Fac. Cs. Qs. Dpto. De FARMACIA LABORATORIO DE FARMACOLOGA II Q.F.

BENEMRITA UNIVERSIDAD AUTNOMA DE PUEBLA FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS LICENCIATURA: QUMICO FARMACOBILOGO

REA ESPECFICA DE: FARMACIA

NOMBRE DE LA ASIGNATURA: CDIGO: FECHA DE ELABORACIN: NIVEL EN EL MAPA CURRICULAR: TIPO DE ASIGNATURA:

FARMACOLOGA II FAR 532L MARZO 2001 FORMATIVO CIENCIA DISCIPLINARIA

PROFESORES QUE PARTICIPARON EN SU ELABORACIN: DC. ISABEL MARTINEZ GARCIA MC. DANIEL ILHUICAMINA LIMON PEREZ DE LEON MC. FELIX LUNA MORALES

HORAS DE TEORA:

HORAS PRCTICA: 2

CRDITOS:

Fac. Cs. Qs. Dpto. De FARMACIA LABORATORIO DE FARMACOLOGA II Q.F.B

NDICE

PRCTICA No.1 NEUROTRANSMISIN. 1 PRCTICA No. 2 EVALUACIN DE DROGAS ANSIOLTICAS 3 PRCTICA No. 3 ANTAGONISMO FARMACOLGICO EN TEJIDO AISLADO. 11 PRCTICA No. 4 ESTIMULANTES SNC 15 PRCTICA No. 5 EFECTO DEL CIDO ACETILSALICLICO EN EL TIEMPO DE SANGRADO. 20 PRCTICA No. 6 ANTICONVULSIVANTES.. 23 PRCTICA No. 7 ANALGESIA. 29 PRACTICA No 8 EFECTOS DE LA ADMINISTRACIN DE ESTRGENOS SOBRE RGANOS REPRODUCTORES.. 32 PRCTICA No. 9 HIPOGLUCEMIANTES.. 36

PRCTICA No.1 NEUROTRANSMISIN

INTRODUCCIN
En el estudio de la biologa celular neuronal hemos visto que las neuronas utilizan dos tipos de canales para la comunicacin intracelular: los canales de reposo que producen el potencial de reposo y los canales activados por voltaje que producen el potencial de accin. Ahora abordamos la transmisin sinptica, el proceso de comunicacin entre las clulas, donde estudiaremos los dos tipos de canales adicionales: los canales en la unin ntima y los activados por ligandos. Durante el desarrollo individual, las neuronas establecen conexiones sinpticas muy especficas con otras neuronas. La percepcin, la emocin y el aprendizaje se basan en la especificidad de las conexiones sinpticas que se realizan entre las neuronas durante su desarrollo. Una neurona realiza un promedio de 1.000 conexiones sinpticas y recibe muchas ms. Por lo tanto, el encfalo humano, que contiene alrededor de 1011 neuronas, establece 1014 conexiones. Afortunadamente, mediante el examen detallado de unas cuantas sinapsis, podemos alcanzar una comprensin global de toda la transmisin sinptica general. La sinapsis es el lugar de interaccin entre dos clulas, est constituida por tres elementos: la terminal presinptica, la terminal postsinptica y una zona de aposicin (hendidura sinptica). En virtud de sus zonas de aposicin, las sinapsis se clasifican en dos grupos principales: elctrica y qumica. En la sinapsis elctrica la hendidura sinptica es pequea, y la corriente generada por el potencial de accin en la neurona presinptica pasa directamente hacia la clula postsinptica gracias a los canales de unin especializados, denominados canales de la unin ntima. En la sinapsis qumica la hendidura sinptica es mayor y no existe ste tipo de canales. Un cambio en el potencial de membrana en la clula presinptica conduce a la liberacin de un transmisor qumico desde la terminal presinptica. El transmisor qumico difunde a travs de la hendidura sinptica unindose a las molculas receptor, situadas en la membrana celular postsinptica, abriendo los canales inicos a travs de los cuales para corriente. El receptor del transmisor puede clasificarse en dos grupos fundamentales, en virtud de cmo controle el receptor de un canal inico de la clula posinptica. Uno de los tipos de Receptores forma una estructura comn con un canal inico que controla

directamente. El segundo tipo, acta directamente en el canal por medio del segundo mensajero y otras reacciones moleculares internas en la clula postsinptica. A su vez, a cada uno de estos grupos pertenecen mltiples tipos de receptores, debido a las diferentes combinaciones de las molculas isomrficas. Ambos grupos de receptores pueden producir excitacin e inhibicin. El sentido de la accin sinptica depender de la interaccin receptor-transmisor. No de las propiedades del transmisor, pues el mismo transmisor puede producir efectos diferentes dependiendo del subtipo receptorial con el que interactu. Como en el caso del glutamato, que es el transmisor qumico enceflico excitador por excelencia, que produce diferentes acciones segn el tipo de receptor glutametrgico al que se una. No obstante, a pesar de la pequea cantidad de transmisores que hay, son capaces de producir una gran variedad de acciones sinpticas. Como consecuencia de la complejidad estructural y de la arquitectura molecular de las sinapsis qumicas, pueden existir gran variedad de enfermedades debidas a la alteracin de ste tipo de sinapsis.

OBJETIVO
Conocer los fenmenos elctricos y qumicos que favorecen o bloquean la neurotransmisin.

PROCEDIMIENTO Y CUESTIONARIO
Empleando el programa interactivo

NEURON, explora Y RESPONDE :

1. La participacin de los canales inicos en la generacin del potencial de accin 2. El mecanismo de los canales inicos sensibles a ligando 3. El mecanismo de los canales inicos sensibles a voltaje 4. El origen del potencial de membrana en reposo 5. El potencial de accin postsinptico inhibitorio 6. El potencial de accin postsinptico excitatorio 7. El mecanismo de libracin del neurotransmisor 8. El mecanismo de segundos mensajeros 9. El mecanismo de recaptacin de neurotransmisor 10. Como sale calcio intracelular.

Investigacin

A) Realiza un esquema en donde expliques e indiques como se incrementa el calcio. B) Se trata de una frmaco que incrementa la salida de calcio intracelular. Consideras que ayudara a mantener la presin arterial en un paciente que tenga hipertensin arterial. C) Que diseo experimental realizaras para estudiar un frmaco que bloquea la recaptura de Dopamina. D) Que utilidad tiene un frmaco que bloquea la recaptura de Noradrenalina E) Que utilidad clnica tiene un frmaco que bloquea la recaptura de GABA. F) Explica los efectos perifricos de un frmaco que bloquea los receptores muscarinicos. H) Que utilidad tendra una frmaco que bloquea la enzima biotransformante de la acetilcolina (anticolinesterasico). i) Explica las diferencias farmacologicas y farmacoterapueticas de un inhibidor de la acetilcolinesterasa reversible de uno no reversible. J) Si bloqueamos los receptores 2 presinptico, cuales serian las consecuencias sobre los niveles de noradrenalina y sus efectos perifricos. K) Se trata de un frmaco que bloquea los receptores i y 2 . Explica y esquemtica las secuencias de sus efectos farmacologicos y que utilidad tendria.

PRCTICA No. 2 EVALUACIN DE DROGAS ANSIOLTICAS

OBJETIVO Demostrar el efecto ansioltico del diacepam en el modelo de Vogel . Demostrar el efecto ansioltico del diacepam en el modelo elevado en cruz INTRODUCCIN En el hombre los desrdenes mentales estn asociados con el estrs, la ansiedad y la depresin. En un estado de ansiedad ocurren diversos cambios fisiolgicos en el organismo, como es el caso, de sudacin, taquicarda, temor, ira, tristeza, alegra, trastornos psico-motores y trastornos de pnico, agorafobia y otros tipos de fobia. Actualmente es necesario que se administre una serie de frmacos para contrarrestar la ansiedad. Se sabe que al ao se produce 8000 toneladas de benzodiacepinas por lo que son necesarios modelos experimentales para evaluar los nuevos ansiolticos. Adems la administracin de algunas benzodiacepinas o nuevos ansiolticos en algn ncleo del SNC nos dara informacin sobre la participacin de diferentes ncleos en el estado de ansiedad. CONOCIMIENTOS PREVIOS. 9 Conocimiento del manejo y cuidado de los animales de laboratorio. 9 Conocimiento de la administracin subcutnea e intraperitoneal . 9 Conocimiento de los frmacos ansiolticos. DESARROLLO DE LA PRCTICA Material 4 jeringas de 1ml Una balanza para roedores

Frmaco: Diacepam (VALIUM 10 mg/2ml ) Soluciones: Solucin Salina Isotnica NaCl al 0.9 %

MODELO DE VOGEL
Este modelo esta constituido por una caja de acrlico de 33 cm de largo, 25 cm de ancho y 25 cm de altura adems de que cuenta con un cubo posterior de 8 cm de ancho por 11 cm de altura con un soporte de 8cm de largo formando un ngulo de 60. En la parte superior del cubo se encuentra un bebedero que esta conectado a un electrodo de referencia (corriente). Otro electrodo se conecta a una rejilla que esta localizada en la parte inferior de la caja. Cuando el roedor sorbe agua cada 20 veces recibe un choque elctrico de 0.7 mA/1seg que es regulado mediante un generador que a su vez se encuentra conectado a un contador de pulsos, eventos y a una medidor de voltaje (0.5, 0. 6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0 mA).

DIAGRAMA DE TRABAJO PARA LA ADMINISTRACIN SISTMICA DE ANSIOLTICOS (MODELO DE VOGEL)

SUJETOS DE EXPERIMENTACIN CONTROL SUPRESIN DE AGUA X 48 HRS PROBLEMA

ADMINISTRACIN DE DIACEPAM

EVALUACIN DE PARAMETROS

RESULTADOS

LABERINTO ELEVADO EN CRUZ

El proceso de ansiedad se realizar en un laberinto T el cual esta compuesto de 4 brazos con una longitud de 50 cm cada uno: 2 brazos cerrados, con paredes de 15 cm, y 2 brazos abiertos. El centro del laberinto mide 10 cm de largo por 10 cm de ancho y la base del laberinto se encuentra a un metro del nivel del piso. (Figura 1 y 2)

FIGURA No. 1

FIGURA No. 2

DIAGRAMA DE TRABAJO PARA LA ADMINISTRACIN SISTMICA DE ANSIOLITICOS ( LABERINTO ELEVADO EN CRUZ )

SUJETOS DE EXPERIMENTACIN

CONTROL ADAPTACIN AL LABERINTO

PROBLEMA

ADMINISTRACIN DE ANSIOLTICOS

EVALUACIN DE PARAMETROS

RESULTADOS

PROCEDIMIENTO Para ambos modelos de experimentacin, se emplearn ratas macho de la cepa Wistar, de peso 200- 250 gr, provenientes del Bioterio Claude Bernard de esta Universidad (MODELO DE VOGEL) Nota: Antes de la prueba de situacin de conflicto (Modelo Vogel) se privarn de agua por 48 hrs, adems de mantenerse en un ciclo luz-oscuridad de 12/12 hrs/da. 1. Al grupo 1 (control) se le administrar solucin salina isotnica a razn de 0.1ml /10gr de peso por va subcutnea. Al grupo 2 (problema) se les administrar Diacepam a una dosis de 0.8 mg/Kg por va subcutnea y a una concentracin de 10 mg/2 ml. 2. Se administrar 1 l en el hipocampo SSI al grupo control y 1 l de diacepam (1g/l) al grupo problema y se efectuar la prueba de Vogel 3 minutos despus de la administracin. 3.- Evaluar los siguientes parmetros durante 20 minutos: A) Tiempo de Latencia al primer sorbo en segundos (TL1S) B) Nmero de pulsos (NP) C) Nmero de eventos (NE) 4.- Recopilar los datos por seccin y llenar la tabla No.1 5.- Graficar los parmetros contra frmaco en forma de barras. TABLA No. 1 RATA TL1S (seg) NP NE

(MODELO LABERINTO ELEVADO EN CRUZ) Nota: La adaptacin al laberinto se realizar un da antes de comenzar los ensayos. El objetivo ser familiarizar al roedor con el laberinto elevado en cruz . El procedimiento ser el siguiente: a. Se colocar al roedor en el centro del laberinto cubrindolo con un contenedor. b. b) Al retirar el contenedor la rata quedar liberada para llevar a cabo la actividad exploratoria en el laberinto durante un tiempo de 10 minutos, este procedimiento se repetir para cada roedor. 1. Al grupo control se le administrar solucin salina y al grupo problema el ansioltico a evaluar, ambos por va subcutnea y se esperar 3 minutos antes de efectuar el ensayo. 2. Por otra parte a otro grupo se le administrar 1 g/l del ansioltico a evaluar y a otro grupo SSI ambos en el hipocampo y despus de 3 minutos de la aplicacin experimental se tomarn los siguientes parmetros experimentales para cada rata durante 15min. Nmero de veces al brazo abierto = # VBA Nmero de veces al brazo cerrado =# VBC Tiempo de latencia al brazo abierto= TLBA Tiempo de latencia al brazo cerrado =TLBC Tiempo de persistencia en el brazo abierto =TPBA Tiempo de persistencia en el brazo cerrado =TPBC

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3. Llenar la tabla No. 2 con sus datos

TABLA No. 2
RATA TLBA TLBC TPBA TPBC #VBA #VBC

4. Se recopilarn los datos por seccin, para despus graficar los resultados en forma de barras parmetro contra frmaco CUESTIONARIO 1. Explica el mecanismo de accin de las Benzodiacepinas. 2. Qu otro modelo propones para evaluar los ansiolticos? 3. Como se clasifican los ansiolticos? 4. Que estructuras del SNC estn relacionadas con la ansiedad? 5. Como se define a la ansiedad? 6. Menciona las propiedades farmacocinticas de: A) Diacepam B) Pracepam C) Clordiacepxido

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PRCTICA No. 3
ANTAGONISMO FARMACOLGICO EN TEJIDO AISLADO
OBJETIVOS Analizar las caractersticas del uso de las preparaciones en tejido aislado para el anlisis del antagonismo farmacolgico. Realizar la curva dosis respuesta de un agonista con el antagonista y encontrar el efecto mximo, en ambas curvas. INTRODUCCIN Una de las caractersticas importantes de la prescripcin mdica es la administracin de frmacos en forma conjunta. Sin embargo la interaccin de esos frmacos pudiese ser benfica o en el ltimo de los casos inocua. El estudio de esas interacciones se puede realizar a diferentes niveles como es el caso en animal integro, en una preparacin aislada o en su defecto en tejido o en cultivo de clulas. El estudio de la interaccin pudiese ser con la finalidad de bloquear un efecto endgeno exagerado, por una determinada patologa o en su defecto aumentar la capacidad fisiolgica de un tejido. Las interacciones son de tipo sinrgico o antagnico. En el primer caso se trata de que dos o ms frmacos produzcan un efecto mayor que cuando se administran por s solas. En el caso del antagonismo se trata del bloqueo del efecto, desde un punto de vista fisiolgico, farmacolgico o qumico. El bloqueo fisiolgico es contrarrestar el efecto de un estado fisiolgico mediante la administracin de frmacos que ejercen acciones diferentes. En el caso de la interaccin qumica es por medio de la interaccin de frmacos pero solo desde el punto de vista qumico. Por ltimo en el bloqueo farmacolgico se trata de administrar un frmaco que se una al sitio de accin de la sustancia endgena y con ello disminuir el efecto agonista.

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DESARROLLO DE LA PRCTICA Material 9 Quimgrafo 9 Estuche de Diseccin 9 6 vasos de precipitado de 1000 ml 9 6 vasos de precipitado de 100 ml 9 6 pipetas de 1 ml 9 Cajas petri ( tapa o base ) 9 Bomba de aire 9 Termmetro Soluciones Acetilcolina 50 mg/5 ml y diluir 1:2 siete veces Histamina 50 mg/5mL y diluir 1:2 siete veces 1.5 lt de Solucin Hartman por equipo. PROCEDIMIENTO 1. Prepare y monte el ilen de rata fijando uno de los extremos en el alambre de tapn de hule, y el otro extremo a la pajilla del quimgrafo. 2. Llene la cmara con solucin Hartman hasta un nivel donde cubra todo el msculo. 3. Administre la concentracin inicial de acetilcolina 0.1 mL por cada 10 ml de solucin Hartman. Observe que la pajilla va subiendo hasta una meseta. Contine registrando y en este punto agregue 0.1 ml de histamina (1mg/2ml) y observe como disminuye la respuesta. Agregue la concentracin mas diluida de acetilcolina, registre por 10 seg y contine agregando las subsecuentes concentraciones de acetilcolina. Se detiene el quimgrafo y se retira la pajilla, se drena la cmara con nueva solucin a 370C y se lava el intestino dos veces, dejando entre cada lavado 1 minuto. 4. Se repiten estos mismos pasos hasta que se complete las concentraciones descritas. 5. Tabula tus registros en la Tabla No. 1 los registros de todo el grupo. Sujetos de experimentacin Rata para toda la seccin

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RESULTADOS TABLA No. 1 Frmaco Concentracin Logaritmo Respuesta Respuesta g/l Conc. (mm) (mm)

Acetilcolina

Acetilcolina + histamina

DISCUSIN En relacin a la revisin bibliogrfica del tema y de los resultados obtenidos discuta lo resultados obtenidos. Analice cada uno de los elementos de la curva dosis respuesta, del frmaco agonista y del antagonismo. Analice adems la importancia de este tipo de experimentos farmacolgicos, en la bsqueda de nuevos frmacos.

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CUESTIONARIO 1. Cules son las acciones fisiolgicas de la acetilcolina? 2. Por qu la histamina disminuye la contraccin del msculo liso? 3. Cmo acta la histamina y su relacin con sus usos clnicos? 4. Por qu al aumentar la concentracin de acetilcolina aun no se revirti el efecto de la atropina? 5. Por qu la acetilcolina a concentraciones altas si revirti el efecto de la histamina? 6. Realiza un esquema de la accin de la acetilcolina. 7. La atropina ejerce su accin sobre los receptores muscarnicos. Qu son estos receptores? cuntos tipos existen? Y cules son sus mecanismos de transduccin de seales? 8.- Si la concentracin de histamina es demasiada, explica que est sucediendo a nivel de receptores y sus efectos clnicos.

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PRCTICA NO. 4
ESTIMULANTES SISTEMA NERVIOSO CENTRAL
OBJETIVO Demostrar el efecto estimulante de anfetamina, cafena y L-dopa en campo cerrado. Demostrar el efecto estimulante de anfetamina, cafena y L-dopa en campo abierto. INTRODUCCIN Los estimulantes del SNC incluyen sustancias como las anfetaminas, la cocana y el metilfenidato. Si bien muchos estimulantes comparten una estructura que se asemeja a la anfetamina, esto no siempre es as. Por tanto existen, si bien existen muchas similitudes farmacolgicas entre los diversos compuestos, cada estimulante tiene efectos que son nicos. El uso crnico de niveles relativamente bajos de un estimulante, as como altas dosis en forma aguda pueden dar como resultado un sndrome parecido a una psicosis. La agitacin y la paranoia son caractersticas y pueden acompaarse de alucinaciones tctiles de insectos arrastrndose debajo de la piel. Este sndrome se ve a menudo en personas que toman estimulantes para mantener un rendimiento laboral adecuado. Las evidencias experimentales demuestran que todos los estimulantes bloquean en forma aguda la recaptacin de los neurotransmisores con monoaminas y algunos tambin causan la liberacin de estas sustancias qumicas. Con el uso prolongado se produce deplecin de los neurotransmisores y la regulacin ascendente compensadora del nmero de los receptores, con lo cual los sistemas se vuelven ms sensibles. Se ha sugerido el tratamiento de la intoxicacin con estimulantes con agentes antipsicticos, sobre la base de los cambios neuroqumicos en el cerebro, pero es preferible proporcionar sostn clnico y proteccin. La acidificacin de la orina en teora tiene valor pero no ha sido til en la prctica para incrementar la eliminacin de los estimulantes.

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La cafena es el estimulante mas consumido en el mundo. Es capaz de incrementar el estado de alerta y el estado de nimo, potenciar el sentimiento de bienestar, facilitar el sentimiento de bienestar, facilitar las tareas psicomotoras, aumentar la motivacin del trabajo, la energa y la concentracin y retrasar el inicio del sueo. DESARROLLO DE LA PRCTICA Material Caja de actividad motora en campo cerrado 3 Jeringas de 1 mL

Soluciones Solucin Salina Isotnica NaCl (0.9%)

Frmacos Cafena Anfetamina (Clobenzorex) L-dopa Haloperidol

Sujetos de experimentacin Ratas macho cepa Wistar

CAJAS DE ACTIVIDAD MOTORA EN CAMPO CERRADO Se representa con una caja de acrlico de color negro, en la parte inferior se encuentra una rejilla y en las paredes de la caja estn distribuidos ocho fotodiodos por los cuales se hace pasar una haz de luz a lo ancho de caja. Cada vez que la trayectoria de la luz se interrumpa por el movimiento del animal se contabiliza en un dispositivo electrnico; este dispositivo se encuentra adaptado a la caja y los datos obtenidos se almacenan en la memoria de la caja para su posterior lectura y gratificacin al trmino del experimento.

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PROCEDIMIENTO 1. A una rata se le administra intraperitoneal. 2. Transcurridos 20 minutos despus de la administracin del frmaco la rata se coloca en la caja de campo cerrado por 6 periodos de 10 minutos. 3. Al finalizar los seis periodos se anotan el nmero de cuentas acumuladas y se anotan en la tabla No. 1. 4. A otra rata se le administra 5 mg/Kg (4 mg/mL) de anfetamina va subcutnea. 5. Transcurridos 10 minutos despus de la administracin del frmaco la rata se coloca en la caja de campo cerrado por 6 periodos de 10 minutos y se anotan el nmero de cuentas acumuladas. 6. A otra rata se le administra 200 mg/Kg de L-dopa va oral. 7. Transcurridos 15 minutos despus de la administracin del frmaco la rata se coloca en la caja de campo cerrado por 6 periodos de 10 minutos y se anotan el nmero de cuentas acumuladas. 8. A otra rata se le administra el haloperidol (50mg/1mL) un depresor del SNC por va intraperitoneal. 9. Transcurridos 15 minutos despus de la administracin del frmaco la rata se coloca en la caja de campo cerrado por 6 periodos de 10 minutos y se anotan el nmero de cuentas acumuladas. 10. Lo mismo se hace para la rata control solo que en este caso se administra solucin salina isotnica. 5 mg/Kg (10mg/1mL) de cafena va

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CAJAS DE ACTIVIDAD MOTORA EN CAMPO ABIERTO PROCEDIMIENTO 1. A una rata se le administra 5 mg/Kg (10mg/1mL) de cafena por va subcutnea. 2. La caja se debe de dividir en 9 partes iguales y 4 compaeros deben estar colocados a los lados de la caja como se muestra en la figura:

3. Transcurridos 20 minutos despus de la administracin del frmaco se coloca la rata en la caja de campo abierto durante 1 hora y se observar lo siguiente: NC: Nmero de cuadrantes visitados NA: Nmero de acilaciones NR: Nmero de rearing

4. El mismo procedimiento se hace para las ratas de anfetamina (5 mg/Kg), L-dopa (200 mg/Kg) y solucin salina isotnica solo que en estos casos se deja transcurrir 10 minutos despus de la administracin. 5. Los resultados se anotan en la tabla 2. RESULTADOS TABLA NO. 1 Periodos Rata con cafena Rata con anfetamina Rata con L10 minutos 20 minutos 30 minutos 40 minutos 50 minutos 60 minutos

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dopa Haloperidol Rata con SSI TABLA NO. 2 Ratas Cafena Anfetamina L-dopa Haloperidol SSI NE NA NR

CUESTIONARIO 1. Grafica tus parmetros contra el frmaco. 2. Explica el mecanismo de accin de los estimulantes utilizados. 3. Menciona las propiedades fisicoqumicas de los frmacos utilizados. 4. Cul es la utilidad clnica de los estimulantes del SNC? 5. Cules son los protocolos clnicos para la administracin de los estimulantes?

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PRCTICA NO. 5
EFECTO DEL CIDO ACETILSALICLICO EN EL TIEMPO DE SANGRADO

OBJETIVO Determinar el efecto del cido acetilsaliclico en el tiempo de sangrado. INTRODUCCIN Cuando se produce la apertura de un vaso sanguneo la sangre se derrama, pero por lo general dicha hemorragia cesa espontneamente mediante un mecanismo fisiolgico denominado hemostasia, que es la detencin espontnea de la hemorragia de vasos sanguneos daados. En esta intervienen tres procesos la contraccin de los vasos, la adherencia y agregacin plaquetaria y la coagulacin sangunea. Un mtodo de estudio para evaluar la fase vascular y plaquetaria de la hemostasia es el tiempo de sangra. Se determina midiendo el tiempo que transcurre desde el momento en que se hace una puncin (dedo u oreja) hasta que la sangre deja de brotar de la herida. Se consideran normales los comprendidos entre 1 y 3 minutos. El cido acetilsaliclico inhibe la liberacin de ADP de las plaquetas y la agregacin plaquetaria por acetilacin de las enzimas plaquetarias que sintetizan los precursores de las prostaglandinas y del tromboxano A2 (sustancia que estimula ms la agregacin). CONOCIMIENTOS PREVIOS 9 Mecanismos de coagulacin de la sangre. 9 Acciones cardiovasculares de los salicilatos. 9 Mtodo de Duke.

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DESARROLLO DE LA PRCTICA Material 9 Cronmetro 9 Una lanceta estril y desechable 9 Papel filtro 9 Torundas de algodn impregnadas de alcohol 9 2 tabletas de cido acetilsaliclico de 500mg PROCEDIMIENTO 1. Determinar en 5 voluntarios sanos la duracin de tiempo de sangrado (valores controles). Nota: Los voluntarios sanos no deben ingerir alimentos cuando menos cinco horas antes de la administracin del cido acetilsaliclico. 2. Administrar a cada uno de los voluntarios dos tabletas de AAS (1g). 3. Transcurrida 4 horas, determinar nuevamente en los cinco voluntarios la duracin del tiempo de sangrado. 4. Anotar los resultados en tabla No. 1 5. Graficar sus resultados del promedio del tiempo de sangrado de sus valores controles y los valores problema en forma de barra.

TABLA No. 1

TIEMPO DE SANGRADO
VOLUNTARIO
1 2 3 4 5 Promedio

VALORES CONTROLES

DESPUS DE LA ADMINISTRACIN DE AAS

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CUESTIONARIO 1. Cules son las utilidades del AAS adems de analgsico? 2. Cul es el mecanismo de accin del AAS como analgsico, antipirtico y antiinflamatorio? 3. Cmo afecta el AAS a nivel cardiovascular? 4. Cules son los efectos txicos del AAS? 5. Investigar modelos experimentales para valorar Analgesia Antipiresis 6. De sus datos obtenidos. Cul es el efecto que observa sobre el tiempo de sangra? y Explique a que se debe? 7. Cmo acta el AAS sobre la coagulacin? (Esquema)

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PRCTICA No. 6
ANTICONVULSIVANTES
OBJETIVOS Evaluar la combinacin de drogas antiepilpticas administradas en el hipocampo de rata sobre crisis convulsivas de tipo generalizadas inducidas por pentilentetrazol. Demostrar el efecto anticonvulsivo del Diazepam biolgico. Conocer las caractersticas de las crisis convulsivas en un modelo

INTRODUCCIN La epilepsia es una enfermedad que afecta entre 0.5 -1.0 % de la poblacin en general. Su manifestacin ms importante es la presencia de crisis, muchas veces convulsivas. Las convulsiones epilpticas suelen producir alteracin transitoria del conocimiento, dejan al individuo en riesgo de lesin corporal y a veces obstaculizan las actividades de estudio y trabajo de ste. El trmino convulsin se refiere a un trastorno transitorio de la conducta, causado por la activacin desordenada, sincrnica y rtmica de poblaciones enteras de neuronas cerebrales. Si bien se sabe, no se cuenta con una profilaxis eficaz, ni con mtodos de curacin, pero si se cuenta con una serie de frmacos disponibles que inhiben las convulsiones, entre los cuales encontramos a los barbitricos anticonvulsivos, hidantonas, desoxibarbitricos, iminoestilbenos, succinimidas, benzodiacepinas, etc. Como la epilepsia es una enfermedad frecuente y que tiene alteraciones secundarias en algunos individuos, no es extrao que la investigacin sea intensa en esta rama de la Farmacologa y se busquen nuevos frmacos con propiedades anticonvulsivas.

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CONOCIMIENTOS PREVIOS. 9 Conocimiento del manejo y cuidado de los animales de laboratorio 9 Conocimiento de la administracin intrahipocampal e intraperitoneal . 9 Conocimiento de los anticonvulsivos.

DESARROLLO DE LA PRCTICA Material. Ratas 4 jeringas de 1ml Balanza para roedores

Soluciones. Pentilentetrazol 100 mg/5ml Diazepam 10 mg/2ml Difenilhidantona Solucin fisiolgica

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DIAGRAMA DE TRABAJO PARA LA ADMINISTRACIN DE ANTIEPILPTICOS

Sujetos de experimentacin

Ciruga estereotxica

Grupo control
SSI

Grupo problema
administracin anticonvulsivantes

Administracin sistmica del Convulsionante

Evaluacin Conductual

Evaluacin del implante

Reportar y Graficar

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PROCEDIMIENTO
Nota: Se emplearn ratas adultas de la cepa Wistar de peso 200-250 g, provenientes del bioterio Claude Bernard de esta Universidad. ADMINISTRACION LOCAL 1. A un grupo de ratas se les realizar la ciruga estereotxica, despus de la ciruga los animales sern colocados individualmente en cajas esperando un lapso de 5 das para su recuperacin, las cuales se dividirn en dos grupos: A) Al primer grupo (control) se le administrar en el hipocampo 1 l SSI y despus de 3 minutos se administrar el convulsionante (Pentilentetrazol) por va intraperitoneal a una dosis de 37 mg/kg de peso. B) Al segundo grupo (problema) se le administrar en el hipocampo el anticonvulsivante (Diacepam 1l) a una concentracin de 1g/l esperando 3 minutos para administrar el convulsionante (Pentilentetrazol) por va i.p. a una dosis de 37 mg/kg de peso ADMINISTRACIN SISTMICA Por otra parte: 1. A otro grupo de ratas (control) se le administrar SSI por va intraperitoneal a razn de 0.1ml/10g de peso, se esperarn 3 minutos y se les administrar el convulsionante (Pentilentetrazol) por va i.p., a una dosis de 37 mg/Kg de peso. 2. Finalmente a otro grupo experimental se le administrar el anticonvulsivante Diacepam a una dosis de 1mg/Kg y a una concentracin de 10 mg/2 ml por va intraperitoneal. A otro animal administrarle en las mismas condiciones 10 mg/kg de difenilhidantoina. 3. Evaluar los siguientes parmetros durante un tiempo de 15 minutos: A) Nmero de sacudidas (NS) o convulsiones mioclnicas, estas sacudidas son nicas, breves y que van de leves a violentas de una parte o de todo el cuerpo sin prdida de la conciencia. B) Nmero de convulsiones tnico-clnicas (NCTC). Contracciones musculares tnicas generalizadas con flexin de las extremidades

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superiores y extensin forzada de las extremidades inferiores, seguidas por contracciones rtmicas de los miembros. Usualmente duran varios minutos y hay prdida de la conciencia. C) D) E) Duracin de cada convulsin tnico-clnica (DCTC). Tiempo de latencia a la primera sacudida mioclnica (TL1SM). Tiempo de latencia a la primera convulsin tnico-clnica

(TL1CTC). 5. Llenar las tablas No.1 y No. 2 6. Graficar los resultados en forma de barras: parmetros contra frmaco TABLA No.1 ADMINISTRACION LOCAL RATAS NS NCTC DCTC TL1SM TL1CTC

TABLA No.2 ADMINISTRACION SISTEMICA RATAS NS NCTC DCTC TL1SM TL1CTC

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CUESTIONARIO 1. Cules son los mtodos de estudio de las drogas anticonvulsivantes? 2. Cules son los mecanismos de accin de las drogas anticonvulsivas? 3. Cul es la clasificacin de las convulsiones epilpticas y las caractersticas que estas presentan? 4. Cul es el mecanismo de desarrollo de las convulsiones? 5. Cules son los efectos indeseables de los anticonvulsivos? 6. Cules son los requisitos de una droga antiepilptica ideal?

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Prctica No. 7
Analgesia
INTRODUCCIN Un analgsico es una sustancia que a travs de su accin sobre el Sistema Nervioso Central (SNC), o bien en la periferia, sirve para reducir o abolir el dolor sin producir inconsciencia. Los frmacos analgsicos empleados en la clnica se dividen en dos grupos: los analgsicos opioides y los analgsicos no opioides. Analgsicos opioides Son un amplio grupo de sustancias tanto de origen natural como sinttico que incluye agonistas semejantes a la morfina y sus antagonistas que pueden bloquear estos efectos. Adems de incluir a los opioides de origen endgeno. La morfina es el analgsico por excelencia y el mejor representante de este grupo, se obtiene del opio, el cual adems de la morfina contiene otros alcaloides con propiedades analgsicas y estimulantes del SNC. Los analgsicos no opioides
Los analgsicos tipo aspirina o tambin llamados antiinflamatorios no esteroidales (AINEs) estn entre los ms empleados en el mundo. En la prctica clnica se utilizan para aliviar el dolor de leve a moderado. Su mecanismo de accin es a travs de la inhibicin de la ciclooxigenasa 1 (COX-1 constitutiva) y ciclooxigenasa 2 (COX-2 inducida) en el sitio de la inflamacin, y con ello la reduccin de la sntesis de prostaglandinas y tromboxanos. En este grupo se incluyen a la aspirina, el ibuprofeno, el naproxeno, el ketoprofeno, la indometacina, el piroxicam y el ketorolaco, entre otros.

OBJETIVO
Producir un cuadro analgsico con el opioide sinttico fentanil empleando el modelo experimental de choque trmico.

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DESARROLLO DE LA PRCTICA Material Naloxona (25 UI) Fentanil (70g/Kg) Metamizol sdico Procedimiento 1. Habituar a la rata. La habituacin consiste en introducir a cada roedor en un contenedor durante 30 minutos por tres das y a la hora que se realizar el experimento. Durante los 30 minutos el animal deber mantener la cola en posicin perpendicular con respecto a la mesa donde se encuentre el contenedor. 2. El da del experimento, pesar a la rata. 3. Llenar con agua un vaso de precipitado de 400 mL, calentar a una temperatura de 58 C (estrictamente). 4. En un slo movimiento introducir la mayor parte de la cola de la rata en el vaso, instantneamente con un cronometro tomar el tiempo que tarda la rata en sacudir la cola o realizar movimientos corporales. 5. Dejar pasar dos minutos y repetir el mismo proceso hasta tener 5 lecturas basales. 6. Obtener el promedio de las lecturas y anotar los datos en la tabla No. 1. 7. Administrar por va intraperitoneal el fentanil en una dosis de 70mg/kg de peso. La concentracin del fentanil es de 0.05 mg/ml. 8. Esperar 6 minutos de latencia y realizar 5 mediciones con espacios de 2 minutos entre cada una. tabla No. 1. 9. Administrar el antagonista naloxona en una dosis de 25 UI esperar 5 minutos de latencia y hacer 5 mediciones. 10. Por ltimo administrar el metamizol sdico (200mg/Kg) esperar 5 minutos de latencia y hacer 5 mediciones. Obtener el valor promedio y anotar los datos en la

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TABLA No. 1
Lecturas 1 2 3 4 5 Promedio Basal (tiempo en seg) Fentanil (tiempo en seg) Naloxona (tiempo en seg) Metamizol sdico (tiempo en seg)

CUESTIONARIO 1. Describe el mecanismo de accin propuesto para los analgsicos opioides. 2. Describe el tipo de antagonismo producido por la naloxona. 3. Describe otros modelos experimentales para medir analgesia. 4. Qu son los opioides endgenos? 5. Indica los usos clnicos de los opioides 6. Qu es el dolor? 7. Describe el sistema de transmisin de los mensajes nociceptivos. 8. Menciona tres diferencias entre los analgsicos opioides y no opioides. 9. Qu es la analgesia? 10. Investiga 5 nombres de analgsicos opioides y 5 de analgsicos no opioides. 11. Qu es analgesia y la neuroleptoanalgesia? 12. En qu consiste la farmacodependencia de los opiceos? 13. Qu es la hipnoanalgesia y qu explicacin dara en caso de que se presente en pacientes que consumen un opiceo? 14. Investigar los mtodos de estudio que se ocupan para estudiar la evolucin de la analgesia. 16. En qu consiste el mtodo de la placa caliente? Indica un diagrama experimental con este mtodo para la determinacin de la analgesia de una droga. 17. Cul es el mecanismo de accin de los opiceos? 18. Cules son las propiedades de un analgsico ideal? 19. Indica la localizacin de los diferentes subtipos de receptores a los frmacos opiceos.
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PRACTICA No 8
EFECTOS DE LA ADMINISTRACIN DE ESTRGENOS SOBRE RGANOS REPRODUCTORES
INTRODUCCIN Los estrgenos son hormonas endgenas que producen muchos efectos fisiolgicos; dichos efectos comprenden acciones vinculadas con el desarrollo, efectos neuroendocrinos, preparacin cclica de las vas de reproduccin para la fecundacin e implantacin, y efectos sobre el metabolismo de minerales, carbohidratos, protenas y lpidos. Se han aislado del plasma sanguneo hasta seis estrgenos naturales, pero solo tres en cantidades notables: -estradiol, estrona y estriol La disminucin de estrgenos se ha asociado a un incremento en el riesgo de padecer enfermedades cardiovasculares, osteoporosis, estados de depresin y demencia, en particular despus de la menopausia reemplazo hormonal. El uso teraputico de los estrgenos se halla extremadamente difundido, y sus efectos farmacolgicos son un reflejo de sus acciones fisiolgicas. Las aplicaciones ms frecuentes de esos compuestos son la terapia de reemplazo hormonal y la anticoncepcin, aunque los medicamentos y las dosificaciones especficos que se utilizan en esas dos situaciones son diferentes. En los roedores se presentan caractersticas diferentes de acuerdo a la presencia o no de estrgenos; estas se dividen en fases que son: Proestro: La vagina se torna seca y se comienza a producir la cornificacin de las clulas de las paredes. Gran numero de clulas epiteliales nucleadas, no hay presencia de leucocitos. Estro: La vagina se ve cornificada y seca, aparece un flujo vaginal abundante. Los estrgenos circulantes provocan cambios en el tero. Hay presencia de clulas epiteliales grandes y cornificadas (no nucleadas). Metaestro: En esta etapa la vagina se ve hmeda, Presencia de leucocitos y clulas cornificadas
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enfermedades degenerativas. Existen

evidencias que sugieren que la disminucin o prdida de estradiol y estrona puede revertirse con el uso de la terapia de

Diestro: El pH vaginal es de 6.1, el dimetro de la luz uterina es de 2.5 mm. Se encuentran especialmente leucocitos y algunas clulas epiteliales nucleadas.

OBJETIVO Determinar el ciclo estro de la rata y los efectos provocados por la administracin de -estradiol-3-benzoato (E2) sobre rganos reproductores de roedores. DETERMINACIN DEL CICLO OVARICO EN RATA Material 3 ratas hembra adultas jvenes Asa bacteriolgica Porta objetos Colorante de Write Alcohol etlico al 70% Lmpara de alcohol ter PROCEDIMIENTO 1. Tomar frotis vaginales diariamente a cada rata. En un portaobjetos limpio se coloca una gota de agua destilada, posteriormente se introduce una asa estril en la vagina de la rata y se da un giro de el asa para hacer un ligero raspado vaginal, solo se debe tomar la muestra en la parte mas externa de la vagina para no provocar una pseudopreez en la rata. Colocar la muestra obtenida sobre el portaobjetos y extenderla hasta obtener una capa fina de la misma. Se fija al calor y se tie con colorante de Write. Se observa al microscopio en seco fuerte (40X). 2. Una vez que se hayan observado y registrado los cambios en el frotis vaginal de todas las fases del ciclo estral, seleccionar y sacrificar una rata en fase estro y otra en fase metaestro o diestro.3. Pesar a las ratas muertas y realizar una incisin en la parte dorsal.4. Observa y registra las diferencias encontradas en el tero. 5. Separa el tero de la vagina,
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seccionando la cerviz, saca el tero y las trompas uterinas sobre un papel filtro y extrae todo el lquido intrauterino.6. Pesa el tero y calcula los mg de peso uterino por 100g de peso corporal. EFECTOS DE LA ADMINISTRACIN DE ESTRGENOS EN RATAS OVARIECTOMIZADAS. Material 4 ratas hembras adultas jvenes Material para ciruga Jeringas para insulina Anestsico(Ketamina) Antibitico-estradiol-3-benzoato[50mg/20ml] Balanza Cubreobjetos PROCEDIMIENTO 1. Pesar las ratas, realizar frotis vaginales y calcular la dosis de anestsico (pentobarbital 45 mg/Kg) 2. Se coloca al animal en posicin ventro-dorsal sobre un campo quirrgico estril, realizar una asepsia en la zona ubicada entre la ltima costilla y la columna vertebral, a nivel de los dos ijares. 3. Rasurar la zona y desinfectar, realizar una incisin en piel con tijera de punta roma; al localizar el msculo se separan las facias posteriormente se introduce una pinza y se separa el tejido adiposo con el fin de localizar el ovario y el cuerno uterino. 4. Despus se liga con hilo Nylon entre el cuerno uterino y los ovarios 5. Posteriormente se introduce el tejido a la cavidad para despus suturar el msculo. 6. Se realiza el mismo procedimiento en el lado contrario. 7. Finalmente se sutura la piel y se administran 20UI de antibitico (IM) por tres das y realizar limpieza diaria de las heridas con isodine para evitar posibles infecciones. 8. Dejar las ratas en recuperacin dos das.

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9. Dividir el grupo en dos: OVX + E2 (Problema) OVX + Vehculo (Control) 10. Despus de empezar la administracin del -estradiol-3-benzoato (500mg/20mL) por 7 das a las ratas problema y DMSO a las ratas control; tomar frotis vaginales de las 4 ratas cada 24 horas hasta que aparezca la fase estro en las ratas administradas con E2. 11. Sacrificar las ratas y comparar los rganos reproductores de ambos grupos, extirpa el tero y calcula los mg de peso uterino por 100 g de peso corporal. CUESTIONARIO 1. Cual es mecanismo de accin de estrgenos? 2. Explica los efectso farmacologicos de la administracin de estrgenos sobre los cambios de los estrgenos. 3. Investiga las consecuencias de los estrgenos sobre la liposisis y la glucolisis. 4. Investiga y explica los protocolos teraputicos de los estrgenos.

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PRCTICA No. 9
HIPOGLUCEMIANTES
OBJETIVO Determinar los cambios de los niveles de glucosa sangunea en rata con hipoglucemiantes. INTRODUCCIN Los hipoglucemiantes orales son un conjunto heterogneo de drogas que se caracterizan por producir una disminucin de los niveles de glucemia luego de su administracin por va oral. Los frmacos orales son medicamentos de utilidad slo para tratar la Diabetes Mellitus Tipo 2 (DM2). Realmente el mejor hipoglucemiante que se conoce es el binomio Dieta-Ejercicio, de modo que el lugar de los frmacos debe ser siempre secundario. Solo aquellos pacientes que no respondan adecuadamente a un rgimen diettico y de actividad fsica debern ser tratados con estos frmacos. Los hipoglucemiantes orales abarcan cuatro familias de drogas bien definidas: Sulfonilureas (glibenclamida, acetohexamida, clorpropamida) Biguanidas (buformina, metformina, fenformina) Inhibidores de las - glucosidasas (miglitol, acarbosa) Tiazolidinedionas (troglitazona, pioglitazona, ciglitazona) Las sulfonilureas y las tiazolidinedionas son realmente hipoglucemiantes, mientras que las biguanidas y los inhibidores de las alfa-glucosidasas son antihiperglucemiantes, necesitando todos de la presencia de insulina para poder ejercer su accin. Para su correcto manejo es preciso tener presente sus caractersticas farmacocinticas, vas de eliminacin, potenciacin de sus efectos por otros medicamentos, efectos secundarios y toxicidad.

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Otro hipoglucemiante que se puede mencionar es la Insulina la cual es una hormona producida por el pncreas. La insulina ayuda a que los azcares obtenidos a partir del alimento que ingerimos lleguen a las clulas del organismo para suministrar energa. Hoy en da todas las insulinas del mercado son insulinas humanas sintetizadas por ingeniera gentica (DNA recombinante). Las insulinas de origen bovino o porcino han desaparecido prcticamente del mercado. Todas ellas estn muy purificadas y tan solo contienen protenas de insulina y no contaminaciones de otro tipo. El nico factor que las diferencia es la duracin de accin. Insulina de accin ultrarrpida; que comienza a hacer efecto a los 15 minutos de haberse inyectado, actuando con mayor intensidad entre los 30 y los 70 minutos. Insulina de accin rpida que empieza a hacer efecto a los 30 minutos de haberse inyectado, actuando con mayor intensidad entre la 1 y 3 horas despus de la inyeccin. Insulinas de accin intermedia o lenta; que empieza a hacer efecto a los 60 minutos de haberse inyectado, actuando con mayor intensidad entre la 3 y 6 horas despus de la inyeccin. CONOCIMIENTOS PREVIOS Conocer la NOM-015-SSA2-1999, para la prevencin, tratamiento y control de la Diabetes Mellitus. Conocer el manejo del glucmetro Ascencia EliteTM, y la forma de toma de muestra para roedores. Conocer los diferentes efectos que producen los hipoglucemiantes. DESARROLLO DE LA PRCTICA Material Ratas de 250g-300g de peso. Balanza para roedores. Glucmetro Ascencia EliteTM. Tiras reactivas para el glucmetro Ascencia EliteTM.
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Tijeras. Cnula. Isodine. Agua purificada. Frmaco: Glibenclamida Metformina Insulina de accin corta. PROCEDIMIENTO 1. Cada equipo utilizar dos ratas las cuales hay que pesar y marcar. 2. Calibrar el medidor. * Insertar la tira de codificacin en la ranura del instrumento (el medidor emitir 2 pitidos y en la pantalla aparecer F-#) * Quitar la tira de codificacin. El medidor est listo para usarse. 3. Insertar la tira reactiva en el medidor. Comprobar que en la pantalla aparece el mismo F-# de la tira de codificacin. 4. Introducir a las ratas en la jaula de inmovilizacin y limpiar la zona de corte de la cola para la toma de muestra. 5. Realizar el corte de cola y obtener una muestra de sangre. 6. Poner en contacto la gota de sangre con el extremo de la tira reactiva y esperar hasta que los resultados aparezcan en la pantalla. Los resultados se indican en miligramos de glucosa por decilitro (mg/dL). Tomar la lectura la cual corresponder a la medida de la glucosa basal. 7. A una rata se le administrar la Glibenclamida 2.5 mg/Metformina 500 mg V.O. y esperar hora; tomar nuevamente una muestra de sangre y medir los niveles de glucosa. 8. Realizar esto cada hora hasta completar 4 lecturas en total. 9. Repetir este procedimiento para la administracin de la Insulina. 2.5 mg 500 mg

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RESULTADOS TABLA DE SEGUIMIENTO GLIBENCLAMIDA /METFORMINA. No. Peso (g) Dosis (mg/Kg) Basal Glucosa (mg/dL) H 1H 1H

TABLA DE SEGUIMIENTO INSULINA DE ACCIN CORTA. No. Peso (g) Dosis (mg/Kg) Basal Glucosa (mg/dL) H 1H 1H

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CUESTIONARIO 1. Graficar los niveles de glucosa en mg/dL contra el tiempo con los resultados de toda la seccin. (Explicar los resultados). 2. Investiga las estructura generales as como las propiedades fisicoqumicas de las sulfonilureas y biguanidas. 3. Crees que exista alguna influencia de la va de administracin sobre el efecto hipoglucemiante del frmaco? 4. Investiga el mecanismo de accin de las biguanidas. 5. Concuerdan los resultados obtenidos con lo esperado tericamente. Da una explicacin. 6. Qu otros mtodos conoces para la determinacin de la glucosa. Menciona por lo menos dos? 7. Cul es la cintica de las biguanidas? 8. Explica la relacin Ejercicio-Glibenclamida con respecto a los niveles de Glucosa sangunea. 9. Cules son los efectos txicos de la Glibenclamida y de la Insulina?

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