BIOQUIMICA CLINICA 2012

PROTEINURIA La proteinuria es probablemente el signo ms frecuente de que existe una enfermedad renal. En la actualidad, se usan tiras reactivas para detectar protenas cualitativamente, como un screening y si resulta positivo, se debe cuantificar protenas por el mtodo de Exton-Rose e informar en g/L o en g/24 hrs. ANALISIS CUANTITATIVO: MTODO DE EXTON-ROSE. FUNDAMENTO: Las protenas en presencia de cido sulfosaliclico precipitan. La turbidez es proporcional a la cantidad de protenas presentes en la orina. Reactivos necesarios : Acido sulfosaliclico 3 % NaCL 0.9 % Estndar seroalbmina 1 g/L 250 mL 1000 mL 100 mL

Curva de calibracin del mtodo: a. Disear y realizar una curva de calibracin para protena, de 5 puntos, en que las concentraciones varen entre 0,1 y 1 g de protena por litro, a partir de un estndar de albmina de 1 g/L. Volumen de muestra = 0,5 mL. b. c. Graficar : x = concentracin de protenas en g/L y = Absorbancia a 660 nm Calcular el factor de calibracin ( pendiente) en g de protenas por litro .

Curva de calibracin para protenas. Mtodo Exton-Rose Tubo: Estndar seroalbmina 1g/L mL Suero fisiolgico mL Acido sulfosaliclico 3 % mL Agitar. Esperar 10 min a t0 ambiente. Leer Absorbancia a 660 nm Concentracin de protena en g/L Blanco ---0.5 2.5 1 2.5 2 2.5 3 2.5 4 2.5 5 ----2.5

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

Una vez obtenido el valor del Factor de calibracin K ( pendiente de la recta ), calcular la concentracin de protena de la muestra de orina (proteinuria) Concentracin de protena en la muestra = Absorbancia de la muestra / K

Curva de calibracin con mitad de volumen.

BIOQUIMICA CLINICA 2012

Se usar para el prctico la mitad de los volmenes calculados para la Curva de Calibracin Tubo: Estndar seroalbmina 1g/L mL Suero fisiolgico mL Acido sulfosaliclico 3 % mL Agitar. Esperar 10 min a t0 ambiente. Leer Absorbancia a 660 nm Concentracin de protena en g/L 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 Blanco ---0.25 1.25 1 1.25 2 1.25 3 1.25 4 1.25 5 ----1.25

Procedimiento para proteinuria (con mitad de volumen En cada uno de dos tubos, (muestra problema; blanco de la reaccin) colocar los siguientes reactivos : Blanco ---0.25 1.25 Muestra 0.25 ---1.25

Orina mL Suero fisiolgico ( NaCL 0.9 %) mL Acido sulfosaliclico 3 % mL Agitar. Esperar 10 min a t0 ambiente.Leer Absorbancia a 660 nm

Agitar por inversin, esperar 10 min. y leer la absorbancia del tubo problema a 660 nm, ajustando el cero del espectrofotmetro con el blanco de la reaccin. Si la orina es muy coloreada se prepara un blanco de muestra de acuerdo a la siguiente tcnica: 0.25 1.25 mL de orina mL de suero fisiolgico

Continuar con la tcnica descrita anteriormente.