UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHOMANN- FCAG ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE INGENIERIA EN INUSTRIAS ALIMENTARIAS

MICROBIOLOGA PRACTICA N 3

PREPARACIN
DE CULTIVO

DE MEDIOS

Cdigo: 2010-35142| Pamela Conde Pumarimay

Preparacin de medios de cultivo

10-35142

1. OBJETIVO: Los alumnos deben de conocer los principales principios para la preparacin de los medios de cultivo

2. FUNDAMENTO: Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en condiciones fsicas ptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiologa por lo que un control en su fabricacin, preparacin, conservacin y uso, asegura la exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos. (Venezuela., 2008) En los laboratorios de microbiologa se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en forma lquida o en forma slida. Usualmente para preparar un medio slido, se parte de un medio lquido al que se le aade un agente solidificante como el agar, la gelatina o la slicagel. Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes en: Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la adicin de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos. Medios definidos o sintticos: son los medios que tienen una composicin qumica definida cualitativamente y cuantitativamente. Generalmente se usan en trabajos de investigacin. De acuerdo al uso del medio de cultivo, stos se clasifican en: Medios de enriquecimiento: son medios lquidos que favorecen el crecimiento de un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el nmero de microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o ms sustancias inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepcin de los que se quieren cultivar. Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser medios slidos y estn diseados para el aislamiento de microorganismos especficos. 2

Preparacin de medios de cultivo

10-35142

Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen ningn tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar caractersticas fisiolgicas de los microorganismos

3. EQUIPOS Y MATERIALES: Autoclave Bao Mara Material de vidrio Cocina Balanza y estufa Balones ,placas Petri, tubos de ensayo, pipetas y matraces

4. PREPARACION: Para la preparacin de medios de cultivo se utiliza agua limpia destilada neutra. Los recipientes que se utilizaran se lavaran esmeradamente con el fin de eliminar cualquier sustancia extraa. En lo posible se prepara mximo dos litros por recipiente. Se preparan segn las indicaciones de las etiquetas del envase de cada medio de cultivo. Los medios que contienen agar o gelatina deben ser calentados para obtener su disolucin, todo con sumo cuidado, los medios que no contienen agar ni gelatinas se pueden disolver por lo general en agua fra o bajo ligero calentamiento. Antes de esterilizarlos es conveniente repartir el medio de cultivo en porciones ms pequeas, si las normas indican otra cosa, la esterilizacin de los medios de cultivo se lleva a cabo en autoclave, a 12C durante 15 minutos. Todas las muestras se trabajan con 100 ml de agua destilada. Puede durar diez das refrigerado. No tiene que tener grumos. Todas las muestras se auto clavan a 121 C por un tiempo de quince minutos, con excepcin de agar rogosa, que se calienta por dos minutos.

AGAR NUTRITIVO:

Preparacin de medios de cultivo

10-35142

Agar agar ausente en el caldo, 12,0

Composicin

Peptona 5,0

Extracto de carne 3,0

Se

pesan 2 gramos aproximadamente y se vierte en matraz para recin realiza su solidificacin al mechero, y as proceder a empaquetar y refrigerar. Se esteriliza por 15 minutos a 121 C Uso: Para el cultivo de microorganismos poco exigentes.

CALDO MR-VP, CALDO ROJO DE METILO SEG. VOGES Y PROSKAUER

Preparacin de medios de cultivo

10-35142

Peptona de carne 7,0

Composicin

D(+)glucos a 5,0

Tampn de fosfato 5,0

Se 1,7

pesa

gramos aproximadamente, se vierte en 10 tubos a razn de 5ml y se esteriliza en autoclave por 15 minutos a 121 C Se incuba das a 37C Uso: Para la diferenciacin bioqumica especialmente dentro del grupo de coli-aerogenes, para anlisis de carnes y de leches.

AGAR

ROGOSA: Es un polvo granulado que se trabaja con agua destilada 7,5 g aproximadamente, se calienta en matraz para despus aadir cido actico glacial (vinagre) una cantidad de 0,132 g,y despus verter en 8 placas petri de 10 a 15 ml. se incuba 3 das a 37C o 5 das a 30C.

Preparacin de medios de cultivo

10-35142

agar-agar 15,0 sulfato y hierro (II) 0,034

Peptona de casena 10,0

D(+)glucosa 20,0 Extracto de levadura 5,0

sulfato de magnesio 0,575

Composici n

Dihidrogeno fosfato potsico 6,0

acetato sdico 15,0 acetato sdico 15,0 tween 801,0

citrato amnico 2,0

Uso: Para el aislamiento de lactobacilos de la flora bucal e intestinal, as como de carne y leches, entre otros alimentos.

Preparacin de medios de cultivo

10-35142

Cuando en un tubo de ensayo se prepara se siembra las capas de un solo microorganismo. Se da de comer cada siembra para que no se muera el microorganismo. Para hacerlo hay que esparcirlo de manera indicada.

Se pesa la cantidad necesario y se coloca en un matraz

Se hidrata: Agregando 100 ml de agua destilada

Medio Ambie nte

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

Homogenizar: Con calor y agitacin(si contiene agar), mezclar y calentar durante 1 a 5 minutos aprox

Se sirve en placas petri esterilizadas

. Se esteriliza
durante 15 minutos a 121 C

Preparacin de medios de cultivo

10-35142

5. RESULTADOS: Se preparo 100 ml para cada medio de cultivo y acuerdo a la gua se peso la cantidad para cada medio de cultivo En Agar nutritivo : 2 gramos En Caldo MR-VP : 1,7 gramos En Agar rogosa : 7,5 gamos Todos eran medios de cultivo naturales o complejos. El aspecto en general de los medios de cultivo era lquido y de color amarillento. 6. DISCUSION DE RESULTADOS: Se dio un resumida explicacin para la realizacin de e s t a p r c t i c a c o n c o n c e p t o s b s i c o s p a r a l a preparacin 8

Preparacin de medios de cultivo

10-35142

de medios de cultivo, as como los tipos de esterilizacin que emplearamos a lo largo de las practicas, que en e s t e c a s o s e utiliz un mtodo fsico: presin a vapor, es decir la a u t o c l a v e q u e p o s e e l o s requisitos indispensables . Antes de servir en las cajas de petri, se realiz la asepsia del rea limpiando la mesa de trabajo y despus eliminando impurezas restantes con alcohol y mechero prendido y despus sirviendo en las cajas una cantidad considerable. Por ltimo se coloc el paquete en refrigeracin

7. CONCLUSIONES: Se aprendi a preparar medios de cultivo Se conoci para que servan los medios de cultivo tocados en sta prctica. Se aprendi como debe de ser la esterilizacin para nuestros medios de cultivo.

8. BIBLIOGRAFIA Venezuela., U. C. (2008). Practicas de microbiologia. Recuperado el 24 de junio de 2012, de http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro /10_Preparaci%C3%B3n_de_medios_de_cultivo.pdf MERCk- Manual de medios de cultivo