MEDIOS DE CULTIVO

INTRODUCCIN: En el laboratorio clnico es indispensable la utilizacin de medios de cultivo, el cual es un material nutritivo preparado1 para el crecimiento de los microrganismos. Hay diferentes tipos de medios, se encuentran los lquidos y los solidos, tambin hay medios generales, selectivos y diferenciales, entre otros. A los medios de cultivo se le puede agregar un medio gelificante2, como es el caso del agar en polvo, este se disuelve por ebullicin, luego se deja enfriar el lquido, ya sea en tubos o placas Petri y se solidifica. El medio solido en placas Petri permite el aislamiento de las colonias de bacterias. Al estar aisladas2 las colonias se puede evaluar textura, tamao, color, forma, brillo y de esta forma facilitar la identificacin. Es importante que los medios de cultivo contengan los nutrientes necesarios para permitir la multiplicacin de las bacterias, adems debe tener una consistencia adecuada para permitir el buen rayado con asa, tambin adecuado pH, temperatura, esterilidad y humedad. Las bacterias pueden crecer en uno o varios medios de cultivos, sin embargo algunas bacterias necesitan medios especficos para su crecimiento. Aspectos generales:3 Los medios de cultivo deshidratado deben cumplir con caractersticas higroscpicas, entre ellas: Conservarse en lugares frescos. Rotular con fecha de recepcin. Rotular con fecha de apertura. Apertura y cierre rpido. Cierre hermtico. Limpieza de tapa y rosca del frasco. Se debe conservar a temperaturas menores a 25C y si no se va a utilizar de inmediato se debe refrigerar congelar los suplementos, adems es conveniente almacenar en lugares que no estn expuestos directamente a la luz. El manejo inadecuado de los manejos de cultivo puede causar: Endurecimiento. Oscurecimiento. Deterioro de ingredientes (oxidacin). Crecimiento de micro organismos contaminantes. Variacin del pH. Cambios en apariencia y color del medio terminado. Prdida de capacidad de aislamiento. Estos medios deben ser descartados. Al preparar medios de cultivos es adecuado incluir informacin importante como: Nombre del medio. Fecha de preparacin. Nmero de lote del medio. pH antes y despus de autoclavado. Tiempo y temperatura de esterilizacin. N de autoclave usado.
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Tortora, G; Funke, B; Case, C . Introduccin a la microbiologa, 9 edicin; Ed. Mdica Panamericana: Buenos Aires, Argentina, 2007, p168. 2 Pratz, G. Microbiologa Clnica; Ed. Mdica Panamericana: Buenos Aires, Argentina, 2006, p24.

Mora, J. Preparacin de medios de cultivo. Hospital Mexico. San Jos, Costa Rica, 2011.

Clculo de peso de los ingredientes/vol. de H2O. Nombre de quien prepar el medio. Es indispensable preparar los medios de cultivos con agua destilada y desioniazada y nunca agua del tubo, ni embotellada, almacenada, ya que se podra formar precipitados y/o opalescencia por reaccin del Ca+2 y Mg+2 con los fosfatos solubles presentes en el medio. Adems de variaciones del pH y la introduccin de sustancias txicas; Cu, Pb, detergentes. Cada uno de los medios tiene un pH final adecuado segn sus caractersticas, si el pH no es adecuado se puede deber a que la cristalera se encuentra contaminada o es alcalina, tambin la utilizacin de agua inadecuada o contaminada, la homogenizacin incompleta, sobrecalentamiento, mala calibracin o mal uso del potencimetro, la no utilizacin de dos puntos de calibracin, soluciones tampn en mal estado o la determinacin de pH en caliente. El pH de cada medio debe ser ajustado segn el valor que indica la casa fabricante, para esto se utiliza soluciones de NaOH y HCl y la ayuda de un potencimetro bien calibrado. Algunos medios despus de su preparacin necesitan ser esterilizados y ser incorporados a la autoclave. Para cada lote preparado se debe tomar el 10% de los medios preparados para realizarle un control de esterilidad, colocndolos a 35 durante 24 horas. A continuacin se ampliara siguientes medios de cultivo: a. Agar Sangre. b. Agar Chocolate c. Agar McConkey. d. Agar Manitol Sal. . a. Agar Sangre: los

Composicin: Extracto de carne, peptona, NaCl, Sangre, Agar, y agua destilada. Es un medio rico adecuado para el cultivo y aislamiento de microrganismos exigentes e indispensable para la identificacin del tipo hemlisis producida4. Puede emplearse sangre desfribinada de cordero al 5%, conejo, o la humano sin embargo esta ultima siempre se considera potencialmente peligrosa. Entre las caractersticas que debe tener la sangre se encuentra: No tener cogulos Ser lo ms fresca posible No debe estar hemolisada Ser estril No haberse sometido a enfriamientos calentamientos repetidos. El medio debe ser autoclavado y enfriado alrededor de los 50 antes de agregar la sangre. Est se agrega aspticamente, agitando con cuidado para evitar la formacin de burbujas. Debe ser chorreado en la placa Petri hasta un grosor aproximado de 4mm. El agar sangre para anaerobios, se le adiciona antibiticos, por ejemplo los aminoglucsidos y la vancomicina, para el aislamiento selectivo de anaerobios. Interpretacin de hemolisis: En la figura 1, se puede apreciar los tres tipos de hemolisis.

Rodriguez, E. Bacteriologa General. Principio y practicas de Laboratorio. Editorial de Costa Rica: San Jos, Costa Rica, 2005, p121.

Figura 1. Agar sangre La alfa-hemlisis indica una la destruccin parcial de los eritrocitos alrededor de la colonia, se puede apreciar un color verdoso. La Beta-hemlisis indica la destruccin total de los eritrocitos alrededor de la colonia, est se observa de apariencia clara e incolora. Y por ultimo la Gama-hemlisis no presenta actividad hemoltica, ni decoloracin. Agar chocolante (PVX): Componentes: Extracto de carne, peptona, NaCl, Sangre, agar, y agua destilada. Es un medio similar al agar sangre, lleva como base un agar nutritivo con la diferencia que se agrega la sangre al estar alrededor de los 80, causando que los eritrocitos se lisan (figura 2). El calentamiento tiene la finalidad de la liberacin de los factores X (hemina) y V (difosfo- piridin-adeninnucletido coenzima I)5, lo cual es necesario para el desarrollo de algunos microrganismos. Est indicado para Neisseria Gonorrhoeae, agente etiolgico de la gonorrea y Haemophilus que causa infecciones en el tracto respiratorio y odo medio. Estas 2 especies no crecen en agar sangre.
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Figura 2. Agar Chocolate Agar McConkey (MCk): Composicin: Peptona, lactosa, NaCl, Sales Biliares, Cristal Violeta, rojo neutro, agar, y agua destilada.

Figura 3. Agar McConkey Es un agar primario, selectivo y diferencial utilizado con mucha frecuencia (figura 3). El colorante cristal violeta inhibe el crecimiento de las bacterias grampositivas y hongos y permite el desarrollo de bacilos gramnegativos. El indicador de pH (rojo Neutro) es un indicador diferencial. Si hay fermentacin de lactosa, el pH disminuye dando el color de las colonias bacterianas un color rojorosado. Cuando no hay fermentacin de la lactosa permanece incolora, como por ejemplo la Shigella6. Agar Manitol Sal (MSa): Composicin: Extracto de levadura,
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Garca, M; Paredes, F; Fernndez M. Microbiologa clnica prctica. 2 Ed, Servicio Publicaciones UCA: Espaa, 1994, p 63.

Forbes, B. Diagnostico microbiolgico; 12 Ed. Ed medica Panamericana: Argentina. 2009, p98.

triptona, gelatina, manitol, NaCl, sulfato amnico, sulfato dipotsico, rojo fenol, agar y agua destilada. Medio selectivo y diferenciador de los generos Staphylococcus y micrococcus. Es altamente selectivo ya que contiene una alta concentracin de cloruro de sodio, el cual impide el crecimiento de la mayora de las bacterias excepto los Staphylococcus. Adems contiene manitol como nico carbohidrato y rojo de fenol como indicador de pH, rojo (pH 8,4), amarillo (pH 6,8)(figura 4).

o los medios de cultivo indicados. Por ltimo es de suma importancia su correcta preparacin, almacenamiento y utilizacin.

Figura 4. Agar Manitol Sal Cuando la colonia no fermenta el manitol como S. Epidermis, el medio permanece sin cambio de color, quizs intensificando el rojo del medio, sin embargo cuando la bacteria fermenta el manitol como el caso del Staphylococcus aureus vira a color amarillo. En conclusin los medios de cultivos son soluciones que permiten el crecimiento de uno o varios microrganismos y de esta forma poder cultivar, aislar e identificar microrganismos. Elegir el tipo de medio adecuado segn la patologa del paciente es de suma importancia para llegar a un correcto diagnstico, en el mercado hay varios tipos de medios para escoger y solo conociendo sus caractersticas individuales y las necesidades nutritivas y fsicas de los microrganismos se podr escoger el