Welcome to Scribd. Sign in or start your free trial to enjoy unlimited e-books, audiobooks & documents.Find out more
Download
Standard view
Full view
of .
Look up keyword
Like this
2Activity
0 of .
Results for:
No results containing your search query
P. 1
Laporan Genetika Molekuler

Laporan Genetika Molekuler

Ratings: (0)|Views: 68|Likes:
Published by Kuro Elf

More info:

Published by: Kuro Elf on Mar 05, 2013
Copyright:Attribution Non-commercial

Availability:

Read on Scribd mobile: iPhone, iPad and Android.
download as DOCX, PDF, TXT or read online from Scribd
See more
See less

05/01/2013

pdf

text

original

 
Laporan Genetika Molekuler (1 & 2)
 
 Nama
 
: Nurlatiefah
 
Tanggal Praktikum: 26 Februari 2013
 
 NRP
 
: G34100123
 
Asisten : 1. Andi Trisnandi G34090046
 
Kelompok 
 
: 1
 
2. Munjiati
 
G34090011
 
Laboratorium
 
: 4
 
3. Diah Apri D G34090070
 
Isolasi Plasmid dan Elektroforesis Pada Gel Agarosa
 
Pendahuluan
 
Vektor DNA adalah molekul DNA yang dipergunakan untuk membawa dan memperbanyak fragmen DNA yang dibawanya. Vektor yang sering digunakan adalah plasmid bakteri. Plasmidadalah molekul ekstrakromosomal dari DNA yang bervariasi ukurannya, dari 1 kb hingga lebih dari200 kb, plasmid ditemukan hampir disemua bakteri (Lehninger 1994). Plasmid merupakan ekstrakromosomal elemen yang merupakan aksesori genetik untuk replikasi dan tidak tergantung darikromosom bakteri. Jenis
-
 jenis vektor selain plasmid yang sering digunakan antara lain bakteriophage, YAC (yeast artificial chromosome) dan cosmid (Kleinsmith & Kish 1995).
 
Elektroforesis adalah teknik pemisahan komponen atau molekul bermuatan berdasarkan perbedaan tingkat migrasinya dalam sebuah medan listrik. Medan listrik dialirkan pada suatumedium yang mengandung sampel yang akan dipisahkan. Teknik ini dapat digunakan denganmemanfaatkan muatan listrik yang ada pada makromolekul, misalnya DNA yang bermuatan negatif.Jika molekul yang bermuatan negatif dilewatkan melalui suatu medium, kemudian dialiri aruslistrik dari suatu kutub ke kutub yang berlawanan muatannya maka molekul tersebut akan bergerak dari kutub negatif ke kutub positif. Elektroforesis ada 2 jenis yaitu elektroforesis horizontal danvertikal. Elektroforesis dapat digunakan untuk mengukur DNA dengan DNA marker yang sudahdiketahui ukurannya. DNA marker berfungsi sebagai pembanding sehingga bisa diketahui ukuranDNA sampel. Medium yang sering digunakan adalah gel agarosa (Stansfield
et al 
. 2003). Buffer yang digunakan ialah larutan TAE 1x. Larutan TAE 1x dibuat dengan melarutkan 9,86 gram Tris, 4ml 0,5 M EDTA dan 2,28 ml Asam Asetat Glasial pada 100 ml ddH
2
O, aduk hingga merata dantambahkan lagi ddH
2
O hingga mencapai volume 200 ml(Sambrook & Russell 2001). Selain gel agarosa, ada 2 gel lagi untuk elektroforesis yaituPulse
-
Field Gel Electrophoresis (PFGE) dan poliakrilamida.
 
Tujuan
 
 
Untuk mengetahui dan dapat mengisolasi plasmid untik vektor kloning serta untuk mengetahui cara mendeteksi DNA dengan gel agarosa.
 
Metode
 
Tahap isolasi
 
Kultur PGEMT
 
dan SG
α
 
Masukkan 1,5ml dalam tube
 
Sentrifuse10000 rpmselama 5 menit
 
Ambil pelet &tambahkan 250 µLlarutan A
 
Vortex
 
+ 250 µLlarutan B
 
Kocok 10 kali
 
Sentrifuse10000 rpm 10menit 4˚C
 
Ambil supernatansebanyak 600 µL
 
+ 1x Volume
 
Larutan PCI
 
Vortex
 
Sentrifuse10000 rpm 10
 
Ambil supernatansebanyak 500 µL
 
+ 0,1x Volume NaOH
 
+ 2x Volume EtOH 100%
 
Inkubasi 30 menit difreezer 
 
Sentrifuse 10000rpm 20 menit 4˚C
 
Ambil pelet +EtOH 70% 500 µL
 
Sentrifuse10000 rpmselama 5 menit
 
Pelet dikeringkandi oven 65˚C
 
+ ddH
2
O 20 µL
 
+ RNAse 0,2xVolume
 
Inkubasi 37˚Cselama 10 menit
 
Inaktif RNAse70˚C 10 menit
 
Stock plasmid difreezer 
 
 
 
Tahap Pembuatan Gel
 
Tahap Elektroforesis
 
Hasil Percobaan
 
Gambar 1. Foto hasil elektroforesis gel agarosa
 
Pembahasan
 
Setiap larutan baik pada proses isolasi plasmid maupun running, memiliki fungsi masing
-
masing. Larutan A berfungsi untuk resuspensi sel.
 
Larutan B berfungsi untuk mendenaturasi DNAdan melisis membran sel. Suspensi dihomogenkan dengan cara membolak 
-
 balik tabung (10 kali).
0,3 gram agar + 1
-
30 mlTAE 1x
 
Erlenmeyer 
 
Microwave 3menit
 
Tungguhingga hangatkuku
 
Tuang kecetakan
 
Ambil 10 µLDNAAmbil 10 µL+ 1,5 µLloading dye
 
Jentikkan kesumur 
 
Running
 

You're Reading a Free Preview

Download
scribd
/*********** DO NOT ALTER ANYTHING BELOW THIS LINE ! ************/ var s_code=s.t();if(s_code)document.write(s_code)//-->