Professional Documents
Culture Documents
VASILICA UNGUREANU
MINIDEFINITIE
Microorganismele desemnate clasic ca aparinnd familiei Streptococcaceae, reprezint un vast ansamblu heterogen de coci : - sferici sau ovali, - gram(+), asezai in lanuri de diferite lungimi sau n perechi, - imobili sau rareori mobili, - nesporulai, - pretenioi nutritiv, - aerobi, cresterea poate fi favorizata de atm. de CO 2, facultativ anaerobi, - catalazo- si oxidazo-negativi, nu reduc nitraii, - fermenteaz glucoza cu producere de ac. lactic, fr gaz.
TAXONOMIE
Dupa 1980 noi criterii de taxonomie molecular au determinat i vor determina modificri importante n clasificare. Astfel, din genul Streptococcus s-au desprins urmtoarele genuri : - Enterococcus streptococii enterici - Lactococcus - streptococii din produsele lactate - Vagococcus streptococii mobili - Abiotrophia streptococii simbiotici dependeni de gruprile thiol, vitamina B6 sau piridoxal). Alte genuri nrudite cu streptococii sunt : - Aerococcus cu specia tip A. viridans - Gemella cu specia tip G. haemolysans - Leuconostoc - cu specia tip L. mesenteroides - Pediococcus - cu specia tip P. cerevisiae - Globicatella - Helcococcus
CLASIFICARE(1)
1. Dupa aspectul hemolizei: - streptococii -hemolitici coloniile sunt nconjurate de o zon bine delimitat de hemoliz complet; diametrul coloniilor, variabil n funcie de grupul antigenic, este de 4-5 ori mai mic dect diametrul zonei de hemoliz gr. A, C, G - streptococii `- hemolitici coloniile sunt nconjurate de o hemoliz incomplet, bordat de o zon ngust de -hemoliz gr. B - streptococii - hemolitici - coloniile sunt nconjurate de o zon de nverzire a mediului, prin hemoliza parial a hematiilor asociat cu reducerea Hb. eritrocitare - streptococii viridans i S. pneumoniae. - streptococii -hemolitici streptococii nehemolitici enterococii i unii streptococi orali
CASIFICARE (2)
2. Pe baza prezenei sau absenei antigenului specific de grup (poliozidul C din peretele celular, cu excepia grupului D la care antigenul specific este acidul glicerol-teicoic) streptococii se mpart n : - Streptococi grupabili Rebeca Lancefield : grupele AW, cu excepia literelor I i J - Streptococi negrupabili lipsii de antigenul specific de grup.
CLASIFICARE (3)
3. Pe baza analizei comparative a secvenelor ARNr 16S s-au conturat 6 grupri de specii, cu anumite corelaii patogenice i ecologice : 3.1. Grupul piogenic predomin specii patogene pentru om i diferite animale. Au semnificaie clinic deosebit pentru om. - SGA , Str. pyogenes -hemolitic, patogen prin excelen pentru om. - SGB, Str. agalactiae `-hemolitic, cu importan deosebit n patologia materno-fetal. - SGC, -hemolitic, determin infecii similare celor post S. pyogenes; specia dysgalactiae cu subspeciile dysgalactiae si equisimilis (poate avea antigen de gr A,C,G); specia equi cu subspeciile equi si zooepidemicus, avnd ca habitat variate animale i omul. - SGG, Str. canis- -hemolitic, determin infecii similare celor post S. pyogenes; avnd ca habitat variate animale. Aceste specii pot determina : - -hemoliza cu colonii minut, care pot exprima antigene de grup 3.2. Grupul anginosus, cu speciile : A, C, G si F (VP +) -hemoliza, sunt negrupabili. - Str. anginosus Microorganismele din acest grup fac parte din microflora oral, a tractului gastrointestinal i genital; pot determina infecii ale tractulu - Str. constellatus respirator superior, ale sistemului nervos central, a tractului digestiv i genito-urinar etc. - Str. intermedius
CLASIFICARE (4)
3.3. Grupul mitis - specii care fac parte din microflora oral si a tractului respirator super - include speciile : - S. mitis - S. oralis - S. sanguinis si parasanguinis (fost sanguis si parasanguis) - S.pneumoniae (dup structura molecular pneumococii sunt mai apropiai de gr. mitis dect de gr. piogenic). 3.4. Grupul salivarius specii care fac parte din microflora oral : - S. thermophilus - S. vestibulis - S. salivarius 3.5. Grupul bovis populeaza tractul intestinal al catorva specii animale si uneori la om; poate determina endocardita i meningita. 3.6. Grupul mutans specii care colonizeaz exclusiv suprafaa dinilor ( placa dentar) la om i unele animale ; sunt streptococii cariogeni.
CARACTERE MORFOTINCTORIALE
- Coci gram (+), sferici sau ovoizi, dispui n perechi (pneumococii) sau n lanuri lungi (din culturi n mediul lichid) sau mai scurte (din culturi pe mediul solid). - Din prelevatele patologice pneumococii se prezint sub forma cocilor gram (+), ovoizi sau lanceolai, dispui n diplo, nconjurai de capsul. - n culturi vechi pot deveni coci gram (-). - n mediile de cultur deficitare streptococii pot prezenta anomalii morfologice : coloraia gram va putea releva coci gram (+) i gram (-), celulele pot fi grupate n lanuri i pot prezenta aspecte normale, cocoide i ovalare, precum i forme bacilare sau chiar globuloase.
CARACTERE DE CULTURA
1.Aspectul creterii : pe mediile solide : - colonii S (smooth) mucoide, matt i glossy determinate de tulpini n ordinea scderii virulenei - colonii R(rough)-determinate de tulpini mai puin virulente - n mediile lichide : streptococii cresc - cu depozit i supernatant clar - cu depozit i tulburare omogen a mediului ( n cazul tulpinilor f. virulente sau streptococilor de grup B si D). 2. Aspectul hemolizei: 2.1. Pe geloza-snge de oaie streptococii dezvolt : - hemoliza (gr. A,C,G si uneori D) - hemoliza ` (gr. B) - hemoliza (str. viridans, pneumococii, streptococii din gr. D) - hemoliza (str. nehemolitici gr. D) 2.2. Pe geloza cu snge de cal unii streptococi hemoliza . -hemolitici pot determina
CARACTERE BIOCHIMICE
Aceste caractere sunt importante pentru identificarea streptococilor negrupabili i a enterococilor, ca de ex. : - fermentarea zaharurilor - hidroliza amidonului - hidroliza argininei - hidroliza esculinei - cresterea pe mediu cu bilesculin ( 40% bila) - cresterea pe mediu cu 6,5% Na Cl - dezvoltarea pe mediu cu trifenil tetrazolium clorid (TTC) - dezvoltarea pe mediu cu telurit de K
in vivo IDR in vitro TTL, TIM Lx A HAP ELISA; RIA RFC ELISA in vivo IDR in vitro TTL, TIM
2. DN-aza B
Ac anti DN-aza B
3. SK
Ac. anti SK
5. Eritrotoxina
6. Proteinaza
Ac. antiproteinaza
FACTORII DE VIRULENTA
1. F. aderen : prot. M fibrilar
- ALT - prot. de legare a fibronectinei (prot. F) 2. F. de invazie: - hialuronidaza - proteaza - streptokinaza 3. F. antifagocitari: - prot. M - capsula de ac. hialuronic - C5a peptidaza - leucocidinele SLO i SLS proteine secretate de streptococ, care omoar fagocitele
2. 3. 4.
In infectiile determinate de streptococii -hemolitici produsele patologice ce pot fi recoltate sunt f. variate : - exsudat faringian si nazal - sputa - l.c.r., lichid pleural, pericardic, peritoneal, periarticular - puroi - secreii vaginale, conjunctivale si auriculare - urina - snge etc. Prelevarea este difereniat pentru fiecare produs patologic n parte, cu respectarea normelor de asepsie. Recoltarea exsudatului faringian se efectueaz cu ajutorul unui tampon de vat montat pe o tij de lemn, sticl sau metal inoxidabil steril. Sputa necesit o preparare obligatorie : 2-3 splri n ser fiziologic steril pentru ndepartarea florei de asociaie oro-faringian.
STREPTOCOCI
TEST LA BACITRACINA
STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE
Hemoliza Test la optochin
DIAGNOSTICUL IMUNOLOGIC
1. Investigarea rspunsului imun umoral 1.1.Decelarea anticorpilor fa de antigenele exocelulare:ASLO i Anti DN -az B, metodele cele mai frecvent folosite, care au la baz o reacie de neutralizare, caracterizate prin capacitatea anticorpilor din serul de bolnav de a neutraliza efectul biologic activ al antigenului corespunztor, care nu va mai aciona asupra substratului introdus n reacie. Titrarea acestor anticorpi are importan diagnostic n infeciile acute streptococice, ca i n puseele acute ale complicaiilor tardive nesupurative, decelarea Ac. ASLO avnd i valoare prognostic i de evaluare a eficacitii tratamentului, iar Ac. anti DN -az B au valoare diagnostic n infeciile streptococice cutanate i n complicaiile acestora GNA. Mai puin utilizat este decelarea celorlali Ac. antiproteine exocelulare: anti Hialuronidaz, anti Streptokinaz i anti NAD-az. 1.2.Decelarea anticorpilor fa de antigene streptococice endocelulare: ac. anti M, anti MAP i anti ACHO. Metodele cele m ai utilizate pentru titrarea acestor anticorpi sunt : Lx A i HAP; nivele crescute ale acestor anticorpi sunt ntlnite n special n complicaiile tardive poststreptococice, susinnd teoriile privind patogenia autoimun a acestor complicaii. 2. Decelarea rspunsului imun celular la diverse antigene streptococice endo- i exocelulare prin metode in vitro sau in vivo nu este realizat dect n scop de cercetare sau n cadrul unor contexte eseniale clinice (alergie sau sindroame cronice).
REACTIA ASLO
- Metoda Rantz i Randeall modificat - Principiu : reacie de neutralizare, bazat pe capacitate a Ac ASLO de a neutraliza activitatea hemolitic a SLO - Tehnica de lucru : - Tratarea serurilor de cercetat pentru ndeprtarea inhibitorilor nespecifici ai SLO: 0,2 ml ser de cercetat + 0,7 ml rivanol 0,4% agitare, 10 min. la temp. cam.; se adug apoi 1,1 ml soluie clorurat izoton - Centrifugare supernatantul reprezint diluia 1 / 10 a serului de cercetat - Se realizeaz diluia 1 / 100 : 0,5 ml din dil. 1/10 + 4,5 ml soluie clorurat izoton - se realizeaz diluia 1 / 500 : 1 ml din dil. 1/100 + 4 ml soluie clorurat izoton - din diluiile 1/100 i 1/500 se repartizeaz n tuburi, conform tabelului - Pstrare la +40C peste noapte. - Citirea i interpretarea rezultatelor : titrul este dat de diluia cea mai mare de ser care a inhibat total activitatea hemolitic a SLO. Titrul normal este considerat pn la 200 ui / ml
REACTIA ASLO*
Dilutii ser Ser bolnav diluat Sol. clorurata izotonica SLO 1 u c / ml 0,8 0,2 0,5
1/100 0,6 0,4 0,5 0,4 0,6 0,5 0,3 0,7 0,5 1 0,5 0,8 0,2 0,5
1/500 0,6 0,4 0,5 0,4 0,6 0,5 0,2 0,8 0,5
M. SLO 1 0,5
Agitare, 15 min. la 37oC Hematii iepure 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Agitare, 45 min. la 37oC Titru ui ASLO/ml 12 50 100 125 166 250 333 500 625 833 1250 2500 hemoliz a absenta hemoliz a
* Pentru scopuri uzuale clinice se poate folosi o schema redusa, cu 5 tuburi, reprezentata de coloanele marcate cu rosu