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TD Milieu de Culture

TD Milieu de Culture

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03/19/2014

 
TD1 : Milieu de culture
Composition du milieu de culture 
Éléments indispensables
 
(milieu de base)
!!
Eau
!
Source de carbone
= saccharose-Rôle pour contrer la déficience de la photosynthèse (20 à 30
 
g/l)-Rôle osmotique, il est indispensable pour la culture d'embryon immature (100 à 120
 
g/l). Ilpermet de mettre en évidence la contamination par un pathogène
!
Éléments minéraux
-
Macroéléments 
 
(besoin en grande quantité g/l)
Azote : 1 à 3
 
% de la matière sèche. On le retrouve dans les protéines, les acides nucléiques,hormones... On le donne sous forme de sel KNO
3
, sous forme d'ammonium NH
4+
. On peutmettre des acides aminés aussi qui contiennent de l'azotePotassium : 2 à 4
 
% de la matière sèche, il intervient dans les échanges osmotiques.Nécessaire à la synthèse des hormones, de la chlorophylle, nécessaire à la division cellulairePhosphate
(phosphore)
: 0,1 à 0,5
 
% de la matière sèche, on en retrouve dans l'ATP et en grandequantité dans les cellules méristèmatiquesSouffre : 0,6 à 0,6
 
% de la matière sèche. Il est absorbé sous forme de sulfate. On en retrouvebeaucoup dans la cystéineCalcium : 1 à 2
 
% de la matière sèche. Il augmente la rigidité des parois (élément de la pectine)et a un rôle dans la perméabilité cellulaire au niveau des membranesMagnésium : 0,1 à 0,7
 
% de la matière sèche. C’est un activateur enzymatique et un élémentcentral dans la chlorophylle-
Microéléments 
 
(besoin en petite quantité mg/l)
Cobalt : sous forme de CoCl
2
(vitamine B12)Molybdène : cofacteur de la nitrate réductaseManganèse : élément de la membrane des chloroplastesZinc : interviens dans la fabrication de l'auxineCuivre : rôle de transporteur dans la photosynthèseBorr : dans le mouvement des sucresLe fer est entre les 2 (micro et macroélément) : il n'est pas fourni sous forme de sel, car ilprécipite. On le fixe à l'EDTA sous forme chélatée, mais il est indispensable pour les milieux deculture
!
Vitamines
: généralement du groupe B (mg/l) sauf pour l'inositol (B7 en 100
 
mg/l)
Biotechnologies animales et végétales1 sur 8
 
Éléments
 
facultatifs
 
(que dans certains milieux)
!
Hormones végétales
 
(régulateurs de croissance)
 On utilise en milieu de culture l'auxine et la cytokinineAuxine de synthèse (ANA) cytokinine de synthèse (BAP)La gibbérelline (AG3) pour l’allongement des tigesAcide jasmonique pour le mécanisme de défense des plantes
!
Agar
 L’Agar permet la culture en milieu solide, mais il n'est pas très purifié donc si ça ne marche pas,on utilise la gelrite qui est plus pure, mais beaucoup plus chère
!
Acides aminés
: glutamine, glycocolle, cystéine
!
Mélanges complexes
 
(utilisé pour les cultures délicates)
Le lait de coco à 2
 
% riche en régulateurs de croissance (division cellulaire)L’hydrolysat de caséine (lait)L’extrait de levure (vitamines, mais en plus grande quantité)
!
Charbon actif
Le charbon à la capacité d'absorber les molécules inactives. Il est utilisé pour la phased'enracinement en capturant les cytokinines qui empêchent l'enracinement. Il permet decapturer la libération de composés toxiques lors d’un stress (composés phénoliques quis'oxydent à la lumière et la plante devient marron)
Composition des éléments minéraux 
6 macroéléments principaux en quantité idéale pour le développement pour la plante. On partde milieu existant. Milieu très utilisé (Murashige et Skoog mis au point sur le tabac, car c'est uneespèce modèle). On peut l’utiliser soit en concentration x1 ou dans d’autres concentrationsselon l'espèce végétale considérée. Il est riche en azote et éléments minéraux. Il est préconisédans la culture d'explants sans méristèmesCulture de fragments nodaux
Murashige et Skoog, mais à une concentration 1/2Les plantes carnivores
Murashige et Skoog à une concentration 1/4On peut cultiver avec MS, mais en enlevant un élément toxique pour la plante considérée (MSsans KNO3, mais il faut compensé l'azote perdu)Parfois les milieux ne sont pas comparables, car la forme des éléments qui sont fournis estdifférente parfois. Il faut alors comparer en
équivalent-gramme d'ionExercice
: comparaison de 2 milieux de culture (Murashige et Skoog et Heller) en fonction deleur contenue en ion NO
3-
Biotechnologies animales et végétales2 sur 8
 
Biotechnologies animales et végétales3 sur 8

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