Seiring Analisis Tumor saliva MarkersA Baru Diagnostik Alat untuk Kanker Mulut Rafael Nagler, 1 Gideon Bahar,

2 Thomas Shpitzer, 2 dan Raphael Feinmesser 2 Abstrak Tujuan: karsinoma sel skuamosa oral (OSCC) adalah keganasan manusia yang umum. Peredaran Darah penanda tumor epitel yang sebelumnya diselidiki dalam serum pasien OSCC tapi hampir neverintheir air liur, terlepas dari fakta bahwa thereis air liur directcontact betweenthe dan lisan Kanker lesi. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menguji penanda tumor dalam air liur OSCC pasien. Desain Eksperimental: Kami mengukur konsentrasi dari enam yang paling banyak dipelajari epitel serum peredaran darah tumor marker dalam air liur OSCC (lidah) pasien. Hasil: Peningkatan yang signifikan (dari 400%) dalam konsentrasi ludah CYFRA 211, jaringan antigen polipeptida, dan CA125 ditunjukkan. Saliva konsentrasi CA19-9, SCC, dan antigen Carcinoembryonic meningkat tanpa signifikansi statistik. Sebuah analisis bersamaan dari tiga penanda meningkat secara signifikan mengungkapkan sensitivitas, spesifisitas, dan negatif dan positif prediksi nilai 71%, 75%, 71%, dan 75%, masing-masing. Kesimpulan: Peningkatan dilaporkan dalam penanda tumor saliva dapat digunakan sebagai alat diagnostik, terutama ketika analisis bersamaan untuk penanda meningkat secara signifikan dilakukan. Saliva pengujian noninvasif, menjadikannya sebagai menarik, alternatif yang efektif untuk pengujian serum, dan kemungkinan mengembangkan kit rumah pengujian lebih lanjut akan memfasilitasi sebagai alat bantu diagnostik, memungkinkan pasien untuk memantau kesehatan mereka sendiri di rumah dan sangat penting bagi mereka yang tinggal jauh dari pengobatan mereka pusat dan terutama bagi mereka yang berisiko terkena OSCC.

Oral squamous cell carcinoma (OSCC) adalah manusia yang umum keganasan, dengan meningkatnya insiden (terutama di orang yang lebih muda) dan 5-tahun tingkat kematian dari F50% (1-4), yang belum berubah secara signifikan dalam> 50 tahun (5-11). Nya lokasi dan pengobatan dalam hasil mulut / wajah / leher dalam relatif tinggi tingkat morbiditas terkait, seperti perawatan sering menghasilkan mutilasi signifikan dan dikompromikan fungsi. OSCC mencakup mobile (oral) dan dasar lesi kanker lidah. Paling sering, lesi kanker mulut adalah terletak di perbatasan lateral lidah, sedangkan satu terletak di dasar lidah dianggap sangat mematikan. Secara klinis, penting untuk dicatat bahwa terapi modalitas saat ini ditawarkan kepada pasien didasarkan pada tradisional Tahap-memprediksi indeks (sebagian besar didasarkan pada tumor-node- metastasis kriteria) dan grading histologi. Sayangnya, prediktor tersebut bersifat subyektif dan relatif bisa diandalkan, seperti sering dua

tumor dengan pementasan identik dan grading berperilaku mode yang sama sekali berbeda, dan meskipun satu merespon terapi, yang lainnya adalah mematikan. Dengan demikian, telah ada terus berkembang upaya didedikasikan untuk penelitian dasar oral kanker, berfokus pada identifikasi indikator biologi untuk diagnosis sifat biologis dan agresivitas. Penanda tumor sirkulasi untuk OSCC diselidiki pada berbagai penelitian (12-21) dan menunjukkan relatif moderat sensitivitas dan spesifisitas nilai dengan kaitannya dengan diagnosis, prognosis memprediksi, atau pemantauan pengobatan. Misalnya, Kurokawa et al. dianalisis antigen sirkulasi Carcinoembryonic (CEA), SCC, protein asam imunosupresif, dan CYFRA konsentrasi pada pasien OSCC dan sensitivitas ditemukan dan akurasi nilai 81% dan 77,8%, masing-masing, dan ketika mereka menganalisis asam CEA, SCC, dan imunosupresif protein, nilai-nilai adalah 69% dan 90,3%, masing-masing (22, 23). Hoffmann et al. (21) dan Krimmel et al. (20), yang menganalisis tingkat sirkulasi dari SCC, CEA, CA19-9, dan CA125 korelasi, ditemukan dengan beban tumor untuk hanya SCC antigen. Mereka melaporkan nilai sensitivitas lebih rendah untuk antigen ini (kecuali untuk pasien dengan metastasis jauh) dan mencatat bahwa antigen sirkulasi SCC belum secara rutin digunakan sebelumnya, sebagai sensitivitas yang dilaporkan relatif rendah penelitian lain juga (15-40%), meskipun kekhususan adalah cukup tinggi (70-90%). Hellner et al. (16) melaporkan bahwa peredaran sensitivitas SCC pada pasien kanker mulut hanya 24%, sedangkan itu jauh lebih rendah untuk CEA. Zoller et al. (17, 18) melaporkan bahwa, meskipun CA19-9, CA125, dan CA15-3 dipamerkan miskin sensitivitas, nilai sensitivitas untuk peredaran darah SCC dan CEA pada pasien kanker mulut adalah 33% dan 43%, masing. Seperti berbagai juga ditemukan untuk lainnya peredaran spidol, seperti CYFRA 21-1 atau jaringan polipeptida antigen (TPS), yang berada di kisaran 25% sampai 96% dan 65% sampai 75%, masing-masing (12-15). Salah satu metode yang disarankan, untuk meningkatkan sensitivitas dan akurasi analisis tersebut, adalah untuk memeriksa penanda sirkulasi berbagai bersamaan (untuk melakukan '' Kombinasi uji''; ref. 22, 23). Anehnya, hampir tidak ada penelitian diperiksa penanda tumor di air liur pasien OSCC. Pemeriksaan tersebut mungkin dari besar manfaat karena kontak langsung antara kanker mulut lesi dan air liur, terutama karena analisis saliva adalah berguna alat diagnostik untuk keganasan jauh lainnya, seperti payudara karsinoma (24). Selain itu, laporan-laporan saliva langka terfokus hanya pada satu penanda tumor yang umum dianalisis, CEA (25, 26), yang tidak terbukti sensitif atau cukup spesifik. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menguji air liur dari OSCC (lidah) pasien untuk enam paling sering dipelajari serum peredaran darah penanda tumor epitel: CYFRA 21-1, TPS, CEA, SCC, CA125, dan CA19-9. Data yang diperoleh kemudian dibandingkan dengan variabel tradisional diperiksa lain yang digunakan untuk diagnosis dan evaluasi dari tingkat keparahan penyakit.

Bahan dan Metode Pasien dan desain penelitian. Data yang dianalisis dalam penelitian ini berhubungan dengan 21 pasien yang menerima pengobatan definitif untuk SCC lidah dan dimonitor sampai 42 bulan. Usia rata-rata kelompok adalah 68 F 17 (kisaran, 30-86) dan termasuk 12 perempuan dan 9 laki-laki. Untuk 14 pasien ini, analisis saliva diperoleh juga, yang dibandingkan dengan kelompok kontrol dari 16 orang sehat cocok untuk usia dan jenis kelamin. Data yang diperoleh pementasan termasuk (menurut tumor-node-metastasis kriteria), penilaian mendalam, histologis dari tumor, tumor diameter maksimal, lokalisasi di dasar dibandingkan ponsel bagian dari lidah, dan usia pasien dan seks. Data lain diperoleh

adalah konsentrasi ludah antigen karbohidrat CA125 dan CA19-9, TPS, CEA, SCC, dan CYFRA 21-1. Mereka adalah diukur sesaat sebelum administrasi kuratif definitif pengobatan, yang termasuk operasi pengangkatan lidah primer tumor, diseksi leher, dan, radiother-sering, adjuvan pasca operasi APY. Data ini berkorelasi dengan kelangsungan hidup akumulatif pasien ' dan kelangsungan hidup bebas penyakit (DFS) data. Air liur koleksi. Seluruh air liur dikumpulkan sesaat sebelum pemberian terapi definitif dalam kondisi nonstimulatory di ruangan yang tenang antara 8 am dan siang, setidaknya 1 jam setelah makan. Pasien diminta untuk menghasilkan air liur dan untuk meludah ke dalam tabung reaksi yang luas selama 10 menit seperti yang dijelaskan sebelumnya (27). Setelah pengumpulan, air liur segera disentrifugasi pada 800 g pada 4jC selama 10 menit untuk mengangkat sel skuamosa dan puing-puing sel. Supernatan yang dihasilkan adalah digunakan untuk analisis biokimia lanjut. Penilaian penanda tumor saliva. Sampel saliva yang disimpan di 70jC sampai dianalisis, ketika semua enam penanda yang diuji. TPS dan CYFRA 21-1 dianalisis seperti yang dijelaskan sebelumnya (12, 28). Secara singkat, TPS diuji menggunakan uji immunoradiometric monoklonal (Beki Diagnostics AB, Bromma, Swedia). Pengujian mengukur M3 epitop fragmen larut cytokeratin manusia 18. CYFRA 21-1 adalah dievaluasi dengan menggunakan kit (Elsa-CYFRA 21-1 kit uji immunoradiometric, CIS Bio International, Gif-Sur-Yvette, Prancis). CYFRA 21-1 adalah dikembangkan menggunakan dua antibodi monoklonal (BM 19-21 dan KS 19-1) yang bereaksi dengan epitop berbeda pada cytokeratin 19 ditemukan di sampel. Antibodi monoklonal pertama bergerak dalam plastik tabung, sedangkan antibodi kedua iodinasi. Ketika sampel mengandung cytokeratin 19 fragmen, epitop mereka lintas- menghubungkan kedua antibodi, mengakibatkan peningkatan radioaktivitas sebagai diukur dengan counter gamma. SCC, CEA, CA19-9, dan CA125 adalah ditentukan dengan immunoassay enzim-linked mikropartikel dis- tributed oleh Abbot (Tokyo, Jepang) dan dilakukan seperti yang dijelaskan sebelumnya (29-31). Analisis statistik. Untuk variabel kategori, frekuensi, percen- tages, dan distribusi dihitung. Untuk variabel kontinyu, rentang, median, sarana, dan SE dihitung. Nilai median dihitung karena variabilitas di-borne besar variabel dalam saliva (Praktek umum). Karena kita menganalisis kecil (<30) kelompok, nonparametrik statistik percobaan digunakan. Distribusi kategoris variabel dibandingkan dan dianalisis dengan uji Fisher-Irwin yang tepat. Median antara sub kelompok pasien dibandingkan dengan Wilcoxon rank-sum test (pasang subkelompok). Sebuah matriks korelasi estimator digunakan untuk menganalisis koefisien korelasi antara yang saliva spidol. Untuk analisis klasifikasi, nilai cutoff yang dihitung sebagai rata-rata ditambah TGR dari kontrol sehat. Sensitivitas dan nilai spesifisitas dihitung sebagai fraksi dari pengamatan, yang diklasifikasikan dengan benar. Perkiraan kejadian kumulatif adalah digunakan untuk menghitung probabilitas kelangsungan hidup dan tingkat DFS sebagai fungsi waktu. Uji log-rank digunakan untuk membandingkan pasang kumulatif kejadian estimator.

Hasil Data klinis, pementasan, grading patologis, dimensi, situs, dan perluasan tumor Distribusi dari 21 pasien sesuai dengan ukuran tumor (T) mengungkapkan bahwa 9 pasien memiliki T 1 tumor dan 10 memiliki T 2 tumor, sedangkan hanya 2 pasien memiliki T 3 dan T 4 tumor (1 dari masing-masing). Artinya, 90% dari pasien memiliki awal (kecil untuk

moderat) tumor. Pada 16 dari 21 (76%) pasien, tidak ada leher metastasis (N 0 ), Sedangkan 4 pasien didiagnosis dengan N 1 dan 1 pasien dengan N 2. Tidak ada yang memiliki metastasis jauh (semua pasien M 0 ). Dengan demikian, 71% dari pasien didiagnosis dengan stadium awal tumor (I dan II), sedangkan hanya 29% dari pasien yang didiagnosis dengan stadium lanjut (III dan IV). Demikian pula, sebagian besar pasien (80%) adalah didiagnosis dengan baik dibedakan dan cukup differenti- diciptakan tumor (7 dan 12 pasien dengan nilai 1 dan 2, masing-masing) dan hanya 2 pasien didiagnosis dengan buruk lesi dibedakan. Diameter tumor rata-rata adalah 2,5 F 1,3 cm (kisaran, 0,8- 6,0 cm), dan kedalaman rata-rata adalah 8,5 F 6,4 mm (kisaran, 1-26 mm). Tingkat korelasi antara diameter dan T dan diameter dan N adalah 0,82 dan 0,25, masing-masing, sedangkan tingkat korelasi antara kedalaman dan T dan kedalaman dan N adalah 0,40 dan 0,34, masing-masing. Hanya 21% dari pasien merokok (3 dari 14 untuk siapa ini Informasi yang tersedia). Tingkat perokok di kontrol kelompok tidak berbeda nyata (4 dari 16). Sekitar 20% dari pasien memiliki keganasan lain atau sebelumnya (4 dari 20 untuk yang datanya yang tersedia) tetapi tidak di kepala dan leher wilayah, dan tidak sebelumnya telah diobati dengan radiother- APY. Tak satu pun dari kontrol diperlakukan dengan radioterapi atau memiliki sebelumnya kanker kepala dan leher. Dalam 17 (85%) pasien, tumor terletak di lidah (mobile) oral (kanker mulut; 13 di bagian anterior / menengah dan 4 tumor terletak posterior lateral), sedangkan pada 3 (15%) penderita tumor adalah terletak di dasar lidah (kanker orofaringeal). Pada 26% dari pasien (5 dari 19 yang tersedia), tumor melampaui yang bahasa daerah dan diperluas secara lokal terhadap tetangga daerah, sebagai dasar mulut.

Saliva tumor marker Individu analisis. Tumor marker analisis saliva adalah tersedia dalam 14 pasien kanker dan 16 kontrol sehat. Itu saliva konsentrasi pada pasien kontrol sehat dari CA125, TPS, CYFRA 21-1, CA19-9, CEA, dan SCC adalah 384 unit / mL, 110 unit / L, 3,44 ng / mL, 27,1 unit / mL, 197,6 ng / mL, dan 140 ng / mL, masing-masing (Gambar 1-4). The ludah konsentrasi dari semua enam penanda tumor lebih tinggi pada pasien kanker dibandingkan dengan kontrol. The ludah tingkat pada pasien kanker dari CA125, TPS, CYFRA 21-1, CA19-9, CEA, dan SCC lebih tinggi sebesar 4,2 (P = 0,0041), 3,9 (P = 0,0026), 3,8 (P = 0,0126), 2,9 (tidak signifikan), 1,6 (tidak signifikan), dan 1,4 (tidak signifikan) kali, masing-masing, dibandingkan dengan kontrol (Gambar 1-4). Accord- ing dengan analisis matriks korelasi dilakukan, cross-berbicara di antara beberapa tanda tersebut saliva tercatat (yaitu, simultan peningkatan penanda yang berbeda pada pasien yang sama). Tingkat korelasi untuk CYFRA 21-1 dan CA125 adalah 0,60 dan untuk CYFRA 21-1 dan TPS itu 0,90, sedangkan tingkat korelasi untuk CYFRA 21-1 dan CEA adalah 0,48 dan untuk CYFRA 21-1 dan SCC itu 0,45. Tingkat korelasi untuk TPS dan CEA adalah 0,70 dan untuk TPS dan CA125 itu 0,50. Concurrent analisis. Tiga tumor marker ludah yang ditemukan untuk menjadi yang paling substansial dan secara signifikan meningkat pada pasien kanker adalah CYFRA 21-1, TPS, dan CA125, yang semuanya meningkat F400%. Oleh karena itu, kami melakukan analisis di yang semua pasien yang salah satu dari tiga tanda adalah tingkat cutoff yang sama atau di atas didefinisikan sebagai pasien dengan penyakit dan sebaliknya (^ penyakit, CA125 z 1.823 dan / atau CYFRA z 8.7 dan / atau TPS z 253, ^ ada penyakit, CA125 <1.823 dan CYFRA <8,7 dan TPS <253). Kami menggunakan analisis untuk menentukan nilai prediktif berbagai dan menemukan nilai-nilai berikut: (a) sensitivitas faktor [(10/14) 100 = 71%], (b) spesifisitas faktor [(12/16) 100 = 75%], (c) nilai prediksi positif [(10 / 14) 100 =

71%], (d) nilai prediksi negatif [(12/16) 100 = 75%], (e) negatif palsu nilai [(14/4) 100 = 28%],dan (f) positif palsu value [(4/16) 100 = 25%].

Survival dan DFS Kumulatif hidup. Tingkat kumulatif kelangsungan hidup semua pasien (n = 21) baik di 24 dan 36 bulan (2 dan 3 tahun) adalah 67%. Tingkat kumulatif kelangsungan hidup semua pasien (n = 21) di 42 bulan (3,5 tahun) adalah 67% (Gambar 5). Kumulatif DFS bertahan hidup. Tingkat DFS kumulatif dari semua pasien (n = 21) pada bulan kedua 24 dan 36 (2 dan 3 tahun) adalah 63%. Tingkat DFS kumulatif dari semua pasien (n = 21) di 42 bulan (3,5 tahun) adalah 52% (Gambar 5). Kumulatif DFS oleh kelas. Tingkat DFS kumulatif (75%) pasien dengan grade 1 di 42 bulan lebih tinggi dibandingkan pasien dengan kelas 2 (43%). Yang terakhir pada gilirannya lebih tinggi dari pada pasien dengan grade 3 (0%). Perbedaan ini signifikan (P = 0,05, Tabel 1). Kumulatif DFS oleh panggung. Tingkat DFS kumulatif (78%) dari pasien dengan stadium I dan II pada 42 bulan secara signifikan lebih tinggi dibandingkan pada pasien dengan stadium III dan IV (17%, P = 0,01; Tabel 2 dan 3). Kumulatif DFS oleh N. Tingkat DFS kumulatif (73%) dari pasien dengan N = 0 di 42 bulan lebih tinggi dari pada pasien dengan N = 1 (25%). Perbedaan ini tidak mencapai statistik signifikansi (P = 0,14). Kumulatif DFS oleh situs. Tingkat DFS kumulatif (55%) dari pasien dengan tumor dasar lidah (n = 3) di 42 bulan adalah lebih tinggi dibandingkan pada pasien dengan tumor lidah seluler (33%; n = 18). Perbedaan ini tidak bermakna secara statistik (P = 0,25). Kumulatif DFS oleh kedalaman. Tingkat DFS kumulatif (75%) pasien dengan kedalaman V5 mm lebih tinggi dibandingkan pada pasien dengan kedalaman> 5 mm (23%). Perbedaan ini tidak mencapai statistik signifikansi (P = 0,13). Kumulatif DFS oleh diameter. Tingkat DFS kumulatif pasien dengan diameter <2 cm pada 42 bulan ditemukan lebih tinggi dibandingkan pada pasien dengan diameter z2 cm (33%). Perbedaan ini tidak bermakna secara statistik (P = 0,12). Kumulatif DFS berdasarkan jenis kelamin, usia, merokok, keganasan lain, extensiveness, atau spidol saliva. The Tingkat DFS kumulatif (72%) dari pasien wanita pada 42 bulan ditemukan secara signifikan lebih tinggi dibandingkan pasien laki-laki (23%, P = 0,04). Tidak ada korelasi signifikan yang ditemukan antara cumula- tive DFS nilai dan salah satu dari variabel-variabel berikut: umur, kebiasaan merokok, keganasan lain, atau perpanjangan tumor melampaui margin lingual. Korelasi positif tidak ditemukan antara DFS kumulatif dan salah satu terukur saliva penanda tingkat.

Diskusi Hasil yang paling penting yang ditemukan adalah bahwa beberapa saliva penanda tumor ditemukan secara signifikan meningkat (oleh 400%) dalam air liur mulut (lidah) pasien kanker. Yaitu penting sehubungan dengan baik klinis-dan-patogenesis terkait aspek kanker mulut, dan berbagai karakteristik ini menunjukkan kanker yang, memang, sebuah kelompok perwakilan lidah pasien kanker dianalisis dalam penelitian ini. Kedua total dan probabilitas DFS kelangsungan hidup yang ditemukan mirip dengan yang ditemukan dalam penelitian lain, seperti prediksi penting peran yang pementasan tumor, grading, N, dan kedalaman nilai

memiliki (6, 32). Fakta bahwa hanya sebagian kecil dari pasien perokok dan bahwa sebagian besar dari mereka didiagnosis pada tahap awal adalah khas seri lidah kanker sebelumnya Israel (32). Peningkatan, ditunjukkan dalam penanda tumor ludah kanker pasien, dapat digunakan sebagai alat diagnostik terutama ketika Analisis bersamaan dilakukan untuk penanda saliva beberapa. Bahwa menunjukkan bahwa alat diagnostik baru adalah penting khusus untuk pemantauan pasien, seperti yang sering sangat sulit untuk membedakan klinis antara pasca operasi dan / atau iradiasi lisan bekas luka mukosa dan lesi kanker berulang. Dengan demikian, seperti Analisis mungkin berubah menjadi alat diagnostik yang berharga karena mungkin menyimpan biopsi yang tidak perlu banyak dan rumah sakit / rawat jalan klinis kunjungan. Tiga dari penanda dianalisis (CYFRA 21-1, TPS, dan CA125) meningkat secara signifikan (sebesar 400%, PV 0,01), sedangkan peningkatan tiga lainnya tidak mencapai statistik signifikansi, mungkin dihasilkan dari variasi yang relatif besar peningkatan dalam penanda tumor saliva. Seperti variasi mungkin menjelaskan mengapa peningkatan ditemukan di CEA ludah (160%) tidak mencapai signifikansi statistik, peningkatan yang mirip dengan yang ditemukan oleh Negri et al, yang melaporkan dari 145%. peningkatan tingkat CEA saliva pada pasien OSCC (25, 33, 34). Hal ini juga penting untuk dicatat bahwa efek meningkatnya dikenal bahwa merokok telah pada tingkat CEA tidak bisa menjelaskan perbedaan antara pasien kanker dan kontrol, sebagai jumlah perokok di antara kedua kelompok adalah serupa. Kita lebih ditingkatkan nilai analisis saliva dengan melakukan gabungan analisis penanda berbagai seperti sebelumnya disarankan untuk penanda sirkulasi (22, 23). Memang, hal itu menunjukkan bahwa, ketika analisis bersamaan dari tiga meningkat secara signifikan spidol dilakukan, sensitivitas, spesifisitas, dan negatif dan nilai prediksi positif berada di kisaran 72% to75%, sebanding dengan yang diperoleh pada saat penanda peredaran darah adalah diukur dalam serum pasien OSCC. Singkatnya, peningkatan yang signifikan dalam tumor saliva spidol (f4-kali lipat) adalah mendorong dalam terang dari banyak keuntungan pengukuran saliva dibandingkan dengan serum analisis. Diagnosis definitif OSCC jelas didasarkan pada biopsi panen, tetapi akan sangat diinginkan dan menguntungkan jika analisis penanda tumor saliva dapat dilakukan pada rutin dasar antara biopsi. Peningkatan tumor saliva spidol dapat digunakan sebagai alat diagnostik, terutama ketika Analisis bersamaan untuk penanda meningkat secara signifikan dilakukan. Itu karena panen saliva adalah noninvasif (35), yang dapat membuat alternatif, menarik efektif untuk pengujian serum, dan kemungkinan kit rumah mengembangkan pengujian untuk seperti spidol lebih mempermudah sebagai alat bantu diagnostik, memungkinkan pasien untuk memantau kesehatan mereka sendiri di rumah. Itu terutama penting bagi orang yang tinggal jauh dari pusat-pusat pengobatan dan terutama bagi mereka yang berisiko tinggi untuk mengembangkan kanker mulut (seperti sebagai pasien dengan OSCC sebelumnya atau dengan lesi prakanker). Namun, hati-hati harus diambil dan catatan terbuat dari fakta bahwa analisis saliva disarankan dapat dianggap sebagai bantuan dan bukan sebagai pengganti lainnya mapan diagnostik tersedia untuk OSCC alat