METODE IDENTIFIKASI Senyawa Obat Organik

Oleh Harjana

Harjana

Acuan

FI IV Ole Pedersen, 2006; Pharmaceutical Chemical Analysis: Methods for Identification and Limit Tests, Taylor & Francis Group, NW. R.P. Fabini; Griefswald T.B.; 1975; Organische Analyse unter. besondr. beruck. von Arzneistoffen; Akademische Verlagsgesellschaft, Geest & Portig, Leipzig Schoorl; 1937 Organische Analyse II, C.U.M.
Harjana 2

IDENTIFIKASI

CARA ORGANOLEPTIS
o o o

Tampilan bentuk & warna Bau Rabaan Rasa

CARA KIMIA CARA INSTRUMENTAL

Harjana

REAKSI IDENTIFIKASI

Pengendapan

Bentuk

Koloid Spt susu Keruh kristal

Warna Satu warna Warna berubah oleh waktu

Harjana 4

Pewarnaan

Bentuk Endapan
Ukuran partikel Koloid Spt susu Keruh Kristal

< 0,001 m larutan 0,001 1 m koloid > 1 m suspensi

Distribusi Afinitas thd air / ion

Harjana

NO3Ag+
+ NO3- Ag

AgC l
Ag+ NO3-

Ag+

AgCl:Ag+ .. NO3NO atau AgCl:Ag + ... NO33

Memecah / mengubah koloid

1. Penambahan elektrolit inert = koagulasi / flokulasi

2. Pemanasan = digesti
Harjana 6

Reaksi warna untuk identifikasi

1.

analit + pereaksi berwarna warna (pereaksi tidak menjadi bagian dari senyawa produk) iodida + kromat Iodium (violet atau merah violet) analit + pereaksi yang tidak berwarna molekul berwarna, tetapi pereaksinya tidak menjadi bagian dari produk fenol + H2O2 warna analit + pereaksi produk berwarna yang tersusun atas bagian analit dan pereaksi karena kondensasi ikatan kovalen atau ikatan kelat atau garam. Misal: kompleks Co dengan barbiturat non-nitrogen substitusi

2.

3.

4.

Kombinasi Oksidasi amina aromatik primer dg HNO2, dilanjutkan dengan kondensasi dengan naftol
Harjana 7

REAKSI WARNA YANG BAIK

satu arah (irreversible) peka stabil sangat selektif, mempunyai tampilan yang berbeda
dengan analit maupun pereaksi, serta tahan terhadap sedikit perubahan prosedur

turunan sulfonamida struktur mol. berbeda nitroprusid vs laktat, sitrat, dan aldehid/keton + ikatan rangkap pada -karbon Asam, asam anhidrida, halida asam, amida asam dan imida + hidroksamin hidroksamat , + Fe(III) warna
8

Untuk penegasan diperlukan bbrp reaksi warna!

Harjana

UJI BATAS

SELEKTIF SENSITIF

Harjana

1. Asetat
(a). bahan + asam oksalat atau KHSO4 aa uap berbau cuka

KHSO4

(b). larutan sample + larutan FeCl3 larutan berwarna merah kecoklatan , jika dipanaskan timbul endapan coklat
3 CH3COOH + FeCl3 Fe(acetate)3 + H20 Fe(acetate)3 + 3 HCl lar coklat merah

Fe(OH)3 + 3 CH3COOH Coklat

Harjana 10

2 Laktat
+ FeCl3 kuning

atau H202

NaFe(NO)(CN)5 + Na-nitroprusid

ammonia

Merah violet

Harjana

biru

11

3. Sitrat dan 4.Tartrat

Pereaksi
ammoniakal H2SO4 pekat kemudian dipanaskan

Asam sitrat
Mereduksi cermin Ag Kuning muda

Asam tartrat
Tdk mereduksi coklat

padatan + asam asetat anhidrid + piridin, dihangatkan

Merah karmin

hijau

Harjana

12

OH OH

5. ASAM ASKORBAT

HO

OH H2 C C O

padatan + CaCO3 pdt + 2 tetes larutan FeSO4 jenuh warna violet + larutan Ag-ammoniakal abu-abu cermin perak Mereduksi KMnO4 10 tts larutan vit C dlm air + 1 tts 1% larutan Na-nitroprusid + 2 tts larutan KOH kuning kenari, + 2 tts asam asetat hijau-kebiruan
Harjana 13

6 Benzoat
3C6H5COO + 2Fe3+ + 3H2O + 3H+ (C6H5COO) 3Fe.Fe(OH)3
+

1.

2. + as sulfat pekat

panasi

menyublim

3. + HCl

kristal

rekristalisasi td. 120 124o C

Harjana

14

7 Salisilat
O
O

O H2N
O

OH OH
OH OH

OH
OH O O

OH

salicylic acid

acetyl salicylate

para amino salicylic acid

salicylic acid

Asetosal, Aspirin

PAS

Fe3+
O O

OOO H O

O H

Fe

3+

OO

Harjana

15

sedikit asam salisilat + 0,5 ml metanol + 5 tetes H2SO4 pkt, panaskan di atas api kecil dinginkan, + air 2 ml bau gondopura 0,05 g garam salisilat dalam 10 ml air, tambah 0,5 ml HCl kristal bentuk jarum

Harjana

16

8. Barbiturat, tersubstitusi pada non-nitrogen

UJI PARRI suasana basa kuat dalam pelarut metanol + Co(II) + Amina/ammonia

barbiturat

tiobarbiturat

Kompleks tetrahedral biru violet Kompleks oktahedral, jika tidak ada amina/ammonia & warna lebih pucat False positif: fenol, difenol, poliol, dipeptida, Harjana heterosiklik yang punya N &
17

9. PARASETAMOL

HO

H N

COCH3

50 mg bahan dilarutkan dlm 10 ml air, + 1 tts 5% FeCl3 biru-violet 100 mg bhn + 1 ml 32% HCl didihkan 3 mnt, + 10 ml air, tunggu ad dingin, + 1 tts 0,1 N K-dikromat violet

Harjana

18

N H N N

10. Amina primer aromatik

H2N

S o

Sulfadiazin

Larutan uji diasamkan dengan HCl, kemudian + larutan Nitrit, didiamkan 1 2 menit, maka akan terbentuk garam diazonium. Garam ini jika direaksikan dgn 1 ml larutan naftol akan membentuk hasil kondensasi berupa larutan atau endapan yang berwarna orange sampai merah

amina-primer aromatik

garam diazonium

Harjana

naftol

oranye s/d merah

19

Alkaloid

alkaloid = senyawa yang berasal dari tanaman, bereaksi basa, mengandung satu atau beberapa atom ntrogen (biasanya cincin heterosiklis) dan biasanya memberi efek fisiologis pada manusia atau hewan umumnya berupa amina tertier atau kuaterner

H3CO

O H3C N N CH3

CH3 N N
H3CO

N CH2

OCH3 OCH3

kofein
Harjana

papaverin
20

m alkaloid + m KBiI4 (alkaloid+)m(BiI4-) m

sedikit alkaloid dilarutkan dalam air atau HCl encer + pereaksi Dragendorff warna oranye atau endapan merah oranye Positif palsu oleh kumarin, hidroksifalvon, beberapa triterpen dan kardenolida, serta kadang-kadang protein
Harjana 21

Xantin

Kofein

aloksan

tetra-(N-metil)-mureksoin

Mureksid, merah violet

Harjana

22

11. KOFEIN
Padatan + pereaksi Dragendorf kuningcoklat, endapan bentuk segi enam memanjang Padatan + larutan HgCl2 endapan, kristal jarum

Harjana

23

12. Papaverin
1. 2. 3.

+ H2SO4 pkt tdk berwarna, dihangatkan violet + HNO3 pkt dipanaskan warna kuning kecoklatan

Larutan papaverin + HCl encer + larutan ZnCl2 endapan kristal jernih bentuk persegi, dengan sudut rompang
Padatan + pereaksi Marquis atau larutan K-Fe(III)-sianda biru violet hijau coklat kuning

4.

Harjana

24

13. EFEDRIN

H C
OH

H C
NH

CH3

CH3

Reaksi Chen Co: larutkan 20 mg sample dalm 2 mL air, + 5 ml 10% Cu-sulfat + 1ml 15% NaOH violet, warna larut dalam eter Dgn pereaksi Dragendorff kristal jarum utk L-efedrin dan prisma untuk D,L-efedrin

Harjana

25

Harjana

14. Penisilin
Bau khas
Hidrolisis suasana asam sulfat encer

formaldehida
OH OH

Ag-ammoniakal
HO3S SO3H

Asam kromatopat

Endapan abu-abu
HO3S O HO O SO3H

SO3H

SO3H
26

merah

15. KLORAMFENIKOL
O2N H C H C CH2OH CHCl2 OH NH C O

10 mg padatan dilarutkan dlm 1 ml 0,5 N KOH dlm etanol warna kuning, jika dipanaskan endapan merah tua Larutkan dalam etanol, + air kristal jarum (basa) Larutkan dalam aseton, + air kristal bentuk ginjal (bentuk garam palmitat)

Harjana

27

16. TETRASIKLIN
CH3 H3C CH3 N CH3 OH CONH2 OH O OH OH 0

0,5 mg padatan + 1 ml H2SO4 pkt, violet, jika + 1 ml air pelan lewat dinding tabung, tunggu 5 mnt 2 ml kuning + 50% ZnCl2 panaskan dlm cawan porselin ad timbul uap, masukan sedikit serbuk tetrasiklin, panasi 1 mnt lagi kuning 0,1 mg serbuk + 2 tts. 1% p-DAB dlm H2SO4 pkt, kuning, .. Hangatkan violet, + 1 ml air kuning
Harjana 28

17. Etanol
3CH3-CH2-OH + 2CrO4= + 10 H+ etanol Kuning 3Cr3+ + 2CH3CHO + 7H2O hijau asetaldehida

2 CH3-CH2-OH + Na etanol

2 CH3-CH2-ONa + H2 Na-etanolat gas

CH3-CH2-OH + as asetat etanol H2SO4 pkt

CH3-CH2-OOC-CH3 etil asetat, bau pisang ambom

Harjana

29

18. METANOL
CH3OH + As. salisilat metilsalisilat
H2SO4 pkt bau gondopura

2. kerjakan di lemari asam, 1 ml metanol dalam cawan porselin + 1 kristal boraks + 2 tetes H2SO4 pkt, lalu nyalakan dengan api api berwarna hijau

Harjana

30

19. FORMALIN HCHO

+ pereaksi Ag-ammoniakal cermin Ag

+ asam kromatopat

merah violet
merah bata

RCH0 + 2 Cu2+ + NaOH + H20 RCOONa + 4 H+ + Cu20

RCHO + NaHSO3

RCH2(OH)SO3Na

Harjana

31

OH

20. VANILIN
HC O

OCH3

Larutan dlm air + 1 tts FeCl3 biru, jika dipanaskan 60o C 2 mnt warna tetap biru, setelah dingin timbul endapan putih 3 mg vanilin + pereaksi Millon hangatkan merah tua

Pereaksi Millon dibuat dari : 10 g Hg dilarutkan dalam HNO3 berasap,bila belum larut hangatkan, setelah larut dan dingin encerkan dengan 20 ml aquadest.
Harjana 32

KARBOHIDRAT

Monosakarida
Glukosa Fruktosa

Gula terbuka aldehida

Glukosa Galaktosa

Disakarida
Sakarosa Laktosa

Gula tertutup keton

Sakarosa Fruktosa

Polisakarida

Amilum
Harjana 33

CH2OH O CH2OH O HO
HO

OH HO

OH

D-glukosa

OH OH OH O

O OH

CH2OH OH

glucose
CH2OH O

Fruktosa

Sakharosa
CH2OH

OH

D-glukosa
O OH OH

OH HO

OH OH

OH HO OH
OH
Harjana

D-galaktosa

fructose

Laktosa

34

REAKSI UMUM
1. Reaksi Molish:

Karbohidrat + larutan -naftol + aliri dg H2SO4 pkt

2. Reaksi Trommer

merah violet

5 mg sample + 2 ml NaOH 0,5 N larut, + 5 tetes larutan Cu-sulfat warna larutan biru. Jika larutan dipanaskan terjadi endapan warna orange sampai merah bata dari Cu2O.

Harjana

35

Harjana

GULA TERBUKA
RCHO + NaHSO3

21. Glukosa
RCH2(OH)SO3Na kuning

RCHO + NaOH dipanasi kuning (polimerisasi)

RCHO + 2 Ag(NH3)2OH perak ammoniakal

RCOONH4 + H20 + 3 NH3 + 2 Ag cermin perak

RCH0 + 2 Cu2+ + NaOH + H20 peraksi Fehling ,, Luff

RCOONa + 4 H+ + Cu20 merah bata

36

laktosa 15 mnt, keton tidak bereaksi atau kalau bereaksi lambat

GULA TERTUTUP
100 mg sample + 10 ml larutan Fehling + 2,5 ml 2 N Caasetat, biarkan 2 menit, saring, filtrate berwarna biru kemudian + sedikit HCl atau asam sulfat encer ad tepat asam (cek dengan lakmus). Didihkan 8 jam, lalu + larutan NaOH sampai alkalis, hangatkan maka sakarosa akan memberikan endapan merah Cu2O.

Harjana

37

22. Fruktosa
1.

Reaksi Saliwanoff: 50 sample + 10 mg resorsin + 10 ml 4 n H2SO4 masak selama 15=20 detik warna merah yang larut dalam amilalkohol

23. Sakarosa
1.

2.

Sakarosa + NaOH tidak kuning. Bila + H2SO4 pkt panasi kuning Setelah dihidrolisa dengan asam akan memberikan reaksi untuk gula terbuka dan fruktosa (Reaksi Saliwanoff)
Harjana 38

24. Laktosa

Slijmzuurreactie: sample dalam beker glas + HNO3 pekat, panasi di atas waterbath sampai volumenya tinggal 1/3. Setelah dingin ditambah dengan aqua aa akan terbentuk endapan Kristal bentuk prisma. Reaksi ini oleh adanya galaktosa 1 mg sample ditaruh di atas obyekglas + 1 tetes difenilhidrazine + 2 3 tetes asam asetat, panasi di atas api kecil timbul warna hijau kehitaman Tidak larut dalam air, di bawah mikroskop terlihat ada hilus dan lamela KI3 biru

25. Amylum

Harjana

39

PEMISAHAN CAMPURAN OBAT

Destilasi Ekstraksi kering Penyaringan Ekstraksi cair-cair berdasar pada perbedaan

kelarutan

Kromatografi
Harjana 40

Ekstraksi cair-cair
1. 2.

3.
4. 5.

Fraksi I Fraksi II Fraksi III Fraksi IV Fraksi V

asam (tak larut dlm air), netral basa lemah basa kuat basa fenolik gol sisa

Harjana

41

Ekstraksi cair-cair
1. 2. 3. 4.

Fraksi I Fraksi II Fraksi III Fraksi IV Fraksi V

5.

asam - eter kloroform- tartrat NaOH - eter dapar salmiak-isopropanol kloroform air
Harjana 42

FRAKSI I FRAKSI II FRAKSI III FRAKSI IV

Benzoat, Salisilat, Barbiturat, kloramfenikol Papaverin, kofein Efedrin Morfin

FRAKSI V

Etanol, Metanol, Parasetamol, Sulfadiazin, penisilin, tetrasiklin, Asetat, Laktat, Sitrat, Tartrat, Askorbat Formalin, Vanilin, Glukosa Fruktosa, Sakarosa, Laktosa, Amylum

Harjana

43