INICIO

500 mg de Ovoalbmina pura + 100mL de sol. Salina estril

10mL de la solucin preparada

Obtencin Suero Testigo

10mL de adyuvante completo de Freud

Visualizar e identificar los vasos sanguneos de la oreja del Conejo

Almacenar de 4-8C

Limpiar el rea con EtOH para visualizar ms fcilmente las venas marginales

Rasurar Oreja Venas visibles? NO Observar la otra oreja SI

A Puncionar la vena hay extraccin? NO Puncionar vena opuesta hay extraccin? NO Puncionar arteria media de la oreja hay extraccin? NO Cambiar el mtodo de puncin (Ej. Sistema alado) hay extraccin? NO SI SI

SI

SI

Cambiar sitio anatmico de puncin (Pierna, etc)

NO

hay extraccin?

SI

Cambiar modelo BIOLGICO y repetir

Extraer Mnimo 3mL de sangre

Despegar coagulo cuidadosamente

Centrifugar 3500rpm/5min

NO

suero separado?

SI

Extraer suero en tubo estril Rotular como SUERO TESTIGO y almacenar de 2-8C Estirar la piel del lomo del conejo y limpiar Inocular 2mL de inmungeno (dosis Cero)

Inoculacin intradrmica

NO

Inoculacin completa?

SI

Es posible calcular dosis faltante? NO Cambiar de modelo biolgico y repetir

SI

Seguir con el esquema de inmunizacin establecido**

Inocular la cantidad faltante Esquema completo? NO SI

C1

C2

Reportar el motivo

Sujetar firmemente al conejo en posicin boca arriba

Localizar el corazn

Realizar asepsia del sitio

Realizar la puncin intracardiaca, con jeringa de 10 mL introducindola a 90

NO

Hay extraccin?

SI

Repetir puncin

Extraer 10mL de sangre aproximadamente

Hay extraccin?

SI Desprender coagulo

Centrifugar a 3500 rpm/ 5 min

NO SI Coagulo?

Repetir cuantas veces sea necesario , sin causar dao o la muerte del conejo

NO

D E Extraer suero Mezclar Rotular 14 tubos de ensayo Sellar extremo del capilar con plastilina Agregar a cada tubo 0.2mL de Sol. salina Repetir procedimiento con cada una de las diluciones del antgeno y con el suero testigo

Al primer tubo agregar 0.2mL de Antgeno

Tomar 0.2mL del tubo 1 y agregar al tubo 2

Incubar a temperatura ambiente de 24-48 horas

Tomar 0.2 mL del tubo 2 y agregar al tubo 3

Repetir sucesivamente hasta terminar el 12vo tubo

Reportar reaccin de precipitacin a la mxima dilucin en que se presente

Marcar 14 tubos capilares en fracciones de 1/3

FINAL

Llenar tubo capilar 1 con la el antisuero e invertir el tubo

Tomar tomar dilucin correspondiente del antgeno hasta la segunda marca.