Cap 3

CAPITOLUL
Cap.3 HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI I A CILOR BILIARE Cristina VIDULESCU, Laureniu Mircea POPESCU
HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI I A CILOR BILIARE

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU
1. INTRODUCERE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43 2. ORGANIZAREA HISTOLOGIC A FICATULUI . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43 2.1. Structur general . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .43 2.2. Tracturile portale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .45 2.3. Organizarea parenchimului hepatic: lobulul hepatic clasic . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .45 2.4. Cile biliare intrahepatice . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .46 2.5. Vasele sanguine . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .47 2.6. Limfaticele . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48 2.7. Nervii . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .48 2.8. Modaliti alternative de interpretare a structurii histologice a ficatului . . . . . . . . . . .49 2.8.1. Lobulii clasici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .49 2.8.2. Lobulii portali . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .49 2.8.3. Acinii hepatici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50 2.9. Zonarea lobulilor i a acinilor hepatici . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .50 3. CELULELE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .52 3.1. Numr i tipuri de celule . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .52 3.2. Celulele sinusoidelor . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .52 3.3. Celulele din spaiul perisinusoidal (Disse) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .57 3.4. Celulele parenchimului hepatic - hepatocitele . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .59 3.5. Canaliculele biliare interhepatocitare, originea sistemului de ci biliare . . . . . . . . . .67 3.6. Celulele ductelor biliare intrahepatice . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .67 3.7. Celulele spaiului portal . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .69 3.8. Celulele progenitoare: celule stem i celule ovale . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .69 4. MATRICEA EXTRACELULAR . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .73 5. CILE BILIARE EXTRAHEPATICE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .75 5.1. Ductele biliare extrahepatice . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .75 5.2. Vezica biliar . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .75 5.3. Vasele, limfaticele i nervii vezicii biliare . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .78 BIBLIOGRAFIE . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .78
Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI
1. INTRODUCERE Structur Ficatul este cea mai mare gland (i cel mai mare organ) din organismul uman, cu greutatea de ~1500 g la adult, reprezentnd ~2% din greutatea corpului. Unicitatea ficatului ca organ este dat de poziia sa strategic ntre cele dou teritorii majore ale sistemului vascular: sursa sanguin aferent major (75%) este vena port, prin care primete sngele venos de la tubul digestiv subdiafragmatic, pancreas i splin, iar artera hepatic (25%) aduce din circulaia general, snge oxigenat. Sngele din aceste dou surse, cu un debit de 1 ml/min/g de esut, se amestec n sinusoidele hepatice, unde moleculele au acces direct la celulele hepatice. Sngele care prsete ficatul este vrsat prin venele hepatice n vena cav inferioar. De la ficat la duoden pleac sistemul de ci biliare intrahepatice i extrahepatice, prin care se elimin bila produs (n cantitatea de cca 1 litru/zi) de celulele hepatice. Cea mai mare parte a bilei ajunge nti n vezica biliar, unde se concentreaz de cca 10 ori i este pstrat pn se descarc n duoden, ca rspuns la ingestia de alimente. Ficatul const din miriade de uniti morfofuncionale microscopice. Acestea au fost numite tradiional lobuli hepatici, marcai de repere microvasculare - venule hepatice eferente centrale (vene centrolobulare) i triade portale periferice (spaii Kiernan), ntre care se ntind coloane radiare de celule hepatice (hepatocite), alternnd cu sinusoide. Un concept mai funcional este acela modern de acini hepatici, n care reperele sunt schimbate, punndu-se n centru ramurile terminale arteriale hepatice nutritive, sursa de snge oxigenat, situate alturi de ramurile terminale portale i biliare. Fiecare acin este divizat n trei zone funcionale, n funcie de distana de la vasele nutritive.1,2,3 Funcii Gndirea esoteric veche considera ficatul ca sediu al sufletului. Gndirea raionalist a acumulat dovezi experimentale pentru un numr impresionant de funcii hepatice interdependente, vitale pentru organism: sinteza proteinelor proprii (hepatocitare): receptori, enzime, transportori, pompe, care ndeplinesc funciile hepatice; prelucrarea moleculelor alimentare, absorbite din tubul digestiv, aduse la ficat de sngele portal: - metabolismul glucidelor, lipidelor, aminoacizilor; - detoxifierea i inactivarea substanelor potenial toxice prin oxidare sau conjugare, pentru a forma produi inofensivi, care sunt excretai
prin bil i ajung din nou n intestin, de unde se elimin (sau se reabsorb); controlul homeostaziei: stocarea i/sau eliberarea n snge a moleculelor prelucrate, ce sunt apoi transportate la celulele din organele i esuturile organismului; un exemplu este meninerea constant a glicemiei, prin capacitatea de a prelua i depozita glucoza sub form de glicogen i de a elibera glucoza - surs important de energie cnd e necesar; ureogeneza: detoxifierea amoniacului rezultat din metabolismul aminoacizilor exogeni i endogeni printr-un ciclu de reacii - ciclul ureei, cu formarea moleculelor hidrosolubile de uree i eliberarea lor n snge pentru a fi excretate de rinichi; prelucrarea unor molecule endogene: glucide, lipide, aminoacizi, hormoni; de exemplu conversia tiroxin (T4) - triiodotironin (T3); secreie endocrin - sinteza i secreia n snge a majoritii proteinelor plasmatice; secreie exocrin - sinteza i secreia de bil: ca gland exocrin asociat tractului digestiv, ficatul produce continuu bila, un fluid care este n final excretat n duoden, prin sistemul de ci biliare; bila faciliteaz digestia, prin emulsionarea grsimilor alimentare, cu formarea de micele, care sunt mai repede absorbite de ctre epiteliul intestinal; de asemenea, prin bil se realizeaz i: - eliminarea bilirubinei din snge, - traficul de IgA: funcie accesorie imun, - eliminarea substanelor detoxifiate; funcie de aprare imunologic - filtrarea sngelui prin fagocitarea materialelor strine de ctre macrofagele ficatului; hematopoieza prenatal i reglarea hematopoiezei n viaa postnatal.
2. ORGANIZAREA HISTOLOGIC A FICATULUI 2.1. Structur general Ficatul este un organ parenchimatos, compus din urmtoarele compartimente: hepatocite, celule epiteliale majoritare, aezate n cordoane radiare; capilare sinusoide - calea final comun pentru cele dou sisteme vasculare aferente - venos portal i arterial hepatic, ce se vars ntr-o ven hepatic eferent central, origine a venelor hepatice eferente; spaiul perisinusoidal, spaiu de schimb situat
43
Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI
SINUSOID HEPATIC CELULA KUPPFER Spaiu perisinusoidal Disse
CELULE ENDOTELIALE
HEPATOCIT
Nucleu Domeniu lateral
CORDON HEPATIC
MICROVILI n domeniul sinusoidal
CANALICUL BILIAR n domeniul biliar
LOBL HEPATIC CLASIC

Venula hepatic eferent central (centrolobular)
Cordoane de hepatocite
Sinusoide hepatice
Ramuri terminale - portale - arteriolare - biliare
SPAIU PORTAL CU TRIADA PORTAL

Arter hepatic
Ven port
Duct biliar interlobular
Fig.1 Componentele histologice ale ficatului.

44
ntre hepatocite i sinusoide, n care se afl celule perisinusoidale; ci biliare: canaliculele biliare interhepatocitare, dependine ale hepatocitelor, se continu cu ductele biliare intrahepatice, ce se vars n ductele biliare extrahepatice; tracturi (spaii) portale, reprezentnd ramificaii din eafodajul de esut conjunctiv, care acoper ficatul i nsoesc n ramificarea lor, vasele, nervii, limfaticele, ductele biliare, aa nct fiecare spaiu portal conine cte un element vascular, biliar, limfatic, nervos, de acelai ordin de ramificare, nglobate n esut conjunctiv lax. Volumul relativ al componentelor ficatului este prezentat n Tabelul 1.
Tabel 1 Volumul relativ al componentelor parenchimului hepatic.4 COMPARTIMENT SPAIUL INTRALOBULAR* Hepatocite Sinusoide SPAIUL EXTRALOBULAR Spaiu portal - esut conjunctiv - ramuri ven port - ramuri arter hepatic - limfatice Vene centrale Vene hepatice 70,6 1,1 22,3 0,3 7,1 0,5 4,3 0,4 2,0 0,2 1,8 0,4 0,2 0,02 0,08 0,06 1,4 0,1 1,3 0,2 % din volumul ficatului
2.2. Tracturile portale Capsula Glisson, format din esut conjunctiv dens, gros de 70-100 m, acoper toat suprafaa ficatului i este acoperit pe majoritatea suprafeei de mezoteliul peritoneal, cu excepia unei mici arii unde faa superioar vine n contact direct cu diafragma. Ea este mai groas pe faa inferioar, n dreptul hilului, numit i porta hepatis, pe unde intr vasele sanguine i nervii, i pe unde pleac ductele biliare hepatice drept i stng. Travee de esut conjunctiv pleac din capsul i se ramific n parenchimul hepatic, nsoind n traiectul lor vasele sanguine i limfatice, nervii i ductele biliare. Ficatul are 2 lobi, marcai la suprafa de inseria ligamentului falciform pe faa superioar (vezi anatomia), dar distribuia arborelui vascular i biliar, st la baza mpririi n lobi, sectoare, segmente, lobuli. La om, esutul conjunctiv este distribuit de-a lungul arborelui vascular i biliar, fiind concentrat n spaii prismatice triunghiulare - spaii portale Kiernan (tracturi portale interlobulare) - n jurul unei triade portale, formate dintr-o ramur a venei porte, o ramur a arterei hepatice, ambele cu caracter preterminal i o ramur a sistemului de ducte biliare de acelai ordin de ramificare. De fapt, termenul de triad ar trebui nlocuit cu acela de tetrad, deoarece n spaiul portal se afl i un al patrulea element, un vas limfatic, originea sistemului de limfatice.
*Se exclud reeaua de reticulin, canaliculele biliare intralobulare.
2.3. Organizarea parenchimului hepatic: lobulul hepatic clasic Parenchimul hepatic uman apare continuu, printre spaiile portale, fr limite clare ntre lobuli.
Epiteliul su are un aspect uniform n toat masa organului: hepatocite dispuse n cordoane (lame) radiare, alternnd cu capilare sinusoide, ce converg radiar spre o ven central. Continuitatea lamelor de hepatocite este ntrerupt doar de prezena din loc n loc a spaiilor portale. Lobulul hepatic a fost descris de Kiernan (1833)8 ca unitate structural i funcional a ficatului. De aceea, este numit lobul clasic, pentru a-l distinge de alte uniti, descrise ca urmare a unor concepii mai recente asupra arhitecturii ficatului (vide infra). Reperele lobulului clasic. Alternana venelor centrale i a spaiilor portale triunghiulare, creaz repere, n raport cu care se pot trasa pe seciuni arii poligonale repetitive, care au n centru cte o ven central, iar la periferie cteva spaii portale (de obicei dou trei) (Fig.1,2). Forma i mrimea. Reconstrucia spaial a seciunilor sugereaz o unitate morfologic cu form spaial de prism hexagonal, cu diametrul de aproximativ 0,7 mm i lungimea de 2 mm. Spaiul portal (Fig.2-4) poate fi privit i ca locul de ntlnire a trei unghiuri ale acestor prisme hexagonale. El apare pe seciune ca o zon mic, triunghiular, cu esut conjunctiv, care nvelete o
45
LOBL HEPATIC
Venul hepatic eferent (centro-lobular)
Plex periductal
TRACT PORTAL
Duct biliar interlobular
Arteriol hepatic terminal
Limfatic portal Ven portram interlobular
Arter hepaticram interlobular Venula de racord
Venul portal terminal perilobular
Duct biliar terminal
Sinusoide
Fig.2 Tractul portal (spaiu portobiliar Kiernan) si ramificaiile terminale ale elementelor vasculare i biliare.
ramur a arterei hepatice, o ramur a venei porte, ambele cu caracter preterminal i o ramur a sistemului de ducte biliare cu acelai ordin de ramificare. Conine i un limfatic origine a sistemului de vase limfatice. Ramurile portale terminale apar lateral la scurte intervale de-a lungul ramurilor portale (v. Fig. 2) i apoi, prin mici venule de racord, conflueaz cu sinusoidele hepatice, capilare cu perete subire, care ocup spaiile dintre lamele radiare de celule hepatice i se vars n vena central (centrolobular). Astfel, celulele hepatice sunt expuse unui volum mare de snge care curge centripet n sistemul labirintic de sinusoide. Bila este secretat continuu, ntr-o reea de canalicule biliare intercelulare, cuprinse ntre lamele de celule hepatice i curge centrifug spre ducte terminale periferice, care se deschid n ductele biliare din spaiile portale. Sngele i bila sunt n contracurent.
2.4. Cile biliare intrahepatice (Fig.3) La periferia lobulului hepatic clasic (n axul acinului hepatic, vide infra), canaliculele biliare conflueaz n ductule terminale (Hering), numite i colangiole. Peretele cilor biliare este format din celule biliare turtite, aezate pe o membran bazal. Ductele biliare interlobulare (diametrul de 30-40 m) fac parte din triada portal, alturi de arteriola hepatic i venula portal din spaiul portal. Peretele lor este format dintr-un epiteliu simplu cuboidal sau columnar, aezat pe o membran bazal. Ductele septale continu ductele interlobulare, progresiv mai mari, cptuite cu epiteliu cuboidal i columnar, care capt progresiv o tunic fibroas cu numeroase fibre elastice i o muscular fin. Ele converg n porta hepatis n ductele hepatice drept i stng, care iniiaz sistemul de ducte biliare extrahepatice (vide infra).
46
Canalicule Celule endoteliale biliare sinusoidale intralobulare
Arteriol hepatic
A V h D
Ven port
Pasaje Hering
Ducte biliare interlobulare
Fig.3 Tract portal i ramificaiile intralobulare ale canaliculului biliar interlobular. 2.5. Vasele sanguine Ficatul are o circulaie cu caracteristici speciale: e situat ntre sistemul portal i circulaia general. Vascularizaia aferent este dubl: venoas i arterial. Vena port este vasul aferent principal (75%) prin care vine snge venos de la tubul digestiv, splin i pancreas. Astfel, sngele ce vine la ficat aduce substanele absorbite n intestin, produsele distrugerii hematiilor n splin i hormoni ai pancreasului endocrin. - Dup ce intr prin porta hepatis, vena port se divide n vene interlobare, care la rndul lor se divid n vene conductoare cu diametrul de cca 400 m i perei foarte subiri, comparativ cu vene de acelai calibru din alte localizri. Ele se divid n vene interlobulare. - Acestea din urm se ramific n vene mai mici, venule portale, cu diametrul de cca 280 m i perete foarte fin, pe care le gsim n spaiile portale (vezi Fig.4), formnd triada portal alturi de o ramur a arterei hepatice i un duct biliar (toate cu un traiect paralel cu cel al venei centrale). - Din acestea se formeaz ramuri terminale laterale, numite venule portale terminale sau venule perilobulare, ce emerg la mici intervale de-a lungul precedentelor. Ele merg de-a lungul limitelor lobulilor clasici i se ramific n scurte venule de racord, care se vars n sinusoide (vezi Fig.2). Artera hepatic, ramur din trunchiul celiac, aduce restul (25%) sngelui aferent. - La intrarea prin porta hepatis, artera hepatic se ramific n artere interlobare i interlobulare. - Majoritatea sngelui arterial este distribuit prin capilare esutului conjunctiv al ficatului, iar un
Fig. 4 Spaiu portal: V - venul portal; A - arteriol hepatic; D - ducte bilare interlobulare; s - sinusoide; h - hepatocite; sgeat - spaiul portal. Coloraie tricrom Masson. volum mai mic ajunge la arteriolele hepatice din triadele portale. - Acestea dau arteriole laterale terminale, care se deschid n sinusoide i alte ramuri mici care se capilarizeaz n jurul ductului biliar al triadei, formnd plexul peribiliar sau periductal. Acesta din urm se deschide direct n sinusoide, nu n venulele portale, cum se credea nainte de studiul microvascularizaiei la microscopie electronic de scanning (SEM).9,10,13 Astfel, o mare parte din sngele arterial ajunge la sinusoide indirect, prin plexul peribiliar. Vascularizaia bogat a ductelor biliare sugereaz posibilitatea ca unii constitueni ai bilei s fie reabsorbii n trecerea lor prin ductele biliare intrahepatice. Sinusoidele (v. Fig.1,2) - Funcia primar a circulaiei hepatice (schimbul de molecule ntre snge i hepatocite) este dus la ndeplinire n sinusoidele hepatice, care formeaz n lobuli un plex tridimensional complicat, totaliznd o suprafa de schimb enorm pentru schimbul metaboliilor ntre snge i hepatocite. - Sngele arterial i cel venos se amestec n sinusoide, astfel c hepatocitele nu sunt niciodat expuse unui snge complet oxigenat. Fiecare celul din cordoanele radiare de hepatocite este expus pe un versant sau, mai des, pe dou, la sngele care curge prin sinusoide. - Sinusoidele hepatice sunt mai largi dect capilarele obinuite, iar pereii lor, formai dintr-un singur rnd de celule endoteliale turtite, se adapteaz suprafeei lamelor de hepatocite care le nconjoar pe toate prile. - Sunt ns separate de hepatocite printr-un spaiu ngust numit spaiu perisinusoidal Disse.
47
p v
Fig 5. Lobulul clasic; parenchim hepatic uman. Lobulii hepatici nu sunt clar delimitai prin esut conjunctiv. v - venule centrale (centrolobulare) p- spaii portale Coloraie HE.
v p
Vascularizaia eferent. Sngele prsete sinusoidele prin vena central (venul centrolobular, venul hepatic terminal), de unde trece apoi n venele sublobulare. Venele sublobulare merg n unghi drept fa de venele centrale. Ele au o adventiie bine dezvoltat format din fibre de colagen i elastice, aezat direct sub endoteliu, deoarece tunica medie lipsete. Ele se deschid n venele colectoare. Acestea din urm converg pentru a da n final venele hepatice (dou sau mai multe). Venele hepatice nu au valvule, dar au o tunic medie bine dezvoltat. Ele se vars n vena cav inferioar.
Ficatul produce o mare cantitate de limf, 1/4 pn la 1/2 din limfa ce ajunge n canalul toracic. Limfa hepatic colecteaz molecule mari i mici, proteine plasmatice, detritusuri celulare, bacterii, substane strine i fluid. Difer de limfa format n alte regiuni prin coninutul mare de proteine plasmatice. Conine proteine (3-5%), albumin n cea mai mare parte. Coninutul n electrolii este asemntor cu al plasmei, dar raportul albumine/globuline este mai mare dect n plasm. Cnd eferena venoas este obstrucionat, presiunea din sinusoide crete, producia de limf n spaiul perisinusoidal crete, ceea ce joac un rol n favorizarea ascitei.
2.7. Nervii 2.6. Limfaticele n interiorul lobulilor nu au fost descrise limfatice, originea reelei limfatice se afl n capilarele limfatice din spaiul portal, spre care curge fluidul ce rmne necaptat de hepatocite. Plasma, ce iese prin fenestraiile sinusoidelor, merge prin spaiile Disse,14 ntr-o direcie contrar curgerii sngelui, strecurndu-se n spaiile Mall15 din jurul ramurilor terminale ale venei porte i ale arterei hepatice de la periferia lobulilor clasici (n axul acinilor hepatici). De aici, intr n capilarele limfatice care nsoesc vasele sanguine i ductele din triada spaiului portal. Ele se continu cu reeaua de limfatice, care este paralel cu ramurile venei porte, de la spaiile portale interlobulare pn la porta hepatis. n final, 80% din limfa hepatic se vars n canalul toracic, iar restul dreneaz n reeaua de limfatice care nsoete venele hepatice.18 Plexul nervos hepatic conine: fibre simpatice din ganglionii simpatici T7-T10, care fac sinaps n plexul celiac;20 fibre parasimpatice din nervii vagi drept i stng; fibre din nervul frenic drept. Nervii efereni vegetativi se ramific odat cu arborele vascular i pot fi observai n esutul conjunctiv din jurul triadelor portale. Fibrele simpatice inerveaz vasele sanguine. Fibrele parasimpatice inerveaz ductele biliare. La oarece i obolan fibrele nervoase vin n contact numai cu celulele din regiunea periportal a lobulului clasic.19 La om i la alte specii fibrele nervoase se gsesc peste tot n lobul. Terminaii simpatice adrenergice, axoni amielinici, se pot vedea n spaiul perisinusoidal Disse, foarte aproape de hepatocite.21
48
LOBUL CLASIC LOBUL PORTAL
Fig.6 Interpretri alternative ale structurii parenchimului hepatic: - lobul clasic - lobul portal - acin hepatic cu zonare.
ACIN
2.8. Modaliti alternative de interpretare a structurii histologice a ficatului Majoritatea glandelor exocrine sunt compartimentate de esut conjunctiv n lobi i lobuli, iar parenchimul lor este format din grupuri de celule epiteliale, formnd acini, ce se vars la extremitile unui arbore de ducte excretorii. Ficatul este diferit, prin dispoziia particular a esutului conjunctiv, care nu delimiteaz lobulii (Fig.5) i prin poziia sa unic n raport cu sursele de snge arterial i venos. Delimitarea unitii morfofuncionale de baz poate fi fcut conform unor linii imaginare, care pot fi trasate n cel puin 3 moduri (Fig.6): 1. lobulul clasic, centrat de venula central; 2. lobulul portal, centrat de spaiul portal; 3. acinul hepatic, centrat de vasele aferente cu caracter terminal. Evident c cele trei interpretri nu intr n conflict, ci sunt moduri alternative de a defini unitile morfofuncionale ale parenchimului hepatic. 2.8.1. Lobulii clasici (Fig.5-8, v. Fig.1) Definiie. Lobulul clasic este definit prin localizarea central a venulei hepatice eferente (venei centrale
sau centrolobulare) i localizarea periferic a ramurilor vasculare preterminale din spaiul portal i prin distribuia radiar a sinusoidelor, alternativ cu lamele de hepatocite. Forma este de prism hexagonal. Axul central este dat de venula hepatic terminal (vena central sau centrolobular). Limitele sunt marcate de spaii portale cu triade portale. Fluxul sanguin i biliar. Sngele curge centripet prin sinusoide, iar bila curge centrifug prin canaliculele biliare intercelulare. Semnificaie. Conceptul de lobul clasic permite nelegerea clar a raportului dintre morfologia ficatului i funciiile sale exo- i endocrin. Lobulul clasic pare a fi adevrata unitate anatomic a parenchimului hepatic, mai ales din perspectiva histologiei comparate: la unele animale (porc, urs, cmil), aceast unitate este clar demarcat prin septuri aproape complete de esut conjunctiv (v. Fig.7). 2.8.2. Lobulii portali (v. Fig.6) Pe la nceputul secolului XX a fost propus o alt interpretare a organizrii ficatului, lobulul portal. Definiie. Lobulul portal este o mas de parenchim n jurul fiecrui spaiu portal, cuprinznd acele celule care secret bila ce se vars n ductul biliar al acelui spaiu portal.
49
Fig.7 Lobulul clasic. Ficat de porc. Lobulii sunt delimitai complet prin esut conjunctiv. Coloraie tricrom Masson. Micrografie. Form. Pe seciune are form triunghiular, iar forma spaial se nscrie ntr-o prism triunghiular. Axul central trece prin ductul biliar al triadei dintr-un spaiu portal. Limitele periferice deseneaz un triunghi, cu cte o venul hepatic terminal (ven central) n fiecare din cele trei unghiuri. Comparaie cu lobulul clasic. Include sectoare din trei lobuli clasici adiaceni unui anume spaiu portal. Semnificaie. Se argumenteaz c aceast mprire concord cu cea a altor glande exocrine n care vascularizaia lobulilor pleac de la vase axiale, iar produsul secretat se vars ntr-un duct central colector. Totui, ea nu este unanim acceptat. 2.8.3. Acinii hepatici (Fig.9) Majoritatea cercettorilor prefer acinul hepatic (Rappaport, 1958)22 ca unitate elementar structural i funcional a ficatului . Definiie. Acinul const dintr-o mas de celule, vascularizat de ramuri terminale ale venei porte i arterei hepatice i drenat de cea mai mic ramur din sistemul de ducte biliare. Form. Ovoid sau romboid. Axe. Axul su mic este paralel cu ramurile laterale cu caracter terminal ale fiecrei arteriole hepatice, venule portale i duct biliar. El unete dou spaii portale adiacente, situate la capetele axului. Axul lung al acinului este o linie imaginar care unete cele dou vene centrale din lobulul clasic, situate la fiecare extremitate a acestui romboid i acum numite venule hepatice terminale, reprezentnd originea sistemului de vene hepatice. Comparaie cu lobulul clasic. Acinul include cte un sector din doi lobuli clasici adiaceni.
50
Fig.8 Lobulul clasic. Ficat uman. Microvascularizaie. Se observ zonarea lobulului: zona 1 primete cea mai bogat aferen arterial. Injecie intrarterial cu tu de China. Micrografie x 100. Reprodus cu permisiune din: L.M. Popescu et al. - Atlas de Histologie, Editura Medical, Bucureti, 1995. Semnificaie. Acinul a fost adoptat pentru c a uurat explicarea degenerrii celulelor hepatice, care apare dup atacul hipoxic sau toxic asupra ficatului, ca i a evoluiei ulterioare: regenerare sau ciroz hepatic. Acinul a devenit baza consideraiilor actuale asupra funciei hepatice, deoarece permite explicarea zonrii parenchimului hepatic, n legtur cu distana fa de arteriola hepatic terminal nutritiv, ce aduce snge oxigenat.23
2.9. Zonarea lobulilor i a acinilor hepatici Acum 70 de ani, la microscopul optic, n lobulul clasic, au fost observate diferene n aspectul hepatocitelor, n trei zone concentrice. S-a interpretat c aceste variaii reflect gradul de activitate metabolic a celulelor din aceste trei zone. O zon la periferia lobulului a fost desemnat ca zon cu funcie permanent, o zon intermediar ca zon cu funcie variabil, iar zona din jurul venei centrale zon de repaus permanent.24 tiind c sngele intr n lobulul clasic pe la periferie i iese prin vena central, s-a dedus c activitatea hepatocitelor depinde de localizarea lor n raport cu concentraia oxigenului de-a lungul traiectului sinusoidelor. Celulele de la periferie ar fi situate mai favorabil, cele mijlocii mai puin, iar cele din jurul venei centrale ar fi expuse la snge cu mai puin oxigen i metabolii.27 Aceast interpretare a fost sprijinit de observaiile patologilor asupra necrozei centrolobulare ce se instaleaz n strile patologice cu hipoxemie. Concepia actual este c heterogenitatea citolo-
TRIADA PORTAL
RAMURI TERMINALE - ARTERIALE - PORTALE - BILIARE VENUL HEPATIC TERMINAL (CENTROLOBULAR)
ACINUL HEPATIC
Fig.9 Arhitectura acinului hepatic. Prisma hexagonal (n galben) ar corespunde lobulului hepatic clasic. gic a hepatocitelor nu depinde n totalitate de gradientul oxigenului disponibil, ci i de ali factori mai puin cunoscui, dar mprirea n zone este justificat. Aceasta a fost aplicat acinilor hepatici, astfel: zona 1 - o zon elipsoidal, n jurul arteriolei hepatice i venulei portale terminale; zona 2 - intermediar; zona 3 - celulele de la extremitile acinului (spre vena central) (v. Fig.6-8). Sngele curge strbtnd pe rnd aceste zone i pleac prin ramurile terminale ale venei hepatice (venele centrale) pe la extremitile acinului. De-a lungul cordoanelor de celule hepatice pot fi demonstrate diferenele de comportament, ultrastructur i activitate enzimatic ntre hepatocitele din zone diferite: zona 1 - sunt primele care primesc oxigenul i substanele nutritive sau toxice din snge; - mor ultimele cnd circulaia este afectat i se regenereaz primele; - sunt primele afectate n cazul ocluziei i stazei biliare; - predomin enzimele metabolismului oxidativ i ale gluconeogenezei, respectiv glicogenogenezei; zona 3 - sunt ultimele care primesc ce a mai rmas din oxigen i substanele din snge; - sunt primele care arat semne de necroz ischemic (necroz centrolobular); - reacioneaz ultimele la ocluzia i/sau staza biliar; - sunt primele care se ncarc cu lipide, consecutiv atacului toxic sau hipoxic; - celulele sunt foarte bogate n enzime implicate n glicoliz i n metabolizarea lipidelor i a medicamentelor; zona 2 - celulele au o configuraie funcional intermediar. Toate hepatocitele au probabil aceleai potenialiti, dar ele exprim diferene n ultrastructur i funcie, n relaie cu concentraia oxigenului i a altor molecule din zona lor acinar. Hepatocitele din orice zon au capacitatea de a-i schimba structura i funcia ca rspuns la modificarea micromediului nconjurtor. De exemplu, administrarea de fenobarbital induce o hipertrofie a reticulului endoplasmic neted (REN), care iniial are loc numai n hepatocitele zonei 1, dar dac ea este continuat timp de 10 zile, hipertrofia REN i,
51
h s
k h
li e Ito h
Fig.10 Parenchim hepatic, cordoane de hepatocite alternnd cu sinusoide. h- hepatocite; e-celule endoteliale; k-celule Kupffer; li-limfocit; Ito- celul Ito; Coloraie HE. Micrografie x 1000.
concomitent, creterea asociat a enzimelor de metabolizare a medicamentului se produc i n zona 2 i, n final, n zona 3.
sursa meninerii i regenerrii parenchimului hepatic.58 (Vezi Tabelul 2)
3.2. Celulele sinusoidelor (Fig.11-14) 3. CELULELE 3.1. Numr i tipuri de celule Exist aproximativ 202x103 celule/mg de esut n ficatul uman normal. Ele sunt grupate, pe criteriul localizrii, n: hepatocite (celule hepatice parenchimatoase), celule ale sinusoidelor i celule perisinusoidale (Fig.10). La acestea se adaug: celule biliare care formeaz peretele cilor biliare intrahepatice, celulele din spaiul portal5 precum i celulele progenitoare (stem), considerate Tabelul 2 Volumul relativ ocupat de diferite tipuri celulare din ficat. CELULE EPITELIALE HEPATOCITE CELULE BILIARE MEZENCHIMALE ENDOTELIALE KUPFFER STELATE (ITO) % 65 60 5 35 19 15 1 SINUSOIDE SPAIU PERISINUSOIDAL SPAIU PERISINUSOIDAL ? PARENCHIM DUCTE BILIARE INTRAHEPATICE COMPARTIMENT Tipuri de celule. Sinusoidele, capilare de tip fenestrat, sunt mrginite de celule endoteliale printre care se afl celulele Kupffer, tipuri celulare distincte, cu origine i funcie diferit. Celulele endoteliale Morfologie: Celulele endoteliale formeaz peretele discontinuu i fenestrat al sinusoidelor (Fig.11). Studiile asupra ratei de clearance a substanelor dizolvate n snge i asupra mrimii particulelor care pot traversa peretele sinusoidelor sugereaz prezena discontinuitilor n perete, care permit accesul direct al plasmei sanguine la celulele hepatice. Acestea au fost confirmate de imaginile de microscopie electronic (ME), n care se observ c, n unele zone, extremitile efilate ale celulelor endoteliale pot fi separate de un spaiu de 0,1-0,5 m.26 n plus poriunile subiri ale celulelor au fenestraii cu mrimi i forme variate, lipsite de diafragm. Aceste fenestrae apar adesea n grupuri care au aspect de sit (engl. sieve-plate).27 Deci, peretele sinusoidelor hepatice are att discontinuiti ntre celule, ct i fenestrae transcelulare (Fig.12). Celulele endoteliale sunt unite prin numeroase jonciuni gap.28 Membrana bazal. ntre endoteliile sinusoidelor hepatice de la specii diferite sunt diferene. La
PROGENITOARE 0.5-1
52
oaie, capr, vit, endoteliul sinusoidelor are o lamin bazal distinct i puine fenestraii. La om, ca i la obolan, nu exist lamin bazal (vezi i matricea extracelular), astfel c nu exist o barier semnificativ n calea particulelor ce traverseaz peretele sinusoidelor. n 30s dup injecia de dioxid de thoriu n vena port, particulele electronodense pot fi gsite ntre peretele sinusoidelor i suprafaa hepatocitelor.29,30 Totui, spaiile i fenestrele impun o barier dimensional n calea moleculelor. Chilomicronii mari, bogai n trigliceride, venii de la intestin prin sngele portal, nu pot trece prin filtrul endoteliului, dar chilomicronii mai mici, cu colesterol i retinol, venii de la alte esuturi, trec n spaiul Disse.31 Celulele endoteliale au gradiente zonale.32 De exemplu, SEM arat la bolnavii alcoolici o reducere evident a numrului de fenestrae, cu formarea unei lamine bazale, n special n zona 3. Funcii: Transcitoz - transport transcelular al substanelor prin vezicule care traverseaz celula. Endocitoz mediat de receptori (v. Fig.11). Celulele endoteliale sunt active n nglobarea unor particule i macromolecule din snge, dup fixarea lor de receptori de suprafa. Ele prezint receptori pentru hialuronan, condroitin sulfat, glicoproteine cu manoz, ca i pentru fragmentul Fc al IgG i pentru LBP (engl., lipopolysaccharide binding protein). Fagocitoz. Celulele endoteliale acioneaz ca gunoieri, alturi de celulele Kupffer, pentru a ndeprta enzime i substane patogene. De asemenea, nghit colagenul denaturat din snge, leag i nglobeaz lipoproteine.31,33 Celulele Kupffer (Fig.11-18) Morfologie, localizare. Von Kupffer observa n 1898 pe preparate colorate cu clorur de aur, celule stelate n peretele sinusoidelor, care se coloreaz selectiv prin aceast metod. Au fost descrise ca celule cu prelungiri, care sunt intercalate printre celulele endoteliale (Fig.16). Celulele Kupffer sunt situate pe suprafaa celulelor endoteliale, iar prelungirile lor se extind n lumen i printre celulele endoteliale. Membrana celular. ME arat c au microvili lungi i lamellipodia care se proiecteaz de pe suprafaa expus curentului sanguin (v. Fig.16). Nu
*
Mi
Fig. 11 Endocitoz n celul endotelial i n celul Kupffer din sinusoid hepatic. Sgei - invaginare i vezicul de endocitoz. Mi - microvili n spaiul Disse. * - lamellipodia Electronomicrografie x 48000. formeaz jonciuni cu celulele nconjurtoare i au o form variabil, ceea ce sugereaz c localizarea lor se poate schimba. Invaginaii nguste ale plasmalemei ptrund adnc n citoplasm i formeaz corpi vermiformi sinuoi, ce constau din dou membrane paralele, cu o linie dens ntre ele i fine striaii transversale. Aceast structur se vede uneori i n macrofagele din alte organe. Semnificaia sa funcional este deocamdat necunoscut. Organite. Celula Kupffer are un complex Golgi juxtanuclear i numeroase mitocondrii. Are profile de reticul endoplasmic ce pot fi evideniate prin reacia histochimic pentru peroxidaz. Aceast reacie servete la identificarea celulelor Kupffer n raport cu celulele endoteliale, care nu posed aceast enzim (Fig.17) Citoplasma este ncrcat cu vacuole electronotransparente, fagozomi, lizozomi, ce conin frecvent eritrocite (v. Fig.16) sau depozite de feritin, depozite de pigment lipocrom. Funcii: Endocitoza. Celulele Kupffer sunt macrofage, derivate din monocitele circulante i fac parte din
53
H E PAT O C I T
SPAIU PERISINSOIDAL DISSE
H E PAT O C I T
CANALICULE BILIARE
H E PAT O C I T
H E PAT O C I T
CELULA ITO
H E PAT O C I T
CELULA KUPPFER
H E PAT O C I T
CELULA ENDOTELIAL
H E PAT O C I T H E PAT O C I T
Fig.12 Sinusoid hepatic. Raporturile ntre hepatocite, celulele sinusoidale i perisinusoidale.
54
*
N
I K H H I
Hepatocit
*
E
Lumen K
Fig.13 Sinusoid hepatic. K - Celula Kupffer; I - Celula Ito; E - Celula endotelial; H - Hepatocite; * - Picturi lipidice n celula Ito. Seciune semifin. Coloraie albastru de toluidin. Micrografie x 1500. Din Dicionar de Imunologie, L.M. Popescu et al., Editura Universitar Carol Davila, Bucureti, 2002.
Hepatocit
Fig. 14 Sinusoid hepatic. N - nucleu; sgeat neagr - endoteliu; sgeat roie - spaiu Disse; K - celul Kupffer n seciune transversal; Electronomicrografie x 10000.
Fig. 15 Ficat uman, microscopie electronic. Se remarc o celul Kupffer rezident n capilarul sinusoid, vizibil aproape n totalitate, ntre hepatocite i endoteliul vascular. Spaiu Disse (Disse), mitocondrii (M), microvili (mv) ai membranei hepatocitului, lizozomi (L). Din Dicionar de Imunologie, L.M. Popescu et al., Editura Universitar Carol Davila, Bucureti, 2002.
55
N H
*
Sinusoid
Hepatocit
Fig.16 Celul Kupffer H - hematie (una n lumenul sinusoidului, alta fagocitat de celula Kupffer); sgeat neagr - endoteliu; sgeat roie - spaiu Disse; N - nucleul celulei Kupffer; * - lamellipodia. Electronomicrografie x 46000.
Fig.17 Sinusoid hepatic. Celula Kupffer, sgeat - reacie pozitiv pentru peroxidaz n reticulul endoplasmic rugos i cisterna perinuclear; N - nucleu. Elelctronomicrografie x 45 000. Preparat i foto: Dr.E. Mandache, Institutul Naional de Patologie Victor Babe. sistemul fagocitic mononuclear al organismului, la fel ca macrofagele sesile din alte organe. Au o mare capacitate de endocitoz (pinocitoz, fagocitoz), mediat sau nu de receptori. Experimental, ele nglobeaz activ un colorant vital - albastrul tripan i alte particule injectate (Fig.18). Injecia repetat de substane particulate n snge duce la creterea numrului de celule Kupffer. Capacitatea lor de a prolifera prin mitoz n aceste condiii, a fost demonstrat prin evidenierea capacitii lor de a ngloba timidina tritiat. Numrul lor crete n ficat i prin recrutarea de precursori (monocite) din snge i diferenierea lor n celule Kupffer. Dac celule din mduva hematogen a unui animal donator, marcate cu un marker cromozomic, sunt injectate la un animal iradiat, pentru a mpiedica diviziunea propriilor sale celule, se poate vedea c celulele Kupffer din ficatul primitorului prezint marker-ul cromozomic, ceea ce arat c s-au format din celulele medulare ale donatorului. Celulele Kupffer prezint pe suprafa receptori specifici pentru poriunea Fc a imunoglobulinelor i componenta C3b a complementului, importante
56
pentru prezentarea antigenului. Opsoninele, fibronectina plasmatic, imunoglobulinele i tuftsina (un peptid imunomodulator natural) favorizeaz recunoaterea antigenilor i grbesc endocitoza de ctre celulele Kupffer. Fagocitarea microorganismelor i a particulelor strine. Celulele Kupffer ndeprteaz din snge bacteriile care reuesc s ajung din colon n sngele portal. Fagociteaz de asemenea bacterii patogene, virusuri, parazii i orice fel de particule strine. Fagocitarea celulelor i moleculelor alterate. Celulele Kupffer sunt capabile s recunoasc i s fagociteze resturi celulare i celule ntregi, de exemplu, eritrocite lezate sau mbtrnite, celule tumorale. Preiau i prelucreaz LDL (engl. low density lipoproteins - liporoteinele de joas densitate) n stare oxidat, care altfel ar fi aterogene. n condiii de coagulare intravascular diseminat fagociteaz fibrina i proteinele denaturate din snge. Endocitarea i metabolizarea moleculelor normale:34 - imunoglobuline, pe care le degradeaz la peptide; - proteinele ce intervin n hemostaz sunt reciclate; - complexe ligand-receptor: celula Kupffer are receptori pentru insulin, glucagon i lipoproteine. Receptorul pentru monozaharide care recunoate N-acetil glucozamina, manoza i galactozamina poate media endocitarea unor glicoproteine, n special hidrolazele lizozomale. Acest receptor mediaz, de asemenea, endocitarea complexelor imune cu IgM; - chilomicroni: celula Kupffer capteaz i endociteaz chilomicronii, care sunt degradai n lizozomi pn la trigliceride, apoi prin aciunea lipazelor, la acizi grai liberi, care sunt eliberai n plasm, unde se leag de albumine, form n care sunt captai de hepatocite; - steroizi: celula Kupffer capteaz steroizii i i catabolizeaz n vederea detoxifierii lor de ctre hepatocit. Sinteza i secreia. n cazul infeciilor generalizate sau n starea post-traumatic celulele Kupffer se activeaz. Ele endociteaz specific endotoxina bacterian i, ca rspuns, secret n cantiti mari TNF (engl. tumour necrosing factor factorul necrozei tumorale), citokine, interleukin-1, colagenaz i hidrolaze lizozomale. Acestea altereaz starea general a bolnavilor, iar starea de ru se datoreaz produilor celulelor Kupffer, cci endotoxina nsi nu este toxic. De notat c
Fig. 18 Celule Kupffer care au fagocitat carmin. Injectare cu carmin, supracolorare hemalaun. Micrografie x 1500 Reprodus cu permisiune din: L.M. Popescu et al., Atlas de Histologie, Editura Medical, Bucureti, 1995. aceste molecule sunt secretate i n condiii bazale, n cantiti mai mici, reprezentnd totui un procent semnificativ (5%) din totalul proteinelor secretate de ficat. Celula Kupffer sintetizeaz de asemenea complement i metabolii ai acidului arahidonic, inclusiv prostaglandine. Prin sintetiza de transferin particip la metabolismul i transportul Fe, prin sinteza unor factori ai complexului protrombinic particip la balana factorilor coagulrii. 35 Funcia eritroblastoid a celulei Kupffer a fost descris n ficatul fetal.
3.3. Celulele din spaiul perisinusoidal (Disse) Considerat iniial artefact, existena unui spaiu ntre sinusoid i celula hepatic este acum ferm stabilit prin studiile la ME.36 Endoteliul st n apropiere de vrfurile microvililor hepatocitelor, orientai neregulat, proiectai n spaiul ngust perisinusoidal (Fig.19). Tipuri de celule. La omul adult normal, n spaiul perisinusoidal au fost descrise: celulele Ito (celule depozitare de lipide) (Fig.20-22) i fibroblati tipici (rari). Ele sunt probabil dou fenotipuri ale aceleiai celule. La roztoare s-au observat celulele cu smburi (engl. pit cells) care sunt limfocite natural killer (NK) sau LGL (large granular lymphocytes). La om aceste celule au fost observate n interiorul sinusoidelor hepatice, n relaie cu celulele endoteliale (Fig.23,24). n ficatul fetal uman, ntre hepatocite i sinusoide se gsesc celulele liniilor hematopoietice (Fig.25). Celulele hepatice stelate sau celulele Ito, (Ito
57
Hepatocit Lumen capilar A A A N A
Hepatocit
Fig.19 Spaiul perisinusoidal Disse.
Fig.20 Celul Ito depozitar de lipide n spaiul perisinusoidal. N - nucleu; A - picturi lipidice care stocheaz vitamina A; sgeat - spaiu Disse; T - trombocit n spaiul Disse. Electronomicrografie x 46 000.
Fig.21 Microscopie optic, special. Ficat preparat pentru microscopie electronic (prefixare glutaraldehid, postfixare n OsO4, includere n Epon), dar secionat la ultramicrotom n seciuni semifine, colorat cu albastru de toluidin i examinat la microscopul optic cu Ob. x100. Conturul trapezoidal delimiteaz o celul Ito ntre dou sinusoide, n vecintatea unei celule Kupffer (K), care a fagocitat material dens (*). Se remarc spaii rotund ovalare n citoplasma celulelor Ito, aparent goale, ele coninnd n realitate vitamina A (A), care fiind liposolubil se dizolv n timpul manevrelor preparative n care se folosesc solveni organici. Hepatocite (H), sinusoide (S), nucleu (N). Din Dicionar de Imunologie, L.M. Popescu et al., Editura Universitar Carol Davila, Bucureti, 2002.
58
Fig.22 Ficat uman, microscopie electronic. Se remarc o celul Ito, rezident n capilarul sinusoid, vizibil aproape n totalitate, ntre hepatocite. Se remarc spaii rotund-ovalare n citoplasma celulelor Ito, aparent goale, ele coninnd n realitate vitamina A (A). Spaiu Disse (Disse), mitocondrii (m), microvili (mv) ai membranei hepatocitului, lizozomi (LI), celul Kupffer (K). Din Dicionar de Imunologie, L.M. Popescu et al., Editura Universitar Carol Davila, Bucureti, 2002.
Fig.23 Sinusoid hepatic. Limfocite (sgeat) n sinusoidele hepatice de om. Seciune semifin. Coloraie albastru de toluidin. Micrografie x 1000. i Shibasaki, 1968) 35 au mai fost numite celule depozitare de lipide, celule interstiiale, lipocite. Originea lor este puin cunoscut. Se crede c ar putea fi celule asemntoare cu pericitele care nsoesc diferite tipuri de capilare. Morfologie, localizare. Ele ocup spaii ntre celulele hepatice i au prelungiri care vin n contact cu celulele endoteliale (Fig.20). Sunt mai frecvente spre centrul lobulului clasic dect la periferia acestuia. Ceea ce le deosebete pe preparatele histologice de rutin este prezena a numeroase picturi lipidice n citoplasm. Cnd nu stocheaz picturi lipidice au un aspect identic cu cel al fibroblatilor. Pot fi colorate selectiv cu clorur de aur. Probabil
Fig.24 Limfocit cu granule mari (LGL) - celul pit. Izolarea mononuclearelor din sngele hepatic, prin centrifugare n gradient de densitate, apoi izolarea celulelor NK prin metoda cu anticorpi (oarece anti-om) monoclonali anti-CD16 i anti CD 56 i bile magnetice acoperite cu anticorpi anti-oarece. Celulele separate au morfologie de LGL. Frotiu, coloraie Giemsa x 1500. c celulele stelate descrise iniial de Von Kupffer dup colorare cu clorur de aur erau n realitate celule Ito, cci fagocitele intravasculare numite azi celule Kupffer nu se coloreaz cu clorur de aur.37 Funcii: 38-40 Stocare de vitamin A Cnd este administrat vitamina A (vitamin liposolubil), ea este stocat n aceste celule, n picturile lipidice. Regleaz fluxul sanguin prin sinusoide. Conin actin i miozin i se contract ca rspuns la endotelin-1 i substan P. Secreia matricei extracelulare. Este neclar dac ele particip la secreia matricei extracelulare n ficatul normal. Dup unii autori ar secreta colagen III n spaiul Disse. Este ns sigur c, dup lezarea hepatocitelor, ele i
E S H
Fig 25 Ficat fetal de om (12 sptamni) H - hepatocite; Hs - Hepatocite stelate; R - celule de reticul; E - elemente ale seriei roii (eritroblati); S- sinusoid. Micrografie x600, coloraie HE.
Hs
59
Fig.26 Hepatocite (H1, H2) delimitnd un canalicul biliar(sgeat); N - nucleu; M - mitocondrii Electronomicrografie x 50000.
N M
H1
H2
SINUSOID
CELULA ITO SPAIU DISSE Microvili
CELULA ENDOTELIAL
PR
G
CB
PL RER P
N
REN
CB
SPAIU DISSE
CELULA KUPPFER
Fig. 27 Schema organitelor celulei hepatice: N - nucleu; G - Golgi; PR - poliribozomi liberi; RER - reticul endoplasmic rugos; REN - reticul endoplasmic neted; L - lizosomi; PL - picturi lipidice; P - peroxizomi; M - mitocondrii; J - complexe joncionale; CB - canalicul biliar intercelular.
60
Pr
N RER
Fig. 28 Hepatocit. N- nucleu caracteristic, eucromatic, cu nucleol vizibil. pierd picturile lipidice, prolifereaz, migreaz n zona 3 a acinului, i schimb fenotipul devenind asemntoare cu miofibroblatii i secret colagen I, III i IV i laminin. Colagenizarea intens a spaiului Disse duce la ngreunarea accesului substratelor proteice la hepatocite. Secret citokine Celulele cu smburi (engl.pit cells) sunt, de fapt, limfocite NK (engl. natural killer). Ele conin granule tipice, mari, azurofile, ce apar electronodense la ME i vezicule cu o incluziune n form de bastona. Celule similare se gsesc i n alte organe: plmn, intestin subire, epididim, glanda mamar. De notat c ele sunt numeroase n ficatul roztoarelor. La om, limfocitele NK nu au fost descrise n spaiul perisinusoidal, ci n sngele sinusoidelor hepatice (Fig.23,24). Cu toate acestea, exist dovezi indirecte c pot penetra n spaiul perisinusoidal, avnd receptori de adezivitate pe suprafaa celulelor endoteliale. 41-43 Celulele liniilor hematopoietice se gsesc n ficatul fetal uman din luna a doua pn la natere i cteva sptmni dup aceea. 44 Celulele hematopoietice sunt n interdependen cu (pre)hepatocite stelate cu prelungiri care, alturi de celulele perisinusoidale stelate, formeaz o reea tridimensional asemntoare cu cea format de celulele reticulare din esuturile hematopoietice adulte (Fig.25). Alturi de acestea coexist cordoane de hepatocite poligonale, asemntoare cu cele mature. 45 Recent a devenit evident nrudirea Fig. 29 Hepatocit. Organite hepatocitare. M - mitocondrii; RER- Reticul endoplasmic rugos; Pr - poliribozomi liberi. strns ntre hepatocite i celulele hematopoietice. Se acumuleaz dovezi care las s se ntrevad posibilitatea unei filiaii directe celul hematopoietic - hepatocit.
3.4. Celulele parenchimului hepatic - hepatocitele (Fig.26,27) Hepatocitul este o celul epitelial multifuncional. Date generale Numr, form, mrime. Hepatocitele reprezint aproximativ 80% din populaia celular a ficatului. Convenional, hepatocitului i se atribuie o form ce poate fi nscris ntr-un hexaedru, cu un diametru mediu de 30 m. Dispoziie. Hepatocitele sunt aranjate n cordoane sau lame, n jurul sinusoidelor i, pe de alt parte, delimiteaz ntre ele canalicule biliare minuscule. Polaritate, domenii, analogie ntre domeniile hepatocitului i domeniile altor celule epiteliale. Hepatocitele nu au, ca multe celule epiteliale, un singur ax de polaritate, cu un domeniu apical i latero-bazal, ci se pot descrie mai multe domenii ale hepatocitului, n funcie de vecinti: domenii sinusoidale, care vin n raport cu sinusoidele, prin intermediul spaiului perisinusoidal Disse; sunt echivalente cu domeniile bazale ale altor celule epiteliale; (unele hepatocite au suprafee care vin n contact cu esutul conjunctiv al spaiului portal. Acestea pot fi i ele echivalate cu suprafeele bazale ale altor celule epiteliale); domenii laterale, spre hepatocitele adiacente; pot fi echivalate cu domeniile laterale ale altor celule
61
PROTEINE PLASMATICE
SINUSOID
GOLGI
HEPATOCIT
REN RER GLICOGEN
GOLGI
REN
Colesterol endogen
Sinteza i conjugarea acidului colic
COLESTEROL CIRCULANT ACIZI BILIARI REABSORBII DIN INTESTIN
GLUCOZ
AMINOACIZI
Fig.30 Roluri cheie ale reticulului endoplasmic neted i rugos: 1. sinteza proteinelor plasmatice n RER i Golgi 2. glicogenoliza n REN. epiteliale; domenii biliare - cte o poriune a domeniului lateral, care particip la formarea peretelui canaliculului biliar intercelular; pot fi echivalate cu domeniile apicale ale altor celule epiteliale. Geometrie. Fiind un hexaedru, hepatocitul are dou domenii sinusoidale i patru domenii laterale, domeniul biliar fiind o specializare central a fiecrui domeniu lateral. Rezult c fiecare hepatocit este nconjurat de un canalicul biliar ca un inel, format ntre membrana celulei n cauz i membranele a patru hepatocite adiacente.46 Organitele celulare47-49 Nucleul (Fig.28) Este rotund, cu unul sau doi nucleoli vizibili. Nucleii variaz ca mrime, 40-60% dintre ei sunt poliploizi (4n, 8n), mrimea fiind proporional cu gradul de ploidie. Majoritatea hepatocitelor au un singur nucleu, dar aproximativ 25% dintre ele sunt binucleate (v. Fig.32). Cisterna perinuclear are pe suprafaa intern o lamin nuclear fin, filamentoas. Reticulul endoplasmic rugos (Fig.29,30). Morfologie. La microscopul optic (MO) se observ n citoplasm corpusculi bazofili cu denumirea tradiional de ergastoplasm. La ME se vede c acetia sunt formai din agregate de cisterne de reticul endoplasmic rugos (RER), iar ribozomii ataai sunt substratul bazofiliei observate la MO. Funcie. RER este abundent, cci funcia de baz a hepatocitului este sinteza i secreia proteinelor plas62
Fig.31 Rolul cheie al reticulului endoplasmic neted: sinteza acizilor biliari i conjugarea lor cu glicina sau taurina. Acizii biliari conjugai sunt excretai, trecand prin Golgi, n canaliculele biliare. matice exportate n snge: albumine, i -globulinele, factorii plasmatici ai coagulrii (cu excepia factorului VIII i mai abundent factorii I, II, III, V, VII, X), ceruloplasmin, transferin, feritin, fibronectina plasmatic. Fac excepie imunoglobulinele plasmatice (-globuline), care sunt sintetizate de limfocitele B. Hepatocitele sintetizeaz i componentele proteice (apoproteinele) pentru lipoproteinele serice (v. cap. 3). RER poate fi convertit n REN. Injectarea de fenobarbital la animal produce o proliferare imediat a RER n celulele hepatice. Dup proliferare, ribozomii se desprind de RER, care astfel e convertit n REN, coninnd acum enzime care s detoxifice celula de fenobarbital. Ficatul detoxific organismul de otrvurile ingerate i de aceea hepatocitul are mult RER / REN, cu enzime de detoxifiere. Poliribozomii liberi Sunt numeroi, dispui n rozete sau spirale, fiind sediul sintezei proteinelor destinate propriei citoplasme, de exemplu glucozo-6-fosfataza, o enzim ce funcioneaz n REN. Reticulul endoplasmic neted (Fig.30-32) Morfologie. Este prezent din abunden. Const dintr-o reea de tubuli ramificai anastomozai. Se observ adesea legturi tubulare evidente ntre REN i RER. Zonare. REN este mai rar n celulele din zona 1 (periportal) dar este foarte abundent n celulele zonei 3, care sunt foarte active n metabolizarea lipidelor.50
Funcii i componena enzimatic Sinteza trigliceridelor din acizi grai i glicerol. Produsele apar n spaiul cisternal, unde devin parte a particulelor de lipoproteine (VLDL). n lumenul reticulului endoplasmic neted (REN) se observ un material globular cu diametrul de aproximativ 30-40 nm, format din VLDL (eng. very low density lipoproteins - lipoproteine cu densitate foarte mic). Aceste complexe de lipoproteine serice sunt sintetizate n hepatocit i eliberate n snge; au n componena lor colesterol, fiind astfel vehicule ale acestei molecule, pe care o transport la toate celelalte celule. Sinteza fosfolipidelor destinate pe de o parte secreiei ca lipoproteine i pe de alt parte structurii mebranelor proprii. Interconversia lipidelor prin enzime care opereaz la diverse niveluri: transacilaze care remaniaz compozoia n acizi grai a fosfolipidelor; un sistem de enzime care desatureaz acizii grai, format din: NADHcitocrom b5-reductaz, citocrom b5, desaturaz. Sinteza de colesterol. Biosinteza colesterolului are ca intermediari-cheie mevalonatul i squalen-ul. Prima etap este formarea de 3-hidroxi-3-metil-glutaril-coenzim A (HMG-CoA) din aceto-acetil-CoA i acetil-CoA. Aceast etap are loc n mitocondrii. HMG-CoA se gsete n mitocondrii i citosol. HMG-CoA- reductaza din membrana REN convertete HMG-CoA la acid mevalonic. Sinteza de acid mevalonic este etapa-cheie n sinteza colesterolului. Squalen-sintetaza (convertete farnezil pirofosfatul n squalen), squalen-epoxidaza, sterolciclaza i alte enzime implicate n conversia squalenului n colesterol sunt constituente ale membranei REN. Sinteza acizilor biliari. Enzime care sintetizeaz acizii biliari (acizi colici i chenocolici) din colesterol sunt constituente ale membranei REN (fac parte din sistemul de oxidaze cu funcii multiple, vide infra). Conjugarea acizilor biliari cu aminoacizi, cu formarea srurilor biliare, taurocolat i glicocolat. Enzime: aminoacil-transferaze pentru taurin i glicocol. Detoxifiere prin conjugare. Enzime: glucuronil transferaze - enzime care conjug glucuronatul fie cu bilirubina fie cu medicamentele i substanele toxice pentru detoxifiere. Hidroxilare pentru sinteze i detoxifiere. Enzime: sistem de oxidaze cu funcii multiple, proteine integrale ale membranei REN, dintre care citocrom-P450 i NADPH-citP450-reductaza, ce produc reacii de hidroxilare, implicate n: 1) sinteze (colesterol, acizi biliari, prostaglandine); 2) catabolismul unor compui hidrofobi potenial toxici ca medicamentele liposolubile (fenobarbital, morfin, codein), carcinogenii, insecticidele. Trebuie notat c uneori metaboliii
SINUSOID
HEPATOCIT
REN
Glucuronil transferaz
1
BILIRUBINA
BILIRUBINA
HEMOGLOBINA
CELULA KUPPFER
HEM
Fig.32 Rol cheie al reticulului endoplasmic neted: conjugarea bilirubinei: 1. Preluare prin transportor a bilirubinei insolubile; 2. Conjugarea bilirubinei cu acid glucuronic, cu formare de bilirubin glucuronid, hidrosolubil ; 3. Excreie prin mecanism activ- transportor dependent de ATP. intermediari n procesul de detoxifiere (de exemplu epoxizii) pot fi mai toxici sau mai intens carcinogeni dect compuii iniiali.
Fig. 33 Aparat Golgi (G) ntr-un hepatocit binucleat; N - nucleu; Electronomicrografie x 30000.
63
Metabolismul glicogenului i al glucozei. Enzime: glucozo-6-fosfataza, protein integral a membranei REN scindeaz glucozo-6-fosfatul cu eliberarea glucozei n snge. Fosforilaza, enzima care scindeaz glicogenul pentru a forma glucozo-6-fosfat este localizat n citosol, lng granulele de glicogen. Glicozilarea proximal a proteinelor de export. Enzime: glicozil transferaze Deiodarea hormonului tiroidian tiroxin (T4) pentru a forma triiodotironin (T3), cu activitate crescut. Hipertrofia REN Anumite medicamente i hormoni (compui aromatici hidrofobi) stimuleaz activitatea REN ca i sinteza de membrane REN, mpreun cu enzimele asociate, proces numit inducie. REN se hipertrofiaz dup expunerea la fenobarbital, etanol, steroizi anabolici, progesteron i anumite medicamente anticanceroase. Stimularea repetat a REN de ctre o substan toxic crete capacitatea sa de a detoxifia alte substane cum ar fi: medicamente (de exemplu, anestezicele), pesticide sau carcinogeni. Aceast inducie are unele consecine clinice, de exemplu: anestezia general la alcoolicii cronici necesit doze periculos mai mari ca cele obinuite; la nou-nscui, al cror REN este stimulat de bilirubina rezultat din prelucrarea hemoglobinei fetale, anestezia general este dificil. Aparatul Golgi Morfologie i localizare. Aparatul Golgi nu este ntr-un singur exemplar, ca n multe alte celule, ci const din multe stive de cisterne (10-50). Fiecare stiv are 5-9 cisterne. Unele stive de cisterne sunt localizate n apropierea nucleului (Fig.33), iar altele lng domeniile biliare ale membranei hepatocitului, adic spre canaliculele biliare. Numeroase vezicule golgiene din zona trans transport constitueni ai bilei spre canaliculul biliar apropiat. Funcie. Elementele golgiene situate spre domeniul biliar sunt implicate n secreia de bil. Aparatul Golgi prelucreaz i majoritatea proteinelor plasmatice de exemplu prin glicozilare terminal, efectuat de glicozil transferazele specifice, nainte de a fi secretate n spaiul sinusoidal. Tot n aparatul Golgi au loc stadiile finale ale sintezei VLDL i mpachetarea lor n vezicule, care sunt exocitate n domeniul sinusoidal. Aparatul Golgi este implicat n reciclarea membranelor i n formarea lizozomilor i peroxizomilor.51-53 Lizozomii Morfologie numr i localizare Lizozomii, vezicule electronodense, cu diametrul de 0,20,5 m, care prezint o reacie histochimic pozitiv
pentru hidrolaze acide. Morfologia lizozomilor hepatici este foarte variat, deoarece ei conin multe feluri de materiale fagocitate, distruse parial (feritin, lipofuscin, pigmeni biliari, cupru). De obicei apar n vecintatea veziculelor golgiene, dar muli lizozomi sunt situai i n apropierea canaliculelor biliare. n mod normal, sunt 800-1000 de lizozomi per celul, dar numrul lor crete n condiii de hipoxie, anemie, staz biliar i n hepatitele virale. Funcii Autofagia - distrugerea componentelor celulare uzate- pare a fi funcia de baz a lizozomilor. Endocitoza mediat de receptori a liganzilor macromoleculari. Complexele receptor-ligand endocitate sunt nglobate n endozomi care fuzioneaz cu lizozomii, formndu-se lizozomi secundari, n care se produce disocierea complexelor i catabolismul macromoleculelor. Reciclare. Reziduurile lizozomale din hepatocit sunt descrcate n bil, prin domeniul biliar al membranei plasmatice. De altfel lizozomii particip la reciclarea unor componente ale bilei. Sunt dovezi c lizozomii intervin i n recuperarea unor elemente ca fierul i cuprul i n reciclarea depozitelor de glicogen. Peroxizomii Morfologie, numr. Peroxizomii sunt vezicule sferice, delimitate de membrane, cu diametrul de 0,2-0,8 m, rspndite n citoplasm, 200-300 per celul. La roztoare, n matricea fin granular a peroxizomilor se observ un nucleoid cristalin, plasat excentric. Nucleoizii izolai din omogenatele de ficat au n componena lor enzima uricaz. Nucleoidul lipsete din peroxizomii ficatului uman. Funcii i componen enzimatic. Semnificaia funcional a peroxizomilor hepatici la om este neleas fragmentar. Se tie c ei conin enzime care particip la gluconeogenez i la metabolizarea alcoolului, lipidelor, purinelor. O mare parte dintre ele sunt oxidaze productoare de peroxid de hidrogen (H2O2) i catalaz care reduce H2O2 la ap, prin mecanismul peroxidativ. Metabolizarea alcoolului e realizat de ctre alcool-dehidrogenaz. Prelucrarea purinelor. Purinele sunt convertite n xantin, care este apoi oxidat la acid uric, cu formarea de superoxid, radical convertit de ctre superoxiddismutaz n peroxid de hidrogen. -oxidarea acizilor grai. Peroxizomii pot realiza oxidarea acizilor grai cuplai cu coenzima A, printr-un set de enzime comparabil cu cel din matricea mitocondrial, dar cu diferena c una dintre enzimele setului peroxizomal genereaz H2O2.
64
Mitocondriile Morfologie, numr, localizare. Sunt alungite, cu cristae lamelare sau tubulare, proiectndu-se spre o matrice mitocondrial cu densitate relativ mic, coninnd cteva granule dense. Ultrastructura mitocondriilor hepatice nu este neobinuit, dar sunt diferene regionale izbitoare ca numr i mrime. n zona 1 (periportal) sunt mai puine, dar de dou ori mai mari ca cele din zona 3 a acinului hepatic. Fiecare hepatocit are sute de mitocondrii distribuite relativ uniform n citoplasm, reprezentnd un procent important (20%) din volumul citoplasmei. Funcii i componen enzimatic. Sinteza de ATP necesar activitii hepatocitului. Metabolismul aminoacizilor. Conin enzime ce catalizeaz reacii de descompunere a aminoacizilor cu formare de cetoacizi care pot intra n ciclul Krebs i, respectiv, grupri amoniu, ce intr n ciclul ureei. n ciclul ureei enzimele mitocondriale colaboreaz cu enzime citosolice. Din categoria enzimelor ce metabolizeaz aminoacizii fac parte: aspartat-transaminaza (enzim citosolic i mitocondrial) i alanin-transaminaza (enzim citosolic); glutamat-dehidrogenaza, enzim-cheie n deaminarea aminoacizilor n ficat, ce dezamineaz glutamatul cu formare de -cetoglutarat i amoniu (n matricea mitocondrial); carbamoilfosfat-sintetaza i ornitincarbamoil-transferaza, care, din ornitin i carbamoilfosfat, formeaz (n matricea mitocondrial) citrulin, care intr n ciclul ureei. Sinteza hemului, pornind de la succinilCoA i glicin, cu formarea acidului -aminolevulinic, cu mai multe etape succesive n care enzimele mitocondriale colaboreaz cu enzimele citosolice (vezi cap.4). Sinteza de colesterol din acetat. n mitocondrii se produc primele etape ale sintezei colesterolului, cu formare de 3-hidroxi-3-metilglutaril CoA, intermediar utilizat apoi n etapele finale care au loc n REN. Incluziuni Glicogen. n seciunile histologice standard (coloraie HE), multe hepatocite au arii necolorate. Pe preparatele colorate cu carmin Best (Fig.34) sau prin reacia PAS (periodic acid - Schiff) pentru zaharide, aceste arii se coloreaz n rou. Ele conin glicogen. La ME glicogenul apare sub forma unor particule cu diametrul de 0,1 m, numite particule . Acestea sunt agregate ale unor particule mai mici - particule , cu diametrul de 20-30 nm. Glicogenul este o form de depozitare a glucozei care poate fi utilizat pentru a menine constant concentraia glucozei n snge. De multe ori glicogenul se gsete asociat cu REN. Fig.34 Cordoane de hepatocite, coloraie carmin Best. Se evideniaz glicogenul stocat n citoplasm, ca granule roii, supracolorare hemalaun. Micrografie x 400. Reprodus cu permisiune din: L.M. Popescu et al. - Atlas de Histologie, Editura Medical, Bucureti, 1995. Lipide. Hepatocitele conin cantiti variabile de lipide sub forma unor picturi electronodense, fr membran. n ficatul normal sunt relativ puine, dar cresc foarte mult dup ingestia de alcool sau alte substane hepatotoxice. Acumularea lipidelor ncepe sub forma a multiple picturi mici care apoi se unesc, iar n strile toxice severe celula poate fi sufocat de o singur pictur lipidic foarte mare. ncrcarea hepatocitelor cu lipide (steatoza) se produce n zona 1 sau n zona 3, n funcie de natura agentului hepatotoxic. Hemosiderin, form de depozit a Fe, prezent n celula hepatic i n seria roie sub forma unor granule de culoare brun nchis. Lipofuscin, granule de pigment de culoare brun rocat. Citoscheletul Const dintr-un strat subplasmalemal (cortex) de filamente intermediare de citocheratine i microfilamente subiri de actin. Acest strat este prezent pe toat suprafaa intern a membranei, dar este mai gros n domeniul biliar, unde ajut motilitatea canaliculului biliar i meninerea lumenului su. Fascicule de filamente intermediare se extind de la cortex spre interiorul celulei, spre centrozom i spre complexele por ale nveliului nuclear. Microtubulii ajut la micarea veziculelor secretorii i eliberarea lor din celul. Membrana celular Morfologie. Domeniul sinusoidal i cel biliar au microvili neregulai. Prin existena microvililor, care mresc suprafaa de schimb de aproximativ 6 ori, este crescut eficiena schimbului ntre sinusoide i hepatocite. n celelalte domenii membrana celular este neted.
65
M M
Fig. 35 Canalicul biliar interhepatocitar Sgeile indic: roie - zonula occludens; albastr - fascia adherens; neagr - macula adherens (desmozom); alb- jonciune digitiform; m - microvili; M - mitocondrii.
M M
Domenii funcionale deosebite pot fi identificate prin metode (imuno)citochimice, care identific receptori sau enzime cu localizare membranar. Receptori. Receptorii pot fi identificai prin utilizarea de anticorpi antireceptor, marcai prin diverse metode. n domeniul sinusoidal sunt prezeni receptori pentru substane care sunt internalizate prin endocitoz mediat de receptori, de exemplu sialoglicoproteine, manozo-6-fosfat. Receptorii sunt cuplai la diferite sisteme de transducie a semnalului. De exemplu, receptorii pentru glucagon i adrenalin funcioneaz prin stimularea adenilatciclazei, cu formare de AMPc, care stimuleaz fosforilaza pentru a scinda glicogenul, cu formare de glucoz. Enzime. Adenilatciclaza i Na+/K+-ATP-aza (o fosfataz alcalin) se gsesc att n domeniul sinusoidal, ct i n domeniile laterale, care se nvecineaz cu cele ale hepatocitelor adiacente. 5-Nucleotidaza catalizeaz hidroliza nucleotidelor (de exemplu, hidrolizeaz adenozin-5fosfatul) cu eliberarea fosfatului din poziia 5. Ea este abundent n membrana hepatocitelor, comparativ cu alte celule. Concentraia seric de 5-nucleotidaz crete n bolile hepatobiliare, dar nu i n cele osoase, de aceea dozarea ei este folosit n diagnostic, coroborat cu dozarea fosfatazelor alcaline serice, care cresc nespecific, att n bolile hepatobiliare ct i osoase. Domeniul biliar conine aminopeptidaze, fosfataze i trei glicoproteine specifice. Conine transportori pentru anionii organici compleci. Nu este nc elucidat semnificaia funcional a tuturor proteinelor membranare ale hepatocitului. Jonciuni intercelulare. Membranele hepatocitelor adiacente prezint jonciuni intercelulare de tip occludens, n jurul canaliculului biliar, jonciuni de tip adherens (desmozomi) i numeroase jonciuni communicans (gap), care realizeaz cuplarea electrotonic dintre celule (v. Fig.35). Excitabilitatea hepatocitelor Hepatocitele apar ca celule excitabile, cu automatism funcional care se manifest prin oscilaii spontane ale Ca2+ intracelular. Totui, inervaia vegetativ a ficatului joac un rol important n reglarea imediat (pe termen scurt) a metabolismului celular, influennd eliberarea de glucoz i lactat. Inervaia nu joac probabil un rol determinant n inducia enzimatic pe termen lung.
Fig.36 Canalicule biliare interhepatocitare fr perete propriu printre cordoanele de hepatocite. Metoda enzimatic pentru ATP-az. Micrografie x 400. Reprodus cu permisiune din: L.M. Popescu et al. - Atlas de Histologie, Editura Medical, Bucureti, 1995.
66
mb H
Fig 37 Duct biliar interlobular n spaiul portal V - vena port cu endoteliu (sgeat); H-hepatocite; mb - membrana bazal a ductului interlobular. Ductul este nconjurat de celulele din spaiul portal: limfocite, fibroblati, posibil celule ovale. Micrografie x 1000. Coloraie HE. 3.5. Canaliculele biliare interhepatocitare, originea sistemului de ci biliare Un canalicul biliar este localizat la mijlocul interfeei ntre celulele hepatice adiacente. Aceste canale minuscule, cu diametrul de 0,5-1,5 m, formeaz o reea cuprins n interiorul cordoanelor (lamelor) de hepatocite, cu ochiuri n care se gsete o singur celul. Datorit ramificrii i anastomozei lamelor de celule reeaua este continu pe toat ntinderea unui lobul, iar la unele specii se continu ntre lobulii nvecinai. Histologia clasic descria canaliculele biliare ca avnd un perete propriu. Microscopia electronic a relevat ns c ele nu au perete propriu, ci peretele canaliculului este o specializare a membranei hepatocitelor adiacente, iar lumenul su este de fapt o dilatare a spaiului intercelular. Membrana domeniilor laterale ale celulelor adiacente este aproximativ plan, membranele n contact sunt quasi-paralele, iar spaiul intercelular care le separ are aproximativ 15 nm. La mijlocul acestei interfee, membranele, de regul aparinnd a dou hepatocite, diverg pentru a forma un spaiu intercelular mai larg care constituie lumenul unui canalicul biliar, cu diametrul de 1-2 m (v. Fig.35). Civa microvili scuri se proiecteaz n lumen, iar membrana ce mrginete canaliculul este consolidat de o ngroare a stratului cortical de filamente citoscheletale. De o parte i de alta a canaliculului, membranele hepatocitelor formeaz jonciuni strnse comparabile cu zonulae occludentes. Ele previn ieirea bilei din canalicul i izoleaz canaliculul, pentru a nu permite ca bila,
Fig.38 Duct biliar interlobular uman. Electronomicrografie x 8000; Preparat i foto: Dr. E. Mandache, Institutul Naional de Patologie V. Babe. cu efect citolitic, s ajung n snge sau printre hepatocite. n apropiere se pot vedea zonulae adherentes. De asemenea, la o oarecare distan, exist desmozomi, jonciuni gap, ntre hepatocitele adiacente. Canaliculele pot fi evideniate prin injectare cu colorani sau mase plastice. Histochimic dau o reacie pozitiv pentru Na+/K+-ATP-az, i alte fosfataze alcaline (Fig.36). Compoziia membranei plasmatice hepatocitare este diferit la nivelul canaliculului de cea din restul celulei, prin abundena de acid sialic, raportul colesterol/fosfolipide mai mare i raportul fosfolipide/sfingomielin mai mic, ceea ce i crete rezistena la aciunea detergent a bilei.55,56 Fluxul biliar. Prezena Na+/K+-ATP-azei sugereaz c secreia bilei este un proces activ. Membrana conine transportori pentru componentele secreiei biliare. Direcia fluxului biliar este de la parenchim spre spaiul portal, opus direciei fluxului sanguin.
3.6. Celulele ductelor biliare intrahepatice Ductele biliare iau natere n timpul dezvoltrii embrionare a ficatului din hepatoblatii periportali, care poart denumirea de plac ductal. La adult, ductele biliare rmn n legtur cu celulele parenchimului hepatic prin anastomozele complexe ale canaliculelor biliare interhepatocitare. Acestea se continu cu ductule terminale sau colangiole, formate n segmentul iniialdin hepatocite alturi de celule ductulare (v. Fig.3) pentru ca apoi colangiolele s fie cptuite exclusiv de celule ductulare turtite
67
M Col Mb
Fig. 39 Polul bazal al celulelor ductulare umane N- nucleu, M - mitocondrii, Mb - membran bazal, Col - colagen, sgeat neagr - falduri ale membranei Preparat i foto: Dr. E. Mandache, Institutul Naional de Patologie V. Babe.
Mi
J
Fig. 40 Polul apical al celulelor ductulare umane N- nucleu; M - mitocondrii; Mi - microvili sgeat neagr - falduri i interdigitaii ale membranei laterale; J - jonciuni stnse; Preparat i foto: Dr. E. Mandache, Institutul Naional de Patologie V. Babe.
M N
(scuamoase). De aici, bila trece n ducte interlobulare mici (marginale) i apoi n ducte interlobulare mai mari, i n ducte mari septale, pn la ductele mari hepatice, drept i stng, care se continu cu ductele extrahepatice. Ramificarea ductelor nsoete ramificarea vaselor.1-3,5 Morfologia i histochimia celulelor epiteliale biliare se schimb de la colangiole la ductele mari. Colangiolele(ductule terminale, canale Hering) sunt mrginite de celule ductulare sau colangiocite, turtite, elipsoidale, cu caractere primitive, care amintesc de celulele stem. Secionate longitudinal, colangiolele apar ca duble coloane de celule alungite, turtite, cu citoplasm puin, fr reacii histochimice specifice. La
nceputul colangiolei, celulele sunt turtite, apoi peretele se continu cu celule cuboidale mici, pe msur ce ductulii se apropie de ductele interlobulare, n care se vars. Aceast regiune de tranziie a sistemului de ducte se vede clar la MO numai dac ductulii sunt destini, cum se ntmpl n cazul ocluziei unui duct biliar.57 Ductele interlobulare mici constau din celule ductale cuboidale sau columnare cu citoplasm puin, eozinofil (Fig.37-40). Citoplasma este rareori PASpozitiv, ntotdeauna albastru alcian-negativ, ceea ce arat c nu secret mucus dect rareori. Membrana celular prezint numeroi microvili n domeniul apical. Ductele mari sunt cptuite cu celule ductale mari, nalt columnare, cu microvili apicali, secretoare de
68
mucus, cu citoplasm PAS-pozitiv, albastru alcianpozitiv, cu nucleii mici, situai bazal. La ME se observ c toate ramurile arborelui biliar, de la colangiole pn la ductele mari au, spre deosebire de hepatocite, o membran bazal (v. Fig.39). Funcie. Ductulele i ductele bilare servesc drept conducte pentru transportul bilei din spaiile canaliculare la duoden. Volumul i compoziia chimic ale bilei sunt modificate n trecerea prin arborele biliar. O caracteristic important a transportului fluidului i electroliilor este aceea c ductulele bilare intrahepatice secret n bil un fluid bogat n bicarbonat, ori de cte ori sunt stimulate de ctre secretin. Totui exist diferene de specie n secreia ductular indus hormonal. La obolan, dei exist receptori pentru secretin pe celulele biliare, rspunsul la secretin este foarte slab. La om, stimularea prin secretin duce la un rspuns dependent de doz, cu dublarea sau triplarea fluxului biliar bazal, nestimulat, cu creterea HCO3-. Secretina se leag de receptorul su i prin aceasta duce la creterea intracelular de AMPc. Mai muli transportori de ioni i canale ionice au fost identificate n epiteliul biliar. Ele sunt prezentate n capitolul Histofiziologia moleculara a ficatului i a cilor biliare.
Fig.41 Mastocit n spaiul portal. Coloraie albastru de toluidin. Micrografie x 600. Colecia Catedrei de Medicin Celular i Molecular, UMF Carol Davila, Bucureti. celule continuu rennoite, cu originea n celule stem. Ficatul sntos are o populaie celular care se rennoiete ncet, cu hepatocite care triesc 200-450 de zile, eliminate apoi prin apoptoz. Apoptoza este decelabil pe seciunile de ficat prin prezena unor formaiuni acidofile, numite corpi Councilman.61 Noi celule hepatice se formeaz n special n zona periportal, probabil din celule stem. Aceste hepatocite noi curg foarte ncet de-a lungul lamelor de celule hepatice spre venele hepatice terminale. S-a sugerat c hepatocitele ar deveni mai difereniate funcional pe msur ce se mic spre zona perivenoas, dar aceast ipotez pare improbabil, deoarece celulele i schimb funcia ca rspuns la schimbarea micromediului (conform experimentelor de perfuzie inversat, de la vena hepatic terminal la spaiul portal). Un alt model pornete de la recunoaterea unanim a capacitii ficatului de a se regenera ca rspuns la pierderea hepatocitelor. Aceasta s-ar realiza prin declanarea proliferrii hepatocitelor linitite, aflate n G0, care sunt determinate s reintre n ciclul celular. Acest model admite prezena de celule stem facultative localizate n sau lng epiteliul biliar. Reeaua biliar este nu numai un conduct pentru bil, ci i un compartiment celular care prolifereaz n condiii adecvate pentru a da natere la hepatocite complet difereniate i la alte tipuri celulare. Celulele ovale reprezint progenitura acestor celule stem i funcioneaz ca un compartiment de amplificare pentru generarea de noi hepatocite. Acesta este un proces condiionat care apare numai cnd capacitatea de regenerare a hepatocitelor este depit.62
3.7. Celulele spaiului portal Sunt celulele care populeaz esutul conjunctiv lax din spaiile portale: n majoritate fibroblati i fibrocite, alturi de limfocite, macrofage, mastocite (Fig.41), rare n ficatul uman normal, dar numeroase n ficatul inflamat sau cirotic unde joac un rol n favorizarea fibrogenezei: mononuclearele prin eliberarea de citokine ce stimuleaz celulele Ito s sintetizeze matrice extracelular; mastocitele prin activitatea de inhibiie a proteazelor care lizeaz componentele matricei extracelulare.58,59
3.8. Celulele progenitoare: celule stem i celule ovale Ficatul adult normal nu este unanim considerat ca o ierarhie de celule originare din celula stem, unii fiind n favoarea, alii contra acestei teorii. Modelul ficatului curgtor60 consider ficatul ca un sistem de linii celulare cu origine n celulele stem, de-a lungul crora se produce un proces de difereniere lent, unidirecional, terminal, permanent. Doar cinetica acestui proces variaz n starea regenerativ, fa de starea normal, linitit. Astfel, ficatul normal s-ar comporta asemntor cu intestinul, ca o linie de
69
Tabelul 3 Markeri pentru celulele ovale. Citokeratinele 7, 8, 18, 19 (expresie intens) Citokeratina 14 (exprimat de puine celule) Vimentina OV 6, OC 2, OC 3 - antigene citoscheletale Gama-glutamil transpeptidaza CD 34 SCF (stem cell factor) c-kit (CD 117) - receptor pentru SCF Thy-1 (CD 90) Alfa-fetoproteina
Reproducere cu permisiune din M. Pan, C. Vidulescu, Celulele stem - cheia regenerrii ficatului, Medical Update, 5:227-231, 2001
D
V
Celulele stem Compartimentul celulelor stem este presupus a exista pe baza unor dovezi indirecte, de vreme ce celulele stem sunt greu de identificat cu precizie. n privina localizrii lor, dovezile experimentale indic urmtoarele posibiliti: celule localizate n stroma spaiului portal; celule periductulare, celule mici din jurul ductulilor (colangiolelor); celule ductulare din chiar peretele ductulilor (colangiolelor) i al ductelor biliare interlobulare mici; celule localizate n orice regiune a epiteliului arborelui biliar, inclusiv extrahepatic; printre hepatocitele periportale; localizare extrahepatic: celule stem cu proveniena n mduva osoas, ce vin la ficat prin curentul sanguin.63-65 n prezena unui stimul natural sau experimental adecvat, aceste celule stem i semnaleaz prezena prin apariia progeniturii lor, reprezentat de celulele ovale, celule neparenchimatoase, cu nucleu oval i citoplasm bazofil, puin abundent. Aceste celule se dispun iniial sub forma unei arborizaii de ductuli asemntori cu ductulii terminali Hering, apoi sunt capabile s se diferenieze fie n hepatocite, fie n celule biliare ductale. Celulele ovale n cazurile de extrem hepatotoxicitate, proliferarea hepatocitelor este restrns sau chiar abolit. Cnd regenerarea hepatocitelor este compromis, apar structuri ductulare, n continuarea arborelui biliar, care avanseaz spre parenchim prin proliferare i migrare. Observate iniial la animalele de experien
Fig.42 Spaiu portal. Sgeata mare indic o celul ce exprim pe suprafa receptorul c-kit (CD 117) pentru SCF (stem cell factor) D - duct biliar interlobular. V - vase pline cu hematii au o intens fluorescen nespecific. Imunofluorescen. Anticorpi anti-CD117 marcai cu ficoeritrin x 400. Seciune de ficat uman, zon paratumoral, bolnav cu hepatocarcinom, operat la Institutul Clinic Fundeni, Centrul de Chirurgie General i Transplant hepatic. celulele ce prolifereaz formnd expansiuni ale ductulelor (colangiolelor) spre parenchim au fost numite celule ovale (Farber, 1955). Celulele ovale au suscitat mult interes, deoarece ele reprezint celulele-int pentru carcinogenii hepatici. obolanii tratai cu carcinogeni chimici prezint o hiperplazie evident a ductulelor bilare, formate din celule ovale. Ele au capacitatea de a se diferenia n celule ce exprim toate caracterele morfologice ale hepatocitelor mature. La om, aceste structuri ductulare, formate din celule epiteliale biliare numite celule ovale ductulare, au fost numite neoductuli sau neocolangiole, observate n bolile hepatice cronice i cancer. Asocierea proliferrii celulelor ovale cu regenerarea deficient, la animal i la om, a dus la ideea c ele reprezint o populaie de celule progenitoare. Se crede c celulele ovale preiau sarcina creterii regenerative dup pierderea substanial de celule din ficat, sugernd c ele sunt progenitura unor celulele stem facultative. Celulele ovale ductulare migreaz n parenchimul periportal. Ele exprim pe membrana celular sau n citoplasm o combinaie specific de markeri moleculari (Tabelul 3). Iniial aceste celule se comport ca celule biliare autentice, cu expresia filamentelor intermediare (citokeratine) specifice, dar apoi capt trsturi de hepatocit ca sinteza de -fetoprotein i sinteza de
70
HEPATOBLATI fr contact mezenchimal
HEPATOCITE PRIMITIVE = ?
HEPATOCITE
?
HEPATOBLATI PRIMITIVI
HEPATOBLATI cu contact mezenchimal
CELULE DUCTALE PRIMITIVE = CELULE TRANZIIONALE ~ CELULE OVALE) =
CELULE DUCTALE
HISTOGENEZA REGENERARE LA ADULT

HEPATOCITE DE TRANZIIE HEPATOCITE
CELULE STEM
CELULE TRANZIIONALE (OVALE)
CELULE DUCTALE
Fig.43 Analogie ntre histogeneza i regenerarea hepatocitelor. albumin. Ulterior, aceste ducte dispar rapid i sunt nlocuite cu hepatocite mici sau chiar celule intestinale. Proliferarea i diferenierea celulelor ovale este probabil influenat puternic de semnalizarea paracrin de la celulele hepatice stelate (vezi cap.4). Celulele ovale apar ca progenitura unor celule stem pluripotente (facultative) care au potenialul celulelor stem gastro-intestinale. Aceste celule stem par s fie localizate n colangiole sau ductele biliare mici intelobulare sau n apropierea lor (Fig.42). Astfel, celulele ovale constituie o rezerv pentru hepatocite, atunci cnd regenerarea hepatocitelor este compromis.66 n acest context se consider c ele pot fi vehicule utile pentru terapia genic ex vivo. Geneza i filiaia celulelor hepatice Ficatul vertebratelor i are originea ntr-o expansiune a peretelui intestinului primitiv, caudal de stomac, pancreas i vezica biliar i const din componente endodermale i respectiv mezodermale. Acestea dau natere hepatoblatilor i respectiv celulelor sinusoidale, perisinusoidale i celulelor conjunctive din spaiile portale. Hepatoblatii primitivi care nconjoar mezenchimul portal formeaz un cilindru cu perete dublu, format de hepatocite, numit plac ductal care se remodeleaz i migreaz n mezenchim pentru a forma ductele biliare intrahepatice. Hepatoblatii exprim proteinele specifice hepatocitare: -fetoproteina (FP) i albumina, n timp ce migreaz spre stroma portal, iar n plus ncep s exprime marker-ul specific pentru ductele bilare, gammaglutamil transpeptidaza (GGT). Iniial, expresia filamentelor intermediare este restrns la citokeratina 8, dar n timpul stadiilor ulterioare ale morfogenezei ductelor, noile celule ductale ncep s exprime citokeratinele biliare caracteristice 7, 8, 18 i 19, dei continu s exprime trsturi de hepatocit pn la 7-14 zile dup natere.
71
3 a
c N
Ht
Fig. 44 Celule hepatice n cultur a - Cultur primar de celule hepatice ce conflueaz n monostrat Ht -Celul tetraploid Coloraie Giemsa x 600 b - Cultur de celule hepatice dup un pasaj. Se observ o celul tetraploid i alta octoploid Coloraie Giemsa x 1000 c - Cultur de celule hepatice; N - nuclei mari cu nucleoli vizibili. Sgeata arat grupuri de mitocondrii Contrast de faz. x 1000. n contrast, hepatoblatii care nu sunt n contact cu mezenchimul portal se difereniaz n hepatocite ce formeaz cordoane, dei, la rndul lor, continu s exprime markerul biliar GGT pn la natere. Citokeratinele hepatocitare sunt numai 8 i 18. Astfel, n ficatul de om i de obolan, hepatoblatii i celulele bilare primitive sunt bipoteniale pentru hepatocite i celule biliare, cel puin pn la natere. Experimental, destinaia hepatoblatilor fetali poate fi schimbat in vitro manipulnd condiiile specifice de cultur. Expresia n embriogenez a genelor specifice ficatului este recapitulat la adult prin reapariia i proliferarea echivalenilor celulelor tranziionale reprezentate de celulele ovale (Fig.43). Celulele ovale sunt progenitura unor celule stem facultative localizate n arborele biliar. n timpul dezvoltrii embrionare, transcripia -FP este marker-ul cel mai timpuriu al expresiei genelor specifice ficatului n anumite celule endodermale determinate i este urmat, dup o zi, de sinteza de albumin. Celulele devin astfel hepatoblati. n acest timp are loc formarea cordoanelor hepatice. Celulele ductelor biliare primitive intrahepatice exprim, n plus fa de aceste proteine hepatocitare, markeri epiteliali biliari i, n consecin, au fost numite celule tranziionale, considerate a rmne n ficatul adult ca progenitoare bipoteniale pentru hepatocite i celulele biliare. Celulele ovale reprezint progenitura celulelor stem activate, concepie sprijinit de faptul c ele exprim markeri considerai caracteristici celulelor stem (Tabelul 3), printre care factorul celulelor stem (SCF) i receptorul su c-kit (CD117) de asemenea bcl-2 i citocheratine.14,67,68 Culturile de celule hepatice Comportamentul celulelor hepatice n cultur (Fig.44) este intens studiat, deoarece acestea pot constitui modele experimentale pentru studii ale metabolismului hepatic, biotransformrii, mutagenezei i pot oferi dovezi experimentale farmacologice pentru tratamentul insuficienei hepatice i a bolilor genetice hepatice prin terapie genic. Stpnirea condiiilor de supravieiure a hepatocitelor umane i condiionarea lor n culturi deschide perspectiva utilizrii lor terapeutice prin transplant de celule. Pe de alt parte se sper construirea de dispozitive cu rolul de ficat artificial, care s suplineasc funciile hepatice la bolnavii cu insuficien hepatic grav. Un asemenea dispozitiv poate folosi celule hepatice ncapsulate n mici bile construite din mase plastice speciale i cptuite cu colagen modificat.
72
Fig.45 Fibre de reticulin (colagen III) printre cordoanele de hepatocite i n jurul venulei centrolobulare.Impregnare argentic. Micrografie x 200. Colecia Catedrei de Medicin Celular i Molecular, UMF Carol Davila, Bucureti. Calitatea hepatocitelor folosite pentru transplant este extrem de important depinznd de natura esutului de origine. Cum orice ficat disponibil este utilizat n general pentru transplant, sunt folosite ca surse de celule segmente de ficat neadecvat pentru transplantare de organ precum i cele rezultate din reducia grefelor. O alt surs poate fi ficatul fetal. De aceea studiile se concentreaz acum i pe perfecionarea crioprezervrii.
Fig.46 Fibre de reticulin (colagen III) n spaiul port. Impregnare argentic. Micrografie x 200. Colecia Catedrei de Medicin Celular i Molecular, UMF Carol Davila, Bucureti. itin sulfat, dermatan sulfat, hialuronat. n spaiile portale ce conin esut conjunctiv, este cert c fibroblatii produc colagen, glicoproteine i proteoglicani, dar i n parenchimul hepatic, hepatocitele, celulele endoteliale, celulele Kupffer, celulele Ito, pot produce componente ale matricei. Substana fundamental, cu consistena ei obinuit de gel, pare s lipseasc n spaiul perisinusoidal. Plasma, care iese prin fenestraiile endoteliului sinusoidelor are acces direct la suprafaa hepatocitelor. Aceasta faciliteaz schimbul metaboliilor ntre snge i hepatocite. Nu poate fi observat o membran bazal; cu toate acestea, n ficatul normal pot fi detectai, n spaiul perisinusoidal, toi constituenii majori ai unei membrane bazale, care ns nu au o aparen morfologic: colagen IV, laminin, heparan sulfat i
4. MATRICEA EXTRACELULAR Matricea extracelular a ficatului este format din colagen: predomin tipurile I, III, IV; glicoproteine: predomin fibronectina i laminina; proteoglicani: predomin heparan sulfat, condro-
Fig. 47 Colagen n spaiul Disse. Electronomicrografie x 50000. Colecia Catedrei de Medicin Celular i Molecular, UMF Carol Davila, Bucureti.
73
fibronectin. Matricea din spaiul Disse influeneaz funcia hepatocitelor, afectnd expresia genelor specifice, ca cea pentru albumin, i de asemenea, numrul i porozitatea fenestraiilor sinusoidelor. Poate fi important n regenerarea hepatic. n acest spaiu exist fascicule subiri de colagen, ce formeaz o reea lax, corespunznd reelei argirofile de fibre reticulare sau de reticulin (colagen III) din jurul sinusoidelor, demonstrabil la MO prin impregnare argentic (Fig.45,46) i vizibil pe preparatele de TEM (Fig.47). Aranjamentul tridimensional al fibrelor de colagen intralobulare se observ bine la SEM pe un preparat din care au fost ndeprtate celulele hepatice prin macerare n baze tari. Se vd fascicule de fibrile de colagen de 60nm n esutul conjunctiv al spaiilor portale, continundu-se cu o reea de fascicule fine de fibrile ce nconjoar sinusoidele. Reelele de fibrile ce nconjoar sinusoidele adiacente sunt interconectate prin fascicule mai groase de colagen care traverseaz cordoanele de hepatocite, trecnd printre celule. Fibrilele de colagen din spaiile portale au acelai diametru cu cele din jurul sinusoidelor. De aceea nu mai are rost perpetuarea ideii tradiionale de deosebire ntre fibrele reticulare i fibrele de colagen, acum fiind clar c reticulina din fibrele reticulare este de fapt unul dintre tipurile de colagen i anume colagen III.69 Dat fiind raritatea fibroblatilor tipici n spaiul Disse, originea reelei de colagen din lobulii hepatici este un subiect de disput. Exist dovezi c sunt implicate celulele Ito (depozitare de lipide), care n anumite condiii vireaz spre fenotipul de fibroblast. Celulele endoteliale au fost i ele incriminate, dar i celulele hepatice, tiindu-se c, n cultur, secret mici cantiti de colagen. Cu toate acestea, nu se tie care este celula responsabil, n condiii normale, de majoritatea produciei colagenului. Controlul fibrilogenezei, puin cunoscut, pare s implice interaciuni celulare ntre celulele sinusoidale i perisinusoidale. Colagenul Celulele Kupffer secret un factor (necaracterizat) care poate stimula celulele Ito s produc colagen. Radicalii liberi de 02 eliberai de celulele Kupffer activate i de alte macrofage au un efect similar. Creterea fibroblatilor este favorizat de factori eliberai de celula Kupffer de exemplu interleukina I (IL-I), factorul necrozei tumorale (TNF-), i factorul de cretere derivat din plachete (PDGF). Leukotrienele secretate de macrofage atrag prin chimiotactism celule inflamatorii ce secret factori promotori ai fibrozei. Vitamina A n doze mari, ca i
-factorul de cretere transformant (TGF-) stimuleaz fibrilogeneza de ctre celulele Ito. TGF- secretat de celulele hematopoietice poate regla fibrilogeneza la mai multe nivele: prin creterea produciei de ARNm pentru colagen i fibronectin; prin producia de inhibitor de colagenaz; prin chimiotaxia monocitelor i fibroblatilor. n fibroza hepatic, celulele Ito prolifereaz i se acumuleaz n exces matrice extracelular. Cnd ficatul se regenereaz, celulele Ito se transform n miofibroblati i i modific secreia de colagen de la tipurile III, IV, la tipul I, prezent n majoritatea formelor de ciroz. Fibroza poate fi nu numai rezultatul fibrilogenezei active ci i al alterrii mecanismului de degradare a colagenului normal sau anormal. n aceast privin, celulele endoteliale, celulele Ito, i celulele Kupffer au roluri importante n clearance-ul colagenului tip I, proteoglicanilor i al colagenului denaturat. Schimbarea n activitile acestor celule poate modifica extensia fibrozei. Astfel, sinteza crescut i/sau degradarea sczut a colagenului duc la depunerea excesiv a acestuia, care afecteaz funcia hepatic. Proliferarea excesiv a elementelor matriciale, n special a colagenului, mpiedic curgerea sngelui i a bilei i interfer cu regenerarea celulelor hepatice: fibroza pericelular afecteaz hrnirea celulelor cu producerea de atrofie hepatocelular. fibroza spaiului Disse mpiedic trecerea substanelor din snge n celule. fibroza n jurul spaiilor portale i a venulelor hepatice obstrucioneaz fluxul sanguin prin ficat. Rezistena venoas n ficat crete de la ramurile venei porte la sinusoide i n final la venele hepatice. Toate cele 3 moduri pot fi implicate. Benzile fibroase care leag tracturile portale cu venulele centrale favorizeaz apariia de canale anastomotice: sngele arterial ocolete hepatocitele normale i se vars direct n venele hepatice eferente, ceea ce altereaz i mai mult funcia hepatocelular i duce la necroz. Tipul de proces implicat, localizarea i extinderea lui determin importana disfunciei hepatice.70 Problema este important, datorit implicaiilor pe care le are n strile patologice, n care fibroza este un element redutabil. De exemplu, la alcoolici, se produce colagenizarea spaiului Disse, formarea unei lamine bazale sub endoteliul sinusoidelor i scderea numrului fenestrelor. Aceste procese sunt maximale n zona 3. Acidul hialuronic Acidul hialuronic (HYA) este un polizaharid ramificat, cu greutate molecular (GM) mare, rspndit n esutul
74
conjunctiv. Este produs mai ales de celulele mezenchimale, intr n circulaie prin limf, i este reciclat de ctre celulele endoteliale ale sinusoidelor hepatice, care posed un receptor de mare afinitate pentru HYA. n ficatul adult, HYA este sintetizat de celulele hepatice stelate (Ito). Endotoxinemia i/sau septicemia cresc producia HYA de ctre un numr crescut de celule stelate, prin activare celulelor stelate, cu creterea produciei de HYA i prin activarea celulelor reticulo-endoteliale ale ficatului, cu producerea de mediatori ce cauzeaz proliferarea celulelor stelate i sinteza crescut de HYA. HYA din ser se poate msura prin RIA (radioimmunoassay). Semiviaa lui n ser este de doar 2-5 min., cu o concentraie de 20-40 g/l la 30-40 de ani, cu o limit superioar de 100 g/l la 60-70 de ani, la indivizii normali. HYA aparine unui grup de substane, glicozaminoglicani acizi, component major, alturi de colagen, a matricei extracelulare. Glicozaminoglicanii acizi, inclusiv HYA, cresc n ficat n ciroz, proporional cu coninutul n colagen. Celulele stelate Ito sunt, probabil, responsabile i de formarea de colagen. Colagenizarea spaiului Disse duce la modificarea sinusoidelor hepatice, cu pierderea fenestrelor i formarea unei membrane bazale. Acest fenomen de capilarizare a sinusoidelor e nsoit de producia crescut de HYA i de eliberarea lui n snge, ca i de un clearance redus al HYA aflat n circulaie. De aceea concentraia seric a HYA crete la 200g/l, iar concentraia 300g/l indic ciroza, mai ales ciroza biliar primar, hepatita cronic i boala hepatic alcoolic. Concentraia crescut de HYA poate aprea i n artrita reumatoid, osteoartrit, sclerodermie, unde producia crescut are loc n sinoviala inflamat.71-73
5. CILE BILIARE EXTRAHEPATICE
5.1. Ductele biliare extrahepatice Poriunea extrahepatic a sistemului de ducte conduce bila de la ficat la vezica biliar i apoi n duoden. Ductele hepatice drept i stng, dreneaz bila din lobii corespunztori ai ficatului. Ductul hepatic comun (ductus choledochus) este format prin unirea acestora. La 3 cm de la originea sa ductul hepatic comun primete afluena ductului cistic, apoi se continu, n jos, pn la vrsarea sa n duoden, pe o lungime de nc 7 cm, prin spatele capului pancreasului, apropiindu-se de ductul pancreatic. Ambele ducte
traverseaz musculara duodenului, apoi au un traiect oblic prin submucoasa acestuia unde n final se unesc formnd ampula hepato-pancreatic (Vater) care se deschide n lumenul duodenului, n vrful unei mici papile.74-76 Structura histologic. Ductele au un epiteliu simplu columnar. La om, dup colecistectomie, i la animalele care nu au vezic biliar, ca obolanul, epiteliul coledocului poate suplini n mic msur funcia de concentrare a bilei. Uneori au n epiteliul lor grupuri de celule secretoare de mucus. Sunt nvelite de un esut conjunctiv dens, acoperit de mezoteliul peritoneal. n peretele duodenului, ductul biliar i cel pancreatic sunt nconjurate de o band de muchi neted, numit sfincterul Oddi. Acest complex de muchi const din patru pri: o band circular de muchi neted - sphincter choledochus - n jurul poriunii terminale a ductului biliar; un sphincter pancreaticus, n jurul ductului pancreatic; fascicule longitudinale de muchi neted fasciculus longitudinalis - n spaiul dintre ducte; fasciculele longitudinale scurteaz poriunea intramural a ductelor i probabil faciliteaz scurgerea bilei n duoden. o reea de fibre musculare n jurul ampulei sphincter ampullae.77 n mod normal, contracia sfincterului coledocului oprete curgerea bilei. Sfincterul are un tonus bazal de 10 mmHg i o activitate fazic independent de contracia muchiului neted duodenal. Rspunde la doze foarte mici de hormoni enteroendocrini i la anticolinergice. Gradul de dezvoltare al acestor componente ale sfincterului Oddi difer ntre indivizi. Cnd sfincterul ampulei este prea bine dezvoltat, contracia sa poate avea nedoritul efect de reflux biliar n ductul pancreatic, ducnd n timp la pancreatit. Ductul cistic (al vezicii biliare) are o mucoas plicaturat, cu falduri spiralate, numite valvele lui Heister. Ductul cistic are o lungime de 3-4 cm ntre gtul vezicii i vrsarea sa n ductul hepatic comun.
5.2. Vezica biliar Generaliti. Vezica biliar este un organ cavitar, n form de par, ce ocup o adncitur de pe suprafaa inferioar a ficatului. Const din corp, fund i un gt care se continu cu canalul cistic. Are dimensiunile 10/4 cm i o
75
CANAL CISTIC VEZICA BILIAR
DUCTE HEPATICE
EPITELIUL VEZICII BILIARE
COLEDOC
MUCOASA CORION MUSCULARA
ARTERE
NERVI
VENE
ADVENTIIA ESUT CONJUNCTIV
SCHEM
MUCOASA
MUSCULARA
MICROGRAFIE
ADVENTIIA
Fig.48 STRUCTURA HISTOLOGIC A PERETELUI VEZICII BILIARE. Coloraie tricrom Masson.
76
COMPLEXE JONCIONALE APICALE
Na+ H20
Cl Lumen vezical
Lumen vezicular
MEMBRANA BAZAL CAPILAR FENESTRAT FIBROBLATI
esut conjunctiv lax
SPAII INTERCELULARE LATERO-BAZALE
Fig.49 Mucoasa vezicii biliare. Epiteliu simplu cilindric cu platou striat (microvili) din vezica biliar. a. Schem dup ME x 1800: sgeile roii indic direcia de transport al apei i ionilor de ctre celulele epiteliale biliare; b. micrografie x 600, coloraie HE. capacitate de 40-70 ml. Poate varia ca form de la un individ la altul i este adesea sediul unor procese patologice care i afecteaz capacitatea i grosimea peretelui. Structura histologic (Fig.48). Suprafaa vezicii biliare este acoperit cu mezoteliul seroasei peritoneale, cu excepia feei sale hepatice. Peretele are un strat exterior de esut conjunctiv i o muscular format din muchi neted, cptuite de o mucoas compus din epiteliu i lamina propria foarte vascularizat. Mucoasa este plicaturat n falduri ramificate care delimiteaz cripte. Faldurile mucoasei sunt nalte i mai apropiate n vezica contractat, dar sunt scurte i mai deprtate n vezica destins. Aceste diferene se vd foarte bine la SEM. Epiteliul (Fig.49) are un singur rnd de celule nalte, columnare, cu nuclei ovali i citoplasm slab eozinofil, cu platou striat (la ME microvili mai scuri dect n intestinul subire, cu glicocalix la vrfurile lor). Marginile laterale ale celulelor sunt drepte n poriunea apical, dar pot fi plicaturate i interdigitate n poriunea latero-bazal. n interiorul faldurilor din aceast zon se afl iruri de mitocondrii. ATP-aza de Na+/K+ este localizat n membrana plasmatic lateral. Spaiul intercelular n jumtatea apical este de 15-20 nm i e nchis spre lumen de zonula occludens. Lrgimea spaiului intercelular n partea latero-bazal depinde de starea funcional a vezicii. Este ngust n inactivitate, destins atunci cnd bila se concentreaz prin resorbia apei ce traverseaz epiteliul.78-80 Lamina propria are fibre de colagen i fibre elastice care asigur flexibilitatea peretelui i acomodarea la schimbrile de volum. Conine capilare fenestrate i mici venule. Nu are vase limfatice. Spre gtul vezicii se afl glande tubuloalveolare simple care se ntind din lamina propria pn n muscular. Epiteliul lor este cuboidal, cu o regiune apical necolorat, datorit acumulrii de vezicule de secreie ce conin o form special de mucus. Nucleul este turtit, situat la baz. n aceast regiune se pot afla invaginri profunde ale mucoasei (greit interpretate ca fiind glande). Acestea se ntind pn la lamina propria i muscular. Se numesc sinusurile Rokitansky Aschoff i pot favoriza evaginarea patologic a mucoasei printre fasciculele de muchi neted din muscular. Musculara peretelui vezical este format din fibre musculare netede aezate neregulat n fascicule longitudinale, oblice i transversale. Spaiile dintre fascicule sunt ocupate de fibre elastice i de colagen i rar fibroblati. esutul conjunctiv extern este dens, bogat n colagen i elastin, cu fibroblati, macrofage i uneori
77
grupuri de celule adipoase. Vasele sanguine, nervii, limfaticele vin prin acest strat i trimit ramuri mici spre muscular i mucoas. Destul de frecvent, pe suprafaa hepatic a vezicii, lng gtul ei, se gsesc n esutul conjunctiv ducte relativ lungi, care nu au deschidere n lumen. Unele pot fi n conexiune cu ductele biliare. Se numesc ductele Luschka. Au fost interpretate ca ducte biliare aberante, formate n viaa embrionar i persistnd la adult.
8. Kiernan F, The anatomy and physiology of the liver, Philosophical Transactions of the Royal Society, London, 123:711-770, 1833. 9. Vonnahme FJ, A scanning electron microscopic study of the liver of the monkey Macacca speciosa. II. Intra- and extrahepatic biliary system, Cell Tissue Research, 215:207-214, 1981. 10. Mc Cuskey RS, The hepatic microvascular system, In Arias IM, Jakoby VB, Boyer JL, Fausto N, Schachter D, Schafritz DA, eds. The liver. Biology and pathobiology. New York, Raven Press, 1994, 1089-1106. 11. Brauer RW, Liver circulation and function, Physiological reviews, 43:115-213, 1963. 12. Lautt WW, Hepatic vasculature: a conceptual review, Gastroenterology, 73:1163-1169, 1977. 13. Schaffner F, Popper H, Capillarization of hepatic sinusoids in man, Gastroenterology, 44:239-242, 1963. 14. Disse J, Uber die Lymphbahnen der Saugetierleber, Archive Mikroscopie Anatomie, 36:203, 1890. 15. Mall FP, A study of the structural unit of the liver, American Journal of Anatomy, 5:227, 1906. 16. Trutmann M, Sasse D, The lymphatics of the liver, Anatomy and Embryology, 190:201-209, 1994. 17. Dumont AE, Mulholland JH, Flow rate and composition of thoracic duct lymph in patients with cirrhosis, New England Journal of Medicine, 263:471-474, 1960. 18. Comparini L, Lymph vessels of the liver in man, Microscopic morphology and histotopography, Angiologica, 6:262-274, 1969. 19. Jayle GE, Les nerfs du foie, etude anatomique et histologique, Nutrition, 7:57, 1937. 20. Mallet-Guy P, et al, Etude experimentale de la neurectomie periartere hepatique. I. Effets de la resection du pedicule nerveux anterieure sur le foie normale, Lyon Chir, 51:45, 1956. 21. Bioulac Sage P, Lafon ME, Saric J, et al, Nerves and perisinusoidal cells in human liver, Journal of Hepatology, 10:105, 1990. 22. Rappaport AM, The structural and functional unit in the human liver (liver acinus), Anatomical Record, 130:673-687, 1958. 23. Rappaport AM, The microcirculatory acinar concept of normal and pathological hepatic structure, Beitragen Pathologie, 157:215, 1976. 24. Gebhart R, Metabolic zonation of the liver: regulation and implications for liver function, Pharmacology and Therapeutics, 53:275-354, 1992. 25. Riede UN, Lobinger A, Grunholz D, et al. Influence of autolysis on the quantitative cytoarchitecture of rat hepatocytes. (An ultrastructural morphometric study) Beitragen Pathologie 157:391-411, 1976. 26. Wisse E, An electron microscopic study of the fenestrated endothelial lining of rat liver sinusoids, Journal of Ultrastructural Research, 31:125-150, 1970. 27. Fraser R, Dobbs BR, Rogers GWT, Lipoproteins and the liver sieve: the role of fenestrated sinusoidal endothelium in lipoprotein metabolism, atherosclerosis and cirrhosis, Hepatology, 21:863, 1995. 28. Balabaud C, Boulard A, Quinton A, et al., Light and transmission electron microscopy of sinusoids in human liver In: Bioulac-Sage P, Balabaud C, eds, Sinusoids in human liver:health and disease, Rijswijk: Kupffer Cell Foundation, 1988, 87-110. 29. Burt AD, Le Bail B, Balabaud C, Bioulac-Sage P, Morphologic investigation of sinusoidal cells, Seminars in liver disease, 13:21-38, 1993. 30. Wisse E, An electron microscopic study of the fenestrated
5.3. Vasele, limfaticele i nervii vezicii biliare Vezica biliar este vascularizat de artera cistic. Sngele venos este colectat de vene care se vars n majoritate n vene mici hepatice, numai cteva se vars n ramura cistic a venei porte. Exist o bogie de limfatice, desfurate n dou plexuri, n lamina propria i n esutul conjunctiv extern. Ultimul primete limfatice de la ficat, permind o cale ce explic colecistita asociat adesea cu hepatita. Aceste plexuri limfatice dreneaz n limfatice mai mari care trec n ganglionii limfatici de la gtul vezicii.16 De la acetia, limfa eferent curge prin limfatice care nsoesc ductul cistic i ductul hepatic comun i, dup ce traverseaz o serie de ganglioni limfatici de lng duoden, se vars n cisterna chyli. Nervii vezicii biliare sunt ramuri din simpaticul splanhnic i nervul vag. Studiile privind efectul stimulrii acestor nervi sunt contradictorii, probabil c fiecare are fibre att excitatorii ct i inhibitorii. Exist i fibre nervoase senzitive, cci supradistensia vezicii sau spasmul tractului biliar extrahepatic poate iniia tulburri reflexe ale intestinului.81
BIBLIOGRAFIE
1. Arias IM, Boyer JL, Chisari F.V., et al. eds. The liver. Biology and pathobiology. Fourth edition. Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia, 2001. 2. Arias IM, Jakoby VB, Boyer JL, et al. eds. The liver. Biology and pathobiology. Raven Press, New York, 1994. 3. Motta PM, ed. Biopathology of the liver, an ultrastructural approach, Dordrecht, Kluver, 1988. 4. Melinkoff SM, Some meanings of the liver, Gastroenterology, 76:636-638, 1979. 5. Finlayson NDC, The liver: anatomy, physiology, liver biopsy and congenital disorders, In: Shearman DJC, Finlayson N, Camilleri M, Carter D, eds, Diseases of the Gastrointestinal Tract and Liver, Churchill Livingstone, New York, 1997, 707-733. 6. Hess FA, Weibel ER, Preisig R. Morphometry of dog liver: normal base-line data, Virchows Arch B Cell Pathol. 12:303-317, 1973. 7. Walker RM, Francis Glisson and his capsule, Annals of the Royal College of Surgeons of England, 38:71-91, 1966. 78
endothelial lining of rat liver sinusoids, Journal of Ultrastructural Research, 31:125-150, 1970. 31. Jones EA, Hepatic sinusoidal cells: new insights and controversies, Hepatology, 3:259-266, 1983. 32. Deaciuc IV, Spitzer JJ Hepatic sinusoidal endothelial cell in alcoholemia and endotoxemia, Alcohol Clin Exp Res. 20:607-614, 1996. 33. Eriksson S, Fraser JRE, Laurent TC, et al., Endothelial cells are the site of uptake and degradation of hyaluronic acid in the liver, Experimental Cell Research, 144:223-238, 1983. 34. Deaciuc IV, Bagby GJ, Niesman MR et al, Modulation of hepatic sinusoidal endothelial cell function by Kupffer cells: an example of intercellular communication in the liver, Hepatology, 19:464, 1994. 35. Kuiper J, Brouwer A, Knook DL, et al., Kupffer and sinusoidal endothelial cells, In Arias IM, Jakoby VB, Boyer JL, Fausto N, Schachter D, Schafritz DA, eds. The liver. Biology and pathobiology. New York, Raven Press, 1994, 791-818. 36. Ito T, Shibasaki S, Electron microscopic study on the hepatic sinusoidal wall and fat- storing cells in normal human liver Archives of Histology and Cytology, 29:137-192, 1968. 37. Ahern M, Halliday J et al, Hepatic stellate cell nomenclature, Hepatology, 23:193, 1996. 38. Geerts A, De Bleser P, Hautekeete ML, et al., Fat storing (Ito) cell biology, In Arias IM, Jakoby VB, Boyer JL, Fausto N, Schachter D, Schafritz DA, eds. The liver. Biology and pathobiology. New York, Raven Press, 1994, 819-838. 39. Wake K., Sternzellen in the liver: perisinusoidal cells with special reference to storage of vitamin A, American Journal of Anatomy, 132:429-461, 1971. 40. Pinzani M, Hepatic stellate (Ito) cells: expanding role for a liver specific pericyte, Journal of Hepatology, 22:700-706, 1995. 41. Wisse E. et al On the tumoricide function of the pit cells the NK cells of the liver, In: Vidal Vanaclocha F ed, functional heterogeneity of the liver tissue, Austin:Medical Intelligence Unit, RG Landes Co., 1996, 207-235. 42. Bioulac-Sage P, Kuiper J, VanBerkel TJC, et al., Lymphocyte and macrophage populations in the liver, Hepato-Gastroenterology, 43:4-14, 1996. 43. Bouwens L, Wisse ER, Pit cells in the liver, Liver 12:3, 1992 44. Medlock ES, Haar JL, The liver hemopoietic environment: I. Developing hepatocytes and their role in fetal hemopoiesis, Anat Rec. 207:31-41,1983. 45. Yong KL, Fahey A, Pahal G, et al., Fetal haemopoietic cells display enhanced migration across endothelium, Br J Haematol. 116:392-400, 2002. 46. Gumucio JJ, Bilir BM, Moseley RH, et al., The biology of the liver cell plate, In Arias IM, Jakoby VB, Boyer JL, Fausto N, Schachter D, Schafritz DA, eds. The liver. Biology and pathobiology. New York, Raven Press, 1994, 1143-1163. 47. Jones AL, Anatomy of the normal liver, In: Zakim D and Boyer TD, eds, Hepatology, Philadelphia, WB Saunders Co, 1982, 17-21. 48. Loud AV, A quantitative stereological description of the ultrastructure of normal rat liver parenchymal cells, Journal of Cell Biology, 37:27, 1968. 49. Schmucker DL, Hepatocyte fine structure during maturation and senescence, Journal of Electron Microscopy techniques, 14:106, 1990. 50. Gumucio JJ, Hepatocyte heterogeneity: the coming of age from the description of a biological curiosity to a partial understanding of its physiological meaning and regulation, Hepatology, 9:154, 1989.
51. Claude A, Growth and differentiation of cytoplasmic membranes in the course of lipoprotein granule synthesis in the hepatic cell, Journal of Cell Biology, 47:745, 1970. 52. Jones AL, Schmucker DL, Mooney JS, et al., Alterations in hepatic pericanalicular cytoplasm during enhanced bile secretory activity, Laboratory Investigation, 40:512, 1979. 53. Jones AL, Schmucker DL, Renston LH, et al., The architecture of bile secretion: A morphological perspective of physiology, Digestive Diseases and Sciences, 25:609, 1980. 54. Phillips MJ, Oshio C, Miyairi M, et al., What is actin doing in the liver cell? Hepatology, 3:433-436, 1983. 55. Jones AL, Renston R, Schmucker DL, et al., A morphologic evaluation of the pericanalicular cytoplasm in the rat hepatocyte demonstrating possible components of the bile secretory apparatus. In Preiseg R, Bircher J, eds., The Liver Quantitative aspects of structure and function, Aulendorf, Editio Cantor, 1979, 63. 56. Jones AL, Burwen SJ, Pathways and functions of biliary protein secretion, In Forte JG ed, handbook of physiology, The gastrointestinal system III, Bethesda, MD, American Physiological Society, 1989, 663. 57. Alpini G, McGill JM, Larusso NF, The pathobiology of biliary epithelia.Hepatology, 35:1256-1268, 2002. 58. Armbrust T, Batusic D, Ringe B, et al., Mast cells distribution in human liver disease and experimental rat liver fibrosis. Indications for mast cell participation in development of liver fibrosis, Journal of Hepatology, 26:1042-1054, 1997. 59. Roberts IS, Brenchley PE, Mast cells: the forgotten cells of renal fibrosis, Journal of Clinical Pathology, 53:858-862, 2000. 60. Zajicek G, Oren R, Weinreb M Jr., The streaming liver, Liver, 5:293-300, 1985. 61. Valente M, Calabrese F, Liver and apoptosis, Ital J Gastroenterol Hepatol. 31:73-77, 1999. 62. Brill S., Holst P., Sigal S., et al., Hepatic progenitor populations in embryonic, neonatal and adult liver, P.S.E.M.B., 204:261-269, 1993. 63. Sell S., Heterogeneity and plasticity of hepatocyte lineage cells, Hepatology, 33:738-750, 2001. 64. Petersen B.E., Bowen W.C., Patrene, K.D., et al., Bone marrow as a potential source of hepatic oval cells, Science, 284:1168-1170, 1999. 65. Theise N.D., Nimmakayalu M., Gardner R, et al., Liver from bone marrow in humans, Hepatology 32:11-16, 2000. 66. Alison M., Liver stem cells: a two compartment system, Curr. Op. Cell Biol., 10:710-715, 1998. 67. Schmidt C, Bladt F, Goedecke S, et al., Scatter factor/hepatocyte growth factor is essential for liver development, Nature, 373:699-702, 1995. 68. Sigal SH, Brill S, Fiorino AS, et al., The liver as a stem cell and lineage system, American Journal of Physiology (Gastrointest. Liver Physiol. 26):G139-G148, 1992. 69. Rojkind M and Greenwl P, The extracellular matrix of the liver In Arias IM, Jakoby VB, Boyer JL, Fausto N, Schachter D, Schafritz DA, eds. The liver. Biology and pathobiology. New York, Raven Press, 1994, 843-868. 70. Martinez-Heranadez A, Delgado FM, Amenta PS, The extracellular matrix in hepatic regeneration: localization of collagen types I, III, IV, laminin, and fibronectin, Laboratory Investigation, 64:157-166, 1991. 71. Murata K, Ochiai I, Akashio K, Polydispersity of acidic glycosaminoglycan components in human liver and the changes at different stages in liver cirrhosis, Gastroenterology, 89:1248-1257, 1985.
79
72. Johnson SJ, Extracellular matrix proteins and hepatic fibrosis, Hepato-Gastroenterology, 43:44-55, 1996. 73. Bissell DM, Choun MO, The role of extracellular matrix in normal liver, Scandinavian Journal of Gastroenterology, 23(suppl.151):1, 1988. 74. Niederau C, Sonnenberg A, Mueller J, Comparison of the extrahepatic bile duct size measured by ultrasound and by different radiographic methods, Gastroenterology, 87:615, 1984. 75. Northover JMA, Terblanche J, A new look at the arterial supply of the bile duct in man and its surgical implications, British Journal of Surgery, 66:379, 1979. 76. Boyden EA, The sphincter of Oddi, Surgery, 1:25, 1937. 77. Elias H, Petty D, Gross anatomy of blood vessels and ducts within the human liver, American Journal of Anatomy, 90:59, 1952. 78. Govil H, Reddy V, Kluskens L, et al., Brush cytology of the biliary tract: Retrospective study of 278 cases with histopathologic correlation, Diagn Cytopathol. 26:273-277, 2002. 79. Onori P, Franchitto A, Alvaro D, et al., Immunohistochemical features of bile duct epithelial cells in normal and experimental liver conditions, Ital J Anat Embryol.,106(Suppl 1):371-378, 2001. 80. Jezequel AM, Benedetti A, Marucci L, et al., Morphological features and modulation of the intrahepatic biliary epithelium. Ital J Anat Embryol.106( Suppl 1):363-369, 2001. 81. Shaffer EA, Review article: control of gall-bladder motor function, Aliment Pharmacol Ther. 14 Suppl 2:2-8, 2000.
80

Cap 3

Uploaded by

Document Information

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Cap 3

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

CAPITOLUL

HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI I A CILOR BILIARE

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI

SINUSOID HEPATIC CELULA KUPPFER Spaiu perisinusoidal Disse

MICROVILI n domeniul sinusoidal

CANALICUL BILIAR n domeniul biliar

LOBL HEPATIC CLASIC

Ramuri terminale - portale - arteriolare - biliare

SPAIU PORTAL CU TRIADA PORTAL

Duct biliar interlobular

Fig.1 Componentele histologice ale ficatului.

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

*Se exclud reeaua de reticulin, canaliculele biliare intralobulare.

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI

Arteriol hepatic terminal

Limfatic portal Ven portram interlobular

Arter hepaticram interlobular Venula de racord

Venul portal terminal perilobular

Duct biliar terminal

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

Canalicule Celule endoteliale biliare sinusoidale intralobulare

Ducte biliare interlobulare

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

LOBUL CLASIC LOBUL PORTAL

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

RAMURI TERMINALE - ARTERIALE - PORTALE - BILIARE VENUL HEPATIC TERMINAL (CENTROLOBULAR)

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI

sursa meninerii i regenerrii parenchimului hepatic.58 (Vezi Tabelul 2)

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI

SPAIU PERISINSOIDAL DISSE

Fig.12 Sinusoid hepatic. Raporturile ntre hepatocite, celulele sinusoidale i perisinusoidale.

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI

Hepatocit Lumen capilar A A A N A

Fig.19 Spaiul perisinusoidal Disse.

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI

CELULA ITO SPAIU DISSE Microvili

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI

REN RER GLICOGEN

Sinteza i conjugarea acidului colic

COLESTEROL CIRCULANT ACIZI BILIARI REABSORBII DIN INTESTIN

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

Laureniu M. POPESCU, Cristina VIDULESCU - HISTOLOGIA MOLECULAR A FICATULUI

Irinel POPESCU - CHIRURGIA FICATULUI

HEPATOBLATI fr contact mezenchimal

HEPATOBLATI cu contact mezenchimal

CELULE DUCTALE PRIMITIVE = CELULE TRANZIIONALE ~ CELULE OVALE) =

HISTOGENEZA REGENERARE LA ADULT

CELULE TRANZIIONALE (OVALE)