INSTITUT PASTEUR D’ALGERIE

« MICROBIOLOGIE DES LAITSET PRODUITS LAITIERS

F.MOUFFOK

I . PREPARATION DES ECHANTILLONS .

I.1. Prise d’essai .Les laits étant des produits liquides constitueront d’emblée donc une solution mère.Les produits laitiers ( laits secs en poudre, yaourt, fromages, desserts lactés etautres étant des produits solides, feront l’objet de dilutions décimales, mais aupréalable il est nécessaire de procéder à leur homogénéisation à l’aide detechniques et d’appareils appropriés (Broyeurs homogénéisateurs, Stomatcher ..) .Les prises d’essai sont effectuées sur l’échantillon homogénéisé en tenant comptede deux facteurs essentiels à savoir :

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le nombre de pièces soumises à l’analyse d’une part,

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les opérations analytiques à conduire ...Mais, en général, on prélève trois fois 25 ml ou 25 gr :

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les premiers serviront à l’analyse bactériologique courante,

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les seconds serviront à la recherche de Salmonella – Shigella,

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les troisièmes serviront à la recherche des Listeria.I.2. Cas des produits liquides.Dans le cas des produits liquides, le mélange de trois à cinq sachets de lait par exemple constituera la solution mère (SM = 1).

Dilutions décimales :

•

Introduire ensuite aséptiquement à l’aide d’une pipette en verre graduée etstérile, 1 ml de la SM, dans un tube à vis stérile contenant au préalable 9 mldu même diluant : cette dilution est alors au 1/10 ou 10

-1

•

Introduire par la suite 1ml de la dilution 10

-1

dans un tube à vis stérilecontenant au préalable 9 ml du même diluant : cette dilution est alors au 1/100ou 10

-2

•

Introduire ensuite aseptiquement à l’aide d’une pipette en verre graduée etstérile, 1 ml de la dilution 10

-2

dans un tube à vis stérile contenant au préalable9 ml du même diluant ; cette dilution est alors au 1/1000 ou 10

-3

.Voir schéma n°1.I.3.Cas des produits solides.Dans le cas des produits solides, introduire aseptiquement 25 grammes de produit àanalyser dans un bocal stérile préalablement taré ou dans un sachet stérile de type« Stomatcher » contenant au préalable 225 ml de diluant soit le TSE ( Tryptone SelEau ) . Homogénéiser.Cette suspension constitue alors la dilution mère (DM) qui correspond donc à ladilution 1/10 ou 10

-1

Dilutions décimales :

•

Introduire ensuite aseptiquement à l’aide d’une pipette en verre graduée etstérile 1ml de la DM, dans un tube à vis stérile contenant au préalable 9 ml dumême diluant : cette dilution sera alors au 1/100 ou 10

-2

•

Introduire par la suite 1ml de la dilution dans un tube à vis stérile contenant aupréalable 9 ml du même diluant : cette dilution est sera alors au 1/100 ou 10

-3

•

Introduire ensuite aseptiquement à l’aide d’une pipette en verre graduée etstérile, 1 ml de la dilution 10

-3

dans un tube à vis stérile contenant au préalable9 ml du même diluant : cette dilution est alors au 1/1000 ou 10

-4

.Voir schéma n°2.Ces dilutions serviront à la recherche des germes suivants :

•

Germes aérobies mésophiles totaux

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Coliformes totaux et fécaux

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Staphylococcus aureus

•

Levures et Moisissures.Remarques :1.Au moment de la réalisation des dilutions décimales, il est impératif dechanger de pipettes entre chaque dilution.