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Instruction Manual
6th Edition,May 1999
Instruction Manual
6th Edition,May 1999
   E  x  p  r  e  s  s   i  o  n   V  e  c  t  o  r   S  y  s  t  e  m
   B   a   c  u   l   o  v   i   r  u   s   B   a   c  u   l   o  v   i   r  u   s
   E  x  p  r  e  s  s   i  o  n   V  e  c  t  o  r   S  y  s  t  e  m
B  a c ul   ovi  r  u sE x pr  e s si   onV  e c t   or  S  y s t   e m M an u al   6  t  h E  d i   t  i   onM a y1  9  9  9 B  a c ul   ovi  r  u sE x pr  e s si   onV  e c t   or  S  y s t   e m M an u al   6  t  h E  d i   t  i   onM a y1  9  9  9 
 
Baculovirus ExpressionVector System Manual
6th EditionMay 1999
Instruction Manual
For information or to place an order, please call:1-800-848-MABS (6227)For Technical Assistance call:1-800-TALK-TEC (825-5832)10975 Torreyana Road • San Diego, CA92121 • USATel: (619)812-8800 • Fax: (619) 812-8888URL: http://www.pharmingen.com
General Methods 6xHis and GST PurificationDirect Cloning 
 
iii
Table of Contents
Baculovirus Memorandum of Agreement
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .vi
Opening Remarks
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .vii
1.The Baculovirus Expression Vector System
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1
2.Advantages of using the Baculovirus Expression Vector System
. . . . . . .3
3.AcNPV Baculovirus DNAs
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .7AcNPV C6 Wild-type Baculovirus DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8BaculoGold
™
Linearized Baculovirus DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .8Linearized AcRP23.lacZ Baculovirus DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .9Linearized AcUW1.lacZ Baculovirus DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .10
4.General Methods
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .114.1Selecting an Appropriate Baculovirus Transfer Vector . . . . . . . . . . . . . .114.2Optimizing Gene Expression . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .144.3Cloning your Gene into a Baculovirus Transfer Vector . . . . . . . . . . . . .14Preparing Vector and Insert . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .14Ligating Vector and Insert . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .16Propagating Vectors . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .17Purifying Vectors . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .184.4Insect Cell Lines . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .18General Handling Techniques . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .19Monolayer Cultures . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .20Suspension Cultures . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .21Freezing and Thawing Insect Cells . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .224.5Producing and Maintaining AcNPV-derived Baculoviruses . . . . . . . . . .22Generating Recombinant Baculoviruses by Co-Transfection . . . . . . . . .23End-point Dilution Assay . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .24Plaque Assay . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .26Plaque Pickup . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .28Amplifying Virus . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .29Storing Virus Particles . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30Isolating AcNPV Particles . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .30Isolating AcNPV DNA . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .314.6Expressing Recombinant Proteins . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .31Monolayer Cultures . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .32Suspension Cultures . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .334.7Purifying Recombinant Proteins . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .36Non-secreted Recombinant Proteins . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .36Cell Lysate Preparation . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .36Secreted Recombinant Proteins . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37
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nhyyyy1387

thanks for the download "not"

reply07 / 27 / 2009
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