ndice

Introduccin I. Indol 1. Gneros bacterianos que identifica 2. Fundamento bioqumico 3. Caractersticas generales 4. Interpretacin 5. Controles de calidad

II.

Rojo de Metilo 1. Gneros bacterianos que identifica 2. Fundamento bioqumico 3. Caractersticas generales 4. Interpretacin 5. Controles de calidad

III.

Voges -Proskauer 1. Gneros bacterianos que identifica 2. Fundamento bioqumico 3. Caractersticas generales 4. Interpretacin 5. Controles de calidad

IV.

Citrato 1. Gneros bacterianos que identifica 2. Fundamento bioqumico 3. Caractersticas generales 4. Interpretacin 5. Controles de calidad

V.

Conclusin

VI.

Bibliografa

Pruebas bioqumicas Consisten en distintos test qumicos aplicados a medios biolgicos, los cuales, conocida su reaccin, nos permiten identificar distintos microorganismos presentes. Sirven de gran apoyo a la hora de diagnosticar infecciones por bacterias. IMVIC El IMVIC se compone de cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato. PRUEBA I.
La prueba del Indol

PRINCIPIO
Estudia la capacidad de degradar el triptfano con produccin de Indol y metabolitos indlicos

II.

Rojo de Metilo

Estudia la fermentacin cido mixta con produccin de cidos estables en el tiempo.

III.

Voges Proskauer

Estudia la fermentacin butanodilica con formacin de un metabolito intermediario neutro.

IV.

Citrato

Estudia la capacidad de utilizar el citrato como nica fuente de carbono.

I. PRINCIPIO

PRUEBA DE INDOL

Para determinar la capacidad de un microorganismo para separar el indol a partir del triptfano. OBJETIVO Ayuda a diferenciacin entre gneros

1. Separacin de Escherichia coli (+) de los miembros de los gneros Klebsiella (variables, por lo comn negativos; V-), Enterobacter (V-), Hafnia (-), Serratia (V-) y una especie de Pantoea, P. agglomerans (-). Ayuda en la diferenciacin de especies junto con otras pruebas bioqumicas.

1. Paenibacillus alvei (+) de otras especies de Bacillus (por lo general -). 2. Escherichia coli (+), E. hermanii (+) y E. fergusonii (+) de E. vulneris (-) y E. blattae (-). 3. Citrobacter freundii (-) de C. koseri (+) y de C. amalonaticus y del biogrupo 1. 4. Klebsiella oxytoca (+) y K. ornithinolytica (+) de otras especies de Klebsiella (V-)

5. Proteous vulgaris (+), P. inconstans (+) de otras especies de Proteus (-) 6. Pasteurella dagmatis (+), P. dagmatis sbesp. Septica (V+) Pasteurella multocida (+), P. multocida subesp. gallicida (+) y P. multocida subesp. multocida (+), P. pneumotropica (+) de P. haemolytica (-) y de Actinobacillus ureae (-) 7. Paenibacillus alvei (+) de las especies aisladas con mayor frecuencia P. macerans (-) y P. polymgxa (-). 8. Peptostreptococcus asaccharolyticus (+) y P. indolicus (+) de otras especies de Peptostreptococcus (-) que pueden causar infecciones humanas. 9. Propionibacterium acnes (+) de las especies de Propionibacterium (-) aisladas con mayor frecuencia. 10. Prueba de indol en mancha 11. Junto con otras pruebas (ureasa y ornitina) subdivide Haemophilus influenzae a Haemophilus parainfluenzae en biotipos. 12. Junto con la sialidasa, alfa- y beta-glucosidasas y alfa-fructosidasa, diferencia entre los aerobios con pigmento negro. FUNDAMENTO El triptfano es un aminocido que puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres metabolitos indlicos principales: escatol (metil indol) y cido indolactico (IAA, indolacetato). Las diversas enzimas intracelulares involucradas se denominan colectivamente triptofanasa. La triptofanasa cataliza la reaccin de desaminacin atacando la molcula de triptfano slo en su cadena lateral y dejando el anillo aromtico intacto como indo. La desaminacin y la hidrlisis tienen lugar con el agregado de una molcula de agua en presencia de la triptofanasa y de la conenzima fosfato de piridoxal.

II. PRINCIPIO.

PRUEBA DE ROJO DE METILO

Probar la capacidad de un microorganismo para producir y mantener estables los productos finales cidos a partir de la fermentacin de la glucosa y para vencer la capacidad buffer del sistema. sta prueba cuantitativa para la produccin de cido (determinacin de pH); algunos microorganismos producen ms cidos que otros. Los resultados de rojo de metilo son caractersticas valiosas para la identificacin de especies de bacterias que producen cidos fuertes a partir de glucosa. OBJETIVO. Ayudan a la diferenciacin entre gneros o la diferenciacin de especies dentro de un gnero de la familia Enterobacteriaceae. 1. Escherichia coli (MR+) Enterobacter cloacae (MR-). de Enterobacter aerogenes (MR-) y

2. Especies de Yersinia (V, variable, por lo comn +) de otros bacilos gramnegativos no entricos (MR-). 3. Diferenciar Edwardsiella ictaluri (MR-) de E. hoshinae (MR+) y E. tarda del biogrupo 1 (MR+) 4. Diferenciar Leminorella richardii (MR-) de L. grimontii (MR+). 5. Diferenciar Klebsiella oxytoca y K. pneumoniae subesp. Pneumoniae (ambas V, por lo comn MR-) y K. terrigena (V) de otras especies o subespecies de Klebsiella. (MR+) Budvicia aquatica (MR+) de otros miembros de familia Enterobacteriaceae con resultados KIA/TSI cido/cido, HS2. Otros microorganismos que son rojo de metilo positivos. Aerococcus urinae Todas las especies Shigella Ewingella americana Especies Kluyvera Lecrercia adecarboxylata

Especies Citrobacter, Buttiauxella agrestis Las pruebas de rojo de metilo y Voges-Proskauer identifican: o Aeromonas veronni o Especies de Listeria o Vibrio metschnikovii

o Aeromonas hydrophila o Aeromonas subesp.masoucida FUNDAMENTO. salmonicida

La prueba de rojo de metilo (MR) es una prueba cuantitativa basada en el uso de un indicado de pH, el rojo de metilo, para determinar la concentracin del ion Hidrgeno, cuando un microorganismo fermenta glucosa. La concentracin del ion Hidrgeno depende de la relacin de gases (CO2 y H2), lo que a su vez es un ndice de las diferentes vas metablicas de la glucosa exhibidas por los diversos microorganismos. Los diferentes patrones de fermentacin se deben a las variaciones en las enzimas relacionadas con el metabolismo del cido piruvico en el organismo. Reaccin global del metabolismo de: E.coli 2 cido lctico + cido actico + etanol + 2 CO2 + 2

2Glucosa + H2O H2 (cido frmico

H2 + CO2)

Klebsiella-Enterobacter 2,3-butanodiol + H2O + 2 CO2 2,3-butanodiol)

Glucosa + O

(Acetona

La validez de la prueba de RM depende de un tiempo de incubacin suficiente como para permitir que se produzca la diferencia en el metabolismo de la glucosa. Los organismos en estudio se incubarn por lo menos 2 das a 35-

37C, lo que permite que todos los organismos con baja proporcin gaseosa(MR+) muestren su limite en la concentracin de iones H limitante, mientras que todos los que tienen relaciones altas de gas (MR-) mostraran una concentracin del ion H ms baja. MEDIO DE CULTIVO UTILIZADO. Frmula Polipeptona o peptona de carne tamponada O digerido pancretico de casena Y digerido pptico de tejidos animales Glucosa (dextrosa) Buffer fosfato dipotsico (K2HPO4) Agua desionizada MTODO DE PREPARACIN. 1) Pesar la cantidad exacta como indica el rtulo. Los productos de las diferentes compaas pueden presentar leves variaciones. 2) Rehidratar con agua destilada o desmineralizada. 3) Calentar con suavidad la solucin. 4) Fraccionar alrededor de 5ml por tubo(26x125mm) Mtodo de esterilizacin: autoclave, 121C, 15lb, 15min. Enfriar antes de usar y refrigerar para la conservacin (4-10C); vencimiento, a las 6-8 semanas. Inoculacin. Incubacin. MICROORGANISMOS UTILIZADOS PARA EL CONTROL DE CALIDAD ATCC 25922 ATCC 13048 Medio de Clark y Lubs

A. MR-positivo (+)/VP negativo(-): Escherichia coli B. MR-negativo (-)/VP positivo(+): Enterobacter aerogenes III. PRUEBA DE VOGES- PROSKAUER

La prueba de Voges-Proskauer (VP) se basa en la deteccin de acetona, un producto final neutro derivado del metabolismo de la glucosa. La glucosa es metabolizada a cido pirvico, las bacterias pueden seguir muchos caminos metablicos; la produccin de acetona es una de las vas metablicas de la degradacin de la glucosa en las bacterias. La prueba de Voges-Proskauer para la acetona se utiliza sobre todo para separa Escherichia coli de los grupos KlebsiellaEnterobacter,aunque otros miembros de la familia Enterobacteriaceae pueden producir un resultado positivo de VP. En esta prueba se determina la va de fermentacin del butanodiol descrita anteriormente en la prueba rojo de metilo. El acetil-metil-carbinol o acetona es un producto intermediario en la produccin de butanodiol esta se forma por la

descarboxilacin de dos molculas de cido purvico, tanto la acetona como el 2,3-butanodiol son productos neutros en la fermentacin de la glucosa. En medio alcalino y en presencia de oxgeno la acetona es oxidada a diacetilo este se revela en presencia de -naftol dando un color rojo-fucsia. Reactivos empleados: Reactivos VP de Barrit

Aadir 0.6 ml de alfa naftol al 5% en alcohol etlico absoluto y 0.2 ml de hidrxido de potasio al 40% a 2.5 ml de cultivo. Agitar vigorosamente el tubo, y dejar a temperatura ambiente durante 10-15 minutos. Observar el color de la superficie del medio. Reactivos VP de Coblentz

Aadir 0.2ml de alfa naftolal 5% en etanol al 95%, creatina al 0.3% en KOH al 40%. VP positivo (+) color rosado-rojo en la superficie del medio (acetona presente) Enterobacter cloacae ATCC 13047

VP negativo (-) color amarillo en la superficie del medio, puede formarse un color cobrizo pero es un resultado negativo. Escherichia coli ATCC 11775

CONCLUSIN

Las pruebas IMViC son suma importancia dentro de la bsqueda de un agente patgeno causal, es decir y comparten una caracterstica importante, stas identifican enterobacterias en su mayora. De acuerdo a sus vas metablicas, las cuales pueden ser aerobias o anaerobias. Cada una denota su fundamento. La prueba de Indol Degradacin de Triptfano con produccin de Indol. Rojo de Metilo. Acidificacin del medio. Voges Proskauer Fermentacin butanodilica con formacin de un metabolito intermediario neutro. Citrato Como nica fuente de carbono BIBLIOGRAFA