Informe Final DE Investigación

INFORME FINAL
DE
INVESTIGACIÓN.
Determinación de la Dosis Efectiva Media (De50)

del Suero Antiofídico Antielapídico (Anticoral)
de Laboratorios Probiol Ltda.
frente al veneno de 5 especies de serpientes
del género Micrurus sp. y la mezcla de estos.
Héctor Charry Restrepo.

Biólogo – Herpetólogo.
Director Científico del Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica
“Ophidia”
Manizales (Caldas) 21 de agosto de 2006

Determinación de la Dosis Efectiva Media del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.
Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica “Ophidia”. Informe final de Investigación.
Contenido.
1. INTRODUCCION.
1.1 Presentación. 5
1.2 Advertencia de confidencialidad y propiedad del informe. 6
1.3 Objetivos generales del estudio. 6
1.4 Justificación. 6
1.5 Definiciones. 7
1.5.1 Dosis Efectiva Media (De50). 7
1.5.1.1 Términos similares. Diferenciación. 7
1.5.1.2 El modelo biológico. 7
1.5.2 Accidente elapídico. 8

1.5.2.1 La subfamilia Elapinae. 8
1.5.3 Accidente micrúrico. 9

1.5.3.1 Definición. 9
1.5.3.2 Incidencia. 9
1.5.3.3 Diversidad de especies. 9
1.5.3.4 Características generales de las serpientes del género Micrurus. 10
1.5.3.5 Los venenos micrúricos. 13
1.5.3.6 Especies de interés médico. 13
1.5.4 Suero Antiofídico Antielapídico Antimicrúrico. 15
1.6 Cantidad de pruebas realizadas. 15
2. MATERIALES Y METODOS.
2.1 Dosis Efectiva media (De50). 17

2.2 Verificación y repetibilidad de las pruebas. 17
2.3 Materiales utilizados para la realización de las pruebas. 17
2.3.1 Venenos de serpientes del género Micrurus. 17

2.3.1.1 Tipos de venenos utilizados. 17
2.3.1.2 Cantidad de veneno utilizada. 18
2.3.1.3 Obtención legal de los venenos. 18
2.3.1.4 Método utilizado para la obtención de los venenos. 18
2.3.1.5 Tratamiento de los venenos. 18
2.3.1.6 Edad de los venenos. 18
2.3.2 Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda. 18
2
2.3.2.1 Identificación de los Sueros Antiofídicos utilizados para las pruebas. 19
2.3.3 Solución Salina Normal. 19

2.3.4 Jeringas. 19
2.3.5 Ratones blancos de laboratorio. 19

2.3.5.1 Especie. 19
2.3.5.2 Cantidad y procedencia. 19
2.3.5.3 Estado de salud, peso y sexo. 20
2.3.5.4 Condiciones de mantenimiento. 20
2.3.5.5 Disposición final. 20
2.3.5.6 Comité de ética. 20
2.4 Métodos utilizados para la realización de las pruebas (procedimientos). 21

2.4.1 Método general y Protocolo utilizado. 21
2.4.2 Preparación de cada ampolla de Suero Antiofídico Anticoral liofilizado. 22
2.4.2.1 Comentario. 22
2.4.3 Preparación de la Solución madre. 23
2.4.4 Preparación de la Solución madre de las pruebas 11 y 12 (para la
determinación de la De50 de la mezcla de los venenos utilizados). 23
2.4.5 Fórmula de cada experimento. 23
2.4.6 Incubación de la fórmula. 24
2.4.7 Inoculación a los animales de experimentación (modelo biológico). 24
2.4.8 Observación y lectura. 24
2.4.9 Disposición final de los materiales y desechos. 24
3. RESULTADOS Y HALLAZGOS.
3.1 Información general. 25
3.2 Tabla de resultados de la De50 del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios

Probiol Ltda. frente al veneno de la especie Micrurus mipartitus. 25A

Probiol Ltda. frente al veneno de la especie Micrurus dumerilii. 25B

Probiol Ltda. frente al veneno de la especie Micrurus surinamensis. 25C

Probiol Ltda. frente al veneno de la especie Micrurus spixii obscurus. 25D

Probiol Ltda. frente al veneno de la especie Micrurus spyches medemii. 25E
3

Probiol Ltda. frente al veneno de la especie Micrurus spp. (mezcla de todos los
anteriores. 25F
4. CONCLUSIONES. 26
5. BIBLIOGRAFÍA. 28
_________________________________________________
INDICE DE TABLAS.
Tabla 1: Número de pruebas, venenos probados y experimentos realizados. P 16

Tabla 2: Tiempo de dilución del Suero Antiofídico Anticoral liofilizado. P 22
Tabla 3: Fórmula de la solución madre de las pruebas 11 y 12. P 24
Tabla 4: Dosis Efectiva media de los venenos estudiados. P 26
__________________________________________________
INDICE DE FIGURAS.
Fig. 1. Detalle de la cabeza de Micrurus sp. P 10

Fig. 2. Detalle de la cabeza de Micrurus sp. P 10
Fig. 3. Craneo de Micrurus mipartitus. Dentición proteroglifa. P 10
Fig. 4. Escutelación cefálica de Micrurus sp. Vista lateral. P 11
Fig. 5. Escutelación cefálica de Micrurus sp. Vista dorsal. P 11
Fig. 6. Escutelación cefálica de Micrurus sp. Vista ventral. P 12
Fig. 7. Región caudal de Micrurus sp. P. 12
Fig. 8. Micrurus mipartitus. P 13
Fig. 9. Micrurus dumerilii. P 14
Fig. 10. Micrurus psyches medemii. P 14
Fig. 11. Micrurus spixii obscurus. P 14
Fig. 12. Micrurus surinamensis. P 15
Fig. 13. Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral. P 16
_____________________________________________________
4
1.
Introducción.
1.1 Presentación.
Los accidentes ofídicos causados por serpientes del género Micrurus constituyen
en nuestro país un riesgo potencial para la población rural y urbana de las zonas
de clima cálido y medio; si bien no son demasiado numerosos desde el punto de
vista estadístico, los accidentes causados por corales tienen la característica de
que revisten especial gravedad y en muchas ocasiones resultan mortales, razón
por la cual se hace indispensable poder contar con un antídoto adecuado, eficaz y
específicamente elaborado para neutralizar el veneno de las especies de
serpientes de coral presentes en nuestro territorio; ese antiveneno para poder
tratar este tipo de accidentes con seguridad y efectividad existe en Colombia
desde hace muchos años, es el Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral
elaborado por Laboratorios Probiol Ltda.
Desde el año 1988, Laboratorios Probiol Ltda. ha estado fabricando el único suero
anticoral disponible en Colombia y hecho específicamente para Colombia, fruto de
una paciente, constante y profunda investigación iniciada por el doctor Cesar
Gómez Villegas (q.e.p.d.), fundador del Laboratorio, y continuada cuidadosamente
por sus sucesores.
El Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral (suero Antimicrúrico) elaborado por

Laboratorios Probiol ha probado en numerosas ocasiones que es un eficaz
antiofídico polivalente anticoral, capaz de neutralizar adecuadamente los venenos
de las diversas especies de corales venenosas presentes en el país, prueba de
ello son las cientos de vidas que ha salvado, no solamente en Colombia, sino
también en los países vecinos. Muchos casos bien documentados lo atestiguan y
confirman.
A pesar del importante acervo probatorio de la indiscutible eficacia de este

producto y de su vital necesidad en un país tropical y especialmente rico en
biodiversidad como es Colombia, recientemente las autoridades sanitarias del
país, a través de su órgano de vigilancia de medicamentos, han puesto en duda la
condición de “Polivalente” del suero antiofídico anticoral, así como su grado o nivel
de potencia neutralizante frente a los venenos de las más importantes especies de
serpientes de coral colombianas; por esta razón, Laboratorios Probiol Ltda.
queriendo tener el concepto científico, riguroso e imparcial de un tercero experto
conocedor del tema, ha contratado con el Centro de Investigación y Asesoría
Ofidiológica “Ophidia” la elaboración de un estudio que determine la potencia
neutralizante de su producto Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral, y que
además confirme o niegue la condición de Polivalente del mencionado producto.
5
El presente documento es el informe final de dicho estudio y contiene los

resultados, conclusiones y hallazgos de la investigación llevada a cabo por el
Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica “Ophidia” a pedido de Laboratorios
Probiol Ltda.
1.2 Advertencia de Confidencialidad y Propiedad del Informe.

El presente documento es de carácter privado y confidencial y pertenece de
manera exclusiva a Laboratorios Probiol Ltda. empresa que lo solicitó y contrató, y
por lo mismo es su propietario. Este informe solo podrá ser publicado, dado a
conocer o utilizado por Laboratorios Probiol Ltda; el Centro de Investigación y
Asesoría Ofidiológica “Ophidia” comparte la propiedad intelectual de este informe
por ser de su autoría, pero el derecho y la prioridad de liberación y primera
publicación es de Probiol. El Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica
“Ophidia” se compromete a no publicar ni dar a conocer parte alguna del presente
informe sin la expresa autorización de Laboratorios Probiol Ltda.
1.3 Objetivos generales del estudio.

a. Determinar la Dosis Efectiva Media (De50), es decir, la capacidad o potencia
neutralizante efectiva media del Suero Antiofídico Altielapídico Anticoral fabricado
por Laboratorios Probiol Ltda. para neutralizar los venenos de las siguientes 5
especies de serpientes del género Micrurus:
Micrurus surinamnesis s.
Micrurus spixii obscurus.
Micrurus mipartitus m.
Micrurus dumerilii t.
Micrurus psyches medemi.
b. Además, determinar la Dosis Efectiva Media (De50) del mismo antiveneno frente
a la mezcla homogénea de todos estos venenos, la que se denominará aquí como
Dosis Efectiva Media (De50) de veneno de Micrurus spp.
1.4 Justificación.
El presente estudio se adelantó con el fin de establecer, sustentar, verificar o
confirmar la condición de dicho producto (Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral
de Laboratorios Probiol Ltda.) como antiveneno POLIVALENTE, es decir, que
posee una adecuada capacidad de neutralización contra todos y cada uno de los
venenos de las especies de serpientes antes mencionadas, así como su mezcla.
Todas estas serpientes altamente venenosas forman parte de la herpetofauna
colombiana y de gran parte de Sudamérica; pertenecen a la familia Elapidae
(elápidos), subfamilia Micrurinae (micrurinos) y son comúnmente llamadas “corales
verdaderas”, “corales” o “serpientes de coral”, son conocidas además con los
nombres vulgares de “rabo de ají”, coral “mataganado”, y “coral matagatos”, entre
muchos otros.
6
1.5 Definiciónes.
Consideramos muy importante para efectos de la comprensión del presente
informe definir algunos términos de especial relevancia dentro del mismo; estos
son:
1.5.1 Dosis efectiva media (De50).

1.5.2 Accidente elapídico.
1.5.3 Accidente micrúrico.
1.5.4 Suero Antiofídico Antielapídico Antimicrúrico (Anticoral).
1.5.1 Dosis Efectiva Media (De50).

Se denomina así a la dosis mínima de un antiveneno (o de un antídoto) capaz de
proteger efectivamente al 50% de los animales expuestos a la acción de una
sustancia tóxica, en un lapso de tiempo determinado, que generalmente es de 24
horas. Se deben determinar además el tipo de tóxico y la cantidad suministrada, la
vía de administración (oral, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal,
intravenosa, inhalada, tópica, etc.) y la especie animal usada como modelo
biológico. La De50 se expresa usualmente en miligramos de veneno neutralizados
por cada ml de antiveneno.
Existen varios métodos para determinar la De50 y la elección del mismo depende
del tipo de tóxico a usar y del tipo de antídoto que se quiere probar.
1.5.1.1 Términos similares. Diferenciación.

No se debe confundir la abreviatura De50, a la que nos hemos referido, con las
abreviaturas DL50 y CL50.
La abreviatura DL50 (dosis letal media) indica la dosis mínima de un tóxico capaz
de causar la muerte del 50% de la población examinada, en un periodo de tiempo
determinado, que usualmente es de 24 horas.
La abreviación CL50 (concentración letal media) indica la concentración mínima

capaz de causar la muerte de la mitad de la población expuesta a la inhalación de
una sustancia tóxica gaseosa o volátil, durante un tiempo determinado.
La DL50 se expresa en miligramos de sustancia tóxica o de veneno por kilogramo

de peso corporal del animal examinado (dato del que debe quedar constancia). La
CL50 se expresa en mililitros de sustancia tóxica gaseosa por kilogramo de peso
corporal del animal examinado (dato del que debe quedar constancia), expuesto al
compuesto por inhalación durante un periodo de tiempo especificado. La gama de
valores de los parámetros DL50 y CL50 es muy amplia.
1.5.1.2 El modelo biológico.

Es importante señalar claramente la especie animal usada como modelo biológico
o el tipo de organismo en el que se realizó el ensayo, ya que los valores de De50,
DL50 o CL50 dependen de varios factores entre los que se destacan: el sistema
7
biológico o el tipo de animal utilizado, la raza, el peso, el sexo, la edad, la dieta,

etc.
Así, por ejemplo, en el caso del insecticida DDT, la DL50 es de 87 mg/kg de peso
corporal cuando se administra por vía oral en ratas, pero alcanza 150 mg/kg de
peso corporal en perros. La DL50 correspondiente a la Dioxina es de 0,02 mg/kg de
peso corporal en ratas y de 0,001 mg/kg de peso corporal en perros; es decir, la
rata tolera una dosis veinte veces superior a la que toleran los perros.
Aunque para valorar cómo respondería un organismo humano no basta una

extrapolación directa de los resultados obtenidos con animales, estos sí dan una
idea clara y muy aproximada del grado de toxicidad de una sustancia o del poder
neutralizante de un antídoto o antiveneno.
1.5.2 Accidente elapídico.

Se denomina accidente elapídico al accidente ofídico causado por una serpiente
perteneciente a la gran familia Elapidae (elápidos). Los elápidos son serpientes
venenosas terrestres y marinas. Poseen el maxilar superior más corto y este
presenta en la parte anterior un par de colmillos cortos, rígidos y erectos,
conductores de veneno, surcados o perforados, esta condición dentaria se
denomina proteroglifa; la cola es generalmente corta, terminada en punta y no
comprimida. Habitan en todos los continentes excepto en Europa. Poseen
venenos muy poderosos de acción neurotóxica. Hay especies terrestres,
hipógeas, arborícolas y otras exclusivamente marinas. Los miembros más
representativos y conocidos de esta familia son las llamadas serpientes de coral,
las cobras, las mambas, búngaros, kraits y las serpientes marinas. Esta familia se
divide en dos grandes subfamilias que agrupan las formas terrestres (Subfamilia
Elapinae) y las formas marinas (Subfamilia Hydrophinae).
1.5.2.1 La subfamilia Elapinae.

Está constituida por serpientes venenosas terrestres, hipógeas o arborícolas.
Todas ellas presentan un tipo de dentición proteroglifa. Pueden ser ovíparas u
ovovivíparas. Esta subfamilia la componen aproximadamente 250 especies y 50
géneros. Usualmente son de talla pequeña y media. Los venenos de estas
serpientes son muy tóxicos y potentes, las 10 serpientes más venenosas del
mundo pertenecen a este grupo. Su coloración suele ser muy vistosa y brillante.
Las especies más conocidas de esta subfamilia son las cobras, mambas,
búngaros, serpientes de coral, etc. Especialmente numerosas son las especies de
esta subfamilia en Australia, en donde comprenden dos terceras partes de los
ofidios presentes en dicho continente.
Los géneros más representativos de esta subfamilia son: Dendroaspis,

Ophiophagus, Boulengerina, Denisonia, Naja, Hemachatus, Acantophis, Maticora,
Notechis, Bungarus, Oxyuranus, Pseudechis, Demansia, Calliophis y
Hemibungarus. En América están presentes los géneros Micrurus y Micruroides.
8
1.5.3 Accidente micrúrico.
1.5.3.1 Definición.
Se denomina accidente micrúrico al envenenamiento causado por la mordedura
de una serpiente del género Micrurus, que forma parte de la amplia familia de los
elápidos (Elapidae) a la que, como se mencionó ya, pertenecen también las
famosas cobras, mambas, kraits y las serpientes venosas australianas; por esta
razón algunas veces se lo denomina también “accidente elapídico” que es un
término mucho más general.
En toda América las serpientes del género Micrurus (que significa “cola corta”) son
conocidas con el nombre de corales o serpientes coral. En algunas regiones de
Colombia, aparte de ser llamadas corales o coralillos, son denominadas también
con los nombres de “coral mata ganado”, “cabeza de chocho” y “rabo de ají”.
1.5.3.2 Incidencia.
Se ha calculado que tan solo entre el 2 y 3% de todos los accidentes ofídicos en
Colombia son ocasionados por corales. Este tipo de accidentes no suelen ser
comunes pero generalmente sí son graves; la mayoría de los casos se presentan
en niños, que se sienten atraídos por la belleza y los colores de estos animales, o
en adultos que imprudentemente juegan con ellos, confiados en su relativa
mansedumbre.
1.5.3.3 Diversidad de especies.

En Colombia se han descrito hasta la fecha 22 especies diferentes de Micrurus,
esta extraordinaria diversidad hace que ocupe el tercer puesto en número de
especies, después de México y Brasil.
Género Micrurus (Serpientes de coral verdaderas) especies reportadas en

Colombia:
M. alleni. M. mipartitus.
M. ancoralis. M. multiscutatus.
M. clarki. M. narduccii.
M. dissoleucus. M. nigrocinctus.
M. dumerilii. M. psyches.
M. filiformis. M. putumayensis.
M. hemprichii. M. sangilensis.
M. isozonus. M. spixii.
M. karlschmidti. M. spurrelli.
M. langsdorffi. M. surinamensis.
M. lemniscatus. M. stewarti.
9
1.5.3.4 Características generales de las serpientes del género Micrurus.

En términos generales, las serpientes de coral son de tamaño mediano y pequeño,
la mayoría de las especies muestra unas proporciones con tendencia a ser muy
delgadas y largas; las escamas son lisas y la mayoría de las especies exhibe una
coloración muy viva y vistosa, con anillos completos de color rojo, negro y blanco
(o amarillo).
La cabeza suele ser pequeña, con el cuello no diferenciado y los ojos muy
pequeños y puntiformes. Habitan en zonas de clima medio y cálido, algunas
especies viven en estrecha cercanía con los seres humanos, como las que
prefieren los jardines o cultivos como el café y cacao. Muchas especies llevan vida
semisubterránea y prefieren permanecen ocultas bajo la hojarasca, piedras o
troncos. Se reproducen por medio de huevos y la gran mayoría se alimentan de
manera exclusiva de otras serpientes, es decir, que son ofidiófagas.
Fig. 1
Fig.2
Como todos los miembros de la familia Elapidae, poseen una dentición de tipo
proteroglifo, con dos colmillos delanteros, pequeños y fijos, que en las especies
más grandes no sobrepasan los 3 mm. En términos generales, son serpientes de
carácter manso, pero cuando muerden lo hacen con mucha fuerza y con
frecuencia se quedan firmemente aferradas a la piel por un largo periodo de
tiempo.
Fig. 3
10
Fig. 4
Fig. 5
11
Fig. 6
Fig. 7 Región caudal de Micrurus spp.
12
1.5.3.5 Los venenos micrúricos.

Los venenos de las serpientes de coral son muy potentes, su acción es
predominantemente neurotóxica, si bien algunos son también cardiotóxicos.
Nunca debe subestimarse el tamaño de la serpiente ni la ausencia inicial de
síntomas generales y locales. La mordedura indolora de una pequeña serpiente
coral “rabo de ají” de 10 a 15 cm de longitud y tan delgada como un cordón de
zapato, es potencialmente mortal para un hombre adulto. Estos venenos poseen
neurotoxinas de bajo peso molecular, que se unen fuertemente a los receptores
colinérgicos de la placa neuromotora de las fibras musculares, actuando como un
“aislante” que bloquea el paso del impulso nervioso al músculo, lo que ocasiona
una parálisis flácida que puede conducir a disnea y paro respiratorio.
La mayoría de estos venenos tiene una actividad de bloqueo postsináptico, sin

embargo, algunos venenos de corales poseen también actividad de bloqueo
presináptico, producto de la acción de fosfolipasas A2 que afectan esta terminal.
Es importante recordar que los venenos de los Micrurus (serpientes de coral) no
producen efectos hemorrágicos, coagulopatías, ni daños locales a piel o a tejidos.
1.5.3.6 Especies de interés médico.

Aunque en Colombia se presentan accidentes por todas las especies de Micrurus,
las más importantes desde el punto de vista médico, por ser aquellas que habitan
en las zonas más pobladas y en estrecha cercanía con los seres humanos, son en
primer lugar, Micrurus mipartitus (coral “rabo de ají”, “rabo de candela”, “cabeza de
chocho”) y Micrurus dumerilii (coral macho, “mataganado” “coral verdadera”). En
segundo lugar se destacan las especies Micrurus surinamensis (“coral de agua”),
Micrurus spixii y Micrurus psyches medemi, es decir, todas las especies que son
objeto del presente estudio.
Fig. 8. Micrurus mipartitus. (Coral “Rabo de ají”).
13
Fig. 9. Micrurus dumerilii.
Fig. 10. Micrurus spyches medemi.
Fig. 11. Micrurus spixii obscurus.
14
Fig. 12. Micrurus surinamensis surinamensis.
1.5.4 Suero Antiofídico Antielapídico Antimicrúrico.

Se denomina así al antiveneno capaz de neutralizar las toxinas presentes en el
veneno de las diversas especies de serpientes pertenecientes a la familia de los
elápidos (fam. Elapidae), subfamilia de los micrurinos (subfam. Micrurinae), género
Micrurus spp. En términos que son más comprensibles se denomina suero
antiofídico “Anticoral”. Este es un suero heterólogo de origen equino, ovino o
caprino, que posee comprobada eficacia y características de Polivalente regional.
Actualmente es producido por laboratorios de México, Costa Rica, Colombia,
Brasil y Argentina.
1.6 Cantidad de pruebas realizadas.

Con el fin de obtener los objetivos generales propuestos en este estudio, se
llevaron a cabo 12 grandes pruebas, dos por cada uno de los venenos de las
especies de Micrurus antes mencionadas; en cada una de las diez (10) primeras
pruebas se realizaron 6 experimentos o niveles, y para el análisis de la mezcla de
todos los venenos, pruebas 11 y 12, se realizaron, respectivamente, 6 y 10
experimentos o niveles, para un gran total de 76 experimentos realizados.
15
Prueba. Veneno. Experimentos.

1 M. mipartitus 6
2 M. mipartitus 6
3 M. Surinamensis 6
4 M. surinamensis 6
5 M. spixii 6
6 M. spixii 6
7 M. dumerilii 6
8 M. dumerilii 6
9 M. spyches medemi 6
10 M. spyches medemi 6
11 M. spp (mezcla) 6
12 M. spp (mezcla) 10
Total 12 6 venenos 76
Tabla 1. Número de pruebas, venenos probados y experimentos realizados
Fig. 13. Presentación del producto Suero Antiofídico Antielapídico (Anticoral) de

Laboratorios Probiol Ltda.
16
2.
Materiales y métodos.
2.1 Método general utilizado para determinar la De50.

En todas la pruebas efectuadas se utilizó el método denominado “Costa Rica” y
que es exactamente el mismo que se emplea de forma regular en los laboratorios
del Instituto de investigaciones biológicas Clodomiro Picado de San José de Costa
Rica para determinar la Dosis Efectiva media (De50) o potencia neutralizante de los
antivenenos. Este método, aceptado mundialmente por la comunidad científica
general, está debidamente validado y avalado por la Organización Mundial de la
Salud (OMS), y se considera un método económico y confiable, seguro y de fácil
aplicación. Para una descripción del método, véase el punto 2.4 de este mismo
documento sobre “métodos utilizados para la realización de las pruebas”.
2.2. Verificación y repetibilidad de las pruebas.

En la realización de todas las pruebas se ha aplicado estrictamente el método
antes mencionado (el denominado método “Costa Rica”), ciñéndose a su
procedimiento, y ha sido aplicado sin adaptaciones ni modificaciones. La lista
completa de los materiales y sus características, así como el método y las técnicas
de manejo utilizadas se relacionan a continuación, de modo que todas las pruebas
descritas en este trabajo puedan ser repetidas y verificadas por quien lo considere
necesario.
2.3 Materiales utilizados para la realización de las pruebas.

2.3.1 Venenos de serpientes del género Micrurus.
2.3.2 Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol.
2.3.3 Solución salina normal.
2.3.4 Jeringas de diversos tamaños.
2.3.5 Ratones blancos de laboratorio (como modelo biológico).
2.3.1 Venenos de serpientes del género Micrurus.

2.3.1.1 Tipos de venenos utilizados.
2.3.1.2 Cantidad de veneno utilizada.
2.3.1.3 Obtención legal de los venenos.
2.3.1.4 Método utilizado para la extracción de los venenos.
2.3.1.5 Tratamiento de los venenos.
2.3.1.6 Edad de los venenos.
2.3.1.1 Tipos de venenos utilizados.

Para la realización de las pruebas se utilizaron los siguientes tipos de venenos de
serpientes del género Micrurus, previa verificación y confirmación de la
identificación taxonómica de cada ejemplar:
17
Veneno de Micrurus surinamnesis.

Veneno de Micrurus spixii.
Veneno de Micrurus mipartitus.
Veneno de Micrurus dumerilii.
Veneno de Micrurus spyches medemi.
2.3.1.2 Cantidad de veneno utilizada.

Para la realización de las pruebas se dispuso de una cantidad mínima de 15 a 20
mg de veneno de cada una de las especies mencionadas. En el formato o planilla
de las pruebas se especifica la cantidad de veneno utilizada en cada caso para la
preparación de la solución madre.
2.3.1.3 Obtención legal de los venenos.

Todos los venenos de serpientes del género Micrurus a utilizar en estas pruebas
han sido obtenidos de ejemplares cautivos que forman parte del inventario oficial
del Serpentario del Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica “Ophidia”.
Dicho serpentario se encuentra debidamente autorizado, avalado y vigilado por las
autoridades ambientales del Estado. Cada ejemplar de la colección ha sido
legalmente obtenido y cuenta con su respectiva identificación y registro.
2.3.1.4 Metodo utilizado para la extracción de los venenos.

Para la extracción de los venenos se ha utilizado la técnica denominada “ordeño
manual” con el uso de pipetas Pasteur; esta técnica es conocida con el nombre de
“método de Barme” y consiste básicamente en sujetar la serpiente por el cuello,
abrirle la boca y colocar sobre cada colmillo una micropipeta tipo Pasteur de
manera que el colmillo quede dentro de esta; luego se hace un masaje de suave
presión sobre las glándulas productoras del veneno, lo que generalmente induce
en la serpiente el reflejo de morder e inocular el veneno, el cual queda depositado
en las pipetas.
2.3.1.5 Tratamiento de los venenos.

Una vez obtenidos, los venenos fueron conservados a baja temperatura y en la
oscuridad, en frascos herméticamente cerrados y debidamente roturados.
Posteriormente fueron secados por liofilización, cuidadosamente pesados en
balanza analítica digital y dispuestos en recipientes plásticos a dosis de 10 mg.
Los recipientes son mantenidos a temperatura ambiente en la oscuridad hasta el
momento de preparar la solución madre o solución de veneno diluido en solución
salina normal.
2.3.1.6 Edad de los venenos.

Ninguno de los venenos utilizados para la realización de estas pruebas tenía un
tiempo mayor a 3 meses de haber sido extraído.
2.3.2 Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol.

Para la realización de todas las pruebas se utilizaron en total 14 ampollas de
Suero Antiofídico antimicrúrico - altielapídico (anticoral) de Laboratorios Probiol
Ltda.
18
2.3.2.1 Identificación de los sueros antiofídicos utilizados en las pruebas:
Tipo de producto: Suero antiofídico antielapídico (anticoral).

Cantidad: 14 frascos viales.
Presentación: Polvo liofilizado para ser reconstituido con 10 ml de
diluente estéril.
Marca: Probiol.
Fabricante: Productos Biológicos Probiol Laboratorios Probiol Ltda.
Lote: AC004 (Lote piloto Nro. 4)
Estos antivenenos nos fueron facilitados por Laboratorios Probiol Ltda.
En la realización de cada una de las 11 primeras prueba de DE50 se utilizaron 6,85

ml de suero antiofídico de cada frasco vial de 10 ml. (véase formato del protocolo
para la determinación de potencia). En cada caso los 3,15 ml restantes fueron
desechados. En la prueba Nro. 12, con 10 niveles o experimentos, se utilizaron
21,3 ml (de 3 frascos viales) de antiveneno, los restantes 8,7 ml fueron
desechados. En total se utilizaron 14 viales de Suero Antiofídico Anticoral de
Laboratorios Probiol Ltda.
2.3.3. Solución salina normal.

Para la preparación de la solución madre (solución de veneno de serpiente
diluido), se utilizó solución salina normal de marca “Baxter”, de uso corriente
hospitalario y disponible comercialmente. Se verificó cuidadosamente la vigencia
del registro sanitario y la vigencia del producto.
2.3.4 Jeringas.
Se utilizaron jeringas desechables de plástico de diferentes marcas disponibles en
el comercio (Rimco, Nipro, BD Plastipak, Inject) con capacidades de 10, 5, 3 y 1
ml; se verificó cuidadosamente la vigencia del producto y de las licencias legales.
2.3.5 Ratones blancos de laboratorio (como modelo biológico).

2.3.5.1 Especie.
2.3.5.2 Cantidad y procedencia.
2.3.5.3 Estado de salud, peso y sexo.
2.3.5.4 Condiciones de mantenimiento.
2.3.5.5 Disposición final.
2.3.5.6 Comité de ética.
2.3.5.1 Especie.
Como modelo biológico para la realización de las pruebas se utilizaron ratones
blancos (suizos) de la especie Mus musculus (llamados comúnmente ratones de
laboratorio).
2.3.5.2 Cantidad y procedencia.

Se utilizaron un total de 456 ratones, 72 para cada una de las cinco primeras
pruebas y 96 para la sexta prueba (véanse los formatos de protocolo para cada
19
una de las pruebas); todos ellos procedentes del Bioterio del Centro de
Investigación y Asesoría Ofidiológica “Ophidia”; Dicho bioterio o criadero técnico
de animales para experimentación, se encuentra debidamente autorizado, avalado
y vigilado por las autoridades ambientales y sanitarias del Estado.
2.3.5.3 Estado de salud. Peso y sexo.

Antes de ser utilizados se verificó por parte del médico veterinario el estado de
salud y el peso de los animales. Se utilizaron solamente animales sanos, de 18 a
20 gramos de peso, machos y hembras no preñadas. Los ratones fueron pesados
en una balanza tipo gramera, de marca Ohaus Cent-O-gram, referencia 8217,
fabricada por Ohaus Scale Corporation y que recientemente fue calibrada.
2.3.5.4 Condiciones de mantenimiento.

Durante la realización de las pruebas y en el tiempo de observación posterior a
estas, los ratones fueron mantenidos en cajas de acero inoxidable (6 por caja) de
las mismas que se utilizan normalmente en el bioterio; fueron mantenidos en
condiciones de temperatura y humedad ambiente, con buena ventilación, y con
agua y alimento disponibles a voluntad todo el tiempo.
2.3.5.5 Disposición final.

Todos los ratones sobrevivientes (150 ejemplares, el 32,89% de los utilizados)
ingresaron de nuevo al bioterio pero fueron mantenidos aparte y sometidos a un
periodo de cuarentena y observación de 30 días, luego de los cuales fueron
examinados para verificar su estado de salud y posteriormente destinados a
alimentar las serpientes del Centro de Investigación.
Los ratones que resultaron muertos durante las pruebas (306 ejemplares) fueron
debidamente empacados en bolsas rojas para desechos biológicos o biomédicos,
marcadas con etiquetas reglamentarias de riesgo biológico, selladas y
conservadas en refrigerador hasta su recolección por parte del personal
especializado en desechos tóxicos y biológicos de la empresa municipal de aseo,
entidad que se encarga de la incineración técnica y adecuada de todo tipo de
desechos tóxicos, biomédicos y hospitalarios.
2.3.5.6 Comité de ética.

Antes de la realización de las pruebas, y conforme a lo establecido en el artículo
23 del capítulo VI la ley 84 de 1989, se reunió el Comité de Etica permanente del
Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica “Ophidia” y hecho un concienzudo
análisis de la necesidad y utilidad de las pruebas a realizar y de la metodología a
emplear, determinó aprobar la realización de los experimentos teniendo en cuenta:
a. Que los experimentos que se quieren llevar a cabo con animales vivos se
realizarán con la autorización previa de la autoridad competente y que tales
pruebas son imprescindibles para el estudio y avance de la ciencia.
b. Que los resultados experimentales no puedan obtenerse por otros

procedimientos o alternativas.
20
c. Que las experiencias son necesarias para el control, prevención, el diagnóstico

o el tratamiento de enfermedades que afecten al hombre o a los animales.
d. Que los experimentos no puedan ser sustituidos por cultivo de tejidos, medios y
modelos computarizados de simulación, dibujos, películas, fotografías, videos u
otros procedimientos.
Así mismo, la realización de las pruebas estuvo vigilada por delegados de dicho
Comité y como consta en el acta correspondiente, se verificó que no se utilizaran
más animales de los estrictamente necesarios y de antemano programados para
los experimentos, que no se les causara dolor innecesario ni se incurriera en
crueldad o maltrato hacia los mismos.
2.4 Métodos utilizados para la realización de las pruebas.
2.4.1 Método general y protocolo utilizado.

2.4.2 Preparación del Suero Antiofídico Anticoral.
2.4.3 Preparación de la solución madre.
2.4.4 Preparación de la Solución madre de las pruebas 11 y 12 (mezcla de
venenos)
2.4.5 Incubación de la solución madre.
2.4.6 Formula de cada experimento.
2.4.7 Inoculación.
2.4.8 Observación y lectura.
2.4.9 Disposición final.
2.4.1 Método general y protocolo.

Como ya se mencionó, el método utilizado para determinar la Dosis Efectiva
Media (De50) fue el llamado “Método Costa Rica”, y que es mismo que se utiliza
regularmente en el Instituto de Investigaciones Biológicas Clodomiro Picado de
San José de Costa Rica para medir el título de neutralización de los antivenenos
que allí se producen.
En principio, este método consiste en la mezcla de una cantidad fija de veneno en

presencia de cantidades variables del antiveneno, las que se ajustan a un volumen
igual, se incuban por 30 minutos a 37°C y se inocu lan por vía intraperitoneal en
grupos de seis ratones por mezcla, de forma que cada uno reciba una dosis no
inferior a 3 dosis letales medias (Dl50).
El título de neutralización, se expresa en microgramos de veneno neutralizados

por mililitro de antiveneno, y se calcula con base en la menor cantidad de
antiveneno que proteja adecuadamente a tres de los seis animales inoculados (el
50% de la muestra). Para mayor información, véase definición de la De50, numeral
1.5.1 de este mismo documento.
21
El tiempo de observación de cada prueba es de 24 horas. La observación

detallada del formato de protocolo puede contribuir mucho a la comprensión del
método y su aplicación. (Véase el anexo 1).
2.4.2 Preparación de cada ampolleta del Suero Antiofídico Anticoral

liofilizado.
Las ampollas de suero antiofídico fueron numeradas del 1 al 14 para identificarlas.
Al momento de realizar cada prueba se preparó la respectiva ampolla de Suero
Antiofídico según las instrucciones del fabricante, esto es, aplicando los 10 ml de
diluente estéril en forma lenta y por la pared del frasco y dejándolo luego en
reposo, sin agitarlo, para permitir que el producto se hidrate.
Con el fin de verificar el tiempo requerido para la dilución del producto, se calculó
un tiempo para la aplicación del diluente estéril de 15 segundos, y se permitió
enseguida un periodo de hidratación en reposo que varió entre 1 y 14 minutos;
concluido este periodo de tiempo se agitó suavemente el frasco por un periodo de
10 segundos y se realizó una observación. Los resultados u observaciones se
relacionan en la tabla 2.
Ampolla Diluente Reposo Agitar Resultado. Observación.

1 15’’ 1’ 10’’ Se observa un grumo sólido muy grande.
2 15’’ 2’ 10’’ Muchos grumos grandes sin diluir.
3 15’’ 3’ 10’’ Algunos grumos grandes sin diluir.
4 15’’ 4’ 10’’ Algunos grumos pequeños sin diluir.
5 15’’ 5’ 10’’ Se forma un sedimento en el fondo.
6 15’’ 6’ 10’’ Un poco de sedimento en el fondo del frasco.
7 15’’ 7’ 10’’ Se observa aún algo de sedimento.
8 15’’ 8’ 10’’ El suero está completamente diluido.
11 15” 11’ 10” El suero está completamente diluido.
Tabla 2. Tiempo de dilución del suero antiofídico Anticoral liofilizado.
2.4.2.1 Comentario.
La presentación final (comercial) del producto Suero Antiofídico Antielapídico
Anticoral, es la de Polvo liofilizado para ser reconstituido con 10 ml de diluente
estéril. La prueba de preparación del suero anteriormente descrita demuestra que
un tiempo de hidratación en reposo entre 5 y 10 minutos facilita mucho la dilución
del producto, el cual no requiere ser agitado fuertemente para quedar listo a ser
utilizado.
22
2.4.3 Preparación de la Solución madre.

En la preparación de la Solución Madre (veneno diluido en solución salina), para
cada prueba se utilizó la fórmula estándar de 1mg de veneno por 1ml de solución
salina. Ante la dificultad de preparar cantidades pequeñas, se preparó siempre
una cantidad de 10 ml de solución madre de cada tipo de veneno.
2.4.4 Preparación de la solución madre de las pruebas 11 y 12 (Mezcla de

todos los venenos antes probados).
Las pruebas 11 y 12, destinadas a determinar la De50 de la mezcla de los cinco
venenos antes probados, se programó como prueba para reconfirmar la condición
de POLIVALENTE del Suero Antiofídico Anticoral de Probiol, condición ya probada
por el hecho de haber neutralizado adecuadamente cada uno de los venenos en
las anteriores pruebas individuales.
Para la preparación de la solución madre de esta prueba se planteó si podría

utilizarse una mezcla de cantidades iguales del sobrante de las soluciones madre
individuales preparadas para cada una de las pruebas anteriores o si por el
contrario se deberían mezclar cantidades iguales de los diferentes venenos, en
estado seco liofilizado y disolver dicha mezcla en solución salina normal.
Reunido el equipo de investigadores y asesores, se planteo y discutió el asunto y

se concluyó que técnicamente no debe existir ninguna diferencia en la solución
madre de venenos mezclados resultante, bien sea que se use un método o el otro;
aún así, se decidió utilizar la segunda opción, para garantizar la frescura de la
solución y para verificar que las cantidades de veneno a mezclar fueran
exactamente iguales. Se conservó la proporción de 1mg de veneno por 1 ml de
solución salina, pero ante la dificultad de pesar cantidades muy pequeñas de
veneno con una exactitud 100% confiable, se optó por preparar una cantidad
grande de solución (25 ml) de modo que se usaran 25 mg de veneno, es decir 5
mg de cada tipo de veneno. La fórmula de la solución madre de venenos
mezclados que se utilizó para las pruebas 11 y 12 es la siguiente:
Veneno de Micrurus miparitus: 5mg

Veneno de Micrurus dumerilii: 5mg
Veneno de Micrurus surinamensis: 5mg
Veneno de Micrurus spyches medemi: 5 mg
Veneno de Micrurus spixii obscurus: 5 mg
Solución Salina Normal: 25 ml
Tabla 3. Fórmula de la solución madre pruebas 11 y 12.
2.4.5 Fórmula de cada experimento.

La formula para cada experimento se preparó en el momento previo a la
inoculación y no antes, y se hizo de acuerdo a las proporciones establecidas y
programadas de antemano para cada nivel según el formato de Protocolo
diseñado para cada prueba (Ver formato de Protocolo). De cada fórmula se
23
preparó un volumen de 4,5 ml, de manera que se pudiera inocular 0,75 ml a cada
uno de los seis ratones de cada nivel y no quedaran sobrantes.
2.4.6 Incubación de la fórmula.

Una vez preparada cada una de las 12 fórmulas de cada prueba, estás fueron
incubadas a 37°C durante 30 minutos en una incubado ra estándar para laboratorio
clínico o bacteriología (Marca “Clinic Lab Supplies” modelo “TermoLab 4,5” de
fabricación canadiense).
2.4.7 Inoculación.
Una vez preparada e incubada la fórmula para cada experimento, se procedió a la
inoculación de 0,75 ml de dicha formula a seis ratones por vía intraperitoneal y en
cada experimento o nivel se hizo de la misma manera; como se dijo antes, de
cada formula se preparó un volumen de 4,5 ml, de manera que se inocularan los
seis ratones de cada nivel y no quedaran sobrantes. La inoculación se efectuó con
jeringas tipo insulina de 1 ml, jeringas de aguja fija no removible; se utilizó una
jeringa por cada ratón y tras la inoculación fueron debidamente desechadas.
2.4.8 Observación y lectura.

Una vez inoculados los ratones de cada experimento o nivel, fueron dejados en
una caja de acero inoxidable con sustrato de cascarilla de arroz, tal y como se los
mantiene normalmente en el bioterio, con alimento y agua disponibles a voluntad.
Cada caja fue debidamente marcada e identificada y dejada en reposo a
temperatura y humedad ambiente, con luz baja e indirecta y protegida de
corrientes de aire, tal y como son normalmente mantenidas. Se anotó
cuidadosamente la hora de cada inoculación y se realizó la lectura de la prueba a
las 24 horas exactas, haciendo el recuento de ratones vivos y muertos, datos que
se consignaron en las planillas correspondientes.
2.4.9 Disposición final.

Todos los frascos, pipetas y jeringas que se utilizaron durante las pruebas, así
como las bolsas vacías de solución salina, los guantes y tapabocas desechables,
fueron empacados en bolsas rojas para desechos biomédicos debidamente
etiquetadas y marcadas. Todas las agujas y jeringas de aguja fija no removible
fueron depositadas en un recipiente tipo “guardián” diseñado especialmente para
la disposición o desecho de elementos cortopunzantes de uso médico; este
recipiente, debidamente etiquetado y marcado, fue sellado según las instrucciones
del fabricante. Todos estos desechos fueron recogidos por personal especializado
en la recolección de desechos tóxicos, biológicos y biomédicos de la empresa
municipal de aseo, que se encarga de la incineración y disposición técnica de esta
clase de basuras. Con respecto a la disposición final de los ratones utilizados en
las pruebas, véase el numeral 2.3.5.5 de este mismo documento.
24
3.
Resultados y hallazgos.
Los resultados y hallazgos de cada una de las pruebas se consignaron en las
respectivas tablas o formatos de Protocolo que se relacionan a continuación.
Información general.
Tipo de pruebas realizadas:

Dosis Efectiva Media (De50).
Número de pruebas realizadas:

12 pruebas, 76 experimentos.
Tipo de antiveneno probado:

Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.
Tipo de toxinas a neutralizar:

Venenos de serpientes del género Micrurus spp.
Método utilizado:
De50 según Método “Costa Rica”, validado por el Instituto de Investigaciones
biológicas “Clodomiro Picado” de San José de Costa Rica”. Aprobado OMS
(WHO).
Modelo biológico utilizado:

Ratones de laboratorio de la especie Mus musculus, de raza albina suiza.
Responsable y Coordinador general de la realización de las pruebas:

Héctor Charry Restrepo.
Director Científico del Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica “Ophidia”.
Pruebas ejecutadas por:

Equipo de Investigadores y colaboradores de “Ophidia”.
25
3.2 Dosis Efectiva Media (De50) del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda.
frente al veneno de la especie: Micrurus mipartitus.
Análisis Nro: 1 Experimentos realizados: 12 Fecha de realización: 19 y 20 de marzo de 2006

Realizado por: Ophidia. Centro de Investigación y Asesoría Ofidiológica. Director y responsable: Héctor Charry Restrepo.
PRUEBA GRUESA
Experimento Veneno sol. Solución Suero Relación Ug de Ratones inoculado Ratones vivos % De50
madre salina normal Anticoral veneno/1 mL Suero intraperitoneal 24 horas
1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6 *
2 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3 *
3 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
4 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
5 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 0
6 0,3 ml 4,2 ml 0 Control 6 0,75 ml 0 de 6 0
Resultado: la De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus mipartitus se encuentra entre 100 y 200 Ug de veneno neutralizado
por cada ml de suero; como el rango es muy grande, se hace necesario realizar una prueba fina en este nivel.
PRUEBA FINA.
7 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6
8 0,3 ml 1,8 ml 2,4 ml 125 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
9 0,3 ml 2,2 ml 2 ml 150 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
10 0,3 ml 2,5 ml 1,7 175 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
11 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
12 0,3 ml 2,9 ml 1,3 225 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
Resultado: la De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus mipartitus se encuentra entre 125 y 150 Ug de veneno neutralizado
por cada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar entre 1,25 y 1,5 mg de veneno (promedio 1,37).
25A
frente al veneno de la especie: Micrurus dumerilii.
Análisis Nro: 2 Experimentos realizados: 12 Fecha de realización: 14 y 15 de abril de 2006

PRUEBA GRUESA
1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6 *
2 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3 *
3 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
4 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
5 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 0
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus dumerilii se encuentra entre los 100 y 200 Ug de veneno
neutralizados por cada ml de suero; con el fin de establecer una cifra más precisa se realiza la siguiente prueba fina:
PRUEBA FINA.
7 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6
8 0,3 ml 1,8 ml 2,4 ml 125 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
9 0,3 ml 2,2 ml 2 ml 150 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
10 0,3 ml 2,5 ml 1,7 175 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
11 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
12 0,3 ml 2,9 ml 1,3 225 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus dumerilii se sitúa en 125 Ug de veneno neutralizados por cada
ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar mínimo 1,25 mg de veneno.
25B
frente al veneno de la especie: Micrurus surinamensis.
Análisis Nro: 3 Experimentos realizados: 12 Fecha de realización: 12 y 13 de mayo de 2006

PRUEBA GRUESA
1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
2 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
3 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
4 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 0 de 6 0
5 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 0
Resultado: la De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus surinamensis se encuentra alrededor de los 100 Ug de veneno
PRUEBA FINA.
7 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
8 0,3 ml 1,8 ml 2,4 ml 125 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
9 0,3 ml 2,2 ml 2 ml 150 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
10 0,3 ml 2,5 ml 1,7 175 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
11 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
12 0,3 ml 2,9 ml 1,3 225 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
Resultado: la De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus surinamensis se encuentra entre 100 y 125 Ug de veneno neutra-
lizado por cada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar entre 1 y 1,25 mg de veneno (promedio 1,12).
25C
frente al veneno de la especie: Micrurus spixii obscurus.
Análisis Nro: 4 Experimentos realizados: 12 Fecha de realización: 26 y 27 de mayo de 2006

PRUEBA GRUESA
1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 5 de 6 83,3
2 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 4 de 6 66,6 *
3 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 2 de 6 33,3 *
4 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
5 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 0
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus spixii se encuentra entre los 200 y 300 Ug de veneno
PRUEBA FINA.
7 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 4 de 6 66,6
8 0,3 ml 2,9 ml 1,3 ml 225 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
9 0,3 ml 3 ml 1,2 ml 250 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
10 0,3 ml 3,1 ml 1,1 ml 275 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
11 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
12 0,3 ml 3,27 ml 0,93 ml 325 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus spixii se sitúa entre 225 y 250 Ug de veneno neutralizados por
cada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar de 2,25 a 2,5 mg de veneno (promedio 2,37).
25D
frente al veneno de la especie: Micrurus spyches medemi.
Análisis Nro: 5 Experimentos realizados: 12 Fecha de realización: 16 y 17 de junio de 2006

PRUEBA GRUESA
1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6 *
2 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3 *
3 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
4 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
5 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 0
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus spyches m. se encuentra entre los 100 y 200 Ug de veneno
PRUEBA FINA.
7 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6
8 0,3 ml 1,8 ml 2,4 ml 125 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
9 0,3 ml 2,2 ml 2 ml 150 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
10 0,3 ml 2,5 ml 1,7 175 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
11 0,3 ml 2,7 ml 1,5 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
12 0,3 ml 2,9 ml 1,3 225 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus spyches m. se sitúa entre 125 y 150 Ug de veneno neutralizados por
cada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar de 1,25 a 1,5 mg de veneno (promedio 1,37).
25E
frente al veneno de la especie: Micrurus sp. (Mezcla de todos los anteriores)
Análisis Nro: 6 Experimentos realizados: 16 Fecha de realización: 20 al 23 de julio de 2006

Prueba gruesa: 20 y 21- 7- 06

1 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6 *
2 0,3 ml 2,7 ml 1,5 ml 200 6 0,75 ml 2 de 6 33,3 *
3 0,3 ml 3,2 ml 1 ml 300 6 0,75 ml 1 de 6 16,6
4 0,3 ml 3,45 ml 0,75 ml 400 6 0,75 ml 0 de 6 0
5 0,3 ml 3,6 ml 0,60 ml 500 6 0,75 ml 0 de 6 0
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus sp. se encuentra entre los 100 y 200 Ug de veneno
Prueba fina: 22 y 23- 7-06

7 0,3 ml 1,2 ml 3 ml 100 6 0,75 ml 4 de 6 66,6
8 0,3 ml 1,5 ml 2,7 ml 110 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
9 0,3 ml 1,7 ml 2,5 ml 120 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
10 0,3 ml 1,9 ml 2,3 ml 130 6 0,75 ml 3 de 6 50 *
11 0,3 ml 2,1 ml 2,1 ml 140 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
12 0,3 ml 2,2 ml 2 ml 150 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
13 0,3 ml 2,4 ml 1,8 ml 160 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
14 0,3 ml 2,44 ml 1,76 ml 170 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
15 0,3 ml 2,54 ml 1,66 ml 180 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
16 0,3 ml 2,63 ml 1,57 ml 190 6 0,75 ml 2 de 6 33,3
Resultado: La De50 del suero antiofídico anticoral de Probiol frente al veneno de Micrurus sp se sitúa entre 110 y 130 Ug de veneno neutralizados por
cada ml de suero; esto significa que cada vial de 10 ml está en capacidad de neutralizar de 1,1 a 1,3 mg de veneno (promedio 1,2). Pag. 25F
4.
Conclusiones.
Observando las planillas del capítulo 3 de resultados y hallazgos, las conclusiones
de este estudio resultan evidentes; ha quedado claramente demostrado que:
a. El Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda. posee

una adecuada potencia neutralizante contra los venenos de serpientes de las
especies Micrurus mipartitus, Micrurus surinamensis, Micrurus dumerilii, Micrurus
spyches medemi y Micrurus spixii.
La Dosis Efectiva Media (De50) del suero antiofídico Antielapídico Anticoral de

Laboratorios Probiol frente al veneno de cada una de las especies de serpientes
mencionadas, según las pruebas y experimentos realizados es la siguiente:
Especie. Dosis Efectiva Media

(De50)*
Micrurus mipartitus. 1,37*
Micrurus surinamensis. 1,12*
Micrurus dumerilii. 1,25*
Micrurus spyches medemi. 1,37*
Micrurus spixii. 2,37*
Micrurus spp. Mezcla. 1,20*
Tabla 3. Dosis efectiva media de los venenos estudiados.

*De50 expresada en miligramos de veneno neutralizados por cada 10 ml de antiveneno.
De aquí se derivan dos conclusiones muy importantes, a saber:
1. El mencionado suero Antiofídico Antielapídico es efectivamente un antiveneno

ANTIMICRÚRICO o ANTICORAL, ya que neutraliza adecuadamente los venenos
de las especies más representativas de este género en Colombia.
2. El mencionado Suero Antiofídico Antielapídico es efectivamente un antiveneno

POLIVALENTE, ya que neutraliza adecuadamente los venenos de un importante
número de especies de serpientes del género Micrurus, incluida la especie
Micrurus mipartitus (coral “rabo de ají”), cuyo veneno no es neutralizado por otros
antivenenos anticorales extranjeros.
b. El Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda. posee

una adecuada potencia para neutralizar la mezcla de todos los venenos
anteriormente mencionados; según las pruebas y experimentos realizados, la
Dosis Efectiva Media (De50) del Suero frente a la mezcla de los venenos es de 1,2
26
mg de veneno neutralizados por cada 10 ml de antiveneno, lo que ratifica y

confirma la condición de ANTICORAL POLIVALENTE.
c. Por ser elaborado a partir del veneno de serpientes de coral colombianas,

procedentes de las diversas zonas geográficas del país, no cabe duda que el
Suero antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda. debe ser el antiveneno de
elección para el tratamiento eficaz de los accidentes causados por la mordedura
de este tipo de serpientes en Colombia.
d. La confirmada condición de POLIVALENTE del Suero Antiofídico Anticoral del

Laboratorios Probiol permite que los accidentes causados por este tipo de
serpientes puedan ser tratados con eficacia y seguridad sin que sea necesaria una
exhaustiva identificación de la especie causante por parte del personal médico o
de enfermería que atienda el caso.
e. La demostrada capacidad neutralizante (De50) del Suero Antiofídico Anticoral de

Laboratorios Probiol Ltda. frente a los venenos micrúricos, guarda una coherente
relación de proporción con la cantidad promedio de veneno inoculada en la
mordida de la mayoría de las especies de corales estudiadas y que está entre los
5 y 25 mg de veneno, esto significa que una dosis inicial de entre 5 y 10 frascos
viales de 10 ml del antiveneno permiten tratar adecuadamente un accidente
micrúrico promedio, siempre y cuando su aplicación sea precoz y por la vía de
administración más adecuada (intravenosa).
f. No dudamos en recomendar este producto como un Suero Antiofídico Anticoral

de primera calidad, capaz de neutralizar adecuadamente los venenos de
serpientes de coral colombianas y consideramos urgente su fabricación industrial y
su posterior distribución a todas las regiones del país.
Autenticación y aval de contenidos, procedimientos, resultados y conclusiones.

El Director y Responsable por esta investigación:
_____________________________________
Héctor Charry Restrepo. C.C. 79’387.066 Btá.
Biólogo – Herpetólogo.
Director científico del Centro de Investigación
Y Asesoría Ofidiológica “Ophidia”.
27
5.
Bibliografía.
En la realización de las diversas etapas que tuvo la elaboración del presente
trabajo de investigación se consultaron numerosas fuentes bibliográficas,
electrónicas y entrevistas personales con expertos y autoridades en el tema. Las
principales fuentes bibliográficas se relacionan a continuación:
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__________________________________________________________________
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ES PROPIEDAD DE LABORATORIOS PROBIOL LTDA.
36

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INFORME FINAL

Determinación de la Dosis Efectiva Media (De50)

Héctor Charry Restrepo.

Manizales (Caldas) 21 de agosto de 2006

1.5.2 Accidente elapídico. 8

1.5.3 Accidente micrúrico. 9

1.5.4 Suero Antiofídico Antielapídico Antimicrúrico. 15

1.6 Cantidad de pruebas realizadas. 15

2.1 Dosis Efectiva media (De50). 17

2.3.1 Venenos de serpientes del género Micrurus. 17

2.3.2 Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios Probiol Ltda. 18

2.3.2.1 Identificación de los Sueros Antiofídicos utilizados para las pruebas. 19

2.3.3 Solución Salina Normal. 19

2.3.5 Ratones blancos de laboratorio. 19

2.4 Métodos utilizados para la realización de las pruebas (procedimientos). 21

3.1 Información general. 25

3.2 Tabla de resultados de la De50 del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios

3.3 Tabla de resultados de la De50 del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios

3.4 Tabla de resultados de la De50 del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios

3.5 Tabla de resultados de la De50 del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios

3.6 Tabla de resultados de la De50 del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios

3.7 Tabla de resultados de la De50 del Suero Antiofídico Anticoral de Laboratorios

Tabla 1: Número de pruebas, venenos probados y experimentos realizados. P 16

Fig. 1. Detalle de la cabeza de Micrurus sp. P 10

El Suero Antiofídico Antielapídico Anticoral (suero Antimicrúrico) elaborado por

A pesar del importante acervo probatorio de la indiscutible eficacia de este

El presente documento es el informe final de dicho estudio y contiene los

1.2 Advertencia de Confidencialidad y Propiedad del Informe.

1.3 Objetivos generales del estudio.

1.5.1 Dosis efectiva media (De50).

1.5.1 Dosis Efectiva Media (De50).

1.5.1.1 Términos similares. Diferenciación.

La abreviación CL50 (concentración letal media) indica la concentración mínima

La DL50 se expresa en miligramos de sustancia tóxica o de veneno por kilogramo

1.5.1.2 El modelo biológico.

biológico o el tipo de animal utilizado, la raza, el peso, el sexo, la edad, la dieta,

Aunque para valorar cómo respondería un organismo humano no basta una

1.5.2 Accidente elapídico.

1.5.2.1 La subfamilia Elapinae.

Los géneros más representativos de esta subfamilia son: Dendroaspis,

1.5.3 Accidente micrúrico.

1.5.3.3 Diversidad de especies.

Género Micrurus (Serpientes de coral verdaderas) especies reportadas en

1.5.3.4 Características generales de las serpientes del género Micrurus.

Fig. 7 Región caudal de Micrurus spp.

1.5.3.5 Los venenos micrúricos.

La mayoría de estos venenos tiene una actividad de bloqueo postsináptico, sin

1.5.3.6 Especies de interés médico.

Fig. 8. Micrurus mipartitus. (Coral “Rabo de ají”).

Fig. 9. Micrurus dumerilii.

Fig. 10. Micrurus spyches medemi.

Fig. 11. Micrurus spixii obscurus.

Fig. 12. Micrurus surinamensis surinamensis.

1.5.4 Suero Antiofídico Antielapídico Antimicrúrico.

1.6 Cantidad de pruebas realizadas.

Prueba. Veneno. Experimentos.

Tabla 1. Número de pruebas, venenos probados y experimentos realizados

Fig. 13. Presentación del producto Suero Antiofídico Antielapídico (Anticoral) de

2.1 Método general utilizado para determinar la De50.

2.2. Verificación y repetibilidad de las pruebas.

2.3 Materiales utilizados para la realización de las pruebas.

2.3.1 Venenos de serpientes del género Micrurus.

2.3.1.1 Tipos de venenos utilizados.