BAB II METODOLOGI PERCOBAAN

II.1 Variabel Percobaan 1. Antiseptik : Carex 2. Desenfektan : Pembersih lantai SOS 3. Tembaga 4. Aluminiuum 5. Kertas saring 6. Terong 7. Bakteri Saccharomyces dan Bakteri Rhizopus oryzae 8. Garam : 10%, 30% dan 50% 9. Susu Indomilk : 5%, 40% dan 90% 10. Glukosa : 1,5 % 11. Pati 1 gram 12. Kuah sayur asem basi II.2 Bahan & Alat yang Digunakan 1. HCl 10% 2. Media - Glukosa - Nutrien Broth - Agar - agar batang 2. Alkohol 96 % 3. Aquadest 100 cc II.2.2 Alat yang Digunakan 1. Petridish 2. Pipet tetes 3. Jarum ose 4. Gelas ukur 5. Beaker glass 6. Tabung reaksi III-1 0,3 gram 0,8 gram 1,5 gram

II.2.1 Bahan Percobaan

II-2 Bab II Metodologi Percobaan 7. Autoklaf 8. Encast 9. Inkubator 10. Pemanas elektrik II.3 Prosedur Percobaan 1. Menimbang dengan teliti 0,8 gr Nutrient Broth; 0,3 gr glukosa dan 1,5 gr agar-agar batang, menambahkan aquadest 100 cc. 2. Melarutkan nutrient broth dan glukosa ke dalam beaker glass menggunakan aquadest kemudian mendidihkannya, menambahkan agar-agar sebanyak 1,5 gram dan mengaduk hingga homogen. 3. Menyaring dan membagi dalam petridish masing-masing 10 cc. II.3.2 Sterilisasi Alat 1. Mencuci alat dengan sabun dan membilas dengan alkohol 96 %. 2. Memasukkan media agar ke dalam petridish sebanyak 10 ml. 3. Untuk tabung reaksi tidak perlu diberi agar. 4. Membungkus dengan kertas lilin (bagian halus di dalam). 5. Memasukkan dalam autoklaf hingga suhunya 1210 C selama 15 menit. II.3.3 Percobaan Oligodinamik 1. Membersihkan logam dalam larutan HCl 10% kemudian mencuci dengan air sampai bersih, mengeringkan dengan menggunakan api bunsen dan meletakkan logam tersebut di dalam petridish yang telah di isi dengan media agar yang telah membeku. 2. Menginokulasikan dengan bakteri dan membungkus kembali dengan kertas lilin. 3. Menginkubasi dalam inkubator selama kurun waktu tertentu sesuai variabel. 4. Melakukan pengamatan terhadap zona bebas bakteri dan zona bakteri. II.3.4 Percobaan Pengaruh Antiseptik dan Desinfektan 1. Memotong kertas saring berbentuk lingkaran dengan diameter 2-3 cm. 2. Mencelupkan dalam larutan antiseptik dan desinfektan. Laboratorium Teknik Bahan Makanan dan Fermentasi Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS

II.3.1 Pembuatan Media

II-3 Bab II Metodologi Percobaan 3. Meletakkan kertas saring tersebut dalam 2 petridish yang telah diisi bakteri dan membungkus kembali dengan kertas lilin. 4. Menginkubasi dengan suhu kamar selama kurun waktu tertentu. 5. Melakukan pengamatan terhadap zona bebas bakteri dan zona bakteri. II.3.5 Membuat Larutan NaCl 1. Menimbang 10 gram NaCl. 2. Memasukkan NaCl ke dalam labu ukur 100 ml, kemudian tambahkan aquadest sampai batas labu ukur. 3. Dan kemudian mengocok hingga homogen. 4. Ulangi langkah 1-3 untuk konsentrasi NaCl 30 % dan 90 %. II.3.6 Membuat Larutan Susu Indomilk 1. Mengambil 5 ml susu indomilk. 2. Memasukkan susu indomilk ke dalam tabung reaksi 10 ml, kemudian tambahkan aquadest 0.25 ml dan kemudian mengocok hingga homogen. 3. Ulangi langkah 1-2 untuk konsentrasi susu Indomilk 40 % dan 90 %. II.3.7 Percobaan Tekanan Osmosis 1. Memotong terong dengan ukuran 1cm x 1 cm x 1 cm. 2. Mengisi tabung reaksi dengan larutan garam dan larutan susu indomilk dengan konsentrasi sesuai variabel. 3. Memasukkan terong kedalam tabung reaksi dan menutupnya dengan kapas dan kemudian membungkusnya dengan kertas lilin. 4. Memasukkan dalam inkubator yang hangat. II.3.8 Membuat larutan glukosa 1. Menimbang glukosa sebanyak 1,5 gram. 2. Memasukkan glukosa ke dalam labu ukur 100 ml dan tambahkan aquadest sampai batas labu ukur. 3. Kocok hingga homogen. 4. Ulangi langkah 1-3 untuk konsentrasi 1,5 %. Laboratorium Teknik Bahan Makanan dan Fermentasi Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS

II-4 Bab II Metodologi Percobaan II.3.9 Percobaan Daya Urai Mikroba II.3.9.1 Penguraiaan Glukosa 1. Masukan larutan glukosa sesuai variabel ke dalam tabung reaksi. 2. Menambahkan Bakteri Saccharomyces cerevisiae dan Rhizopus orizae ke dalam tabung raksi. 3. Menutupnya dengan kapas dan kemudian membungkusnya dengan kertas lilin. 4. Memasukan dalam inkubator yang hangat. II.3.9.2 Penguraiaan Pati 1. Masukkan Media nutrien broth yang diberi pati sebanyak 10 ml ke dalam petridish. 2. Menambahkan bakteri Rhizopus orizae. 3. Membungkus dengan kertas lilin. 4. Memasukkan ke dalam inkubator yang hangat. II.4 Diagram Alir Percobaan

II.4.1 Pembuatan Media Mulai

Menimbang dengan teliti : 0,8 gr Nutrient Brooth; 0,3 gr glukosa, 100 cc aquadest dan 1,5 gram agar-agar batang Melarutkan nutrient broth 0,8 gr dan glukosa 0,3 gr dengan 100 cc aqudest kemudian mendidihkannya, menambahkan agar-agar batang sebanyak 1,5 gr, mengaduk sampai homogen

Menyaring dan membaginya ke dalam petridish, masing-masing 10 cc

Selesai

Laboratorium Teknik Bahan Makanan dan Fermentasi Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS

II-5 Bab II Metodologi Percobaan

II.4.2 Sterilisasi Alat Mulai

Mencuci alat dengan sabun dan membilas dengan alkohol 96 % Memasukkan media agar ke dalam petridish sebanyak 10 ml.

Untuk tabung reaksi tidak perlu diberi agar.

Membungkus menggunakan kertas lilin (bagian halus di dalam)

Memasukkan dalam autoklaf dengan temperatur 1210 C selama 15 menit

Selesai

Laboratorium Teknik Bahan Makanan dan Fermentasi Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS

II-6 Bab II Metodologi Percobaan

III.4.3 Oligodinamik Mulai

Membersihkan logam dengan larutan HCl 10% kemudian mencuci dengan air dan keringkan dengan api lalu meletakkan logam dalam petridish yang telah diisi dengan media agar yang telah membeku

Menginokulasi dengan bakteri

Menginkubasi dalam inkubator selama kurun waktu tertentu. Melakukan pengamatan terhadap zona bebas bakteri dan zona bakteri

Selesai II.4.4 Pengaruh Antiseptik dan Desenfektan

Laboratorium Teknik Bahan Makanan dan Fermentasi Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS

II-7 Bab II Metodologi Percobaan Mulai

Memotong kertas saring berbentuk lingkaran dengan diameter 2-3 cm.

Mencelupkan dalam larutan antiseptik dan desinfektan. Meletakkan keras saring tersebut dalam 2 petridish yang telah diisi bakteri.

Menginkubasi dengan suhu kamar selama kurun waktu tertentu.

Melakukan pengamatan terhadap zona bebas bakteri dan zona bakteri.

Selesai II.4.5 Membuat Larutan Garam Mulai

Menimbang dengan teliti : 10 gr, 30 gr dan 50 gr NaCl

Melarutkan NaCl dengan 100 ml aqudest kemudian mengaduk sampai homogen

Selesai II.4.6 Membuat Larutan Susu Indomilk Mulai

Mengambil 0.25 ml susu Indomilk

Memasukan susu indomilk ke dalam tabung reaksi 10 ml, Laboratorium Teknik Bahan Makanan dan Fermentasi kemudian tambahkan Program Studi D3 Teknik homogen aquadest 9,75 ml dan kemudian kocok hingga Kimia FTI-ITS Ulangi langkah 1-2 untuk konsentrasi Susu indomilk 40 % dan 90 %.

II-8 Bab II Metodologi Percobaan

II.4.7 Tekanan Osmosis Mulai

Memotong terong dengan ukuran 1 cm x 1 cm x 1 cm

Mengisi tabung reaksi dengan larutan garam dan larutan susu Indomilk dengan konsentrasi sesuai variabel

Memasukkan manisa ke dalam tabung reaksi dan menutupnya dengan kapas, kemudian dibungkus dengan kertas lilin

Memasukkan dalam inkubator yang hangat

Selesai Laboratorium Teknik Bahan Makanan dan Fermentasi Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS

II-9 Bab II Metodologi Percobaan

II.4.8 Membuat Larutan Glukosa Mulai

Menimbang dengan teliti : 1,5 gr glukosa

Melarutkan Glukosa dengan 100 ml aqudest kemudian mengaduk sampai homogen

Selesai

II.4.9 Daya urai mikroba II.4.9.1 Penguraian Glukosa II.4.9.2 Penguraian Pati Mulai Mulai Mengisi tabung reaksi dengan larutan glukosa sesuai variabel Masukkan media nutrien broth yang diberi pati sebanyak 10 ml ke dalam petridish Menambahkan bakteri Saccharomyces cerevisiae dan Rhizopus oryzae ke dalam tabung reaksi Menambahkan Bakteri Rhizopus orizae Menutup dengan kapas dan membungkus dengan kertas lilin dan menyimpannya ke dalam inkubator Membungkus dengan kertas lilin dan memasukkan ke dalam inkubator Selesai Selesai

Selasai Selesai

Laboratorium Teknik Bahan Makanan dan Fermentasi Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS

II-10 Bab II Metodologi Percobaan

III.5 Gambar Alat

Pipet tetes Beaker gelas

Petridish

Jarum ose

Pemanas elektrik

Gelas ukur

Encass Laboratorium Teknik Bahan Makanan dan Fermentasi Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS

II-11 Bab II Metodologi Percobaan Inkubator

Tabung Reaksi

Autoklaf

Laboratorium Teknik Bahan Makanan dan Fermentasi Program Studi D3 Teknik Kimia FTI-ITS