Anti HBc

Antibodi terhadap HBcAg (anti-HBc)

Antibodi ini muncul selama pemulihan dari HBV akut dan pada kedua fase infeksi HBV kronis.

Test Anti HBc

Test Anti HBc adalah suatu test untuk mendeteksi adanya IgM dan IgG antibodi Hepatitis B Antigen (HBc) dan terindikasi sebagai obat Hepatitis B sebelum dan sesudah infeksi. Test Anti Hbc digunakan sebagai uji screening darah untuk mencegah penyebaran Virus Hepatitis B. Anti HBc muncul pada gejala Hepatitis B akut dan yang sedang berlangsung.

Tujuan
Mendeteksi infeksi Hepatitis B yang pernah terjadi Mendeteksi adanya reaksi positif palsu dalam pemeriksaan Mendeteksi kemungkinan adanya infeksi

Orto HBc ELISA Uji Sistem 480 Test Kit

Orto HBc Sistem Uji ELISA adalah assay enzyme-linked immunosorbent kualitatif untuk mendeteksi dari total antibodi terhadap antigen virus hepatitis B core (anti-HBc) dalam serum atau plasma manusia diindikasikan untuk pemutaran darah dan produk darah dimaksudkan untuk transfusi dan sebagai bantuan dalam diagnosis berlangsung atau sebelumnya virus hepatitis B (HBV) infeksi.

 (1,2). Selama fase akut infeksi HBV, anti-HBc muncul tak lama setelah penampilan antigen permukaan hepatitis B (HBsAg) dan tetap mengikuti pembersihan HBsAg (3). Dalam kasus-kasus mana HBsAg telah dibersihkan dan munculnya anti-HBs tertunda, anti-HBc mungkin menjadi satusatunya serologi penanda infeksi HBV baru-baru ini (4). Anti-HBc ditemukan di hampir semua pasien dengan hepatitis B kronis (5). Enzim-linked immunosorbent assay (ELISA) prosedur menyediakan sarana untuk secara rutin mendeteksi antibodi terhadap spesifik antigen (6,7). Metode FDA-berlisensi komersial diperoleh dalam bentuk kit. Literatur dan

Komputerisasi; DATA SISTEM MANAJEMEN Data A. Raw ditranskripsi secara manual dari lembar pembacaan instrumen ke dalam database komputer. Ini Database yang dirancang khusus untuk pengelolaan CDC Hepatitis Reference Laboratory (HRL) uji hasil, dan fungsi dalam perangkat lunak SQL Server (Microsoft, Redmond, WA) dengan Visual Basic (Microsoft, Redmond, WA) user interface. Nilai uji dibandingkan dengan nilai cutoff dihitung dari kontrol. Hasil dinyatakan sebagai "positif" atau "negatif" Informasi lain dalam database mungkin biasanya mencakup nomor identifikasi HRL, jumlah spesimen, tanggal dikumpulkan, tanggal diuji dan hasil pengujian untuk penanda hepatitis lainnya. Pelaporan dilakukan secara langsung dari database di cetak membentuk atau dengan transfer elektronik. Data yang disimpan secara elektronik yang didukung secara rutin. B. Selesai data ditinjau oleh pengawas lab. File C. disimpan pada CDC Area Network (LAN) secara otomatis didukung malam ke tape oleh CDC Data Center staf. D. Dokumentasi untuk pemeliharaan sistem data dipertahankan dengan salinan cetak dari catatan data selama 2 tahun.

Persiapan
A. Instrumentasi (1) Multichannel perangkat aspirator-mesin cuci yang mampu meracik dan aspirating 300: l sampai 800: l per sumur. (2) Dual panjang gelombang microwell mampu membaca pada 490 nm atau 492 nm dengan filter referensi 620 pembaca nm atau 630 nm. Linearitas dari pembaca microwell harus berkisar dari setidaknya 0-2,5 unit absorbansi. Multichannel mikropipet Adjustable mampu memberikan 50 ml dan 200 ml dengan setidaknya akurasi 5% atau dispenser setara reagen. (3) tetap atau disesuaikan mikropipet single-channel mampu mengirimkan 10 ml dengan setidaknya 10% keakuratan atau dilutor sampel setara.

B. Bahan (1) Deionized air (Kontinental Air Systems, Inc, San Antonio, TX). Halaman 5 Antibodi terhadap Virus Antigen Hepatitis B Core di Serum - NHANES 2003-2004 (2) 5: l dan 250: l Tips pipet sekali pakai atau setara. (3) Multichannel mikropipet reservoir atau wadah reagen setara. (4) sarung tangan pelindung, Tronex atau Flexam, kecil / menengah / besar (Manufaktur Terbaik, Menlo Park, GA). (5) 2 mL cryovials, kucing. tidak. 5000-0020 (Nalge Company, Inc, Rochester, NY). (6) kotak Cryovial, kucing. tidak. 5026-0909 (Nalge Company, Inc, Rochester, NY). (7) microtubes mL 1,5 (Marsh Biomedis Produk, Rochester, NY). (8) 50 mL-polypropylene tabung (Corning Glass Works, Corning, NY). (9) orto HBc ELISA Uji Sistem 480 Test Kit (Kode Produk 933.245, Ortho Diagnostik Sistem, Raritan, NJ). (10) 4N asam sulfat (H2SO4) (Kode Produk 933.040, Ortho Diagnostik Sistem, Raritan, NJ). (11) 20X Wash Buffer Konsentrat (Kode Produk 933.730, Ortho Diagnostik Systems, Raritan, NJ). Dapar fosfat dengan natrium klorida dan deterjen. Pengawet: 2% 2-chloroacetamide.

C. Reagen Orto HBc ELISA Uji Sistem 480 Test Kit berisi reagen berikut; disiapkan oleh produsen. Volume yang tercantum adalah untuk 480 tes. (1) Hepatitis B Virus Inti Antigen (HBcAg) (rekombinan)-Coated microwell Pelat 5 Pelat. Setiap lempeng memiliki 8 strip dari 12 sumur di masing-masing pemegang. (2) Antibodi Conjugate (Murine monoklonal) 1 botol (125 ml). Campuran anti-manusia IgG dan IgM anti-manusia konjugasi lobak peroksidase dengan stabilisator protein. Pengawet: thimerosal 0,02%. (3) Spesimen pengencer 1 botol (150 ml). Phosphate-buffered saline dengan stabilisator protein dan deterjen. Pengawet: 0,02% thimerosal. (4) OPD Tablet 30 Tablet. O-phenylenediamine 2HCl. (5) Substrat penyangga 1 botol (190 ml). Sitrat-fosfat buffer dengan hidrogen peroksida 0,02%. Pengawet: 0,01% thimerosal. (6) Positif kontrol (Manusia) 1 vial (1,0 ml). Sumber: Human serum atau plasma yang mengandung anti-HBc dan non-reaktif untuk HBsAg dan antibodi terhadap jenis human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) dan tipe 2 (HIV-2). Pengawet: 0,02% thimerosal. (7) Negatif kontrol (Manusia) 2 botol (1.0 mL masing-masing). Sumber: Human serum non-reaktif untuk anti-HBc, HBsAg dan antibodi untuk manusia jenis immunodeficiency virus 1 (HIV-2) dan tipe 2 (HIV-2). Pengawet: thimerosal 0,02%. (8) sealers pelat 21, pakai. Antibodi terhadap Virus Antigen Hepatitis B Core di Serum - NHANES 2003-2004

Prosedur
Pendahuluan Sebelum awal prosedur, membawa komponen kit ke suhu kamar (15 sampai 300C). Ambil microwell untuk Substrat,kontrol positif,kontrol negatif

Preparasi Sampel Biarkan spesimen serum untuk datang ke 2025EC Pasang strip microwell ke pegangan strip microwell, jika perlu. Strip microwell harus tingkat dalam pegangan strip microwell. Untuk plate lengkap, tambahkan hitam atau dilapisi strip microwell. Siapkan record (peta plate) mengidentifikasi penempatan kontrol dan spesimen di microwells.

 Mengatur sumur uji kontrol sehingga 1A adalah substrat kosong Dari 1A, mengatur semua kontrol dalam konfigurasi horisontal atau vertikal sebagai berikut: Konfigurasi tergantung pada software. 1A Substrat kosong Kontrol Negatif,Kontrol Negatif Kontrol Negatif,Positif Kontrol Positif Kontrol

Operasi AutoWash Ortho Nyalakan AutoWash menggunakan toggle switch di bagian belakang instrumen. Pompa vakum akan datang, seperti yang akan "Power" indikator pada instrumen. Tempatkan pelat microwell pada dukungan plate. Menggunakan keypad pengguna memilih siklus mencuci terprogram untuk Ortho HBc. Tekan tombol Start. Setelah siklus mencuci yang lebih menghapus piring. Mengatur AutoWash Soak. Thermolyne inkubator Menetapkan dan memverifikasi suhu inkubator di 37C. Operasi dari Ortho AutoReader II

Setelah siklus mencuci yang lebih menghapus plate. Mengatur AutoWash Soak. Thermolyne inkubator Menetapkan dan memverifikasi suhu inkubator di 37C. Operasi dari Ortho AutoReader II Setelah reaksi akhir ini telah dihentikan, menempatkan pelat microwell pada pelat operator. Menggunakan keyboard komputer pilih uji Sanguin diprogram untuk mengontrol pembacaan pelat microwell dengan AutoReader II dengan menggunakan tombol kursor untuk memilih Hasilkan. Pilih PLATE diikuti oleh Hasilkan / EDIT PLATE A dan tekan tombol ENTER. Dari kolom Assay memilih HCV 3.0 dan masukkan nomor plat dan tekan ENTER

 Dari keyboard komputer memasukkan informasi tentang kontrol dan uji sampel ID angka ke posisi yang tepat pada template microwell pada layar komputer dan tekan AKHIR Pilih KEMBALI KE MENU MASTER. Pergi ke MENU MASTER dan pilih BACA PLATE A. The AutoReader Ortho otomatis akan membaca piring, dan mencetak nilai absorbansi untuk masing-masing baik ke printer. Dari keyboard komputer memasukkan informasi tentang kontrol dan uji sampel ID angka ke posisi yang tepat pada template microwell pada layar komputer dan tekan AKHIR Pilih KEMBALI KE MENU MASTER. Pergi ke MENU MASTER dan pilih BACA PLATE A. The AutoReader Ortho otomatis akan membaca piring, dan mencetak nilai absorbansi untuk masing-masing baik ke printer.

 Operasi Prosedur Assay Pipet 200: L pengencer Spesimen untuk semua microwell dari pelat mikrotiter kecuali 1A. Pipet 10: L kontrol atau sampel serum ke dalam well yang sesuai. Terapkan menutupi segel. Menetaskan pada 37oC 1oC selama 1 jam 5 menit. Tempatkan plat mikrotiter pada AutoWash dan mencuci semua well lima kali dengan Buffer Wash (1X). Tambahkan 200: L Antibodi Conjugate untuk semua sumur kecuali 1A. Terapkan segel penutup. Menetaskan pada 37oC 1oC selama 1 jam 5 menit. Siapkan Solusi Substrat yang cukup untuk mengisi kontrol dan uji well. Luangkan waktu untuk tablet OPD untuk membubarkan sepenuhnya.

 Tempat lempeng mikro di AutoWash dan mencuci semua well lima kali dengan Buffer Wash (1X). Tambahkan 200: L Solusi Substrat untuk semua sumur, termasuk 1A. Terapkan menutupi segel. Menetaskan pada suhu kamar selama 30 menit 1 menit dalam gelap. Tambahkan 50: L asam sulfat 4N (H2SO4) Untuk semua well, termasuk 1A. Baca reaksi pada 492 nm dalam spektrofotometer AutoReader Ortho II. sampel positif Retest dalam rangkap menggunakan prosedur ini.

 Perhitungan (1) Perhitungan cutoff dilakukan oleh instrumen membaca dan oleh perangkat lunak manajemen data yang menggunakan rumus berikut: Cutoff = NC_x + 0,400 (2) Hitung rata-rata absorbansi kontrol negatif (NC_x) dengan menentukan mean dari negatif kontrol.

Interpretasi
Ada atau tidak adanya anti-HBc ditentukan dengan membandingkan nilai absorbansi sampel dengan nilai cutoff. Ini nilai cutoff dihitung dari negatif dan positif absorbansi nilai kontrol. Spesimen dengan absorbansi lebih besar atau sama dengan nilai cutoff dianggap reaktif untuk anti-HBc. nilai kontrol negatif harus memenuhi kriteria penerimaan sebagai berikut: Kurang dari atau sama dengan 0,350, dan lebih besar dari atau sama dengan -0,005. Jika salah satu dari 3 nilai kontrol negatif di luar salah satu dari batas-batas ini, menghitung ulang negatif kontrol berarti didasarkan pada dua nilai lain yang dapat diterima. . Plate tidak valid dan jalankan harus diulang jika dua atau lebih dari nilai kontrol berada di luar batas. Individu nilai kontrol positif harus memenuhi kriteria penerimaan sebagai berikut: lebih besar dari atau sama dengan 0,800 dalam rentang linier microwell reader tidak boleh berbeda lebih dari 0.500 Presisi dari prosedur ini adalah sebagai diklaim untuk lisensi dan dipertahankan oleh produsen di bawah kewenangan FDA. Metode ini menghasilkan koefisien variasi (CV) dari 5-10% dalam berjalan dan 8-15% antara berjalan di HRL