PRCTICA NO.

3 PREPARACION DE FROTIS Y FIJACION OBJETIVO: Comprender y aplicar la utilizacin de un frotis y de la fijacin como la principal herramienta del estudio citolgico bacteriano. INTRODUCCION: Existen tcnicas y procedimientos para todos los estudios citolgicos uno de los ms importantes es la tcnica de la preparacin de clulas para ser observadas. FROTIS: Antes de efectuar una coloracin es necesario realizar un extendido o frotis sobre la superficie de un portaobjetos, de modo que se obtenga una pelcula homognea. Dependiendo de tipo de muestra se debe hacer diferentes tipos de extensiones: -Producto lquido. -Cultivo en medio slido. -Sangre y rganos. SECADO: Se hace un secado por si solo del frotis. Se puede acelerar la desecacin calentando con un mechero Bunsen, pero sin calentar jams brutalmente. FIJACION: Tiene como finalidad que las bacterias queden adheridas al vidrio de manera que los sucesivos lavados realizados durante la coloracin no arrastren los grmenes. Se debe procurar, adems, que este proceso altere lo menos posible la morfologa microbiana. Existen dos mtodos: -Fsico o mtodo de Koch (calor). -Qumico (metanol). Aunque existen otros mtodos de fijacin los mencionados anteriormente son los ms utilizados en Microbiologa. MATERIAL: 1 Bolsa Roja 1 Contenedor Rojo Medios de Cultivos ya Preparados 2 Asas de Siembra Mechero Rejilla de Asbesto Soporte Universal Gotero 2 Cajas de Petri

1 Abate lenguas Portaobjetos Cubreobjetos Agar Alcohol Etlico Alcohol de 95 % Azul de Metileno Cubre bocas Guantes

DESARROLLO DE LA PRCTICA 1. Lavar 2 portaobjetos y 2 cubreobjetos con agua y jabn y luego enjuagarlos con varias gotas de alcohol de 95%. Se dejan secar (no con aire) -Con el asa previamente esterilizada se toma una pequea cantidad de la muestra a examinar. -Se coloca la muestra sobre el portaobjetos y se homogeniza con la gota de agua destilada estril. -Se toma el portaobjetos entre el dedo pulgar y el ndice, y se extiende la gota en el sentido de eje mayor, sin llegar a ninguno de los cuatro bordes, hasta obtener una pelcula uniforme. -Se deja que el portaobjetos se seque al aire o se mantiene a 40 cm., de la llama de mechero (SECADO). -Se fijaran las bacterias de la siguiente manera_ a) Portaobjetos No. 1 (Koch). Pasar lentamente tres veces sobre la llama del mechero. Dejar enfriar entre los pasos. b) Portaobjetos No. 2 (Qumico). Cubrir el extendido con alcohol etlico, dejarlo en contacto por 5 minutos, eliminar el excedente. -Una vez fijado el extendido cubrir la superficie con la solucin colorante (colorante simple). Dejar actuar durante 2 minutos. -Lavar los preparados con abundante agua para eliminar el exceso de colorante. -Dejar secar al aire. -Observar el preparado con objetivo 40x y 100x. EVALUACION Entregar reporte de la prctica especificando los siguientes puntos: -Determinar que microorganismos se observan. -Definir cul preparacin resulto mejor para la observacin. -Hacer dibujos de material observado. -Hacer cultivos con agar para cultivos de bacterias. BIBLIOGRAFIA -Daguet y colaboradores. Tcnicas de Bacteriologa. Examen de Laboratorio. Editorial Jims, Mxico 1990. -Negrori, Microbiologa Estomatologica. Fundamentos y gua practica. Editorial Panamericana, Mxico 1996. -Bailey, Scout. Diagnostico Microbiologico Editorial Panamericana, Mxico 1992.

PRACTICA NO. 4 MORFOLOGIA BACTERIANA

OBJETIVO: Diferenciar las formas elementales de las bacterias y otros microorganismos.

INTRODUCCION BACTERIAS La forma y la manera de agruparse son caractersticas de las bacterias que ayudan para su identificacin dado al tamao tan pequeo y la relativa sencillez de las bacterias, no son muchas las formas y las agrupaciones, son el punto de partida para la identificacin plena o aproximada de las especies bacterianas. Las bacterias se diferencian en tres formas que son fundamentales: las esfricas denominadas cocos, las cilndricas o bastoncillo llamados bacilos y las que tienen forma ondulada o espiral denominadas espirilos. Los cocos no siempre son completamente redondos, algunos son lanceolados o bien arrionados; pero de todos modos se consideran cocos. Si forman cadenas se denominan estreptococos. Si se agrupan en parejas son llamados diplococos. De estos hay una variante: si el par de individuos semeja las cabezas de un tornillo o un grano de caf se trata de niserias. Si se tienen los extremos semejando la punta de una lanza se les denomina neumococos. Los bacilos tambin muestran algunas variantes, pero siempre se caracterizan por tener uno de sus dimetros ms largos. Estos presentan diferencias, segn la especie de que se trate sus extremos pueden ser: redondeados, rectos, puntiagudos, abultados e irregulares. Las bacterias curvas varan desde microorganismo pequeos, en forma de coma o ligeramente helicoidales con una curva, hasta largas forman espiroquetales que presentan muchas espiras. MATERIAL: Laminillas de diferentes formas de bacterias: (una para cada alumno). Streptococcus sp Bacillus sp Lactobacillus Espiroquetas

Microscopio Aceite de inmersion

DESARROLLO DE LA PRACTICA Observar en el microscopio. Elaborar los dibujos utilizando los objetivos de 10x, 40x, 100x.

EVALUACION Observacin de las laminillas (dibujos). Presentacin de reporte.

BIBLIOGRAFIA Murray P. R., Kobayashi G. S., Rosenthal K.S Microbiologia Medica 2. Ed. Harcourt brace, 1997

Romero C. Microbiologia y Parasitologia Humana. 2. Ed. Mdica Panamericana, Mxico 1999

Ross Philip, W. Microbiologa Bucal y Clnica Ed. Cientfica PLM, Mxico 1985