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18_wine Resveratrol Hplc, Bjc, V.29, n.2, 2012

18_wine Resveratrol Hplc, Bjc, V.29, n.2, 2012

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REVISTA BOLIVIANA DE QUÍMICA 
 VOLUMEN 29, No.2 – 2012
Downloadable from: Revista Boliviana de Química. Volumen 29 Nº2. Año 2012http://www.bolivianchemistryjournal.org
,
http://www.scielo.org
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http://www.scribd.com/bolivianjournalofchemistry 
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CUANTIFICACIÓN DE RESVERATROL EN VINOS MEDIANTE HPLC
Atma-Sol Bustos; 
a
Juan C. Calisaya; 
a
Carolina Paredes; 
a
Gimena Durán; 
Marco Taquichiri; 
Juan A. Alvarado; 
JMauricio Peñarrieta; 
a
 
a
Centro de Investigaciones en Química de Alimentos, Carrera de Ciencias Químicas, FCPN, UMSA, La Paz – Bolivia,
b
Departamento de análisis CEANID, Departamento de Física UAJMS, Tarija – Bolivia,
c
Instituto de Investigaciones en ProductosNaturales (IIPN), Carrera de Ciencias Químicas, Universidad Mayor de San Andrés, Calle Andrés Bello y Calle 27 Cota Cota,Edificio FCPN, 2º piso, La Paz- Bolivia.
Accepted: 12/11/12 Published: 09/12/12
 
Keywords:
 
 Resveratrol, Vinos, HPLC.
ABSTRACT
Resveratrol, a phenolic compound, was quantified in wines from Tarija - Bolivia by a method by Reverse Phase HighPerformance Liquid Chromatography ( HPLC). The method was validated considering parameters such as standarddeviation (S), coefficient of variation (CV), linear correlation coefficient (R), limit of detection (LOD) and limit of quantitation (LOQ). The amount of resveratrol found in the wines analyzed is somewhat high compared to valuesreported worldwide, giving an average of 7.7 ± 0.9 mg / L.*Corresponding author:
atma_sol@hotmail.com
 
RESUMEN
El Resveratrol, un compuesto
 fenólico
, fue cuantificado en vinos procedentes de micro vinificación en Tarija –Bolivia mediante un método por cromatografía Líquida de Alta Resolución con siglas en inglés HPLC en fasereversa. El método fue validado considerando parámetros de desviación estándar (S), coeficiente de variación (CV),coeficiente de correlación lineal (R), límite de detección (LOD) y límite de cuantificación (LOQ). La cantidad deresveratrol hallada en los vinos analizados es algo elevada comparada con valores reportados a nivel mundial, dandocomo promedio 7,7 ± 0,9 mg/ 
 
INTRODUCCION
En los últimos años muchos estudios han demostrado que el consumo moderado de vino es beneficioso para la salud,relacionándolo con la prevención de trastornos degenerativos como la enfermedad de Alzheimer o demencia senilentre otros [1] [2] [3] [4]. El compuesto vinculado con estos efectos es el resveratrol [2] [3] [4]. El resveratrol, uncompuesto fenólico categorizado como fitoalexina, se encuentra en mayor cantidad en raíces de
Polygonumcuspidatum,
planta utilizada en oriente contra males cardiovasculares [5] [2]; también se encontraron en uvas y enproductos producidos con éstas como el vino [3] [4] [6]; otras fuentes de obtención son el cacao y sus derivados,pistacho, granulados de lúpulo (en la cerveza se encuentra en muy poca cantidad), granos de maní y en mantequillade los mismos, arándano y otros [2] [6] [7]. El isómero hallado con mayor frecuencia es el
trans
– resveratrol [2].Usualmente, se encuentra acompañado de su derivado
glicosilado
 
(trans
- piceado).
 
REVISTA BOLIVIANA DE QUÍMICA 
 VOLUMEN 29, No.2 – 2012
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Estos compuestos se encuentran significativamente en los vinos tintos. La concentración de estos compuestos en elvino depende de varios factores, como son la variedad de uva, las condiciones del suelo, el clima, la radiación UV yotros [2]. Por estas razones se propone la hipótesis de que los vinos producidos en Bolivia (vinos de altura) presentanmayor contenido de resveratrol, lo que impulsa a que esta variable sea investigada en los mismos. La técnica analíticaescogida para realizar este análisis fue la del HPLC debido a que ésta es rápida, reproducible, confiable y no necesitagran cantidad de analito en comparación con técnicas clásicas [8]. Dependiendo del detector que presenta el equipoHPLC (DAD o UV-VIS) la interpretación de los espectros varía ligeramente, por lo que en el presente trabajo setomaron en cuenta ambos casos haciendo uso de dos diferentes equipos de HPLC: Agilent (con detector DAD) yPerkin Elmer (con detector UV-VIS). Al mismo tiempo de indicar la metodología utilizada para interpretar losespectros se da a conocer el tratamiento estadístico mínimo que validad el método de HPLC empleado.
RESULTADOS Y DISCUSIONES
Curva estándar y validación del método de HPLC empleado:
La curva estándar promedio es la siguiente:
 Figura 1
. Curva Estándar – HPLC Agilent.
Los parámetros que validan el método son los presentados a continuación:
Tabla 1
. Parámetros de validación del método HPLC.
Desviación estándar (S)297,9Coeficiente de variación (CV) (%) 2,9Coeficiente de correlación lineal (R)0,999Límite de detección (LOD) (ppm) 1,67Límite de cuantificación (LOQ) (ppm) 5,6El CV recomendado es entre 1 y 20 % [2]. Nuestro valor se encuentra dentro de lo permitido. El bajo valor devariación se debe en su mayoría al manipuleo humano ya que las mediciones que realizan este tipo de equipos nopresentan grandes errores, por lo general el CV de lectura de un HPLC suele ser entre 1 y 2 % [2]. El valor de R essuperior a 0,999 que es el rango aceptable propuesto [2] [9]. El valor de LOD encontrado está por debajo del halladopor Lamuela-Ravenotos et al. en vinos, quien reportó un LOD de 3 ppm [2] lo que indica una mayor sensibilidad delequipo.
 
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 VOLUMEN 29, No.2 – 2012
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 Identificación de resveratrol en vinos mediante HPLC:
A continuación se muestra, mediante cromatogramas, las dos maneras de cuantificar resveratrol en vinos: porcomparación con el tiempo de retención del patrón (Figura 2) y por el método de adición estándar (Figura3)dependiendo del detector del equipo HPLC
 Figura 2
. Cromatograma HPLC con DAD – vino 8E1 (incluido el espectro UV del resveratrol)
 Figura 3
. Cromatogramas sobrepuestos de HPLC con detector UV – vino 3E2 sin dopar ydopado con estándar de resveratrol.
Como se ve en la Figura 3, bajo este método es factible la identificación de compuestos. Muchas veces no essuficiente comparar el tiempo de elución debido a que este puede salir ligeramente diferente cuando se analizanmuestras complejas, o en todo caso puede ser confundido con la señal de otro analito por su proximidad a la señaldeseada, bajo este método se aclara el espectro y se puede hacer la correspondiente integración del pico.
Cuantificación de resveratrol en vinos mediante HPLC:
Realizando la correspondiente integración se obtiene:
Tabla 2
. Cantidad de resveratrol en vinos.
VinoConcentración (ppm)1E0 7,32E1 7,93E2 7,88E1 9,87E0 8,19E2 7,910E07.011E16,912E26,9

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