COMPUESTOS LUMINISCENTES

Revista:

Journal of the American Chemical Society JACS Ttulo: Engineering of Highly Luminescent Lanthanide Tags Suitable for Protein Labeling and Time- Resolved Luminescence Imaging

Nombre: Luz Guarda Garrido

INTRODUCCIN

Uso de la microscopa de fluorescencia convencional para visualizacin de tejidos o compartimientos celulares.

En inmunohistoqumica, problemas con la auto-fluorescencia de las muestras y dispersin de la luz en el equipo

Se propone el uso de la microscopa de luminiscencia (TRLM) como alternativa de la microscopa de fluorescencia convencional Diseo de nuevos luminfos con mayores tiempos de vida del estado excitado A partir de 1978 los complejos luminiscentes de lantnidos se convirtieron en objeto de estudio debido a la aplicacin en el mejoramiento de los tiempos de resolucin de los espectros Si es tan buena alternativa. Por qu se han desarrollado tan pocas etiquetas?

-deben ser solubles en medios acuosos o en disolventes adecuados para desempear su papel en Sondas bioespecficas
- unidades con grandes cromforos -el complejo debe poseer una zona activada para activar el injerto de los complejos en la zona marcada

INTRODUCCIN

Dos posibles estrategias para obtener complejos estables 1. Encapsulamiento de cualquier catin lantnido en una cavidad definida de un macro-ciclo de un criptando. 2. La incorporacin en el diseo de ligando (como macro-cclo o estructuras tipo podales) con numerosas terminaciones anionicas (como funciones carboxilatos o derivados fosforados) para la estabilizacin del complejo por interacciones electrostticas.

SNTESIS
O
O

i,ii,iii, iv)
Br N NH2 N N Br

vi)

MeO

O OMe

v)

HO

O OH NH 2 *H 2 O

OMe
OMe O

NH3 , Cl
O Br OMe

O O OEt
OMe

EtO

O N

Br

N N N

vii)

N N

N N

viii)
OH O

O O O O OH2 O O O O N N N

O O

N
O

HO

O
O N OH

NaO

OH

OH2

N Ln N

N N N

ix)

N Ln N N O O N N O O

x)

SNTESIS

El ligando LH4 es obtenido en 7 pasos:

i. Reaccin de Sandmeyer
NaNO2, -20C NaOH

Br2

NH2

N2

HCl

Br

amina 1 aromtica

sal de diazonio

sust. Por halgeno

ii. Reaccin de Metalacin

n-Bu - Li , -78C Bu3SnCl

Br

Sn

SNTESIS
iii. Reaccin de acoplamiento de Still con catalizador de Pd
[Pd(PH3)4] tolueno 110C

N N Sn
Br N Br

permite la sntesis de bifenilos estricamente impedidos

iv. Bromacin radicalaria en benceno bajo irradiacin UV

N N

NBS;AIBN, hv benceno

Br N

Br

SNTESIS
v. Esterificacin del c. Glutmico hidratado
O HO O OH NH 2 *H 2O
TMSCl,CH3OH t.a

O MeO O OMe NH 3 , Cl
+ -

dimetil ester glutamato; mezcla racmica

vi. N-alquilacin
OMe O Br MeO O OMe NH 3 , Cl
+ -

O Br N N Br

O Br OMe

CH3CN, K2CO3
N N N

N N

80C

SNTESIS
vii. Carboxilacin bajo atmosfera de CO

OMe O Br OMe N N N N N O Br O EtO O N N N N OMe O O OMe N OEt

[Pd(PPh3)2Cl2] EtOH/Et3N CO (1 atm) 70C

tetraester

SNTESIS
viii. Hidrlisis bsica del tetraester y posterior acidificacin

OMe O EtO N N O N

O O OMe N N OEt O HO N O

OH

O O OH N N N OH

1.NaOH, MeOH/H2O, 70C 2. HCl 2N

Ligando LH4

SNTESIS
ix. Sntesis del complejo de lantnido
O O NaO OH HO O O N N N N O O OH N
NaOH diluido

O OH LnCl3. 6H2O, MeOH/H2O, 70C N N N Ln

OH2 O O N N O O

SNTESIS
x. Ester de la N-hidroxisuccinimida

O O NaO O N Ln N N O O N N O O NHS, EDCl.HCl, DMSO t.a OH2

O O O O OH2 O O N N N N O O

N O

N Ln

PROPIEDADES DE LOS COMPLEJOS

La alta estabilidad de un complejo de lantnido es un requisito para su uso en medios biolgicos.(kcond) aplicacin en ensayos de bioanlisis Inmunohistoqumica hibridacin in situ

CARACTERIZACIN

Espectro de absorcin del ligando libre LH4 como el de los complejos [LnL(H2O)]Na Ln= Eu, Tb o Gd, muestran bandas de intensidades de absorcin debido a transiciones -* del ligando cromforo. Los estudios espectroscpicos determinaron que el metal coordina con 1.1 molcula de agua en solucin a temperatura ambiente.

CARACTERIZACIN

El agua contribuye a aumentar el tiempo de luminiscencia de los dos complejos La luminiscencia de los complejos metlicos de Eu y Tb es un proceso eficiente (0.24 y 0.49) La eficiencia del complejo activado con NBS se demuestra mediante el etiquetado de la protena BSA

CARACTERIZACIN
El espectro muestra 19 peaks
sobre 40 ppm como resultado de la contribucin paramagntica del Eu

CARACTERIZACIN
Los complejos de Eu3+ y Tb3+ muestran una fuerte luminiscencia en solucin acuosa.

CONCLUSIN

Los ligandos LH4 son fciles de sintetizar y tienen una alta afinidad hacia los cationes lantnidos Son estables en solucin acuosa a pH neutro y presentan elevada luminiscencia a pesar de tener una molcula de agua incluida en la primera esfera de coordinacin del complejos.

Las excelentes propiedades fotofisicas demuestran la efectividad del uso de bpy-carboxilato cromforo como un bloque de construccin para el diseo de ligandos capaces de formar complejos de lantnidos estables y muy luminosos