III. CARACTERELE GENERALE ALE BACTERIILOR Morfologie bacterian. Structura celulei bacteriene.

Sporul bacterian Morfologie bacterian Unul dintre criteriile majore care stau la baza clasificrii microorganismelor l constituie morfologia acestora, adic forma lor, care este determinat genetic. Forma bacteriilor, reprezentnd un criteriu taxonomic important, trebuie apreciat n mod convenional, pe celule provenite din culturi tinere, n faza de cretere activ, pe medii de cultur corespunztoare i n condiii optime de temperatur i presiune parial a oxigenului, precum i de pH. Respectarea acestor exigene se realizeaz cel mai adecvat, n condiii artificiale i anume n laborator. Aceste aspecte au o importan major, deoarece, trebuie cunoscut faptul c n culturi vechi, cele mai multe bacterii degenereaz, adic sufer modificri apar celule cu forme aberante - sau chiar mor. Acelai fenomen apare i n cazul cultivrii microorganismelor n condiii improprii de mediu i se explic prin intervenia unor aciuni nocive n procesul de diviziune normal a celulelor sau prin alterarea mecanismelor de permeabilitatea selectiv a celulelor, cnd are loc o imbibiie cu ap urmat de autoliza structurilor celulare sub aciunea enzimelor proprii. innd cont de morfologia celulelor bacteriene, acestea pot fi grupate n 5 categorii: sferice cilindrice spiralate sau elicoidale filamentoase ptrate

Trebuie precizat c n urma diviziunii, la majoritatea speciilor bacteriene, celulele fiice se separ, datorit fie agitrii mecanice, fie curenilor de convecie din mediu sau a micrii browniene, a forelor rezultate din presiunea de turgor a celulelor care cresc, dar mai cu seam, aceast izolare este consecina activitii flagelilor, n cazul bacteriilor mobile. Sunt frecvente situaiile, n cazul anumitor specii aparinnd grupului bacteriilor sferice ori cilindrice, cnd celulele-fiice rmn grupate n formaiuni compacte, caracteristice, cu important valoare taxonomic (streptococi, stafilococi, streptobacili). Modul de grupare al celulelor n urma diviziunii, este condiionat de raportul geometric dintre diferitele planuri succesive de diviziune i de tendina celulelor-fiice de a rmne unite. Este de remarcat faptul c nu ntotdeauna aceast modalitate de grupare a celulelor, n urma diviziunii, reprezint un caracter morfologic propriu, ci poate fi o consecin a stadiului de cretere sau a condiiilor culturale. Spre exemplu, Corynebacterium diphteriae, are celule grupate n palisad, iar Mycobacterium tuberculosis, n grupuri de cte 3 bacili, care dau impresia de structur ramificat. Dei destul de frecvente, aceste moduri de grupare reprezint excepii de la regul, datorit faptului c cele mai multe celule bacteriene aparinnd speciilor respective, apar izolate unele de altele.

-1-

1. Bacteriile sferice cocii, de form sferic, ovoid, elipsoidal, reniform sau uneori, neregulat, n funcie de poziia celulelor fiice dup diviziune, pot prezenta o clasificare n ase subtipuri morfologice: a. cocul simplu sau izolat, n care celulele sunt dispuse izolat: Micrococcus ureae b. diplococul celulele sunt grupate cte dou: Neisseria gonorrheae sau diplococul lui Neisser c. streptococul celulele sunt dispuse n lanuri, de lungimi diferite, ca mrgelele ntr-un irag: Streptococcus agalactiae, S. pyogenes, S. salivarius. d. tetracocul sau tetrada celulele sunt dispuse n dispozitive de cte patru elemente: Gaffkya tetragena, Micrococcus tetragenus e. sarcina celulele sunt dispuse n cuburi sau n pachete: Sarcina lutea, S. flava f. stafilococul celulele sunt dispuse n grmezi cu aspect de ciorchine: Staphilococcus aureus, S. epidermidis. Lampropedia, are forma unor celule sferice sau aproape cubice, grupate n iruri regulate, formnd tablete rectangulare alctuite din 16, 32 sau 64 de celule agregate, datorit unei matrice extracelulare. Aceste celule prezint n interior incluziuni refringente i sunt acoperite de un nveli complex, distinct de peretele celular, care nconjoar ansamblul celular i nu celulele independente. Lampropedia formeaz pelicule pe suprafaa mediilor lichide i este izolat din rumen i din ape mloase stagnante. 2. Bacteriile cilindrice bacilii, care au form de bastona i se caracterizeaz prin aceea c diametrul lor longitudinal, este cel mai adesea de cteva ori mai mare dect diametrul transversal. Astfel, unii bacili pot avea aspect filiform, n timp ce alii la care cele dou diametre sunt comparabile, dobndesc un aspect sferic-ovalar i sunt dificil de deosebit de coci, motiv pentru care sunt denumii cocobacili (Haemophilus influenzae). Haemophilus influenzae este un cocobacil mic, necapsulat, gram negativ, aerob sau facultativ anaerob, fiind agentul etiologic al unei gripe (influenza). Contaminarea se realizeaz pe calea tractului respirator, fiind incriminat n proporie de 30-50% din nasofaringitele asimtomatice la copii, precum i de meningitele care apar la copii ntre 6 luni i 3 ani. Un criteriu de identificare n cazul bacililor l constituie aspectul marginilor i al extremitilor, astfel: corp rectiliniu, cu margini paralele i cu capatele tiate drept (Bacillus anthracis)

- corp rectiliniu, cu margini paralele i cu capatele rotunjite (Salmonella sp., Bacillus

subtilis, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus sp.)

- corp rectiliniu, dar marginile laterale ale celulei sunt apropiate la extremiti, n form de
suveic (Fusiformis fusiformis)

-2-

- corp rectiliniu, dar marginile laterale ale celulei sunt deprtate i rotunjite, la una sau la
ambele extremiti, n form de mciuc (Corynebacterium diphteriae, Clostridium botulinum, Clostridium tetani, Clostridium perfringens)

- form neregulat fiind dispui sub form de unghi, sugernd aspectul literelor V, X,Y
(Mycobacterium tuberculosis) Bacilii pot fi grupai cte doi diplobacili, n lanuri cu lungimi variabile streptobacili sau n palisad, ca scndurile ntr-un gard, situaie, n care bacilii sunt dispui apropiat i paralel n sensul axului lor longitudinal. Unele genuri de microorganisme, aparinnd tipului morfologic bacilar, formeaz grupuri caracteristice n form de rozet sau de stea (Agrobacterium stellulatum, Phyllobacterium stappi). 3. Bacteriile spiralate sau elicoidale cuprinznd trei tipuri morfologice: a) vibrionul are form de virgul, iar flagelul (organitul de deplasare) pe care-l prezint, este de 2-3 ori mai mare dect diametrul bacteriei. Reprezentanii acestui tip morfologic prezint o singur spir, sunt nesporulai, necapsulai, gram negativi i aparin genului Vibrio, care cuprinde mai multe specii cu patogenitate variabil pentru om. Cea mai cunoscut specie a acestui gen este Vibrio cholerae, agentul etiologic al holerei, avnd o importan istoric deosebit, holera, fiind rspndit i astzi, n anumite regiuni ale globului, prezentnd caracter endemic. b) spirilul are form de spiral rigid, cu lungime de 13-14 , iar la capete se gsesc smocuri de cte 15 cili. Sunt sunt gram negativi, n general forme saprofite, de ex. Spirillum volutans, iar Spirillum minus este cunoscut ca agent etiologic al unor maladii la om. c) spirocheta are form de spiral flexibil cu mai multe ture de spir, cu protoplasma helicoidal nrulat n jurul unui filament axial. Sunt microorganisme cu lungime de 5-20 i grosime de 0.09-0.5, gram negative, putndu-se colora i prin metoda Giemsa sau prin impregnri argentice i aparin familiei Spirochaetaceae. Pot fi observate la microscop, n cmp ntunecat, deoarece fiind prea subiri, observaiile pe fond clar sunt foarte dificil de realizat. Germenii aparinnd acestui tip morfologic pot fi clasificai n dou categorii:

- saprofite n ap, sol, caviti naturale - parazite la om i animale.

Dintre formele parazite pot fi amintite genurile: Treponema, Borrelia i Leptospira. 4. Bacteriile filamentoase sunt reprezentate de actinomicete care au asemnri morfologice cu fungii i prezint particularitatea de a forma hife cu tendin de ramificare, de unde apare i aspectul lor caracteristic de miceliu. n unele situaii, aspectul filamentos este determinat de aezarea celulelor individuale n lanuri de celule reunite printr-o teac delicat cu perete neted, care n condiii favorabile poate acumula hidroxid de fier sau de mangan (Sphaerotilus natans).
-3-

5. Bacteriile ptrate, au forma unor ptrate cu latura de 1,5 - 11m i o grosime inegal (0,1 m sau mai mic, n regiunea central i 0,2 0,5 m, la periferie, Parkes, 1981). Unele dintre celulel au un nveli variabil ca prezen i mrime, de la aspectul de halou fin pn la acela de band lat de 0,1 m. Celulele conin vacuole cu gaze, care dispar la presiune i sunt situate frecvent de-a lungul marginilor ptratelor i a liniilor de diviziune. Uneori sunt dispersate la ntmplare n celul sau chiar umplu celula, dnd impresia unui sac turtit, destins n anumite regiuni de un coninut globular, care i d aspectul unei pungi de polietilen, cu boabe de mazre, din care cea mai mare parte a coninutului a fost golit. Multiplicarea se realizeaz prin diviziune, fiecare ptrat crescnd pn cnd ia forma unui dreptunghi care se divide n dou pri egale, iar alteori diviziunea se face n dou planuri ce alterneaz n unghi drept i ca urmare, celulele rezultate din mai multe diviziuni, formeaz placarde divizate. Bacteriile ptrate au fost ncadrate n genul Quadra aparinnd probabil grupului Archaebacteria (Parkes i Walsby, 1981). Structura celulei bacteriene Datorit dimensiunilor extrem de reduse, ultrastructura celulelor bacteriene a putut fi evideniat abia dup descoperirea microscopului electronic i consecutiv perfecionrii tehnicilor citochimice de studiu. Considernd peretele celular ca reper, se poate realiza o clasificare a componenilor celulei bacteriene, n dou categorii: 1. 2. componeni intraparietali formeaz protoplastul i sunt reprezentai de membrana plasmatic, mezozomi, citoplasm, nucleoid, ribozomi, aparat fotosintetic, incluziuni, vacuole, rhapidosomi, magnetosomi; componeni extraparietali situai la exteriorul peretelul celular i sunt reprezentai de capsul, stratul mucos, glicocalix, flageli sau cili, fimbrii, pili i , spini.

Peretele celular Peretele celular delimiteaz celula la exterior, i este situat n afara membranei plasmatice. Are rolul de a-i asigura protecia fa de mediu i capacitatea de a rezista la diferena de presiune osmotic dintre citoplasm i mediul extracelular (peretele celular este att de puternic, nct mpiedic celula bacterian s explodeze, atunci cnd presiunea osmotic dintre citoplasm i mediu este prea mare). Ca urmare a compoziiei chimice i a structurii sale, peretele celuar are o consisten rigid i determin aspectul morfologic celular. La anumite specii, peretele celular este acoperit de capsul sau de un strat mucos pericelular, iar speciile mobile prezint la exteriorul peretelui, flageli sau cili. Grosimea peretelui celular variaz ntre 15 35 nm, n mod excepional putnd ajunge la 80 nm, la specia Bacillus acidophilus. Trebuie reinut c n cadrul aceleiai specii, peretele celular este mai subire la celulele tinere care cresc rapid, dect la cele mbtrnite sau la care sinteza proteinelor este inhibat prin lipsa unui aminoacid.

-4-

Evidenierea peretelui celular este foarte dificil de realizat cu ajutorul microscopului optic datorit indicelui su de refracie foarte mic i de aceea pentru a putea fi vizualizat, se apeleaz la aplicarea unor tehnici de colorare selectiv albastru Alian, cristal violet sau carbofuxin. Microscopia electronic este foarte util pentru evidenierea peretelui celular ca i a altor componente celulare. Bacteriile tinere, cu citoplasm abundent, compact i omogen prezint un perete celular care ader net la coninutul celular subiacent. Bacteriile mbtrnite, n curs de liz prezint un perete celular detaat de membrana citoplasmatic i mult mai uor evideniabil. Compoziia chimic a peretelui celular a fost evaluat prin metode indirecte prin degradarea acestuia pe cale enzimatic (lizozimul este o enzim care degradeaz mucopolizaharidele). Compoziia peretelui celular difer de la o celul la alta, constituind un factor important n analiza i diferenierea celulelor bacteriene. Sub aspectul compoziiei i structurii sale, peretele celular poate aparine uneia din cele trei categorii care coincid cu modul de colorare al bacteriilor i anume: Gram-pozitiv, Gram-negativ i alcoolo-acido rezistent. La toate cele trei categorii exist un component comun structural i anume peptidoglicanul mureina. Deosebirea dintre cele trei tipuri de perei celulari o constituie aranjamentul structural al proteinelor, polizaharidelor i lipidelor, iar peretele bacteriilor acido rezistente conine mai multe tipuri de lipide complexe, nentlnite la alte tipuri de bacterii. Peretele celular al bacteriilor Gram pozitive se coloreaza n violet prin tehnica Gram. Este mai gros, dar simplu structurat - monostrat relativ omogen, dei este constituit din mai multe structuri continue, unitatea de baz fiind peptidoglicanul, format din unitti repetitive.

- dublul strat lipidic - peptidoglicanul

-5-

Mureina este structura rezultat din unitile de peptidoglicani cu ajutorul unei enzime: transpeptida. Are rolul de a menine forma bacteriei (la presiuni de 2-2,5 atmosfere) n cazul n care bacteria i pierde peretele sub actiunea penicilinei. Componentele peretelui celular al bacteriilor Gram pozitive sunt:
1.

Peptidoglicanul reprezint 80 90% din greutatea uscat a celulei.

Fig. 1. Structura peptidoglicanului este tip reea, n care alterneaz lanurile liniare de N-acetil glucozamin (GlcNAc sau NAG) i acidul N - acetil muramic (MurNAc or NAM).

-6-

Peptidoglicanul este un polimer vast, care const din lanuri unite strns ntre ele de monomeri de peptidoglican. Aceti monomeri, la rndul lor constau din 2 lanuri de amino glucide unite ntre ele, N-acetylglucozamin, i acid N-acetilmuramic.

2. Acizii teicoici sunt polimeri lungi i flexibili localizai exclusiv n peretele celular,
membrana plasmatic i straturile capsulare ale bacteriilor. Sunt de dou categorii: a. acizii teicoici parietali de la suprafaa celulei sunt legai covalent de stratul peptidoglicanic al peretelui celular. Nu se gsesc la toate celulele Gram pozitive, iar formarea lor este dependent de n mare msur de condiiile de cultivare i de mediu; b. acizi teicioci membranari (lipoteichoici) sunt legai covalent de fraciunea glicolipidic a membranei plasmatice i formeaz o reea ntre membrana plasmatic i peretele celular. De aceea acizii lipoteichoici rmn ancorai n membrana protoplastului cnd bacteriile gram pozitive sunt convertite n protoplati. Acizii lipoteichoici sunt constituieni mult mai caracteristici ai bacteriilor Gram pozitive comparativ cu acizii teichoici, iar sinteza lor nu este dependent de condiiile de cretere. 3. Acizii teichuronici sunt ataai de peretele celular i pot fi asociai cu acizii teichoici n cadrul aceleiai bacterii. 4. Acizii neteichoici 5. Polizaharide neutre Peretele celular al bacteriilor Gram negative se coloreaz n rou prin tehnica Gram. Peretele bacteriilor gram negative este mai subire dect a celor Gram pozitive. Are structur mai complex, fiind alctuit din dou componente: complexul peptidoglican lipoprotein membrana extern a peretelui celular

Complexul peptidoglican lipoprotein este situat n partea median a peretelui celular, este electrondens putnd fi ndeprtat prin tratare cu lizozim. Este legat de membrana plasmatic prin intermediul unor peptidoglicani n curs de formare, fiind ataat de aceasta datorit presiunii de turgor a celulelor vii. Stratul peptidoglicanic reprezint 2,4 10% din greutatea peretelui celular i are o component chimic foarte asemntoare la toate bacteriile Gram negative. Membrana extern a peretelui celular este situat la exterior fa de stratul peptidoglicanic i de membrana plasmatic, are o structur caracteristic i poat4e fi ndeprtat cu detergeni 2%, fenol 45% sau EDTA. Membrana extern este alctuit din fosfolipide, n proporie de 35%, proteine, 15% i lipopolizaharide, 50%. Spaiul periplasmatic este ntlnit doar la bacteriile Gram negative i este delimitat spre interior de membrana citoplasmatic, iar spre exterior de un strat care acioneaz ca o sit molecular corespunznd membranei externe a peretelui celular. Spaiul periplasmatic i complexul peptidoglican lipoprotein ocup aceeai zon a peretelui celular n care primul

-7-

adpostete constituienii periplasmatici iar cellalt susine i ntrete nveliurile celulei. Pe lng numeroasele enzime implicate n nutriie, spaiul periplasmatic conine: proteine specifice neenzimatice proteine de legare care leag specific anumite substane, zaharuri, aminoacizi, ioni anorganici, transportndu-le pn la nivelul proteinelor de transport legate de membran. Acestea pot fi eliberate uor din celule prin oc osmotic.

- dublul strat lipidic - peptidoglicanul - lipide + lipopolizaharide

- porine Peretele celular al bacteriilor alcoolo-acido rezistente se coloreaz n rou n urma coloraiei Ziehl-Neelsen.

-8-

- dublul strat lipidic - peptidoglicanul

- lipide + lipopolizaharide - porine

- micolai - acyl lipide

-9-

- acizi micolici - arabinogalactan

Este unicul tip de perete celular hidrofob cu un nalt coninut lipidic. Mai mult de 60% din greutatea uscat a celulei bacteriene este reprezentat de acizi micolici cu lan lung i de acizi grai. Aceste tipuri de acizi micolici au putut fi evideniate n diferite micobacterii. Acizii micolici i acizii grai cu lan scurt constituieni ai membranelor externe parietale sunt responsabili de caracteristicile peretelui celular alcoolo-acido-rezistent. Toate micobacteriile patogene au localizare intracelular; peretele lor celular asigur supravieuirea celulelor bateriene, le protejeaz de activitatea fagocitar i le asigur rezisten la degradarea oxidativ. Un exemplu: Ord. Actinomycetales, Fam. Mycobacteriaceae, Genul Mycobacterium - cuprinde bacterii fine, de form bacilar, nesporulate, imobile, aerobe i oxidative. n cadrul genului sunt recunoscute mai multe specii, dintre care unele sunt patogene pentru om i animale, la care produc tuberculoz (M. tuberculosis, M. bovis, M. avium) altele produc la om sau animale boli grave, dar cu alte denumiri (M. leprae, M. paratuberculosis) altele produc doar infecii localizate, iar altele sunt considerate nepatogene, respectiv saprofite. Semnificaia biologic a peretelui celular 1. sistemul de meninere mecanic 2. protecie fa de ocul osmotic 3. creterea i diviziunea celular 4. conine enzime autolitice capabile s atace structura peptidoglicanic 5. bacteriile G- prin membrana extern acioneaz ca o barier impermeabil pentru moleculele hidrofobe. Membrana extern reine n spaiul periplasmatic enzimele degradative. Dei ndeplinete funcii importante, peretele celular nu este indispensabil pentru activitatea biologic i biochimic celular. PROTOPLATI I SFEROPLATI Celulele lipsite de perete celular supravieuiesc i sunt funcionale. PROTOPLASTUL Se menine n medii izotonice sau hipertonice ca o formaiune sferic. Pstreaz proprietile vitale ale celulei: - capacitate respiratorie normal - sinteza de proteine i acizi nucleici

- 10 -

- viabilitate n culturi - capacitate de diviziune. Protoplastul, n medii hipotonice se lizeaz. Nu are capacitatea de a reface peretele celular dac acesta a fost complet ndeprtat. La celulele gram negative, peretele celular nu este degradat total sub aciunea lizozimului, ci are loc degradarea selectiv a mucocomplexului. SFEROPLASTUL Este un corp sferic echivalent unui protoplast nconjurat de constituenii peretelui celular care au rezistat la aciunea lizozimului. CELULA GRAM NEGATIV, n medii hipertonice devine sferoplast, iar n medii hipotonice se lizeaz. 1. Componenii intraparietali Membrana plasmatic Membrana plasmatic este o formaiune structural care nconjoar la exterior citoplasma bacterian, separnd-o de suprafaa intern a peretelui celular, la care ader strns, ca urmare a diferenei de presiune osmotic ntre coninutul celular i mediul extern. La microscopul electronic apare ca o formaiune triplu stratificat alctuit din dou straturi ntunecate separate printr-un strat clar. Robertson a denumit aceast formaiune unit membrana. Modelul de structur acceptat n unanimitate, a fost modelul mozaicului fluid (Singer Nicholson/1972) care sugereaz o aezare caracteristic a componentelor specifice ale membranei, reprezentate de lipide, proteine i glucide, n acord cu proprietile lor i satisfcnd exigenele termodinamice, furniznd o explicaie satisfctoare a proprietilor generale a biomembranelor. Astfel, fosfolipidele formeaz un film fluid n care plutesc proteine globulare, iar glucidele interacioneaz cu ambele tipuri moleculare. Lipidele sunt reprezentate de fosfolipide, cu structur complex avnd o extremitate polar hidrofil, alctuit dintr-o grupare fosfat i ali constitueni legai printr-o molecul de glicerol care formeaz un fel de punte reprezentat de doi acizi grai care formeaz regiunea nepolar, hidrofob a moleculei. Spre deosebire de celulele eucariote, membrana bacteriilor, cu excepia genului Mycoplasma, nu conine colesterol. Proteinele, n raport cu poziia lor n structura membranei sunt de dou feluri: a. proteine integrate n general insolubile n ap, care nu pot fi ndeprtate fr ruperea dublului strat lipidic. Au o orientare fix fiecare protein de acelai tip este orientat n aceeai direcie. b. Proteine de suprafa neinserate n dublul strat lipidic, n general hidrosolubile, situate fie pe suprafaa intern, fie pe cea extern, legate cel mai adesea de proteinele integrate.

- 11 -

Glucidele reprezint componentul cel mai slab reprezentat n structura membranei plasmatice i se gsesc sub forma unor polizaharide legate de proteine sau interacionnd puternic cu anumite lipide. Membrana plasmatic: reprezint singura suprastructur citoplasmatic permanent a celulei bacteriene, avnd rolul de a delimita spaiul intracelular; nu reprezint o grani fizic inert a celulei, ci o structur funcional capabil s asigure o limit cert ntre interiorul i exteriorul acesteia; funcioneaz ca o barier osmotic dotat cu impermeabilitate cvasitotal fa de multe tipuri de molecule i permite trecerea nestnjenit a altora; este implicat n mobilitatea bacterian; are rol important n diviziune, contribuind la formarea septului transversal care separ celulele fiice; particip la sinteza peretelui celular, a capsulei i chiar a cililor; are funcii nemijlocite n delimitarea sporului; Mezozomii Sunt ntlnii n literatur sub diferite denumiri corpi perifierici, condrioizi sau plasmalemasomi. Au caracteristicile structurale ale plasmalemei din care au provenit n urma unei invaginri sub form de sac sau pung. n urma acestui fenomen de invaginare se produce creterea suprafeei membranei plasmatice, ca rspuns la unele condiii de mediu. Plasmalema mpreun cu mesozomii reprezint echivalenii funcionali ai sistemelor membranare interne caracteristice celulelor eucariote. Sunt mai bine reprezentai la bacteriile Gram +, la celelalte, fiind mai greu de observat. ndeplinesc diferite funcii: - n procesele secretorii, - n producerea i eliberarea unor exoenzime ca penicilaz, - n sinteza nveliurilor celulare - membran, perete, sept transversal Citoplasma bacterian Este un sistem coloidal complex format din proteine, glucide, lipide, ap i substane minerale. Nu are o organizare definit ca i la celulele eucariote, n interiorul ei gasindu-se materialul nuclear, incluziuni i ali constituieni. La celulele mbtrnite citoplasma se retrage centripet, ndeprtndu-se de perete, scade cantitatea de AND, i pierde treptat afinitatea tinctorial dobndind o structur granular cu vacuole. Datorit coninutului n minerale, se realizeaz o presiune interioar de 5 atm. la bacterii Gram i de 25 atm. la bacterii Gram+. Citoplasma bacterian conine cantiti mari de ARN, ceea ce explic bazofilia sa intens, mai evident la celulele tinere. Nucleul bacterian

- 12 -

Nu are o structur bine delimitat de membran nuclear, cu un numr definit de cromozomi capabili de diviziune mitotic, la fel ca i la celulele eucariote. O astfel de formaiune poart mai multe denumiri: nucleoid, nucleosom, material nuclear, nucleoplasm, echivalent nuclear sau chiar nucleu impropriu. Datorit densitii foarte mari a citoplasmei bacteriene, a dimensiunii reduse, a afinitii egale pentru colorani a citoplasmei i materialului nuclear, mult vreme nu s-a putut face o difereniere net ntzre acesta i citoplasm. n urma acestor probleme s-au dezvoltat dou ipoteze:

1. ipoteza nucleului difuz conform cruia materialul nuclear nu

apare ca o formaiune morfologic distinct pentru c granulaiile fine de cromatin sunt rspndite uniform n citoplasm, ipotez care nu corespunde realitii; 2. ipoteza nucleului difereniat confirmat de microfotografiile electronice, conform creia materialul nuclear reprezint o formaiune distinczt, clar, care ocup partea central a celulei avnd form de granule sferice sau ovalare, haltere, bastonae izolate sau dispuse n V. n urma cercetrilor efectuate, s-a dovedit c nucleul bacterian este format dintr-o singur molecul de AND, de form circular, corespunde cromozomului bacterian. Un astfel de cromozom se mai numete i lineon sau genofor. Cromozomul bacterian, prin structura lui, include toat informaia genetic a bacteriei, ceea ce asigur transmiterea ereditar i variabilitatea ei n cvadrul speciei. Din punct de vedere genetic, bacteriile sunt organisme haploide. La unele bacterii, s-a evideniat i prezena AND extracromozomal n elemente genetice numite epizomi sau plasmide. Epizomii Se gsesc izolai sau integrai n cromozom i conin un microcromozom circular. Dein unele informaii genetice ca: rezistena la antibiotice sau chimioterapice, sinteza de colicine. Sunt transmise altor bacterii mai uor, neavnd rigiditatea cromozomului. Plasmidele se gsesc numai n stare autonom. Plasmidele sunt uniti mici de ADN specifice bacteriilor (exemplu: plasmidele care codifica rezistenta la antibiotice). Ribozomii Sunt organite celulare care realizeaz sinteza proteinelor. Sunt formaiuni intracitoplasmatice, nucleoproteice, sferice, cu diametru de 20 m, n numr variabil. Conin 50% ap, iar substan uscat se compune din 65% ARN i 35% proteine. Unii ribozomi sunt dispui liberi n citoplasm, iar alii sunt fixai de suprafaa intern a membranei citoplasmatice. Au tendina de a se grupa n iruri liniare de cte 4-50 elemente, formnd polisomi sau ergosomi. Polisomii contribuie la decodarea informaiei genetice aduse de ARNul mesager asigurnd nmcatenarea aminoacizilor pentru a forma lanuri polipeptidice specifice. n timpul procesului de biosintez a proteinelor, polisomii se deplaseaz de-a lungul moleculelor de ARN mesager asigurnd iniierea, creterea i terminarea lanului

- 13 -

polipeptidic. Ribozomii au fost descoperiti de George Emil Palade, pentru care a fost recompensat cu Premiul Nobel. Denumite iniial granulele lui Palade, au fost numite ribozomi de ctre Richard B. Roberts n 1958. Aparatul fotosintetic La bacterii aparatul fotosintetic este localizat n membrana citoplasmatic i rezult din invaginarea i creterea acesteia, formnd vezicule membranoase, membrane tubulare sau sisteme lamelare. La alte tipuri de bacterii Chlorobium, aparatul fotosintetic e reprezentat prin vezicule mari, ovale, care nu sunt legate evident de membrana plasmatic. La cianobacterii alge albastre verzi aparatul fotosintetic poate avea o configuraie similar cloroplastului de la celulele eucariote, adic separat de membrana citoplasmatic, gsindu-se n citoplasm sub form de saci membranari turtii, numii tilacoizi. Toate aceste structuri ale aparatului fotosintetic asigur conversia energiei luminoase n energie chimic.

Incluziuni citoplasmatice n citoplasma bacterian, la sfritul perioadei de cretere activ, apar nite produi metabolici sub form de granule distincte sau fin dispersate, inerte osmotic care constituie substane nutritive de rezerv, numite incluziuni. Din punct de vedere chimic incluziunile citoplasmatice pot fi: - polimeri organici glicogen, amidon, lipide; - polimeri anorganici granule de volutin - incluziuni anorganice simple granule de CaCO3 sau sulf coloidal

- 14 -

Dup structura lor, evideniat pe electronomicrografii, incluziunile citoplasmatice sunt de dou tipuri: A. incluziuni nconjurate de membrane incluziuni de poli hidroxibutirat (PHB), incluziuni de sulf, carboxizomii i magnetosomii B. incluziuni nenconjurate de membrane granule de glicogen, amidon, volutin, cianoficin, ficobilisomii, incluziuni cristaline, paracristaline i rhapidosomii. A1 Incluziunile de PHB (lipidice) pot fi observate la microscopul fotonic datorit afinitii lor pentru coloranii liposolubili negru de Sudan. Au aspectul unor granulaii rotunde, foarte refringente, delimitate de o membran monostratificat derivat dintr-un strat al membranei plasmatice. Reprezint un material de rezerv tipic pentru procariote rezerv celular de carbon i energie (Many researches have showed that Alcaligenes, Pseudomonas, Rhizobium and
Bacillus types produce and store Poly-3-hydroxybutyrate.)

A2 Incluziunile de sulf prezente la sulfobacterii, reprezint un depozit de rezerv i dispar prin oxidarea sulfului ex. Beggiatoa chromatium. Apar sub forma unor corpusculi strlucitori, birefringeni acoperii cu o membran monostrat, alctuit din subuniti globulare proteice. Sunt ntlnite la bacterii care cresc n medii bogate n hidrogen sulfurat. A3 Carboxizomii sunt incluziuni cu aspect poliedric prezente n numr variabil la bacteriile care fixeaz dioxidului de carbon pe calea pentozofosfailor. Sunt delimitai de o membran monostrat i localizai n regiunea nucleoplasmei. Prezint structur granular i constituie depozite enzimatice cu activitate de fixare a dioxidului de carbon. A4 Magnetosomii sunt incluziuni care conin fier i sunt rspunztoare de fenomenele de orientare i migrare sub aciunea cmpurilor magnetice slabe. Bacteriile care conin magnetosomi magnetotactice - se gsesc n general n medii acvatice. Au fost izolate din sedimente marine i de ap dulce (ex. Pestera Movila - zona Mangalia) prin introducerea n aceste medii a unor magnei permaneni. Acestea au capacitatea de deplasare ntr-o anumit direcie, dirijate fiind de cmpuri magnetice slabe sau de cmpul magnetic al Pmntului. Bacteriile magnetice, descoperite n 1975, conin nanoparticule din materiale magnetice pe care le genereaz singure. Rolul componentei magnetice 1. orientare n medii anaerobe (magnetotactism) 2. identificarea de resurse - ex. fier 3. obinerea de energie necesar metabolismului Magnetosomii formeaz 1-2 lanuri intracelulare cu structur stabil, alctuite din 5-41 particule, avnd forma unor cuburi cu coluri rotunjite, aezate rectiliniu longitudinal n raport cu axul longitudinal al celulei n imediata apropiere a suprafeei interne a plasmalemei. Dup izolarea din celul, lanul de particule ia o form circular nchis.

- 15 -

flageli

lanul de magnetozomi

Componenta magnetic - magnetozomii sunt cristalite magnetice acoperite cu o membran, cu dimensiuni variabile ntre 10 i 100 nm. Magnetosomul este alctuit dintr-o zon central electronopac, bogat n fier, nconjurat la eterior de o zon clar, transparent cu grosime de 1,6 nm i un al doilea strat electronopac la exterior de 1,4 nm. Particulele care alctuiesc magnetosomii sunt fie n contact direct unele cu altele fie sunt separate prin benzi subiri de citoplasm. B1 Incluziuni de glicogen i amidon sunt prezente n special la bacterii sporulate, aerobe, sunt puternic refringente, vscoase i se coloreaz n galben brun cu iod n cazul glicogenului i n albastru n cazul amidonului, culori care contrasteaz cu citoplasma glbuie. B2 Incluziuni de volutin apar sub forma unor granule sferice, fr structur intern, electroopace, situate n regiunea nucleoplasmatic, prezente n special la celulele mbtrnite. Sunt alctuite din incluziuni de polifosfat anorganic sau polimetafosfat i sunt cunoscui sub numele ce corpusculi Babe Ernst. Produc efecte metacromatice i se coloreaz n rou violet cu albastru de metilen sau cu albastru de toluidin. B3 Granulele de cianoficin sunt caracteristice cianobacteriilor. Au form neregular sfeoidal, sunt prezente n celulele vegetative fiind copolimeri ai acidului aspartic cu arginin. Reprezint rezerve celulare de azot acumulate dup ncetarea creterii. Se consider c n cursul creterii normale, aminoacizii sunt ncorporai n structura proteinelor, n timp ce dup ncetarea creterii sunt depozitai n polipeptide de rezerv.

- 16 -

B4 Incluziunile parasporale au aspectul unor octoedre bipiramidale, compuse din subuniti bacilare care, unele ajung n final n exterior fa de sporangiu, n timp ce altele sunt nchise n interiorul sporangiului. Formarea lor este corelat cu sporularea i se datoreaz supraproduciei de proteine al nveliului sporal i depozitrii lor intracelulare. B5 Rhapidosomii sau microtubulii (rhapidos baston, soma corp) sunt particule ribonucleice cu form de bastonae scurte, rigide situate intra- i extracelular, dac sunt eliberate prin liza bacteriei gazd. Sunt structuri tubulare submicroscopice, cu un canal central n care ptrunde substan de contrast electronopac. Pe seciuni transversale apar ca un cilindru gol a crui teac prezint 12 pliuri ncurbate n spiral i formeaz un complex scheletic care asigur o anumit form celulei permindu-i totodat s aib o dinamic continu. Se consider c rhapidosomii ar fi implicai n fixarea nucleului i ar servi ca ax n jurul cruia se produce rotaia n cursul replicrii. Vacuolele sunt formaiuni sferice cu diametrul cuprins ntre 0.3 0.5 microni, mai puin refringente dect citoplasma i apar n celulele bacteriene n perioada lor de cretere activ. Numrul lor este variabil ntre 6-20/celul i conin numeroase substane dizolvate n ap, fiind nconjurate la periferiede un nveli lipoproteic unistratificat numit tonoplast. Exist trei ipoteze n legtur cu existena vacuolelor : 1. se consider c vacuolele constituie o entitate permanent vacuom, indispensabil celulei bacteriene 2. se consider c vacuolele ar fi structuri temporare, aprute de novo sub influena condiiilor de mediu 3. se consider c vacuolele se formeaz ca rezultat al ptrunderii n celula bacterian a unei cantiti de ap n exces, care apoi se separ n picturi n care se dizolv produii de metabolism hidrosolubili, n timp ce lipidele i proteinele acumulate n jurul acestor pictuir ar forma tonoplastul. Vacuolele cu gaze aerosomii sau corpii de flotaie sunt prezente exclusiv la procariote, la bacterii imobile acvatice, iar la microscopul cu contrast de faz apar ca nite granule strlucitoare, refringente, pe fondul negru al celulei, putnd fi identificate graie faptului c spre deosebire de alte structuri, dispar la presiune moderat prin eliminarea gazului pe care-l conin. Membrana vacuolelor este impermeabil pentru ap, dar permite trecerea prin difuziune a gazelor. Vacuolele cu gaze regleaz raportul suprafa/volum al celulelor bacteriene. Rolul vacuolelor - reglatori ai presiunii osmotice n raport cu mediul extern sau de depozite de substane de rezerv n perioada premergtoare formrii incluziunilor.

- 17 -