A Histologia ao servio da Engenharia

Alexandra Lemos

Aquando da diminuio ou perda de funo de uma parte do corpo humano h necessidade de a substituir e/ou reparar, podendo ser usados para tal biomateriais. Num sentido mais lato os biomateriais so considerados qualquer material que esteja em contacto directo ou indirecto com tecidos vivos, mas mais estritamente so definidos como materiais usados para reparar e/ou substituir partes do corpo humano. Existem diferentes tipos de biomateriais, nomeadamente polimricos, metlicos e cermicos, cuja aplicao est dependente do tipo de tecido a substituir. Na Figura 1 esto ilustrados alguns exemplos de biomateriais.

Figura 1. Exemplos de biomateriais. Esquerda pele; Centro vlvula cardaca; Direita prtese da anca.

O aumento da esperana mdia de vida, bem como o incremento das doenas sseas que afectam no s as pessoas idosas, mas tambm cada vez mais os jovens, como resultado de acidentes traumticos diversos, tem vindo a determinar um aumento exponencial do uso de biomateriais cermicos no combate a essas doenas e em reconstrues maxilofaciais. Com vista reparao ssea tm vindo a desenvolver-se biocermicos que tentam imitar a estrutura do osso, no s qumica como tambm fisicamente. O osso um tecido vivo, com uma estrutura tridimensional macroporosa, que tem uma capacidade de renovao limitada e cujos componentes principais so a matriz, a medula e as clulas sseas. A matriz uma estrutura hbrida orgnica-inorgnica, constituda essencialmente por fosfatos de clcio (parte inorgnica) e fibras de colagnio (parte orgnica). Os enxertos algenos e autgenos podem ser usados com sucesso, sob certas condies, no entanto possuem problemas associados com custos adicionais de recolha, local de morte do dador e, principalmente, disponibilidade. Por outro lado, os implantes metlicos apresentam

limitaes, uma vez que no se comportam como o osso saudvel e no possuem a capacidade de remodelao com o tempo. Deste modo, a estratgia de regenerao ssea tem-se baseado muito no desenvolvimento de biocermicos porosos, devido ao facto de se poder manipular no s a composio qumica como tambm a estrutura porosa 3-D, permitindo a infiltrao do tecido sseo e aumentando a ligao implante-tecido. Mas a dificuldade de fabrico de estruturas porosas com caractersticas adequadas (geometria e tamanho dos poros, a sua distribuio espacial, etc.) tem sido um dos principais obstculos a vencer, constituindo ainda um dos maiores desafios nesta rea. O surgimento recente de tcnicas de manufactura rpida que permitem a construo de estruturas internas pr-definidas abriu perspectivas para o fabrico personalizado de biocermicos porosos, nomeadamente atravs da deposio robtica [1]. Em termos de composio, os fosfatos de clcio so cermicos cuja composio muito prxima da parte inorgnica do osso humano, que podem ser usados na substituio ou reparao ssea, e nos quais a razo Ca/P varia. As apatites so o fosfato de clcio mais estudado, sendo a hidroxiapatite (HA) a mais usada em medicina. Possui uma estrutura cristalina hexagonal e pode ser descrita por Ca10(PO4)6(OH)2, com uma razo Ca/P de 1.67. O seu uso generalizado deriva do facto de possuir uma composio qumica muito prxima do osso humano e dentes, sendo espectvel uma melhor ligao aos tecidos circundantes quando implantada. No entanto, a hidroxiapatite sinttica diferente da hidroxiapatite natural j que a segunda no estequiomtrica, possui uma razo Ca/P inferior a 1.67 e contem ies de carbonato, sdio, magnsio, flor e cloro. De forma a aproximar a composio da hidroxiapatite sinttica da natural tm sido desenvolvidos muitos trabalhos de incorporao de ies na estrutura da hidroxiapatite, melhorando no s a sua bioactividade como a sua resistncia mecnica. Por outro lado, a introduo de um implante num organismo vivo gera sempre uma reaco inflamatria por parte do hospedeiro, da a necessidade de uma caracterizao exaustiva in vitro e in vivo. Desta forma, o desenvolvimento destes novos biocermicos envolve uma equipa multidisciplinar, na qual cabe engenharia um papel determinante no desenvolvimento de novas formulaes em termos de composio e de novas estruturas tridimensionais, e histologia o papel tambm determinante na avaliao da interao entre o biocermico e o tecido envolvente. O processo que envolve o biocermico desde a sua concepo a nvel laboratial at sua comercialiao, semelhana do que acontece na indstria farmacutica, moroso, com custos associados muito altos e questes ticas muito pertinentes. Na Figura 2 est representada a pirmide dos biomateriais na qual se mostra quais as etapas que devero ser seguidas at comercializao de um biomaterial. Tendo por base um biocermico

desenvolvido no mbito da engenharia de materiais, com uma estrutura semelhante ao osso humano, a primeira etapa consiste na avaliao do seu comportamento in vitro em meio nocelular e a segunda em meio celular. Geralmente usado um meio no-celular designado por SBF (Simulated Body Fluid), o qual no mais do que um fluido que simula a composio do plasma humano e avaliada a camada de apatite formada superfcie do biocermico, a qual tem uma composio muito aproximada da parte mineral do osso e depende fortemente da composio qumica do biocermico. Relativamente s culturas celulares, so usadas normalmente clulas do tecido a substituir. No caso especfico dos substitutos sseos, podero ser usadas linhas de clulas humanas osteoblsticas ou mesmo osteoblastos humanos, sendo avaliadas a citotoxicidade e a taxa de proliferao celular. Os testes in vivo so efectuados atravs da implantao dos biocermicos em animais e avaliao da resposta por parte dos mesmos. Numa primeira fase estes ensaios in vivo so realizados em animais de pequeno porte, nomedamente em ratinhos e coelhos e numa segunda fase so testados em animais maiores, tais como ovelhas ou porcos. Os ensaios clnicos so a ltima etapa antes da comercializao e so os mais dificeis, no s pelo custo e complexidade associados, mas tambm pelas questes ticas que necessrio salvaguardar.

Figura 2. Pirmide dos biomateriais Nestas trs ltimas etapas, sem dvida que a histologia fundamental para que se possa avaliar de forma correcta o comportamento do biocermico tanto em contacto com as clulas (ensaios in vitro) como com o tecidos de animais (in vivo) e de humanos (ensaios clnicos). Como exemplo de um material que foi desenvolvido a nvel laboratorial e que se encontra neste momento em comercializao pode referir-se o Bonelike. Este material comeou a ser

desenvolvido em no incio dos anos 90 e a sua composio apenas foi protegida em 1999 atravs do registo de patente [2]. Vrios foram os estudos realizados ao longo dos anos para avaliar o seu comportamento qumico e mecnico [3-6], o comportamento in vitro em meio celular [7,8], o comportamento in vivo [9] e o comportamento em humanos (ensaios clnicos) [10-11]. O trabalho Bone ingrowth in macroporous Bonelike for orthopaedic application [11], descreve os ensaios clnicos do Bonelike realizados no Hospital de So Joo no Porto e uma leitura mais atenta deste trabalho permite verificar a elevada importncia que tem a histologia para a avaliao do comportamento em humanos do material. De facto, neste caso especfico a histologia est ao servio da engenharia, sendo usada como uma ferramenta de trabalho para avaliar um comportamento. A histologia de facto suprema a complementar a engenharia no desenvolvimento e caracterizao de biocermicos. E a questo premente: que seria da engenharia sem a histologia no campo dos biomateriais? Nada! Engenheiros e histologistas tm, sem sombra de dvida, campos de estudo e trabalho que, embora muitos diferentes, se complementam e at se poder confundir quem est ao servio de quem!

[1] 2002, J.E. Smay, J. Cesarano III & J.A. Lewis. Colloidal inks for directed assembly 3-D of periodic structures. Langmuir 18:5429-37. [2] Santos JD, Hastings G, Knowles JC. Sintered hydroxyapatite compositions and method for the preparation thereof. Worldwide Application (PCT), Patent No. 1 189 851, 1999. [3] Lopes MA, Santos JD, Monteiro FJ, Knowles JC. Glass-reinforced hydroxyapatite: A comprehensive study of the effect of glass composition on the crystallography of the composite. J Biomed Mater Res 1998;39(2):24451. [4] Lopes MA, Monteiro FJ, Santos JD. Glass-reinforced hydroxyapatite composites: fracture toughness and hardness dependence on micro-structural characteristics. Biomaterials 1999;20(21):208590. [5] Lopes MA, Monteiro FJ, Santos JD. Glass-reinforced hydroxyapatite composites: Secondary phase proportions and densification effects on biaxial bending strength. J Biomed Mater Res 1999;48(5):73440. [6] Lopes MA, Monteiro FJ, Santos JD, Serro AP, Saramago B. Hydrophobicity, Surface tension and Zeta potential measurements of glass reinforced hydroxyapatite composites. J Biomed Mater Res 1999;45:3705.

[7] Lopes MA, Knowles JC, Santos JD, Monteiro FJ, Olsen I. Direct and Indirect effects of P2O5 glass reinforced hydroxyapatite composites and growth and function of osteoblast-like cells. Biomaterials 2000;21:116572. [8] Ferraz MP, Fernandes MH, Santos JD, Monteiro FJ. HA and Double layer HA- P2O5/CaO Glass coatings: influence of chemical composition on human bone marrow cells osteoblastic behaviour. J Mater Sci: Mater Med 2001;12:62938. [9] Lopes MA, Santos JD, Monteiro FJ, Ohtsuki C, Osaka A, Kaneko S, et al. Push-out testing and histological evaluation of glass reinforced hydroxyapatite composites implanted in the tibiae of rabbits. J Biomed Mater Res 2001;54:4639. [10] Gutierres M, Hussain NS, Afonso A, Almeida L, Cabral T, Lopes MA, et al. Biological behaviour of Bonelike graft implanted in the tibia of humans. Key Eng Mater 2005;17:10414. [11] M. Gutierres, M.A.Lopes, N. Sooraj Hussain, A.F. Lemos, J.M.F. Ferreira, A. Afonso, A.T. Cabral, L. Almeida, J.D. Santos. Bone ingrowth in macroporous Bonelike for orthopaedic application. Acta Biomaterialia 4 (2008) 370377