Esteroides cardiotnicos

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

ESTEROIDES CARDIOTONICOS
Profesor Alejandro Martnez Martnez Facultad de Qumica Farmacutica E-mail: amart@muiscas.udea.edu.co

Medelln, Abril de 2002

Alejandro Martnez M., 2002

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GLICOSIDOS CARDIOTONICOS

Los glicsidos cardiotnicos son sustancias constituidas de una porcin esteroide, una porcin glicosdica y un anillo de -lactona a,-insaturada o d-lactona-a,insaturada, que actan sobre el msculo cardiaco y por tanto se utilizan como medicamentos contra la insuficiencia cardiaca. Se conocen entonces segn el anillo lactnico dos grandes clases de cardiotnicos: Los CARDENOLIDOS, con anillo de -lactona, y los BUFANOLIDOS O ESCILANOLIDOS, con anillo de dlactona. La figura 24 muestra la estructura estereoqumica general de ambas clases de sustancias. O O

RO Figura 24. Estructura general de cardiotnicos (R=H, aglicona ; R=Gli, Glicsido) BIOSINTESIS La figura 25 esquematiza el proceso de biosntesis de los cardenlidos y bufanlidos. Se tienen evidencias experimentales de que la progesterona es un intermedio en el proceso 1. La progesterona formada se condensa con una unidad C2 para dar origen a una cadena lateral de 4 carbonos tpica de los cardenlidos. La posterior oxidacin y deshidratacin origina el anillo - lactona-a,-insaturado. Posteriormente ocurre la glicosilacin.

1 Lindemann, P., Luckner, M., PHYTOCHEMISTRY 46 (3) 507 (1997).

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Figura 25. Biognesis de cardenlidos

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DISTRIBUCION NATURAL Los cardiotnicos se encuentran principalmente en las hojas de plantas de las familias Scrofulariaceae, Apocynaceae, Liliaceae, Ranunculaceae y Moraceae. Los bufanlidos se han encontrado tambin en ranas del gnero Bufus, y en las alas de mariposas monarca, han sido considerados de inters por su potencial anticancergeno2. ENSAYOS DE RECONOCIMIENTO Los cardenlidos se pueden reconocer en muestras biolgicas mediante los ensayos de coloracin con varios reactivos nitro, tal como se anot para las sesquiterpenlactonas; especficamente con los reactivos de Kedde, Legal y Raymond. Al igual que las saponinas esteroides, dan resultados positivos con el reactivo de Liebermann-Burchard, lo que permite diferenciarlos de las terpenlactonas y las cumarinas. Por otro lado, los carbohidratos ligados incluyen generalmente a la D-glucosa, LRhamnosa y desoxiazcares. Estos ltimos pueden reconocerse mediante el ensayo de Keller-Kiliani. HIDROLISIS Los glicsidos cardiotnicos se hidrolizan fcilmente en soluciones cidas liberando la sapogenina y los carbohidratos ligados. En medio alcalino, adems de liberarse la sapogenina ocurre epimerizacin sobre el carbono 17 y apertura del anillo lactnico, tal como lo explica el mecanismo mostrado en la figura 26. HECHOS ESTRUCTURALES Los cardiotnicos naturales en su gran mayora, poseen: -un anillo lactnico a,-insaturado en posicin 17 -un grupo hidroxilo o glicosilo en posicin 3 -un grupo hidroxilo en posicin 14 -configuracin cis entre los anillos A/B y C/D -otros grupos hidroxilo en 1, 5, 12, 16, etc. -el grupo metilo 19 algunas veces oxidado hasta alcohol o aldehdo -1 a 4 unidades de carbohidrato ligadas al oxgeno del carbono 3 -los carbohidratos ligados son principalmente glucosa y desoxiazcares como digitoxosa, cimarosa, etc. Los desoxiazcares son una caracterstica importante de los glicsidos cardiotnicos, ya que esta clase de carbohidratos se encuentra prcticamente restringida a estas sustancias naturales. La Figura 27 muestra algunos ejemplos de cardiotnicos naturales y desoxiazcares ms comunes.

2Pettit, G. R.; J. NAT. PROD. 59 (8) 812-821 (1996).

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Figura 27. Algunos ejemplos de cardiotnicos y desoxiazcares naturales EXTRACCION Y AISLAMIENTO Al igual que las saponinas esteroides y otros glicsidos terpenoides, los cardiotnicos pueden aislarse en forma glicosdica o como sapogeninas. En el primer caso se utiliza el mtodo ya descrito para las saponinas esteroides (desengrase, extracto polar, resina de intercambio inico, Sephadex y cromatografa), mientras que en el segundo caso se realiza una hidrlisis cida seguida de particin con un solvente orgnico (generalmente cloroformo) y cromatografa en sus diferentes formas, especialmente con slica gel. Para el fraccionamiento por cromatografa en columna con slica gel pueden utilizarse mezclas de solventes como Diclorometano/Metanol/Agua 91:22:683. Luego de este fraccionamiento e hidrlisis cida, las geninas pueden analizarse y separarse por HPLC-fase reversa4,5,6,7; mientras que los carbohidratos ligados pueden analizarse por cromatografa en papel eluyendo con la mezcla Butanol/Acido Actico/Agua 4:1:58. Recientemente y gracias al avance de las denominadas tcnicas "on-line" y el desarrollo de interfaces HPLC-Espectrometra de masas se pueden analizar extractos crudos que contienen glicsidos cardiotnicos o saponinas, mediante tcnicas combinadas como LC-TMS (HPLC combinada con Espectrometra de masas con interfase termospray) y LC-CF/FAB (HPLC combinada con Espectrometra de masas FAB de flujo continuo) 9. CARACTERISTICAS ESPECTRALES a. Espectroscopia Infrarrojo10 Los cardiotnicos adems de las bandas caractersticas de la funcionalidad esteroide, presentan bandas de absorcin caractersticas del grupo carbonilo lactnico a,-insaturado alrededor de 1715-1745 cm-1. b. Espectroscopia Ultravioleta El cromforo g-lactona a,-insaturada muestra un mximo de absorcin alrededor de 215-220 nm11.
3. J. CHROMATOG. 367, 45 (1986). 4. CHEM. PHARM. BULL. 24, 2995 (1976). 5. J. CHROMATOG. 365, 123 (1986). 6Abe, F.; Yamauchi, T.; Minato, K.; PHYTOCHEMISTRY 42(1) 45-49 (1996). 7Tor, E. R. y col., J. AGRIC. FOOD. CHEM. 44, 2716 (1996). 8. CHEM. PHARM. BULL. 24, 2886 (1976). 9Wolfender, J-L., y col.; J. CHROMATOG. A 712, 155-168 (1995). 10 Begum, S., y col., PHYTOCHEMISTRY 50, 435-438 (1999).

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c. Espectrometra de masas Los espectros de masas de impacto electrnico (70 eV) de las agliconas de cardenlidos presentan el fragmento caracterstico m/z 111, el cual se origina por el mecanismo ilustrado en la Figura 28. Adems se observa la prdida de CO2 (M-44)12. Para los glicsidos se utiliza actualmente la Espectrometra de masas FAB en modo positivo o negativo. La Figura 29 ilustra la utilidad del espectro FAB de iones negativos para el 9-hidroxiescilifaesido aislado de Urginea maritima13.

11 Begum, S., y col., PHYTOCHEMISTRY 50, 435-438 (1999). 12Budzikiewicz et al., "Mass Spectrometry of Natural Products", Vol. II: Steroids; Holden-Day, San Francisco, 1964. 13Krenn, L. et al.; J. NAT. PROD. 59, 612 (1996).

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O O H

O O b

a R

O O

CH2 m/z 111

[M-CO2]+

Figura 28. Mecanismo de formacin de los fragmentos m/z 111 y M-44, caractersticos de cardenlidos

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O O m/z 415 OH

OH (L)Ramnosil O

OH

m/z 561 (M-H)Figura 29. Esquema de fragmentos FAB del 9-hidroxiescilifaesido

d. Espectrometra RMN14 Los cardenlidos se reconocen por RMN-1H por las seales del protn 3a (4.4 ppm, m), del metilo 18 (0.9, s), del metilo 19 (1.1, s), el protn 17 (2.8-3.5 ppm), el protn del hidroxilo 14 (5.0-6.0 ppm, s), los protones 21a y 21b (4.8-5.8 ppm, dd, J=18 y 2 Hz) y el protn olefnico 22 (6.0-6.4 ppm, s ancho)15. En el espectro de RMN-13C se observan las seales caractersticas en d 74 (C-3), 64 (C-14 hidroxilado), 36 (C-21), 96 (C-22), 119 (C-20) y 214 (C-23)16. Los bufanlidos se reconocen por RMN-1H por las seales del protn 3a (4.0-5.5 ppm, quintete ancho), del metilo 18 (0.9, s), del metilo 19 (1.1, s), el protn 21 (7.3, d, J=2-3.5 Hz), el protn 22 (8.0, dd, J=10 y 2-3.5 Hz) y el protn 23 (6.3 ppm, d, J=10 Hz). En el espectro de RMN-13C se observan las seales caractersticas en d 76 (C-3), 16-20 (C-18 y C-19), 119-125 (C-20), 150 (C-21 y C22), 112-116 (C-23) y 165 (C-24)17,18.

14 Begum, S., y col., PHYTOCHEMISTRY 50, 435-438 (1999). 15Abdel-Azim, N. S.; et al. ; PHYTOCHEMISTRY 42(2) 523 (1996). 16PHYTOCHEMISTRY 28, 1203 (1989). 17Kopp, B. et al.; PHYTOCHEMISTRY 42(2) 513 (1996). 18Krenn, L. et al.; J. NAT. PROD. 59, 612 (1996).

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Los desoxiazcares presentes en los glicsidos cardiotnicos presentan espectros RMN caractersticos19. VALORACION EN PRODUCTOS FARMACEUTICOS La mejor tcnica para valorar los glicsidos cardiotnicos en extractos vegetales y productos farmacuticos es HPLC20,21,22. Otros mtodos de valoracin de los cardiotnicos son la colorimetra con el Reactivo de Kedde y mtodos biolgicos en los que se determina la Dosis Letal Mnima (DL-50), el volumen de vmito en palomas, el paro cardaco en gatos y con el corazn aislado de ranas, y los mtodos enzimticos 23. ACCION FARMACOLOGICA Y RELACION ESTRUCTURA-ACTIVIDAD Los cardiotnicos tienen accin inotrpica positiva, es decir, incrementan las fuerzas de contraccin del msculo cardaco. Por otro lado, las hojas de digital tienen un efecto diurtico. Por estas razones se les utiliza en tratamientos de nefritis, edemas y algunas enfermedades infecciosas. Se ha establecido que para que los cardiotnicos manifiesten su actividad requieren adems del ciclo lactnico a,-insaturado, que: -la configuracin sea 14,3,17 -configuracin A/B cis Adems, se ha observado que la presencia de azcares ligados y el nmero de hidroxilos tienen capacidad en aumentar la actividad farmacolgica. Se ha reportado que los glicsidos cardiotnicos con azcares ligados a travs de uniones 14 son ms activos que los que los ligan a travs de uniones 16 y 1224. Los hidroindenos son productos de sntesis que sirven de plantilla para producir agentes inotrpicos25.

19Pauli, G.; J. NAT. PROD. 58(4) 483-494 (1995). 20PLANTA MED. 45, 207 (1982). 21J. CHROMATOG. 448, 157 (1988). 22Abdel-Azim, N. S.; et al. ; PHYTOCHEMISTRY 42(2) 523 (1996). 23PLANTA MED. 45, 207 (1982). 24 Takechi, M. y col., PLANTA MED. 64 (2) 179 (1998). 25 Sevillano, L. G., y col., METHODS FIND. EXP. CLIN. PHARMACOL. 1999 (Suppl. A): 135.

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PRINCIPALES DROGAS VEGETALES QUE CONTIENEN CARDIOTONICOS Hojas de digital La droga la constituyen las hojas desecadas de Digitalis purpurea (Fam. escrofularicea). Esta planta es cultivada en Europa, pero en nuestro pas es ms bien escasa y se utiliza con fines ornamentales. Se la conoce con el nombre vulgar de "campanitas" o "dedalera" y crece silvestre en localidades como a orillas de la autopista Medelln-Bogot en el sector de Sasaima. Los principios activos son una mezcla de glicsidos cardiotnicos denominados purpureaglicsidos, en los cuales la sapogenina es la digitoxigenina. Uno de estos es el purpureaglicsido A:
O

OH

CH OH
2

OH CH CH
3

O
OH OH

O O
OH

OH

O
OH

O O

OH

Purpureaglicsido A

La especie relacionada Digitalis lanata, tambin contiene glicsidos cardiotnicos pero con la caracterstica particular de que uno de los carbohidratos ligados posee un grupo hidroxilo acetilado. Esta especie contiene los denominados lanatsidos como por ejemplo:
O

OH CH2OH

O
OH OH

OH CH3

O O
OH O

CH3

O
OH

O O

OH

OAc

Lanatsido A

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La especie D. lanata, aunque es originaria de Europa, tambin se encuentra en nuestro pas, especficamente en la sabana de Bogot. Estas drogas vegetales se comercian en Europa bajo nombres comerciales como Digitalina, Cardinatina, Cristalloxina, Digoxina, etc. Para el anlisis HPLC de esta droga puede consultarse el trabajo de Ikeda y col.26, y este autor tambin ha reportado el anlisis cuantitativo mediante Cromatografa en Capa Fina de Fase Reversa 27. El gnero Isoplexis fam. Escrofulariceas contiene cardenlidos similares a los de Digitalis28. Estrofanto Esta droga la constituyen las semillas desecadas de varias especies de plantas del gnero Strophantus, y es usada como veneno de flechas por los nativos de algunas tribus de Africa. Esta droga contiene el glicsido estrofantina:

HO HO HO OH R am n os il(O ) OH

Estrofantina G

Azuceno de la habana Corresponde al Nerium oleander (Fam. Apocinceas). Esta planta es cultivada para fines ornamentales, y es comn verla en diferentes sitios de la ciudad de Medelln, con flores rosadas o blancas. La variedad de flores blancas tiene reportados usos como antdoto, antibacterial, antiepilptico, anticancergeno, cardiotnico y como depresor del Sistema Nervioso Central (SNC). De las races,

26Ikeda, Y. y col.; J. NAT. PROD. 58 (6) 897-901 (1995). 27Ikeda, Y. y col.; J. CHROMATOG. 746A 255-260 (1996). 28Schaller, F., Kreiss, W., PLANTA MED. 62 (5) 450 (1996).

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Huq y col., aislaron un cardenlido que adems de cardiotnico es antibacterial29. Las hojas contienen varios cardenlidos con accin depresora sobre el SNC 30.

OCOCH3

OH Oleandrosil(O)

Oleandrina Thevetia peruviana Las semillas de esta planta contienen cardiotnicos como el peruvsido:

O H OH Tevetosil(O)

Peruvsido Lirio de los valles La droga la constituyen las partes areas de Convallaria majalis (Fam. liliceas). Esta contiene varios cardiotnicos, entre ellos la convalatoxina:

29 Huq, M. M., y col., FITOTERAPIA 70, 5-9 (1999). 30 Begum, S., y col., PHYTOCHEMISTRY 50, 435-438 (1999).

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O H OH Ramnosil(Glucosil)O OH Convalatoxina

Bulbo de escila La droga la constituyen los bulbos de Drimia maritima (Fam. liliceas). Contiene bufanlidos como el escilareno-A el cual produce irritacin gstrica la que a su vez induce la secrecin de los bronquiolos, por lo cual se usa como expectorante. O O

OH Glucosil(Glucosil)Ramnosil(O)

Escilareno-A

Helboro negro Corresponde al Helleborus niger (Fam. Ranunculceas).

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O O

O H OH (Glucosil)Ramnosil(O) OH Heleborina Otras referencias recientes: Glicsidos cardiotnicos31 Especies relacionadas existentes en Colombia32 La Digitalis purprea se introdujo antes de 1850 a Bogot y se fu extendiendo a los climas fros de la cordillera oriental. El "lirio de los valles" Convalaria majalis se cultiva como ornamental y se conoce con el nombre de "campana de mayo". El "catap" "cobalonga" es ornamental en poblaciones de clima caliente y corresponde a la Thevetia neriifolia. El "azuceno de la habana" Nerium oleander se encuentra en varios pisos climticos p. ej. en Cartagena y en Medelln, y es utilizado para fines ornamentales. El "rajalgar" corresponde a Asclepias curasavica, cuya savia es utilizada en preparados para aflojar los dientes. La "fruta de culebra" es una apocincea: Rauwolfia tetraphylla, de la cual se obtiene tambin un alcaloide hipotensor.

31 Carter, C. A. y col., TETRAHEDRON 53 (50) 16959 (1997). 32Patio G. Daniel J.; "Utilizacin Teraputica de Nuestras Plantas Medicinales"; 1a. edicin, Ediciones Tercer Mundo, Bogot, 1984, pp. 141-151.

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