Welcome to Scribd, the world's digital library. Read, publish, and share books and documents. See more
Download
Standard view
Full view
of .
Look up keyword
Like this
4Activity
0 of .
Results for:
No results containing your search query
P. 1
Progenmol 6 : Restriksi DNA

Progenmol 6 : Restriksi DNA

Ratings: (0)|Views: 182|Likes:

More info:

Published by: Rifai Ridwan Dieugeste on Sep 04, 2012
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as DOCX, PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

12/01/2012

pdf

text

original

 
Laporan Praktikum Proyek Genetika Molekuler MikrobaPercobaan 06Restriksi DNA
Nama : Ridwan Muhamad RifaiNIM : 10408040Tgl. Percobaan : 14 Oktober 2010Tgl. Pengumpulan : 21 Oktober 2010Kelompok : 6Asisten : RahmaProgram Studi MikrobiologiSekolah Ilmu dan Teknologi HayatiInstitut Teknologi Bandung2010
 
1.
 
Tujuan
a.
 
Merestriksi suatu fragmen insert dengan panjang 750 bp dari vektor pGEMT-Easy dengan enzim restriksi EcoRI
2.
 
Metode
Dalam ilmu rekayasa biologi molekuler dikenal suatu metode yang disebut denganrestriksi DNA. Restriksi DNA adalah proses pemotongan DNA baik untai gandamaupun untai tunggal dengan menggunakan enzim DNA restriksi (DNA nuklease)pada sisi spesifik yang dikenal sebagai sisi pengenalan (
recognition site
). Padaorganisme, enzim ini digunakan untuk mendegradasi fragmen DNA asing yang masukke dalam sel, misalnya DNA virus. DNA organisme itu sendiri aman dari prosesrestriksi karena mengalami proses metilasi. (Lodish, 2004)Enzim restriksi mengenali sisi restriksi dari urutan nukleotidanya yang cocok. Sisirestriksi ini kebanyakan dan hampir semuanya bersifat palindrom yaitu sama baikdari forward maupun reverse.
Palindrom pada DNA
Sistem palindrom ini akan menimbulkan pemotongan yang bersifat sticky end.Namun ada pula enzim restriksi yang memotong sisi pengenalan sebagai blunt end.Saat ini dikenal empat jenis enzim nuklease restriksi. Keempat jenis enzim inidigolongkan berdasarkan pada komposisi, jenis kofaktor, target DNA yang akandipotong, dan posisi sisi aktif enzim relatof terhadap target DNA. Keempat jenisenzim tersebut adalah
a
.
Tipe I
, enzim membelah di lokasi terpencil dari sisi pengenalan, membutuhkanbaik ATP dan S-adenosyl-L-methionine berfungsi; protein multifungsi denganaktivitas restriksi dan metilasi
b. Tipe II
,
 
enzim bersatu dalam atau pada jarak tertentu dari sisi pengenalan, palingmembutuhkan magnesium, fungsi tunggal enzim tidak bergantung metilasi
 
c. Tipe III
, enzim membelah di lokasi jauh dari sisi pengenalan, membutuhkan ATP(tetapi tidak menghidrolisisnya), S-adenosyl-L-metionin merangsang reaksi namuntidak diperlukan, ada sebagai bagian dari kompleks modifikasi metilasi
d. Tipe IV
, enzim menarget DNA termetilasi(Bickle,1993)Pada praktikum ini akan dilakukan restriksi terhadap plasmid pGEMT-Easy denganmemanfaatkan sisi pengenalan pada EcoRI. Karena itu digunakan enzim restriksiyang khusus akan memotong sisi pengenalan EcoRI. Bahan-bahan yang digunakanadalah sebagai berikut.-
 
Buffer EcoRI-
 
Enzim EcoRI-
 
Deion-
 
Plasmid DNAKesemua bahan tersebut dicampur dalam tube dan diinkubasi semalaman dalam es.Selanjutnya larutan tersebut dielektroforesis dengan terlebih dahulu ditambahkanloading dye. Selain itu sebagai pembanding, dielektroforesis pula plasmid uncut,yaitu plasmid yang belum direstriksi. Elektroforesis dilakukan pada tegangan 100Vselama 45 menit. Hasil elektroforesis akan menunjukan apakah plasmid terestriksiatau tidak dilihata dari ukuran band yang terdeteksi.
3.
 
Hasil Pengamatan
Pada saat pencampuran dan setelah inkubasi tidak ada suatu indikator pun yangdapat terlihat dari tube, misalnya perubahan warna yang mengindikasikan restriksitelah selesai. Karena itu digunakan elektroforesis untuk mendeteksi apakah restriksiberjalan atau tidak. Berikut adalah gambar hasil elektroforesis.

You're Reading a Free Preview

Download
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->