QUE ES ANTIBIOGRAMA?

El antibiograma es la prueba microbiolgica que se realiza para determinar la susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de una bacteria a un grupo de antibiticos. Las tcnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de microbiologa para estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables de las infecciones.

QUE ES EL METODO DE DILUCION EN CALDO? En los mtodos de dilucin en caldo, base de casi todos los mtodos utilizados en la actualidad, se colocan concentraciones decrecientes del agente antimicrobiano, generalmente diluciones en tubos con un caldo de cultivo que sostendr el desarrollo del microorganismo. El caldo ms comnmente usado para estas pruebas es el de Mueller-Hinton suplementado con los cationes magnesio y calcio. Los agentes antimicrobianos se preparan en "soluciones madre" concentradas y luego se diluyen en caldo hasta obtener las concentraciones apropiadas. Un tubo de caldo se mantiene sin inocular como control negativo de crecimiento. Luego de la incubacin adecuada (usualmente de un da para el otro) se observa la turbidez de los tubos que indicar desarrollo bacteriano. El microorganismo crecer en el tubo control y en todos los otros que no contengan suficiente agente antimicrobiano como para inhibir su desarrollo. La concentracin de antibitico que presente ausencia de crecimiento, detectada por falta de turbidez (igualando al control negativo), se designa como la Concentracin Mnima Inhibitoria (CMI) (ver esquema ampliado). Para medir la capacidad de un antimicrobiano para matar a un microorganismo (CMB) se debe realizar la prueba de actividad bactericida, que emplea el mismo sistema de dilucin en caldo que para medir la sensibilidad. Al mismo tiempo que la suspensin inicial del microorganismo es inoculada en los tubos de caldo, se toma una alcuota del tubo de control de crecimiento, inmediatamente despus de ser sembrado, y se inocula tambin en una placa de agar para determinar el nmero real de unidades formadoras de colonias (UFC) del inculo. Este nmero se obtiene al contar las colonias presentes luego de la incubacin de la placa de agar hasta el da siguiente y por multiplicacin por el factor de dilucin. Por ejemplo, usando un asa calibrada de 0,01 ml para sembrar la placa y contando unas 250 colonias, en 1 ml del tubo original habr 250/0,01. Una vez determinada la CMI, se siembra una cantidad conocida de inculo de cada uno de los tubos de caldo que no presentaban turbidez en placas de agar (la pequea cantidad del agente antimicrobiano que es llevada junto con el inculo se elimina por dilucin en el agar), y el nmero de colonias que crece en estos subcultivos, despus de incubar durante la noche, se

compara con el nmero de UFC/ml del cultivo original. Dado que incluso las drogas bactericidas no siempre esterilizan totalmente una poblacin bacteriana, la mnima concentracin del agente antibacteriano que permite sobrevivir a menos de 0,1 % del inculo original se denomina concentracin bactericida mnima (CBM) o concentracin letal mnima (CLM). Las CMI y las CMB de un agente antimicrobiano pueden ser determinadas, con este mtodo o con alguna variante, para cualquier bacteria que crezca en un medio liquido. Pero segn se pudo disponer de mayor nmero de agentes antimicrobianos para el tratamiento de una gran variedad de bacterias, se hicieron aparentes las limitaciones del macromtodo de dilucin en caldo y se desarrollaron variantes de esta tcnica que permitieran, por ejemplo, probar simultneamente un gerrnen aislado de un paciente frente a ms de un agente antimicrobiano.

QUE ES EL METODO DE DIFISION EN AGAR? El microorganismo a investigar se inocula en una o varias placas de agar y sobre su superficie se disponen los discos correspondientes a varios antibiticos. Se incuban las placas durante 16-24 horas a 35C y al cabo de este tiempo se estudia el crecimiento en ellas. Se valora el dimetro de la zona de inhibicin que se forma alrededor de cada disco y se compara con las referencias oportunas publicadas por el NCCLS. Con esta referencia podemos informar si el microorganismo es Sensible, Intermedio o Resistente (S, I, R) a cada uno de los antibiticos ensayados en las placas. CUAL ES EL FUNDAMENTO DE LA PRUEBA? El primer fundamento del antibiograma es el de medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se sospecha es la responsable de una infeccin a uno o varios antibiticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un tratamiento antibitico. El antibiograma sirve, en primer lugar, para orientar las decisiones teraputicas individuales. El segundo fundamento del antibiograma es el de seguir la evolucin de las resistencias bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiolgico, a escala de un servicio, un centro de atencin mdica, una regin o un pas, es como puede adaptarse la antibioterapia emprica, revisarse regularmente los espectros clnicos de los antibiticos y adoptarse ciertas decisiones sanitarias, como el establecimiento de programas de prevencin en los hospitales. CUALES SON LOS MECANISMOS DE ACCION DE LOS ANTIBIOTICOS?

El antibitico no crea resistencia, pero selecciona las bacterias resistentes eliminando las sensibles. Es lo que se conoce con el nombre de presin de seleccin. El aumento de la frecuencia de las cepas resistentes va unido cas siempre al uso intensivo del antibitico en cuestin. Antibiticos primariamente bactericidas: Ejercen una accin letal e irreversible sobre el microbio

antibiticos primariamente bacteriostticos: inhiben el crecimiento pero no matan al microorganismo, permitiendo que las propias defensas del husped pueden eliminar a las bacterias COMO SE REALIZA LA INTERPRETACION DE RESULTADOS? el antibiograma debe ser interpretado de manera global a fin de descubrir, a travs de la comparacin de las respuestas para cada antibitico, un mecanismo de resistencia incluso dbilmente expresado.