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INSTITUT PASTEUR D’ALGERIE
 SEMINAIRE DE RECYCLAGE 
LABORATOIRES D’HYGIENE DES WILAYA DE L’EST
 MANUELDES TRAVAUX PRATIQUES  ANALYSES DES ALIMENTS du 16 au 20 Juillet 2005 Responsable des Travaux pratiques : Dr E. LEBRES Assistants : Mr Azizi Djamal  Mr Boudjellab Badreddine
 
M E T H O D E S G E N E R A L E S
I . PREPARATION DES ECHANTILLONS .
I.1. Prise d’essai .Les laits étant des produits liquides constitueront d’emblée donc une solutionmère.Les produits laitiers ( laits secs en poudre, yaourt, fromages, desserts lactés etautres étant des produits solides, feront l’objet de dilutions décimales, mais au palable il est nécessaire de proder à leur homoisation à l’aide detechniques et d’appareils appropriés (Broyeurs homogénéisateurs, Stomatcher ..).Les prises d’essai sont effectuées sur l’échantillon homogénéien tenantcompte de deux facteurs essentiels à savoir :
le nombre de pièces soumises à l’analyse d’une part,
les opérations analytiques à conduire ...Mais, en général, on prélève trois fois 25 ml ou 25 gr :
les premiers serviront à l’analyse bactériologique courante,
les seconds serviront à la recherche de Salmonella – Shigella,
les troisièmes serviront à la recherche des Listeria.I.2. Cas des produits liquides.Dans le cas des produits liquides, le mélange de trois à cinq sachets de lait par exemple constituera la solution mère (SM = 1).
 Dilutions décimales :
Introduire ensuite aséptiquement à l’aide d’une pipette en verre graduée etstérile, 1 ml de la SM, dans un tube à vis stérile contenant au préalable 9ml du même diluant : cette dilution est alors au 1/10 ou 10
-1
.
Introduire par la suite 1ml de la dilution 10
-1
dans un tube à vis stérilecontenant au préalable 9 ml du même diluant : cette dilution est alors au1/100 ou 10
-2
.
Introduire ensuite aseptiquement à l’aide d’une pipette en verre graduée etstérile, 1 ml de la dilution 10
-2
dans un tube à vis stérile contenant au préalable 9 ml du même diluant ; cette dilution est alors au 1/1000 ou 10
-3
.Voir schéma n°1.I.3.Cas des produits solides.
2
 
Dans le cas des produits solides, introduire aseptiquement 25 grammes de produit à analyser dans un bocal stérile préalablement taré ou dans un sachetstérile de type « Stomatcher » contenant au préalable 225 ml de diluant soit leTSE ( Tryptone Sel Eau ) . Homogénéiser.Cette suspension constitue alors la dilution mère (DM) qui correspond donc à ladilution 1/10 ou 10
-1
.
 Dilutions décimales :
Introduire ensuite aseptiquement à l’aide d’une pipette en verre graduée etstérile 1ml de la DM, dans un tube à vis stérile contenant au préalable 9ml du même diluant : cette dilution sera alors au 1/100 ou 10
-2
.
Introduire par la suite 1ml de la dilution dans un tube à vis stérilecontenant au préalable 9 ml du même diluant : cette dilution est sera alorsau 1/100 ou 10
-3
.
Introduire ensuite aseptiquement à l’aide d’une pipette en verre graduée etstérile, 1 ml de la dilution 10
-3
dans un tube à vis stérile contenant au préalable 9 ml du même diluant : cette dilution est alors au 1/1000 ou 10
-4
.Voir schéma n°2.Ces dilutions serviront à la recherche des germes suivants :
Germes aérobies mésophiles totaux
Coliformes totaux et fécaux
Staphylococcus aureus
Levures et Moisissures.Remarques :
1.
Au moment de la réalisation des dilutions décimales, il est impératif dechanger de pipettes entre chaque dilution.
2.
Contrairement à cela, lors de l’ensemencement il est recommander decommencer par la plus forte dilution à savoir 10
-3
dans le but justement dene pas changer de pipettes. On travaillera alors à l’aide d’une pipettegraduée en verre stérile de 5 ml.
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