CROMATOGRAFA Definicin Principios bsicos

Flujo de fase mvil

Definicin
Tcnica que permite separar los componentes de una muestra debido a su diferente afinidad entre dos fases inmiscibles entre s, una estacionaria (liquida o slida) y otra mvil (gas o lquida)

to

A B
t1

A
t2

COMPORTAMIENTO CROMATOGRFICO DE LOS COMPUESTOS

El comportamiento cromatogrfico de un componente de una muestra puede describirse de diversas formas: VR Volumen de retencin Volmen de fase mvil necesario para transportar la banda de un componente desde el punto de inyeccin, a travs de la columna, hasta el detector (en el mximo de pico del componente).
tR tiempo de retencin

Tiempo necesario para que el componente, una vez inyectado pase a travs de la columna y alcance el detector (en el mximo de pico del componente).
k razn de reparto

Es una medida del tiempo que el componente est en la fase estacionaria en relacin con el tiempo que est en la fase mvil

VOLUMENES DE RETENCIN
A fin de considerar los efectos de la presin y temperatura en cromatografa de gases a menudo es til utilizad los volmenes de retencin en lugar de los tiempos de retencin. Vr = tR F Donde tR es el tiempo de retencin y F es la tasa de flujo masico
donde F = F = Fm x* Ts/T * (P-PH2O)/P

Donde Ts es la temperatura de la columna en K y P es la presin del gas en la salida de la columna, por lo general P y T son la presin y temperatura del medio ambiente, F = tasa de flujo promedio y Fm = Tasa de flujo medido.

Seal
to

k razn de reparto tR tM VR - V M k= = tM VM Donde tM es el tiempo de retencin de un compuesto que no interaccionara con la fase estacionaria y tR es el tiempo de retencin del compuesto de inters. Lo mismo se puede expresar en relacin con Los volmenes de retencin.

tB

tA tiempo

El objetivo de la cromatografa es doble: Separar los distintos componentes de la muestra Identificar los componentes previamente separados

Separar los distintos componentes de la muestra Selectividad y eficiencia

Buena selectividad Eficiencia baja

Baja selectividad Buena eficiencia

Buena selectividad Buena eficiencia

CROMATOGRAFA DE GASES
Es la tcnica a elegir para la separacin de compuestos orgnicos e inorgnicos trmicamente estables y voltiles

Un cromatgrafo de gases consiste en el acoplamiento de varios mdulos bsicos ensamblados para: Proporcionar un flujo constante de gas portador Permitir la introduccin de vapores de la muestra en la corriente de gas que fluye Contener la longitud apropiada de fase estacionaria Mantener la columna a la temperatura apropiada (o la secuencia del programa de temperatura) Detectar los componentes de la muestra a medida que eluyen de la columna Proveer una seal legible proporcional en magnitud a la cantidad de cada coomponente

INYECCIN DE LA MUESTRA
Inyeccin de muestra

Fase estacionaria

Flujo de la corriente
Muy soluble / tiende a adsorberse a la fase estacionaria Poco soluble / tiende a ser eluida por la fase mvil

PUERTOS DE INYECCIN
Inyector de split / splitless Inyeccin con divisin Se utiliza cuando los analitos que interesan constituyen el 1 % de la muestra en la columna cromatogrfica. La temperatura del inyector se mantiene alta para facilitar una evaporacin rpida. El flujo del gas portador arrastra la muestra a la cmara de mezcla, donde se realiza una completa evaporacin y homogenizacin. Al pasar por el capilar se produce la divisin y slo pasa a la columna el 1 % de la mezcla, el resto se ventea.

Jeringa Septo 102 ml/min 1 ml/min Purga del septo

Salida de la divisin Columna 1 ml/min

100 ml/min

INYECCIN SIN DIVISIN

Es apropiada para analizar trazas del analito que constituyen menos del 0.01% de una muestra de alto punto de ebullicin, en disolventes de bajo punto de ebullicin. Se inyecta dentro de la gua, en un volumen de 2 microlitros de disolucin diluido en disolventes de bajo punto de ebullicin. La temperatura del inyector en la inyeccin debe ser menor 220C.

INYECCIN EN COLUMNA.
Se usa con muestras que se descomponen por encima de su punto de ebullicin. La disolucin se inyecta directamente en la columna, sin pasar por un inyector caliente.

La temperatura inicial de la columna es suficientemente baja para que condensen los solutos en una banda estrecha.
Para una mejor inyeccin en columna se usan jeringas de 0.25 a 0.32 mm de dimetro.

SISTEMA DE INYECCIN
El modo estndar es la inyeccin directa, la muestra es inyectada con una jeringa a travs de un septum de goma a un alineador de vidrio donde es vaporizada y transportada por el gas al interior de la columna.
El bloque de inyeccin, se mantiene a una temperatura tal que permita convertir prcticamente de forma instantnea la muestra lquida en un tapn de vapor. Existen jeringas especiales para muestras gaseosas. Tambin se puede emplear un lazo o bucle para incoporar las muestras gaseosas al flujo de gas portador

SISTEMA DE INYECCIN
El modo de separacin ms extendido en la actualidad se basa en el empleo de columnas capilares. Estas columnas requieren muy pequeos volmenes de muestra.

Esto se logra empleando un inyector que incorpora un divisor de flujo (split). Normalmente se introduce en la columna un 1% Cuando las sustancias a separar se encuentran a muy bajas concentraciones se realiza inyeccin sin divisor (splitless)

ESPACIO DE CABEZA (HEAD SPACE)

Se analiza la fase de vapor en equilibrio termodinmico con la muestra en un sistema cerrado. Para ello se procura un equilibrio estable, mediante el control de la temperatura del vial que contiene la muestra. Posteriormente, se arrastra la fase vapor al interior del cromatgrafo.
T equilibrio Gas portador A la columna

PURGA Y TRAMPA (PURGE AND TRAP)

Es aplicable solo a muestras lquidas. Consiste en la continua renovacin del gas en equilibrio con la muestra, con lo que se consigue el desplazamiento dinmico de los compuestos voltiles de la muestra lquida a la fase gaseosa. Los vapores se arrastran a una trampa donde quedan retenidos y se van concentrando. Finalizado el proceso se calienta la trampa y se arrastran los vapores al interior del cromatgrafo.
1) Gas portador trampa T baja

2) Gas portador
trampa T alta A la columna

COLUMNAS CROMATOGRFICAS

Columnas capilares

Columnas Empacadas

COLUMNAS CROMATOGRFICAS EMPACADAS

Se construyen con tubo de acero inoxidable, niquel o vidrio. Los dimetros interiores van de 1,6 a 9 mm. La longitud suele ser inferior a los 3 m. Se rellenan de un material adsorbente adecuado a las sustancias que se quiere separar.

COLUMNAS CROMATOGRFICAS CAPILARES

Se construyen con slice fundida. Los dimetros interiores suelen ser de 200-250 mm. La longitud suele ser superior a los 20 m. Hay dos tipos:
Empacadas con partculas slidas ocupando el total del dimetro de la columna (micro-empacadas) Tubulares abiertas, con trayectoria para el flujo abierta y sin restriccin por el centro de la columna

EJEMPLOS DE FASES ESTACIONARIAS EN CROMATOGRAFA DE GASES Separaciones por punto de ebullicin de compuestos en un intervalo amplio de pesos moleculares:
Escualano Polidimetilsiloxano

Para hidrocarburos insaturados y otros compuestos

polidifenildimetilsiloxano policarboranometilcianoetilsilicn

Para compuestos nitrogenados

poliamida policianoetilmetilsilicon

Para alcoholes, steres, cetonas y acetatos

polietilenglicol pentaeritritol tetracianoetilado

HORNO

Las columnas cromatogrficas se enrollan, se sujetan en un soporte y se introducen en el interior de un horno El horno debe poderse calentar y enfriar rpidamente La temperatura se debe poder programar para poder trabajar en rgimen de gradiente

Muchas aplicaciones y mtodos cromatogrficos requieren comenzar a temperaturas por debajo de la ambiental

SISTEMAS DE DETECCIN
Detector de ionizacin de llama (FID)

Este detector aade hidrgeno al eluyente de la columna. La mezcla pasa a travs del conducto de un mechero, donde se mezcla con aire externo y luego arde. Cuando entra en la llama material ionizable del eluyente de la columna Se quema y la corriente aumenta notablemente. Este detector es ideal para compuestos oxidables. No responde a los compuestos de carbono totalmente oxidados, como carbonilos o carboxilos y grupos ster

SISTEMAS DE DETECCIN

Detector de conductividad trmica (TCD)

Utiliza un filamento caliente colocado en el flujo de gas emergente.

La cantidad de calor por conduccin que pierde el filamento hacia las paredes del detector depende de la conductividad trmica de la fase gaseosa. Es til para determinar la presencia incluso de pequeas cantidades de materiales orgnicos que producen una reduccin relativamente grande en la conductividad trmica del eluyente de la columna.

SISTEMAS DE DETECCIN
El eluyente pasa entre dos electrodos. Uno de los electrodos tiene en su superficie un radioistopo que emite electrones de alta energa conforme decae. Los electrones bombardean el gas portador (N2) formndose un plasma que contiene iones positivos, radicales y electrones trmicos. Se aplica una diferencia de potencial de modo que se recolectan los electrones generados. Los compuestos que absorben electrones reaccionan con los electrnes trmicos disminuyendo la corriente del detector, la cual es medida y permite la cuantificacin

Detector de captura de electrones (ECD)

SISTEMAS DE DETECCIN
Los eluyentes son ionizados y Detector de espectroscopa de masas (MS) fragmentados. Los iones resultantes se dirigen a travs de un cuadrupolo y se ordenan en funcin de su masa. Ese detector permite obtener el espectro de masas del compuesto que ha eluido. Podemos por tanto conocer, adems del tiempo de retencin el espectro de masas del compuesto y contrastarlo con bibliotecas de espectros. Se trata por tanto de un detector universal para la mayora de los compuestos conocidos.

CROMATOGRAFA DE GASES