Coloracin Wright

Coloracin Wright

El frotis sanguneo una vez seco, se somete a un proceso de fijacin y posteriormente a una tincin mediante un colorante adecuado. En la mayora de laboratorios, los colorantes ms empleados para la tincin hematolgica se basan en el de Romanowsky ya que puede obtenerse mayor informacin a partir del examen de un frotis de sangre perifrica bien teido.

Coloracin Wright

Una tincin de Romanowsky consiste en azul de metileno y sus productos de oxidacin, as como eosina Y. La accin combinada de estos colorantes produce el efecto de Romanowsky y da una coloracin purprica a los ncleos de los leucocitos y a los grnulos neutrfilos y de color rosado a los eritrocitos. Los componentes principales causantes de este efecto son el azul B (un producto de oxidacin del azul de metileno) y la eosina Y. La amplia variacin en los colores y sombras observadas con la tincin de Romanowsky permiten distinciones sutiles de las caractersticas celulares.

Coloracin Wright Fundamento

La naturaleza cida o bsica de las estructuras celulares determina su avidez por los componentes del colorante policromtico de Wright; es as como los cidos nucleicos se tien con azul B que es el bsico y la hemoglobina con la eosina Y que es cida. Otras estructuras se tien por una combinacin de ambos y se denominan neutrfilas.

Coloracin Wright Procedimiento

Materiales Extendidos de sangre en lmina o laminilla. Colorante de Wright. Buffer de fosfatos (pH 6.4). Cubetas para tincin. Agua corriente.

Mtodo

Coloracin Wright Fundamento

Es variable y debe estandarizarse en cada laboratorio. Un modelo es el siguiente:

Teir las extensiones de sangre una vez se hayan secado al aire libre. Si se desea dejar por ms de una hora sin colorear es necesario fijarlas con metanol absoluto. (15 segundos aproximadamente). Colocar los extendidos en un plano horizontal y con la extensin de sangre hacia arriba y en las cubetas respectivas. Cubrir toda la superficie de la preparacin con Wright. Esperar 2 -3 minutos (el tiempo ptimo es determinado por ensayo y error).

Coloracin Wright Procedimiento

Agregar un volumen igual de solucin amortiguadora (pH 6.4) o en su defecto agua de grifo con resultados igualmente buenos. La cantidad de agua o buffer debe ser suficiente para cubrir la lmina completamente, pero no en exceso que caiga a la cubeta. (2.5 ml para lminas y 0.5 ml para laminillas aproximadamente). Soplar suavemente el extendido para mezclar hasta obtener una pelcula uniforme de apariencia metlica - verdosa. Esperar 7 minutos.

Remover el colorante con agua corriente manteniendo los extendidos en posicin horizontal. El lavado debe ser rpido (5 - 30 segundos) para evitar precipitacin del colorante sobre la superficie del extendido. Dejar secar al aire. Quitar con una gasa humedecida en alcohol, el colorante que queda adherido al dorso de la lamina o laminilla, teniendo cuidado de que el alcohol no tenga contacto con la superficie coloreada

Coloracin Wright Procedimiento

Los extendidos en laminilla se pueden montar para uso temporal colocndolos con la pelcula de sangre hacia abajo y sobre una lmina en la que se ha depositado una gota de aceite de inmersin..

Control de calidad La tincin de Wright bien preparada y cronometrada funcionar correctamente si la extensin fue realizada en forma correcta ya que extensiones gruesas no permiten juzgar la calidad de la tincin. El criterio ms confiable sobre la calidad de la tincin es la forma en que se tien los monocitos. La tincin es comprobada en una extensin fina preparada con sangre de lactante, habitualmente rica en monocitos.

Coloracin Wright Control de calidad Preanalitico

El ncleo debe tener una estructura vesicular fina, y en el citoplasma han de verse los caractersticos grnulos rosados muy finos.

Una tincin satisfactoria debe dar los siguientes resultados: Glbulos Rojos: rojo amarillento.

Coloracin Wright Control de calidad Preanalitico

Neutrfilos: cromatina prpura oscuro, citoplasma rosa plido y grnulos lila.

Eosinfilos: cromatina prpura oscuro, citoplasma azul plido y grnulos rojo brillante. Basfilos: cromatina prpura oscuro, grnulos azul oscuro. Linfocitos: cromatina prpura oscuro, citoplasma azul cielo.

Monocitos: cromatina prpura medio, citoplasma azul grisceo y grnulos lila Plaquetas: centrmero violeta o prpura, hialmero azul claro

Coloracin Wright

Causas de error en la tincin del frotis sanguneo. Una extensin excesivamente azul (basfila). Extensin gruesa. Lavado insuficiente. Tiempo tincin excesivamente prolongado. Empleo de colorante excesivamente alcalino Una coloracin excesivamente rosada (acidfila). Extensin delgada. Exceso de buffer. Empleo de colorante excesivamente cido.

Coloracin Wright

Finalmente : Presencia de precipitados. Puede evitarse mediante filtracin del colorante antes de su empleo.

Apreciacin de artefactos morfolgicos debido al anticoagulante. Cuando el frotis se realiza con sangre recolectada con EDTA, es muy importante no esperar ms de 2 horas de la extraccin, ya que pueden aparecer alteraciones morfolgicas imprevisibles de las clulas sanguneas