Manual

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.
Manual de Procedimientos de laboratorio
UNIVERSIDAD VERACRUZANA
MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA EL LABORATORIO DE LA E. E. PARASITOLOGIA CLINICA
AUTORES: M.E. Sara Ortigoza Gutirrez M. E. Martha Cruz Aguilar
Parasitologa Clnica
Introduccin
El presente manual de Parasitologa Clnica tiene la finalidad de funcionar como gua de trabajo en la experiencia educativa Parasitologa Clnica, la cual se encuentra curricularmente establecida en la retcula del estudiante de Licenciatura de Qumica Clnica. Mediante este Manual el estudiante conocer, comprender y analizar sus conocimientos de Parasitologa, aplicando y desarrollando sus saberes tericos, heursticos y axiolgicos; debido a que en el laboratorio se requiere que trabaje en un ambiente de respeto, responsabilidad y tica, haciendo uso de sus habilidades en el manejo de equipo, asi como en el desarrollo de metodologas, previo sustento terico. Se incluye un apartado de confiabilidad y control de calidad especifico para cada tcnica descrita. Una vez efectuada la tcnica en el laboratorio, en el apartado del reporte de resultados, se hace nfasis en el estado diagnstico del parsito con lo que el alumno aprender la forma correcta de reportar los resultados en el mbito laboral e integrar sus conocimientos tericos con los prcticos.
Parasitologa Clnica
REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE PARASITOLOGIA
1. El alumno debe llegar puntual a su clase. 2. El alumno debe de portar una bata de manga larga de algodn. 3. El alumno debe de asistir a la prctica de laboratorio con su Manual de Parasitologa Clnica 4. Los libros, cuadernos y objetos personales no deben estar en la mesa de trabajo. 5. El alumno debe contar con su laboratorio correspondiente. 6. El alumno debe limpiar su rea de trabajo con hipoclorito de sodio antes y despus de la prctica de laboratorio. 7. El alumno tiene prohibido Laboratorio. 8. Durante la prctica de laboratorio el alumno debe usar guantes y cubrebocas. 9. El alumno debe desechar las muestras con las que se trabaj de acuerdo a Norma Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002 y a la Gua para la NOM-087-ECOL-SSA1-2002 10.-En caso de romperse o derramarse muestra fecal deber verterse fenol o hipoclorito sobre l y dejarlo cuando menos 10 minutos antes de limpiar. estrictamente comer, beber, y fumar en el material necesario para la prctica de
Parasitologa Clnica
METODO DE STOLL
1.- INTRODUCCIN
Esta tcnica fue ideada y desarrollada por Stoll en 1923, debido a sus caractersticas de accesibilidad en costo y material a utilizar es uno de los ms empleados de manera exitosa en encuestas epidemiolgicas. Este mtodo forma parte de los exmenes considerados cuantitativos, por lo que es necesario tener el antecedente de que la muestra se encuentra positiva, para su posterior cuantificacin. La tcnica es de utilidad para hacer una evaluacin de la intensidad de ciertas helmintiasis, se debe recordar que los helmintos son metazoarios y dentro de esta clasificacin se encuentran los nematelmintos gusanos redondos tales como; Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, uncinarias (Necator americanus y Ancylostoma duodenale) y Strongyloides stercoralis. Adems tambin se pueden cuantificar platelmintos (gusanos planos) como; Hymenolepis nana, Hymenolepis diminuta y otras teniasis.
2.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN

El fundamento de este mtodo es bsicamente aritmtico, los clculos se basan en las diluciones empleadas. Debido a que la cantidad de muestra es muy pequea en comparacin con el volumen de hidrxido de sodio, las helmintiosis moderadas son ms difciles de evaluar. Por el hecho de no utilizar tincin temporal y debido a que los quistes se aclaran con el hidrxido es una tcnica especfica para la cuantificacin de helmintiasis.
3.- LISTA DE REQUERIMIENTOS

3.1 Reactivos NUM. 1 NOMBRE DEL REACTIVO Hidrxido de sodio ( ver anexos) CONCENTRACION CANTIDAD 0.1 N 100 ml.
Parasitologa Clnica
3.2 Equipos de Laboratorio 1. 30 microscopios.
3.3 Materiales de laboratorio
CANTIDAD 30 30 30 30 150 30 30 30 30
DESCRIPCIN Pipetas de 2 ml graduadas en milsimas Probetas de 10 ml graduadas Varillas de vidrio delgada de 20 cm. de longitud. Bulbos Perlas de vidrio de 3 Mm. de dm. Guantes Aplicadores Portaobjetos Cubreobjetos
4.- TCNICA O PROCEDIMIENTO 1. 2. 3. 4. 5. 6. En la probeta de 10 ml poner 5.6 ml de la sol. De hidrxido de sodio 0.1 N. Agregar materia fecal hasta la marca de 6 ml Mezclar con la varilla de vidrio Depositar 5 perlas y tapar la probeta Agitar vigorosamente durante 1 min., hasta formar una suspensin homognea. Dejar en reposo la probeta 15 minutos, los restos fecales y huevos comienzan a irse al fondo. 7. Tomar la pipeta serolgica e introducirla a la parte media de la suspensin. 8. Tomar 0.075 ml y colocarlos entre porta y cubreobjeto. 9. Observar la preparacin al microscopio con objetivo seco dbil y seco fuerte. 10. Se observarn absolutamente todos los campos de la preparacin y se contaran los huevos encontrados. 4.1 Muestreo y muestra 4.1.1 4.1.2 La Obtencin de muestra debe ser; expulsin de manera natural En frasco de boca ancha etiquetados con; nombre, edad, sexo y fecha.
4.2 Preparacin del sistema de Medicin 4.2.1 Seguir las Instrucciones de limpieza y manejo del microscopio.
Parasitologa Clnica
4.3 Uso del sistema de Medicin (Proceso de lectura y / u observaciones) 4.3.1 Enfocar al microscopio la preparacin con objetivo 10 X. 4.3.2 Realizar la lectura de la totalidad de la preparacin de manera sistemtica. 4.3.3 Reportar segn indicaciones en el apartado reporte de resultados. 4.3.4 Terminado el proceso apagar el equipo, limpiar y enrollar perfectamente el cordn. 4.3.4 Desechar los materiales de acuerdo con el procedimiento de desecho estndar 5.- PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS De acuerdo con la formula establecida, calcular la concentracin de la sustancia en las unidades respectivas. 5.1 Calculo de resultados El nmero de huevos o larvas contados en toda la preparacin se multiplican por los siguientes factores, segn se haya tomado 0.075 0.15 ml de la suspensin y tambin en consideracin con la consistencia de la muestra:
HECES Duras Pastosas Lquidas Duras Pastosas Liquidas
MUESTRA 0.075 0.075 0.075 0.150 0.150 0.150
FACTOR 200 400 800 100 200 400
5.2 Reporte de resultados El resultado se expresa en huevos o larvas por mililitro de heces (ml lmlh); por ejemplo si la materia fecal es pastosa y se encontraron 4 huevos de uncinarias en toda la preparacin: 4 X 200= 800 Se reportar: 800 hmlh de uncinarias. Toda vez obtenidos los resultados, estos se vacan en una libreta o cuaderno control.
Parasitologa Clnica
6.- CONFIABILIDAD ANALTICA
6.1 6.2
6.3
Se recomienda verificar que la cantidad de muestra tomada sea exacta, a fin de no alterar el factor de dilucin. Se debe llevar con cuidado la pipeta hasta el centro y parte media de la suspensin de la probeta, ya que esto hace que disminuya el error debido a la sedimentacin rpida de los huevos. Se recomienda no Pipetear con la boca, sino con un bulbo micropipetas.
7.- CONTROL DE CALIDAD Evitar la hidratacin del hidrxido de sodio en el momento de pesar. Usar frasco de tapn de caucho para guardar la solucin. 8.- PRACTICABILIDAD 8.1 Debe ser un estudiante de Qumica Clnica, Qumico Frmaco bilogo Qumico Bilogo parasitlogo con supervisado por el facilitador de la Experiencia Educativa
Bibliografa
Jimnez Cardoso Enedina, Control de calidad en Parasitologa, 1ra edicin, editorial Prado, 2006. Rodrguez, Atlas de Parasitologa Mdica, 1ra edicin, Mc Graw Hill, 2004. Lpez Pez Myrian, Atlas de Parasitologa, 1ra edicin, Manual Moderno, 2006 De Haro Irene, Salazar Paz Mara, Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis, Edit. Mndez Editores Mxico D.F.1999
Parasitologa Clnica
UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANLISIS REGIN VERACRUZ

NOMBRE: ______________________________________________________ FECHA: _______________________________________________________ NOMBRE DE LA PRCTICA: ______________________________________ MUESTRA _____________________________________________________ FUNDAMENTO (INTERPRETACION): _______________________________ ______________________________________________________________
OBSERVACIONES MICROSCOPICAS.-
REPORTE ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
CONCLUSIONES: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
Parasitologa Clnica
TCNICA DE FERREIRA
1.- INTRODUCCIN
El mtodo fue descrito por Biagi y Cols. En 1959 y fue puesto en practica por Ferreira y Abreu. Rene caracterstica de un coproparasitoscopico y de un mtodo cuantitativo es til para el recuento de huevos y larvas de todos los parsitos considerados metazoarios y adems hace una buena concentracin de los protozoarios: quistes y ooquistes.
Debido a la utilizacin del tamiz y a los lavados aplicados, se logra una materia fecal fina que facilita su estudio microscpico 2.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
Esta tcnica se basa en la utilizacin del formol como preservador y desinfectante y de la diferencia de densidades con el empleo del sulfato de zinc con una densidad de 1.192, que har que los parsitos existentes en las muestra floten. Tiene como limitante que el material a utilizar no se consigue fcilmente.

3.1 Reactivos NUM. 1 2 3 4 NOMBRE DEL REACTIVO Sulfato de Zinc Formaldehdo Sol. Salina Lugol CONC. 35% 10% 0.9% CANTIDAD 500 ml 300 ml 500 ml 50 ml
3.2 Equipos de Laboratorio

1. 2. 3. 4. 30 microscopios 1 centrifuga Balanza granataria Campana de Ferreira
3.3 Materiales de laboratorio

CANTIDAD 15 15 DESCRIPCIN Pinzas de presin Frasco de Gerber
Parasitologa Clnica
15 15 30 30 15 15
Aplicadores Tubos de ensaye de 100 x 25 mm Portaobjetos Cubreobjetos Embudo Tubos de ltex de 15 cm de largo
4.- TCNICA O PROCEDIMIENTO

1. Pesar un frasco de ancha junto con un abate lenguas 2. Depositar materia fecal en el frasco ayudndose con el abate lenguas 3. Medir 36 ml de la solucin de formaldehdo, vaciar en el frasco 4. Homogeneizar la materia fecal con la solucin de formol hasta que quede una suspensin. 5. Pasar la mezcla por malla previamente colocada en un embudo y recibir la suspensin en un tubo colocado en una gradilla. 6. Centrifugar a 2000 rpm. Durante 1 minuto. 7. Decantar el sobrenadante y resuspender el sedimento con sol. Salina. 8. Volver a centrifugar bajo las condiciones anteriores. 9. Decantar nuevamente el sobrenadante y agregar 2 a 3 ml de sulfato de zinc, mezclar hasta hacer una nueva suspensin. 10. Introducir la campana de Ferreira en el tubo de ensaye. Ver Fig.1. 11. Llenar el tubo con ms solucin para que el menisco suba. 12. Centrifugar a 2000 rpm. Durante 1 min. 13. Sacar el tubo de la centrfuga y con el pulgar y el ndice se comprime fuertemente el trocito de manguera de caucho del extremo anterior de la campana y de un golpe se saca este del tubo. 14. Lavar el exterior de la campana. 15. Invertir la campana sobre el portaobjetos y poner 2 a 3 gotas de lugol, de tal manera que arrastren el contenido de la parte estrecha de la campana, que es donde se encuentran las formas parasitarias. 16. Homogeneizar la suspensin con el ngulo de un cubreobjetos colocar este sobre el portaobjetos 17. Examinar la preparacin con el microscopio seco dbil y seco fuerte. Contar todos los huevos de la totalidad de la preparacin.
Parasitologa Clnica
10
4.1 Muestreo y muestra 4.1.1 4.1.2 La Obtencin de muestra debe ser; expulsin de manera natural En frasco de boca ancha etiquetados con; nombre, edad, sexo y fecha.
4.2 Preparacin del sistema de Medicin 4.2.1. Seguir las Instrucciones de limpieza y manejo del microscopio. 4.3 Uso del sistema de Medicin (Proceso de lectura y / u observaciones) 4.3.1. Enfocar al microscopio la preparacin con objetivo 10X y 40X. 4.3.2. Contar la totalidad de la preparacin.
5.- PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

5.1 Calculo de resultados El nmero total de huevos o larvas encontrados se multiplica por 5; se obtiene de esta manera el nmero de huevos de la totalidad de la preparacin 5.2 Reporte de resultados 5.2.1 El resultado se expresa en huevos o larvas por gramos de heces (hgh); por ejemplo si se encontraron 10 huevos de Ascaris lumbricoides: 9 X 5= 50 hgh 5.2.2 Toda vez obtenidos los resultados, estos se vacan en una libreta o cuaderno control.

6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 Se debe verificar la densidad del sulfato de zinc peridicamente para evitar errores de concentracin. Lavar perfectamente bien las campanas y para tratarlas una vez al mes con mezcla crmica. Verificar que el caucho no este roto Revisar que las tuercas no estn oxidadas Hacer los pares correspondientes para evitar que la centrfuga se desbalance
7.- CONTROL DE CALIDAD

Se recomienda la experiencia del analista en la aplicacin de esta tcnica Se usan preparaciones de referencia sobre todo en la identificacin de las larvas.
Parasitologa Clnica
11
8.- PRACTICABILIDAD
8.1 Debe ser un estudiante de Qumica Clnica, Qumico Frmaco bilogo Qumico Bilogo parasitlogo con supervisado por el facilitador de la Experiencia Educativa
Fig. No 1. Campana de Ferreira
Fuente: Biagi F., Enfermedades parasitarias.
9.- Bibliografa
Biagi Francisco, Enfermedades Parasitarias, 3ra edicin, Manual Moderno, 2004 Jimnez Cardoso Enedina, Control de calidad en Parasitologa, 1ra edicin, editorial Prado, 2006. Rodrguez, Atlas de Parasitologa Mdica, 1ra edicin, Mc Graw Hill, 2004. Tay Jorge, Parasitologa, 6va edicin, Mndez Editores, 2010. Becerril Marco, Parasitologa Mdica, 2da edicin, Mc Graw Hill, 2008.
Parasitologa Clnica
12

REPORTE ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
CONCLUSIONES: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
Parasitologa Clnica
13
METODO DE KATO KATZ. FROTE GRUESO

1.- INTRODUCCIN
Este mtodo fue descrito por Kato y Miura en 1954 y antiguamente se denominaba como; frote grueso fue evaluada por Komiya Kobashi y Martn Beaver, quienes introdujeron la modificacin de pasar la materia fecal por una malla para evitar el paso de fibras y restos alimenticios no digeridos, lo que mejor la tcnica original.
Es una tcnica muy sencilla en cuanto a materiales y reactivos a utilizar, en cuanto a los clculos para el reporte de resultados estos no representan mayor problema.
Se usada para diagnosticar helmintiasis y cuantificar el hallazgo de huevos, los resultados nos dan la concentracin de huevos por gramos de heces.

Este mtodo se fundamenta en la utilizacin de glicerina como aclarante y el verde de malaquita como colorante de contraste, adems de un cubreobjeto de celofn humedecible, que es el vehculo para la solucin de Kato. En este apartado se debe considerar que a travs de este mtodo no se diagnosticaran protozoosis por el aclaracin que produce la glicerina y el verde de malaquita puede enmascarar la finas estructuras de los parsitos unicelulares. Otro dato a tener en cuenta es que cuando se tratan de parasitosis mixtas como geohelmintiasis con himenolepiosis los huevos de estos ltimos son delicados y aclaran mas rpido que los de nematelmintos.

3.1 Reactivos NUM. 1 2 3 NOMBRE DEL REACTIVO CONCENTRACION QP 3% -CANTIDAD 100 ml 3 gr 100 ml
Glicerina Verde de malaquita Agua destilada
3.2 Equipos de Laboratorio 1. 30 microscopios. 2. Estufa de cultivo.
Parasitologa Clnica
14
3.3 Materiales de laboratorio CANTIDAD 30 30 30 30 1 rollo 30 30 DESCRIPCIN Cuadros de malla para mosquitero de 10 cm x lado Cuadros de papel celofn de 22 x 40 mm (como portaobjeto) Cuadros de cartn de 3 mm de grosor y de 30 mm de lado con una perforacin en el centro de 6 mm de dimetro. Papel encerado Papel absorbente Abatelenguas o Aplicadores Portaobjetos

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Depositar sobre el papel encerado 5 grs de materia fecal colocar la malla sobre la materia Presionar la malla para que salga el tamizado. Se efecta una horadacin de 0.6 cm. de dimetro en cartn de cascaron y se coloca sobre un portaobjeto. Ver fig. 2. Dentro del circulo se introduce la muestra de materia fecal (50 mg) . Con sumo cuidado retirar el soporte de papel cascaron o cartn. El excremento quedara en forma cilndrica. Cubrirlo con un fragmento de celofn (22 x 30 mm) que se encuentra previamente humedecido con glicerina y verde de malaquita 3% durante 24 hrs. Hacer un squash con la ayuda de papel adsorbente, con el propsito de eliminar el exceso de glicerina y de lograr una extensin delgada, apta para la observacin.
9.
10. dejar reposar durante 20 30 minutos a 37 grados centgrados para aclaracin del material fecal (pero no de los huevos) 11. Examinar al microscopio para su cuantificacin. 4.1 Muestreo y muestra 4.1.1 4.1.2 La Obtencin de muestra debe ser; expulsin de manera natural En frasco de boca ancha etiquetados con; nombre, edad, sexo y fecha.
Parasitologa Clnica
15
4.2 Preparacin del sistema de Medicin 4.2.1. Seguir las Instrucciones de limpieza y manejo del microscopio. 4.3 Uso del sistema de Medicin (Proceso de lectura y / u observaciones) 4.3.1 Enfocar al microscopio la preparacin con objetivo 10 X. 4.3.2. Realizar la lectura de la totalidad de la preparacin de manera sistemtica. 4.3.3. Reportar segn indicaciones en el apartado reporte de resultados. 4.3.4. Terminado el proceso apagar el equipo, limpiar y enrollar perfectamente el cordn. 4.3.5 Desechar los materiales de acuerdo con el procedimiento de desecho estndar

De acuerdo con la formula establecida, calcular la concentracin de la sustancia en las unidades respectivas. 5.1 Calculo de resultados El nmero de huevos contados en toda la preparacin se multiplica por un factor constante de 20; Si en 50 mg. de la muestra se encontr un huevo, como 1 gr. Tiene 1000 mgs. Se hace una regla de tres y por consiguiente 1000 dividido entre 50 dar un factor de 20, que es el que se utilizar para multiplicar el nmero de huevos contados en la preparacin. 5.2 Reporte de resultados El resultado se expresa en huevos por gramos de heces (hgh) larvas por gramos de heces (lgh)

6.1 Se debe evitar que el tiempo de aclaracin se exceda, pues esto dificulta la observacin de los huevos.

Solo la prctica de la tcnica durante varias veces ayudar a establecer los tiempos especficos para cada espcimen
Parasitologa Clnica
16
8.- PRACTICABILIDAD
Figura No. 2 material para el mtodo de Kato.
Fuente: Beltrn Fabin M.Tello Casanova R., Naqueira Velarde C., Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnstico de los parsitos intestinales del hombre.
9.- Bibliografa
Jimnez Cardoso Enedina, Control de calidad en Parasitologa, 1ra edicin, editorial Prado, 2006. Beltrn Fabin M.Tello Casanova R., Naqueira Velarde C., Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnstico de los parsitos intestinales del hombre.
Parasitologa Clnica
17
Lpez Pez Myrian, Atlas de Parasitologa, 1ra edicin, Manual Moderno, 2006 Biagi Francisco, Enfermedades Parasitarias, 3ra edicin, Manual Moderno, 2004
Parasitologa Clnica
18

REPORTE ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
CONCLUSIONES: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
Parasitologa Clnica
19
METODO DE TAMIZADO
1.- INTRODUCCIN
En ciertas parasitosis es importante tanto para el medico como para el paciente la recuperacin de los parsitos adultos o porciones de ellos a fin de establecer un diagnostico de certeza o de evaluar el efecto de la teraputica empleada. Esta tcnica es utilizada para la recuperacin de parsitos adultos o segmentos de ellos en la materia fecal.
Algunas de la parasitosis en las que puede ser de utilidad el empleo de esta tcnica son; Tricocefalosis en su estadio adulto los cuales se vern como pequeas hebras de hilo o pequeas porciones de cabello de all su nombre trico= cabello. Uncinariosis en su fase adulto, lo que resulta valioso para la identificacin de genero de uncinaria que parasita a nuestro paciente. Enterobiasis con lo que se establecera el nematodo causante de la patologa, otros especimenes que se obtienen con este mtodo son las Taenias que son de suma importancia en cuanto a la mortalidad que puede ocasionar Taenia solium sobre todo en su estadio larval, o como ya se menciono anteriormente al lograr recuperara el escolex despus de un tratamiento nos da el indicio que nuestro paciente se encuentra desparasitado de el temible parasito que es la solitaria. 2.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
Es una tcnica que se fundamenta en el uso de diferentes tamices que van del ms grande al mas pequeo los que funcionan como filtros atrapando los materiales burdos que pudieran interferir con la observacin, el mtodo es de especial utilidad en los casos de teniasis, en los que con frecuencia los otros mtodos de rutina dan resultados negativos.

3.1 Reactivos NUM. NOMBRE DEL REACTIVO 1 2 3 4 Alcohol Glicerina Cloruro de Sodio Solucin salina CONCENTR ACIN 70 % Q. P. 2% 0.9% CANTIDAD 100 ML 20 ML 50 ML 1000 ml
Parasitologa Clnica
20
3.2 Equipos de Laboratorio 1. 30 microscopios. 2. Bao Maria. 3.3 Materiales de laboratorio CANTIDAD 30 30 1 30 30 DESCRIPCIN Coladera o tamiz Cristalizadores Termmetro Portaobjetos Cubreobjetos

1. 2. 3. Se colocan los tamices uno sobre otro en orden decreciente de grosor (el mas grande arriba y la ms fina al final) Colocar la materia fecal en el tamiz superior, como se muestra en la fig. No. 3. Agregar solucin salina con un chorro suave y mezclando con un abatelenguas, de manera que los esclex-progltidos y/o nemtodos adultos queden en los tamices. Los parsitos recogidos en el tamiz son lavados en solucin tibia de NaCl al 2%, agitndolos prolongadamente para estimular la relajacin y luego se examinan en fresco. Los parsitos grandes se fijan y conservan en formol al 5 o 10%, a 80 OC con una pequea cantidad de glicerol. Los parsitos pequeos pueden fijarse en alcohol al 70%, caliente y conservar en la misma solucin. Los trematodos y progltidos pueden examinarse comprimindolos entre portaobjetos.
4.
5. 6. 7.

Se reportar la fase parsita encontrada, con su gnero y especie. 5.1 Calculo de resultados No se practican clculos.
Parasitologa Clnica
21
5.2 Reporte de resultados El resultado se expresa en fase, genero y especie.

A los pacientes que tengan indicado tratamiento contra teniosis y tamizado posterior, se les pedir que recolecten la totalidad de la materia fecal evacuada en 24 o 48 hrs. En frasco limpio y de boca ancha y que no se contamine con orina.

Se utilizaran lminas de referencia como control de calidad.
8.- PRACTICABILIDAD
Fig. 3 Tamizado de materia fecal Fuente: Tay J. Lara, Gutirrez, Velazco, Parasitologa Mdica.
9.-Bibliografa Tay Jorge, Parasitologa, 6va edicin, Mndez Editores, 2010.
Parasitologa Clnica
22
Becerril Marco, Parasitologa Mdica, 2da edicin, Mc Graw Hill, 2008. Gmez Marn Jorge E., Protozoologa Mdica, 1ra edicin Manual Moderno, 2010. Jimnez Cardoso Enedina, Control de calidad en Parasitologa, 1ra edicin, editorial Prado, 2006. Rodrguez, Atlas de Parasitologa Mdica, 1ra edicin, Mc Graw Hill, 2004.
Parasitologa Clnica
23

REPORTE ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
CONCLUSIONES: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
Parasitologa Clnica
24
METODO DE SEDIMENTACIN DE RITCHIE.

1.- INTRODUCCIN
Esta tcnica forma parte de una serie de anlisis coproparasitoscopicos considerados de concentracin fue descrita por Ritchie en 1948, es de utilidad para la bsqueda de huevos quistes y larvas. Es empleada cuando no se observan parsitos en el mtodo directo y para aumentar la probabilidad de observar parsitos en las muestras estudiadas.
Algunas referencias no indican el uso de malla o gasa al aplicar el mtodo (ver apartado de tcnica) por lo que se pueden obtener sedimentos sucios y no con la calidad requerida para un optima observacin. 2.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN
Es fundamento de la tcnica se basa en el uso de la fuerza centrfuga que obligara a los parsitos a ir al fondo del tubo, del ter que elimina los detritus orgnicos, mientras que el formol ayuda a mantener la integridad de las formas parasitarias que se concentran.

3.1 Reactivos NUM. 1 2 3 NOMBRE DEL REACTIVO Formaldehdo Eter etlico o de petrleo Solucin salina CONCENTRACI N 40 % Q. P. 0.9% CANTIDAD 500 ML 300 ML 1000 ml
3.2 Equipos de Laboratorio 1. 30 microscopios. 3.3 Materiales de laboratorio CANTIDAD 30 30 30 30 30 DESCRIPCIN Coladera Embudos Gradillas Pipetas Pasteur Portaobjetos
Parasitologa Clnica
25
30
Cubreobjetos

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. Diluir 2 grs. De heces en 5 ml de solucin salina fisiolgica. Filtrar la solucin obtenida sobre colador y embudo. Centrifugar durante 5 minutos a 2500 r.p.m. Eliminar el sobrenadante. Volver a lavar si es necesario Al sedimento agregar 3 ml del formaldehdo al 40 % y 2 ml de ter. Tapar el tubo y agitar enrgicamente Centrifugar 3 mins a 2500 r.p.m. (entre el ter y el formaldehdo se formar un tapn de grasa y materiales orgnicos) Del sedimento tomar una muestra con la pipeta Pasteur Colocar la muestra entre portaobjeto y cubreobjeto Observar al microscopio con 10 X y posteriormente con 40 X. Reportar.

Se reportar la fase del parsito, con su gnero y especie. 5.1 Calculo de resultados No se practican clculos. 5.2 Reporte de resultados El resultado se expresa en fase, genero y especie y cruces por campo.

6.1 Se deber introducir la pipeta Pasteur para la toma de la muestra del fondo del tubo con el mayor cuidado, pues se pueden presentar problemas al momento de la observacin por el arrastre de grasa.

Se utilizaran lminas de referencia como control de calidad.
8.- PRACTICABILIDAD
8.1 Debe ser un estudiante de Qumica Clnica, Qumico Frmaco bilogo Qumico Bilogo parasitlogo con supervisado por el facilitador de la Experiencia Educativa.
Parasitologa Clnica
26
9.- BIBLIOGRAFA
Biagi Francisco, Enfermedades Parasitarias, 3ra edicin, Manual Moderno, 2004 Tay Jorge, Parasitologa, 6va edicin, Mndez Editores, 2010. Becerril Marco, Parasitologa Mdica, 2da edicin, Mc Graw Hill, 2008. Gmez Marn Jorge E., Protozoologa Mdica, 1ra edicin Manual Moderno, 2010. Jimnez Cardoso Enedina, Control de calidad en Parasitologa, 1ra edicin, editorial Prado, 2006. Rodrguez, Atlas de Parasitologa Mdica, 1ra edicin, Mc Graw Hill, 2004.
Parasitologa Clnica
27

REPORTE ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
CONCLUSIONES: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
Parasitologa Clnica
28
METODO DE CONCENTRACIN DE EXPECTORACIN. DISTOMIASIS PULMONAR

1.- INTRODUCCIN
Se trata de una tcnica de concentracin y aclaracin en una muestra de expectoracin sencilla y til para la bsqueda de distomas como; Paragonimus. El Paragonimus mexicanus es un organismo parasito que se adquiere por la ingestin de cangrejos y acociles contaminados y tiene predileccin por las vas pulmonares en las que puede ocasionar alteraciones tales como; tos, disnea esputo hemoptoico, lo que puede ser confundido con una tuberculosis pulmonar u otras afecciones del tracto respiratorio por lo que se requiere de un diagnostico diferencial.

El mtodo se basa en el uso de la fuerza centrfuga para sedimentar los elementos formes y en el uso de una solucin de hidrxido de sodio para aclarar la muestra.

3.1 Reactivos NUM. 1 NOMBRE DEL REACTIVO Hidrxido de sodio CONCENTRACIN 3% CANTIDAD 500 ML
3.2 Equipos de Laboratorio 1. 30 microscopios. 2. 1 centrifuga 3.3 Materiales de laboratorio CANTIDAD 30 30 30 30 30 30 DESCRIPCIN Tubos cnicos Gradillas Pipetas Pasteur Bulbos Portaobjetos Cubreobjetos
Parasitologa Clnica
29

1. En el recipiente donde se recolecto la muestra aadir una parte igual de hidrxido de sodio al 3 %. 2. Mezclar muy bien durante 3 mins. 3. Depositar toda muestra en un tubo cnico. 4. Centrifugar 5 mins. A 5000 r.p.m. 5. Desechar el lquido sobrenadante. 6. Con una pipeta Pasteur tomar del fondo del tubo y depositar entre porta y cubreobjeto 7. Examinar la preparacin al microscopio con 10X y 40X

Se reportar la fase del parsito, con su gnero y especie. 5.1 Clculo de resultados No se practican clculos. 5.2 Reporte de resultados El resultado se expresa en fase, gnero y especie del parsito. La intensidad se reporta en cruces por campo.

6.1 La toma de muestra debe ser expectoracin y no saliva.

Se utilizaran imgenes de referencia como control de calidad.
8.- PRACTICABILIDAD
8.1 El analista debe ser un Qumico Clnico, Qumico Frmaco bilogo Qumico bilogo parasitolgo con entrenamiento supervisado.
9.-BIBLIOGRAFA.
Lpez Pez Myrian, Atlas de Parasitologa, 1ra edicin, Manual Moderno, 2006 Biagi Francisco, Enfermedades Parasitarias, 3ra edicin, Manual Moderno, 2004
Parasitologa Clnica
30
Tay Jorge, Parasitologa, 6va edicin, Mndez Editores, 2010. Becerril Marco, Parasitologa Mdica, 2da edicin, Mc Graw Hill, 2008. Gmez Marn Jorge E., Protozoologa Mdica, 1ra edicin Manual Moderno, 2010. Jimnez Cardoso Enedina, Control de calidad en Parasitologa, 1ra edicin, editorial Prado, 2006. Rodrguez, Atlas de Parasitologa Mdica, 1ra edicin, Mc Graw Hill, 2004.
Parasitologa Clnica
31

REPORTE ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
CONCLUSIONES: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
Parasitologa Clnica
32
BSQUEDA DE HUEVOS DE Schistosoma haematobium

1.- INTRODUCCIN
Es una tcnica sencilla que trata de concentrar los elementos formes de la orina, entre ellos las formas parsitas.
Schistosoma haematobium es un parasito plano que afecta la vejiga urinaria, urteres produciendo estenosis uretral, infeccin crnica y grave, hidronefrosis hasta uremia. La morfologa del huevo son elpticos, presenta una cubierta transparente, pardo amarillenta porosa y cubierta con microvellosidades, tienen un espoln que lo fijan a los capilares sanguneos adems contienen enzimas lticas.
El parsito adulto macho mide de 6.4 a 12 mm de longitud y de 2 a 4 mm de ancho es
de color grisceo pliega su cuerpo formando un canal ginecforo ventral que le da el aspecto cilndrico donde se coloca la hembra. El nmero de testculos es de 6 a 9. Parsito adulto hembra mide de 7.2 a 17 mm de longitud, son cilndricos, las glndulas vitelgenas ocupan la mitad posterior del cuerpo el ovario se encuentra en la mitad anterior. En el extremo posterior hay un receptculo seminal en forma de retorta. El tero es corto. Tanto el macho como la hembra tienen dos ventosas una oral y otra ventral. Poseen una cola en forma de tenedor bifurcada. Son la fase infectante.

El mtodo se basa en la sedimentacin por centrifugacin de los elementos formes (entre ellos los huevos de Schistosoma)

3.1 Reactivos No se requieren reactivos 3.2 Equipos de Laboratorio 1. 30 microscopios.
Parasitologa Clnica
33
2. 1 centrifuga. 3.3 Materiales de laboratorio CANTIDAD 30 30 30 30 30 30 DESCRIPCIN Tubos cnicos Gradillas Pipetas Pasteur Bulbos Portaobjetos Cubreobjetos

1. 2. 3. 4. 5. Centrifugar la orina a baja velocidad en tubos cnicos durante 5 mins. Desechar el sobrenadante Mezclar perfectamente el sedimento Servir entre portaobjetos y cubreobjetos Observar en 10X y 40X.

Se reportar la fase del parsito, con su gnero y especie. 5.1 Calculo de resultados No se practican clculos. 5.2 Reporte de resultados El resultado se expresa en fase, gnero y especie del parsito. La intensidad se reporta en cruces por campo.

6.1. Antes de recolectar la muestra pedir al paciente que ejecute 20 sentadillas o que suba o baje las escaleras rpidamente, de esta manera se excretar la mayor cantidad de huevos.

Parasitologa Clnica
34
8.- PRACTICABILIDAD
8.1 Debe ser un estudiante de Qumica Clnica, Qumico Frmaco bilogo Qumico Bilogo parasitlogo con supervisado por el facilitador de la Experiencia Educativa. 9.-BIBLIOGRAFA. Jimnez Cardoso Enedina, Control de calidad en Parasitologa, 1ra edicin, editorial Prado, 2006. Rodrguez, Atlas de Parasitologa Mdica, 1ra edicin, Mc Graw Hill, 2004. Mara Beltrn Fabin de Estrada, Ral Tello Casanova, Csar Nquira Velarde, Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnstico de los parsitos intestinales del hombre. Serie de Normas. Tcnicas N 37. Lima 2003 Biagi Francisco, Enfermedades Parasitarias, 3ra edicin, Manual Moderno, 2004 Tay Jorge, Parasitologa, 6va edicin, Mndez Editores, 2010. Becerril Marco, Parasitologa Mdica, 2da edicin, Mc Graw Hill, 2008.
Parasitologa Clnica
35

REPORTE ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
CONCLUSIONES: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________
Parasitologa Clnica
36
EXAMEN COPROLGICO FUNCIONAL

1.- INTRODUCCIN
En este mtodo se realizar un estudio de las heces fecales, tanto Fsico-QumicoCitolgico-coproparasitoscopico a las cuales se les har una inspeccin del contenido de toda la muestra y se les efectuarn tcnicas para la deteccin de parsitos, bacterias y otras alteraciones gastrointestinales. El examen coprolgico de las heces tiene su mxima indicacin clnica en las diarreas crnicas, y en general interesa en procesos que cursan con insuficiencia digestiva o en aquellas en que se busca bacteria o parsito causante de la enfermedad; comprende la observacin directa, macroscpica, anlisis organolptico o fsico, el anlisis qumico, bacteriolgico y parasitolgico de la deposicin. Para practicar un examen coprolgico hay que recomendar hacer una inspeccin conciente de las muestras, pues los hallazgos pueden variar notablemente y en distintos campos microscpicos; llevando un examen a conclusiones errneas; conviene evitar que la orina se mezcle con la deposicin; y el clnico la examinar. Un estudio riguroso afines de investigacin requiere de la aplicacin de mtodos qumicos de balance, conociendo exactamente la proporcin de la dieta y la cantidad de heces. Para el uso clnico corriente basta la observacin microscpica de heces con las cinco preparaciones clsicas, sin teir, con lugol, con sudn, cido actico y Giemsa.

El examen coprolgico de las heces tiene su mxima indicacin clnica en las diarreas crnicas y en general interesa en procesos que cursan con insuficiencia digestiva o en aquellas en que se buscan bacterias o parsitos causantes de la enfermedad; se fundamenta en la observacin directa al microscopio, anlisis organolptico o fsico, el anlisis qumico, bacteriolgico y parasitolgico de la deposicin.
Parasitologa Clnica
37

3.1 Reactivos NUM. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 NOMBRE DEL REACTIVO cido tricloroactico NaOH Lugol Solucin de Sudn ter Solucin de Benedict Solucin de Piramidn cido actico Agua oxigenada (H2O2) HCl Cloruro frrico amoniaco Ac. clorhdrico CONCENTRACION 5% 10 % parasitologico ---Q.P. ---3% 36% 3% 5% 3% Q.P. Q. P. CANTIDAD 500 ML 500 ML 50 ML 50 ML 500 ML 300 ML 100 ML 150 ML 150 ML 150 ML 300 ML 20 ML 50 ML
3.2 Equipos de Laboratorio 30 microscopios. 1 centrifuga 3.3 Materiales de laboratorio CANTIDAD 30 300 30 30 30 2 30 15 3 15 30 DESCRIPCION Tubos de ensayo de 15 x 150 Tubos de ensayo de 13 x 100 Cubreobjetos Abatelenguas Aplicadores Goteros Papel pH Pipetas de 5 ml Pinzas para tubo Gradillas Portaobjetos
Parasitologa Clnica
38

EXAMEN FISICO O CARACTERES ORGANOLPTICOS Cantidad Color Normal 150 200 grs. Pardo (presencia de coprobilingeno) Amarillo (en lactantes) Gris (presencia de cacao o chocolate) Verde (ingestin de vegetales o medicamentos colomelanos) Negro (hierro y bismuto) Amarillo oro (ruibarbo o xantoninas) Normal o Sui gneris Agrio y Rancio (en lactantes debido a cidos grasos) Ptrido (en diarreas graves) Ftido (lesiones sifilticas o ulceras del recto) Heces normales (son blandas pero moldeadas) Duro (estreimiento) Semilquidas Lquidas Blanda no moldeada, pastosa
Olor
Aspecto
EXAMEN MACROSCOPICO Restos de alimentos Cuerpos extraos Sanguinolento Se observan fragmentos de alimentos y semillas no digeridas. Objetos ingeridos por los nios, p. ej. Botones pequeos, etc. Sangre macroscpica. Disentera aguda, enteritis amibiana y en leo colitis Normalmente se presenta en pequeas cantidades: ntimamente ligado a la materia fecal Abundante: se presenta en caso de irritacin e inflamacin del intestino y del colon.
Moco
Parasitologa Clnica
39
Parsitos adultos y progltidos Se observan parsitos como por Ej. Ascaris lumbricoides, taenias, Trichuris trichiura, oxiuros o progltidos.
EXAMEN QUMICO
Reaccin pH
Neutra (es normal) Ligeramente cida (en lactantes) Ligeramente alcalina (6.9 7.2) 3 ml de materia fecal diluida, agregar una gota de amoniaco y 2 ml de cido. actico al 1/3 . Interpretacin: Si forma opacidad, la reaccin es POSITIVA 3 ml de materia fecal diluida 2 ml de cido tricloroactico Interpretacin: en caso POSITIVO se observa precipitado Se debe realizar un blanco con agua
Mucina
Albmina compleja
Albmina desintegrada 2 ml de materia fecal diluida 0.5 ml de c. tricloroactico e incubar 37OC por 30 Interpretacin: en caso POSITIVO se observa precipitado Peptonas 2 ml de materia fecal diluida 0.5 ml de NaOH Incubar por 30 Interpretacin: en caso POSITIVO, se observa precipitado. Suspender una gota de materia fecal diluida 1 o 2 gotas de sol. de lugol Interpretacin: Cuando el almidn es digerido se colorea de ROJO Cuando el almidn no es digerido se colorea de AZUL Preparar una lmina con emulsin de heces y agregar una gota de negro de Sudan. Interpretacin: La reaccin positiva se evidencia por la presencia de gotas negras El numer de gotas de grasa observadas se emplea para determinar de manera aproximada el porcentaje del contenido de grasa en heces.
Almidones
Grasas neutras
Parasitologa Clnica
40
Los individuos con menor excrecin de grasa deben de presentar menos de 10 gotas por cada 10 campos. Nmero aproximado de gotas 10 20 30 35 40 Jabones Cantidad aproximada de grasa 5 % 10 % 15 % 20 % 30 %
Se observan como agujas dispuestas en racimos o abanicos cortos y planos, escamas gruesas que el calor no funde ni se disuelven en ter
Azucares reductores: MONOSACARIDOS 2.5 ml de materia fecal diluida 1 ml de sol. de Benedict Calentar a ebullicin por 5 Interpretacin. Coloracin verde: NEGATIVA Coloracin precipitado caf: POSITIVA DISACRIDOS 2.5 ML de suspensin de materia fecal 1 ml de cido clorhdrico Ebuir 5 mins. Centrifugar a 3000 r.p.m. durante 5 mins. Al sobrenadante agregar 1 ml de Benedict Ebuir durante 5 mis. Interpretacin: Coloracin verde =NEGATIVA Coloracin caf = POSITIVA. 1 ml de suspensin de heces 0.5 ml de c. Actico 1/12 0.5 ml de Piramidn 3 % 0.5 ml de agua oxigenada 3% Mezclar con un aplicador o varilla de vidrio. Interpretacin: POSITIVO, color azul 1 ml de emulsin de heces fecales 1 ml de HCl al 5% 1 ml de cloruro frrico al 3% Mezclar 41
Hemoglobina
Bilirrubinas
Parasitologa Clnica
Usar un blanco con agua Interpretacin: POSITIVO: coloracin verde NEGATIVO: no se presenta cambio de coloracin.
EXAMEN MICROSCPICO Fibras musculares Aparecen como cilindros estriados transversales con extremos seccionados en sentido perpendicular al eje y muestran ncleos bien conservados en digestiones deficientes. Mientras que, en digestiones completas sus extremos redondos no muestran ninguna estra o solo huellas con ausencias de ncleos. Forman vainas amarillentas con estras longitudinales. Presenta fibras ramificadas bien aparentes. Observacin de cristales de oxalato de calcio, principalmente por ingestin de vegetales.
Tejido conjuntivo Tejido elstico Cristales
EXAMEN COPROPARASITOSCOPICO Se realizarn las tcnicas en: Fresco para la observacin de trofozoitos. Flotacin Tcnicas de concentracin Para la observacin de huevos y quistes Sedimentacin
Tcnica de tamizado: observacin de parsitos adultos.
EXAMEN CITOLGICO Se realiza un frotis del moco y se fija con alcohol, se tie por la tcnica de Giemsa para la observacin de eritrocitos, en caso de sangre fresca y de Leucocitos como; Linfocitos y Polimorfonucleares en caso de un proceso infeccioso o inflamatorio.
Parasitologa Clnica
42
COPROCULTIVO Se realizan inoculaciones de las heces fecales en medios de cultivos selectivos para la identificacin de bacterias, vibrin y levaduras. 4.1 Muestro y muestra Es necesario que la materia fecal sea recin recolectada. 5.- PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS Reportar de acuerdo al formato incluido en el apartado de reporte de resultados. 5.1 Clculo de resultados No se practican clculos. 5.2 Reporte de resultados

6.1. La muestra debe ser reciente y evitar contaminaciones con orina u otro material. 6.2. El primer examen a efectuar una vez recibida la muestra debe ser el Coprocultivo.

Como control de calidad para el cultivo se introduce una caja con los agares a utilizar en la estufa de cultivo (sin sembrar) Se debe tener cuidado en el manejo de cada uno de los reactivos empleados, algunos causan irritacin de vas respiratorias, de la piel y mucosas. Se deben emplear muestras de referencia.
8.- PRACTICABILIDAD
9.- BIBLIOGRAFA.
Lpez Pez Myrian, Atlas de Parasitologa, 1ra edicin, Manual Moderno, 2006.
Parasitologa Clnica
43
Biagi Francisco, Enfermedades Parasitarias, 3ra edicin, Manual Moderno, 2004. Tay Jorge, Parasitologa, 6va edicin, Mndez Editores, 2010. Becerril Marco, Parasitologa Mdica, 2da edicin, Mc Graw Hill, 2008. Gmez Marn Jorge E., Protozoologa Mdica, 1ra edicin Manual Moderno, 2010. Jimnez Cardoso Enedina, Control de calidad en Parasitologa, 1ra edicin, editorial Prado, 2006. Rodrguez, Atlas de Parasitologa Mdica, 1ra edicin, Mc Graw Hill, 2004.
Parasitologa Clnica
44

NOMBRE: _________________________________________________ FECHA: ___________________________________________________ NOMBRE DE LA PRCTICA: __________________________________ MUESTRA ________________________________________________ FUNDAMENTO (INTERPRETACION) : __________________________
______________________________________________________________ Citologa de heces ______________________________________________ Examen fsico: Cantidad _______________________________________________________ Color __________________________________________________________ Olor __________________________________________________________ Aspecto________________________________________________________ Examen macroscpico: Restos de alimentos ______________________________________________ Cuerpos extraos ________________________________________________ Sangre ________________________________________________________ Moco __________________________________________________________ Parsitos adultos ________________________________________________ Examen microscpico Fibras musculares _______________________________________________ Tejido conjuntivo_________________________________________________ Tejido elstico___________________________________________________ Cristales _______________________________________________________ Examen qumico: Ph ____________________________________________________________
Parasitologa Clnica
45
Albmina compleja _______________________________________________ Albmina desintegrada ____________________________________________ Peptonas ______________________________________________________ Almidones ______________________________________________________ Grasas neutras __________________________________________________ Monosacridos __________________________________________________ Disacridos _____________________________________________________ Hemoglobina ___________________________________________________ Bilirrubina ______________________________________________________ Mucina ________________________________________________________ Coproparasitoscpico:
Coprocultivo: __________________________________________________________
CONCLUSIONES: __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________ __________________________________________________________________
Parasitologa Clnica
46
DE PROGLOTIDOS Y TREMATODOS
1.- INTRODUCCIN
En esta tcnica se podrn identificar los progltidos de las diferentes tenias, as como tambin trematodos por la tcnica de tinta china. Taenia Saginata posee Progltidos los cuales se clasifican como ; inmaduros, maduros y gravidos. los Progltidos maduros son cuadrados, el ovario es bilobulado. Progltidos grvidos son largos. Posee de 15 a 30 ramas uterinas poco ramificadas, las ramas uterinas se teirn con la tinta china lo que facilitara la cuenta de las mismas. Mientras que los Progltidos maduros de Taenia solium son cuadrados, el ovario es trilobulado. Progltidos grvidos son largos, tiene menos de 12 ramas uterinas muy ramificadas y gruesas

Para poder diferenciar los progltidos de las diferentes especies tenias se requiere de la investigacin de las ramas uterinas, lo mismo que para poder estudiar los trematodos es necesario el uso de una tcnica para su tincin como la de la tinta china.

3.1 Reactivos NUM. 1 2 3 4 5 5 NOMBRE DEL REACTIVO Glicerina Ac. actico Etanol Ac. fnico Tinta china Xilol CONCENTRACIN Q. P. 5% 70 y 95% 75% comercial 25% CANTIDAD 300 ML 500 ML 500 ML 300 ML 50 ml. 300 ML
Parasitologa Clnica
47
3.3 Materiales de laboratorio CANTIDAD 30 15 15 15 DESCRIPCIN Portaobjetos Jeringa hipodrmica de 2 ml Agujas no. 25 2 cm Vasos de precipitado de 250 ml

1. 2. Pueden aclararse los progltidos y trematodos completos con ac. actico al 5% hasta disolver los corpsculos calcreos, o por adicin gradual de glicerina. Tambin se aclaran despus de breve conservacin con alcohol de 70%. En inmersin de Fenol-Xilol (ac. fnico 75% y Xilol 25%). Deshidratacin en alcohol al 95%. Si el tero de los progltidos no contiene huevos dificultndose la identificacin se proceder:
3.
a) A inyectar tinta china en el tronco uterino central usando una jeringa hipodrmica de 1-2 ml y aguja no. 25 de 2 cm. b) Despus de la inyeccin se lava el exceso de tinta en la superficie. c) Se comprime el progltido entre dos portaobjetos y se observa.

Se reportar la fase del parsito, con su gnero y especie. 5.1 Calculo de resultados No se practican clculos. 5.2 Reporte de resultados
Reportar Gnero y especie del parsito, as como la tcnica realizada.

6.1. Los especimenes ya identificados se montan en blsamo de Canad o resina sinttica, para lo cual se requiere supervisar la calidad de estos reactivos.
Parasitologa Clnica
48
6.2 Es necesario realizar un correcto etiquetado del parsito, estadio, fecha y nombre del proceso.

8.- PRACTICABILIDAD
8.1 Debe ser un estudiante de Qumica Clnica, Qumico Frmaco bilogo Qumico Bilogo parasitlogo con supervisado por el facilitador de la Experiencia Educativa. 9.- BIBLIOGRAFA
Becerril Marco, Parasitologa Mdica, 2da edicin, Mc Graw Hill, 2008. Gmez Marn Jorge E., Protozoologa Mdica, 1ra edicin Manual Moderno, 2010. Jimnez Cardoso Enedina, Control de calidad en Parasitologa, 1ra edicin, editorial Prado, 2006. Rodrguez, Atlas de Parasitologa Mdica, 1ra edicin, Mc Graw Hill, 2004. Haro Arteaga I., Salazar Schettino P., Cabrera Bravo M. ,Diagnostico morfolgico de las parasitosis. Mndez editores. 1999. Mxico D. F.
Biagi Francisco, Enfermedades Parasitarias, 3ra edicin, Manual Moderno, 2004
Parasitologa Clnica
49
COLORACIN PARA PLATELMINTOS

1.- INTRODUCCIN
Las preparaciones teidas con montaje fijo son de utilidad para el diagnostico de las parasitosis porque facilitan la observacin de algunas estructuras internas del parsito que resultan clave para la identificacin del mismo

La presente tcnica se basa en un proceso de fijacin, seguido de una deshidratacin hidratacin segn sea el caso, para posteriormente seguir con la fase del colorante, aclaracin y montaje.

3.1 Reactivos NUM. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 NOMBRE DEL REACTIVO Orcena c. Actico Agua destilada c. Clorhdrico Alcohol etlico Alcohol Xilol Resina Sinttica Aceite de clavo CONCENTRACION Q.P. Q. P. Q. P. 95% absoluto Q. P. 10% Q. P. CANTIDAD 300 ML 500 ML 500 ML 4 ML 50 ml. 200 ML 200 ML 50 ML 300 ML
Parasitologa Clnica
50
3.3 Materiales de laboratorio CANTIDAD 10 5 5 8 5 DESCRIPCIN Portaobjetos de 6 mm de espesor Frascos de vidrio hojas de bistur Vasos de koplin Pincel

1. Los especimenes se colocan entre dos portaobjetos de 6 mm de grosor, por capilaridad se impregnan con la solucin de Orcena actica. 2. Dejar de 4 a 6 hrs. 3. Cuidadosamente levantar el vidrio que cubre a los parsitos y recuperarlos con un pincel o con la ayuda de una hoja de bistur 4. Colocarlos en un frasco con Orcena actica, taparlos y dejar actuar en el fijador durante 8 das. 5. Sacarlos y poner a diferenciar en alcohol cido de 2 a 24 hrs. El tiempo depender de la aclaracin para observar las ramas uterinas. 6. Pasar por 4 cambios de alcohol de 95 %, 2 de absoluto y 2 de xilol, 5 minutos cada uno. 7. Aclarar con aceite de clavo 8. Montar con resina sinttica.

Se reportar la fase del parsito, con su gnero, especie. 5.1 Calculo de resultados No se practican clculos. 5.2 Reporte de resultados
Reportar Gnero y especie del parsito, as como la tincin empleada.

Los mejores resultados de una tincin se obtienen cuando esta se realiza en el menor tiempo posible. Parasitologa Clnica 51
Se deben estandarizar cuidadosamente los tiempos de tincin.

Se utilizaran imgenes de referencia como control de calidad, las mismas laminas fijadas pueden emplearse para capacitacin del personal como control de calidad.
8.- PRACTICABILIDAD
8.1. Debe ser un estudiante de Qumica Clnica, Qumico Frmaco bilogo Qumico Bilogo parasitlogo con supervisado por el facilitador de la Experiencia Educativa.
9.-BIBLIOGRAFA
Haro Arteaga I., Salazar Schettino P.,Cabrera Bravo M.,Diagnostico morfolgico de las parasitosis. Mndez editores. 1999. Mxico D. F. Atas A., Parasitologa Mdica, Editorial Mediterrneo, 1999, Santiago de Chile. Biagi F., Enfermedades parasitarias, Editorial la Prensa Medica Mexicana,17 reimpresin, 2000, Mxico D. F. Tay J., Lara, Gutirrez, Velazco, Parasitologa Mdica, Mndez editores, sexta edicin 1996, reimpresin 2000, Mxico D. F. Beltrn Fabin M., Tello Casanova R., Naqueira Velarde C.,Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnstico de los parsitos intestinales del hombre. Editor Leonid Lecca Garca, 2003, Lima Per. Lpez Pez M., Corredor Arjona A., Nicholls Orejuela, Atlas de Parasitologa, editorial Manual moderno.2006, Colombia.
Parasitologa Clnica
52
ANEXOS
PREPARACION DE REACTIVOS
Solucin 0.1 N de hidrxido de sodio

Se pesan 4 g de hidrxido de sodio lo ms rpido posible para evitar la hidratacin y la alteracin del peso, se coloca en un matraz volumtrico de un litro. Se agregan unos 100 a 200 ml de agua y se disuelve. Se afora el matraz a la marca y se agita para homogenizar la solucin. Se guarda en un FRASCO CON TAPON DE GAUCHO. NO SE DEBE UTILIZAR FRASCO CON TAPON ESMERILADO, pues los hidrxidos de potasio y sodio disuelven el vidrio y se sellan los frascos.
Sulfato de zinc 33%

Sulfato de zinc 33 grs. Agua destilada.aforar a 100 ml. Disolver el sulfato de zinc en el agua destilada en un matraz de vidrio adecuado utilizando un agitador magntico. Ajustar a la gravedad especfica () a 1.18 por la adicin de sulfato de zinc o agua destilada, segn sea el caso. En el caso de muestras frescas formalinadas usar sulfato de zinc con gravedad especifica () de 1.20. Aforar y guardar el frasco de vidrio con tapn de rosca. Marcar el nombre del reactivo, la concentracin y la fecha de caducidad de doce meses posterior a la fecha de elaboracin. Almacenar a 4 C. Checar la gravedad especifica ante de usar.
Parasitologa Clnica
53
Formaldehdo 10%
Se disuelven 10 ml de formaldehdo en 90 ml de agua destilada y se guarda en frascos con tapn hermtico no metlico.
Sol. Salina 0.9%

Se pesan 9 g NaCl, se disuelven en agua destilada y se completa el volumen a 1000 ml en matraz volumtrico.
Verde de malaquita 3%
Se disuelven 3 g de verde de malaquita en 100 ml de agua y se guarda en frasco mbar con tapn esmerilado.
Solucin de verde de malaquita y glicerina

Se mezclan 1 ml de solucin de verde de malaquita, 100 ml de glicerina pura y 100 ml de agua, se homogenizan y se guarda la solucin, que es estable durante mucho tiempo, en un frasco mbar de boca ancha y tapa de baquelita. Se recomienda cortar los cuadros de celofn y mantenerlos dentro del frasco con la solucin de trabajo y as, siempre tendremos el material listo.
Soluciones alcohlicas a partir de alcohol de 95%.

El alcohol del comercio viene a una concentracin de 95%; como resulta demasiado caro el uso de alcohol absoluto para hacer soluciones alcohlicas de concentraciones variables, se puede partir de 95%, si se toma en consideracin la siguiente regla. Es necesario recordar que el alcohol tiene qu ser puro de caa, pues el desnaturalizado, por contener sustancias que lo hacen tener mal sabor, hay interferencia en los procesos de tincin.
Alcohol 70%
Se mezclan 70 volmenes de alcohol de 95% y 30 volmenes de agua destilada.
Cloruro de sodio 2%
Parasitologa Clnica
54
Se pesan 20 g NaCl, se disuelven en agua destilada y se completa el volumen a 1000 ml en matraz volumtrico
Formaldehdo 40%
Se disuelven 40 ml de formaldehdo en 60 ml de agua destilada y se guarda en frascos con tapn hermtico no metlico.
Hidrxido de sodio 3%
Se pesan 3 g de hidrxido de sodio lo ms rpido posible para evitar la hidratacin y la alteracin del peso, se lleva 100 ml de agua destilada, se agita para homogenizar la solucin. Se guarda en un FRASCO CON TAPON DE CAUCHO. NO SE DEBE UTILIZAR FRASCO CON TAPON ESMERILADO, pues los hidrxidos de sodio disuelven el vidrio y se sellan los frascos.
Acido tricloroactico 5%
Se disuelven 5 ml de acido tricloacetico e se llevan a 100 ml de agua destilada y se guarda en frascos con tapn hermtico no metlico.
NaOH 10%
Se pesan 10 g de hidrxido de sodio lo ms rpido posible para evitar la hidratacin y la alteracin del peso, se agregan 100 ml de agua destilada, se agita para homogenizar la solucin. Se guarda en un FRASCO CON TAPON DE CAUCHO. NO SE DEBE UTILIZAR FRASCO CON TAPON ESMERILADO, pues los hidrxidos de sodio disuelven el vidrio y se sellan los frascos.
Lugol parasitolgico Solucin madre

Se disuelven 10 g de yoduro de potasio en 100 ml de agua destilada y en seguida se agregan 5 g de yodo cristaloide, se agita constantemente para que se disuelva la
Parasitologa Clnica
55
mayor cantidad posible, se guarda en frasco mbar. No importa que quede exceso de yodo en el fondo; esto se hace para que la solucin permanezca con la concentracin deseada durante mucho tiempo e inclusive se puede reintegrar el volumen con adicin de agua destilada.
Solucin de trabajo de lugol

Se mezclan volumen a volumen solucin madre de lugol y agua destilada. Se sugiere evitar los frascos goteros con bulbo de caucho porque el lugol los destruye rpidamente, es mejor utilizar frascos goteros especiales con tapn esmerilado.
Solucin de piramidn 3%
Se disuelven 3 ml de piramidon en 100 ml destilada y se guarda en frascos con tapn hermtico no metlico.
Acido actico 36%

Se disuelven 36 ml de acido actico en 100 ml de agua destilada y se guarda en frascos con tapn hermtico no metlico.
HCl 5%
Se disuelven 5 ml de acido clorhdrico en 100 ml de agua destilada y se guarda en frascos con tapn hermtico no metlico.
Cloruro frrico 3%
Se disuelven 3 ml de cloruro frrico en 100 ml agua destilada y se guarda en frascos con tapn hermtico no metlico.
Ac. actico 5%
Se disuelven 5 ml de acido actico en 100 ml de agua destilada y se guarda en frascos con tapn hermtico no metlico.
Ac. fnico 75%
Parasitologa Clnica
56
Se disuelven 5 ml de acido fnico en 100 ml de agua destilada y se guarda en frascos con tapn hermtico no metlico.
Xilol 25%
Se disuelven 25 ml de xilol en 100 ml de agua destilada y se guarda en frascos con tapn hermtico no metlico.
Parasitologa Clnica
57

Manual

Uploaded by

Document Information

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Manual

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS PARA EL LABORATORIO DE LA E. E. PARASITOLOGIA CLINICA

AUTORES: M.E. Sara Ortigoza Gutirrez M. E. Martha Cruz Aguilar

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE PARASITOLOGIA

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

2.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN

3.- LISTA DE REQUERIMIENTOS

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

3.2 Equipos de Laboratorio 1. 30 microscopios.

3.3 Materiales de laboratorio

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

HECES Duras Pastosas Lquidas Duras Pastosas Liquidas

MUESTRA 0.075 0.075 0.075 0.150 0.150 0.150

FACTOR 200 400 800 100 200 400

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

6.- CONFIABILIDAD ANALTICA

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANLISIS REGIN VERACRUZ

REPORTE ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

3.- LISTA DE REQUERIMIENTOS

3.2 Equipos de Laboratorio

3.3 Materiales de laboratorio

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

4.- TCNICA O PROCEDIMIENTO

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

5.- PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

6.- CONFIABILIDAD ANALTICA

7.- CONTROL DE CALIDAD

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

Fig. No 1. Campana de Ferreira

Fuente: Biagi F., Enfermedades parasitarias.

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE BIOANLISIS REGIN VERACRUZ

REPORTE ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

METODO DE KATO KATZ. FROTE GRUESO

2.- PRINCIPIO Y METODOLOGA DE LA DETERMINACIN

3.- LISTA DE REQUERIMIENTOS

Glicerina Verde de malaquita Agua destilada

3.2 Equipos de Laboratorio 1. 30 microscopios. 2. Estufa de cultivo.

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

4.- TCNICA O PROCEDIMIENTO

Facultad de Bioanlisis, Veracruz.

Manual de Procedimientos de laboratorio

5.- PROCESAMIENTO Y REPORTE DE RESULTADOS

6.- CONFIABILIDAD ANALTICA

REPORTE

REPORTE

REPORTE

REPORTE

REPORTE

REPORTE