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COLORACIONES ESPECIALES

F-Dsh-A

agente bacteriano y problemas patolgicos

Verde metilo pironina Brown Brenn Mucicarmin Zielh Nielsen plata metenamina PAS Giemsa Waysson Griedley Glenn Warthin Starry

Perls o azul de Berln

Estructuras especficas en los tejidos, (tipo de agentes infecciosos), la forma de agrupacin y forma.

COLORANTES ?
PLATA METENAMINA: hongos , otros usos para el dx histolgico de la membrana basal en biopsia renal.

VERDE METILO PIRONINA

PLATA METENAMINA

BROWN BRENN

Rutina en algunos laboratorios : sospecha etiologa infecciosa

GRAM : detecta grmenes y/o bacterias gram+ y gram- : diferenciar El uso y difusin de esta tcnica ha sido recomendada como mtodo rpido y fcil en la deteccin de bacteriemia en pacientes crticos.

Las bacterias Gram positivas, (Lactobacillus acidophilus) retienen el tinte y se colorean de azul.

PAS: CHO, (glucgenos), mucopolisacridos neutros, mucoprotenas, los hongos, entre otros.

Perls o azul de Berln: Fe

ZIELH NIELSEN: BK

Giemsa : gram+

Hematopatologa: elementos hematolinfoides, incluyendo clulas cebadas. Se puede usar para evidenciar HP en el moco superficial de la mucosa gstrica.

VERDE METILO PIRONINA FENICADA: gram -, color rojo vivo y los ncleos verde azuloso.

LEVADITIS(espiroquetas): en sus componentes el nitrato de plata que identifica bacterias color oscuro.

GRIDLEY: hongos y Endoameba histoltica. MUCICARMIN DE MAYER: mucoprotenas y Criptococcus y se usa en centros especializados y en infecciones.

WARTHIN STARRY Y WAYSSON : biopsias gstricas (HP) Carnoy's, inmunohistoqumica, las que se comparan con las muestras histolgicas fijadas en formol al 10 % y coloreadas con H/E(mayor sensibilidad ). Cohen utiliz una nueva tcnica , +rpida, -costosa, fcil de realizar e interpretar y con una sensibilidad a mtodos de coloracin convencional:

PAS

Hematoxilina

azul de metileno

tie microorganismos de azul brillante, completa en pocos minutos.

TCNICA HISTOLGICA PAS Brown Brenn

AGENTE INFECCIOSO Hongos, Parsitos

TINCIN DE IDENTIFICACIN Rosado Azul Rojo Rojo Rojo Rojo

Bacterias grampositivas Bacterias gramnegativas


Bacterias gramnegativas Gramnegativas Bacilos

Verde metilo Glenn Zielh Nielsen

Relacin de rganos muestreados segn tcnicas empleadas RGANOS


Pulmn Cerebro Hgado Rin Piel

TCNICAS EMPLEADAS
PAS, H/E, BK Plata Plata, Perls, H/E,PAS H/E, PAS y tricrmica H/E,PAS, rojo congo

BK
Otros autores utilizan para los bacilos cidos resistente, el PCR, lo que demuestra una alta sensibilidad en el diagnstico de micobacteria.

Ac. Clorhdrico 20%: HCl = 20 ml H2O destilada = 80 ml

Sol. de ferrocianuro de K 10% Ferrocianuro de K = 10 g H2O destilada = 100 ml Sol diaria

Solucin de rojo ncleo

-Desparafinar e hidratar. - Sol. Diaria de HCl ferrocianuro de K (30min) - Enjuagar las laminas con H2O d. -Solucin de rojo ncleo durante 5 min -Lavar en H2O c. (2min) -Deshidratar, aclarar y montar.

H.P.

MARRON

Fondo = amarillo parduzco

Solucin tampn: -Acetato sodico 1.64g - ac, acetico 2.5 ml - H2O destilada 200 ml

Solucin de nitrato de Ag: -Nitrato de Ag 0.5 g -Sol. Tampn 50 ml

Solucin 1: - hidroquinona 0.3 g - Sol .tampn 10 ml Solucin 2: Sol. Acuosa de nitrato de plata 2 % a 60C. = 3 ml

Solucin de trabajo: sol 1 + sol 2

-Desparafinar e hidratar. - Sol. Tampn - nitrato de Ag 1 % x 30 60 min -Lavar en sol. Tampn. -Sol de trabajo 3 min. -Enjuagar en agua c. - Lavar en sol. Tampn -Deshidratar, aclarar y montar.
H.P.
OSCUROS

Fondo = amarillo parduzco

ROJO CONGO

SOLUCIONES:

SOLUCION DE ROJO CONGO: -Sol. De rojo Congo 1 g - H2O destilada 100 ml

SOLUCION DE PERMANGANATO ACIDO DE POTASIO: -sol acuosa de permanganato de K 0.5 % 47.5 ml - sol. Acuosa de ac. Sulfrico 3 % 2.5 ml

SOLUCION ACUOSA DE ACIDO OXALICO 1 %:

PROCEDIMIENTO:

-Desparafinar e hidratar. -Tratar con permanganato acido de potasio x 30 seg. - lavar en H2O destilada. -Ac oxlico 1 % hasta blanquear, lavar en H2O destilada. -Rojo congo 30 min -Sol. De carbonato de litio x 15 seg. -H2O c. x 15 min. - H. x 2min, lavar H2O c. X 1 min. -Deshidratar , aclarar y montar.

polarizada (verde manzana)

Colorea los hidratos de carbonos, (glucgenos), mucopolisacridos neutros, mucoprotenas, los hongos, entre otros.

Solucin de HCl 1 N:
-HCl concentrado 8.35 ml - H2O destilada 100 ml

Reactivo de Schiff:

1. Fucsina bsica 0.5 g 2.Solucin de HCl 1 N 10 ml 3.Disulfito de Na 0.5 g 4.H2O destilada 100 ml 5.Carbn activado 0.25 g

Disolver 1 en 2 en 4 caliente hasta ebullicin. Enfriar, + 3, agitarlo x 20 min. Dejarlo hasta sgte. Da en frasco hermtico y oscuro adquiri color amarillento, + 5 , agitarlo

Solucin acuosa de ac. Periydico 0.5 % -Cristales de ac, perydico 0.5 g -H2O destilada 100 ml

PROCEDIMIENTO:

-Desparafinar e hidratar las secciones. -Ac. Perydico 10min -Lavar H2O destilada -Reactivo de Schiff 5-7min -Lavar c/ H2O destilada 3-5min -H x 2 min -Lavar en H2O c. -Deshidratar - Aclarar y montar

RESULTADO:

Las sustancias PAS positivas color rojo, ncleo azul.

RIION = GLUCOGENO

Se utiliza tambin para demostracin de produccin de mucina por las clulas tumorales de una neoplasia epitelial.

El borde en cepillo de los tbulos proximales tiene afinidad por los reactivos usados en la coloracin de PAS (flechas). (PAS, X200).

GLOMERULO NEFRITIS

tie de forma especfica las membranas basales glomerulares, tubulares y de la cpsula de Bowman.

Dentro de las sustancias positivas tenemos: - glucgeno - membrana basal - glndulas mucosas

TRICRMICA

DE MASSON: Fibras de colgeno tipo I que forman fibras gruesas o haces, diseados para dar resistencia; tambin evidencia, aunque en menor intensidad, las fibras reticulares. Se emplean colorantes para diferenciar los ncleos, citoplasma y las fibras de colgeno.

Solucin de Bouin: -Sol. Acuosa saturada de ac, pcrico (75ml) -formaldehido comercial 25ml -Ac. Actico glacial 5ml Solucin A de HEMATOX. FERRICA:
Solucin B de HEMATOX. FERRICA: -cloruro frrico 29% (4ml) -agua destilada 95 ml Solucin TRABAJO de HEMATOX. -HCl concentrado 1 ml -SOL. A + SOL. B = 1/1 VOL

-H (1g) -alcohol absoluto 100 ml

Solucin FUCSINA ACIDA: -sol. acuosa de escarlata Biebrich 1% 90 ml -sol. acuosa de fucsina ac. 1% 10 ml Solucin acido Fosfotngtico 5 % -Ac. Acetico glacial 1 ml -Ac. Fosfotngtico 5g -H2O destilada 100ml Solucin de azul de anilina: -Azul anilina 2.5g Solucin de acido actico 1%: -Ac. Acetico 2 ml -Ac. Actico glacial -H2O destilada 100ml -H2O destilada 100ml

PROCEDIMIENTO: Desparafinar e hidratar hasta agua c. Fijador de Bouin x 1h Lavar hasta desaparecer color amarillo. H. Fe x 10 min y lavar agua c. 10min. Sol. de fucsina ac. X 15 min H2O destilada enjuague Solucin acido Fosfotngtico 5 % Sol. De anilina 5 a 10 min. y H2O destilada H2O actica 1% 3-5 min OH 95% y absoluto 2cambios, xilol 2 cambios blsamo

-NUCLEOS= OSCUROS - CITOPLASMA, QUERATINA, FIBRAS MUSCULARES= ROJO - FIBRAS COLAGENAS Y MOCO= AZUL (ANILINA)

Sealan trombos hialinos intracapilares. Estos "trombos" son positivos para inmunoglobulinas (IgG e IgM). (Tricrmico de Masson, X600).

Las tcnicas de tricrmico tambin definen ntidamente las zonas de glomeruloesclerosis, el depsito de colgeno periglomerular y, por ende, la esclerosis intersticial con mayor resalte de la atrofia tubular.

Glomerulonefritis membranoproliferativa

destacar la cantidad y distribucin de la fibrosis y demostracin de ndulos en la cirrosis

Solucin acuosa de ferrocianuro de K 2%: - ferrocianuro de k 2 g Solucin acuosa de HCl 2%: - H2O destilada 100 ml - HCl 2 ml Solucin de H/E: - H2O destilada 100 ml

-Desparafinar e hidratar. - 1 vol. Ferricianuro de K x 1min - + 1 vol. De HCl x 15-20 min hasta tomar colorac. Azul - lavar c/ H2O c. x 2 min -H x 2 min -Lavar en H2O c. x 1 min - E X 15 seg -Lavar en H2O C. x 20 seg. -Deshidratar, aclarar y montar.

OBJETIVO: - Demostracin de hierro trivalente, El Fe demostrable por este mtodo se hala bajo forma de hemosiderina.

RESULTADOS: Los depsitos de Fe se observan de color azul turquesa, ncleos de color morado y citoplasma rosado.

Hemosiderina, sales de Fe = azul Ncleos, citoplasma = rosa a rojo

Para hemosiderina: (Perls) especialmente til en patologa heptica para la demostracin de cmulos de Fe en los hepatocitos en distintas situaciones o en casos extremos de hemosiderosis (ejemplo en la enfermedad gentica hemocromatosis).

La hemosiderina es una forma parcialmente desnaturalizada de ferritina que se aglomera con facilidad y reconoce en el examen microscpico como unos grnulos azulinos en el citoplasma = debido a la reaccin de Perls, (presencia de Fe trivalente). Normalmente se halla en bazo, medula sea y clulas de Kupffer del hgado.

GRACIAS POR SU ATENCION

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