BioSMART ISSN: 1411-321X

Volume 5, Nomor 2 Oktober 2003

Halaman: 124-130

Efek Pemberian Natrium Siklamat secara Oral terhadap Karakteristik

Hematologis Tikus Putih (Rattus norvegicus L.)

The effects of giving natrium cyclamate orally on rat’s (Rattus norvegicus L.) hematological
characteristics

RIANDINI AISYAH, SHANTI LISTYAWATI, TETRI WIDIYANI

Jurusan Biologi FMIPA Universitas Sebelas Maret Surakarta 57126

Diterima: 17 Mei 2003. Disetujui: 31 Agustus 2003.

ABSTRACT

The aims of this research were to study the effects of giving natrium cyclamate orally on rat’s (Rattus norvegicus L.) hematocryte value,
Hb, erythrocyte and leukocyte number, Mean Corpuscular Volume (MCV), Mean Corpuscular Hemoglobin (MCH), Mean Corpuscular
Hemoglobin Concentration (MCHC), and the erythrocyte and leukocyte morphology. For these purposes, natrium cyclamate was treated
orally to rats (Rattus norvegicus L.) within 30 days. The framework of this research is that natrium cyclamate, which is given orally to
rats, will enter the digestorial tract, goes into the circulatorial system and influences hematological characteristics. In this research,
Complete Random Design with 5 experimental categories i.e.: 2 ml akuades/200 g body weight as the control, 4,5 mg natrium
cyclamate/200 g body weight; 9,5 mg natrium cyclamate/200 g body weight; 14,5 mg natrium cyclamate/200 g body weight and 19,5
mg natrium cyclamate/200 g body weight was used in this experiment. The observations included in the hematocryte value, Hb,
erythrocyte and leukocyte number, MCV, MCH and MCHC. The data resulted were analyzed by Analysis of Variance and DMRT.
Morphology of erythrocyte and leukocyte was analyzed qualitatively. The result showed that the treatment of natrium cyclamate in 19,5
mg/200 body weight’s dosage decreased hematocryte value; 4,5 mg natrium cyclamate/200 body weight, 9,5 mg natrium cyclamate/200
body weight and 14,5 mg natrium cyclamate/200 body weight’s dosages decreased Hb; 9,5 mg natrium cyclamate/200 g body weight
14,5 mg natrium cyclamate/200 body weight and 19,5 mg natrium cyclamate/200 body weight's dosages reduced erythrocyte number
and increased leukocyte number. It can be concluded that the treatment of various dosages of natrium cyclamate could change the
erythrocyte and leukocyte morphology.

Key words: natrium cyclamate, rat (Rattus noregicus L.), hematological characteristics.

PENDAHULUAN Penggunaan siklamat yang dianggap aman untuk

Pemanis buatan adalah bahan tambahan makanan (BTM)
yang berasa manis, tidak atau hampir tidak mempunyai
nilai gizi, dan tidak mengandung kalori. Penggunaan
pemanis buatan cenderung tinggi karena lemahnya
pengawasan serta adanya masyarakat yang belum atau
tidak tahu bahayanya, sehingga produsen mengambil
keuntungan dari kondisi ini. Pemanis buatan yang banyak
digunakan di Indonesia adalah siklamat dan sakarin.
Siklamat berupa kristal atau bubuk kristal yang berwarna
putih, tidak berbau, mudah larut dalam air dan pada bentuk
larutan memiliki tingkat kemanisan sebanyak 30 kali rasa
manis sukrosa (Murdiati dkk., 1988). Siklamat yang
biasanya dipakai adalah natrium siklamat (Sally, 1998;
Murdiati dkk., 1988), namun senyawa ini dapat
menimbulkan kanker atau mutasi genetik pada manusia,
karena adanya sikloheksilamin (Lindsay, 1985). Siklamat
juga memicu terbentuknya radikal bebas peroksida, suatu
katalisator kuat reaksi oksidasi lebih lanjut (Tranggono,
1988). Di Indonesia penggunaan siklamat masih diijinkan,
namun telah dibatasi dalam SK Menteri Kesehatan RI No.
235 tahun 1979 dan SK Menteri Kesehatan RI No. 208
tahun 1985 (Murdiati dkk., 1988; Sally, 1996).
manusia (acceptable daily intake; ADI) menurut ketentuan
FAO/WHO adalah 11 mg/kg berat badan/hari (0,2 mg/kg
bb/hari untuk tikus putih), sedangkan batas maksimal
penggunaan (BMP) berdasarkan SK Menteri Kesehatan RI
No. 208 tahun 1985 untuk manusia adalah 3 g/kg bb/hari
(54 mg/kg bb/hari untuk tikus putih) (Murdiati dkk., 1988).
Penelitian terdahulu menunjukkan bahwa siklamat
dapat menyebabkan terjadinya anemia yang ditandai
dengan menurunnya kadar hemoglobin (Hb) serta rusaknya
sel-sel darah merah. Hal ini merupakan akibat penimbunan
sel darah putih (leukosit) secara abnormal (Hoffbrand dan
Pettit, 1987), dimana jumlah leukosit dapat mencapai lebih
dari 10x104 tiap mm3 (Mattingly dan Seward, 1993).
Penelitian tentang unsur darah penting untuk kesehatan
karena morfologi, jumlah dan perbandingan berbagai
macam jenis sel darah merupakan indikator dari berbagai
perubahan patologis dalam tubuh (Leeson dkk., 1996).
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui karakteristik
hematologis tikus putih (Rattus norvegicus L.) yang
diperlakukan dengan natrium siklamat secara oral selama
30 hari, meliputi: nilai hematokrit (PCV), kadar
hemoglobin, jumlah eritrosit, jumlah leukosit, MCV, MCH
dan MCHC, serta morfologi eritrosit dan leukosit.

© 2003 Jurusan Biologi FMIPA UNS Surakarta

 AISYAH, dkk. – Efek Na-siklamat terhadap darah Rattus norvegicus
BAHAN DAN METODE
Waktu dan tempat penelitian
Percobaan ini dilaksanakan pada bulan September-
Oktober 2002. Pemeliharaan hewan uji dan pemberian
perlakuan dilaksanakan di Unit Pengembangan Hewan
Percobaan (UPHP) UGM Yogyakarta. Pembuatan preparat
apus untuk pemeriksaan morfologi darah, pengukuran nilai
hematokrit (PCV), kadar Hb, perhitungan jumlah eritrosit
dan leukosit, MCV, MCH dan MCHC dilakukan di
Laboratorium Pusat MIPA UNS Surakarta.
Alat dan bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini meliputi:
kandang pemeliharaan tikus putih, spuit 3 ml dan kanul,
tempat air minum, sentrifus, sealing putty, mikrohema-
tokrit, spektrofotometer UV-1601 merk Shimadzu, tabung
reaksi, kuvet, mikropipet, pipet volume, hemasitometer tipe
double improve neubauer, mikroskop, pipet pengencer
eritrosit, pipet pengencer leukosit, mikroskop, gelas benda,
pipet tetes, kertas tissue, dan alat fotomikrografi.
Bahan yang digunakan meliputi tikus putih (Rattus
norvegicus L.) jantan umur 2,5 bulan dengan berat badan
rata-rata 200 gram, Par G pellet sebagai pakan sehari-hari,
air ledeng, natrium siklamat, EDTA, larutan Hayem,
larutan Turk, metanol, zat warna Giemsa dan air mengalir.
Cara kerja
Rancangan percobaan
Percobaan ini menggunakan Rancangan Acak Lengkap
(RAL) dengan 5 macam perlakuan, setiap perlakuan
dengan 5 ulangan. Tikus putih berumur 2,5 bulan dengan
berat badan rata-rata 200 gram dipelihara di kandang,
masing-masing kandang perlakuan berisi 5 ekor tikus putih
(total 5 perlakuan = 25 ekor). Sebelum dipergunakan tikus
putih diaklimatisasi 1 minggu. Tikus uji diberi pakan dan
minum secara et libitum serta diberi larutan natrium
siklamat secara oral selama 30 hari, dengan dosis per hari
untuk masing-masing kelompok sebagai berikut:
I : 2 ml akuades (sebagai kontrol)/200 g bb
II : 4,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb
III: 9,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb
IV: 14,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb
V : 19,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb
Teknik pengambilan data
Pengambilan sampel darah. Darah diambil dari sinus
orbitalis tikus putih menggunakan mikrohematokrit (Smith
dan Mangkoewidjojo, 1988). Pengambilan darah dilakukan
10 hari sekali sebanyak 1 ml.
Pengukuran kadar hematokrit dan hemoglobin.
Kadar hematokrit (packed cell volume; PCV) diukur
dengan tabung mikrohematokrit yang sudah dilapisi
antikoagulan EDTA. Darah dihisap dari sinus orbitalis
dengan pipa hematokrit, hingga ¾ bagian pipa, kemudian
dipusingkan dengan kecepatan 1500 rpm selama 5 menit.
Pengukuran dilakukan dengan membandingkan bagian
darah yang mengendap dengan seluruh bagian darah yang
ada dalam tabung mikrohematokrit (Benyamin, 1961).
Adapun kadar hemoglobin diukur dengan metode
sianmethemoglobin. Dalam hal ini eritrosit dihancurkan
125
agar hemoglobin lepas dan dapat diubah menjadi bentuk
yang stabil dengan larutan Drabkin, sehingga semua
hemoglobin, oksihemoglobin, methemoglobin, dan
karboksilhemoglobin menjadi sianmethemoglobin. Kadar
hemoglobin ditentukan dengan spektrofotometer, dimana 5
ml larutan Drabkin dimasukkan dalam tabung reaksi,
ditambah 0,02 ml darah, dicampur, dan dibiarkan 3 menit,
lalu dibaca absorbansinya pada panjang gelombang 540 nm
Kadar Hb dapat diketahui dengan menggunakan kurva
kalibrasi atau langsung dihitung dengan konsentrasi Hb =
absorbansi x nilai yang tertera di kalibrasi larutan Drabkin
(Tahono dkk., 2000).
Perhitungan jumlah eritrosit. Perhitungan eritrosit
dilakukan dengan hemasitometer. Darah dihisap ke dalam
pipet pengencer eritrosit sampai tanda 0,5 dan larutan
Hayem sampai tanda 101. Jumlah eritrosit per mm3 darah =
jumlah eritrosit terhitung x 10.000 (Gandasoebrata, 1992).
Perhitungan jumlah leukosit. Perhitungan dilakukan
dengan cara mengencerkan darah dengan menggunakan
larutan Turk. Darah dihisap ke dalam pipet pengencer
leukosit sampai tanda 0,5 dan larutan Turk sampai tanda
11. Perhitungan leukosit dilakukan dengan menggunakan
hemasitometer. Jumlah leukosit per mm3 darah = jumlah
leukosit terhitung x 50 (Gandasoebrata, 1992).
Perhitungan nilai MCV, MCH, dan MCHC.
• Mean Corpuscular Volume (MCV) adalah
perbandingan hematokrit dengan jumlah eritrosit atau
volume rata-rata eritrosit dari sampel darah.
MCV = PCVx10 fl
Jumlah eritrosit (juta/mm3 )
fl = femtoliter =10 –15 liter
• Mean Corpuscular Hemoglobin (MCH) adalah jumlah
rata-rata hemoglobin dalam eritrosit.
MCH = Hemoglobin (Hb) x 10
pg
Jumlah eritrosit (juta/mm3 )
pg = picogram =10-12 gram
• Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration
(MCHC) adalah jumlah hemoglobin per unit eritrosit.
MCHC = Hemoglobin (Hb) x 100 %
PCV
Morfologi sel darah. Pengamatan morfologi sel darah
dilakukan dengan pembuatan preparat apus darah (smear
preparation). Sediaan apus darah difiksasi dengan metanol
selama 5 menit, kemudian dikeringanginkan selanjutnya
direndam dalam larutan pewarna Giemsa 3% dalam
metanol selama 20 menit, dicuci dan dikeringkan.
Pengamatan eritrosit dan leukosit dilakukan dengan
membandingkan sel-sel yang terdapat pada sediaan apus.
Analisis data
Data dianalisis dengan Analisis Varian (Anava) untuk
mengetahui pengaruh natrium siklamat terhadap nilai
hematokrit (PCV), kadar Hb, jumlah eritrosit, nilai MCV,
MCH, MCHC, dan jumlah leukosit tikus putih, kemudian
dilanjutkan dengan uji DMRT pada taraf signifikansi 5%.
Morfologi eritrosit dan leukosit dianalisis secara kualitatif.
126 B i o S M A R T Vol. 5, No. 2, Oktober 2003, hal. 124-130

HASIL DAN PEMBAHASAN
Bahan kimia dinyatakan toksik apabila memiliki efek
berbahaya bagi makhluk hidup (Koeman, 1987). Sifat
toksik zat kimia dapat teramati dari adanya perubahan
fungsional, struktural, atau biokimiawi. Faktor penting
yang mempengaruhi potensi aman atau tidaknya suatu zat
kimia adalah hubungan antara dosis (kadar zat) dengan
efek yang ditimbulkannya (Loomis, 1978).
2.). Peningkatan kadar Hb pada 10 hari ke-3 secara
keseluruhan terjadi seiring dengan peningkatan pemberian
dosis, tetapi setelah diuji dengan Anava, faktor dosis
ternyata tidak menunjukkan adanya beda nyata. Dari hasil
uji Anava, terlihat bahwa faktor yang signifikan dari
pengaruh pemberian natrium siklamat terhadap kadar Hb
darah tikus adalah faktor waktu (F hitung>0,05), sedangkan
faktor dosis maupun interaksi antara dosis dan waktu tidak
signifikan (F hitung<0,05).

Perubahan hematologis Tabel 2. Rata-rata kadar Hb (g/dL) pada tikus putih setelah
Nilai hematokrit (PCV) pemberian natrium siklamat dengan dosis yang bervariasi.
Hematokrit adalah perbandingan sel-sel darah merah
Kadar Hb (g/dl)
dalam suatu volume darah tertentu. Hematokrit menunjuk- Kel.
10 hari ke-1 10 hari ke-2 10 hari ke-3
kan persentase eritrosit dalam darah (Wulangi, 1993).
I 16,84±0,30 bb 10,98±0,26 Aa 12,24±1,32 Aa
II 13,28±0,84 Aa 10,62±1,34 Aa 12,46±4,43 Aa
Tabel 1. Rata-rata nilai hematokrit pada tikus putih setelah
pemberian natrium siklamat dengan dosis yang bervariasi. III 13,06±1,36 Aa 11,50±1,83 Aa 12,84±1,26 Aa
IV 14,16±1,42 ABa 12,12±0,20 Aa 13,66±1,20 Aa
Nilai hematokrit (%) V 13,20±1,17 Aa 11,64±0,44 Aa 13,22±1,27 Aa
Kel.
10 hari ke-1 10 hari ke-2 10 hari ke-3
I 45,60±0,67 Ba 45,80±0,47 Ba 45,40±0,84 Ca Kadar Hb tikus percobaan setelah 30 hari diperlakukan
II 44,80±0,50 bb 43,40±0,27 Aab 42,80±0,42 Ba umumnya lebih rendah dari pada hari-hari awal
III 44,40±0,44 Ba 43,40±0,57 Aa
43,40±0,67 Ba diperlakukan. Secara keseluruhan penurunan kadar Hb
IV 44,20±0,55 Ba 44,40±0,44 ABa 43,80±0,65 Ba terjadi pada 10 hari ke-3 pada semua tikus dibandingkan
V 42,60±0,91 Ab 43,00±0,61 Ab 41,00±1,06 Aa dengan 10 hari ke-1 namun penurunan ini justru tidak
terjadi pada tikus yang diberi dosis tinggi dan pada tikus
Dalam penelitian ini, secara keseluruhan terjadi yang diberi dosis rendahpun penurunan yang terjadi sangat
penurunan nilai hematokrit pada akhir perlakuan (Tabel 1.) kecil. Hal ini terjadi dimungkinkan karena tikus dengan
Pada pemberian natrium siklamat dengan dosis paling pemberian natrium siklamat dosis tinggi (19,5 mg/200g bb)
tinggi yakni 19,5 mg/200 g bb terjadi penurunan nilai melakukan reaksi imunitas. Secara keseluruhan pada 10
hematokrit secara nyata, hal ini menunjukkan adanya hari ke-3, tikus putih mempunyai kadar Hb yang lebih
kecenderungan tikus untuk mengalami anemia yang rendah dari tikus normal, hal ini menunjukkan adanya
ditandai dengan menurunnya konsentrasi sel-sel darah kecenderungan tikus untuk anemia.
merah. Menurut Benjamin (1961), nilai hematokrit
merupakan cara sederhana untuk mengetahui abnormalitas Jumlah eritrosit
pada darah. Nilai ini umumnya dianggap sama manfaatnya Jumlah eritrosit merupakan salah satu parameter
dengan jumlah sel darah merah total. Dari hasil uji Anava, penting untuk menilai kesehatan, mengingat perannya yang
terlihat bahwa pengaruh natrium siklamat yang paling sangat besar dalam mengangkut O2 ke seluruh tubuh.
signifikan adalah faktor dosis dan waktu (F hitung>0,05), Sirkulasi darah menggambarkan mekanisme dasar
sedangkan untuk faktor interaksi antara dosis dan waktu distribusi zat kimia ke seluruh tubuh (Loomis, 1978). Hasil
tidak berpengaruh nyata (F hitung<0,05). uji Anava menunjukkan pengaruh yang signifikan dari
Pada 10 hari ke-3, nilai hematokrit semakin menurun di pemberian natrium siklamat terhadap jumlah eritrosit
bawah kisaran normal diikuti dengan menurunnya jumlah adalah faktor dosis dan waktu (F hitung>0,05), sedangkan
eritrosit (Tabel 3), sebaliknya kadar hemoglobin meningkat faktor interaksi antara dosis dan waktu tidak berpengaruh
dibandingkan pada 10 hari ke-2 (Tabel 2). Penurunan nilai nyata (F hitung<0,05).
hematokrit yang berarti terlihat pada dosis 19,5 mg/200 g
bb. Hal ini terjadi karena adanya hemolisis karena Tabel 3. Rata-rata jumlah eritrosit pada tikus putih setelah
rapuhnya membran eritrosit. Membran yang rapuh ini pemberian narium siklamat dengan dosis yang bervariasi.
disebabkan oleh adanya radikal bebas dari natrium siklamat
Jumlah eritrosit (106/mm3darah)
yang berinteraksi dengan oksigen membentuk radikal Kel.
10 hari ke-1 10 hari ke-2 10 hari ke-3
peroksida sehingga membran menjadi lemah. I 9,80±0,63 bb 9,47±0,82 Ba 9,12±0,82 Ca
II 9,38±0,91 ABa 8,00±0,81 ABa 7,49±0,53 Ba
Kadar hemoglobin III 9,09±0,39 Abb 7,90±0,36 Aab 6,02±0,59 ABa
Hemoglobin adalah komponen eritrosit dan merupakan Abb Ab
IV 8,70±0,68 7,65±0,46 5,92±0,20 Aa
protein konjugasi dalam transport oksigen dan Ab Ab
V 8,26±0,40 7,58±0,38 5,98±0,40 Aba
karbondioksida. Penetapan kadar Hb sering dilakukan
untuk mengetahui adanya anemia (Tahono dkk., 2000). Penurunan jumlah eritrosit ini mempengaruhi terben-
Dalam penelitian ini, rata-rata kadar Hb meningkat pada 10 tuknya eritropoietin dan merangsang terjadinya eritropoi-
hari ke-3 dibandingkan dengan 10 hari ke-2, namun esis, tetapi karena eritrosit yang ada baru terbentuk, maka
menunjukkan penurunan dibandingkan 10 hari ke-1 (Tabel
 AISYAH, dkk. – Efek Na-siklamat terhadap darah Rattus norvegicus 127

Hb yang ada pada eritrosit belum mencapai kadar optimal. Nilai MCV, MCH, dan MCHC
Jumlah Hb yang belum stabil ini menyebabkan Selain pemeriksaan kadar Hb dan jumlah eritrosit,
kemampuan Hb untuk mengikat oksigen belum optimal. pemeriksaan anemia anemia sering pula dilengkapi dengan
Menurut Wulangi (1993), jumlah oksigen yang menurun pemeriksaan volume rata-rata eritrosit (MCV), jumlah rata-
akan mengakibatkan hati melepaskan lebih banyak globulin rata Hb eritrosit (MCH) dan jumlah Hb per unit eritrosit
dan ginjal memproduksi lebih banyak fak-tor eritropoietik (MCHC).
ginjal. Di dalam darah, globulin dan faktor eritropoietik
ginjal akan mengadakan interaksi membentuk eritropoietik Tabel 5. Rata-rata nilai MCV pada tikus putih setelah pemberian
yang akan merangsang terjadinya eritropoiesis. natrium siklamat dengan dosis yang bervariasi.
Kecepatan eritropoiesis diatur sedemikian rupa sehing-
ga jumlah eritrosit yang terdapat dalam peredaran darah MCV (fl)
Kel.
kurang lebih konstan. Setiap kali jumlah oksigen yang 10 hari ke-1 10 hari ke-2 10 hari ke-3
I 47,20±3,10 Aa 49,68±4,86 Aa 51,04±4,33 Aa
ditransport ke jaringan berkurang biasanya akan mening-
II 59,36±5,18 Ba 55,98±5,47 Aa 58,04±4,13 Aa
katkan kecepatan pembentukan eritrosit. Pada 10 hari ke-3,
III 49,34±2,00 ABa 55,76±2,78 Aab 65,78±7,57 bb
dosis 14,5 mg/200 g bb dan 19,5 mg/200 g bb tikus
IV 51,88±4,35 ABa 58,68±3,47 Aa 74,22±2,45 bb
cenderung mengalami anemia karena jumlah eritrositnya di
V 51,88±2,01 ABa 57,26±3,20 Aa 69,18±3,22 bb
bawah kisaran normal, hal ini diatasi dengan pembentukan
eritrosit oleh sumsum tulang. Oleh karena itu, bukan kon-
sentrasi yang mengatur kecepatan pembentukann eritrosit,
Tabel 6. Rata-rata nilai MCH pada tikus putih setelah pemberian
tetapi kemampuan fungsional sel untuk mentransport natrium siklamat dengan dosis yang bervariasi.
oksigen ke jaringan (Philips dan Murray, 1995).
Dari dua puluh tikus yang diberi perlakuan natrium MCH (picogram)
siklamat, 15 diantaranya menunjukkan jumlah eritrosit Kel.
10 hari ke-1 10 hari ke-2 10 hari ke-3
yang lebih rendah dari jumlah normal (7,2-9,6x106/mm3 I 17,38±1,02 Ab 12,04±1,11 Aa 13,42±1,15 Aa
darah). Tikus uji mempunyai jumlah eritrosit lebih rendah II 14,44±1,15 Aa 13,74±2,44 Aa 16,78±2,01 Aab
dari pada tikus kontrol. Menurut Hanim (1997), natrium III 14,42±1,33 Aa 14,66±1,22 Aa 22,46±3,87 bb
siklamat dapat merusak sel-sel darah merah, sehingga IV 16,76±2,68 Aa 15,98±0,85 Aa 23,20±2,35 bb
menurunkan jumlah eritrosit dalam sirkulasi dan cenderung V 16,12±1,56 Aa 15,44±0,83 Aa 22,40±2,49 bb
menyebabkan anemia.

Jumlah leukosit Tabel 7. Rata-rata nilai MCHC pada tikus putih setelah
Leukosit merupakan bagian penting dari pertahanan pemberian natrium siklamat dengan dosis yang bervariasi.
tubuh terhadap invasi asing. Pada umumnya semua leukosit
melakukan fungsinya dalam jaringan, dan darah hanya MCHC (%)
Kel.
10 hari ke-1 10 hari ke-2 10 hari ke-3
digunakan sebagai alat transport dari tempat pembentukan,
I 36,92±0,52 bb 23,84±0,61 Aa 27,02±3,07 Ba
penimbunan dan aktivitas (Burkitt dkk., 1995).
II 29,72±2,00 Aa 24,52±3,24 Aa 29,18±3,56 Aa
Tabel 4. Rata-rata jumlah leukosit pada tikus putih setelah III 29,40±3,02 Aa 26,50±1,89 Aa 29,50±2,53 Aa
pemberian natrium siklamat dengan dosis yang bervariasi. IV 32,46±3,56 ABa 27,28±0,39 Aa 31,16±2,49 ABa
V 31,06±2,83 Aba 27,06±0,83 Aa 32,30±3,19 ABa
Jumlah leukosit (10 3/mm3 darah)
Kel. Keterangan Tabel 1-7: Angka yang diikuti huruf kapital yang
10 hari ke-1 10 hari ke-2 10 hari ke-3
I 12,80±0,40 Aa 12,80±0,80 Aa 12,16±0,33 Aa sama dalam satu kolom menunjukkan tidak beda nyata antar
II 13,92±0,45 Aa 12,80±1,20 Aa 13,12±0,73 Aa dosis perlakuan. Angka yang diikuti huruf kecil yang sama dalam
Aa Aa satu baris menunjukkan tidak beda nyata antar waktu.
III 15,04±1,18 14,40±0,68 23,04±1,07 bb
I : 2 ml akuades/200 g bb tikus
IV 26,40±1,62 Ba 28,00±0,56 Ba 27,36±2,06 Ca II : 4,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb tikus
Ba Ba
V 28,80±2,06 28,80±0,49 34,08±2,42 Db III : 9,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb tikus
IV : 14,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb tikus
Setelah 30 hari diberi perlakuan, tikus uji mengalami V : 19,5 mg natrium siklamat dalam 2 ml akuades/200 g bb tikus
peningkatan jumlah leukosit terutama pada dosis 19,5
mg/200g bb. Peningkatan jumlah leukosit ini sebagian Data pada Tabel 1, 2, dan 3, menunjukkan bahwa nilai
adalah leukosit-leukosit abnormal, meskipun belum terlihat MCV dan MCH mengalami sedikit peningkatan pada
kecenderungan tikus untuk mengalami leukemia (jumlah kelompok perlakuan III (9,5 mg/200g bb), IV (14,5 m
leukosit lebih dari 10x104/mm3 darah), tidak menutup g/200g bb) dan V (19,5 mg/200g bb), sedangkan nilai
kemungkinan hal ini dapat terjadi apabila pemberian MCHC stabil untuk semua kelompok perlakuan. Nilai
natrium siklamat dosis tinggi diberikan secara terus- MCV menyatakan perbandingan hematokrit terhadap
nenerus untuk jangka waktu yang panjang sehingga terjadi jumlah eritrosit (femtoliter), nilai MCH menyatakan jumlah
akumulasi dan toksisitas bahan pemanis tersebut. Dari hasil rata-rata Hb dalam eritrosit (picogram) dan nilai MCHC
uji Anava, terlihat bahwa faktor dosis, waktu, maupun menyatakan jumlah Hb per unit eritrosit (%). Belum ada
interaksi antara dosis dan waktu berpengaruh sangat standar yang pasti untuk nilai MCV, MCH dan MCHC
signifikan (F hitung>0,05) (Tabel 4.). pada tikus putih yang menyatakan keadaan anemia.
128 B i o S M A R T Vol. 5, No. 2, Oktober 2003, hal. 124-130
Dari hasil uji Anava, terlihat bahwa faktor yang
berpengaruh signifikan terhadap nilai MCV dan MCH
adalah faktor dosis dan waktu (F hitung>0,05), sedangkan
faktor interaksi antara dosis dan waktu tidak berpengaruh
nyata (F hitung<0,05). Sementara untuk nilai MCHC faktor
waktu yang berpengaruh nyata (F hitung>0,05) sedangkan
faktor dosis dan interaksi antara waktu dan dosis tidak
signifikan (F hitung<0,05).
Nilai MCV pada 10 hari ke-1, 2 dan 3 mengalami
peningkatan, sedangkan nilai MCH pada 10 hari ke-1 dan 2
mengalami penurunan dibanding kontrol dan meningkat
pada 10 hari ke-3. Nilai MCHC meningkat pada 10 hari ke-
1, menurun pada 10 hari ke-2 dan meningkat lagi pada 10
hari ke-3. Nilai MCV selalu berhubungan dengan nilai
hematokrit dan jumlah eritrosit. Apabila MCV meningkat
namun nilai hematokrit dan jumlah eritrosit menurun
berarti peningkatan volume eritrosit tidak mampu tidak
diikuti kemampuan untuk mempertahankan keberadaannya
dalam darah, serta kerja enzimatis dari eritrosit oleh enzim
katalase dan anhidrase karbonat belum mampu
mempertahankan keadaan stabil dari proses eritropoiesis.
Selain itu, sistem antioksidasi yang terdapat pada membran
eritrosit hanya bertahan sementara, keadaan membran yang
terus menerus berhubungan dengan oksigen dengan adanya
pengaruh radikal bebas dari natrium siklamat menyebabkan
eritrosit yang stabil dalam darah hanya sebagian kecil saja,
hal ini ditandai dengan volume eritrosit (MCV) yang besar
namun jumlah eritrosit menurun.
Pada 10 hari ke-3, MCH meningkat, tetapi jumlah
eritrosit menurun. Hal ini berhubungan dengan mekanisme
umpan balik yang terjadi pada proses eritropoiesis. Meka-
nisme ini berfungsi untuk menyeimbangkan kebutuhan
oksigen sehingga fluktuasi (naik turunnya) kadar Hb
berhubungan dengan mekanisme tersebut. Kadar Hb yang
meningkat pada akhir perlakuan bila dibandingkan dengan
saat pertengahan perlakuan akan menyebabkan
pengangkutan oksigen dalam darah berjalan dengan baik
untuk mengimbangi jumlah eritrosit yang menurun.
Perubahan morfologi eritrosit dan leukosit
Gambar 1. Bentuk eritrosit tikus kontrol pada 10 hari ke-3.
Setelah 30 hari perlakuan dengan natrium siklamat,
terjadi perubahan struktur morfologi eritrosit, antara lain
terdapat eritrosit bentuk paku payung, topi dan adanya
poikilositosis (bentuk bervariasi) (Gambar 2 dan 3).
Perubahan struktur eritrosit merupakan indikasi terjadinya
kerusakan hati. Menurut Hanim (1997), radikal bebas dari
pemanis buatan dapat merusak lobulus sel hati karena
pembendungan pembuluh darah khususnya di vena
sentralis akibat akumulasi dan toksisitas bahan pemanis.
Menurut Ressang (1988, dalam Hanim, 1997), akibat
pembendungan pembuluh darah terbentuk lintasan melalui
sinusoid yang meluas sehingga daerah segitiga Kiernand
ikut meluas, selanjutnya aliran darah menjadi tidak lancar.
Perubahan morfologi pada eritrosit tersebut disebabkan
hemolisis membran eritrosit. Hemolisis ini terjadi karena
membran eritrosit merupakan membran yang berhubungan
dengan oksigen. Membran sel seperti membran eritrosit
yang berhubungan dengan oksigen, sering mengalami
proses oksidasi. Radikal bebas dari natrium siklamat
bergabung dengan oksigen yang diikat hemoglobin atau
oksigen yang sudah dilepaskan hemoglobin ketika
hemoglobin akan berikatan dengan CO2, membentuk ikatan
radikal peroksida. Radikal ini menyerang membran eritrosit
sehingga struktur membran berubah dan tidak stabil, yang
akhirnya berpengaruh pada kehidupan eritrosit. Pada
kelompok kontrol tidak terjadi perubahan morfologi,
karena massa sel dapat melaksanakan fungsinya secara
normal tanpa gangguan dari luar.
Setiap eritrosit dibatasi oleh membran plasma yang
merupakan suatu kompleks lipoprotein. Pada bagian bawah
membran plasma terdapat kerangka sel (sitoskelet) yang
terdiri dari dua lapisan yaitu jala granular vertikal dan
filamen horizontal, jala-jala ini terutama tersusun oleh
protein kontraktil yang disebut spektrin. Protein ini mampu
memelihara bentuk bikonkaf dan memungkinkan
pengaliran oksigen dan karbonmonoksida secara efisien di
dalamnya. Dalam keadaan normal, sitoplasma berada
dalam keseimbangan osmotik dengan plasma. Terjadinya
perubahan tekanan osmolaritas antara plasma dan cairan
dalam sel akibat adanya larutan natrium siklamat akan
Gambar 2. Eritrosit bentuk topi setelah pemberian natrium
siklamat dosis 9,5 mg/200 g bb 10 hari ke-3.
 AISYAH, dkk. – Efek Na-siklamat terhadap darah Rattus norvegicus
a
b
b a
Gambar 3. Eritrosit bentuk (a) paku payung dan (b)
poikilositosis setelah pemberian natrium siklamat dosis 19,5
mg/200 g bb pada 10 hari ke-3.
Gambar 4. Bentuk leukosit kontrol pada 10 hari ke-3.
menyebabkan krenasi sel darah. Ini sebagai akibat
keluarnya air dari sel-sel sehingga mengkerut dan
menghasilkan bentuk sel seolah berduri atau disebut
dengan eritrosit bentuk paku payung seperti tampak pada
Gambar 3 (Leeson dkk., 1996).
Selain perubahan morfologi yang terjadi pada eritrosit,
leukosit juga mengalami perubahan struktural. Pada
pemberian natrium siklamat dosis tinggi (19,5 mg/200g
bb), terjadi peningkatan jumlah leukosit abnormal.
Kelainan yang terjadi berupa adanya hipersegmentasi lobus
neutrofil (Gambar 5) pada pemberian dosis 14,5 mg/200 g
bb, pada pemberian dosis 19,5 mg/200 g bb menunjukkan
kecenderungan terjadinya leukositosis (jumlah leukosit
yang terlalu banyak) (Gambar 6). Menurut Hoffbrand dan
Pettit (1987), kegagalan sumsum tulang dalam membentuk
sel-sel darah menyababkan terbentuknya sel-sel abnormal,
129
Gambar 5. Bentuk leukosit yang memperlihatkan kerusakan lobus
neutrofil setelah pemberian natrium siklamat dosis14,5 mg/200 g
bb pada 10 hari ke-3.
Gambar 6. Leukosit yang mengalami leukositosis setelah
pemberian natrium siklamat dosis 19,5 mg/200 g bb 10 hari ke-3.
jumlah leukosit dalam sirkulasi meningkat dan
menginfiltrasi organ lain. Kerusakan yang terjadi karena
radikal bebas dari natrium siklamat dapat merusak sel-sel
darah putih.
KESIMPULAN
Pemberian natrium siklamat pada tikus putih (Rattus
norvegicus L.) pada dosis 19,5 mg/200g bb tikus
menyebabkan terjadinya penurunan nilai hematokrit; pada
dosis 4,5 mg/200 gbb, dosis 9,5 mg/200g bb dan dosis 14,5
mg/200 g bb menyebabkan penurunan kadar Hb, dan pada
dosis 9,5 mg/200g bb, dosis 14,5 mg/200 g bb dan dosis
19,5 mg/200g menyebabkan penurunan jumlah eritrosit dan
meningkatkan jumlah leukosit.
130 B i o S M A R T Vol. 5, No. 2, Oktober 2003, hal. 124-130
Hasil pengamatan terhadap morfologi eritrosit dan
leukosit tikus putih yang diberi perlakuan dengan natrium
siklamat menunjukkan terjadinya eritrosit bentuk paku
payung, bentuk topi dan terjadinya poikilositosis (bentuk
eritrosit yang bervariasi). Pada leukosit terjadi kerusakan
lobus neutrofil dan kecenderungan terjadinya leukositosis
(jumlah leukosit yang terlalu banyak).
DAFTAR PUSTAKA
Benyamin, M.M. 1961. Outline of Veterinary Clinical Pathology. 3rd
edition. Ames-Iowa: The IOWA State University Press.
Burkitt, H.G., B. Young, dan J.W. Heath. 1995. Histologi Fungsional.
Edisi 3. Penerjemah: Tambajong, J. Jakarta: EGC Penerbit Buku
Kedokteran.
Gandasoebrata, R. 1992. Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta: P.T
Dian Rakyat.
Hanim, D. 1997. Pengaruh Vitamin E terhadap Organ Hati dan Uterus
Yikus Putih (Rattus norvegicus) Betina yang Diberi Perlakuan
Natrium Sakarin dan Natrium Siklamat (Studi Awal: Endometriosis
pada Wanita Hamil). [Thesis]. Surakarta: Bagian Ilmu Gizi Fakultas
Kedokteran UNS.
Hoffbrand, A.V dan J.E. Pettit. 1987. Kapita Selekta Haematologi. Edisi
2. Penerjemah: Darmawan, I. Jakarta: EGC Penerbit Buku
Kedokteran.
Koeman, J.H.1987. Pengantar Umum Toksikologi. Penerjemah: Yudono,
R.H. Yogyakarta: UGM Press.
Leeson, T.S, C.R. Leeson, dan A.A. Paparo. 1996. Buku Ajar Histologi.
Jakarta: EGC Penerbit Buku Kedoteran.
Lindsay, R.C. 1985. Food Chemistry. 2nd edition. Penyunting: Fennema,
O.R. New York: Marcell Dekker Inc.
Loomis, T.A. 1978. Toksikologi Dasar. edisi 3. Penerjemah: Donatus,
I.A.. Semarang: IKIP Press.
Mattingly, D dan C. Seward. 1993. Bedside Diagnosis. edisi 13.
Penerjemah: Hartono, A. Yogyakarta: UGM Press.
Murdiati, A., Supriyanto, dan P, Triwitono. 1988. Uji Toksisitas Bahan
Pemanis Buatan pada Tikus. Yogyakarta: Pusat Antar Universitas
Pangan dan Gizi UGM.
Phillips, J. and P. Murray. 1995. The Biology of Desease. Oxford:
Bleckwell Science Ltd.
Sally, T.S. 1996. Pemanis buatan dalam makanan dan minuman. Majalah
Ilmiah Fakultas Kedokteran Usakti 15 (2): -
Sally, T.S. 1998. Pemanis buatan dalam beberapa merek madu produksi
Indonesia. Majalah Ilmiah Fakultas Kedokteran Usakti 17 (2): -
Smith, J.B dan S. Mangkoewidjaja.1988. Pemeliharaan, Pembiakan dan
Penggunaan Hewan Percobaan di Daerah Tropis. Jakarta: UI Press.
Tahono, Hadiwidodo, Yuwono dan Wuryaningsih. 2000. Patologi Klinik I
Pengantar Analisa Laboratorium Patologi Klinik Fakultas
Kedokteran. Surakarta: UNS Press.
Tranggono. 1988. Kimia dan Biokimia Lipid, Kumpulan Hand Out
Magang dalam Negeri Kimia dan Biokimia Pangan. Yogyakarta:
Pusat Antar Universitas Pangan dan Gizi UGM.
Wulangi, K.S. 1993. Prinsip-prinsip Fisiologi Hewan. Jakarta: Depdikbud
Dirjen Pendidikan Tinggi Proyek Pembinaan Tenaga Kependidikan.