PROBLEMAS DE BIOQUIMICA. Curso 08/09.

PROBLEMAS DE CINETICA ENZIMATICA. 1. Una enzima cataliza una reaccin con una velocidad mxima de 5 moles por minuto, siendo su Km para el sustrato de 0,5 mM. Si la ponemos en presencia de una concentracin 500 mM de sustrato, Qu cantidad de sustrato se lograr transformar en 10 min? Sol.: 50 moles 2. La Km de una hexoquinasa para la glucosa es 10-4 M. Si la concentracin de glucosa en el medio de reaccin es 1,8 g/ml, cul ser la relacin [E]/[ES]? (Pm glucosa= 180). Sol.: 10. 3. La Km para el etanol de la alcohol deshidrogenasa de levadura es de 1,3 x 10-2 M. Si la concentracin de alcohol en el medio de reaccin es de 59,8 g/ml, qu proporcin de enzima estar libre y qu proporcin estar combinada con el sustrato? (Pm etanol= 46). Sol.: [ES]= 9,1%; [E]= 90,9% 4. Calcular qu velocidad se obtendr en una reaccin enzimtica si la velocidad mxima es igual a 100 y la concentracin de sustrato es igual: a) 10 Km y b) Km/3. Sol.: a) v= 90,9; b) v= 25 5. Calcular qu concentracin de sustrato, expresada en funcin de la Km, nos dar una velocidad de reaccin enzimtica igual al 60% de la velocidad mxima. Sol.: [S]= 1,5 Km. 6. Calcular la relacin entre la concentracin de sustrato necesaria para una velocidad 90% de la velocidad mxima y la requerida para una velocidad 10% de la velocidad mxima, es decir [S]90/[S]10, para una enzima cuya cintica de saturacin sigue una hiprbola. Sol.: [S]90/[S]10= 81. 7. Una enzima cuya Km= 2,4 x 10-4 M se ensaya con las siguientes concentraciones de sustrato: a) 2 x 10-7 M; b) 6,3 x 10-5 M; c) 10-4 M. La velocidad medida en la reaccin con 5 x 10-2 M de sustrato fue de 0,128 moles/min. Calcular las velocidades iniciales en los otros casos. Sol.: a) 0,107 moles/min; b) 26,61 moles/min; c) 27,6 moles/min. 8. Una enzima cataliza una reaccin a una velocidad de 35 moles/min cuando la concentracin de sustrato es 0,01 M. La Km para el sustrato es 2 x 10-5 M. Cul ser la velocidad inicial a las concentraciones de sustrato: a) 3,5 x 10-3 M; b) 4 x 10-4 M; c) 2 x 10-4 M; d) 2 x 10-6 M y e) 1,2 x 10-6 M?. Sol.: a) 34,8 moles/min; b) 33,3 moles/min; c) 31,8 moles/min; d) 3,18 moles/min; e) 1,98 moles/min.

9. A partir de los siguientes datos obtenidos para una reaccin catalizada enzimticamente, calcular grficamente la Km y la Vmax de dicha enzima Sustrato (mM) 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 Velocidad (moles/min) 1,00 1,67 2,40 2,50 2,78 3,00

Sol.: Km= 2 mM; Vmax= 5 moles/min 10. 25 l de una preparacin enzimtica se llevan a ensayo a un volumen de reaccin estndar de 1 ml y a temperatura y pH ptimos, pero con distintas concentraciones iniciales de sustrato, obtenindose las velocidades iniciales que se indican: Sustrato (mM) Velocidad (nmol/min) -3 303 x10 120,0 149 x10-3 98,0 128 x 10-3 92,6 100 x10-3 83,3 -3 80 x 10 74,6 a) Determnese la Km de la enzima y la velocidad mxima que se puede conseguir con la concentracin de enzima utilizada. b) Qu cantidad de enzima, expresada como U/ml, contiene nuestra preparacin enzimtica?. Sol.: a) Km= 0,083 mM y Vmax= 153,8 nmoles/min; b) 6,152 U/ml. 11. La descarboxilacin enzimtica de un -cetocido procede con las velocidades iniciales para las concentraciones que se citan: [cetocido] (mM) Velocidad (moles CO2/2 min) 2,500 0,588 1,000 0,500 0,714 0,417 0,526 0,370 0,250 0,252 A partir de estos datos calcular Vmx y Km de esta reaccin enzimtica. Sol.: Vmx= 0,35 moles/min; Km= 0,4 mM. 12. Un sustrato fue hidrolizado por una enzima y la velocidad inicial de desaparicin fue medida para distintas concentraciones del mismo. Calcular la Km y la Vmx a partir de los datos que se resumen a continuacin: Sustrato (mM) Velocidad (moles/min) 2,3 0,95 3,0 1,13 4,5 1,42 12,0 2,14 38,0 2,64 Sol.: Km= 5 mM; Vmx= 3 mol/min.

13. A partir de los siguientes valores determinar grficamente Km y Vmx para una reaccin enzimtica: Sustrato (mM) Velocidad (moles P/2 min) 5,000 0,392 2,000 0,330 1,420 0,278 1,052 0,246 0,500 0,170 Sol.: Km= 1 mM; Vmx= 0,48 moles/2 min 14. Qu informacin puede obtenerse a partir de una representacin de LineweaverBurk cuando la recta obtenida, convenientemente extrapolada, corta al eje de abscisas en -40 litros/mol? Sol.: Km= 25 mM 15. Qu informacin puede obtenerse de una representacin de Lineweaver-Burk sabiendo que cuando (1/[S]) x 10-2= 2,5 M-1, 1/v=0. Sol.: Km= 4 mM. 16- Al representar por el mtodo de Lineawer-Burk una cintica enzimtica se obtienen una recta que corta al eje de ordenadas en 1/v= 3 x 105 min/mol. Qu informacin podra obtenerse de este dato? Sol.: Vmax= 3,33 moles/min 17 Calcular la Km y Vmax de una enzima sabiendo que la recta obtenida en una representacin de Lineweaver-Burk corta al eje de ordenadas en 5 x 103 (moles/min)-1, y que la pendiente de dicha recta es 120 min/litro Sol.: Km= 24 mM; Vmax= 2 x 10-4 moles/min. 18. A partir de una representacin de Lineweaver-Burk para una reaccin enzimtica cuya recta corta al eje de ordenadas en 1/v= 25 h/mol y extrapolando al eje de abcisas en 1/[S]= -1,3 x 102 (moles/l)-1, calcular Vmx y la Km. Sol.: Vmx= 4 x 10-2 moles/h; Km= 7,69 mM. 19. Al representar por el mtodo Lineweaver-Burk los datos obtenidos con una determinada enzima se encontr que las rectas cortaban los ejes de coordenadas en los puntos indicados a continuacin: Sin inhibidor Con inhibidor (1mM) -1 Corte 0Y (mol/min) 0,2 0,2 -1 Corte 0X (mM) -2,0 -0,5 Se pide: a) Calcular la Vmax y Km de dicha enzima en ausencia y presencia de inhibidor; b) De que tipo de inhibidor se trata?; c) En ausencia de inhibidor y con una concentracin inicial de sustrato de 0,1 M Qu cantidad de sustrato se habr consumido al cabo de 4 minutos de reaccin? Sol.: Vmax= 5 moles/min; Km= 0,5 mM; Km'= 2 mM; b) Inhibicin competitiva; c) 19,9 moles.

20. Una reaccin enzimtica se lleva a cabo a diferentes concentraciones de sustrato, en ausencia y presencia de dos inhibidores diferentes: (Ia)=(Ib)= 1.5 mM. La siguiente tabla muestra los datos obtenidos: Sustrato (mM) v (moles/min) va (moles/min) vb (moles/min) 0.2 1.67 0.625 0.83 0.4 2.86 1.176 1.43 0.8 4.44 2.110 2.22 1.6 6.15 3.480 3.08 3.2 7.62 5.160 3.81 Se pide: a) Determinar todos los parmetros cinticos de la enzima. b) Qu tipo de inhibidores son Ia e Ib? Sol.: a) Km=Km'b= 1mM; Km'a= 3 mM; Vmax= Vmax'a = 10 moles/min; Vmax'b = 5 moles/min; Kia = 0.75 mM; Kib = 1.5 mM. b) el inhibidor "a" es competitivo, mientras que el "b" es no competitivo. 21. Una reaccin enzimtica se lleva a cabo con distintas concentraciones de sustrato, en ausencia y presencia de un inhibidor. Los datos obtenidos se representan en unos ejes de coordenadas segn el mtodo de Lineweaver y Burk. Las rectas obtenidas cortan a los ejes de coordenadas en los siguientes puntos, en ausencia y presencia de inhibidor, respectivamente, corte en abscisas (mM-1) = -3,7 y -0,2 y corte en ordenadas (moles/min)-1 = 0,01 y 0,01. a) De qu tipo de inhibicin se trata? b) Calcular la Km y Vmax en ausencia y presencia de inhibidor c) Determinar la concentracin de inhibidor sabiendo que Ki = 2,6 10-1 mM Sol.: a) Inhibicin competitiva; b) Km= 0,27 mM; Km'= 5 mM; Vmax= Vmax'= 100 moles/min; c) [I]= 4,55 mM 22. Al representar por el mtodo de Lineweaver y Burk los resultados obtenidos en tres experimentos, al emplear una misma cantidad de enzima y sustrato, en las condiciones que se explican en la tabla adjunta, se encontraron los puntos de corte con los ejes indicados en la tabla: Sin adiciones + 5 mM A + ? mM B -1 Corte OY (moles/min) 0,5 0,5 0,8 Corte OX (mM)-1 - 5,0 -2,5 -5,0 Se pide: a) Calcular Vmax y Km en ausencia y presencia de A. Qu efecto produce este compuesto sobre la actividad enzimtica? b) Idem que en "a" pero en el compuesto "b". c) En ausencia de A o B y con una concentracin inicial de sustrato de 0,2 M, calcular la cantidad de sustrato que se habr consumido al cabo de 5 minutos de reaccin. d) Calcular la Ki del compuesto A. e) Calcular la concentracin de B en el tercer experimento, sabiendo que su Ki = 5 mM Sol.: a) Km = 0,2 mM; KmA = 0,4 mM; Vmax= VmaxA = 2 moles/min; Inhibidor competitivo; b) KmB= 0,2 mM; VmaxB= 1,25 moles/min; Inhibidor no competitivo; c) 10 moles, d) 5 mM; e) 3 mM 23. Al representar por el mtodo de los dobles inversos la cintica de la enzima fosfatasa alcalina (en una resuspensin de 8 g/ml) y en presencia de p-nitrofenil fosfato, se obtiene una recta que corta al eje de ordenadas en 1/300 min/M, y una pendiente de 0,05 min. Calcular: a) Vmax; b) Km; c) Nmero de recambio si el Pm de esta enzima es de 80000 daltons. Por otro lado, al ensayar en presencia de 60 M de glicerol fosfato, y haciendo la misma representacin grfica, el punto de corte con el eje de ordenadas es el mismo, mientras que la pendiente es de 0,1 min, d) De qu tipo de

inhibidor se trata?; e) Calcular Km', Vmax' y Ki; f) Determinar el grado de inhibicin en estas circunstancias si estamos en presencia de 45 M de p-nitrofenil fosfato. Sol.: a) 300 M/min; b) Km= 15 M; c) N de recambio= 3000 min-1; d) Inhibidor competitivo; e) Km= 30 M, Vmax= 300 M y Ki= 60 M; f) 20%. 24. Al estudiar la cintica de inhibicin de cierto enzima se han obtenido los resultados de la tabla siguiente: __________________________________________________________ Sustrato (mM) v (mol/min) ______________________________________________ [I]= 0 [I]= 0,1 mM [I]= 1 mM __________________________________________________________ 0,02 2,90 2,52 1,18 0.05 5,00 4,02 1,43 0.10 6,67 5,02 1,54 0.20 8,13 5,72 1,60 0.50 9,09 6,25 1,64 __________________________________________________________ Determinar grficamente: a) el tipo de inhibicin; b) el valor de Km del enzima; c) la velocidad mxima y d) el valor de Ki Sol.: a) Inhibicin acompetitiva; b) Km= 0,05 mM; c) Vmax= 10 moles/ min; d) Ki= 0,2 mM 25. La glutamina sintetasa (GS) cataliza la siguiente reaccin: L-Glu + NH3 + ATP L-Gln + ADP + Pi Cuando las concentraciones de NH3 y de ATP son saturantes, el enzima manifiesta una cintica michaeliana respecto al cido. glutmico. Sin embargo, cuando a un preparado enzimtico se le aade L-serina de modo que su concentracin resulte ser 16 mM, se observa que tanto Km com Vmax disminuyen hasta alcanzar 1/3 del valor primitivo. Indicar: a) qu tipo de inhibicin ejerce la serina? y b) cul ser el valor de su Ki?. Sol.: a) Inhibicin acompetitiva, b) Ki = 8 mM 26. La deshidrogenasa de Spirulina mxima es capaz de oxidar el metilviolgeno reducido liberando hidrgeno, segn la ecuacin: Hidrogenasa Metilviolgeno --------------------------> colorante oxidado + H2 En presencia del in cianuro (CN-) a concentracin 2,5 10-4 M, se observa que el enzima mantiene invariable su Km pero su velocidad mxima disminuye en un 20%. Averiguar: a) qu tipo de inhibicin ejerce el cianuro? y b) cul ser el valor de su Ki?. Sol.: a) Inhibicin no competitiva y b) Ki= 10-3 M 27. En una cuba de fermentacin con 25 l de capacidad que contiene un sustrato a una concentracin inicial de 0,08 mM, se obtienen una velocidad Vmx de reaccin de 0,4 mmoles/min. La enzima responsable del proceso funciona a mitad de dicha velocidad cuando [S]= 20 M. Por error, un operario aade 1,5 mmoles de un compuesto txico a

dicha cuba al comienzo de la fermentacin, observndose un descenso del nmero de recambio de la enzima. Suponiendo que el compuesto slo pudiese ser un inhibidor competitivo o no competitivo y que su Ki fuese igual a 100 M. Calcular: a) Km expresada en M. b) Vmax (en mmoles/min) de la enzima inhibida c) Grado de inhibicin que provoca la presencia del inhibidor. Sol.: a) 20 M; b) 0,25 mmoles/min; c) 37,5% 28. Se ensaya una enzima con su sustrato especfico en presencia de un inhibidor competitivo. Si la velocidad mxima de la reaccin no inhibida es de 55 moles/min, calcular la velocidad inicial de la reaccin inhibida y el grado de inhibicin, sabiendo que: [S]= Km= 2 x 10-4 M y que [I]= Ki= 2,5 x 10-3 M Sol.: v'= 18,33 moles/min y grado de inhibicin= 33,35% 29. Una enzima tiene, en ausencia de inhibidores, una Km para su sustrato de 6,7 x 10-4 M y su Vmx es de 300 moles/min. Calcular la Ki para un inhibidor competitivo sabiendo que con una [S]= 2 x 10-5 M y una [I]= 10-5 M, se obtiene una velocidad inicial (v') de 1,5 mol/min. Sol.: Ki= 2 x 10-6 M. 30. a) Calcular el grado de inhibicin de la reaccin enzimtica en las condiciones anteriormente citadas; b) Si [S] incrementa 20 veces mientras [I] permanece constante y c) [S] incrementa 100 veces mientras [I] permanece constante. Sol.: a) 82,76%; b) 75,57%; c) 55,35%. 31. Calcular la concentracin de un inhibidor competitivo (Ki= 10-7 M) necesaria para inhibir en un 20% la velocidad de una reaccin enzimtica (Km= 1,6 x 10-4 M) cuando la concentracin de sustrato es 0,4 mM. Sol.: 0,875 x 10-7 M. 32. Qu concentracin de inhibidor competitivo se requiere para conseguir una inhibicin del 10% de una reaccin enzimtica, si la concentracin de sustrato es 1,5 mM, la Km para el sustrato es 0,29 mM y la Ki para el inhibidor 2 x 10-5 M?. Sol.: [I]= 1,36 x 10-5 M. 33. Una enzima se ensaya en presencia de una concentracin de sustrato 2,5 x 10-4 M. La Vmax de la reaccin es 25 moles/l/min y su Km es 4 x 10-5 M a) Qu velocidad se observar en presencia de 4,5 x 10-4 M de un inhibidor no competitivo?. b) Cul ser el grado de inhibicin? Ki = 3 10-4 M Sol.: a) 8,62 moles/l/min; b) 60% 34. Una cierta enzima cataliza la transformacin de 0,4 mmoles de sustrato en 5 minutos cuando la concentracin de ste es saturante. Si se ensaya la enzima con una concentracin de sustrato de 60 M la velocidad de la reaccin es de 40 moles/min y, si adems se aade un inhibidor competitivo a concentracin 30 M, el grado de inhibicin resulta ser del 75%. Calcular la Km de la enzima y la Ki del inhibidor. Sol.: Km= 60 M y Ki= 5 M

35. Calcular la concentracin de un inhibidor competitivo, cuya Ki= 10-7 M, necesaria para inhibir en un 80% la velocidad de una reaccin enzimtica, sabiendo que la Km de la enzima es 1,6 10-4 M y que la concentracin de sustrato es de 40 M Sol.: 5 x 10-7 M