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EL FENOMENO DE LA RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR

En los cursos bsicos de qumica se suelen estudiar los elementos de la


tabla peridica tomando en consideracin la existencia de isotopos, es decir,
definiendo un elemento qumico dado por su nmero de masa y numero de
carga. Hay algunas otras propiedades de los elementos que, hasta hace poco,
solo incumban a los fsicos y que en la actualidad interesan a los qumicos,
debido al uso de nuevas tcnicas experimentales, como la resonancia
magntica nuclear, la resonancia elctrica cuadrupolar y la espectroscopia de
microondas.
Los ncleos de todos aquellos isotopos cuyos nmeros de masa y de
carga sean pares no tienen spin nuclear y en consecuencia tampoco tienen ni
momento magntico ni momento elctrico cuadrupolar. Basta que con que uno
de estos dos nmeros sea impar para que el ncleo del tomo respectivo
presente el fenmeno, debido a que tiene un spin nuclear. Los isotopos que
tengan spin nuclear pueden ser de uno de dos grupos: los que tengan nmero
de masa impar, independientemente de su numero de carga, tendrn por
spinnuclear un numero impar dividido por dos tal como 1/2, 1/3, etc., y los
ncleos con masa par y carga impar tendrn valores de spin nuclear en
nmeros enteros.
La carga elctrica que posee el ncleo de cualquier elemento qumico,
puede distribuirse uniformemente o no, sobre una superficie dada. Cuando la
superficie del ncleosobre la que se distribuye esta carga es esfrica, la
distribucin ser uniforme. Sin embargo no todos los ncleos son
absolutamente esfricos y entonces la distribucin de la carga no ser
uniforme. En estos ltimos casos es cuando existe el momento elctrico
cuadrupolar, ya que el ncleo tiene un comportamiento que depende de la
direccin en que se acerca a l una carga dada. Como consecuencia de la no
uniformidad de carga, los ncleos que no son esfricos tienen formas de
prolato cuando estn ensanchados hacia los polos de un eje imaginario de giro
y de oblato cuando este ensanchamiento ocurre en el ecuador. Los momentos
elctricos cuadrupolares son positivos en los ncleos de forma de prolato y
negativos para aquellos que estn en forma de oblato. El momento elctrico
cuadrupolar es tema de una tcnica espectrometrica diferente a la RMN, pero
debe de tenerse en cuenta cuando se estudia espectros de RMN, ya que el
momento elctrico cuadrupolar contribuye al ensanchamiento de las seales de
resonancia. En principio, el hecho de que el neutrn tenga un spin nuclear es
contradictorio con su falta de carga. Sin embargo, se supone que el neutrn
esta disociado en un protn y en un mesn negativo durante parte de su tiempo
de vida.
ORIENTACIN DE UN NCLEO EN UN CAMPO MAGNTICO

Todos los ncleos tienen carga y masa los que poseen un nmero
atmico impar o /y un nmero msico impar tienen tambin spin.
- Ncleos con spin:
1
1
H,
13
6
C,
14
7
N y
17
8
O.
- Ncleos sin spin:
12
6
C,
16
8
O. .
Cualquier ncleo que posea espn se puede estudiar por RMN, pero en
este tema nos limitamos slo al ncleo
1
1
H (protn.
Un protn tiene un nmero cuntico de espn de 1/2 y puede
considerarse como un pequeo imn. En ausencia de un campo magntico,
todos los protones estn orientados al azar en todas las direcciones. En
presencia de un campo magntico el spin protnico adopta dos orientaciones
posibles, una paralela a la direccin del campo externo, de menor energa, y
otra anti paralela al campo de mayor energa. La diferencia de energa de estas
dos orientaciones es proporcional a la fuerza del campo magntico externo
(H
0
)
o
kH E = A
t

2
h
k =
Siendo la razn giro magntica (constante para un ncleo dado. El
cambio de orientacin puede hacerse mediante la absorcin de un cuanto de la
radiacin electromagntica adecuada.
v h E =
La energa necesaria para conseguir el cambio de orientacin del spin
nuclear es la suministrada por la zona de radiofrecuencia del espectro
electromagntico (10-100 MHz).
Combinando las ecuaciones anteriores hallamos:
o
H
t

v
2
=
Estas ecuaciones indican que cuando se colocan protones en un campo
magntico que tiene una fuerza determinada, existir una frecuencia definida
de separacin entre los dos niveles d energa. As un campo de 14.000 gauss
requiere una frecuencia de 60 MHz (regin de radiofrecuencia del espectro
electromagntico) para que ocurran transiciones entre las dos orientaciones. La
unidad Hz son ciclos por segundo, c.p.s, y MHz son 10
6
c.p.s. En un campo de
23.500 gauss se necesitan 100 MHz, y en uno de 47.000 gauss, 200 MHz. En
la figura 1, se representa la separacin de los niveles de energa de spin de un
ncleo de hidrgeno en funcin del campo magntico externo (H
0
).








P
ara obtener un espectro de RMN, la muestra se coloca en el campo de un
electroimn y se aplica una radiofrecuencia haciendo pasar una corriente a
travs de una bobina que rodea a la muestra (figura 2). Se incrementa
H
0
(Direccin del campo)
H
0
(gauss), aumento de la fuerza del campo
Nivel de energa
en ausencia de
campo externo
Energa (MHz)
AE
AE
AE
Figura 1.
Separacin de los niveles de energa de spin de un ncleo de hidrgeno
en funcin del campo magntico externo (H
0
)
lentamente el campo magntico (H
0
) y los cambios de orientacin de los
ncleos se detectan en forma de voltaje inducido, como resultado de la
absorcin de energa proporcionada por la radiofrecuencia.
Los ncleos que han pasado del estado de baja energa al de alta
energa por accin de la radiofrecuencia, caen espontneamente al estado de
baja energa y pueden volver a ser excitados. Un espectro de RMN es la
representacin grfica del voltaje inducido en funcin de la variacin del campo
magntico. El rea del pico depende del nmero total de ncleos que cambian
de orientacin.


APANTALLAMIENTO DE LOS NUCLEOS DE HIDRGENO
Si todos los ncleos de hidrgeno absorbieran energa en campos de
idntica fuerza y a una frecuencia dada, la espectroscopia RMN sera
nicamente un mtodo para anlisis cuantitativo de protones. En realidad es
mucho ms ya que la fuerza del campo a la que absorbe un determinado
protn depende de lo que le rodea, es decir, de la estructura molecular.

Los electrones de los enlaces sometidos al campo magntico externo H
o

giran constantemente alrededor del protn en un plano perpendicular al de
dicho campo. Cualquier carga elctrica en movimiento genera un campo
H
0
Generador de
barrido
Receptor de
radiofrecuencia
Transmisor de
radiofrecuencia
Registro
IMAN
Ampermetro
Figura 2
Elementos bsicos de un espectrofotmetro de resonancia magntica nuclear
Voltaje
Inducido
Campo magntico
magntico inducido que generalmente se opone al campo externo (fig.2). Se
dice que los electrones que rodean al protn lo apantallan si el campo inducido
se opone al externo, es decir, los electrones protegen al ncleo de los efectos
del campo externo. Cuando el campo inducido se suma al campo externo, se
dice que los electrones desapantallan el ncleo.

Los ncleos de hidrgeno estarn segn sus alrededores diferentemente
apantallados o des apantallados y como resultado de ello el protn estar
sometido a un campo magntico neto o efectivo:
H
neto
= H
externo
- H
inducido
Esta diferencia entre el campo magntico externo y el campo inducido
hace que el aparato no vea a todos los hidrgenos iguales, as al realizar el
barrido del campo magntico los distintos protones cambian de orientacin a
diferente fuerza de campo dependiendo de cmo estn de apantallados.
La magnitud del apantallamiento depende de la densidad electrnica
alrededor del ncleo de hidrgeno. Por ejemplo los protones del yoduro de
metilo estarn mas apantallados que los del metanol porque la
electronegatividad del oxgeno es mayor que la del yodo.
El espectro de RMN de un compuesto permite, por lo tanto conocer no
slo la proporcin relativa de las diferentes clases de protones presentes, sino
tambin conocer los alrededores de cada protn.
DESPLAZAMIENTO QUMICO.
Electrones en
circulacin
+
e
-
H
0
H
inducido
Figura 2.
Apantallamiento (H
inducido
) provocado por la circulacin de electrones alrededor
del ncleo en un plano perpendicular al campo externo (H
0
)
En la descripcin del fenmeno RMN, se ha llegado a un punto en el que
la frecuencia de resonancia de los ncleos de isotopos determinados es una
funcin del campo magntico aplicado. Este concepto es el que se emplea en
la llamada resonancia magntica nuclear de lnea ancha, que es simplemente
un mtodo espectrometrico no destructivo de anlisis tanto cualitativo como
cuantitativo, entre cuyas aplicaciones mas sensacionales se encuentra el
anlisis de rocas lunares tradas a la Tierra por la tripulacin del Apolo XI.
En resumen, son las posiciones de resonancia de los protones en el
espectro. No todos los enlaces son iguales y el campo inducido es diferente en
cada caso, esto hace que en el espectro aparezcan distintas seales a distintas
posiciones. Era necesario disear algo cuantitativo para medir el mucho o el
poco apantallamiento.
Las posiciones de resonancia de un protn se miden por comparacin
con la posicin de resonancia de los 12 H
+
equivalentes de una sustancia de
referencia (TMS) tetrametilsilano (CH
3
)
4
Si. Sus 12 protones resuenan dando
una seal nica y ntida a campos ms altos que cualquier otro compuesto
orgnico ya que el silicio es ms electropositivo que los tomos de los
compuestos orgnicos. La seal de TMS no interfiere y aparece en el extremo
del espectro de mayor campo.
Sin embargo, al qumicoorgnico la RMN le seria de muyescasa utilidad
si solo le sirviera como una tcnica eficiente para detectar los isotopos de
muchos elementos qumicos. Afortunadamente la posicin de resonancia de
una seal dada dependetambin, aunque en grado pequeo, del contorno
qumico en que se encuentra el ncleo observado. Esta dependencia es la que
le resulta extraordinariamente til y sirve de base a la resonancia magntica
nuclear de alta resolucin, que tanto ha contribuido al desarrollo de la qumica
de hoy da. El contorno qumico de un elemento dado, o sea su naturaleza de
otros tomos que se encuentren en la molcula a distancia relativamente
cercanas al ncleo observado, tiene un cierto efecto, ya que los electrones
presentes pueden formar una pantalla magntica tal que el campo magntico
que experimenta el ncleo observado resulta ligeramente diferente del campo
magntico aplicado. Estos efectos se conocen como fenmenos de proteccin
y son la causa del llamado desplazamiento qumico, o sea la separacin entre
una seal se resonancia de inters y otra seal arbitrariamente escogida como
termino de referencia. Si la seal de referencia corresponde a un ncleo
aislado, el desplazamiento qumico es igual a la constante de proteccin, o sea
la diferencia entre el campo aplicado y el campo que realmente se manifiesta
en el ncleo.
En la presencia del campo magntico principal (H
O
), los electrones que
giran alrededor del ncleo, estarn sujetos a ciertos movimientos que producen
las llamadas corrientes magnticas inducidas. La fuerza de la corriente
inducida es desde luego menos que la del campo magntico principal que la
indujo, pero es proporcional a la de este. Por efecto de estas corrientes
diamagnticas locales, el campo magntico aplicado, ya que se trata de
corrientes electrnicas de circulacin opuesta al campo magntico principal.
Esto trae por consecuencia que para que se produzca el fenmeno de
resonancia, el campo magntico principal deber ser incrementado en un cierto
valor para compensar el campo magntico inducido que se le opone y por ello
las seales de resonancia aparecern las altos. En estos casos se dice que la
proteccin diamagntica es una proteccin positiva. La demostracin
experimental de lo anterior la brinda el hecho de que es posible establecer
relaciones lineales entre el desplazamiento qumico de algunas seales y la
electronegatividad del grupo, e altera la densidad electrnica de los ncleos
observados.
Aparte de la proteccin diamagntica o proteccin `positiva hay otro tipo
de proteccin denominada paramagntica, la que fundamentalmente depende
de la orientacin de que un grupo dado tenga respecto al campo magntico.
Las circulaciones paramagnticas tambin producen un pequeo campo
magntico secundario, que ahora es paralelo y en el mismo sentido que el
campo magntico principal (H
O
). La seal de la resonancia aparecer en
campos ms bajos, que ya el ncleo soporta ahora de intensidad del campo
paramagntico inducido y del campo magntico principal, por lo que este tipo
de fenmeno corresponde a una proteccin negativa o una desproteccin.
Desde el punto de vista general, el desplazamiento qumico de los
protones se ve afectado por su posicin relativa a grupos capaces de crear
zonas de proteccin o de desproteccin. Se dice que protones que muestran
sus seales ms altas, se encuentran en zonas de proteccin positiva y
aquellos que originan seales a campos bajos, en zonas de proteccin
negativa.
Los mecanismos de proteccin son en todo caso el resultado de
corrientes inducidas, que son proporcionales a la intensidad del campo
magntico aplicado y que confieren a la resonancia magntica nuclear su gran
utilidad tcnica.
El desplazamiento qumico de un ncleo de hidrgeno determinado es la
diferencia entre la fuerza del campo a la que absorbe el protn y la fuerza del
campo a la que absorben los protones del patrn TMS. Las distintas seales
se dice que presentan un cierto desplazamiento qumico respecto a la
referencia interna.
Para describir los desplazamientos qumicos se utiliza la escala delta (o)
que se obtiene dividiendo el desplazamiento qumico observado en Hz por la
frecuencia del espectro utilizado en Hz y se obtiene o en partes por milln
(ppm)
) (
) (
10 ). (
6
ppm
Hz ometro delespectr Frecuencia
Hz observado ento Desplazami
= o

Ejemplo:
Si en un espectro de 60 MHz el desplazamiento qumico de un protn
con relacin al TMS es de 200 Hz, cul es el desplazamiento qumico
expresado en o?
ppm 34 , 3
10 . 60
10 . 200
6
6
= = o
El desplazamiento qumico de un protn determinado es siempre el
mismo en las mismas condiciones (disolvente, temperatura, etc.), y no depende
de la frecuencia del aparato utilizado en la medida.
Al pico del TMS se le asigna un valor de o = 0,000 ppm, y se define una
escala hasta o = 10 ppm. (Figura 4)

Los trminos apantallado y des apantallado se utilizan para indicar que
un ncleo absorbe a valores deo, ms bajos o ms altos, que otro ncleo. Por
ejemplo se dice que los protones metlicos de CH
3
O- estn mas des
apantallados que los de CH
3
-C-.
La regin de campos bajos de un espectro de RMN es la de altos
valores de o, y la regin de campos altos, la de valores de o pequeos.
En la tabla anterior se presentan algunos ejemplos de desplazamientos
qumicos de protones situados en distintos ambientes qumicos.
Los desplazamientos qumicos de los protones hidroxlicos de los
alcoholes se hallan generalmente en la regin o = 5,0-0,5. La posicin depende
de los puentes de hidrgeno segn la concentracin de la muestra, igual les
ocurre a los protones de los grupos amino.
o
0,0 1.0 2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 7,0 8,0 9,0 10,0
ppm
( )
TMS
o
Hacia campo ms bajo
(desapantallamiento)
Hacia campo mas alto
(apantallamiento)
R-C-H
O
RCONH
2
C
6
H
6
CH
3
-O-
CH
3
-Cl
R
3
C-H
R-NH
2 C = C
H
RCOOH
R-OH
-C
C-H
RCOCH
CH-N
Desplazamientos qumicos de protones unidos a distintos grupos
Figura 4
Los espectros de RMN, dan an ms informacin ya que el aparato es
capaz de medir el rea bajo curva, es decir de integrar y suministra esta
informacin en forma de escalones. La altura de cada escaln es proporcional
al rea del pico registrado durante ese salto. Las alturas de los saltos
corresponden al nmero relativo de protones de cada clase.
As el espectro de RMN del t-butil metil ter (figura 5) muestra slo dos
picos de reas relativas 1:3. Los protones del grupo metilo unido a oxigeno son
responsables del pico a o = 3,12 y los del grupo t-butilo del pico a o = 1,12 ppm.
La figura 6 representa el espectro de RMN del 2,2-dimetilpropanol, un
ismero del t-butil metil ter, se observan tres picos correspondientes a los tres
tipos de protones equivalentes de reas relativas 1:2:9




ACOPLAMIENTO SPIN-SPIN
10 9 8 7
6 5
4 3 2 1 0
CH
3
CCH
2
OH
o (ppm)
CH
3
CH
3
1
2
9
-OH
-CH
2
-
-CH
3
-
Figura 6
Espectro RMN del 2,2-dimetilpropanol
10 9 8 7
6 5
4 3 2 1 0
CH
3
-C-O-CH
3
o (ppm)
CH
3
CH
3
1
3
-O-CH
3
Figura 5
Espectro RMN del t-butil metil ter
CH
3
C
Si tenemos un ncleo de hidrgeno que a tres enlaces de distancia no
hay ningn hidrgeno ms. Este ncleo dar un pico sin desdoblar, llamado
singlete (s)
Si el ncleo de hidrgeno (H) tiene un solo hidrgeno vecino (Ha) a 3
enlaces de distancia. El ncleo H sufrir el campo aplicado H
0
y el producido
por Ha. El protn Ha puede tener dos orientaciones con respecto al campo
aplicado: paralela y anti paralela. En la mitad de las molculas el campo creado
por Ha se adicionar a H
0
y para que en H siga existiendo el mismo campo
neto, el campo externo tendr que ser menor, apareciendo un pico a campos
ms bajos que o. En la otra mitad de las molculas el campo creado por Ha se
opone a H
0
y para que ese protn sienta el mismo campo neto, el H
0
tendr
que tener un valor mayor y aparece un segundo pico a campo mas alto que o.
Las intensidades relativas de los dos picos son idnticas, la seal se llama
doblete (d). La separacin entre los picos desdoblados se denomina constante
de acoplamiento J (Hz)
Lo que ha sucedido es el llamado "Acoplamiento spn-spn", cada protn
tiene spin y se comporta como un imn, con dos orientaciones distintas al
aplicar un campo externo, la mitad de los protones se orientan con spin
paralelo y la otra mitad con spin anti paralelo al campo y el campo neto del
protn ser en un caso menor y en otro mayor al campo externo.
Si el hidrgeno H tiene a tres enlaces de distancia dos hidrgenos
vecinos Ha y Hb se producir el acoplamiento spin-spin entre ellos y la seal
aparecer desdoblada en tres picos, triplete (t). Las reas de los picos
desdoblados sern 1:2:1.
De todo esto se puede deducir la siguiente regla general: si un protn
(H) tiene n protones vecinos sobre los carbonos adyacentes, su absorcin
estar desdoblada en (n+1) picos. El valor de (n+1) recibe el nombre de
multiplicidad.

- Los acoplamientos spn-spn son recprocos cada H influye en los
H vecinos.
- El acoplamiento entre tomos de hidrgeno ocurre cuando hay
hidrgenos separados por tres enlaces , si la separacin es de 4-5.. enlaces
no hay acoplamiento.
- A un enlace de distancia, no hay molculas orgnicas con tomos
de hidrogeno separados a un enlace de distancia
- A dos enlaces de distancia los hidrgenos son equivalentes y no
se acoplan
- Los hidrgenos equivalentes no sufren acoplamiento spn-spn, no
se acoplan.
- Slo hay acoplamiento entre hidrgenos a tres enlaces de
distancia que no sean equivalentes.


0
o (ppm)
C C
H
C
50 : 50
Doblete (d)
TMS
o (ppm)
H
a
H
0
0
o (ppm)
C C
H
C
Area = 100
Singlete (s)
TMS
o (ppm)
H
0
0 o (ppm)
C C
H
C
25 : 50 : 25
Triplete (t)
TMS
o (ppm)
Ha
H
0
Hb
Efecto nulo sobre Hneto del H
Doble posibilidad = doble rea
TCNICAS BSICAS DE ESPECTROMETRA RMN

Cuando se sitan dentro de un campo magntico, los ncleos activos de RMN
(como el 1 H, o el 13 C) absorben a una frecuencia caracterstica del istopo.
La frecuencia de resonancia, la energa de la absorcin y la intensidad de la
seal son proporcionales a la fuerza del campo magntico. Por ejemplo, en un
campo magntico de 21 Tesla, los protones resuenan a 900 MHz. Es comn
referirse a un imn de 21 T como imn de 900 MHz, aunque distintos ncleos
resuenan a una frecuencia diferente en este campo.

En el campo magntico terrestre, los mismos ncleos resuenan en frecuencias
de audio. Este efecto se utiliza en los espectrmetros RMN y otros
instrumentos. Debido a que estos instrumentos son fciles de transportar y
baratos, a menudo se utilizan para la enseanza y el trabajo de campo.


ACOPLAMIENTO-J

Parte de la informacin ms til para determinar la estructura en un espectro
RMN unidimensional proviene del acomplamiento-J o acoplamiento escalar (un
caso especial de acoplamiento espn-espn) entre los ncleos activos de RMN.
Este acoplamiento surge de la interaccin de los diferentes estados espn a
travs de los enlaces qumicos de una molcula, y resulta en la divisin de
seales RMN. Estos patrones de divisin pueden ser complejos o simples y,
del mismo modo, pueden ser interpretables o engaosos. Este acoplamiento
proporciona informacin detallada sobre la conectividad de los tomos en una
molcula.

El acoplamiento a ncleos equivalentes n (espn ) divide la seal en un
multiplete n + 1 con ratios de intensidad que siguen el tringulo de Pascal. El
acoplamiento a espines adicionales conducir a nuevas divisiones de cada uno
de los componentes del multiplete; por ejemplo, el acoplamiento a dos ncleos
diferentes de espn , con constantes de acoplamiento muy distintas,
conducir a un doblete de dobletes (abreviatura: dd). Hay que tener en cuenta
que el acoplamiento entre ncleos que son qumicamente equivalentes (es
decir, que tienen el mismo desplazamiento qumico) no tiene efecto de los
espectros RMN, y los acoplamientos entre ncleos que son distantes (por lo
general ms de 3 enlaces en molculas flexibles) suelen ser demasiado
pequeos para observar divisiones. Los acoplamientos de largo alcance, de
ms de tres enlaces, se observan a menudo en compuestos aromticos y
cclicos, conduciendo a patrones de divisin ms complejos.

Por ejemplo, en el espectro de protones para el etanol que se ha descrito
anteriormente, el grupo CH3 se divide en un triplete con una relacin de
intensidad de 1:2:1 mediante los dos protones CH2 vecinos. Del mismo modo,
el CH2 se divide en un cuarteto con una relacin de intensidad de 1:3:3:1
mediante los tres protones CH3 vecinos. En principio, los dos protones CH2
tambin se dividen de nuevo en un doblete para formar un doblete de cuartetos
mediante el protn hidroxilo, pero el intercambio intermolecular del protn
hidroxilo acdico a menudo resulta en una prdida de informacin del
acoplamiento.

El acoplamiento a cualquier ncleo de espn , tal como el fsforo-31 o el flor-
19, funciona de esta manera (aunque las magnitudes de las constantes de
acoplamiento pueden ser muy diferentes). Pero los patrones de divisin difieren
de los descritos anteriormente para los ncleos con espn superior a debido
a que el nmero cuntico de espn tiene ms de dos valores posibles. Por
ejemplo, para el acoplamiento al deuterio (un ncleo de espn 1) divide la seal
en un triplete 1:1:1, porque el espn 1 tiene tres estados de espn. Del mismo
modo, un ncleo de espn 3/2 divide una seal 1:1:1:1 en un cuarteto y as
sucesivamente.

El acoplamiento combinado con el desplazamiento qumico (y la integracin de
protones) nos dice no slo el entorno qumico de los ncleos, sino tambin el
nmero de ncleos activos RMN vecinos en la molcula. En los espectros ms
complejos, con mltiples picos en desplazamientos qumicos similares, o en el
espectro de ncleos distintos del hidrgeno, el acoplamiento es a menudo la
nica manera de distinguir ncleos diferentes.


ACOPLAMIENTO DE SEGUNDO ORDEN (O FUERTE)

La descripcin anterior asume que la constante de acoplamiento es pequea
en comparacin con la diferencia en frecuencias RMN entre los espines
inequivalentes. Si la separacin del desplazamiento disminuye (o la fuerza del
acoplamiento aumenta), los patrones de intensidad del multiplete se
distorsionan, y luego se vuelven ms complejos y difciles de analizar
(especialmente si ms de dos espines estn involucrados). La intensificacin
de algunos picos en un multiplete se logra a expensas del resto, que a veces
casi desaparece en el ruido de fondo, aunque el rea integrada bajo los picos
se mantenga constante. En la mayora de RMN de alto campo, sin embargo,
las distorsiones suelen ser modestas y las distorsiones caractersticas (techo)
pueden ayudar a identificar los picos.

Los efectos de segundo orden disminuyen cuando la diferencia de frecuencia
entre multipletes aumenta, por lo que el espectro RMN de alto campo (es decir,
de alta frecuencia) muestra menos distorsin que los espectros de frecuencia
menor. Los primeros espectros a 60 MHz eran ms propensos a la distorsin
que los espectros de mquinas posteriores que operan en frecuencias de 200
MHz o superiores.


INEQUIVALENCIA MAGNTICA

Pueden ocurrir efectos ms sutiles si los espines qumicamente equivalentes
(es decir, ncleos relacionados por simetra y con la misma frecuencia RMN)
tienen diferentes relaciones de acoplamiento respecto a los espines externos.
Los espines que son qumicamente equivalentes pero no son indistinguibles
(sobre la base de sus relaciones de acoplamiento) se denominan espines con
inequivalencia magntica. Por ejemplo, los sitios 4 H del 1,2-diclorobenceno se
dividen en dos pares qumicamente equivalentes por simetra, pero un individuo
miembro de uno de los pares tiene diferentes acoplamientos a los espines que
componen el otro par. La inequivalencia magntica puede dar lugar a espectros
muy complejos que slo pueden ser analizados mediante modelado
computacional. Estos efectos son ms comunes en los espectros RMN de
sistemas aromticos y otros no flexibles, mientras que el promedio
conformacional de los enlaces CC en molculas flexibles tiende a igualar los
acoplamientos entre protones en carbonos adyacentes, reduciendo los
problemas con la inequivalencia magntica.


ESPECTROMETRA DE CORRELACIN

La espectrometra de correlacin es uno de los diversos tipos de
espectrometra de resonancia magntica nuclear (RMN) bidimensional. Este
tipo de experimento RMN es mejor conocido por su acrnimo, COSY. Otros
tipos de espectrometra RMN bidimensional son la espectrometra-J, la de
intercambio (EXSY), la de efecto Overhauser nuclear (NOESY), la de
correlacin total (TOCSY), y experimentos de correlacin heteronuclear como
el HSQC, HMQC y HMBC. Los espectros bidimensionales RMN proporcionan
ms informacin acerca de una molcula que los espectros RMN
unidimensionales, y son especialmente tiles para determinar la estructura de
la molcula, en particular para molculas que son demasiado complicadas para
la RMN unidimensional. El primer experimento bidimensional, COSY, fue
propuesto por Jean Jeener, un profesor de la Universit Libre de Bruxelles, en
1971. Este experimento fue posteriormente implementado por Walter P. Aue,
Enrico Bartholdi y Richard R. Ernst, que publicaron sus trabajos en 1976.


RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR DE ESTADO SLIDO

Una variedad de circunstancias fsicas impide que las molculas sean
estudiadas en solucin, ni tampoco mediante otras tcnicas
espectroscpicas a un nivel atmico. En los medios de fase slida, tales
como cristales, polvos micro cristalinos, geles, soluciones anisotrpicas,
etc, se da en particular el acoplamiento dipolar y la anisotropa de
desplazamiento qumico, que se convierten en dominantes para el
comportamiento de los sistemas de espn nuclear. En la espectrometra
RMN convencional en estado de solucin, estas interacciones
adicionales daran lugar a una ampliacin considerable de las lneas
espectrales. Diversas tcnicas permiten establecer condiciones de alta
resolucin, que pueden, al menos para los espectros de 13 C, ser
comparables a los espectros RMN en estado de solucin.

Dos conceptos importantes para la alta resolucin en la espectrometra
RMN de estado slido son la limitacin de la posible orientacin
molecular mediante orientacin de la muestra, y la reduccin de las
interacciones magnticas nucleares anisotrpicas mediante giro de la
muestra. De este ltimo enfoque, destaca el mtodo del giro rpido en
torno al ngulo mgico, cuando el sistema est compuesto por ncleos
de espines 1/2. Una serie de tcnicas intermedias, con muestras de
alineamiento parcial o movilidad reducida, se estn utilizando tambin
en espectrometra RMN.

Las aplicaciones de la RMN de estado slido suelen utilizarse en
investigaciones sobre protenas de la membrana, fibrillas de protenas,
todo tipo de polmeros, anlisis en qumica inorgnica, y tambin otras
ms "exticas" como las hojas de plantas y las pilas de combustible.



APLICACIONES DE RESONANCIA MAGNETICA NUCLEAR

USO DE LA RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR EN LA
MEDICINA

La Resonancia Magntica Nuclear (RMN) es un fenmeno fsico
basado en las propiedades magnticas que poseen los ncleos
atmicos permitiendo alinear los campos magnticos de diferentes
tomos en la direccin de un campo magntico externo. La respuesta a
este campo externo depende del tipo de ncleos atmicos por lo que
esta tcnica puede utilizarse para obtener informacin sobre una
muestra., y en general, las molculas mas utilizadas son el Hidrgeno-1
y el Carbono-13.
La resonancia magntica nuclear hace uso de las propiedades de
resonancia aplicando radiofrecuencias a los tomos o dipolos entre los
campos alineados de la muestra y permite estudiar la informacin
estructural o qumica de una muestra. La RMN se utiliza tambin en el
campo de la investigacin de computadoras cunticas. Sin embargo sus
aplicaciones ms frecuentes se encuentran ligadas al campo de la
medicina, para la obtencin de imgenes del cuerpo, adems esta
tcnica cada da va ganando mas terreno sobre otras, como la
Tomografa Computarizada, pues la RM es mucho mas inocua que la
TC.
Introduccin

La Resonancia Magntica nuclear es una tcnica utilizada en la
actualidad para obtener imgenes por medio de la polarizacin de las
molculas de un cuerpo, por medio de un campo magntico intenso,
este fenmeno esta basado en las propiedades magnticas de los
ncleos atmicos.
El principal uso de la Resonancia Magntica (RM), es el de
obtener imgenes del interior de los seres vivos principalmente el ser
humano, aunque tambin se utiliza dentro de la medicina veterinaria,
para un diagnstico de alguna enfermedad o malfuncionamiento de un
rgano o un aparato sin necesidad de una intervencin o tcnica
invasiva, aunque como se ver mas adelante existe un procedimiento
en donde la RM es invasiva, pero en su mayora los procedimientos
utilizados son no invasivos e inocuos. Su uso en este campo es reciente
debido a que va muy ligado con el aumento de la velocidad de
procesamiento de las computadoras por lo que la RM es una tcnica
que lleva desarrollndose desde los ltimos 70 aos.

Objetivos
Conocer los principales usos de la Resonancia Magntica
Nuclear en la medicina actual, as como la forma en que fue
desarrollndose a lo largo de la historia, los procesos fsicos que
intervienen y las ventajas que presenta la Resonancia Magntica
nuclear contra otras tcnicas para obtencin de imgenes, como la
Tomografa Computarizada.
Se pretende por lo tanto hablar de manera sencilla y concreta
sobre la RMN para que se pueda entender la importancia de esta
tcnica y los avances que se han logrado en los ltimos aos para su
mejoramiento lo que trae como consecuencia una muy importante
ayuda para el diagnstico mdico.
El presente trabajo se divide en: un Marco Terico donde se
habla sobre la historia de la Resonancia Magntica Nuclear y se van
introduciendo y explicando algunos de los procesos fsicos que se
fueron juntando para poder llegar a los aparatos de RMN con los que se
cuenta actualmente. Posteriormente se muestran algunos de los
diferentes procedimientos utilizados para la RMN, su uso en la medicina
y algunas cuestiones de seguridad.

Marco Terico
Para llegar a los actuales aparatos de Resonancia Magntica se
ha recorrido un largo camino durante los ltimos dos siglos, pues desde
las investigaciones de las propiedades magnticas de la sangre de
Michael Faraday hasta los nuevos aparatos para tomar imgenes del
cerebro se ha caminado un largo trecho.
Las investigaciones bsicas que dieron lugar a la resonancia
magntica se iniciaron en una serie de laboratorios de fsica en las
primeras dcadas del siglo XIX, sin embargo el camino hacia su
descubrimiento comenz con las primeras investigaciones sobre la
naturaleza del tomo. Aunque el concepto de tomo se remonta hasta
la Grecia antigua, ha sido en los ltimos cien aos aproximadamente
cuando se ha adquirido un conocimiento objetivo de su existencia y de
las partes que lo forman. En 1897, el fsico J. J. Thomson, de la
Universidad de Cambridge (Inglaterra), descubri el electrn. Durante
las dos dcadas siguientes, una serie de destacados fsicos, entre los
que se incluyen Max Planck, Ernest Rutherford, Niels Bohr, Erwin
Schrodinger y Werner Heisenberg, se basaron en los trabajos de unos y
otros para avanzar en el estudio de la estructura y propiedades del
tomo y las partculas atmicas. Con ello, revolucionaron la fsica y
elaboraron una teora y un lenguaje nuevos conocidos como mecnica
cuntica.
En 1929, Isidor Isaac Rabi comenz a impartir clases de
mecnica cuntica en la Universidad de Columbia. Durante la dcada
siguiente, su equipo de investigacin utiliz una tcnica denominada
resonancia de haces moleculares para estudiar las propiedades
magnticas de los tomos y las molculas. En la poca en la que Rabi
realiz estos experimentos, los fsicos saban que los ncleos atmicos
estaban compuestos por dos tipos de partculas: protones con carga
positiva y partculas neutras denominadas neutrones. Alrededor de este
ncleo formando como una especie de nube se encontraban los
electrones, cuya carga era negativa. Los fsicos tambin haban
descubierto que los electrones, los protones, los neutrones y, en
muchos casos, los ncleos en s, se comportaban como si giraran sobre
su eje, al igual que los planetas. Esto llev al descubrimiento de una
propiedad denominada momento angular de espn, que cuenta con
magnitud y direccin. Una partcula giratoria de este tipo genera un
campo magntico y un "momento magntico" asociado y acta como
una pequea barra magntica con polos positivo y negativo. Si se
coloca en un campo magntico externo potente, el "momento
magntico" de un ncleo tiende a alinearse con (en paralelo) o contra
(en sentido antiparalelo) el campo externo. La alineacin paralela
corresponde a un estado de energa inferior a la alineacin antiparalela.

Los experimentos de Rabi consistan en hacer pasar un haz de
molculas de cloruro de litio a travs de una cmara de vaco y
manipular el haz con distintos campos magnticos. Al estudiar cmo
afectaba el campo magntico a la trayectoria de las molculas, Rabi
pudo adquirir nuevos conocimientos acerca de las magnitudes del
momento magntico del ncleo. Rabi previ que, con el estmulo
apropiado, los momentos magnticos de los ncleos podan invertirse o
cambiar su orientacin en relacin al campo magntico. En 1937,
siguiendo los consejos del fsico holands Cornelius J. Gorter, Rabi y su
equipo aadieron un nuevo elemento a sus experimentos: sometieron
un haz molecular a ondas de radio (seales electromagnticas dentro
del intervalo de la radiofrecuencia o la radiodifusin) mientras variaban
la potencia del campo magntico.
Rabi y su equipo ajustaron la potencia del campo magntico
hasta hacer que los momentos magnticos de los ncleos se invirtieran,
lo que sucede cuando la frecuencia de la seal de radio coincide con la
frecuencia precesional caracterstica de los ncleos. Cuando se produce
esta coincidencia (la frecuencia de resonancia), un ncleo absorbe
energa de la seal de radio igual a la diferencia entre sus dos estados
de energa y, por tanto, salta al estado superior. Tambin se produce
una inversin cuando un ncleo emite dicha energa al pasar de nuevo
del estado superior de energa al inferior. Rabi poda detectar la
transicin tanto si el ncleo saltaba al estado de energa superior como
si descenda al inferior. Esta tcnica se denomina en la actualidad
resonancia magntica o, de forma ms precisa, resonancia magntica
de haces moleculares.
El equipo de Rabi emple esta nueva tcnica para deducir
detalles hasta ahora desconocidos acerca de las interacciones internas
de las molculas. Descubrieron una serie de resonancias dentro de una
molcula simple que les permiti "ver" cmo los tomos individuales
estn unidos entre s y cmo sus ncleos se ven afectados por los
tomos vecinos. Estos extraordinarios experimentos y el desarrollo de la
resonancia magntica de haces moleculares como tcnica de estudio
de las propiedades magnticas y la estructura interna de molculas,
tomos y ncleos le valieron a Rabi el premio Nobel de fsica en 1944.
Varios meses despus de realizar estos experimentos, el equipo
de Rabi intent una variacin: manipular la frecuencia de radio en lugar
de la potencia del campo magntico. Este mtodo, que ampla el
espectro de las seales resultantes al igual que se ampla el espectro
de la luz visible al pasar por un prisma, es la base de la espectroscopia
de radiofrecuencias, que revolucionara el anlisis qumico y resultara
ser un componente esencial en el desarrollo de las exploraciones
mediante resonancia magntica como herramienta de diagnstico
mdico.
Sin embargo durante el transcurso de la Segunda Guerra Mundial
se interrumpieron las investigaciones sobre RMN, pero en los aos
posteriores se produjeron importantes avances. En Estados Unidos, dos
grupos de fsicos se propusieron por separado desarrollar un mtodo
ms simple para observar la resonancia magntica en los ncleos de
molculas de lquidos y slidos en lugar de en molculas aisladas como
en los experimentos de Rabi. Edward Purcell fue el encargado de dirigir
la investigacin de la Universidad de Harvard y FelixBloch fue el
encargado de la Universidad de Stanford. Purcell trabajo en la mejora
del Radar durante la Segunda Guerra Mundial en el Instituto de
Tecnologa de Massachussets, investigando sobre todo la produccin y
deteccin de la energa producida por las radiofrecuencias, lo que
probablemente le ayud a entender estos fenmenos.

Tanto Purcell como Bloch decidieron estudiar el protn, el ncleo
del tomo de hidrgeno (H). Al estar compuesto por un nico protn, el
ncleo del hidrgeno posee un momento magntico considerable. El
hidrgeno se convertira enel elemento ms importante para la
resonancia magntica debido a sus propiedades nucleares favorables,
su presencia casi universal y su abundancia en el cuerpo humano como
parte del agua (H2O). El equipo de Purcell utiliz un bloque de 90 g de
parafina como fuente de hidrgeno, mientras que el equipo de Bloch
emple unas gotas de agua contenidas en una esfera de cristal. Los dos
equipos de investigacin colocaron las muestras en un campo
magntico y esperaron a que los ncleos alcanzaran un equilibrio
magntico y trmico, un estado magnetizado en el que los ncleos se
alinean ligeramente ms en paralelo al campo externo que en sentido
antiparalelo. A continuacin, al igual que hizo el equipo de Rabi, los
equipos de investigacin aplicaron ondas de radio para provocar que los
momentos magnticos de los ncleos de las muestras se invirtieran.
Purcell y Bloch esperaban detectar resonancia magntica al observar la
energa que los ncleos en precesin absorban o cedan al campo de
frecuencia de radio cuando se propiciaban las condiciones de
resonancia.
En 1945, ambos grupos lograron crear, con tres semanas de
diferencia, las condiciones necesarias para observar el fenmeno. Sus
experimentos demostraron lo que tcnicamente se conoce como
resonancia magntica nuclear en materia condensada, para distinguirlo
del descubrimiento de Rabi, la resonancia magntica de haces
moleculares. En 1952, Bloch y Purcell compartieron el premio Nobel de
fsica por estos experimentos.
Las investigaciones en resonancia magntica nuclear siguieron
avanzando. Los investigadores que formaban parte de los laboratorios
de Purcell y Bloch pronto comenzaron a utilizar la espectroscopia de la
resonancia magntica nuclear para investigar la composicin qumica y
la estructura fsica de la materia. Uno de los primeros avances en este
sentido fue la medicin de las cantidades denominadas tiempos de
relajacin, T1 y T2; T1 es el tiempo que tardan los ncleos de las
muestras experimentales en volver a su alineacin original o estado de
equilibrio, mientras que T2 es la duracin de la seal magntica
obtenida de la muestra. Es posible que el ncleo se mantenga en este
estado y que no tenga la diferencia requerida para dar el vector de
magnetizacin en un estado termodinmico a causa de esto T1 es
siempre mayor (o menor) que T2. En el espectro de la RMN, T2 define
el ancho de la seal de RMN, y mientras un ncleo tenga un tiempo T2
largo, la seal RMN es muy alta. La longitud de los tempos T1 y T2
estn tambin relacionados con el movimiento molecular.
Uno de los primeros alumnos de Purcell en graduarse,
NicolaasBloembergen, que haba llegado a Harvard desde Holanda en
1946, jug un papel decisivo junto a Pound y Purcell en esta
investigacin. Bloembergen fue el primer investigador en medir los
tiempos de relajacin de forma precisa y, junto a Purcell y Pound,
tambin midi el modo en que estos tiempos cambiaban en gran
variedad de lquidos y slidos. Afortunadamente para futuras
investigaciones y aplicaciones, los tiempos de relajacin pueden
medirse en segundos o fracciones de segundo, convirtiendo a la
resonancia magntica nuclear en una herramienta de investigacin
enormemente prctica.
Bloembergen, Purcell y Pound publicaron un artculo en 1948 que
ejerci una gran influencia en varias ramas de la fsica. La manipulacin
de los tiempos de relajacin ha proporcionado un mtodo de gran
eficacia en qumica y biologa para analizar la estructura de las
molculas y, como otros investigadores descubriran ms tarde, resulta
esencial para producir el contraste necesario para la obtencin de
imgenes de tejidos del cuerpo humano.
A finales de la dcada de 1940, Henry Torrey de la Universidad
de Rutgers y, de forma independiente, Erwin Hahn de la Universidad de
Illinois, llevaron a cabo un nuevo avance en el campo de la resonancia
magntica nuclear al aplicar a la muestra impulsos de ondas de radio
potentes en lugar de una nica onda continua. Primero observaron
seales de resonancia magntica nuclear transitorias durante la
aplicacin de impulsos largos. Gracias a las observaciones posteriores
de Hahn acerca de que las seales de resonancia magntica nuclear
transitorias podan medirse despus de la aplicacin de impulsos cortos,
la tcnica de impulsos se convirti en la opcin ideal para fsicos y
qumicos que investigaban tomos y molculas.

Adems, Hahn descubri un fenmeno conocido como "eco de
espn", que result ser de gran importancia para la medicin de los
tiempos de relajacin. En un principio, Hahn atribuy estas seales
aparentemente falsas a un fallo en su equipo electrnico. Tras un
estudio ms profundo, reconoci que estaban causadas por la
aceleracin y desaceleracin de los ncleos giratorios debido a las
variaciones en los campos magnticos locales. Al aplicar dos o tres
impulsos de radio cortos y, a continuacin, escuchar el eco, Hahn
descubri que poda obtener informacin an ms detallada sobre la
relajacin del espn nuclear de lo que era posible con un nico impulso.
La resonancia magntica nuclear con impulsos y los ecos de
espn jugaran un papel esencial en el desarrollo de la resonancia
magntica dos dcadas despus. En aquel momento, sin embargo, la
idea de utilizar la resonancia magntica nuclear para la obtencin de
imgenes simplemente no se le ocurri a ninguno de los cientficos que
utilizaban el espectro de resonancia magntica nuclear en fsica o
qumica. De todas formas era necesario que se realizaran algunos
avances para poder llegar a esto, ya que a finales de la dcada de
1950, Russell Varian, de VarianAssociates, propuso un nuevo mtodo
de impulsos denominado resonancia magntica nuclear con
transformada de Fourier, al mismo tiempo que Irving Lowe y Richard E.
Norberg, de la Universidad de Washington en St. Louis, demostraron
experimental y tericamente cmo era posible obtener todos los
resultados disponibles de los experimentos con onda continua mediante
la manipulacin matemtica de las seales producidas en un
experimento con impulsos, pero el problema radicaba en la baja
capacidad de las computadoras en esos tiempos, pues se necesitaba
que se procesara una gran cantidad de datos en un tiempo corto.
A finales de la dcada de 1960, Richard Ernst y Weston
Anderson, que por entonces trabajaban para VarianAssociates, estaban
estudiando el complejo espectro de resonancia magntica nuclear, de
gran inters para los qumicos. El hecho de buscar las frecuencias que
producen la gran cantidad de lneas del espectro mediante el mtodo de
aproximaciones sucesivas haca que el proceso fuera extremadamente
lento. Estos investigadores se dieron cuenta de que si emitan de forma
simultnea un intervalo de frecuencias de radio a los tomos de la
muestra y, a continuacin, realizaban el anlisis de Fourier a la seal de
impulso resultante, podan obtener todos los resultados del mtodo de
onda continua. Esta tcnica resultaba mucho ms rpida que la anterior,
y permita a los investigadores observar seales hasta diez veces ms
dbiles. Para entonces, los avances realizados en el campo de la
informtica hacan que la transformacin de Fourier resultara prctica;
en 1991, R. Ernst gan el Premio Nobel de Qumica por esta
contribucin.

La aparicin de los equipos informticos de alta velocidad fue
fundamental para el desarrollo de la tcnica de obtencin de imgenes
por resonancia magntica, ya que permitan gestionar los numerosos y
complejos clculos que eran necesarios para obtener las imgenes.
Adems de estos avances en el campo de la informtica, otros tres
avances contribuyeron al nacimiento de la tcnica de obtencin de
imgenes por resonancia magntica. Uno de estos avances fue el que
realiz el ingeniero electrnico britnico GodfreyHounsfield, que en
1971 fabric un instrumento que combinaba una mquina de rayos X
con un ordenador y emple algunos principios de reconstruccin
algebraica para explorar el organismo en distintas direcciones,
manipulando las imgenes para obtener una vista transversal del
interior. Hounsfield desconoca que el fsico nuclear sudafricano Allan
Cormack haba publicado bsicamente la misma idea en 1957,
utilizando una tcnica de reconstruccin denominada transformada de
radn. Aunque el trabajo de Cormack no tuvo una gran difusin, l y
Hounsfield compartieron en 1979 el premio Nobel de medicina por el
desarrollo de la tomografa computerizada. Los principios
fundamentales de la tomografa computerizada constituyen la base de
muchos de los sofisticados mtodos de obtencin de imgenes que
existen en la actualidad.

Los otros dos avances que contribuyeron a la obtencin de
imgenes por resonancia magntica estaban relacionados con la
resonancia magntica nuclear. Uno fue la conceptualizacin de la
resonancia magntica nuclear como herramienta de diagnstico clnico
y el otro la invencin de un mtodo prctico para producir imgenes
tiles a partir de los datos de la resonancia magntica nuclear.
Ya en 1959, J. R. Singer, de la Universidad de California,
Berkeley, propuso que la resonancia magntica nuclear poda utilizarse
como herramienta de diagnstico en medicina. Unos aos ms tarde,
CarltonHazlewood, del BaylorCollege of Medicine, public los resultados
de una serie de trabajos en los que se utiliz la resonancia magntica
nuclear para diagnosticar enfermedades musculares en pacientes
humanos. En 1969, Raymond Damadian, un mdico del Downstate
Medical Center de Brooklyn (Nueva York), comenz a idear la forma de
utilizar esta tcnica para detectar los primeros signos del cncer en el
organismo. En un experimento realizado en 1970, Damadian extirp una
serie de tumores de rpido crecimiento que se haban implantado en
ratas de laboratorio y comprob que la resonancia magntica nuclear de
los tumores era diferente de la de los tejidos normales. En 1971,
Damadian public los resultados de sus experimentos en la revista
Science. Sin embargo, an no se haba demostrado la fiabilidad clnica
del mtodo de Damadian en la deteccin o diagnstico del cncer.
El gran avance tcnico que hizo posible producir una imagen til
a partir de las seales de resonancia magntica nuclear de tejidos vivos
lo realiz el qumico Paul Lauterbur, que a principios de la dcada de
1970 diriga la compaa NMR Specialties, ubicada en Pittsburgh. En
1971, Lauterbur observ al qumico LeonSaryan repetir los
experimentos de Damadian con tumores y tejidos sanos de ratas.
Lauterbur lleg a la conclusin de que la tcnica no ofreca la
informacin suficiente para diagnosticar tumores y se propuso idear un
mtodo prctico para obtener imgenes a partir de la resonancia
magntica nuclear. La clave estaba en ser capaz de localizar la
ubicacin exacta de una determinada seal de resonancia magntica
nuclear en una muestra: si se determinaba la ubicacin de todas las
seales, sera posible elaborar un mapa de toda la muestra.
La idea de Lauterbur consista en superponer al campo
magntico esttico espacialmente uniforme un segundo campo
magntico ms dbil que variara de posicin de forma controlada,
creando lo que se conoce como gradiente de campo magntico. En un
extremo de la muestra, la potencia del campo magntico graduado sera
mayor, potencia que se ira debilitando con una calibracin precisa a
medida que se fuera acercando al otro extremo. Dado que la frecuencia
de resonancia de los ncleos en un campo magntico externo es
proporcional a la fuerza del campo, las distintas partes de la muestra
tendran distintas frecuencias de resonancia. Por lo tanto, una
frecuencia de resonancia determinada podra asociarse a una posicin
concreta. Adems, la fuerza de la seal de resonancia en cada
frecuencia indicara el tamao relativo de los volmenes que contienen
los ncleos en distintas frecuencias y, por tanto, en la posicin
correspondiente. Las sutiles variaciones de las seales se podran
utilizar entonces para representar las posiciones de las molculas y
crear una imagen.. Actualmente, los dispositivos de obtencin de
imgenes por resonancia magntica utilizan tres conjuntos de bobinas
de gradientes electromagnticos sobre el sujeto para codificar las tres
coordenadas espaciales de las seales.
Al mismo tiempo Peter Mansfield, de la Universidad de
Nottingham, Inglaterra, tuvo una idea similar. En 1972, Mansfield estaba
estudiando el modo de utilizar la resonancia magntica nuclear para
obtener informacin detallada acerca de la estructura de materiales
cristalinos. En un trabajo publicado en 1973, Mansfield y sus colegas
tambin utilizaron un esquema de gradiente de campo. En 1976,
Mansfield desarroll una tcnica ultrarrpida para obtener imgenes con
resonancia magntica conocida como ecoplanar, que permite explorar
todo el cerebro en cuestin de milsimas de segundo. La tcnica
ecoplanar es la clave para crear imgenes con resonancia magntica de
forma rpida para el diagnstico de infartos cerebrales e imgenes con
resonancia magntica funcional en las investigaciones sobre el cerebro.
Mientras tanto, a los resultados de Lauterbur, publicados en
1972, se incorporaba una imagen de la muestra experimental: un par de
tubos de ensayo sumergidos en un vial de agua. Mediante el pequeo
escner de resonancia magntica nuclear que l mismo haba creado (y
una tcnica denominada proyeccin de fondo procedente de la
tomografa computerizada), continu explorando pequeos objetos. En
1974, valindose de un dispositivo de resonancia magntica nuclear
mayor, obtuvo una imagen de la caja torcica de un ratn vivo. En 1975,
Mansfield ya haba obtenido imgenes de una serie de tallos de plantas
y de un muslo de un pavo muerto. Al ao siguiente, obtuvo la primera
imagen de un dedo humano por resonancia magntica nuclear, en la
que se poda diferenciar el hueso, la mdula, los nervios y las arterias.
Damadian, por su parte, tambin trabaj en la obtencin de imgenes.
En 1977, obtuvo una imagen de la caja torcica de un hombre vivo.
A principios de la dcada de 1980, la gran oleada de
investigaciones relacionadas con la obtencin de imgenes por
resonancia magntica dieron lugar a un floreciente sector comercial. El
trmino "nuclear" se fue poco a poco eliminando del nombre debido a
las connotaciones negativas que esto traa y para hacerlo mucho mas
comercial Los avances en el campo de la informtica de alta velocidad y
los imanes superconductores permitieron a los investigadores disear
mquinas de resonancia magntica de mayores dimensiones con una
sensibilidad y una resolucin inmensamente mejores.

El gran avance que condujo a la resonancia magntica funcional
se produjo a principios de la dcada de 1980, cuando George Radda y
sus colegas de la Universidad de Oxford, Inglaterra, descubrieron que la
resonancia magntica se poda utilizar para registrar los cambios en el
nivel de oxgeno de la sangre, lo que a su vez poda servir para realizar
un seguimiento de la actividad fisiolgica. El principio en el que se basa
la obtencin de imgenes con contraste BOLD (del ingls
bloodoxygenleveldependent, dependiente del nivel de oxgeno de la
sangre) fue descrito 40 aos antes por Linus Pauling. En 1936, Pauling
y Charles D. Coryell, ambos del California Institute of Technology
(Instituto tecnolgico de California), publicaron un estudio en el que
describan el magnetismo de la hemoglobina, el pigmento que
transporta el oxgeno y que le da a los glbulos rojos su color. Mucho
antes, en 1845, el fsico y qumico ingls Michael Faraday, el
descubridor de la induccin electromagntica, investig las propiedades
magnticas de la sangre seca pero dejo inconclusos estos estudios,
sobre todo el realizarlos con sangre fresca. Sin embargo Pauling y
Coryell realizaron este experimento 90 aos despus. Ambos qumicos
descubrieron que la susceptibilidad magntica de la sangre arterial
completamente oxigenada difera hasta en un 20% de la sangre venosa
totalmente desoxigenada.
En 1990, SeijiOgawa de los laboratorios Bell de AT&T inform
que en estudios realizados con animales, la hemoglobina desoxigenada
colocada en un campo magntico aumentaba la potencia de dicho
campo, mientras que la hemoglobina oxigenada no. Ogawa demostr
en estudios con animales que una zona que contiene gran cantidad de
hemoglobina desoxigenada deforma ligeramente el campo magntico
que rodea al vaso sanguneo, deformacin que se ve reflejada en una
imagen por resonancia magntica.
Otros investigadores comenzaron a estudiar estos efectos en
seres humanos. En 1992, por ejemplo, varios investigadores, entre los
que se incluan Ogawa, John W. Belliveau del Massachusetts General
Hospital y Peter Bandettini del Medical College of Wisconsin, publicaron
los resultados de una serie de estudios acerca de la respuesta cerebral
a estimulacin sensorial realizados con estas tcnicas de obtencin de
imgenes por resonancia magntica funcional. Actualmente, las
imgenes obtenidas por resonancia magntica funcional se utilizan,
entre otras cosas, para guiar a los cirujanos de forma que no se daen
zonas esenciales del cerebro, para detectar sntomas de infartos
cerebrales y para esclarecer el funcionamiento del cerebro.
En la actualidad la espectroscopia y las exploraciones por
resonancia magntica son tecnologas de diagnstico ampliamente
utilizadas en medicina y, con el surgimiento en los ltimos aos de
nuevas tcnicas, mquinas y computadoras an ms potentes, la
velocidad y precisin de la resonancia magntica funcional ha
aumentado de manera extraordinaria.



Desarrollo
Actualmente el principal uso de la RMN es en la medicina,
esta una tcnica de obtencin de imgenes del organismo basada en el
fenmeno fsico de la resonancia. Estas imgenes se utilizan como
fuente de informacin en numerosos diagnsticos.
Como se explic anteriormente, la RM utiliza fuertes campos
magnticos que actan sobres los tomos que componen diferentes
sustancias en el cuerpo como el hidrgeno. Los diferentes tejidos
emiten diferentes ondas en funcin de su densidad y de su contenido en
agua. Una computadora traduce los patrones de estas ondas en
imgenes muy detalladas de las partes del cuerpo en las cuales se
pueden identificar anomalas que pueden ser utilizadas para un
diagnstico mdico. La RM produce cortes axiales (trasversales) del
cuerpo parecidos a los de la tomografa axial computarizada, pero
tambin puede presentar proyecciones en diferentes planos: coronales
y sagitales.
La tcnica usa equipos con potentes campos magnticos que
oscilan desde 0,2 hasta 2 ms Teslas, lo que alinea los tomos con un
nmero impar de nucleones, por lo general el Hidrgeno, y al ser
sometidos a estas seales de radiofrecuencia se les otorga energa, y
cuando esta seal cesa los tomos se realinean con el campo
magntico, esto produce liberacin de energa en forma de seales
electromagnticas que son recogidas por bobinas y procesadas por
medio de una computadora, que se emplean para formar imgenes del
cuerpo.
ENTRE LAS TCNICAS MAS UTILIZADAS PARA OBTENER
IMGENES POR MEDO DE LA RMN SON LAS SIGUIENTES:

RMN por difusin.- Esta tcnica mide la difusin de las molculas
de agua en los tejidos, esto es a partir de que en los tejidos biolgicos la
difusin de las molculas de agua son anisotrpicas, por ejemplo, las
molculas dentro del axn de una neurona tienen poca posibilidad de
cruzar la membrana mielina, por lo que la molcula se mover
principalmente a lo largo de dela s fibras del axn y gracias a esto y al
conocimiento de que estas molculas se mueven en una sola direccin
y asse puede asumir que la mayora de las fibras siguen esa direccin.

RMN Angiografa.- Es una tcnica de RM que genera imgenes
de las arterias para evaluar posibles crecimientos, adelgazamientos o
algn malfuncionamiento estructural. La tcnica para obtener imgenes
de la venas es conocida como venografa.

RMN por Espectroscopia.- Es una tcnica que combina la RMN
con la espectroscopia y esto permite obtener imgenes por RM que
proporcionen una amplia informacin sobre las propiedades fsicas y
qumicas de la regin analizada.

RMN Funcional.- Esta tcnica mide las cambios de seal en el
cerebro que permiten observar el cambio de actividad neuronal. El
cerebro es escaneado en una baja resolucin, pero se obtiene
imgenes mas rpido. El funcionamiento se basa ene le mecanismo
BOLD, la cual aumenta conforme la actividad neuronal aumenta y el
sistema vascular responde mandando mas hemoglobina oxigenada, la
cual decrementa la seal de la RMy as puede obtenerse la imagen.

RM Intervencional.-Es la nica tcnica invasiva utilizada, para
poder introducir un escner al rea que se pretende revisar

RM guada por medio de ultrasonido.-Esta tcnica permite
enfocar la RM por medio de ondas ultrasnicas, calentando los tejidos y
as puede obtenerse una imagen trmica del rea en forma
tridimensional .

Multi-RM.- El hidrgeno es la molcula ms utilizada por la RM,
sin embargo es muchas otras molculas pueden ser polarizadas como
el Helio-3, el Carbono-13, el Oxgeno-17, el Sodio-23, Fsforo-31,
Xenn-129 entre otras, y esto permite obtener, en ocasiones, imgenes
mas detalladas de rganos a los que las tcnicas usuales con el
Hidrgeno y se puede obtener detalles sobre la estructura y funcin.

LOS RGANOS Y APARATOS QUE MS SE ESTUDIAN CON
ESTOS MTODOS SON:

Aparato Muscoloesqueltico.- Sigue constituyendo la primera
indicacin de la RM, por volumen. A pesar de que la radiologa simple
sigue siendo la prueba inicial en muchos casos, la RM tiene la virtud de
valorar patologa de partes blandas, que es invisible en la radiografa:
meniscos, ligamentos, msculos y tendones, cartlago, etc. La RM se ha
convertido en el estndar en muchas patologas articulares y ha
demostrado ampliamente su eficacia en la caracterizacin de lesiones
de partes blandas y en la deteccin precoz de patologa osteoarticular.
Todas las articulaciones, y cualquier parte del cuerpo que contenga
huesos y msculos se benefician de esta aplicacin

Columna vertebral.- La RMN complementa la informacin
aportada por las radiografas de columna, valorando discos
intervertebrales, partes blandas y mdula. Presenta muchas ventajas
con respecto al TAC para el estudio de la patologa discal y es su
capacidad de obtener imgenes sagitales o coronales, con lo que el
estudio es ms completo. Adems, la RM es la tcnica de eleccin para
el estudio de mdula y saco aracnoideo, con una notable superioridad
con respecto a cualquier tcnica de imagen.

Crneo.- La capacidad multiplanar, la resolucin espacial y su
posibilidad de caracterizacin tisular son caracteres indiscutibles de la
RM que hacen que sea mucho ms usada que otras tcnicas de
imagen. En la actualidad, se puede afirmar que los nico motivo para
indicar un TAC craneal frente a una RM son los de disponibilidad
(acceso en el hospital, horario de funcionamiento), situacin del
paciente y costo (aunque el costo de un TAC con contraste es similar al
de una RM sin contraste), adems de situaciones puntuales como la
hemorragia subaracnoidea y la deteccin de calcio (escasa sensibilidad
de la RM). Dentro de este apartado, han aparecido unas tcnicas
novedosas, cuyas aplicaciones se estn validando actualmente.
Algunos de estas tcnicas son la difusin, la perfusin y la
espectroscopia adems de algo conocido como la Resonancia
Magntica funcional.

Abdomen.-Tambin en los estudios del abdomen, la RMN, esta
compitiendo contra la TC, para el diagnstico de problemas en el
hgado, pncreas, y otros rganos alojados en el abdomen.

Pelvis.- Los avances tecnolgicos estn permitiendo avanzar
en las aplicaciones de la RM. Se ha demostrado la superioridad de la
RM en el estadio de neoplasias endometriales, debido a su
discriminacin tisular. Tambin se ha mostrado un gran avance en la
deteccin de cncer de prstata.

Trax.- Aunque el porcentaje de estudios de este territorio
sigue siendo pequeo, la tendencia es progresiva.

Corazn.- La RM actualmente es capaz de realizar estudios del
corazn no solo morfolgicos sino tambin funcionales, y se considera
el standard en el clculo de parmetros de funcin ventricular (fraccin
de eyeccin, volumen telesistlico y telediastlico, masa miocrdica).
Tiene adems un papel importante en la isquemia miocrdica, para
determinar la viabilidad del miocardio y predecir por lo tanto la respuesta
a un tratamiento de revascularizacin. Puede aportar informacin
importante en el estudio de las miocardiopatas, displasia arritmognica
del ventrculo derecho y otras patologas.

Para realizar el proceso se coloca a la persona dentro de una
mquina que es un tubo, que es el escner, y se debe de permanecer
quieto mientras se desarrolla el anlisis, pues el movimiento puede
afectar seriamente las imgenes obtenidas.

La RMN no presenta ningn riesgo, no produce dolor y solo si se
necesita inyectar alguna sustancia contrastante, como el gadolino, se
puede presentar alguna reaccin alrgica. Sin embargo al tratarse de
una tcnica que utiliza fuertes campos magnticos y ondas de radio
frecuencia debe de cuidarse de que no exista algn elemento metlico
dentro o fuera del cuerpo, tales como:
Marcapasos
Dispositivos implantados como bombas de insulina
Grapas o clavos metlicos.
Prtesis metlicas
Joyas o broches de metal
Cualquier otro aparato electrnico o tarjetas con cdigo
magntico

Esto se aplica a todo aquel que se encuentre dentro del espacio
en el que se realiza la Resonancia Magntica . La intensidad del campo
magntico generado disminuye a medida que nos alejamos del
isocentro del imn, segn unas curvas de intensidad definidas. Los
posibles efectos del campo magntico sobre dispositivos electrnicos se
manifiestan desde la lnea de 5 gauss.
Adems si se porta alguna prtesis o aparatos de ortodoncia fijos
que son considerados inocuos para la exploracin, pueden afectar la
imagen si la zona que se v a estudiar es cercana.

Por lo tanto se puede decir que esta tcnica es completamente
inocua en comparacin con otras, por ejemplo la Tomografa
Computarizada (TC), ya que esta utiliza radiacin ionizada, o tambin
rayos X para la adquisicin de imgenes hacindola una buena
herramienta para tejidos densos como los huesos, mientras que la RMN
es mucho mejor para los tejidos blandos (que son la mayora del cuerpo
humano). Ambos pueden generar imgenes mltiples en 2-D de
secciones cruzadas o pedazos de tejidos para reconstruccin en
imgenes de 3-D, pero a diferencia de la TC, que solo utiliza los rayos X
como atenuadorpara el contraste de la imagen, la RMN cuanta con una
larga lista de propiedades que pueden ser usadas para el control de la
imagen. Otra cosa mas es que la TC, o los simples rayos X, pueden ser
perjudiciales si alguna persona se somete durante mucho tiempo a
ellos. Y por ltimo es que la RMN, con excepcin de algunos casos
como se presentaron arriba, no utiliza un medio de contraste para tomar
las imgenes, en cambio la TC utiliza medios de contraste.

ESPECTROMETRA RMN APLICADA A PROTENAS

Gran parte de la reciente innovacin dentro de la espectrometra RMN se ha
dado en el campo de estudio de las protenas, y se ha convertido en una
tcnica muy importante en la biologa estructural. Un objetivo comn de estas
investigaciones es obtener una alta resolucin de las estructuras
tridimensionales de las protenas, similar a lo que puede lograrse por
cristalografa de rayos X. En contraste con la cristalografa de rayos X, la RMN
se limita sobre todo a las protenas relativamente pequeas, de menos de 35
kDa, aunque los avances tcnicos permiten la resolucin de estructuras ms
grandes. La espectrometra RMN es a menudo la nica manera de obtener
informacin de alta resolucin, en todo o en parte, de protenas no
estructuradas.

Las protenas son varios rdenes de magnitud ms grandes que las pequeas
molculas orgnicas que se mencionaron anteriormente en este artculo, pero
la misma teora se aplica a la RMN. Debido al mayor nmero de elementos
presentes en la molcula, los espectros unidimensionales bsicos se ven
solapados con la superposicin de seales, hasta el punto de que el anlisis
resulta imposible. Por lo tanto, se realizan experimentos multidimensionales (2,
3 o 4D) para hacer frente a este problema. Para facilitar estos experimentos, es
conveniente marcar isotpicamente la protena con 13 C y 15 N, debido a que
los istopos 12 C predominantes de forma natural no son activos a la RMN,
mientras que el momento cuadrpolo nuclear del istopo 14 N predominante de
forma natural impide que se pueda obtener informacin de alta resolucin a
partir de este istopo de nitrgeno. El mtodo ms importante utilizado para la
determinacin de la estructura de las protenas utiliza experimentos NOE para
medir las distancias entre pares de tomos dentro de la molcula.
Posteriormente, las distancias obtenidas se utilizan para generar una estructura
3D de la molcula usando un programa de ordenador.

ESPECTROSCOPIA DE RMN CON ONDA CONTINUA (CW:
CONTINUOUS WAVE)
Desde sus comienzos hasta finales de los 60, la espectroscopia de RMN
utiliz una tcnica conocida como espectroscopia de onda continua (CW). La
manera de registrar un espectro de RMN en el modo de CW era, bien mantener
constante el campo magntico e ir haciendo un barrido de frecuencias con un
campo oscilante, o bien, lo que era usado ms a menudo, se mantena
constante la frecuencia del campo oscilante, y se iba variando la intensidad del
campo magntico para encontrar las transiciones (picos del espectro). En la
RMN de CW las seales del espectro se registran como seales en resonancia.
La espectroscopia CW est limitada por su baja sensibilidad, ya que
cada seal se registra una sola vez por cada barrido y la tcnica de resonancia
magntica nuclear ya es de por s no demasiado sensible; esto quiere decir que
la tcnica sufre de una baja relacin seal-ruido. Afortunadamente, en RMN es
posible mejorar la relacin seal-ruido mediante el promediado de seal. El
promediado de seal consiste en repetir la adquisicin del experimento e ir
sumando los espectros que se obtienen. De esta manera, las zonas del
espectro en que existen seales se suman de manera constructiva, mientras
que, por su parte, las zonas en que hay ruido, por su carcter aleatorio, se
acumula ms lentamente que la seal. Mediante el promediado de seal se
incrementa la relacin seal-ruido en un valor que es la raz cuadrada del
nmero de espectros que se han acumulado. Esta relacin se cumple con
espectros de RMN en los que intervienen un slo tipo de ncleos, por ejemplo,
slo
1
H,
13
C, etc., tambin llamados espectros homonucleares.
ESPECTROSCOPIA DE RMN DE PULSOS Y TRANSFORMADA DE
FOURIER
La tcnica de RMN con transformada de Fourier (FT-NMR) es la que se
utiliza en los espectrmetros actuales. Uno de los pioneros en este campo
es Richard R. Ernst, que la desarroll a partir del ao 1966 y por la que fue
galardonado con el Premio Nobel de Qumica en 1991.
FT-NMR permite disminuir drsticamente el tiempo que requiere adquirir
una acumulacin (scan) del espectro completo de RMN. En vez de realizar un
barrido lento de la frecuencia, una en cada instante, esta tcnica explora
simultnea e instantneamente todo un rango de frecuencias. Dos desarrollos
tcnicos fueron fundamentales para poder hacer realidad la tcnica FT-NMR:
ordenadores capaces de llevar a cabo las operaciones matemticas necesarias
para pasar desde el dominio de tiempo al de la frecuencia, es decir, para
obtener el espectro; y el conocimiento sobre cmo poder excitar
simultneamente todo un rango de frecuencias.
La FT-NMR funciona con la muestra (espines nucleares) sometida a un
campo magntico externo constante. Se irradia la muestra con un pulso
electromagntico de muy corta duracin en la regin de las radiofrecuencias.
La forma que suele usarse para este pulso es rectangular, es decir, la
intensidad de la radiofrecuencia oscila entre un mximo y un mnimo que es
constante mientras dura el pulso. Un pulso de corta duracin tiene una cierta
incertidumbre en la frecuencia (principio de indeterminacin de Heisenberg). La
descomposicin de fourier de una onda rectangular contiene contribuciones de
una de todas las frecuencias. El pulso que se genera es por tanto policromtico
y cuanto ms corto sea, es capaz de excitar un mayor rango de frecuencias.
La aplicacin de un pulso policromtico en una regin estrecha de la
banda de radiofrecuencias (MHz) afecta a aquellos espines nucleares que
resuenen en esa regin. Un pulso policromtico con una anchura en frecuencia
de unos pocos kHz puede llegar a excitar simultneamente slo a los espines
nucleares de un mismo tipo de ncleo atmico dentro de una molcula, por
ejemplo, todos los ncleos de hidrgeno (1H). Antes del pulso el vector
de polarizacin neta de cada uno de los espines nucleares se encuentra en
situacin de equilibrio alineado en la direccin del campo magntico. Durante el
tiempo que se aplica el pulso, el pulso introduce un segundo campo magntico
en una direccin perpendicular al campo principal del imn y el vector
polarizacin realiza un determinado movimiento de precesin. Tras cesar el
pulso, el vector polarizacin de todos los espines afectados puede formar un
cierto ngulo con el eje del campo magntico principal. En este momento, los
espines, comportndose como pequeos imanes polarizados, comienzan a
precesionar con su frecuencia caracterstica en torno al campo magntico
externo, induciendo una pequea corriente oscilante de RF en una bobina
receptora situada en las inmediaciones de la muestra. A medida que los
ncleos van regresando poco a poco a la situacin inicial de equilibrio
alineados con en el campo magntico principal, la seal detectada va
disminuyendo de intensidad hasta hacerse cero. Esta cada de la seal se
conoce como cada libre de la induccin (Free InductionDecay) (FID) y da lugar
al espectro de RMN.


La seal que se detecta FID (Free InductionDecay) es una seal
oscilante que contiene todas las seales del espectro y decae hasta hacerse
cero.
La FID es una onda que contiene todas las seales del espectro en una
forma que es dependiente del tiempo. Esta onda puede convertirse en un
espectro de seales en funcin de su frecuencia. Para ello se utiliza una
funcin matemtica conocida como Transformada de Fourier. El resultado es lo
que se conoce como un espectro de RMN (espectro de frecuencias).
RMN MULTIDIMENSIONAL
La posibilidad de excitar la muestra con uno o ms pulsos de
radiofrecuencia (RF), cada uno de ellos aplicado con una potencia, duracin,
frecuencia, forma y fase particulares, e introducirlos en momentos especficos
de tiempo durante el experimento de RMN, generalmente antes de que el
sistema haya regresado al equilibrio por relajacin, permite disear toda una
gama de secuencias de pulsos de las que se puede extraer informacin
molecular muy variada.
Una secuencia de pulsos es una distribucin en el tiempo de alguno o
varios de los siguientes elementos: i) un cierto nmero de pulsos de RF que
afectn a uno o ms tipos de ncleos, ii) tiempos de espera en los que no se
hace nada sino esperar a que el sistema evolucione de una determinada forma.
Estos tiempos de espera pueden ser fijos o bien incrementables si su duracin
se va aumentando a medida que se repite el experimento. iii) gradientes de
campo magntico y iv) una etapa final en la que se adquiere la FID.
En un experimento de RMN multidimensional la secuencia de pulsos
debe constar de al menos dos pulsos y stos deben separados por un periodo
de espera incrementable. La secuencia de pulsos se repite un nmero de
veces adquirindose una FID en cada ocasin. La fase de alguno de los pulsos
puede alterarse en cada repeticin as como incrementarse la duracin de uno
o ms tiempos de espera variables. Si la secuencia de pulsos tiene un tiempo
de espera incrementable el experimento tendr dos dimensiones, si tiene dos
ser de tres dimensiones, si tiene tres el experimento ser de cuatro
dimensiones. Aunque en teora no existe lmite en el nmero de dimensiones
de un experimento, experimentalmente hay limitaciones impuestas por la
consiguiente prdida de seal por relajacin que conlleva la deteccin de las
distintas dimensiones. Los tiempos de registro de los experimentos de RMN
multidimensional se pueden acortar drsticamente con lastcnicas rpidas de
RMN desarrolladas en la presente dcada.
Los experimentos multidimensionales se pueden clasificar en dos tipos
principales:
Experimentos de correlacin homonuclear: Son aquellos en los que
todas las dimensiones corresponden al mismo ncleo. Ejemplos: COSY
(COrrelationSpectroscopY), TOCSY (TOtal Correlation SpectroscopY), NOESY
(Nuclear Overhauser Effect SpectroscopY).
Experimentos de correlacin heteronuclear: En este experimentos se
obtienen espectros cuyas dimensiones pertenecen a diferentes ncleos.
Ejemplos: HMQC (Heteronuclear Multiple Quantum Correlation), HSQC
(Heteronuclear Simple Quantum Correlation), HMBC (Heteronuclear Multiple
Bond Correlation), HOESY (HeteronuclearOverhauser Effect SpectroscopY).
Grosso modo, las interacciones que pueden detectarse por RMN se
pueden clasisficar en dos tipos:
1. Las interacciones a travs de enlaces se basan en el
acoplamiento escalar
2. Las interacciones a travs del espacio se basan en el
acoplamiento dipolar. En el caso de muestras en disolucin, el
acoplamiento dipolar se manifiesta como efecto Overhauser nuclear que
permite determinar la distancia entre los tomos.
Richard Ernst en 1991 y KurtWthrich en el 2002 fueron galardonados
con el premio Nobel de Qumica por su contribuciones al desarrollo de la RMN
de 2-dimensiones y multidimensional con transformada de Fourier. Los
avances conseguidos por ellos y por otros grupos de investigadores han
expandido la RMN a la bioqumica, y en particular a la determinacin de la
estructura en disolucin de biopolmeros comoprotenas o incluso cidos
nucleicos de tamao pequeo.
SLIDOS
La RMN en disolucin es complementaria de la cristalografa de rayos
X ya que la primera permite estudiar la estructura tridimensional de
lasmolculas en fase lquida o disuelta en un cristal lquido, mientras que la
cristalografa de rayos-X, como su nombre indica, estudia las molculas en
fase slida.
La RMN puede utilizarse tambin para el estudio de muestras en estado
slido. Si bien en su estado actual queda lejos de poder proporcionar con buen
detalle la estructura tridimensional de una biomolcula.
INFORMACION OBTENIDA MEDIANTE RM
En el estado slido las molculas estn estticas y no existe, como
ocurre con las molculas en disolucin, un promediado de la seal de RMN por
el efecto de la rotacin trmica de la molcula respecto a la direccin del
campo magntico. Las molculas de un slido estn prcticamente inmviles, y
cada una de ellas experimenta un entorno electrnico ligeramente diferente,
dando lugar a una seal diferente. Esta variacin del entorno electrnico
disminuye la resolucin de las seales y dificulta su interpretacin. Raymond
Andrew fue uno de los pioneros en el desarrollo de mtodos de alta resolucin
para resonancia magntica nuclear en estado slido. l fue quien introdujo la
tcnica de la rotacin en el ngulo mgico MagicAngle Spinning (MAS) que
permiti incrementar la resolucin de los espectros de slidos varios rdenes
de magnitud. En MAS, las interacciones se promedian rotando la muestra a
una velocidad de varios kilohertzios.
Alex Pines en colaboracin con John Waugh revolucionaron tambin la
RMN de slidos introduciendo la tcnica de la polarizacin cruzada (CP) que
consigue incrementar la sensibilidad de ncleos poco abundantes gracias a la
transferencia de polarizacin de los protones a los ncleos ms insensibles
cercanos, generalmente
13
C,
15
N o
29
Si.
A caballo entre la RMN en disolucin y en fase slida, se encuentra la
tcnica de HR-MAS (High ResolutionwithMagicAngleSinning), cuya aplicacin
fundamental es el anlisis de geles y materiales semislidos. El fundamento del
HR-MAS es hacer girar la muestra, al ngulo mgico, a una velocidad muy
superior que en slidos habituales. El efecto conseguido son espectros mono y
bidimensionales de gran calidad, prxima a la RMN en disolucin. La principal
aplicacin de esta tcnica es el anlisis de matrices biolgicas y polimricas,
como resinas para sntesis en fase slida solvatadas.

La aplicacin fundamental de la espectroscopia de RMN es la
determinacin estructural, ya sea de molculas orgnicas, organometlicas o
biolgicas. Para ello es necesario la realizacin de diferentes tipos de
experimentos de los cuales se obtiene una determinada informacin.
Para la elucidacin estructural de molculas orgnicas y
organometlicas los experimentos ms utilizados son los siguientes:


Ejemplo de un espectro
1
H de RMN.
Espectro monodimensional de
1
H: Da informacin del nmero y
tipo de hidrgenos diferentes que hay en la molcula. La posicin en el
espectro (desplazamiento qumico) determina el entorno qumico del ncleo,
y por tanto da informacin de grupos funcionales a los que pertenecen o
que estn cerca. La forma de la seal da informacin de los protones
cercanos acoplados escalarmente.


Ejemplo de un espectro APT, un tipo de experimento de
13
C.
Espectro monodimensional de
13
C: Al igual que en
1
H el
desplazamiento qumico da informacin de los grupos funcionales.
Dependiendo del tipo de experimento realizado se puede obtener
informacin del nmero de hidrgenos unidos a cada carbono.


Ejemplo de un espectro COSY.
Espectros bidimensionales homonucleares: Los experimentos
COSY y TOCSY dan informacin de las relaciones entre los protones de la
molcula, por acomplamiento escalar o dipolar (NOESY)
Espectros bidimensionales heteronucleares: Los experimentos
HMQC y HSQC indican qu hidrgenos estn unidos a qu carbonos. El
experimento HMBC permite determinar relaciones entre protones y
carbonos a mayor distancia (2 o 3 enlaces)
Experimentos con otros ncleos: Si la molcula posee otros
ncleos activos en RMN es posible su medida a travs de experimentos mo
nodimensionales o bidimensionales (por deteccin indirecta)

APLICACIONES DE LA RESONANCIA MEGNETICA NUCLEAR A LA
INVESTIGACION BIOMEDICA

Desde su descubrimiento en 1946, las tcnicas de Resonancia
Magntica Nuclear (RMN) han evolucionado, sobre todo en las ltimas
dcadas, hasta convertirse en una herramienta muy til, primero en campos
como la fsica y la qumica, y ms recientemente en otros como la biologa
molecular, la medicina o la bioqumica.

La RMN es una tcnica transversal que ha experimentado un
espectacular desarrollo gracias a la contribucin de numerosas reas de
conocimiento que abarcan desde las ciencias experimentales clsicas hasta
ciencias de la salud o tecnolgicas. Fue descrita en 1946 de manera
simultnea e independiente por los investigadores Bloch y Purcell,
consiguiendo ambos por ello el Premio Nobel en 1952. Es un fenmeno que
presentan los ncleos magnticamente activos en presencia de un campo
magntico estable y la aplicacin de ondas electromagnticas de
radiofrecuencia. El ncleo es el corazn de los tomos donde se acomodan la
mayora de las masas elementales (neutrones y protones). Los ncleos con un
nmero impar de protones o neutrones, poseen un momento magntico
caracterstico y un campo magntico asociado. Cuando se exponen a un
campo magntico esttico B0, los dipolos magnticos de los ncleos tienden a
alinearse con el mismo. Para el istopo 1H del tomo de hidrgeno se crean
dos estados energticos, uno paralelo y otro antiparalelo a B0, con
prcticamente la misma probabilidad de ser ocupados y una magnetizacin
neta resultante (M0). La RMN se basa en la aplicacin de un campo de
radiofrecuencia B1 en una direccin perpendicular a B0 que genera una
magnetizacin transversal dependiente del tiempo que induce, por tanto, un
voltaje que se puede medir empleando un receptor apropiado (1). A pesar de
ser el ncleo ms sensible y abundante, el 1H no es el nico empleado en esta
tcnica.
Existen otros tomos que aportan informacin muy valiosa y no
accesible por otras metodologas, como son 31P, 13C, 19F, 23Na, etc.
La RMN presenta dos vertientes de estudio, por un lado la espectroscopa,
quiz la ms conocida en el campo de la qumica y la bioqumica, y por otro la
imagen ms extendida en la medicina y la biomedicina (2). Las aplicaciones
bioqumicas de la RMN (3) probablemente comenzaron en 1972 cuando por
espectroscopa de carbono 13 (13C RMN) se sigui el metabolismo de la
glucosa, marcada con dicho istopo, en una suspensin. En base a los
resultados se concluy que esta tcnica poda ser enormemente til en el
estudio de procesos bioqumicos. Pronto la 31P RMN se utiliz para determinar
el pH intracelular en una suspensin de eritrocitos y posteriormente en un
msculo. Casi simultneamente se obtuvo la primera imagen de RMN.
La enorme versatilidad de aproximacin de esta tcnica permite la
investigacin de aspectos tan diversos como la estructura tridimensional y
dinmica de macromolculas biolgicas, el estudio de la anatoma normal y
patolgica en seres humanos y modelos animales, o el seguimiento in vivo de
rutas metablicas y su regulacin. No obstante, la Imagen de Resonancia
Magntica (IRM)(4) es la vertiente ms conocida a nivel popular dada su cada
vez mayor implantacin en el diagnstico clnico. Es una tcnica que usa una
radiacin electromagntica no ionizante para obtener imgenes con un
excelente contraste entre tejidos blandos y una elevada resolucin espacial en
cualquier direccin del espacio. En este caso, de entre todos los posibles
tomos a utilizar, el hidrgeno es el de uso ms extendido por diferentes
factores. Prcticamente la totalidad de las imgenes obtenidas en diagnstico
son imgenes de 1H, que por otro lado es el ncleo ms abundante en el
cuerpo humano. Dentro de las potenciales aplicaciones de la IRM, merecen un
notable inters todas las encaminadas al diagnstico, pronstico y estudio de
las diferentes neuropatologas, algunas de la cuales forman parte de las
enfermedades de mayor prevalencia y trascendencia en la sociedad actual,
como son los tumores intracraneales, neurodegeneraciones o encefalopatas.
Adems, como resultado de los avances tecnolgicos, las tcnicas de
adquisicin rpida de imagen han permitido abordar reas que tradicionalmente
se crean incompatibles con la RM, como estudios dinmicos, imagen cine,
imagen 3D de alta resolucin, angiografa y estudio funcional del cerebro.
Dentro del campo de la investigacin bsica, el desarrollo de la aproximacin
biomdica de la RMN se ha soportado en algunas ventajas de los mtodos
empleados en la misma comparados con las tcnicas ms clsicas. Las
caractersticas inherentes de esta tcnica, como tiempos de relajacin, valores
de desplazamiento qumico y constantes de acoplamiento, contienen una
valiosa informacin del estado fisiolgico o patolgico de los tejidos y de la
operacin in situ de multitud de procesos biolgicos (5). Por contrapartida, los
mtodos de RMN son menos sensibles que los clsicos mtodos pticos o
radiactivos, con sensibilidades que oscilan entre 0,01 y 1 mM para estudios in
vitro e in vivo respectivamente.

Todas estas caractersticas abren un enorme campo de posibilidades
que han conducido a que tanto la imagen como la espectroscopa de RMN se
apliquen cada vez ms en multitud de reas y lneas de investigacin dentro de
casi cualquier rea de la ciencia, permitiendo el estudio de numerosos
aspectos de una manera que no abordable por ninguna otra tcnica.




Imagen de RMN en
orientacin sagital del
cerebro de una rata
(modelo animal de
traumatismo cerebral
difuso). Se aprecian
regiones hiperintensas
asociadas a la dilatacin
de los ventrculos y el
edema cerebral.

UNIDAD DE ESPECTROSCOPA DE RESONANCIA MAGNTICA
NUCLEAR

La Unidad de Espectroscopa de Resonancia Magntica Nuclear (UE-
RMN) es el resultado de una alianza estratgica entre la
Universidad de Costa Rica (UCR) y el Instituto Nacional de
Biodiversidad (INBio) para ofrecer servicios especializados
de muy alto nivel a la industria, sector acadmico, sector
gubernamental y pblico en general. La Unidad se localiza
en la Escuela de Qumica de la UCR y cont en su
establecimiento con el apoyo de la Fundacin CRUSA.
La UE-RMN cuenta con un espectrmetro Varian
Mercury de 400 MHz. Este equipo puede medir espectros
de 1H, 19F, 31P, 13C y cualquier otro ncleo hasta la
frecuencia de15N. El instrumento est equipado con una
unidad de temperatura variable con un rango operativo desde -100 C hasta
+100 C, un accesorio de gradiente de campo, una sonda para deteccin
inversa y otra sonda para deteccin en modo normal.
Adems de los espectros rutinarios en una dimensin, se puede obtener
sin ninguna dificultad espectros bidimensionales, como por ejemplo, COSY,
NOESY, HMBC, HMQC, HSQC, TOCSY, etc.
LA TCNICA DE RMN
La Resonancia Magntica Nuclear (RMN) es una tcnica no destructiva
que permite el anlisis de compuestos orgnicos y algunos inorgnicos. Por
medio de ella se puede deducir la identidad de la gran mayora de compuestos
orgnicos conocidos y desconocidos. Tan slo se necesitan unos cuantos
miligramos de sustancia para realizar un anlisis.
A diferencia de otras tcnicas de anlisis, como espectroscopa infrarroja
o cromatografa, la resonancia magntica nuclear permite la identificacin no
ambigua de compuestos.
Por su versatilidad y la riqueza de la informacin que produce, es la
tcnica ms usada en la identificacin de nuevos compuestos orgnicos.

Aplicaciones
El rango de posibles aplicaciones de la resonancia magntica nuclear es
demasiado amplio para incluir un lista completa, pero algunas aplicaciones
incluyen:
Verificacin del grado de pureza de materias primas.
Anlisis de drogas y frmacos.
Desarrollo de productos qumicos.
Control de calidad de productos qumicos.
Investigacin de reacciones qumicas.
Identificacin de sustancias desconocidas.
Anlisis de polmeros.

Estructuras 3D de biomolculas
La aplicacin de la RMN-2D, mediante el procedimiento desarrollado
por el grupo de Wthrich en los aos 80, permiti determinar estructuras 3D
de protenas de hasta 15 kDa. La superposicin de las seales producto del
incremento en su nmero y el ensanchamiento natural de las mismas al
aumentar la masa molecular hacan muy difcil trabajar con protenas mayores.
La introduccin del marcaje isotpico con P 13 P C y P15 PN, utilizando
procedimientos de ingeniera gentica, y la introduccin de experimentos de
RMN-3D y -4D permitieron el estudio de protenas de hasta 30 kDa.
La creciente complejidad espectral presente en protenas an mayores
pudo ser compensada utilizando tcnicas para reducir el ancho de lnea
espectral. A tales efectos la sustitucin isotpica selectiva de protones por
deuterio, que reduce la relajacin dipolar (BH B~ 6b DB), es
particularmente efectiva. Asimismo la tcnica TROSY, mediante un mecanismo
de compensacin de contribuciones a la relajacin de los componentes dipolar
y de anisotropa del blindaje, ha contribuido tambin a reducir el ancho de
lnea y por ende la de seales haciendo posible el estudio de protenas con
masas moleculares del orden de 100 kDa.

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