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F-Dsh-A
Verde metilo pironina Brown Brenn Mucicarmin Zielh Nielsen plata metenamina PAS Giemsa Waysson Griedley Glenn Warthin Starry
Estructuras especficas en los tejidos, (tipo de agentes infecciosos), la forma de agrupacin y forma.
COLORANTES ?
PLATA METENAMINA: hongos , otros usos para el dx histolgico de la membrana basal en biopsia renal.
PLATA METENAMINA
BROWN BRENN
GRAM : detecta grmenes y/o bacterias gram+ y gram- : diferenciar El uso y difusin de esta tcnica ha sido recomendada como mtodo rpido y fcil en la deteccin de bacteriemia en pacientes crticos.
Las bacterias Gram positivas, (Lactobacillus acidophilus) retienen el tinte y se colorean de azul.
PAS: CHO, (glucgenos), mucopolisacridos neutros, mucoprotenas, los hongos, entre otros.
ZIELH NIELSEN: BK
Giemsa : gram+
Hematopatologa: elementos hematolinfoides, incluyendo clulas cebadas. Se puede usar para evidenciar HP en el moco superficial de la mucosa gstrica.
VERDE METILO PIRONINA FENICADA: gram -, color rojo vivo y los ncleos verde azuloso.
LEVADITIS(espiroquetas): en sus componentes el nitrato de plata que identifica bacterias color oscuro.
GRIDLEY: hongos y Endoameba histoltica. MUCICARMIN DE MAYER: mucoprotenas y Criptococcus y se usa en centros especializados y en infecciones.
WARTHIN STARRY Y WAYSSON : biopsias gstricas (HP) Carnoy's, inmunohistoqumica, las que se comparan con las muestras histolgicas fijadas en formol al 10 % y coloreadas con H/E(mayor sensibilidad ). Cohen utiliz una nueva tcnica , +rpida, -costosa, fcil de realizar e interpretar y con una sensibilidad a mtodos de coloracin convencional:
PAS
Hematoxilina
azul de metileno
TCNICAS EMPLEADAS
PAS, H/E, BK Plata Plata, Perls, H/E,PAS H/E, PAS y tricrmica H/E,PAS, rojo congo
BK
Otros autores utilizan para los bacilos cidos resistente, el PCR, lo que demuestra una alta sensibilidad en el diagnstico de micobacteria.
-Desparafinar e hidratar. - Sol. Diaria de HCl ferrocianuro de K (30min) - Enjuagar las laminas con H2O d. -Solucin de rojo ncleo durante 5 min -Lavar en H2O c. (2min) -Deshidratar, aclarar y montar.
H.P.
MARRON
Solucin tampn: -Acetato sodico 1.64g - ac, acetico 2.5 ml - H2O destilada 200 ml
Solucin 1: - hidroquinona 0.3 g - Sol .tampn 10 ml Solucin 2: Sol. Acuosa de nitrato de plata 2 % a 60C. = 3 ml
-Desparafinar e hidratar. - Sol. Tampn - nitrato de Ag 1 % x 30 60 min -Lavar en sol. Tampn. -Sol de trabajo 3 min. -Enjuagar en agua c. - Lavar en sol. Tampn -Deshidratar, aclarar y montar.
H.P.
OSCUROS
ROJO CONGO
SOLUCIONES:
SOLUCION DE PERMANGANATO ACIDO DE POTASIO: -sol acuosa de permanganato de K 0.5 % 47.5 ml - sol. Acuosa de ac. Sulfrico 3 % 2.5 ml
PROCEDIMIENTO:
-Desparafinar e hidratar. -Tratar con permanganato acido de potasio x 30 seg. - lavar en H2O destilada. -Ac oxlico 1 % hasta blanquear, lavar en H2O destilada. -Rojo congo 30 min -Sol. De carbonato de litio x 15 seg. -H2O c. x 15 min. - H. x 2min, lavar H2O c. X 1 min. -Deshidratar , aclarar y montar.
Colorea los hidratos de carbonos, (glucgenos), mucopolisacridos neutros, mucoprotenas, los hongos, entre otros.
Solucin de HCl 1 N:
-HCl concentrado 8.35 ml - H2O destilada 100 ml
Reactivo de Schiff:
1. Fucsina bsica 0.5 g 2.Solucin de HCl 1 N 10 ml 3.Disulfito de Na 0.5 g 4.H2O destilada 100 ml 5.Carbn activado 0.25 g
Disolver 1 en 2 en 4 caliente hasta ebullicin. Enfriar, + 3, agitarlo x 20 min. Dejarlo hasta sgte. Da en frasco hermtico y oscuro adquiri color amarillento, + 5 , agitarlo
Solucin acuosa de ac. Periydico 0.5 % -Cristales de ac, perydico 0.5 g -H2O destilada 100 ml
PROCEDIMIENTO:
-Desparafinar e hidratar las secciones. -Ac. Perydico 10min -Lavar H2O destilada -Reactivo de Schiff 5-7min -Lavar c/ H2O destilada 3-5min -H x 2 min -Lavar en H2O c. -Deshidratar - Aclarar y montar
RESULTADO:
RIION = GLUCOGENO
Se utiliza tambin para demostracin de produccin de mucina por las clulas tumorales de una neoplasia epitelial.
El borde en cepillo de los tbulos proximales tiene afinidad por los reactivos usados en la coloracin de PAS (flechas). (PAS, X200).
GLOMERULO NEFRITIS
tie de forma especfica las membranas basales glomerulares, tubulares y de la cpsula de Bowman.
Dentro de las sustancias positivas tenemos: - glucgeno - membrana basal - glndulas mucosas
TRICRMICA
DE MASSON: Fibras de colgeno tipo I que forman fibras gruesas o haces, diseados para dar resistencia; tambin evidencia, aunque en menor intensidad, las fibras reticulares. Se emplean colorantes para diferenciar los ncleos, citoplasma y las fibras de colgeno.
Solucin de Bouin: -Sol. Acuosa saturada de ac, pcrico (75ml) -formaldehido comercial 25ml -Ac. Actico glacial 5ml Solucin A de HEMATOX. FERRICA:
Solucin B de HEMATOX. FERRICA: -cloruro frrico 29% (4ml) -agua destilada 95 ml Solucin TRABAJO de HEMATOX. -HCl concentrado 1 ml -SOL. A + SOL. B = 1/1 VOL
Solucin FUCSINA ACIDA: -sol. acuosa de escarlata Biebrich 1% 90 ml -sol. acuosa de fucsina ac. 1% 10 ml Solucin acido Fosfotngtico 5 % -Ac. Acetico glacial 1 ml -Ac. Fosfotngtico 5g -H2O destilada 100ml Solucin de azul de anilina: -Azul anilina 2.5g Solucin de acido actico 1%: -Ac. Acetico 2 ml -Ac. Actico glacial -H2O destilada 100ml -H2O destilada 100ml
PROCEDIMIENTO: Desparafinar e hidratar hasta agua c. Fijador de Bouin x 1h Lavar hasta desaparecer color amarillo. H. Fe x 10 min y lavar agua c. 10min. Sol. de fucsina ac. X 15 min H2O destilada enjuague Solucin acido Fosfotngtico 5 % Sol. De anilina 5 a 10 min. y H2O destilada H2O actica 1% 3-5 min OH 95% y absoluto 2cambios, xilol 2 cambios blsamo
-NUCLEOS= OSCUROS - CITOPLASMA, QUERATINA, FIBRAS MUSCULARES= ROJO - FIBRAS COLAGENAS Y MOCO= AZUL (ANILINA)
Sealan trombos hialinos intracapilares. Estos "trombos" son positivos para inmunoglobulinas (IgG e IgM). (Tricrmico de Masson, X600).
Las tcnicas de tricrmico tambin definen ntidamente las zonas de glomeruloesclerosis, el depsito de colgeno periglomerular y, por ende, la esclerosis intersticial con mayor resalte de la atrofia tubular.
Glomerulonefritis membranoproliferativa
Solucin acuosa de ferrocianuro de K 2%: - ferrocianuro de k 2 g Solucin acuosa de HCl 2%: - H2O destilada 100 ml - HCl 2 ml Solucin de H/E: - H2O destilada 100 ml
-Desparafinar e hidratar. - 1 vol. Ferricianuro de K x 1min - + 1 vol. De HCl x 15-20 min hasta tomar colorac. Azul - lavar c/ H2O c. x 2 min -H x 2 min -Lavar en H2O c. x 1 min - E X 15 seg -Lavar en H2O C. x 20 seg. -Deshidratar, aclarar y montar.
OBJETIVO: - Demostracin de hierro trivalente, El Fe demostrable por este mtodo se hala bajo forma de hemosiderina.
RESULTADOS: Los depsitos de Fe se observan de color azul turquesa, ncleos de color morado y citoplasma rosado.
Para hemosiderina: (Perls) especialmente til en patologa heptica para la demostracin de cmulos de Fe en los hepatocitos en distintas situaciones o en casos extremos de hemosiderosis (ejemplo en la enfermedad gentica hemocromatosis).
La hemosiderina es una forma parcialmente desnaturalizada de ferritina que se aglomera con facilidad y reconoce en el examen microscpico como unos grnulos azulinos en el citoplasma = debido a la reaccin de Perls, (presencia de Fe trivalente). Normalmente se halla en bazo, medula sea y clulas de Kupffer del hgado.