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A. M. C. Ruffino
et al.
: Metabolitos primarios y pigmentos fotosintéticos en quinoa
108
Evolución de metabolitos primarios y pigmentosfotosintéticos durante la ontogenia de cotiledones dequinoa (
Chenopodium quinoa 
 Willd.) sometidos aestrés salino
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Ruffino, Ana M. C.; Mariana Rosa; Mirna Hilal; Juan A. González y Fer-nando E. Prado. 2008. “Evolución de metabolitos primarios y pigmentos fotosintéticos durantela ontogenia de cotiledones de quinoa (
Chenopodium quinoa 
Willd.) sometidos a estrés salino”.
Lilloa 
45 (1-2). Se estudió la variación en el desarrollo (PF y PS) y en el contenido depigmentos fotosintéticos (clorofila y carotenoides), carbohidratos solubles (sacarosa, glucosa y fructosa), lípidos (fosfolípidos, glicolípidos y esteroles), proteínas solubles y prolina duranteel ciclo ontogénico de cotiledones de quinoa (
Chenopodium quinoa 
Willd.) sometidos a salinidad.Los resultados obtenidos mostraron que la presencia de sal (230 mM) afecta tanto la dis- tribución como el contenido de la mayoría de los compuestos analizados. Los niveles de pig-mentos fotosintéticos, lípidos y proteínas solubles resultaron significativamente inferioresen los cotiledones estresados; mientras que, los carbohidratos solubles (glucosa y sacarosa)mostraron contenidos más altos. La prolina libre, por su parte, prácticamente no exhibiócambios de significación entre los cotiledones control y estresados hasta el 12
avo
día dedesarrollo, para luego mostrar un fuerte incremento, superior al 600%, en los cotiledonescontrol, y en mucha menor proporción (+170%) en los estresados. La relación fosfolípidos/glicolípidos si bien, no mostró variaciones de significación a lo largo de todo el ciclo paracada tratamiento, los valores resultaron inferiores en los cotiledones estresados.
 
En funciónde los resultados alcanzados se discute el efecto del estrés salino sobre la ontogenia co- tiledonar.P
ALABRAS
 
CLAVE
: Cotiledones, metabolitos, ontogenia, quinoa, salinidad.
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Ruffino, Ana M. C.; Mariana Rosa; Mirna Hilal; Juan A. González andFernando E. Prado. 2008. “Evolution of primary metabolites and photosynthetic pigmentsduring ontogeny of cotyledons of quinoa (
Chenopodium quinoa 
Willd.) under salt stress”.
Lilloa 
45 (1-2). Development variation (FW and DW) and photosynthetic pigments (chloro-phyll and carotenoids), soluble carbohydrates (sucrose, glucose and fructose), lipids (phos-pholipids, glycolipids and sterols), soluble proteins and proline content variations were stud-ied during ontogenetic cycle of quinoa cotyledons (
Chenopodium quinoa 
Willd.) under salinitycondition. Results showed that presence of salt (230 mM) affects the distribution as wellas the content of most the analyzed compounds. Photosynthetic pigments, lipids and solu-ble proteins were significantly lower in stressed cotyledons; while, soluble carbohydrates(glucose and sucrose) contents were higher than in control cotyledons. On the other hand,free proline content didn’t exhibit significant changes between control and stressed cotyle-dons during the first twelve days, and then it showed a strong increment, bigger to 600%,in control cotyledons, and in a smaller proportion (+170%) in stressed cotyledons. Al- though phospholipids/glycolipids ratio didn’t show significant variations along the ontogeneticcycle in both treatments, the lowest values were observed in stressed cotyledons. On thebasis of these results we discussed the effects of saline stress on cotyledonar ontogeny.K 
EYWORDS
: Cotyledons, metabolites, ontogeny, quinoa, salinity.
Ruffino, Ana M. C.
1
; Mariana Rosa
1
; Mirna Hilal
1
; Juan A. González
2
 y 
Fernando E. Prado
1
1
Cátedra de Fisiología Vegetal. Facultad de Ciencias Naturales e IML. Miguel Lillo 205,(4000) Tucumán, Argentina. E-mail: ruffinoana@hotmail.com
2
Instituto de Ecología, Área Botánica. Fundación Miguel Lillo. Miguel Lillo 251, (4000)Tucumán, Argentina.
Recibido: 20/12/07 – Aceptado: 09/10/08
 
Lilloa 45 (1–2): 108–118, 2008
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Lilloa 45 (1–2): 108–118, 2008
109
INTRODUCCIÓN
La quinoa (
Chenopodium quinoa
Willd.)es una dicotiledónea anual nativa de la Re-gión Andina de América del Sur (Risi &Galwey, 1984). Su grano rico en almidónhace que la misma sea considerada como unpseudocereal, por cuanto los verdaderos ce-reales son monocotiledóneas. Además de suriqueza amilácea el grano de quinoa posee unelevado contenido proteico rico en aminoáci-dos esenciales, lo que lo convierten en un ali-mento altamente nutritivo (Jacobsen, 1993).La quinoa al igual que otros miembrosde la familia
Chenopodiaceae
se caracterizapor presentar una extraordinaria toleranciaa la salinidad, sequía, bajas temperaturas y suelos pobres en nutrientes, situaciones quese dan con bastante frecuencia en las regio-nes áridas y semiáridas donde prospera (Rei-mann & Breckle, 1993; Ungar, 1996; Prado,
et al
., 2000). La elevada tasa de crecimientoque exhibe la quinoa en las empobrecidasregiones donde se la cultiva habitualmente,puede ser atribuida a su eficacia fotosintéticapor cuanto sin ser una verdadera planta C4,exhibe valores de fotorespiración inferiores alos de las especies C3 (Gandarillas, 1983).Por otra parte, la gran resistencia que exhibefrente a la salinidad determina que sea con-siderada como una especie halófita (Jacob-sen
et al
., 1994).La adaptación de las plantas halófitas ala salinidad está asociada, entre otras co-sas, a ajustes metabólicos que conducen a laacumulación de determinados compuestostales como: azúcares solubles, polioles, ami-nácidos, glicina betaína y aminas cuaterna-rias, entre otros (Flowers
et al
., 1977; Gor-ham
et al
., 1981; Briens & Larher,
 
1982;Bohnert
et al
., 1995). Estas sustancias ade-más de desempeñar un rol importante en laregulación osmótica de las células, actúancomo estabilizadores y protectores de ciertoscomponentes celulares, razón por la cual selos conoce también con el nombre de osmo-litos compatibles o protectores (Turner,1990; Bohnert
et al
.,1995).El grado de resistencia de las plantas acondiciones de salinidad elevada conllevaaparejada a la síntesis de osmolitos, todauna serie de cambios metabólicos y morfoló-gicos que, en mayor o menor medida, van aafectar su desarrollo y crecimiento (Munns,1993). Entre los cambios más notables quese observan en las plantas sometidas a estréssalino, merecen mencionarse aquellos queafectan la capacidad fotosintética y el meta-bolismo primario, especialmente el referidoa los hidratos de carbono, lípidos y proteí-nas (Bolarín
et al
., 1995; Prado
et al
., 1995,2000; Pérez-Alfocea & Larher, 1995). La sen-sibilidad de las plantas a la salinidad, ade-más de depender de sus ajustes metabólicos, varía con el estado de estado de desarrollode las mismas (Adam, 1990); siendo, por logeneral, más sensibles en los primeros esta-dios (Ungar, 1991).En la mayoría de las especies los cotile-dones u hojas embrionales desempeñan unpapel importante durante la germinación y primeros estadios de desarrollo de la plántu-la (Bewley & Black, 1994). Así, mientras enalgunas especies los cotiledones adquierenuna gran significación desde el propio mo-mento de la germinación, debido a su capa-cidad de acumular sustancias de reserva; enotras, al no tener dicha propiedad, su papeladquiere relevancia luego de producido elestablecimiento de la plántula. En estos ca-sos la energía necesaria para la germinaciónproviene de las reservas acumuladas en otraspartes de la semilla, tal como ocurre con laquinoa cuyas sustancias de reserva se acu-mulan en el perisperma (Burnouf-Radosevi-ch, 1988). En esta clase de plantas los cotile-dones adquieren un rol de significacióncuando tiene lugar la síntesis de clorofila y elinicio del proceso fotosintético. Dentro de esecontexto y considerando la poca informaciónexistente con relación al efecto del estréssalino a lo largo del ciclo vegetativo de lasplantas, se plantea como objetivo de este tra-bajo analizar el efecto de la salinidad sobreel contenido de pigmentos fotosintéticos, hi-dratos de carbono, proteínas, lípidos y proli-na durante el ciclo ontogénico de los cotile-dones de quinoa.
 
A. M. C. Ruffino
et al.
: Metabolitos primarios y pigmentos fotosintéticos en quinoa
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MATERIALES Y MÉTODOS
 Material vegetal y condiciones de cultivo.—
Se utilizaron semillas de quinoa (
Chenopo-dium quinoa
Willd.) adquiridas en el Merca-do Municipal de Salta, Argentina. La germi-nación se realizó en bandejas plásticas de10x15x3 cm sobre un soporte de vermiculi-ta. Las bandejas fueron regadas cada 3 díascon 100 ml de solución de Hoagland (dilu-ción 1:8) para las plantas control y con lamisma solución adicionada de NaCl 230 mMpara las plantas sometidas a estrés salino. A fin de evitar una excesiva concentración desal como consecuencia de la evapotranspira-ción se intercalaron periódicamente riegoscon agua destilada libre de NaCl. El desarro-llo de las plántulas se realizó con un fotope-ríodo de 12 h luz/oscuridad y una tempera-tura de 25/20 ± 1°C (día/noche). La densi-dad de flujo fotónico a nivel de las plántulasfue de 90 mmoles m
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 y la humedad rela-tiva se mantuvo entre 70-80%. Una vez com-pletados los tiempos de crecimiento estipula-dos (6, 12 y 21 días), se procedió a la reco-lección de los cotiledones para la realiza-ción de los correspondientes estudios. Estaarbitraria distribución de las fechas demuestreo se hizo en función del contenido declorofila, como una medida del estado dedesarrollo de los cotiledones, y en lo estable-cido como duración del ciclo ontogénicopara hojas completamente desarrolladas deotras especies (Patakas & Noitsakis, 2000). Asimismo, la última fecha de recoleccióncorresponde al estadio en el cual, si bien, loscotiledones aún resultan funcionales a laplántula ya se encuentran en estado senescen-te; mientras las primeras hojas verdaderas,perfectamente desarrolladas, y con un tama-ño similar al de los propios cotiledones yason fotosintéticamente funcionales (Gonzá-lez, JA. Comunicación personal, 2005). Elmaterial destinado a los análisis químicos seconservó a -20°C hasta su utilización. El pesoseco (PS), previa determinación del pesofresco (PF), se obtuvo por secado de los coti-ledones a 70 °C durante 72 h.
 Extracción y cuantificación de pigmentos fo-tosintéticos.—
La extracción de los pigmen-tos fotosintéticos (clorofila y carotenoides) serealizó en oscuridad a 45°C durante 12 hutilizando 25 mg de cotiledones y 2 ml de di-metilsulfóxido (DMSO), de acuerdo a la téc-nica de Chapelle & Kim
 
(1992). La cuantifi-cación de los mismos se hizo a partir de laslecturas de absorbancia a 664, 648 y 472 nmsiguiendo el procedimiento de Wellburn(1994).
 Extracción y cuantificación de carbohidratos solubles y prolina.—
Los carbohidratos solu-bles y prolina se extrajeron tratando el ma-terial (0,5 g) con 4 ml de etanol al 80% a 75°C según el método descripto por Prado
el al.
(2000). La cuantificación de los azúcaressolubles totales se realizó con el método delfenol-ácido sulfúrico (Dubois
et al.,
1956), lafructosa por la técnica del resorcinol-tiourea(Roe & Papadopoulos,
 
1954), la sacarosapor el mismo método de acuerdo a la modi-ficación de Cardini
et al.
(1955); en tantoque para la glucosa se utilizó la reacciónacoplada de la glucosa oxidasa-peroxidasa(Jorgensen & Andersen, 1973). La prolinafue estimada siguiendo la técnica Ting &Roussef (1979).
 Extracción y cuantificación de lípidos.—
Laextracción de los lípidos se realizó homoge-neizando 1 g de cotiledones con 4 ml demetanol según la técnica de Zenoff 
et al.
(1994). Para la cuantificación de los fosfolí-pidos (ìmoles de Pi) se siguió la técnica de Ames (1966), para los glicolípidos (ìmolesde glucosa) la del fenol-ácido sulfúrico(Roughan & Batt, 1967); mientras que paralos esteroles (ìmoles de estigmasterol) se uti-lizó el método de Lynch
et al.
(1963).
Otros análisis.—
 
Las proteínas solubles seextrajeron con buffer fosfato de sodio 50mM, pH 7,4 conteniendo b-mercaptoetanol 1mM y MnSO
4
5 mM. El contenido proteicose determinó por el método de Lowry 
et al.
(1951).
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