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ISSN 2236-4420

Semana Entomolgica da Bahia (SINSECTA), 03 a 09 de dezembro de 2012

Qualidade microbiolgica do mel de Apis mellifera (Hymenoptera: Apidae) produzido na Regio Nordeste do Estado da Bahia
Lorena Silva Souza1; Marivalda Figueredo Santa Barbara 1; Geni da Silva Sodr1; Polyana Carneiro dos Santos; Alberto Magno Matos de Almeida2; Carlos Alfredo Lopes de Carvalho1
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Universidade Federal do Recncavo da Bahia, Centro de Cincias Agrrias, Ambientais e Biolgicas. Rua Rui Barbosa, 710. CEP: 44380-000, Cruz das Almas-BA, Brasil. E-mail: lorenassouza@yahoo.com.br; fsbmary@hotmail.com; polyufba@yahoo.com.br; genisodre@gmail.com; insecta@ufrb.edu.br. 2 Centro Territorial de Educao Profissional do Semirido NE II. Rua Jos Domingos Silva Neto, 1. CEP: 48400-00, Ribeira do Pombal-BA, Brasil. E-mail: albmagmatos@ig.com.br.

Resumo: O presente estudo foi realizado com o objetivo de avaliar microbiologicamente os mis produzidos por Apis mellifera da Regio Nordeste do Estado da Bahia, de maneira a verificar a possvel presena de microrganismos indesejveis que possam afetar o produto. Para tanto foram coletadas amostras de mis da Regio Nordeste de estado da Bahia e encaminhadas ao Ncleo de Estudos dos Insetos do Centro de Cincias Agrrias, Ambientais e Biolgicas da Universidade Federal do Recncavo da Bahia, onde procederam as seguintes anlises microbiolgicas: contagem padro de bolores e leveduras, aerbios mesfilos e psicrotrficos, e quantificada a presena ou ausncia de coliformes totais e termotolerantes. Constatou-se ausncia de bactrias aerbias psicrotrficas, coliformes totais e coliformes tolerantes e presena de bactrias mesfilas, que 3 -1 2 -1 apresentou valores entre 2,5x10 a 1,4x10 UFC.g , com mdia de 2,5x10 UFC.g . Os mis provenientes da Regio Nordeste da Bahia podem ser considerados de boa qualidade. No entanto, deve-se seguir as boas prticas de fabricao (BPF), afim de evitar o aumento da microbiota de bactrias mesfilas, bolores e leveduras. Palavras chave: bolores, leveduras, bactrias, coliformes.

Microbiological quality of Apis mellifera (Hymenoptera: Apidae) honey produced in the northeastern State of Bahia
Abstract: The present study was carried out aiming to evaluate microbiologically the honey produced by Apis Mellifera from the Northeast Region of Bahia State, to verify the possible presence of undesirable microorganisms that may affect the final product. In order to do so, samples of honey from the region were collected, put into plastic containers and forwarded to the Insect Studies Nucleus at the Center of Agriculture, Environmental and Biological Sciences at he Universidade Federal do Recncavo da Bahia, where the following microbiological analysis were made: standard counting of yeasts and molds, aerobial mesophiles and psycotrophics bacteria, and the presence or absence of total and thermo tolerant coliforms was quantified. It was demonstrated the absence of psychotropic aerobial bacteria, total coliforms and tolerant coliforms and the presence of mesophile bacteria which presented 3 -1 2 -1 amounts between entre 2.5x10 a 1.4x10 UFC.g , with an average of 2.5x10 UFC.g . The honeys from the northeastern region from Bahia can be considered to be of good quality. However, one should follow the good manufacturing practices, in order to avoid the increase of bacterial microbiota, mesophilic yeasts and molds. Key words: molds, yeasts, bacteria, coliforms.

Introduo
O mel o adoante mais antigo utilizado pelo homem, sendo composto principalmente de monossacardeos, como a glicose e a frutose (Kuroishi et al., 2012). Considerado tambm como alimento energtico, rico em nutrientes, alm de apresentar propriedades medicinais, assim como: efeito cicatrizante e antibacteriano (Silva, 2006). Essas particularidades geralmente esto relacionadas s caractersticas qumicas do produto (Molan, 1999). O mercado consumidor exige cada vez mais alimentos bem elaborados e de qualidade, sendo necessria a realizao de anlises microbiolgicas que assegurem a qualidade do produto (Souza et al., 2011). Entre os Magistra, Cruz das Almas-BA, v. 24, nmero especial, p. 194-199, dez. 2012.

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vrios parmetros que determinam a qualidade de um alimento, os mais importantes esto diretamente relacionados s caractersticas microbiolgicas (Franco, 2008). A caracterizao microbiolgica de um produto fornece informaes que permitem avali-lo quanto s condies de processamento, armazenamento e distribuio para o consumo, sua vida til e quanto ao risco sade da populao (Franco, 2008). Apesar da importncia, a Legislao brasileira vigente, no contempla anlises microbiolgicas em mel, estabelecem apenas que sejam seguidas prticas de higiene na manipulao do produto (Brasil, 2000; CAC, 2001). Contudo estes conceitos precisam ser revistos principalmente por se tratar de um produto de consumo humano (Tchoumboue et al., 2007). A presena de agentes antibacterianos, como o perxido de hidrognio, cidos fenlicos e substncias volteis acarretam em condies desfavorveis para o crescimento e desenvolvimento de microrganismos (Malika et al., 2005; Franco, 2008). No entanto as leveduras, bactrias formadoras de esporos e fungos filamentosos so considerados microrganismos primrios que podem estar diretamente relacionados na deteriorao do produto, produo de enzimas, toxinas, converso metablica do alimento, produo de fatores do crescimento (vitaminas e aminocidos) e fatores de inibio de microrganismos competidores (Silva et al., 2008). Geralmente meio cido, elevada atividade de gua e elevada umidade so os principais fatores responsveis pelo desenvolvimento desses microrganismos (Franco, 2008). importante ressaltar que a umidade pode resultar em trocas na sua composio, alterando a atividade de gua do produto, favorecendo, a partir desse momento, a deteriorao por microrganismos existentes no mel (Denardi et al., 2005; Bogdanov, 2009). Atividade de gua inferior a 0,91 favorece a multiplicao de bactrias patognicas em alimentos (Jay, 2005; Franco, 2008). O Territrio Nordeste da Bahia responsvel por 26,4% da produo de mel no estado da Bahia (IBGE, 1996; 1998; 2003; 2004; 2005; 2006; 2007), evidenciando que as condies ambientais e climticas baianas so propcias para a expanso da atividade, alm de gerar um nmero significativo de empregos diretos. Apesar da importncia do mel para regio e a crescente demanda, faltam conhecimentos sobre as caractersticas microbiolgicas desse produto. Diante dessas particularidades de fundamental importncia tomar providncias pertinentes obteno de um produto de qualidade. Desse modo, o presente trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar a qualidade microbiolgica de amostras de mis de Apis mellifera, produzidas por apicultores da Regio Nordeste do Estado da Bahia, de maneira a verificar a possvel presena de microrganismos indesejveis que possam afetar o produto.

Material e Mtodos
Amostras Foram analisadas 21 amostras de mis de Apis mellifera coletadas diretamente de apicultores de diferentes localidades do Nordeste do Estado da Bahia: Ribeira do Pombal, Ribeira do Amparo, Tucano, Helipolis, Banza, Jandara, Entre Rios e Euclides da Cunha (Tabela 1). Tabela 1 - Locais da colheita, coordenadas geogrficas e codificao das amostras de mel de Apis mellifera da Regio Nordeste do Estado da Bahia Locais Territrio de Identidade Coordenadas Amostras Ribeira do Pombal Semirido Nordeste II 1050 S 3832 O 01, 04, 07, 10, Ribeira do Amparo Semirido Nordeste II 1102 S 3826 O 02, 03 Tucano Sisal 1057 S 3847O 05, 09, 11 Helipolis Semirido Nordeste II 1041 S 3817 O 06 Banza Semirido Nordeste II 1034 S 38 36 O 08, 16, 21 Euclides da Cunha Semirido Nordeste II 1030 S 3900 O 12, 13, 14 Entre Rios Agreste de Alagoinhas/Litoral Norte 1156 S 3805 O 15, 17, 18, 20 Jandara Agreste de Alagoinhas/Litoral Norte 1133 S 3747 O 19 As amostras foram armazenadas em embalagens plsticas, mantidas em temperatura ambiente e encaminhadas ao Ncleo de Estudos dos Insetos (Insecta) do Centro de Cincias Agrrias, Ambientais e

Magistra, Cruz das Almas-BA, v. 24, nmero especial, p. 194-199, dez. 2012.

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Biolgicas (CCAAB) da Universidade Federal do Recncavo da Bahia, em Cruz das Almas-BA, onde foram realizadas as anlises. Anlises microbiolgicas As anlises microbiolgicas foram realizadas seguindo o mtodo da American Public Health Association (APHA) descrito nas normas internacionais (Downes et al., 2001) para cada grupo de microrganismo. Foi realizada a contagem padro de bolores e leveduras, aerbios mesfilos e psicrotrficos, e quantificada a presena de coliformes totais e termotolerantes nas amostras de mis. Para a realizao das anlises, uma alquota de 25,0 g de cada amostra de mel foi utilizada para a -1 preparao da primeira diluio (10 ) em 225,0 mL de gua peptonada tamponada a 0,1%, e as preparaes das diluies decimais subsequentes foram realizadas em tubos contendo 9,0 mL do mesmo diluente para obteno -2 -3 das concentraes 10 e 10 . Bolores e leveduras Para contagem padro dos bolores e leveduras, 0,1 mL de cada diluio foi plaqueada na superfcie do meio de cultura gar Sabouraud Dextrose. Com o auxlio de uma ala de Drigalski, realizou-se o espalhamento do inculo por toda a superfcie do meio. A anlise foi realizada em duplicata. A incubao foi em BOD (Demanda Bioqumica de Oxignio) a 25C durante cinco dias. Aps esse perodo, procedeu-se a contagem para determinar 1 o nmero de Unidades Formadoras de Colnias (UFC.g ). Aerbios mesfilos e psicrotrficos Para determinao de aerbios mesfilos e psicrotrficos, alquotas de 1 mL das diluies foram plaqueadas em profundidade em meio de cultura gar Padro para Contagem (PCA). As placas inoculadas foram incubadas a 35C por 48 h (aerbios mesfilos) e 7C por 10 dias (aerbios psicrotrficos). A determinao foi realizada em duplicata. Aps esses perodos, realizou-se a contagem para determinar o nmero de Unidades -1 Formadoras de Colnias (UFC.g ). Coliformes totais e termotolerantes Na avaliao dos coliformes totais e termotolerantes utilizou-se a tcnica do Nmero Mais Provvel (NMP) tambm conhecida como mtodo de tubos mltiplos, sendo inicialmente realizado o teste presuntivo utilizando o Caldo Lauril Sulfato Triptose (LST) para incubao das diluies, utilizando-se trs tubos contendo 10 mL de LST com tubos de Durhan invertidos para cada diluio, os quais permaneceram em estufa para demanda biolgica de oxignio (BOD) a 35 C por 48 h. A presena de coliformes foi observada pelo crescimento com produo de gs no interior dos tubos de Durhan. Para os tubos da srie LST que apresentaram resultados positivos, foi realizado o teste confirmatrio utilizando o Caldo Verde Brilhante Bile (VB) para coliformes totais, incubados a 35 C por 24-48 h e o caldo Escherichia coli (EC) para coliformes termotolerantes, que foram mantidos a 45 C em banho-maria sob agitao -1 durante 24 h. O Nmero Mais Provvel (NMP.g ) de coliformes totais e termotolerantes foi determinado por meio da tabela de Hoskins.

Resultados e Discusso
Os resultados das anlises microbiolgicas das 21 amostras de mis do Nordeste da Bahia so apresentados na Tabela 2. O valor mdio para a contagem de bolores e leveduras foi de 1,8x103 UFC.g-1. No entanto, 29% das -1 amostras analisadas foram consideradas isentas da presena destes microrganismos (<1,0x10 UFC.g ). As 4 -1 demais apresentaram contagem com valores de 5,0x10 a 2,5x10 UFC.g . Os valores mximos foram constatados nas amostras 04 e 09. Valores prximos aos encontrados no presente estudo foram verificados em alguns trabalhos referentes microbiologia do mel de Apis mellifera. Sodr et al. (2007) analisaram 58 amostras de mis 3 2 1 dos Estados do Cear e Piau e constataram respectivamente mdias de 1,2x10 e 2,7x10 UFC.g- . Silva et al. (2008) trabalhando com amostras de mis de entrepostos registrados no Servio de Inspeo Federal (SIF) do 3 -1 Estado de Minas Gerais constataram mdia de 3,7x10 UFC.g .

Magistra, Cruz das Almas-BA, v. 24, nmero especial, p. 194-199, dez. 2012.

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A contagem total de aerbios mesfilos apresentou valores entre 2,5x10 a 1,4x103 UFC.g-1, com mdia de 2 -1 2,5x10 UFC.g . Pires (2011) ao analisar a presena destes microrganismos em mel produzido no Piau encontrou 4 4 -1 valores de 1,0x10 e 5,0x10 UFC.g . Em outras pesquisas no comum a mensurao deste grupo de microrganismos, no entanto, conforme Silva et al. (2010) esta anlise o mtodo mais utilizado como indicador geral de populaes bacterianas em alimentos. Desta forma, no um indicador de segurana, pois no est diretamente relacionado presena de patgenos ou toxinas. Entretanto, dependendo da situao, pode ser til na avaliao da qualidade, porque populaes altas de bactrias podem indicar deficincias na sanitizao ou falha no controle do processo. Tabela 2 - Anlises microbiolgicas de mel de Apis mellifera produzido na Regio Nordeste do Estado da Bahia: Contagem padro de bolores e leveduras (UFC.g-1), aerbios mesfilos e psicrotrficos (UFC.g-1), -1 coliformes totais e termotolerantes (NMP.g ). -1 Bolores/ Aerbios Coliformes (NMP.g ) Amostra Leveduras Psicrotrficos Mesfilos Totais Termotolerantes -1 -1 -1 (UFC.g ) (UFC.g ) (UFC.g ) (35 C) (45 C) 01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Mdia <1,0x10 5,0x10 2 2,0x10 1,0x104 <1,0x10 5,0x10 <1,0x10 <1,0x10 4 2,5x10 5,0x10 5,0x10 <1,0x10 1,0x102 <1,0x10 1,0x102 5,0x10 5,0x102 2 1,0x10 2 4,5x10 2 2,5x10 5,0x10 1,8x103 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 <1,0x10 3,5x10 2,3x102 2 1,0x10 6,5x10 2 7,5x10 2 5,0x10 2 1,1x10 2,5x10 1,4x102 2 3,0x10 4,2x102 9,5x10 5,5x10 2 1,3x10 2 2,0x10 3,5x10 3,5x10 1,8x102 4,0x10 1,4x103 8,5x10 2 2,5x10
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<3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0

<3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0 <3,0

Como consta em Landgraf (2008), todas as bactrias patognicas de origem alimentar so mesfilas. Na 6 maioria dos alimentos as alteraes organolpticas so detectveis quando os nmeros so superiores a 10 -1 8 -1 UFC.g . Normalmente, em alimentos fermentados, a populao microbiana de, aproximadamente, 10 UFC.g sem necessariamente serem considerados deteriorados. Os resultados encontrados neste trabalho so inferiores aos mencionados anteriormente. Em nenhuma das amostras de mis analisadas foi verificada a presena de bactrias aerbias -1 psicrotrficas, sendo considerada <1,0x10 UFC.g . Estes microrganismos crescem em alimentos sob refrigerao, porm na classificao tradicional dos microrganismos em funo da temperatura, os psicrotrficos considerados um subgrupo dos mesfilos, apresentando temperatura tima de crescimento acima de 20C (Silva et al., 2010). -1 Todas as amostras foram negativas para presena de coliformes totais e termotolerantes (<3,0 NMP.g ). Os microrganismos pertencentes ao grupo dos coliformes podem ser utilizados para refletir a qualidade microbiolgica de produtos em relao vida de prateleira ou segurana, neste ltimo caso, devido presena de patgenos alimentares. Em geral, microrganismos indicadores, como o grupo dos coliformes, so utilizados para avaliar a Magistra, Cruz das Almas-BA, v. 24, nmero especial, p. 194-199, dez. 2012.

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sanificao dos produtos (Silva et al., 2008). Desse modo, os resultados obtidos neste trabalho para este grupo de microrganismos podem evidenciar segurana e que o produto possui qualidade higinico-sanitria satisfatria. Resultados semelhantes foram constatados por outros autores: Sodr et al. (2007) analisaram mis do Cear e Piau; Silva et al. (2008) avaliaram mis produzidos por pequenos apicultores e mis de entrepostos de Minhas Gerais; Alves et al. (2009) estudaram amostras de mel orgnico das ilhas do alto do rio Paran; Pires (2011) verificou a qualidade microbiolgica do mis de abelhas Apis mellifera produzido no Piau. Em todos no foi detectada a presena de microrganismos do grupo dos coliformes. O controle da qualidade da produo do mel primordial, tornando-se fundamental o atendimento das boas prticas de higiene por parte dos produtores, bem como a utilizao de um local adequado para o manuseio e extrao do mel (Pires, 2011). A Portaria n 367 de 04 de setembro de 1997 (Brasil, 1997), que considerava alguns padres microbiolgicos para o mel foi revogada. A legislao brasileira vigente, representada pela Instruo Normativa n 11 de 20 de outubro de 2000 onde consta em anexo o Regulamento Tcnico de Identidade e Qualidade do mel, no estabelece parmetros microbiolgicos para este produto, apenas recomenda procedimentos higinicos para a manipulao do mel (Brasil, 2000). As anlises microbiolgicas em alimentos so de fundamental importncia para a preveno de enfermidades transmitidas pelos mesmos, e para o mel no seria diferente, o mesmo trata-se de um alimento que amplamente consumido no mundo (Pires, 2011).

Concluses
A qualidade geral das amostras de mel da Regio Nordeste da Bahia pode ser considerada boa, sendo semelhante a resultados obtidos em outras pesquisas. Nenhuma das amostras foi positiva para presena de bactrias aerbias psicrotrficas, coliformes totais e coliformes tolerantes.

Agradecimentos
Ao Programa de Educao Tutorial (PET), do curso de Agronomia, do Centro de Cincias Agrrias, Ambientais e Biolgicas da Universidade Federal do Recncavo da Bahia; ao CNPq pela Bolsa de Produtividade em Pesquisa concedida a C.A.L.C.

Referncias
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