Tcnicas de semeadura

As tcnicas de semeadura so o mtodo pelo qual se transfere inculos bacterianos de um meio de cultura ou material a ser analisado (secrees, alimentos) para um outro meio de cultura. Para garantir que apenas o microorganismo desejado seja semeado, so utilizadas as tcnicas asspticas: procedimentos que devem ser adotados visando a no contaminao de materiais, meios e culturas.

Crdito: GEOFF TOMPKINSON/SCIENCE PHOTO LIBRARY

Semeaduras em meios slidos em tubos Estria sinuosa: semear com ala ou agulha bacteriolgica, em zig-zag, partindo da base para a extremidade do bizel (superfcie inclinada do meio). Objetivo: obteno de intensa massa de microorganismos.

Estria Reta: semear com agulha bacteriolgica, fazendo uma linha reta, com cuidado de no ferir o Agar, partindo da base para a extremidade do bizel (superfcie inclinada do meio). Objetivo: obteno de pequena massa de microorganismos.

Picada Central: semear com agulha bacteriolgica, no centro do Agar. Dependendo da finalidade, o inculo deve penetrar at 2/3 do tubo ou at o fundo deste. Objetivo: utilizado para verificar fermentao e motilidade em algumas tcnicas.

Picada em Profundidade: semear com agulha bacteriolgica, no centro do Agar. Dependendo da finalidade, o inculo deve penetrar at 2/3 do tubo ou at o fundo deste. Objetivo: utilizado para verificar fermentao e motilidade em algumas tcnicas.

Semeaduras em meios slidos em placas de Petri Pour-plate ou disseminao (mtodo em profundidade): Transferir 1 ml da cultura para placa de Petri vazia, colocar 10 20 ml do meio fundido (e resfriado a cerca de 45 50C) sobre a cultura e homogeneizar suavemente com movimentos circulares. VDEO Objetivo: contagem bacteriana. utilizado tambm para anlise de microorganismos anaerbios, adicionando uma outra camada de meio fundido aps o endurecimento da primeira camada.

Estria simples: transferir uma alada da cultura para meio slido em placa e estriar com a ala bacteriolgica sobre o meio. A estria pode ser realizada em movimento de zig- zag (estria sinuosa) ou como uma linha reta sobre o meio (estria reta).

Objetivo: Essa tcnica muito utilizada para visualizao de determinadas propriedades metablicas, como a produo de enzimas hidrolticas (hidrlise de substncias do meio - gema de ovo, sangue...), e produo de pigmentos.

Esgotamento em estrias ou estrias mltiplas: transferir uma alada da cultura para meio slido em placa e estriar com a ala bacteriolgica sobre o meio. A placa dividida em 4 quadrantes e a inoculao pode ser feita de 2 tipos: 3 estrias: estriar em metade da placa, com movimentos de zig-zag. Quando atingir a metade, girar a placa 90 e estriar at a metade (1/4 da placa), girar mais 90 e estriar o meio restante. 4 estrias: estriar at 2/3 da metade da placa, girar 90, estriar 2/3 do prximo quadrante (1/4 da placa), girar 90, estriar mais 2/3 do prximo quadrante (1/4 da placa), girar 90 e estriar o restante do meio. Objetivo: obteno de colnias isoladas. importante no cruzar as estrias (no tocar a ala na estria anterior), para reduzir o inculo a cada estria e obter as colnias isoladas. Pode-se, alternativamente, flambar a ala entre as estrias e tocar a ponta da estria anterior, arrastando um pequeno inculo para a prxima estria. Spread-plate ou distenso: Transferir 0,1 ml da cultura para o meio slido na placa e espalhar uniformemente com a prpria ponta da pipeta, ou ala bacteriolgica / swab / ala Drigalsky. Objetivo: obteno de crescimento confluente, ou para contagem bacteriana. Esta tcnica muito utilizada na realizao de antibiogramas.

Semeaduras em meios lquidos Difuso: uma alada da colnia (Agar em placa) ou da cultura (de outro meio ou lquido) introduzida no meio lquido, com agitao da ala, para maior difuso dos microorganismos (da ala para o meio e homogeneizao no meio). Pode-se inclinar o tubo a 30 e esfregar o inculo na parede do mesmo, quando o tubo retornar posio original o inculo se difundir no meio.Objetivo: um repique genrico para crescimento bacteriano em meio lquido.

Fonte: Aloysio de Mello e Raquel de Souza. Apostila de Aulas Prticas Bacteriologia. UFF 2007.