Microbiologa General

PROGRAMA TERICO

Materia: Microbiologa General

Semestre: Quinto Clave: 0328 Carcter: Obligatorio Departamento de Ciencias Qumico Biolgicas y Agropecuarias

Contenido.
I. Introduccin. II. Desarrollo histrico de la microbiologa. III. Fundamentos de la microbiologa. IV. Gentica microbiana. V. Relacin husped- parsito. VI. Control del desarrollo bacteriano. VII. Impacto de los microorganismos en la Ing. Gentica y la Biotecnologa. VIII. Interaccin e impacto de los microorganismos en el medio ambiente.

Q. B. Rosa Amelia Vzquez Curiel ameliav@navojoa.uson.mx

I.- INTRODUCCIN

Definicin:
La Microbiologa se define etimolgicamente del Griego MICROBIO y del griego LOGOS que significa tratado. Es una ciencia que estudia o que trata de los organismos vivos invisibles a simple vista o de tamao microscpico. stos se denominan MICROBIOS, MICROORGANISMOS o PROTISTAS.

Alcances de la Microbiologa:
La Microbiologa es una ciencia que se dedica al estudio de las regularidades que rigen la vida y el desarrollo de los microorganismos; as como sus caractersticas, relaciones mutuas y su relacin con otros grupos de organismos. Algunos microorganismos son tiles y otros dainos que causan alteraciones tanto en el organismo humano, animal, vegetal, como en la naturaleza inanimada. El desarrollo de la microbiologa, al igual que el de otras disciplinas cientficas, se halla en estrecha dependencia de los medios de produccin, de las demandas de la prctica y con el progreso general de la ciencia y de la tecnologa. De acuerdo con las necesidades de la sociedad, la microbiologa se dividi en las siguientes ramas: MICROBIOLOGA GENERAL, AGRCOLA, INDUSTRIAL, MDICA, SANITARIA y VETERINARIA. Y actualmente se han formado, adems, la microbiologa del mar y la csmica. La microbiologa mdica moderna se ha convertido en una extensa disciplina que se subdivide en BACTERIOLOGA, ciencia de las bacterias (agentes etiolgicos de muchas enfermedades infecciosas); la VIROLOGA, ciencia de los virus; INMUNOLOGA, ciencia de los mecanismos de defensa del organismo tanto contra los agentes patgenos como para los no patgenos; MICOLOGA, que se dedica al estudio de los hongos patgenos para el ser humano; y la PROTOZOOLOGA cuyo objeto de investigacin son animales monomoleculares patgenos. Adems la microbiologa mdica estudia los mecanismos de infeccin, los mtodos de diagnstico de laboratorio, el tratamiento y la profilaxis especficas de las enfermedades infecciosas.

La microbiologa como ciencia independiente, dispone de una metodologa propia de investigacin que permite resolver muchos problemas de gran importancia para la salud pblica. Los mtodos microbiolgicos se aplican ampliamente en otras disciplinas mdicas tanto tericas como clnicas. La microbiologa es una ciencia que es relativamente joven. El mundo de los microorganismos se descubri hace poco ms de 300 aos y hubieron de pasar otros 200 aos antes de que se apreciase y se comprendiese el significado real de los microorganismos. Durante los ltimos 40 aos, la microbiologa ha emergido como un campo muy significativo de la Biologa. Hoy los microorganismos son utilizados por los investigadores para el estudio de prcticamente de todos los fenmenos biolgicos principales. Precisamente hasta 1870 no se comprenda ni se aceptaba su papel como agentes causantes de enfermedades. Y fue ms o menos entonces cuando se estableci que los microorganismos realizaban muchas funciones vitales en nuestro medio ambiente. Existe una gran variedad de poblacin de microorganismos y se encuentran prcticamente en todas partes de la naturaleza. Estn presentes en las corrientes de agua, lagos, ros, ocanos. Estos son transportados por las corrientes de aire desde la superficie de la tierra a partes ms altas de la atmsfera y desde all llegan a cientos de miles de nuevas localizaciones. Estn sobre nuestro cuerpo y en nuestra boca, nariz y otros orificios del cuerpo. En un solo estornudo es posible expeler millones de microorganismos al autor no inmediato o los microorganismos son ms abundantes all donde los nutrientes, la humedad y la temperatura son adicionados para su crecimiento y multiplicacin. Los microorganismos son responsables de muchas enfermedades que han sido plaga de las civilizaciones durante siglos.

Antes que se descubriese que los microorganismos eran causantes de enfermedades antiguamente mora bastante gente por brotes de enfermedades como difteria, viruela, peste, etc. Actualmente gracias a los descubrimientos hechos en microbiologa, la medicina ha conseguido mayores xitos en el diagnstico, prevencin y curacin de enfermedades. Y por lo tanto ha disminuido el nmero de muertes. El estudio de los microorganismos ha contribuido en gran manera a lo que hoy se sabe de gentica y de metabolismo. Algunos de los microorganismos se han considerado como fuentes de protenas. Sin embargo, la prevencin de la enfermedad fue uno de los primeros puentes hacia los que se enfoc la microbiologa y sigue siendo uno de los principales objetivos.

Campos de aplicacin de la microbiologa

Por lo general los microbilogos suelen especializarse en el estudio de determinados grupos de microorganismos. Hablando con propiedad se tienen las siguientes disciplinas: Bacteriologa, Protozoologa, Parasitologa, Micologa, Ficologa y Virologa. Estas ramas estudian un determinado grupo de microorganismos: a) BACTERIOLOGA: Se dedica al estudio de las bacterias, aunque a veces se utiliza como sinnimo de microbiologa. b) PROTOZOOLOGA: Es una rama de la parasitologa que se encarga de estudiar exclusivamente a los protozoos. c) PARASITOLOGA: Es una disciplina que abarca el estudio de los protozoos y de otros microorganismos y macroorganismos parsitos.

d) MICOLOGA. Es una rama de la microbiologa que trata el estudio de los hongos, como son las levaduras y los mohos. e) FICOLOGA: Es una rama que se encarga del estudio de las algas. f) VIROLOGA: Es una ciencia que se encarga del estudio de los virus. Cabe mencionar que estas disciplinas no abarcan todos los aspectos microbiolgicos, por lo que no es raro que exista una mayor especializacin en algunos aspectos biolgicos de un grupo especfico de microorganismos, ejemplo: la gentica bacteriana, la ficologa de las algas, citologa de las bacterias, etc. Ahora, si se toma en cuenta la variedad y la significacin de la actividad de los microbios se puede observar el gran campo de aplicacin de la microbiologa de los que se menciona lo siguiente: MICROBIOLOGA MDICA. Por lo general los microorganismos se van conociendo por el tipo de enfermedad que causan tanto a los seres humanos, como animales y plantas. La rama de la microbiologa que se encarga sobre el estudio de los microorganismos que producen enfermedades en el hombre es la microbiologa mdica

Regresar
II. DESARROLLO HISTRICO DE LA MICROBIOLOGA La historia de la microbiologa se basa en los logros de muchos cientficos, de los cuales desafortunadamente se dan a conocer relativamente muy pocos nombres y acontecimientos que son los ms destacados. Aunque muchas contribuciones importantes de personas nobles han sido olvidados y opacados por otras que tal vez no sean tan importantes, la investigacin sigue adelante. Indudablemente que el mrito no es para el primero que se le ocurri la idea, sino para aquel que convence al mundo.

De esta manera, aparecen los nombres ms famosos de personas que convencieron ya sea desarrollando una tcnica, ideando un instrumento o exponiendo algn concepto, que explica sus hallazgos claramente y con atraccin; y que finalmente fue adoptado, de tal forma que la ciencia floreci y evolucion. Se mencionar aqu algunos datos histricos, que nos servirn principalmente para comprender el origen de la microbiologa como ciencia, as como la importancia que sta tiene en el campo de la investigacin. No fue, sino a partir de 1865, cuando se vislumbraron mayores progresos en la comprensin de los microorganismos y de sus actividades. Adelantos verdaderamente importantes que se lograron como resultado de las investigaciones. Las relaciones que hiciera Leeuwenhoek sobre la ubicuidad de los microorganismos, por ejemplo, permitieron que 200 aos ms tarde, Louis Pasteur, descubriera la participacin de estos microbios en las reacciones de fermentacin. A Koch, Smith y a muchos otros; descubrir la relacin de los microorganismos con las enfermedades. A Galileo y Robert Hooke, en 1610 y 1665 respectivamente se deben las primeras nociones de los microscopios. En su constitucin eran ms semejantes a los modernos que los fabricados por Leeuwenhoek, aunque los lentes de ste eran mejor tallados. Leeuwenhoek describi los organismos que otros ya haban visto, no se duda que vio bacterias, hongos y muchas formas de protozoos. El descubrimiento de los microbios espole el inters en el origen de las cosas vivas y despert una fiebre de argumentos y especulaciones. En 1749, John Needham (1713-1781), experimentando con carne expuesta a cenizas calientes observ la aparicin de organismos que no estaban presentes al principio del experimento.

Spallanzani (1729-1799) hirvi caldo de carne durante 1 hora y despus sell los frascos. No aparecieron los microbios. Dos investigadores independientes, Franz Schulze (1815-1873) y Theodore Schwann (18101882) respondieron a las investigaciones de los dos anteriores, unos 60 70 aos despus, exponiendo los cultivos al aire y no aparecieron los microbios. An as, partidarios en extremo de la generacin espontanea no se convencieron. Aproximadamente en 1850, Schrder y Von Dusch llevaron a cabo un experimento ms convincente haciendo pasar aire a travs de algodn en los frascos que contenan caldo calentado y no hubo desarrollo. Por ltimo el concepto de la generacin espontanea que resucitado por ltima vez por Pouchet, quien public en 1859 un extenso estudio probando su existencia, pero Pouchet careca del ingenio, el mpetu y el tesn de Louis Pasteur (1822-1895). Y fue Pasteur quien llev a cabo experimentos que pusieron punto final a la discusin, publicando sus resultados en 1864. Sus frascos no produjeron signos de vida. Louis Pasteur empez su brillante carrera como profesor de qumica en la Universidad de Lille, Francia. Estudi mtodos y procesos que intervenan en la produccin (vinos y cerveza) para que fueran de buena calidad y constante. Observ la fermentacin que llevaban a cabo los microbios para obtener alcohol a partir de las frutas y los granos. Pasteur seal que los microbios no deseables podran ser eliminados por calentamiento, lo que no alteraba el aroma de los jugos, pero s para hacer inocuos a los microorganismos.

Observ que manteniendo los jugos a una temperatura de 62 C por media hora se lograba lo anterior, y que actualmente se conoce como proceso de pasteurizacin, utilizado ampliamente en la industria. Investig por aos sobre la enfermedad pebrina (enfermedad en el gusano de seda) a solicitud del gobierno francs, debido al dao que este gusano estaba ocasionando en la industria francesa, y finalmente pudo aislar el parsito causante de la enfermedad. Seguidamente, Pasteur tropez con el problema del carbunco, enfermedad de bovinos, de ovejas y a veces en los seres humanos. Despus de aislar a los microbios a partir de la sangre de animales enfermos los cultiv en frascos de laboratorio. Robert Koch (1843-1910) mdico meticuloso y que a veces se olvidaba de ejercer su profesin para jugar con la nueva y fascinante ciencia como la bacteriologa, trabajaba al mismo tiempo sobre la enfermedad del carbunco en Alemania. l fue quien descubri los bacilos tpicos con puntos angulosos en la sangre de bovinos que haban muerto de carbunco. A partir de estos experimentos examin y aisl el microorganismo y fue cuando por primera vez se demostr su relacin con la enfermedad. De sta se establecieron los postulados de Koch, que son los siguientes: a) El organismo especfico ha de encontrarse siempre asociado a la enfermedad. b) El organismo ha de ser aislado y obtenido en cultivos pero en el laboratorio. c) Este cultivo puro inoculando a un animal susceptible produce enfermedad. d) Debe recuperarse el organismo en cultivo pero del animal infectado experimentalmente.

En cuanto al concepto de cultivo puro Joseph Lister, en 1878, obtuvo por primera vez cultivos puros (cultivo axnico) de bacterias por diluciones seriadas en medios lquidos, obteniendo de esta manera un solo y verdadero tipo, al que Lister llam Bacterium lactis. Mientras tanto Koch perfeccion sus mtodos para el estudio de las bacterias. El descubrimiento de cultivos slidos fue una de sus ms grandes contribuciones. Koch ide diferentes tcnicas con las que estudi muestras de pacientes con tuberculosis y despus de una serie de pruebas anunci el microorganismo que causa la tuberculosis. Cabe recalcar que la utilizacin de cultivos puros tiene gran importancia no solo en el estudio de poblaciones infectadas sino en los avances que se han tenido en otras ramas, como la microbiologa marina, microbiologa del conducto intestinal y otras las cuales requieren: 1. Del conocimiento de la fisiologa de microorganismos individuales en cultivo puro. 2. De las relaciones ecolgicas de la totalidad de las poblaciones microbianas en un medio dado. Pasteur continu sus investigaciones en la prevencin de las enfermedades infecciosas y alrededor de 1880 aisl el germen causante del clera de las gallinas, mediante cultivos puros. Esta tcnica ideada por Koch en cuanto a obtencin de cultivos puros, le sirvieron para muchos ensayos en los que tuvo xito; los mismos que utiliz para la inoculacin de pollos sanos, este experimento lo constern puesto que los pollos no enfermaron, ni murieron. Revisando cada paso de su experimento encontr que en la inoculacin haba utilizado los cultivos puros viejos en lugar de los nuevos que haba preparado. Esto lo llev a repetir el experimento pero inoculando de los dos tipos de cultivo a diferentes grupos de pollos, lo que le sirvi para demostrar el principio de inmunizacin. Esta demostracin explicaba el principio en el que se fundamenta el xito de Jenner al aplicar el virus de la viruela bovina, en 1798, para inmunizar a las personas contra la viruela humana.

Posteriormente Pasteur aplic este principio a la prevencin del carbunco, observando con satisfaccin los mismos resultados. A los cultivos viejos (atenuados) los llam vacunas, trmino derivado de la palabra vaca en honor de Jenner y aplic el trmino vacunacin a la inmunizacin con cultivos de bacterias atenuadas, aunque no se tenga relacin alguna con las vacas. La fama de Pasteur prevaleci en toda Francia, por lo que no fue sorprendente que se enfrentara a un mayor reto cuando se le pidi sobre una enfermedad que afectaba a los seres humanos, enfermedad transmitida al hombre por mordeduras de perros, gatos y otros animales; la rabia. El experimento consisti en la inoculacin de conejos a partir de la saliva de perros rabiosos, ya que de antemano saba que el virus era demasiado pequeo para ser visto al microscopio, nunca se haba cultivado en laboratorio y que no era una bacteria. El experimento se basaba en extraer el cerebro y la mdula espinal de los conejos infectados, se disecaron por varios das, se pulverizaron y se mezclaron con glicerina; esta mezcla inyectada a los perros los protega contra la rabia. Pasteur qued sorprendido cuando despus del ensayo decisivo, un joven que haba sido mordido por un lobo rabioso, no muri. Los xitos de Pasteur y de Koch les hicieron acreedores de honores y premios por sus compatriotas. Koch lleg a ser profesor de higiene y director del Instituto de Enfermedades Infecciosas, fundado por l en la Universidad de Berln. En gratitud a Pasteur se estableci el Instituto de Pasteur en Pars en 1888.

Gracias a sus aportaciones se vislumbraron horizontes ms amplios para la microbiologa, da a da se iban descubriendo nuevas bacterias, por muchos hombres estudiosos y discpulos de Koch y Pasteur. Estas y otras observaciones dieron lugar a la microbiologa aplicada, ya que se hicieron extensivas a otras enfermedades. Despus de que Edwin Klebs y Frederick Leoffler descubrieron el bacilo de la difteria y obtuvieron sus venenos en un frasco de laboratorio, Emil Von Behring y Shibasaburo Kitazato idearon el mtodo de producir inmunidad para las infecciones causadas por estos organismos inyectando sus toxinas (venenos) en animales para obtener una antitoxina (sustancia que neutraliza la toxina). Lo mismo hicieron Kitazato y Von Behring con los cultivos de closiridium tetani para la prevencin y tratamiento del ttanos. Poco despus Von Behring recibi Premio Nobel en fisiologa y medicina en 1901. A estos acontecimientos le siguieron otros como: la demostracin de la inmunidad mediante inoculacin de cultivos muertos de microorganismos, el descubrimiento de que las clulas blancas de la sangre coman dentro de las bacterias, productoras de enfermedad por el (ruso) Elie Metchnikoff a las que llam Fagocitos; mientras en Alemania Paul Erlich explicaba la inmunidad en base a la presencia de determinadas sustancias solubles en la sangre. Hoy en la actualidad sabemos que los dos mecanismos desempean sus partes. Otra aportacin de Erlich importante porque dio apertura al futuro de la quimioterapia y de los antibiticos fue la observacin de que un arsenical orgnico (compuesto 606 de la serie ensayada), destrua el microbio de la sfilis dentro del cuerpo. Debido a estos logros y los anteriormente expuestos, el periodo de 1880 y 1900 se considera como la primera poca de oro y un paso sustancial de la infancia a la adolescencia para la microbiologa. Por otro lado en el continente europeo, un cirujano ingls, Joseph Lister utiliz una solucin diluida de cido fnico como desinfectante de las heridas postoperatorias con la finalidad de combatir la infeccin de las mismas por microorganismos, obteniendo tan grande xito, que la tcnica se acept rpidamente, a la vez que sirvi para establecer los principios de las tcnicas aspticas utilizadas en la actualidad.

Los microbilogos empezaron a aparecer y de alguna manera fueron muy influidos por Koch, Pasteur y Joseph Lister. Igualmente los Bacterilogos en Europa y Amrica. Entre los americanos que directa o indirectamente fueron responsables del desarrollo de la bacteriologa en Estados Unidos son: William, Harold, Clarence, Ernst y H. L. Russell. Puede considerarse las aportaciones por los cientficos e investigadores. Pertenecieron a la primer poca de oro y comienza a abrirse un mayor auge, con el xito de los americanos en la construccin del Canal de Panam con la conquista de los cientficos de la fiebre amarilla, al descubrir que el virus, era transmitido a los seres vivos por mosquitos. A esto le siguieron aplicaciones en el campo de la microbiologa del suelo, las plantas, hasta llegar a formar parte como una de sus ramas, en el campo mas amplio de la Biologa. Es entonces cuando empieza a abrirse paso la segunda poca de oro de la microbiologa y principalmente hacia el ao de 1945 y, que continua hasta nuestros das, al reintroducirse bacterias y virus en la corriente principal de la biologa y donde los conocimientos logrados con el estudio de los microorganismos son los fundamentos de la biologa moderna, biologa molecular y de la ingeniera gentica. Se esbozaran algunos aspectos importantes que corresponden a la segunda poca de oro ya que sera demasiado larga la lista de todos aquellos que contribuyeron al desarrollo de la microbiologa, pero que si se desea dar una referencia completa se puede consultar el libro THE HISTORY OF THE BACTERIOLOGY, de William Bulloch. Las relaciones que hiciera Leewenhoek sobre la ubicuidad de los microorganismos, por ejemplo, permitieron que, 200 aos ms tarde, Louis Pasteur descubriera la participacin de estos microbios en la reaccin de fermentacin. A Koch, Smith y a muchos otros, descubrir la relacin de microorganismos con la enfermedad. En 1905, Robert Koch recibe Premio Nobel por haber contribuido importantemente en la creacin de la microbiologa como ciencia.

Se le recuerda por haber aislado las bacterias que causan el carbunco y la tuberculosis. El trabajo de Theobald Smith sobre la transmisin de la fiebre de Texas, seal el camino para los trabajos subsiguientes de Reed sobre la epidemiologa de la fiebre amarilla. La persistencia de Paul Ehrlich, por encontrar un compuesto qumico que destruyera a la espiroqueta que causa la sfilis en el ser humano y sin producir daos a las clulas de los tejidos, abri paso a los logros obtenidos en el futuro, sobre el uso de compuestos qumicos en el tratamiento de la enfermedad; lo cual le permiti compartir con Elie Metchnikoff, Premio Nobel en 1908. Como se puede ver, la historia no slo trata del pasado, sino que se hace cada da, a medida que nuestros conocimientos aumentan con cada nuevo descubrimiento y cada suceso. En muchas ocasiones, el reconocimiento de una contribucin cientfica, se retrasan durante aos, por ejemplo: en 1929 Alexander Fleming public su trabajo sobre la accin antibacteriana de los cultivos de Penicillium, pero la importancia de este descubrimiento bsico no fue reconocido hasta 1945 y con Premio Nobel. As, la historia de la microbiologa, est llena de logros asombrosos, pero tambin de larga preparacin para lograrlo. La microbiologa inici desde que el hombre empez a pulir piezas de vidrio y a combinarlo para lograr amplificaciones grandes y poder observar a los microorganismos.

Evolucin en los ltimos aos:

Por ejemplo, el Premio Nobel otorgado a Enders, Robbins y Weller por su triunfo en la investigacin sobre el cultivo de virus de la poliomielitis, lo cual hizo posible que Jonas, Salk, Herald Cox, Hillary Koprowski y Albert B. Sabin obtuvieran vacunas para la prevencin de esta enfermedad. Fritz Lipman y Hans Krebs fueron distinguidos con el Premio Nobel en 1953, por sus estudios fundamentales sobre clulas vivas y por los avances sobre fisiologa y metabolismo.

En 1958, Premio Nobel de medicina y fisiologa Joshua Lederberg, George Beadle y Edward Tatum quienes descubrieron que los genes regulan los procesos qumicos de la clula, que estn organizados y que pueden alterarse por el proceso de recombinacin. Desde este descubrimiento hasta 1968, se hicieron aportaciones por descubrimientos sobre los cidos nucleicos, herencia y cdigo gentico. En 1969, el Premio Nobel de medicina fue para otros norteamericanos, Max Delbruck, Alfred D. Hershey y Salvador E. Luria quienes estudiaron procesos vitales en los bacterifagos y ayudaron a establecer la moderna biologa molecular. Otros descubrimientos en 1972 hasta 1975 sobre la estructura de anticuerpos y partculas virales de cncer en clulas tumorales son parte de la misma historia que como puede apreciarse no tiene fin y permanecer as, mientras haya hombres y mujeres con talento y dispuestos a enfrentarse a otros retos.

Nomenclatura y clasificacin de microorganismos

Desde hace mucho tiempo, el mundo de todos los seres vivos se ha dividido en dos reinos, el inmvil de las plantas fotosintticas, y el mvil, formado por animales no fotosintticos. Tiempo ms tarde, a principios del siglo XIX el mundo microbiano empez a ser estudiado en forma sistemtica, se realizaron grandes esfuerzos para adaptar a todos los nuevos organismos que fueron descubiertos, como organismos unicelulares mviles, como aquellos que tenan envoltura flexible parecida a la de las clulas animales. Por otro lado, las algas como eran fotosintticas y tenan pared celular rgida igual que las clulas vegetales fueron consideradas como plantas; los hongos o eumicetos y las bacterias (esquizomicetos), debido a su divisin por hendidura transversal fueron agrupados como plantas. Esta simple clasificacin en plantas y animales presentaba bastante inconsistencia, ya que los hongos y la mayor parte de las bacterias no son fotosintticas, muchas bacterias son mviles, algunos hongos y algas poseen esporas mviles (zoosporas), etc.

La solucin ms lgica hasta ese momento fue la propuesta de E. H. Haeckel en 1866, zologo alemn, quien propuso un tercer reino biolgico, el de los PROTISTAS, el cual se distingue de los animales y plantas por su organizacin relativamente simple. Con el desarrollo del microscopio electrnico ha sido posible profundizar en el conocimiento de la ultraestructura celular, y donde tambin ha sido posible reconocer dos categoras, basadas en la complejidad de su organizacin. Los protistas superiores o EUCARIOTES y los protistas inferiores o PROCARIOTES. Los protistas superiores o eucariotes poseen clulas grandes (con ncleo verdadero), muy semejante a las de animales y plantas; contienen una membrana nuclear, mltiples cromosomas en el interior de cada ncleo y un aparato mittico que garantiza la equiparticin de los elementos que resultan de la replicacin cromosmica entre los ncleos hijos. En este grupo o categora se incluyen los protozoos, los hongos y la mayora de las algas. Los protistas inferiores o procariotes, se caracterizan por poseer clulas ms pequeas en las cuales el ncleo est constituido por un nico cromosoma que carece de membrana nuclear, carecen de diversas estructuras rodeados por membranas. En este grupo se incluyen todas las bacterias y un grupo pequeo de algas azul-verdes (cianobacterias). ES IMPORTANTE MENCIONAR QUE LOS VIRUS NO SE INCLUYEN EN ESTA CLASIFICACIN, PUESTO QUE NO SE CONSIDERAN CLULAS Poco despus Whittaker (en 1969), propuso un sistema de clasificacin en cinco reinos y que en la actualidad es ampliamente aceptado, porque considera los siguientes aspectos: Las relaciones evolutivas Por ser compatible con estudios recientes sobre bioqumica, gentica y ultraestructura.

Los reinos propuestos son: Monera, que incluye los procariotes; Protista que incluye microorganismos eucariticos unicelulares; Vegetal que contempla los organismos eucariticos multicelulares y multinucleados; Animal donde se agrupan animales multicelulares y el reino de los Hongos donde se encuentran los hongos superiores multinucleados. Observando lo anterior se dar cuenta que los microorganismos se encuentran en tres de los cinco reinos: MONERA (Algas azul-verdosas y bacterias) PROTISTA (microalgas y protozoos) HONGOS (Levaduras y mohos) La ordenacin de los organismos vivientes con el descubrimiento de la evolucin biolgica ha pasado de una clasificacin puramente descriptiva y sistemtica, a una clasificacin taxonmica "natural"; la cual intenta agrupar los organismos de tal forma que refleje las lneas de su ascendencia evolutiva. Una pieza clave de esta clasificacin es la definicin de ESPECIE, como un grupo de individuos capaces de reproducirse entre ellos en forma continuada. Los niveles superiores de la clasificacin, como el gnero, tribu, familia, orden y clase; carece de una definicin clara y prctica. La situacin en las bacterias es algo distinta: el nmero de caractersticas disponibles para la clasificacin es mucho ms limitado. Por lo tanto, no es de extraarse que en el Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, que puede considerarse como el fruto del mayor trabajo en equipo que se haya realizado en lo que se refiere a clasificacin, y que, por otra parte, es la gua ms utilizada.

Este tipo de clasificacin, a pesar de que es especulativa en relaciones taxonmicas, es muy til como clave determinativa, para identificar un organismo desconocido y relacionarlo con otros organismos. Actualmente la descripcin y clasificacin de los organismos vivos es y ha sido un objetivo de primordial importancia, en todas las ramas de las ciencias biolgicas. De esta manera, una vez que las caractersticas de un organismo queden perfectamente descritas, es posible compararlos con otros microorganismos con la finalidad de determinar y establecer similitudes, as como diferencias. Mediante la comparacin de caractersticas de un gran nmero de microorganismos se llega finalmente a un sistema para agrupar los especmenes relacionados. Posteriormente se establece un grupo cuyos miembros tienen caractersticas muy similares al cual se le considera especie y se le asigna un nombre cientfico (donde el microorganismo adquiere su nombre). Es importante y necesaria la identificacin ya que al conocer sus caractersticas pueden ser de utilidad: Para estudiar y aclarar numerosos procesos bioqumicos, para aclarar procesos Por su produccin de sustancias qumicas que son de gran valor (p. ej. vitaminas y

vitales.

antibiticos). Estos son solo unos aspectos pero hay ms consideraciones que son importantes. Para poder identificar y clasificar a un M. O. deben determinarse con cierto grado de precisin las siguientes caractersticas:

1. Caractersticas de cultivo. Se refiere a (a) las sustancias nutritivas necesarias para el desarrollo y (b) las condiciones fsicas de un medio que lo favorezcan. 2. Caractersticas morfolgicas. Se refiere al tamao de la clula, su forma, su agrupacin, diferenciacin en tinciones e identificacin de estructuras. 3. Caractersticas metablicas. Se refiere a la manera o forma por la cual los microorganismos llevan a cabo los procesos qumico-biolgicos. 4. Caractersticas de la composicin bioqumica. Se refiere a la identificacin de las principales caractersticas de los componentes qumicos de la clula. 5. Caractersticas antignicas. Se refiere a la deteccin de componentes celulares especiales (qumicos) que dan prueba de similitud entre las especies. 6. Caractersticas genticas. Se refiere al anlisis de la composicin del cido desoxirribonucleico (DNA), as como la determinacin de la reaccin que ocurre entre material DNA a partir de diferentes microorganismos. Sobre la base de todas estas propiedades y caractersticas, se ha ido clasificando a los microorganismos: 1. Con relacin al reino. 2. Dividindolos en grupos y subgrupos con el siguiente orden: phylum, clase, orden, familia, tribu, gnero, especie, variantes (serotipos). El nombre cientfico del microorganismo se escribe en latn y letra cursiva y est formado por: a) GNERO; escrito con mayscula, seguido por la (b)ESPECIE escrita en minscula. P. ej. Bacillus subuies Amaeba proteus Aspenrgillus niger (bacteria) (protozoario) (hongos)

GENERALIDADES DE INDUSTRIA HONGOS Y LEVADURAS

LOS DIFERENTES GRUPOS DE MICROORGANISMOS

CLNICAMENTE IMPORTANTES Y DEAQUELLOS QUE SE RELACIONAN CON

Son clulas que se consideran EUCARIOTICAS, no llevan a cabo la fotosntesis, ya que carecen de clorofila. Crecen en medios habituales del laboratorio. Su reproduccin es por esporas. Pueden ser de tipo Macroscpico o Microscpico: macroscpicos como lo es el caso de los championes. Los microscpicos estn formados por una serie de tubos llamados HIFAS. En algunos hongos, las hifas tienen paredes transversales llamadas SEPTAS y a las hifas se les nombra Hifas Septadas, entre septa y septa transversal existe un espacio el cual es llamado artculo. Las hifas que no poseen estas paredes transversales se les llama hifas CENOCITICAS; ahora si tenemos un conjunto de hifas ya sean septadas o no septadas, entonces tenemos las MICELAS. As como hay hongos de provecho tambin hay hongos que son perjudiciales para el hombre como lo son: COCCIDIOIDIS INMILIS que causa lesiones en la piel, huesos y endmicos principalmente en Sonora y Baja California. Las levaduras pueden ser de forma esfrica, alargada, ovoides y son mucho ms grandes que las bacterias. Su reproduccin es asexual por el proceso de Gemacin. Las levaduras son Eucariticas y adquieren la apariencia de nopales. Tambin pueden ser patgenas como Candida albicans que causa lesiones en el pelo, uas, pie de atleta y otros rganos. BENFICOS COMO Sacharomyces cerevicial que permiten la obtencin de alcohol.

La importancia de muchas levaduras y mohos en la industria es por su capacidad de formar productos de fermentacin como alcohol isopropilico y acetona, tambin son tiles en la industria del pan y del queso y en la industria farmacutica por la obtencin de ciertos antibiticos. En cuanto al cultivo, en general tanto mohos como levaduras se desarrollan mejor a temperatura ambiente entre los 20 y 25 grados centgrados o a los 37 grados y en medios de PH 5.5 a 6.5. La mayora de los hongos son aerobios y para su aislamiento se usan medios como Sabouraud y medio de pensilvania. En sus caractersticas morfolgicas de las levaduras y mohos se observan mejor en preparaciones sin teir, con menos alteracin y con lentes de poco aumento. GENERALIDADES DE LOS VIRUS Los virus son microorganismos tan pequeos que solo pueden verse con los aumentos que proporciona el microscpio electrnico. Estos pueden pasar a traves de los poros de filtros que no permiten el paso de las bacterias. Los virus solo se pueden reproducir dentro de las clulas de animales, vegetales y otros microorganismos, por esta razn se le considera como parsitos obligados intracelulares. Los virus dependen de las clulas del hospedador para su reproduccin debido a que carecen en gran parte de maquinaria metablica propia, son incapaces de generar energa o de sintetizar protenas y dependen de las clulas del hospedador para realizar estas funciones. Sin embargo los virus pasan informacin gentica al igual que las clulas del hospedador para la reproduccin y para apoderarse de los sistemas generadores de energa y de sntesis de protenas de las clulas hospedadoras. El material gentico que poseen es DNA o RNA pero no ambos, este material gentico se encuentra encerrado en una cubierta de protena altamente especializada, que lo protege cuando el virus se encuentra fuera de la clula hospedadora, a la vez le sirve como vehculo de entrada cuando penetra en dicha clula.

A los virus estructuralmente completos maduros e infectivos se les conoce como VIRIONES. A los virus que infectan a las bacterias se les llama bacterifagos. Estos fueron descubiertos independientemente por Frederick W. Twort, en Inglaterra en 1915 y por Flix D' Elle en 1917. Los bacterifagos fueron observados en colonias bacterianas que sufran lsis, se disolvan y desaparecan, adems este efecto podran ser transmitido de una colonia a otra y a partir de estas observaciones se sugiri que el agente ltico poda ser un virus. Posteriormente estos han sido ampliamente utilizados en investigaciones genticas debido a que son entidades biolgicas ms pequeas y ms sencillas y que son capaces de autoreplicarse. Los virus se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza y existen en la mayora de las bacterias, tambin existen en diferentes formas aunque muchos poseen una cola a travs de la cual circula el cido nucleico en el interior de la clula hospedadora; los principales tipos de virus bacterianos son: VIRUS LITICOS O VIRULENTOS y VIRUS MODERADOS (LISOGENICOS) O AVIRULENTOS. REPRODUCCIN DE LOS VIRUS El primer paso en la reproduccin de un bacterigeno es la absorcin en el cual el extremo de la cola del virus queda unida a la pared celular, la fijacin es especfica ya que poseen configuraciones moleculares completarias en sus sitios receptores opuestos. El segundo paso es la penetracin que es un hecho mecnico que permite la entrada del fago a la clula hospedadora gracias a una enzima llamada lisosima la cual va en la cola del fago y digiere la pared celular, aunque la penetracin se logre una vez que las fibras de la cola se fijan a la clula y la vaina se contrae induciendo el tubo de la cola en la clula y este inyecta

su DNA y la cubierta de protena que forma la cabeza y la estructura de la cola del virus permanece fuera de la clula. En aquellos que no poseen vaina contrctil todava no est claro cmo penetra el cido nucleico en la clula. CULTIVO DE VIRUS Los virus se pueden cultivar inoculando ratones o utilizando tejidos. La inoculacin en ratones, cobayos, conejos y primates se han utilizado para el cultivo de los virus ya que son un buen instrumento de diagnstico, debido a que pueden mostrar sntomas tpicos de la enfermedad siendo posible examinar cortes histolgicos al microscopio. El cultivo de tejidos para virus se inici con el cultivo de embriones de pollos triturados en sueros o en soluciones salinas, esto condujo a la utilizacin de tejidos puros de tejidos de clulas animales en las que podran crecer los virus. Ahora se cultivan como las clulas bacterianas en recipientes de plstico o de vidrio donde quedan adheridos a la superficie y continan dividindose produciendo una monocapa de clula que se utilizan para la propagacin de los virus en grandes cantidades para realizar estudios de investigacin, para la produccin comercial de vacunas y para el aislamiento y propagacin de virus procedentes de material clnico. En cuanto a las vacunas preparadas a partir de cultivos tienen una ventaja sobre las preparadas en embriones de pollo, ya que se reduce al mnimo la posibilidad de que un paciente presente hipersensibilidad o alergia a la albmina de huevo.

Inicio
III. FUNDAMENTOS DE LA MICROBIOLOGA ANATOMA DE LAS BACTERIAS

La anatoma de las bacterias se refiere al estudio de las estructuras de un organismo, as como su organizacin en cuanto a las partes del mismo y la relacin estructural entre las mismas. Los elementos bsicos de la anatoma bacteriana comprenden: Citoplasma (cuerpo celular interno), Pared Celular y en cuanto al Ncleo no se conoce la naturaleza exacta pero s contiene el material nuclear y que puede estar esparcido en el Protoplasma. CITOPLASMA: Se haya rodeado de una membrana citoplasmtica, situada justamente en el interior de la pared celular, esta contiene generalmente varios granulos y otras inclusiones celulares, tambin el material nuclear que es de importancia vital. PARED CELULAR: Es una estructura muy rgida que se encuentra entre la membrana citoplasmtica y cpsula o capa mucosa, se encuentra en todas las clulas vivas, tienen cierta elasticidad vara de acuerdo con la bacteria y sus condiciones. El espesor de la pared de la mayora de las bacterias vara entre 10 y 35 Nm. sin embargo, algunos son considerablemente gruesas resistentes a los agentes qumicos como susceptibles a las tinciones. La pared celular puede contener en la superficie rganos de locomocin como: Flagelos, Vellosidades (fimbrias). Tambin estructuras internas especiales llamadas Esporas. COMPOSICIN QUMICA DE LA PARED CELULAR Poseen en su estructura material Peptidoglicano y es el que proporciona rigidez a la pared. Son polmeros de grandes molculas que se repiten por unidades. LAS UNIDADES QUE SE REPITEN SON: 1. N-Acetil glucosamida (AGA) 2. Ac. N- acetil Muramico 3. Peptidos (de 4 a 5 aminoacidos). L- Alanina, D- Alanina, D- ac. Glutmico, Lisina y otros constituyentes qumicos como: a) Ac. Teicico

b) Protenas con polisacaridos c) Lipoprotenas d) Lipopolisacaridos Todos esos constituyentes estn unidos al peptidoglicano, forman la estructura qumica compleja y le dan rigidez. MEMBRANA CITOPLASMTICA Se encuentra debajo de la pared celular, llamada tambin membrana protoplasmtica o membrana plasmtica su medida es de 7, 5nm. Es extremadamente importante por qu controla el paso de sustancia qumica en solucin hacia adentro y fuera de la clula, es capaz de tomar y retener cantidades adecuadas de nutrientes y de descargar el exceso y/o los productos de desecho. Proporciona adems la maquinaria bioqumica para transportar iones inorgnicos, azucares, aminocidos y otros metabolitos a travs de esta membrana. Esta sustancia en solucin o soluto pasan a travs de la membrana por: 1. DIFUSIN PASIVA: (OSMOSIS): Es inesposifica no se hace distincin entre los solutos que pasa a travs de la membrana. Proceso mediante el cual la sustancia qumica pasa a travs de la membrana desde un rea de mayor concentracin a un rea de mayor concentracin La difusin pasiva acta para igualar la concentracin de solutos a ambos lados de la membrana. 2. TRANSPORTE ACTIVO: Es altamente especfico, es decir los solutos pasan antes de haber sido seleccionados. Adems permiten que se alcance una [ ] de soluto ms alta, dentro de la clula que la que existe fuera de la clula. El transporte activo es muy importante para las clulas bacterianas en ambiente como el ocano, en donde la nutricin est presente en pequeas cantidades. El proceso de transporte activo implica un intrincado mecanismo dentro de la membrana citoplasmtica, compuestos transportadores de membranas, junto con reacciones bioqumicas que proporcionan energa, realizan esta clase de trabajo.

ESTRUCTURA DENTRO DE LA MEMBRANA CELULAR CONTENIDO DENTRO DE LA MEMBRANA CITOPLASMTICA 1. REA CITOPLASMTICA: (de aspecto granular que es rica en RNA) densamente empaquetados a travs del rea citoplasmtica hay partculas de PROTENAS- RNA llamados RIBOSOMAS. RIBOSOMAS: Son el sitio de la biosintesis de protena y se encuentran en todas las clulas (procarioticas e eucarioticas). 2. REA CROMATICA O REA NUCLEAR: Que es rica en DNA. 3. PORCIN FLUIDA: Que contiene nutrientes disueltos, materia particulada (cuerpos de inclusin). REA NUCLEAR: Las clulas bacterianas a diferencia de los organismos eucariticos: Carece de cromosomas discretos. Aparato mittico (para la divisin celular). Nucleolo. Membrana nuclear. El material nuclearo DNA, en una clula bacteriana ocupa una posicin cerca del centro de la clula y est unida al sistema mesosoma-membrana citoplasmtica. (mesosoma invaginacin de membrana citoplasmtica). Este material es el aparato gentico total o genma de la bacteria. APARATO GENTICO O GENOMA {DNA-SISTEMA MESOSOMAMEMBRANA CITOPLASMTICA {CONTIENE UN CROMOSOMA CIRCULAR. Consta de un nico cromosoma circular en el que van todos los genes. En cuanto al material nuclear se le designa CUERPO DE CROMATINA, NUCLEOIDE, O CROMOSOMA BACTERIANO. INCLUSIONES CITOPLASMTICA: Dentro del citoplasma pueden acumularse diferentes clases de sustancias qumicas y formar granulos y glbulos denominados CUERPOS DE INCLUSIN. Ejemplo: hay bacterias que acumulan grandes cantidades de azufre que aparecen como glbulos dentro del

citoplasma. Otros cuerpos de inclusin estn formados por compuestos de: polifosfato, lpidos, glucgeno o almidn. ESTRUCTURA FINA DE LAS CLULAS BACTERIANAS: El examen de una clula bacteriana por tcnicas de microscopa moderna, revela que existen estructuras por fuera de la pared celular como: FLAGELOS: Compuestos por subunidades de protenas fibrosas o flagelina y contractil, estos salen del citoplasma y miden aproximadamente 0.013 micras. Los contienen gneros de bacterias como las pseudomonas, Escherichia, todos los espirilos, mitad de los bacilos y ningn coco ordinario. PELOS (FRIMBRIAE): Son filamentos ms cortos y numerosos compuestos por subunidades de protena (pilina) lo contienen tanto m.o mviles, inmviles, ejemplo: salmonella tiphi (bacilos), bacterias, shigella flexneri. CPSULA: Algunas bacterias se encuentran rodeadas de una capa de material viscoso conocido como cpsula o capa mucosa el tamao de esta cpsula depende del medio en el que crece la bacteria. Puede ser una fraccin de un dimetro de la clula o mucho ms grande en grosor que la misma clula bacteriana. La relacin exacta entre la cpsula y el resto de la clula no se conoce. Se cree que el material que forma la cpsula es segregado a partir de la clula y debido a su viscosidad no pueden difundirse quedando solo alrededor de la pared celular. Ejemplo: las bacterias con cpsula que crecen en la leche producirn un espesamiento de esta. La cpsula le proporciona a las bacterias una cubierta protectora y sirve de reservario de alimento almacenado. Las cpsulas de ciertas bacterias que producen enfermedad aumentan la capacidad infectiva de las bacterias. Ejemplo: KLEBSIELLA PNEUMONEAE. Si las bacterias pierden su cpsula totalmente pueden perder su virulencia y por tanto su capacidad para producir enfermedades.

Las bacterias capsuladas tambin son responsables en algunos procesos industriales: a) Pueden tupir los filtros (por exceso de material viscoso o sustancias mucosas en el equipo de fabricacin). b) Recubrir tuberia. c) Afectar la calidad del producto (fbricas de papel, mediante la formacin de sustancias mucosas, cpsula en la planta).

VAINAS: Algunas especies de bacterias, particularmente los de ambientes de agua dulce y marinas estn encerradas dentro de una vaina y tbulo. Formados por compuestos metlicos insolubles, (xido frrico, xido mangansico), que se encuentran precipitados en torno a la clula como producto de actividad metablica. Estos compuestos metlicos insolubles son formados por la clula a partir de compuestos solubles de hierro o manganeso presentes en el ambiente. La vaina no es una parte vital de la clula, sino que la bacteria con vaina constituye en grupos importantes de m. o. Aguas dulces: rica en materia orgnica. PEDUNCULOS: Ciertas bacterias se caracterizan por la formacin de un apndice semirgido llamados pednculos que se prolonga desde la clula. El dimetro del apndice es menor que es de la clula que le ha producido. El pednculo tiene una sustancia adherente en el extremo dostal (ms distante de la clula) que les permite a la clula pegarse a superficie slida. Estas bacterias se encuentran en: Aguas dulces Ambientes marinos

Donde la posibilidad de fijarse a superficie slida es importante para el crecimiento bacteriano y para su supervivencia. ESPORAS Y PROCESO DE ESPORULACION: Durante el ciclo de esporulacin se sintetiza cido dipiconlico, que es exclusivo de la espora bacteriana y que no se encuentra en la clula vegetativa (bacteria en su estado natural de crecimiento activo). PROPIEDADES DE LAS ESPORAS LIBRES Las esporas bacterianas libres tienen dos propiedades fundamentales: 1. Son altamente resistentes a los cambios fsicos y qumicos que podran lesionar a los organismos vegetativos como: La sequedad, el calor, substancias qumicas perjudiciales, a los desinfectantes, son difciles de teir, etc. 2. Son capaces de germinar en condiciones favorables (es decir que pueden volver a su forma vegetativa original de desarrollo con todas las propiedades intactas, como: humedad, disponibilidad de ciertos aminocidos y substancias nutritivas. Es importante sealar que el proceso de germinacin va acompaado de prdida de resistencia al calor, liberacin de cido dipiconlico en el medio y aumenta su actividad enzimtica. IMPORTANCIA La importancia radica en que es una propiedad de un grupo pequeo de bacilos con caractersticas en comn. Todos los bacilos formadores de esporas se pueden encontrar en el suelo, en el tracto intestinal (humano y animal). Algunos pueden ser patgenos y la mayora son saprfitos. Ejemplo: Clostridium tetani - - - - - - Germen del ttano Clostridium perfringens - - Bacilo de la Gangrena gaseosa

Bacillus anthracis - - - - - Germen causante del carbunco REQUERIMIENTO GASEOSO. Los principales gases que afectan el crecimiento bacteriano son: oxgeno atmosfrico y Bixido de Carbono. Las bacterias pueden mostrar amplia variedad de respuestas al oxgeno atmosfrico libre por lo que se pueden clasificar en: AEROBIAS, ANAEROBIAS, ANAEROBIAS FACULTATIVAS Y MICROAEROFILAS. AEROBIAS. Las que necesitan de presencia de oxgeno atmosfrico, para poder desarrollarse. ANAEROBIAS. Las que no necesitan de oxgeno atmosfrico para poder desarrollarse. ANAEROBIAS FACULTATIVAS. ausencia de oxgeno atmosfrico. MICROAEROFILAS. Las que pueden crecer en pequeas cantidades de oxgeno atmosfrico. ACIDEZ O ALCALINIDAD. La mayora de las bacterias crecen en condiciones de cultivo con PH de 6.5 a 7.5. Es muy probable que el pH cambie como resultado del efecto de compuestos cidos o bsicos, producidos durante el metabolismo, esto se puede evitar incorporando al medio, soluciones buffers o tampones como amortiguadores de PH. SALINIDAD. Las bacterias requieren de ciertas concentraciones de sal, y dependiendo de lo que soportan se pueden nombrar como Halfilas o Halfilas facultativas. HALOFILAS. Aquellas que necesitan altas concentraciones de sal para poder crecer. HALOFILAS FACULTATIVAS. Aquellas que pueden crecer en diferentes concentraciones de sal. Las que crecen y se desarrollan en presencia o en

MICROSCOPIO Y TIPOS DE MICROSCOPIAS

El microscopio es uno de los instrumentos ms importantes, en relacin al desarrollo de la medicina como ciencia y como arte, no dejando de lado que es el instrumento ms importante dentro de un laboratorio de microbiologa, o un laboratorio de cualquier especialidad. La palabra MICROSCOPIO, deriva del griego uixpo que significa "pequeo" y axanelv que significa "ver". Fue inventado por Giovanni Farber en 1625 y aproximadamente 48 aos ms tarde, el verdadero impulsor de la microscopia fue el holands Anton Van Leewenhoek (1632-1723), quien desarroll un microscopio funcional en 1673. El microscopio es un instrumento que permite observar objetos no perceptibles a simple vista. Ello se consigue mediante un sistema ptico compuesto por lentes de cristal que al ser atravesadas por la imagen del objeto la amplifican. Cada tipo de microscopio y cada mtodo utilizado para preparar muestras, ofrecen ventajas para demostrar algunos aspectos morfolgicos de los microorganismos. Segn el nmero y disposicin de las lentes, se puede diferenciar entre microscopio ptico simple y microscopio ptico compuesto. Todas aquellas lentes con montura o sin ella, gruesas o pequeas, biconvexas o planoconvexas; que amplifiquen los objetos que consideran microscopios simples. El microscopio compuesto, est constituido por la combinacin de dos sistemas de lentes convergentes, uno prximo al ojo del observador (ocular) y que acta como microscopio simple; otro prximo al objeto y denominado OBJETIVO; este tipo de microscopios son los que normalmente encontramos en los laboratorios.

Por muy variables que sean las lentes, cualquiera que sea su potencia, el principio siempre ser el mismo; pero cuanto mayores sean las curvaturas de las lentes y distancia entre el sistema objetivo y sistema ocular (longitud ptica), mayor ser el aumento total. El microscopio ptico consta de tres sistemas: mecnico, ptico y de iluminacin. SISTEMA MECNICO. Consta de una base o pie, brazo, portacondensador, platina, revlver, cabeza, cremalleras, tornillos macromtrico y micromtrico. Todo el sistema en s tiene por objeto sostener el sistema ptico y el de iluminacin en un mismo eje. SISTEMA DE ILUMINACIN. Se encuentra situado bajo la platina y tiene la misin de iluminar los objetos por medio de luz transmitida. Est formada por una fuente luminosa, espejo, condensador, diafragma, diafragma del condensador y de lmpara, filtros y colector. Consta de un espejo y un diafragma, el espejo es adaptable a diferentes posiciones, tiene superficie plana y otra cncava que pueden intercambiarse. La fuente luminosa puede ser natural o artificial. Artificial cuando la fuente luminosa es un filamento de tungsteno (w). El diafragma va montado bajo la platina. Es un sistema de iris y permite, por medio de una palanca, obtener a voluntad conos luminosos de distinto tamao y, mediante condensadores, conos luminosos muy grandes. Los condensadores constan de un sistema de lentes de gran abertura sujetos a una montura y colocados entre la platina y el espejo, pueden subirse y bajarse a voluntad y tienen un diafragma unido al conjunto. SISTEMA PTICO. Consta de un sistema de lentes oculares y de un sistema de lentes objetivos.

Los lentes oculares ms comunes son de 8x, 10x, 12.5x y los objetivos panormicos son de 1, 2, 5, 3.2, 4 y 6.3x. El microscopio compuesto que se manejar en los laboratorios tiene los objetivos: a) Objetivo seco dbil b) Objetivo seco fuerte c) Objetivo de inmersin 10x 16, 25, 32, 40, 63x 50x, 63x, 100x por su poder de resolucin

En la actualidad con ciertos aditamentos que se utilizan en el microscopio ptico ordinario, se pueden tener las siguientes microscopas: 1. De campo oscuro 2. De contraste de fases 3. De luz ultravioleta 4. De fluorescencia MICROSCOPA DE CAMPO OSCURO Se usa el mismo equipo excepto el condensador. Aqu se usa un condensador para campo oscuro. Este condensador tiene un disco negro en la parte central de las lentes, las cuales hacen que los rayos luminosos entren solo por las orillas no oscurecidas, originando as que en vez de obtenerse un haz de luz completo, solo se obtiene un haz anular. Esta luz no entra normalmente al objetivo por salir del condensador en ngulo muy oblicuo y el campo microscpico se ve obscuro. El objeto se ve brillante en el fondo oscuro a diferencia de la microscopa de campo claro que es la normalmente usada en laboratorios, en donde el microscopio posee un condensador normal. Este deja pasar la luz o rayos luminosos tanto centrales como perifricos, produciendo campo brillante o claro.

MICROSCOPA DE CONSTRASTE DE FASES

El microscopio de contraste de fases est diseado de tal manera que sus objetivos y condensadores separan la luz directa que pasa la preparacin y la desviada por los objetos contenidos en ella. El objetivo tiene un anillo pintado de un material semitransparente que permite que la luz directa que pasa por la preparacin sea retardada una media onda en relacin con la luz desviada por la preparacin. El resultado es el ver un objeto ms claro que lo normal y rodeado de un fondo ms oscuro que lo normal. Anlisis de estructuras que vistas por microscopa ordinaria son poco visible; debido a que sus ndices de refraccin son muy parecidos. Estas pequeas diferencias en el ndice de refraccin hacen que la luz del condensador se desve un poco. Tanto en microscopa de campo oscuro y en campo de contraste de fases se utilizan preparaciones suspendidas en lquidos, no teidas para obscurecer estructuras internas. MICROSCOPA DE LUZ ULTRAVIOLETA El microscopio de luz UV permite un mayor poder de resolucin, lo que hace posible que haya ms aplicaciones que las obtenidas por microscopio de luz ordinaria. La luz ultravioleta tiene una longitud de onda ms corta (entre 180 a 400 nm) frente a 400 a 700 nm de la luz visible, lo que le dar un aumento en el poder de resolucin alrededor del doble obtenido por microscopa de luz luminosa. La principal ventaja estriba en devolver la absorcin especfica de varias sustancias visibles. La caracterstica de absorber la luz UV de algunas sustancias permite su localizacin, distincin y medicin en especmenes incluso en estado vivo.

Como las radiaciones UV son invisibles, las imgenes se hacen visibles por el registro sobre una emulsin fotogrfica por el uso de un tubo convertidor de imagen o por desplazar una pantalla de televisin despus de que es captada por un tubo de cmara de televisin sensible a la luz ultravioleta. MICROSCOPA DE FLUORESCENCIA Algunos colorantes denominados fluorocromos tienen la propiedad de ser excitados (pasar a un nivel superior de energa) cuando absorben luz UV (luz de corta). A medida que las molculas excitadas regresan a su estado normal liberan el exceso de energa en forma de luz visible de mayor que la radiacin excitante. Esta propiedad se le denomina fluorescencia. La microscopa fluorescente se basa en la ley fsica que dice: "una molcula excitada no puede ceder energa a otras molculas, sino que las emite como radiacin, en este caso como luz de mayor longitud de onda". Existen muchos aparatos que se utilizan en este campo, pero todos tienen en comn ciertos componentes como: fuente de luz, filtros selectivos de excitacin y filtros secundarios oculares, todos ellos adaptados al microscopio. Tambin se han desarrollado mtodos microscpicos modernos que aprovechan la mayor deteccin que posibilita este sistema. El diagrama de un microscopio de fluorescencia moderno permite que la luz sea emitida desde arriba (epifluorescencia) del preparado. Un filtro deja pasar la deseada para excitar al fluorocromo y un filtro barrera en el objetivo protege al ojo del observador de la radiacin fluorescente. Los objetos fluorescentes aparecen brillantemente iluminados contra un fondo oscuro segn el color del colorante usado. P. ej. Absorbe a 365m Emite a 542 m

Anaranjado de acridina A estos materiales se les llama fluorescentes y al fenmeno se le denomina fluorescencia. VENTAJAS

Permite obtener resultados rpidos. En ciertos casos se puede obtener un diagnstico de certeza a partir de frotis directo, sin
necesidad de esperar un cultivo.

Es posible identificar un pequeo nmero de microorganismos de un cultivo mixto. Es posible identificar microorganismos muertos o que no pueden ser cultivados. Se pueden utilizar pequeas cantidades de colorante en la fijacin del microorganismo para
tener resultados positivos en comparacin con otras tcnicas de tincin.

Es un mtodo ms sensible.
Los microorganismos se tien con un colorante fluorescente y aparecen como objetos luminosos cuando se observan al microscopio con iluminacin de luz UV. Los colorantes fluorescentes tienen varias aplicaciones en microbiologa. La ms notable e importante es detectar reacciones antgeno-anticuerpo. Los colorantes fluorescentes se combinan qumicamente con los anticuerpos. Esto hace posible identificar clulas individuales que reaccionan con el anticuerpo. A esta aplicacin se le conoce como tcnica de Anticuerpos fluorescentes o Inmunofluorescencia. MICROSCOPIO ELECTRNICO Trabaja no con rayos luminosos sino con rayos electrnicos propagados en el vaco que concentrados y refractados por campos magnticos se proyectan sobre la preparacin y se proyectan en un foco donde proyectan una imagen no visible, pero que puede fotografiarse o

revelarse en una pantalla especial. Se logran aumentos de 30 000 a 100 000 dimetros. Puede resolver partculas a 0.001m. Tcnicas electrnicas Tcnica de sobreado Tcnica de cortes ultrafinos

Tcnica de sombreado Consiste en depositar un fino bao de metal (p. ej. platino) sobre el objeto, colocndolo en el trayecto de un haz de iones metlicos en el vaco. El haz se dirige oblicuamente de manera que el objeto adquiera una "sombra" en forma de un rea no baada en el otro lado. Cuando luego se hace pasar un haz de electrones a travs de la preparacin baada en el microscopio electrnico y se hace una impresin positiva de la imagen negativa, el efecto que se obtiene es tridimensional. Tcnica de cortes ultrafinos El uso de cortes ultrafinos de material incluido, el mtodo de desecacin por congelacin de las muestras que impide las distorsiones provocadas por los procedimientos tradicionales de secado y el uso de la tincin negativa con un material electrodenso como el cido fosfotngstico. Microscopio electrnico de barrido Proporciona imgenes tridimensionales de las superficies de los objetos observados. El objeto es recubierto inicialmente con una delgada pelcula de un metal pesado y a continuacin es explorado por el haz de electrones del microscopio. Los electrones dispersados por el metal pesado son reunidos y enfocados para formar la imagen final.

MTODOS Y TCNICAS PARA EL ESTUDIO DE MICROORGANISMO Preparacin de muestras para su examen por microscopa ptica Todos los microorganismos en estudio pueden ser examinados, ya sea en estado vivo y sin teir o despus de haber sido teidos por colorantes, para que resalten con ms claridad. Para esta finalidad se han ideado mtodos de preparacin de los especmenes, como lo son suspensin de los organismos en un lquido y utilizacin de pelculas delgadas o frotis secos, fijados y teidos. Las tcnicas que se conocen son: Tcnica de montaje hmedo, tcnica de gota pendiente, tcnica de bloque pendiente, y la tcnica de preparaciones fijadas y teidas. Las tcnicas ms utilizadas son la tcnica de montaje hmedo y tcnica de gota pendiente las cuales hacen posible examinar organismos en condiciones de vida normal suspensos en un lquido. Y la tcnica de preparaciones fijas y teidas la cul hace posible examinar organismos en cuanto a su morfologa y ordenamiento caracterstico pero en condiciones no vivas. Tcnica de montaje hmedo normal Consiste en colocar sobre un portaobjetos normal una gota de la suspensin bacteriana, utilizando un asa estril, se coloca un cubreobjetos, sellando los lados con vaselina para evitar que se seque la preparacin. Tcnica de gota pendiente Tcnica utilizada para observar la movilidad de bacterias vivas, as como su fisin binaria y otras caractersticas de los organismos que pueden ser destruidas por coloracin. Se utiliza una laminilla especial para gota suspendida (placa excavada), se coloca un poco de vaselina con un palillo alrededor de la concavidad y de la suspensin bacteriana se pone una gota en el centro de un cubreobjetos, posteriormente se tapa con una laminilla excavada de tal forma que la concavidad coincida con el centro del cubreobjetos donde se

encuentra la gota, se invierte suavemente la lmina y se presiona para evitar la evaporacin, de esta manera queda la gota suspendida y lista para observarse con el objetivo seco dbil y con el diafragma cerrado unas dos terceras partes hasta enfocar y encontrar la gota suspendida y pasar gradualmente al objetivo de mayor aumento. Tcnica de bloque pendiente Es un mtodo til en el estudio de la divisin celular de las bacterias. Es un mtodo conocido como Mtodo de Hill. En la prctica rutinaria no es utilizada. En general las tcnicas de montaje hmedo son preferibles en los siguientes casos: a) Observacin de microorganismos que al teirse puedan ser destruidos o alterados en su morfologa, p. ej. las espirales. b) Cuando sea susceptible de contener espiroquetas que causen sfilis. c) Se sospeche de microorganismos mviles. d) Se desee observar cambios citolgicos que ocurren durante la divisin celular y se desee determinar la velocidad con que ocurren. e) Observacin de inclusiones celulares, como vacuolas y materia grasa. Preparacin de muestras fijas Mtodos utilizados en la observacin de caractersticas morfolgicas y estructurales de las bacterias. El mtodo consiste en que a partir de una suspensin bacteriana, se extienda sobre un portaobjetos una fina pelcula de la misma con un asa estril, se deja secar al aire libre y se fija la preparacin, pasando el portaobjetos unas 3 veces por la flama del mechero; cuidando que la pelcula quede hacia arriba. En la fijacin tambin se pueden utilizar ciertas sustancias qumicas en vez de calor, como el alcohol metlico, formol u otros. TINCIONES Y TCNICAS DE TINCIN Debido a que las bacterias y otros microorganismos son pequeos y su protoplasma posee un ndice de refraccin cercano al del agua, se requiere generalmente de tinciones

biolgicas para visualizar adecuadamente o demostrar el fino detalle de sus estructuras internas. En el siglo XIX, la introduccin de la coloracin fue un gran avance, o de los principales avances en microbiologa clnica y en otros campos de microscopa diagnstica, durante los ltimos 100 aos, hoy se depende de estas coloraciones. Las tinciones se llevan a cabo con soluciones acuosas u orgnicas de colorantes o grupos de colorantes que confieren una variedad de colores a los microorganismos, tejidos animales o vegetales, u otras sustancias de importancia biolgica. Los colorantes no solo se emplean para la tincin directa de materiales biolgicos sino adems para demostrar las funciones fisiolgicas de los microorganismos. Tambin sirven como indicadores de cambios de pH en los medios de cultivo y como indicadores Redox para demostrar la presencia o ausencia de condiciones anaerobias. Casi todos los colorantes biolgicamente tiles son derivados del alquitrn y la estructura fundamental alrededor del cual estn constituidas qumicamente la mayora de los colorantes es el anillo bencnico. Difieren en el nmero y disposicin de estos anillos y a la sustitucin de los tomos de hidrgeno por otras molculas. En Microbiologa la mayora de los colorantes ms utilizados son derivados de la anilina. Los compuestos orgnicos coloreados (colorantes), para teir microorganismos son muchsimos, y de estructura compleja. Se pueden clasificar en grupos como: 1. Colorantes de trifenilmetano. 2. Colorantes de oxacina. 3. Colorantes de tiacina.

La clasificacin de los colorantes es algo compleja, pero generalmente est basada en los cromforos presentes, y prcticamente de acuerdo al comportamiento qumico del colorante. En trminos amplios se dividen en: cidos, bsicos y neutros; que no indican necesariamente sus reacciones de pH en solucin sino ms bien una parte significativa de la molcula o sea si es aninica o catinica. Desde el punto de vista prctico, los colorantes cidos reaccionan con sustancias bsicas ( como estructuras citoplasmticas). Los bsicos tien estructuras de naturaleza cida como la cromatina nuclear de las clulas. Los neutros son sales formadas por un colorante cido y un colorante bsico, p. ej. el eosinato azul de metileno. Lo ms comn son los dos primeros procesos. Coloracin. Es un proceso de teir artificialmente los microorganismos con colorantes o reactivos, para facilitar su estudio microscpico. El proceso de tincin supone una reaccin de intercambio de iones entre el colorante y sitios activos de la superficie o internos de la clula. Donde los iones teidos reemplazan a otros iones en los compuestos celulares. Las protenas y los cidos nucleicos celulares, pueden participar en la formacin de las sales con iones positivos: Clula bacteriana (Na) + El in coloreado est positivo: MB Cl, colorante cloruro azul de metileno. - + Clula bacteriana Na + + MB Cl (reemplazo). +

+ Clula bacteriana MB +

+ Na Cl

Los colorantes son compuestos orgnicos que constan de anillos bencnicos y grupos cromfonos y auxcromos, para poder fijar el colorante a un objeto es necesario el uso de un mordente. MORDENTE. Es toda sustancia qumica que fija el colorante de tal modo que el material teido lo retiene, p. ej. sulfato ferroso, cido tnico, yodo, etc. Los mtodos de coloracin se pueden clasificar de acuerdo al nmero de colorantes y reactivos que se utilicen como: coloraciones simples o directas y coloraciones diferenciales. Coloraciones simples o directas. Coloraciones en las cuales se utiliza un solo colorante aplicado a una fina pelcula fijada o frotis. Coloraciones diferenciales. Mtodo utilizado para teir microorganismos por aplicacin de una serie de soluciones colorantes y/o reactivos, aplicados a una pelcula de bacteriras o frotis. Dependiendo de la aplicacin y lo que se desee observar respecto a una clula, existen diferentes tipos de coloraciones o tcnicas que de alguna u otra manera se considera, ya sea directas o simples y/o diferenciales, que son: Simples o directas Diferenciales: Gram, cido resistente, Giemsa, coloraciones especiales para descubrir estructuras Tincin negativa

Coloraciones

COLORACIN SIMPLE: (COLORACIN DIRECTA). Mtodo de tincin de bacrerias o de otros organismos, por aplicacin de una sola solucin de un colorante a una pelcula fijada o frotis. Los colorantes utilizados pueden ser, azul de metileno, verde de malaquita, etc. A veces en el interior de las clulas, aparecen granulos ms profundamente teidos que el resto de la clula, lo cual indica la presencia de entidades qumicas activas en forma de partculas que tienen mayor afinidad por el colorante que la clula en conjunto. COLORACIONES DIFERENCIALES: Mtodo de tincin de bacterias, por aplicacin de varias soluciones de colorantes y reactivos, en una muestra fijada o frotis. Este mtodo incluye varias tcnicas, dependiendo de lo que se desee conocer o estudiar sobre los microorganismos. Independientemente de la tcnica utilizada, el mtodo en general pone de manifiesto diferencias entre clulas microbianas o entre partes de una clula. Los colorantes y reactivos que se utilizan depende de la tcnica empleada y de lo que se desee observar o estudiar. De las tcnicas ms utilizadas estn la Tcnica de tincin Gram, Tcnica de tincin cido resistente o de Ziehl Neelsen, Tcnica de tincin Giemsa. Tcnica de tincin Gram. tincin diferencial ms utilizada en bacteriologa, debido a que prcticamente todas las bacterias pueden ser clasificadas como Gram positivas o como Gram negativas. Estas dos categoras pueden diferenciarse por este mtodo de acuerdo a su estructura en la composicin de la pared celular. La teora sobre el mecanismo de la tincin Gram, se basa en la permeabilidad de la membrana. El contenido de lpidos de una a otra categora es variable y de esto depende el que la membrana pueda tener mayor permeabilidad o disminucin de permeabilidad al ponerse en

contacto con solventes orgnicos, por lo que las bacterias podrn retener uno u otro colorante utilizados en esta tcnica. En el caso de las bacterias Gram positivas por su bajo contenido de lpidos es disminuida su permeabilidad con el solvente orgnico, por lo que puede retener el colorante primario con el que se ha teido la muestra y se observaran de un color violeta. En el caso de las bacterias Gram negativas por su alto contenido de lpidos su permeabilidad es todava suficiente como para no poder retener el colorante primario al utilizar el solvente orgnico de tal manera que quedan incoloras y se colorean con el colorante de contraste utilizado, observndose las bacterias de un color rosa o rojo. La tcnica incluye las siguientes substancias; Cristal violeta como colorante primario, lugol como mordente, alcohol-acetona como solvente orgnico y safranina como colorante de contraste. Estas substancias se deben aplicar en el mismo orden ya que cualquier cambio puede afectar a la reaccin. Tcnica de tincin de Ziehl-Neelsen. Mtodo de tincin diferencial, utilizado para detectar la presencia de organismos cido resistentes. Las Micobacterias poseen cpsula gruesa y cerosa, resistentes a la tincin; sin embargo una vez teidas, esta cpsula resiste a la decoloracin cuando es tratada con potentes solventes orgnicos, por tal razn, los microorganismos que tienen esta propiedad se llaman cido resistentes. Los colorantes y reactivos utilizados en esta tcnica son: Carbolfucsina como colorante primario, alcohol-cido como decolorante y Azul de metileno como colorante de contraste. Afn de que el colorante primario penetre a travs de la cpsula cerosa de los bacilos cido resistentes, se requiere de cierto tratamiento fsico. Esto en la tcnica convencional de Ziehl Neelsen en la cual se utiliza calor despus de cubrir la muestra con carbolfucsina como tratamiento fsico, para que pueda penetrar el colorante. Esto se logra pasando el mechero

varias veces a travs del portaobjetos hasta observar desprendimiento de vapores de la solucin del colorantes, es necesario evitar que se produzca ebullicin. Existe una modificacin de la tincin de ziehl neelsen que es la Modificacin de Kin Youn, tambin conocido como Mtodo Fro. Se diferencia de la anterior en que en lugar de emplear calor, para facilitar la tincin se aade al colorante carbolfucsina un detergente tensoactivo, como tergitol. Al hacer uso de la T. de coloracin cido resistente, se debe de tener precaucin, ya que organismos no viables presentes en los extendidos de pacientes tratados con drogas pueden teirse con la tcnica; por lo tanto, la presencia de organismos cido resistentes, no indica necesariamente foco de tratamiento y persistencia de infeccin activa; en estos casos se requieren cultivos para determinar la viabilidad de cualquier organismo cido-resistente. MTODO DE GIEMSA Este mtodo es til para poner de manifiesto las Ricketsias localizadas dentro de la clula husped. Estos organismos adquieren una coloracin diferencial y se ven dentro del citoplasma de dicha clula. Tambin tiene utilidad, para teir frotis de sangre en el examen de protozoos, para visualizar inclusiones virales o de otros organismos en las clulas infectadas, as como la presencia de otros parsitos como toxoplasmas en tejido cerebral. COLORACIONES PARA DESCUBRIR ESTRUCTURAS CELULARES Son mtodos especiales de tincin que se utilizan para observar estructuras dentro o en el interior de la pared celular bacteriana, como lo son flagelos, cpsulas, ncleo o material nuclear, endosporas y granulos. El principio en el que se basan cada uno de estos mtodos de coloracin diferencial es en gran parte el mismo que el de la tincin de Gram y de Ziehlneelsen; de tal forma que la estructura en estudio manifiesta un grado de afinidad por el colorante diferente al del resto de la clula.

TINCIONES NEGATIVAS Es una tcnica mediante la cual las clulas sin teir se hacen visibles en una pelcula oscura; los organismos aparecen iluminados en un campo microscpico oscuro. En la prctica, la suspensin bacteriana se mezcla con tinta china o con nigrosina, despus se extiende como una pelcula delgada sobre un portaobjetos y se deja secar. La ventaja de este procedimiento, en el estudio morfolgico, es que las clulas no reciben una agresin fsica o qumica, ni distorsin de las clulas como sucede con otros mtodos. TCNICA DE TINCIN GRAM 1. La muestra preparada fija y seca inundarla con cristal violeta por un minuto. 2. Lavar hasta que no salga ms colorante. 3. Cubrir con lugol por un minuto. 4. Lavar con agua quitando el exceso. 5. Decolorar con alcohol acetona de 30 a 60 segundos. 6. Contraste con safranina por un minuto. 7. Lavar con agua y secar al aire y examinar. Las bacterias que retienen el colorante inicial (violeta) son Gram (+) y las que se decoloran con alcohol y toman el colorante de contraste (rojo o pardo) son Gram (-). PROCEDIMIENTO DEL MTODO DE ZIEHL NEELSEN 1. Preparar una solucin de fucsina fenicada mezclando 10 ml. de una solucin alcohlica saturada de fucsina con 90 ml. de una solucin acuosa de fenol al 5%. 2. Preparar un decolorante mezclando 3 ml. de cido clorhdrico concentrado con 97 ml. de alcohol al 95%. 3. Cubrir la preparacin de fucsina fenicada, calentando sobre una llama durante 5 min. hasta el emisin de vapores, sin hervir. Se aade colorante de tiempo en tiempo para que no se seque. 4. Lavar con agua y decolorar con alcohol cido.

5. Teir con azul de metileno por espacio de 30 a 60 segundos. 6. Lavar con agua, secar el exceso y examinar el mycobacterium tuberculosis en el esputo teido por este mtodo aparece rojo sobre un fondo azul. Las bacterias no cido resistentes se tien de azul. Otras tcnicas de tincin diferencial son las TINCIONES ESPECIALES O SELECTIVAS, estas son utilizadas para detectar especficamente alguna parte de la clula, y se denominan dependiendo de la estructura a teir o identificar. Algunas tcnicas son TINCIN DE FLAGELOS: con el mtodo de Bailey, mtodo de Gray, etc. COLORACIN DE CPSULAS: con el mtodo de Anthony, mtodo de Hiss, etc. TINCIN DE ESPORAS: con el mtodo de Dorner, mtodo de Mittwer, mtodo de Wirtz-Con Klin, etc. Metabolismo bsico y cultivo de anarbios METABOLISMO C. H. : Son de preferencia para los M. O. o bacterias heterotrofas. Especialmente la glucosa la cual puede degradarse por la ruta de glucolisis. Degradacin de la glucosa hasta cido pirvico. GLUCOSA La glucosa: la fermentan muchas bacterias distintas de muchas formas diferentes. A. E. Coli, Salmonella, Enterobacter al fermenta la glucosa dan como productos una mezcla de compuestos cido succinico, Acetil CoA, Alcohol, Ac. Actico, Ac. Frmico, CO2, H2. B. Streptococcus lactis: fermentan a la glucosa hasta Ac. Lctico casi exclusivamente. Clostridium, Eubacterium, Bacillus: Ac. Butrico, Butanol, Acetona, Isopropanol, Ac. Actico, Frmico, Etanol, H2, CO2, etc. Glucosa________ Ac. Piruvico__________ Ac. Lctico conservacin de microorganismos aerbios y

Los lpidos y protenas son utilizados como alternativa para obtener energa que generalmente obtienen de la glucosa. Lo hacen en forma rpida y eficiente en intermediarios de las rutas glicolticas y del ciclo del TCA que constituyen el esqueleto alrededor del cual construir el resto de las vas degradativas. DEGRADACIN DE LPIDOS O GRASAS: Comienza con la hidrlisis de triglicridos, a glicerina y cidos grasos por accin de las enzimas lipasas. CATABOLISMO DE PROTENAS: Muchos m. o. hetertrofos pueden degradar protenas exgenas utilizando los productos como fuente de C, N y energa. (prot. son grandes no pasan la membrana y las bacterias producen exenzimas proteasas que hidrolizan las prot. exgenazas pptidos, y las bacterias producen peptidazas que rompen a los pptidos a aminocidos que son ms degradados transformndose en comp. que entran en el ciclo TCA.

METABOLISMO BACTERIANO OBSERVADO EN PRUEBA DE ENSAYO Todos los organismos tienen la propiedad de realizar un cambio continuo (metabolismo) de sustancias con el medio que lo rodea. Para llevar a cabo los procesos de nutricin y de reproduccin se requiere la presencia de materiales nutritivos a partir de las cuales los m. o. sintetizan los componentes de su cuerpo y obtienen la energa indispensable a travs de la oxidacin y reduccin de distintas sustancias. La luz y materia orgnica e inorgnica sirven de fuentes de energa a las bacterias. De acuerdo con el aprovechamiento de carbohidratos y la fuente energtica, las bacterias se dividen en 4 grupos: 1. Bacterias fototropicas: o sea, los m. o. que utilizan la luz como fuente de energa. 2. Bacterias Quimiotrficas: que son m. o., que emplean sustancias qumicas en calidad de fuente de energa.

3. Bacterias Autotrficas: que son m. o. que aprovechan el cido carbnico (CO2) en calidad de fuente de C. Algunas bacterias tienen la propiedad de asimilar el polietileno, cido brico, Fenol y otras sustancias inorgnicas. 4. Bacterias Heterotrofas: Son bacterias que precisan el carbono orgnico (carbohidratos, cidos grasos) para su nutricin. Segn el tipo de nutricin las bacterias se dividen en: 1. Fotoautotroficas: cuya fuente de energa en la luz solar y la de carbono es CO2. 2. Fotoheterotroficas: cuya fuente de C es la luz y la de Carbono los compuestos orgnicos. 3. Quimioautotroficas: cuya fuente de energa son compuestos inorgnicos reducidos y la de carbono el CO2. 4. Quimioheterotrficas: asimilan el carbono y la energa de los compuestos orgnicos. Este grupo comprende la mayora de las bacterias. NUTRICIN Todos los m. o. necesitan de una fuente de energa. Ejemplo: Plantas verdes. Utilizan energa radiante de la luz y se les llaman FOTOTROFOS. Animales. Dependen de la oxidacin (prdida de electrones de un tomo) de compuestos qumicos y se les llama QUIMIOTROFOS. En las bacterias existen los dos. Todos los organismos vivos son FOTOTROFOS O QUIMIOTROFOS. Todos los organismos requieren de carbono en alguna forma, CO2 an en pequeas cantidades, la mayora requiere de compuestos orgnicos de carbono. Plantas _________ CO2 _________ C. H por fotosntesis EN TRMINOS NUTRICIONALES

Tipo Fototrofo Autotrofo Heterotrofo Quimiotrofo Autotrofo Heterotrofos

Fuente de energa Luz solar Luz solar Ox. de comp. org. Ox. de comp. org.

Fuente de C. CO2 Comp. Org. CO2 Comp. org.

Ejemplo Chromatium Rhodopseudomonos Thiobacillus Escherichia

Req. De N Plantas: Obt. de sales de inorgnicas de Nitrgeno, ejemplo: KNO3. Animales: Obt. de comp. orgnicos de Nitrgeno, ejemplo: prot. y productos de degradacin (peptidos y ciertos cidos). Bacterias: Algunas N2 atmosfrico. Algunos compuestos orgnicos de Nitrgeno. Algunos N2 de compuestos orgnicos nitrogenados. Req. de S y P Animales: de compuestos orgnicos de S. Vegetales: de compuestos inorgnicos de S. Algunas bacterias: compuestos orgnicos de S. Algunas bacterias: compuestos inorgnicos de S. Algunas bacterias: S elemental. Bacterias: El P a partir de Fosfatos, ejemplo: sales de cido fosfrico. Req. de varios elementos metlicos Todos los Na, K, Ca, Mg, Mn, Fe, Zn, Cu, Co, para su org. crec. y bact. en partes pro milln. Req. de agua______ para su crecimiento y funciones metablicas. Bacterias_________ todos los nutrientes deben de estar en solucin acuosa para que puedan pasar al organismo. MTODOS DE CULTIVOS ANAEROBICOS Los mtodos para cultivos anaerbicos son muchos y hay desde mtodos sencillos a complejos, unos econmicamente caros y otros baratos. Independientemente del costo los

mtodos que se pueden utilizar son: exclusin de aire por calor, mtodo de Roux, mtodo de Wright, agar en profundidad y agentes reductores. Los mtodos ms utilizados son: el de Brewer, que consiste en una caja especial a la cual se le aade tioglicolato de sodio mezclado con agar para extraer el oxgeno presente y despus inocular, se cubre con la tapa de Brewer la cual tiene deprimida casi toda la porcin central, de tal modo que queda una capa de aire muy delgada por encima del agar y que se extrae por la sustancia que se adiciona al medio. MTODO DE LA JARRA ANAERBICA Consiste en un frasco de boca ancha en el cual se introduce la caja petri y por encima una veladora encendida, se tapa y se somete a incubacin a 37 grados durante 24 horas. Otros mtodos consisten en utilizar recipientes especiales como son: recipientes de Novy, caja de Bray y Spray, en las que se utilizan mezclas de sustancias que reducen el oxgeno y desprenden CO2 creando condiciones de anaerobiosis; en el caso del recipiente de Novy el aire se extrae con una bomba de vaco y se sustituye por un gas inerte. MTODO DE CIDO PIROGNICO Se lleva a cabo en cultivo de agar inclinado y se fundamenta en el empleo de una solucin alcalina y de cido pirognico para absorber el oxgeno del tubo de ensayo. Los tubos debern taparse con algodn hidrfilo, no es necesario que sea estril, se corta o se quema la parte superior del algodn y se introduce en el tubo un cm. por debajo del cido pirognico desecado. En el espacio se agrega un ml. de solucin caliente de Hidrxido de Sodio al 10% para disolver el cido, se cierra con tapn de hule y se sella con parafina fundida. El tubo debe incubarse en posicin vertical. Otros mtodos que no son muy utilizados son: la utilizacin de recipientes anaerobios de fsforo, recipientes anaerobios con fsforo de Varney, recipientes bajo presin aumentada de CO2, etc.

TCNICAS DE AISLAMIENTO DE BACTERIAS Los cultivos puros representan condiciones artificiales para el desarrollo de las bacterias y otros microorganismos y las condiciones son impuestas mediante su manejo en el laboratorio. Existe una gran variedad de tcnicas por medio de las cuales las diferentes especies de una muestra natural pueden ser aisladas y desarrollarse como un cultivo puro. Las tcnicas son: TCNICA DE SIEMBRA POR ESTRIA, T. DE DIFUSIN EN PLACA, T. DE PLACA VERTIDA, T. DE ENRIQUECIMIENTO DEL CULTIVO, T. DE LAS DILUCIONES EN SERIE Y T. DE AISLAMIENTO DE UNA SOLA CLULA. TCNICA DE SIEMBRA POR ESTRIA En este mtodo se utiliza un asa bateriolgica, con la cual se pasa una porcin de la muestra a la superficie de un medio de cultivo slido donde se siembra por estras. Se recomienda utilizar mnimo tres cajas con medio de cultivo. Tambin se puede seccionar imaginariamente la caja en tres o cuatro partes para diluir la muestra. TCNICA POR DIFUSIN EN PLACA En este mtodo por lo comn se utiliza una varilla de vidrio estril para adelgazar la muestra. Es parecido al anterior y las colonias crecen en la superficie del medio. TCNICA DE LA PLACA VERTIDA El principio de la tcnica es la dilucin o adelgazamiento de la muestra en tubos que contienen agar fundido y enfriado, tambin es necesario utilizar tres o ms tubos para poder obtener colonias ms aisladas. El medio debe mantenerse en estado lquido, aproximadamente 45 grados centgrados para poder que se disperse adecuadamente el inoculo. Una vez sembrado, el medio se pone en cajas de petri estriles donde se deja solidificar para despus incubarse a 37 grados centgrados. En este caso algunas colonias u organismos quedan atrapados entre el agar, pero tambin se observarn colonias en la superficie del mismo.

Todas las tcnicas anteriores se pueden mejorar si se utilizan medios selectivos o diferenciales para el aislamiento o tambin se puede tratar al medio con ciertas condiciones fsicas cuando se desea obtener ciertos organismos y eliminar otros. TCNICA DE DILUCIONES EN SERIE Mtodo muy til cuando en una muestra mixta, el microorganismo que buscamos se encuentra en mayor cantidad que cualquiera de los otros. El cultivo puro lo podemos obtener a partir de diluciones en tubo y pases sucesivos de tal manera que despus de tanto diluirse la muestra podr contener el microorganismo que deseamos, pudiendo confirmar lo anterior haciendo una siembra del cultivo que se supone est puro en una placa con medio slido. Ahora cuando tenemos el microorganismo que buscamos en una cantidad menor o escasa que los dems microorganismos en una muestra mixta y la queremos aislar, podemos utilizar la TCNICA DE ENRIQUECIMIENTO DEL CULTIVO, con esto podemos mejorar las posibilidades de aislamiento de tipos fisiolgicos poco frecuentes. El principio consiste en utilizar medios de composicin conocida como los medios de enriquecimiento y saber cuales son los sustratos que requiere el microorganismo para aumentar la poblacin y despus inocularse en placas para su aislamiento. TCNICAS DE AISLAMIENTO DE UNA SOLA CLULA Mtodo que se utiliza en estudios muy especializados y que la practique un operador experimentado; hace necesario el uso de un MICROMANIPULADOR como equipo especial adaptado a un microscopio, que permite controlar los movimientos de una micropipeta o microcnula (aguja muy fina), dentro de una gota pendiente de donde se puede extraer una sola clula dentro de un tubo, para despus pasarla a un medio de cultivo apropiado para su desarrollo. . MEDIOS DE CULTIVO Y PREPARACIN La preparacin y el examen de cultivos, es una tcnica especial que requiere de gran cuidado y atencin en cada paso a realizarse; ya que de ello depende:

a) Un buen estudio de los microorganismos. b) Condiciones de seguridad (cuando se trata de microorganismos peligrosos). c) Evitar la contaminacin de los cultivos y otros materiales utilizados. Recordemos que existen microorganismos en el polvo, dedos y en todo el medio ambiente. Las distintas mezclas de sustancias nutritivas empleadas en el laboratorio para el cultivo de microbios se denominan genricamente medios de cultivo. La mayora de los medios de cultivos utilizados, son mezclas preparadas empricamente por los microbilogos (sin conocimiento exacto de su composicin o de su valor nutritivo especfico). Los medios de cultivo artificiales de composicin qumica definida y reproducible aumenta da con da con la finalidad de resolver problemas especiales en investigacin y en la Microbiologa industrial. REQUERIMIENTOS GENERALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Los medios deben hasta ciertos lmites parecerse al sustrato natural sobre el cual habitan los microorganismos, ejemplo, extractos del suelo para microorganismos del suelo, sangre o suero para los patgenos de animales y humanos y extractos de plantas para los patgenos vegetales. Estos pueden ser: 1. Requerimientos para desarrollo a) Substancias orgnicas b) Substancias inorgnicas 2. Requerimientos de energa

Todos los requerimientos nutricionales bsicos, de los medios de cultivo proporcionan elementos y la energa necesaria para sintetizar sus propios componentes metablicos, como enzimas y coenzimas; que adems la constante biosntesis y la energa conducirn a su reproduccin. Al igual que otros organismos tienen en sus constituyentes fundamentales; protenas, carbohidratos, lpidos, sales minerales, vitaminas y ciertos factores de crecimiento. Ahora dependiendo de sus capacidades para sintetizar los componentes, las bacterias se pueden clasificar como: AUTOTROFICAS, HETEROTROFICAS E HIPOTROFICAS. Las bacterias AUTOTROFICAS, sintetizan todos los componentes metablicos a partir de molculas orgnicas que contienen Nitrgeno, Amoniaco, Anhidrido carbnico, compuestos simples de Carbono, Fosfatos y agua; para lo cual necesitan todo un conjunto de enzimas. Otras bacterias, tienen la habilidad de utilizar para su nutricin, substancias simples para su energa, Glucosa como fuente de carbono, Aminocidos como fuente de Nitrgeno, ejemplo: Chromatium, Thiobacillus. Las bacterias HETEROTROFICAS, tienen poca habilidad sinttica, por lo que son ms exigentes en su nutricin. Requieren de protenas ya formadas, de vitaminas, factores de crecimiento y gases indispensables, que se descompone por enzimas hidrolticas hacindolas asimilables, las cuales ya dentro de las clulas son ensambladas y utilizadas por la clula. Ejemplo: Escherichia coli, Lactobacilos, Salmonella typhi, proteus, estafilococos, etc. Las bacterias HIPOTROFICAS, son organismos muy exigentes que no se pueden cultivar en medios artificiales por ms ricos que sean. Requieren de todo un sistema metablico funcionando, por lo que solo se multiplican dentro de las clulas en pleno metabolismo, ejemplo: Ricketsias, Clamidas, Virus, etc. Tambin de acuerdo a la fuente de energa que utilicen o de cmo la obtengan las bacterias pueden nombrarse FOTOTROFAS si la obtienen de luz radiante y QUIMIOTROFAS sin son incapaces de asimilar energa radiante y se valen de la oxidacin de compuestos qumicos para obtener su energa.

COMPOSICIN DE LOS MEDIOS: Muchas bacterias requieren solo los medios ordinarios de cultivo, otros necesitan medios especiales para su desarrollo y/o para su identificacin o cuando las caractersticas de cultivo y las reacciones especficas son los factores determinantes. Muchos medios de cultivos contienen: Macerados de carne en agua que por lo comn se encuentran como extractos de carne (bovino, cerdo, etc. ya preparados). Contienen Peptonas, sal (cloruro de sodio), y si se desea, tambin se el puede dar consistencia al caldo o medio cuando se desea estudiar las caractersticas coloniales o aislar un determinado microorganismo. NATURALEZA DE LOS MEDIOS DE CULTIVO De acuerdo a la naturaleza, los medios de cultivo se denominan como SINTETICOS Y NO SINTETICOS. SINTTICOS: Son medios que generalmente son utilizados para estudiar los requerimientos nutricionales de los organismos. En estos sus constituyentes qumicos estn qumicamente definidos en su composicin. NO SINTTICOS: Medios utilizados para multiplicacin de microorganismos, as como para el estudio taxonmico de los mismos y cuya composicin qumica no est bien definida. Por lo que considerando dicha composicin y su estado fsico, se pueden clasificar como: A) MEDIOS LQUIDOS No sintticos. Ejemplo: leche: sustrato de origen natural, cuya composicin favorece el crecimiento bacteriano. Son caldos o soluciones acuosas de substancias de origen natural tales como peptonas, levaduras y extractos de carne cuya composicin no est bien definida, pero que favorecen el

crecimiento bacteriano. En su composicin no contienen substancias como gelatina o agar y por lo tanto no solidifican o gelifican pero se puede preparar a partir de estos medios slidos. B) MEDIOS SLIDOS LICUABLES Se preparan aadiendo agar a los caldos en una proporcin de 1 a 1.5% o con una mezcla de Agar - Gelatina, son utilizados para conservar vivas las cepas de los cultivos por largos periodos. C) MEDIOS SLIDOS Estn hechos a base de compuestos orgnicos como: rebanadas de papa, trozos de zanahoria, suero sanguneo coagulado, tiles para el crecimiento y taxonoma. Tambin puede contener compuestos inorgnicos: silice, usado como solidificante cuando los agentes orgnicos como el agar interfieren con el crecimiento especfico de la bacteria. Los medios slidos constan generalmente de agar, gelatina o albmina. Son necesarios para el estudio de las caractersticas coloniales; as como para el aislamiento de especies bacterianas. El agar se disuelve en el agua cerca del P. E., se solidifica alrededor de los 38 grados centgrados y no vuelve a licuarce hasta que se hierve de nuevo. (el agar se disuelve alrededor de una concentracin del 2 al 3% y la gelatina del 10 al 15% y solidifica a una temperatura de 25 grados centgrados. Actualmente los medios de cultivo se pueden obtener artificialmente en el comercio en forma de polvos secos. Estos productos deshidratados se transforman fcilmente en medios de cultivo por adicin de agua y esterilizacin. De acuerdo a su funcin o a su aplicacin, a los medios se les puede clasificar de la siguiente manera: > Medios enriquecidos > Medios enriquecedores

> Medios diferenciales > Medios selectivos > Medios de ensayo MEDIOS ENRIQUECIDOS: Son medios de cultivo que se preparan a base de la adicin de componentes o substancias como sangre, suero, extractos de tejidos de animales y plantas, carbohidratos, casena digerida, extractos de levaduras, etc. al caldo nutritivo o agar, les proporciona substancias nutritivas complementarias para que el medio pueda soportar el crecimiento de bacterias ms exigentes. Ejemplo: aquellos medios que se hacen con suero sanguneo coagulado (Loefer para bacilos diftricos), o mezclas coaguladas de glicerina y huevo (Loweinstein- Jensen para bacilos de la tuberculosis); as como los que se preparan enriqueciendo caldo o agar simple con Carbohidratos, sangre, suero sanguneo, casena digerida, extractos de levaduras, etc. MEDIOS ENRIQUECEDORES: Son medios de cultivos que ya tienen las substancias nutritivas en su composicin, sirven para cuando deseamos estudiar microorganismos que se encuentran en muy pequeas cantidades en la naturaleza y se puede aumentar su poblacin, ejemplo: caldo nutritivo, caldo de selenio, sales biliares, etc. MEDIOS DIFERENCIALES: Son medios que ponen de manifiesto diferencias entre grupos de microorganismos que se deseen estudiar y otros grmenes que pueda haber. Contienen en su composicin una substancia indicadora (Azcar) y una substancia inhibidora (Colorante), que son factores que permiten distinguir caractersticas metablicas y las caractersticas morfolgicas diferentes debido a la utilizacin de los sustratos del medio, ejemplo: EMB, AGAR SANGRE, MAC CONCKEY, etc. Estos medios favorecen el desarrollo de bacilos tifoideos y otros microorganismos afines, que causan infecciones intestinales; inhibe tambin el desarrollo de bacilos ordinarios, as como microorganismos Gram Positivos y favorece el crecimiento de Gram Negativos.

Para que puedan desarrollarse libremente especies que interesan, con frecuencia se aade penicilina, estreptomicina, acitidiona u otros antibiticos, para evitar el desarrollo de grmenes indeseables. MEDIOS SELECTIVOS: Son medios preparados a base de agar nutritivo, al cual se le adicionan ciertas substancias qumicas especficas inhibidoras que permiten el crecimiento de algunas bacterias y que inhiben el desarrollo de otro grupo de bacterias. Esto significa que se pueden seleccionar las bacterias que solo se desarrollan en presencia de compuestos orgnicos poco comunes, agregndolas al medio de cultivo y omitiendo todos los dems compuestos. Algunos ejemplos de este tipo de medios son: Staphilococcus No. 110 (S- 110) Agar dextrosa Sabouraud (para hongos, PH = 5.6) Caldo peptona (para espirilos del clera, alcalino con PH = 8.5) Agar Salmonella - Shigella (Agar S_S) Agar Verde Brillante MEDIOS DE ENSAYO: Son medios que se utilizan con el fin de identificar y clasificar a los microorganismos. Estos medios fueron ideados para ensayar los microorganismos segn sus actividades metablicas particulares. Por lo anterior mencionado, se utilizan una gran variedad de medios de cultivo; que se toman en cuenta como pruebas que se relacionan con el metabolismo bacteriano. Algunos ejemplos son: Voges- Proskauer, Rojo de Metilo, Produccin de Indol, Prueba de Ureasa, Citrato, reduccin de Nitratos, SIM, Agar Frrico con Azcar Triple (TSI), Agar Hierro Kligers (KIA), Malonato, etc.

IV. GENTICA BACTERIANA Introduccin:

La teora sobre la herencia y variabilidad de los organismos vivos fue creada por C. Darwin en 1859, quien demostr que todas las especies vegetales y animales existentes sobre la tierra aparecieron mediante variabilidad, esto a partir de formas orgnicas. Dichos hechos se encuentran sujetos a las leyes fundamentales de le Gentica, las cuales fueron descritas y posteriormente enunciadas por el Naturalista Checo G. Mendelev, todas estas leyes fueron estudiadas ms tarde y con ms detalle por H. de Vries, T. Morgan, H. Muller, N. Vavilov y otros. Otros cientficos que hicieron aportaciones al estudio de la variabilidad de los microorganismos son L. Pasteur, L. Tsenkouski. En 1941, G. Beadle y E. Tatum obtuvieron mutantes bioqumicos en la Neurospora. Tiempo ms tarde, en el ao de 1953, J. Watson y F. Crick descifraron la estructura de la molcula de DNA y determinacin del Cdice Gentico mediante el cual se observaron y se dieron a conocer los mecanismos de la sntesis de los Polipptidos y protenas de todos los seres vivos. Uno de los ms importantes acontecimientos que sirvieron en la etapa de desarrollo de la gentica, fueron los estudios realizados sobre la transmisin de la informacin gentica, cuyos resultados demostraron que esta transmisin se poda efectuar en dos direcciones. ADN - - - - - - - - - - ARN - - - - - - - - - - PROTENA ARN - - - - - - - - - - ADN - - - - - - - - - - PROTENA

Actualmente una de las nuevas tendencias es la Ingeniera - Gentica, mediante la cual es posible realizar transplantes de Genes de la clula a la otra, lo cual permite de un modo determinado, dirigir la herencia, sustituyendo un gene por otro. De esta manera se puede decir acertadamente que la gentica de los microorganismos representa la base de la BIOLOGA MOLECULAR; por lo que muchos descubrimientos en el campo de la gentica de los microorganismos, se han utilizado con bastante eficiencia en la Biologa y en la Medicina. Como podemos darnos cuenta, debido a la organizacin simple, reproduccin rpida, a que son haploides (por lo general), ya que en ellos pueden reproducirse con facilidad mutaciones inducidas y recombinaciones genticas; las bacterias y los virus se han convertido en objetos principales, tanto del estudio de la estructura como de la funcin de los genes exclusivamente. LA GENTICA es la disciplina que estudia los mecanismos por los cuales los caracteres pasan de un organismo a otro. El estudio de la gentica se enfoca hacia la comprensin de la variabilidad de los organismos y la evolucin de la especie. Tambin es una importante herramienta de investigacin en los intentos por comprender los mecanismos moleculares que permiten el funcionamiento de las clulas, proporcionndonos a la vez una forma de introducir nuevas propiedades a los organismos. La transferencia de genes puede tener lugar de formas diferentes y, si se acompaa por recombinacin gentica, puede dar lugar a la formacin de nuevos organismos. LA RECOMBINACIN GENTICA es una herramienta importante en la direccin de la estructura gentica de un organismo. Tambin es de gran importancia ya que todo lo mencionado anteriormente constituye una de las actividades primordiales en el campo de la Ingeniera Gentica.

Dentro de los principios bsicos de la Gentica, se tiene que la recombinacin es el proceso mediante el cual los elementos genticos, contenidos en dos genmas separados se unen en una sola unidad. Por lo que debido a este mecanismo pueden originarse dos genotipos, aun en ausencia de Mutaciones. En los Procariontes, la recombinacin gentica implica: 1. La insercin en una receptora, de un fragmento de DNA gentico diferente de una clula donadora. 2. Debe efectuarse la integracin de este fragmento de DNA o de sus copias en el genoma de la clula receptora. Existen tres mecanismos mediante los cuales el fragmento de DNA es introducido en la clula receptora: Estos tres mecanismos son conocidos como COMBINACIONES GENTICAS, y son: CONJUGACIN, TRANSDUCCIN Y TRANSFORMACIN. En las recombinaciones bacterianas, las clulas no se fusionan y usualmente una porcin del cromosoma de la clula donadora (macho) es transferido a una clula receptora (hembra). En cuanto al mecanismo se cree que dentro de las clulas receptoras el fragmento de DNA de la donadora se coloca a lo largo del DNA de la receptora, de tal forma que queden adyacentes los genes homlogos. Ciertas enzimas actan sobre el DNA de la receptora, causando cortes y la incisin de un fragmento, luego el DNA de la donadora queda integrado en el cromosoma receptor en el lugar del DNA previamente escindido. La clula receptora se convierte entonces en la clula recombinante porque su cromosoma receptor contiene DNA tanto de la clula donadora como de la receptora.

MECANISMO DE CONJUGACIN. Es uno de los tres mecanismos de transferencia de material gentico de una bacteria a otra y depende de un contacto fsico entre clula y clula; aqu es posible que sean transferidos grandes segmentos del cromosoma y en casos especiales el cromosoma entero. MECANISMO DE TRANSFORMACIN. Proceso mediante el cual el DNA (desnudo) o libre y que contiene una limitada cantidad de informacin gentica, es transferido desde una clula a otra. El DNA se obtiene de una clula donadora por lsis natural de la clula o por extraccin qumica. MECANISMO DE TRANSDUCCIN. Proceso en el que hay transferencias de genes desde una bacteria a otra mediante un Bacterifago. Cuando este DNA vrico se integra en el cromosoma bacteriano se denomina PROFAGO. Cuando una bacteria entra en el ciclo ltico, sea espontneamente o por induccin con luz ultra violeta, ocasionalmente parte del cromosoma bacteriano puede quedar ensamblado accidentalmente dentro de la cabeza del fago.

Principios de Inmunologa
Teora de la inmunidad: Con el trmino "inmunidad" ( del latn IMMUNITAS, liberacin del tributo o salvacin de alguna cosa). Se sobre entiende la insusceptibilidad del organismo de las infecciones o agentes no infecciosos que le es genticamente heterogneas. El organismo animal y humano distingue con suma exactitud la "propia" de lo "extrao", propiedad gracias a la cual se asegura la defensa contra la introduccin no solo de m.o. patgenos, sino contra las sustancias extraas entre protenas polisacridos, lipopolisacridos y otras. La ciencia que se ocupa de los problemas de inmunidad y que se a denominado INMUNOLOGA, se convirti en una rama independiente. Ella se dedica a un amplio campo de fenmenos biolgicos: Mecanismos de defensa contra los agentes de las enfermedades infecciosas y tumores, establecimientos de vnculos genricos entre el mundo vegetal y animal, problemas de la inmunohematologa, inmunogentica, inmunohistoqumica, inmunodiagnstico, etc.

V. RELACIN HUSPED - PARSITO

La mayor parte de los microorganismos que habitan en el cuerpo humano lo hacen porque se benefician de los nutrientes y del hbitat protegido que este cuerpo humano les provee. Pero desde el punto de vista del cuerpo humano esta relacin puede ser mutualismo, comensalismo o parasitismo, segn sea beneficiosa, neutral o perjudicial, respectivamente. Independientemente del tipo de relacin, todas comienzan con el contacto, algunos microorganismos se establecen permanentemente colonizndolo (microbiota normal), otros desaparecen rpidamente (transeuntes) y otros invaden los tejidos. Este contacto con los microorganismos conduce a la infeccin, condicin en la cual el microorganismo patgeno elude las defensas del husped, penetra en los tejidos y se multiplica. Cuando los efectos acumulativos de la infeccin daan los tejidos se produce una enfermedad infecciosa. La relacin husped - parsito comienza con el contacto, progresa a la infeccin y finaliza en enfermedad. Cuando un microorganismo potencialmente infeccioso est presente en el cuerpo sin invadirlo todava se le denomina contaminante, por lo que estar contaminado no es lo mismo que estar infectado ya que no todas las contaminaciones acaban en infeccin y no todas las infecciones acaban en enfermedad. De hecho, la contaminacin sin infeccin y la infeccin sin enfermedad es la regla. Microbiota normal del cuerpo humano: El cuerpo humano debido a que mantiene relativamente estables su pH, temperatura y un aporte constante de nutrientes, provee un hbitat favorable para una gran cantidad de microorganismos. De hecho es tan favorable que clula a clula en el cuerpo humano existen 10 veces ms clulas de microorganismos que humanas. Esta gran mezcla de microorganismos adaptada al cuerpo humano recibe el nombre de microflora, aunque el trmino ms preciso es el de microbiota. Esta microbiota incluye bacterias, hongos y protozoos. Origen de la Microbita: Antes del nacimiento un feto humano sano est libre de microorganismos. El primer encuentro del recin nacido con los microorganismos es en el canal del parto y especialmente en la vagina. El recin nacido adquiere los microorganismos por contacto superficial, tragando o inhalando. Posteriormente los adquiere a travs de los objetos y personas que le cuidan (leche artificial: coliformes, lactobacilos, enterococos; leche materna: Bifidobacterium). Cada parte

del cuerpo humano, con sus condiciones ambientales especiales, tiene su propia mezcla de microorganismos. Por ejemplo, la cavidad oral adquiere una poblacin natural diferente a la de los intestinos. En un corto perodo de tiempo (erupcin de los dientes e introduccin de alimentos slidos) el nio tendr el mismo tipo general de microbiota que una persona adulta que viva en el mismo ambiente. La naturaleza de esta microbiota va a depender de factores tales como la frecuencia de lavados, dieta, prcticas higinicas y condiciones de vida. Distribucin de la microbita en el cuerpo humano: La Sangre, los fluidos corporales y los tejidos En individuos sanos la sangre, fluidos corporales y tejidos estn libres de microorganismos. Piel La epidermis junto con la dermis forman una barrera frente a muchos microorganismos debido a que son impermeables a stos, por lo que a la piel se la denomina la primera lnea de defensa. La constante exposicin de la piel al medio ambiente implica que en sta existan muchos microorganismos transeuntes. Sin embargo la superficie de la piel es hostil a la supervivencia y crecimiento de muchas bacterias debido a su sequedad, bajo pH (3-5) y sustancias inhibitorias (lisozima que destruye el peptidoglucano). A pesar de estos factores algunas bacterias pueden sobrevivir en la piel, crecer y formar la microbiota normal ya que las glndulas sudorparas y sebceas excretan agua, aminocidos, urea, sales y cidos grasos que sirven como nutrientes a estos microorganismos. La mayor parte de estas bacterias son especies de Staphylococcus (S. epidermidis) aunque tambin existen Micrococcus y Corynebacterium. En la parte ms profunda de las glndulas sebceas existen bacterias anaerbicas como Propionibacterium acnes que al ser parte de la microbiota, normalmente no es perjudicial; sin embargo, ha sido asociado con el acn, una enfermedad de las glndulas sebceas de la piel. Debido a su localizacin profunda, el nmero de estas propionibacterias se v muy poco afectado por el lavado o por las soluciones desinfectantes. Ojos La conjuntiva es lavada contnuamente por las lgrimas que adems de remover a los microorganismos contiene lisozima. Consecuentemente, la microbiota de la conjuntiva es

espordica. Los principales microorganismos encontrados son Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Corynebacterium, Streptococcus pneumoniae, Neisseria spp. Tracto respiratorio El tracto respiratorio es un sitio difcil para la colonizacin de los microorganismos ya que en el tracto respiratorio alto los microorganismos que estn en el aire que respiramos pasan a travs de las fosas nasales a la nasofaringe quedando pegados en el moco el cual contiene lisozima; al pasar este moco a la faringe, las bacterias atrapadas en el moco pueden ser tragadas y destrudas por el HCl del estmago. A pesar de sto existen numerosos microorganismos en las fosas nasales debido a la habilidad de adherirse a las clulas epiteliales de las membranas mucosas. Las bacterias ms frecuentemente encontradas en las fosas nasales son Staphylococcus epidermidis y Staphylococcus aureus; en la nasofaringe cepas avirulentas de treptococcus pneumoniae. El tracto respiratorio bajo no posee microbiota debido a que los microorganismos se eliminan mecnicamente por los cilios de la trquea. Si alguna bacteria pasa a travs de la trquea es fagocitada por los macrfagos. Boca La abundante y constante presencia de alimento disuelto en la boca hacen de ella un ambiente ideal para el crecimiento bacteriano. Sin embargo, el contnuo flujo de saliva hace que los microorganismos se tragen y destruyan por el HCl del estmago. Consecuentemente la mayor parte de los microorganismos que constituyen la microbiota de la boca resisten estos mecanismos al adherirse firmemente a las distintas superficies de la cavidad oral. Los dientes son un rea de esta adherencia bacteriana, de hecho la placa dental es una agregacin de bacterias y materia orgnica. La caries est iniciada por Streptococcus mutans al hidrolizar la sacarosa en glucosa y fructosa. La glucosa es polimerizada en glucano y la fructosa metabolizada a cido lctico. El glucano acta como cemento uniendo las bacterias a los dientes y el cido lctico acta como abrasivo. Una vez iniciado el ataque por Streptococcus mutans, otras bacterias como Lactobacillus y Actinomyces contribuyen como invasores secundarios en el desarrollo de la caries. La microflora normal de las encas consiste fundamentalmente en bacterias Gram (+) como Streptococcus sanguis y especies de Actinomyces.

Tracto gastrointestinal La mayor concentracin de microbiota normal del cuerpo humano se encuentra en el tracto gastrointestinal. Estmago: aunque el estmago est recibiendo constantemente bacterias transeuntes de la cavidad oral, un estmago sano contiene muy pocas bacterias debido al efecto bactericida del HCl y enzimas digestivos. Los pocos microorganismos que se encuentran son lactobacilos y levaduras (Candida spp.). Intestino delgado: en el duodeno sobreviven pocas bacterias debido a la combinacin del ambiente fuertemente acdico del estmago y la accin inhibitoria de la bilis. De los microorganismos presentes, la mayora son cocos y bacilos Gram (+). En el yeyuno se encuentran especies de enterococos, lactobacilos y corinebacterias. Tambin puede encontrarse la levadura Candida albicans. La ltima parte del intestino delgado, el leon, posee una microbiota ms abundante y parecida a la del intestino grueso. En el leon crecen bacterias anaerobias como Bacteroides y anaerobios facultativos como Escherichia coli. Intestino grueso: el colon es la parte del cuerpo humano que contiene la mayor poblacin microbiana. Se calcula que un adulto excreta alrededor de 30 billones de clulas bacterianas diariamente a travs de la defecacin. Se han aislado alrededor de 300 especies bacterianas diferentes de las heces humanas. En el intestino grueso existen 300 veces ms bacterias anaerobias (Bacteroides y Fusobacterium) que anaerobios facultativos (Escherichia, Proteus, Klebsiella y Enterobacter); tambin se encuentra la levadura Candida albicans. Una prolongada terapia con ciertos antibiticos pueden eliminar muchos microorganismos de la microbiota normal intestinal permitiendo el crecimiento de especies resistentes a los antibiticos lo que puede causar transtornos gastrointestinales como es la diarrea. La administracin oral de la bacteria Gram (+) Lactobacillus acidophilus puede aliviar estos desrdenes intestinales ya que la ingestin de estos microorganismos reemplaza a los organismos intestinales indeseables. Existen en el mercado muchos productos comerciales con fines teraputicos que contienen lactobacilos. Tracto genitourinario En individuos sanos los riones, urteres y vejiga estn libres de microorganismos por lo que

la orina en la vejiga tambin lo est. Sin embargo existen bacterias en la parte inferior de la uretra tanto en hombres como mujeres (Staphylococcus epidermidis, Streptococcus faecalis y corinebacterias) de tal manera que la orina adquiere estos microorganismos cuando pasa de la vejiga al exterior del cuerpo humano en la parte inferior de la uretra. El tracto genital femenino tiene una microbiota compleja. Durante los aos que existe actividad en los ovarios (pubertad --> menopausia) la microbiota principal de la vagina son lactobacilos cido tolerantes (bacilos de Doderlein); stos hidrolizan el glucgeno producido por el epitelio vaginal en estos aos debido a la accin de los estrgenos, formando cido lctico. Como resultado, el pH de la vagina se mantiene entre 4,4 y 4,6. Los microorganismos capaces de crecer a este bajo pH son los que se encuentran en la vagina (enterococos, corinebacterias y Candida albicans). Este glucgeno no est presente antes de la pubertad ni despus de la menopausia, con lo que las secreciones vaginales son suavemente alcalinas y contienen microorganismos normales de la piel y colon.

Factores de Patogenicidad Microbiana:

Patogenicidad es un trmino general que se utiliza para describir las infecciones microbianas. Las propiedades que contribuyen a que un patgeno infecte y dae los tejidos del husped se llaman factores de virulencia. La virulencia (invasin y toxicidad microbiana) puede deberse a uno o a mltiples factores. En algunos microorganismos las causas de la virulencia estn claramente establecidas mientras que en otros no lo estn tanto. A continuacin vamos a describir los factores de patogenicidad y virulencia. Puerta de Entrada: Al iniciar una infeccin, un microorganismo penetra en los tejidos del cuerpo por una ruta caracterstica, la puerta de entrada que para la mayor parte de los microorganismos suelen ser las mismas regiones anatmicas que contienen microflora normal: piel, tracto alimentario, tracto respiratorio y tracto genitourinario. La mayor parte de los patgenos se han adaptado a una puerta especfica de entrada, aquella que le provee de un hbitat adecuado para crecer y diseminarse. Esta adaptacin puede ser tan restrictiva que si ciertos patgenos penetran por la puerta "equivocada" no sern infecciosos. Por ejemplo, la inoculacin de la mucosa nasal con el virus de la gripe invariablemente conlleva a la gripe, pero si el virus contacta slo con la piel no habr infeccin.

Tamao del Inculo:

Otro factor crucial para el curso de la infeccin es la cantidad de microorganismos presentes en el inculo. Para la mayor parte de ellos la infeccin tendr lugar si existe un nmero mnimo de clulas llamado dosis infecciosa (ID). Este nmero se ha determinado experimentalmente para muchos microorganismos variando desde 1 clula en la fiebre Q, 10 partculas virales en la rabia, 1000 clulas en la gonorrea, 10000 clulas en la fiebre tifoidea hasta 109 clulas en el clera. En general, los microorganismos con ID pequeos tienen mayor virulencia. Si el tamao del inculo es ms pequeo que el ID, la infeccin generalmente no progresar. Si el tamao del inculo es mucho mayor que el ID, el comienzo de la enfermedad puede ser ms rpido.

Mecanismos de Invasin, Establecimiento de los microorganismos Patgenos

Una vez que el patgeno ha contactado con el husped a travs de las vas de entrada, el siguiente paso en la infeccin requiere que el patgeno (i) se una al husped; (ii) atraviese el epitelio y (iii) se establezca en los tejidos. a.- Adhesin Es el proceso mediante el cual los microorganismos consiguen una posicin ms estable en el portal de entrada, lo que les permite no ser fcilmente eliminados y estar listos para invadir los compartimentos estriles del cuerpo. Los mecanismos que utilizan los patgenos bacterianos en la adhesin incluyen fimbrias o pilis, flagelos y cpsulas. Los virus se unen a travs de receptores especializados. b.- Factores de virulencia (penetracin e invasin) Los factores que contribuyen a la penetracin e invasin de los tejidos se dividen en exoenzimas, toxinas y factores antifagocticos. Enzimas extracelulares: muchas bacterias y hongos patgenos secretan exoenzimas que rompen e inflingen daos en las estructuras epiteliales. Los siguientes enzimas disuelven las barreras defensivas del husped y promueven la diseminacin de los microorganismos en

tejidos ms profundos: - Mucinasa: destruye la capa protectora de las membranas mucosas; la produce Vibrio cholerae. - Queratinasa: digiere el principal componente de la piel y pelo; la producen los hongos dermatofitos. - Colagenasa: digiere la principal fibra del tejido conectivo; la producen especies de Clostridium. - Hialuronidasa: digiere la sustancia que acta como cemento de las clulas animales compactndolas, cido hialurnico. Este enzima es un importante factor de virulencia en estafilococos, clostridios, estreptococos y neumococos. - Algunos enzimas reaccionan con los componentes de la sangre como es el caso de la coagulasa producida por estafilococos patgenos que coagula la sangre. Las kinasas bacterianas disuelven los cogulos favoreciendo la invasin de los tejidos daados. Toxinas bacterianas: una toxina es un producto qumico especfico de microorganismos, plantas y algunos animales que es venenoso para otras formas de vida. Toxigenicidad es la capacidad de producir toxinas; esta capacidad es una caracterstica de muchas especies controlada genticamente siendo la responsable de los efectos adversos de una variedad de enfermedades llamadas toxinosis. Toxemia es una toxinosis en la cual la toxina se distribuye a travs de la sangre desde el sitio de infeccin (ttano y difteria). Intoxicacin es una toxinosis causada por la ingestin de toxinas (botulismo). Las toxinas se denominan de acuerdo a su sitio especfico de accin en: Neurotoxinas cuando actan en el sistema nervioso. Enterotoxinas cuando actan en el intestino. Hemotoxinas cuando lisan los hemates. Nefrotoxinas cuando daan los riones. Las toxinas tambin se pueden clasificar segn su origen en: Exotoxinas: toxinas secretadas por una clula bacteriana viva en el tejido infectado. Endotoxinas: toxinas que slamente se liberan despus de que la clula ha sido daada o lisada. Nunca se secretan. Las diferencias entre exotoxinas y endotoxinas son:

Factores antifagocticos: Los fagocitos son clulas que bloquean el avance de los microorganismos en los tejidos. A travs de la fagocitosis los patgenos son introducidos dentro del fagocito donde son destrudos por potentes enzimas. Para combatir la fagocitosis muchos microorganismos han adoptado mecanismos que evitan el proceso fagoctico (factores antifagocticos): - Matar los fagocitos: especies de Streptococcus y Staphylococcus producen leukocidinas, sustancias txicas para los glbulos blancos. - Produccin de una cpsula que dificulta al fagocito la ingestin del microorganismo. Ejemplos son Streptococcus pneumoniae, Salmonella typhi, Yersinia pestis y Neisseria meningitidis. - Supervivencia dentro del fagocito: algunas bacterias se han adaptado a sobrevivir dentro del fagocito despus de la ingestin. Especies patgenas de Legionella, Listeria y Mycobacterium son capaces de evitar su destruccin dentro del fagocito. Esta supervivencia intracelular en los fagocitos tiene especial significancia ya que provee a los microorganismos de un lugar donde "esconderse", crecer y distribuirse a travs del cuerpo.

Mecanismos fundamentales de defensa

Sistema inmune (organismo) vertebrados, se clasifica: 1. Sistema linfositoide o celular o clulas en B. 2. Sistema plasmacitoide o humoral o clulas en T. Tanto vacunas como los m.o. infectados estimula los mecanismos de resistencia (sistema inmunitario). Cuando se est en contacto previo con este tipo de m.o. o sustancias extraas se dice que ha adquirido INMUNIDAD ADQUIRIDA. El sistema inmune tiene la capacidad de distinguir entre clula y sustancia de su propio organismo y las que tienen otro origen. Sustancias extraas:

1. Virus, 2. Toxinas: Sustancia inmunosa elaborada por un organismo. 3. Toxoide: Toxina que ya ha sido tratada para destruir su propiedad txica sin afectar sus propiedades antignicas, 4. Bacterias, 5. Vacunas. Estas pueden activar el sistema inmune ya que son reconocidas como sustancias extraas o antigenos. ANTIGENO: Es cualquier sustancia que introducida en un organismo (vertebrados) provoque una respuesta inmunitaria conducente a la adquisicin de inmunidad. INMUNIDAD La respuesta inmunitaria tiene como resultado: 1. La formacin de anticuerpos especficos que circulan por el torrente sanguneo (INMUNIDAD HUMORAL). 2. La estimulacin del nmero de clulas reactivas especficas llamadas linfocitos (INMUNIDAD CELULAR). (Capacidad incrementada para distinguir otras clulas) o clulas activadas. Tanto los anticuerpos como los linfocitos especializados reaccionan con el antgeno utilizado como inmunizante. La inmunidad adquirida de esta forma capacita al organismo para destruir o neutralizar m.o. inmunisores o seres txicos. PROPIEDADES DE LOS ANTIGENOS: ANTIGENO: Sin excepciones son sustancias de elevado peso molecular aproximado de 10.000 o superiores.

Los compuestos con peso molecular 6.000 daltones raramente actan como antgenos de por s solamente 2 grupos de sustancias naturales se comportan claramente como inmungenos (estimulan a la rep. inmunitaria). 1. Protenas, 2. Polisacridos. PROTENAS: Por lo general estimulan la produccin de anticuerpos con mayor eficacia que los polisacridos, slo los polisacridos complejos (grandes) ejemplo: capsulares del Pneumococo son buenos antgenos.

VI. CONTROL DEL DESARROLLO BACTERIANO

FUNDAMENTOS: La salud de una nacin (hombre) est determinada por la capacidad de sus habitantes o del hombre mismo, para controlar eficazmente las poblaciones microbianas. Por lo general el hombre utiliza procedimientos muy especficos cuando por ejemplo: Administra un medicamento para eliminar microbios o parsitos. Realiza prcticas sanitarias en el hogar o en el hospital. Purifica el agua que ingiere. Pasteuriza la leche o cuando practica la conservacin y la preservacin de los

alimentos. Debido a lo anterior se cree de vital importancia llevar a cabo un buen control de microorganismos con la finalidad de: a) Prevenir la transmisin de infecciones por enfermedades, personas, animales o plantas. b) Prevenir la contaminacin o la proliferacin de microorganismos perjudiciales que deterioren los alimentos.

c) Prevenir el deterioro o destruccin de materiales causados por microorganismos a nivel industrial. d) Control de microorganismos con la finalidad de obtener cultivos puros en la microbiologa industrial, en los procesos de cerveza, vino, quesos, etc. e) Evitar contaminacin de material que se est utilizando en el diagnstico de un microorganismo.

Control de microorganismos en el agua:

El control de microorganismos en el agua se lleva a cabo nicamente en relacin con medidas sanitarias. Se presentan tres problemas: la purificacin del agua para hacerla potable, la purificacin de las albercas y la purificacin de las aguas negras.

Potabilizacin del agua

Depsitos de agua. filtracin y cloracin se someten: a). Se dice que con solo 0.5 ppm de cloro libre eliminar los patgenos entricos del agua. Purificacin de las albercas. El problema de las albercas es algo serio debido a la rapidez con la cual los usuarios o baistas intercambian microorganismos patgenos, pero puede ser controlado o resuelto manteniendo concentraciones de cloro libre en 0.5 ppm. Purificacin de aguas negras. Es importante la purificacin de las aguas negras por la utilizacin de las mismas en las grandes ciudades o ciudades modernas, donde las aguas negras domsticas se bombean a travs de una planta de desechos, que va seleccionando y eliminando botellas, papel, cajas, etc. Despus estas aguas se dejan sedimentar en tanques grandes, se procede a decantar y separar el lodo que posteriormente es tratado para luego filtrar y purificar el agua para beber.

Control de microorganismos en la leche;

Desde el punto de vista econmico no es posible esterilizar completamente la leche, excepto con calentamiento drstico, lo cual hace que pierda el sabor de la leche fresca; sin embargo, al desear obtener o producir la leche evaporada que se enlata, s se hace uso de la esterilizacin por calor. Esto no significa que la leche fresca no deba tratarse para controlar los microorganismos de leche contaminada que constituye un vehculo de entrada de muchas enfermedades como lo son la tuberculosis y la fiebre ondulante causada por Brucella entre las ms importantes y otras producidas por infecciones en las vacas con estreptococos del grupo A, Salmonellas, praphycoccus aureus, etc., o por infecciones de las personas que trabajan en las lecheras; como fiebre tifoidea, disentera, hepatitis, etc. Dado que muchas enfermedades transmitidas por la leche son resultado de la contaminacin de sta, es obvia una medida de control que insista en procedimientos sanitarios durante la produccin y embotellamiento o envasamiento de la leche; y dado que aun con estos procedimientos sanitarios no resuelve el problema de prevenir todas la enfermedades, se tiene que asegurar mediante pasteurizacin.

Control de los microorganismos en los alimentos:

Cuando diversos organismos comienzan a crecer en productos alimenticios, pueden descomponerlos o deteriorarlos provocando as enfermedades, otras veces pueden ser contaminados por el manejo de los mismos por personas infectadas. De ah que el inters desde el punto de vista de la microbiologa de los alimentos se centraliza en su descomposicin y en la transmisin de enfermedades ya que los microorganismos patgenos afectan ms bien al consumidor que a los alimentos, en s es necesario tener un control de los microorganismos.

En otro rengln, mediante la prevencin de la descomposicin de los alimentos, como lo son las carnes se puede lograr por muchos procedimientos sanitarios, aunque el esfuerzo mayor es dirigido hacia medidas de preservacin entre las cuales se mencionan: irradiacin, temperaturas bajas, desecacin, calor, salado, azucarado, ahumado, preservativos qumicos, etc. Mediante la prevencin de la transmisin de enfermedades las cuales se pueden prevenir mediante medidas sanitarias.

Control de microorganismos en el aire:

El aire no se considera habitat microbiano y las clulas bacterianas que existan en el aire se toman en cuenta como contaminantes accidentales, o como esporas de hongos dispersadas por el aire. De cualquier forma se intentan medidas de control, ya que son muchas bacterias patgenas las transportadas a travs del aire sobre partculas de polvo o sobre residuos secos de gotitas de saliva, por lo que hay que valorarlas. Entre las medidas de control para este tipo de infecciones estn: Ventilacin sanitaria en habitaciones. Irradiacin ultravioleta en habitaciones. Desinfeccin qumica en habitaciones.

En cuanto al suelo, toda la vida sobre la tierra dependen completamente de las actividades metablicas de los microorganismos del suelo. Es importante aclarar que no es posible elegir un procedimiento que desinfecte o esterilice todo tipo de material; debido a que en la aplicacin de un agente fsico, qumico, antimicrobiano o quimioteraputico que es utilizado para inhibir o destruir poblaciones microbianas, hay que considerar muchos factores. Entre los ms importantes se tienen: TEMPERATURA, CLASES DE MICROORGANISMOS, ESTADO FISIOLGICO DE LAS BACTERIAS, AMBIENTE, etc.

TEMPERATURA: Las temperaturas bajas, elevadas o cualquier cambio de temperatura fuera de los rangos estimados de supervivencia para las clulas puede influir inhibiendo o destruyendo a las clulas. CLASES DE MICROORGANISMOS: Al igual que otros seres vivos los microorganismos tambin son diferentes unos a otros y por lo tanto difieren en su susceptibilidad en respuesta a los diferentes agentes fsicos o qumicos, como en el caso de las clulas vegetativas son ms susceptibles que las esporas. ESTADO FISIOLGICO: El estado fisiolgico de las bacterias influye bastante en la susceptibilidad a los diferentes agentes antimicrobianos, ya que las clulas jvenes son ms vulnerables que las clulas viejas, principalmente por los siguientes factores: Las clulas jvenes poseen un intenso metabolismo activo. Las clulas viejas poseen una menor actividad metablica, a la vez que su pared celular entre ms vieja sea la clula va perdiendo su permeabilidad. AMBIENTE: El medio que rodea a las clulas microbianas tambin influye en su desarrollo o se puede inhibir o destruir si las condiciones como las propiedades fsicas o qumicas del medio o sustancias que se encuentran en el medio no son las adecuadas, la acidez o alcalinidad, la consistencia del material ( si es viscoso o acuoso), ya que influyen tambin en la penetracin lo que puede inactivar a la clula, causndole daos como deshidratacin, o ruptura de la misma; como ejemplos se tienen sistemas de plasmlisis, plasmoptisis, smosis, etc. Por lo anterior podemos decir que el control de microorganismos que son indeseables en medicina, en la industria, en la agricultura, etc. utiliza diversos mtodos y/o artificios para su inhibicin o destruccin como los que a continuacin se mencionan: AGENTES FSICOS,

AGENTES

QUMICOS,

AGENTES

ANTIMICROBIANOS

AGENTES

QUIMIOTERAPEUTICOS.

ESTERILIZACIN POR AGENTES FSICOS La esterilizacin es la eliminacin de microorganismos por medio de un agente fsico. Se destruyen todas las formas de vida microbiana, no se puede hablar de trminos medios, un objeto o material es estril o no lo es. Diversos agentes fsicos tienen efecto sobre la viabilidad de los microorganismos. Entre los ms notables se tienen la temperatura (calor y fro en sus aceptaciones comunes y corrientes en lo referente a grados centgrados, la desecacin, radiciones ionizantes y no ionizantes, las vibraciones snicas, la presin, etc.) Muchos de estos agentes son utilizados para eliminar o destruir microorganismos, as como la contaminacin de instrumentos, medios de cultivo, fluidos biolgicos, etc. La muerte de las bacterias por el calor es consecuencia de la desnaturalizacin de protenas, donde las ligaduras intramoleculares e intermoleculares (puentes de hidrgeno) de las protenas, de las cuales depende su funcionalidad son ms dbiles cuando las protenas estn hidratadas que cuando no lo estn, de tal manera que el calor hmedo es ms efectivo en la desnaturalizacin de enzimas y otros componentes proteicos importantes para la clula que el calor seco. Es por eso que se dice que el calor hmedo tiene mayor penetrabilidad. Tanto la esterilizacin por calor hmedo y por calor seco, pueden ser generados en diversos aparatos y en ambos casos hay factores que condicionan la efectividad de sus procesos, como lo son: la cantidad de agua, temperatura, tiempo de contacto, superficie de esterilizacin, pH, edad de las bacterias, presencia de esporas, composicin del medio de suspensin, etc. De las tcnicas ms utilizadas en el laboratorio para la esterilizacin son las siguientes:

Horno (gas o elctrico)

CALOR SECO

Incineracin

CALOR HMEDO

Vapor o presin (autoclave) Esterilizacin fraccionada (vapor fluyente) Tyndalizacin, aparato Arnold Agua hirviente, Pasteurizacin

CALOR SECO ESTERILIZACIN EN HORNO (CALOR SECO) La esterilizacin en horno es la aplicacin de calor seco, este mtodo fsico es utilizado nicamente para material de vidrio, algodn, aceite, telas y otros materiales no combustibles y que se someten a temperaturas menores de 200C. Por lo general se consideran suficientes dos horas de exposicin a 160C 180C por espacio de una hora, por lo tanto, no debern esterilizarse en el horno objetos de hule natural o sinttico, ni material de plstico. Tampoco conviene esterilizar al horno recipientes con lquido de cualquier naturaleza, pues se evaporan. El mecanismo de accin es por desnaturalizacin de las protenas y tambin acta como agente oxidante. Al iniciarse el proceso de elevacin de temperatura, las capas ms bajas de aire se calientan y se dilatan, posteriormente este aire sube a travs de los entrepaos perforados hasta

la pared ms alta del aparato, obligando a la capa de aire fro presente a descender, la cual es calentada cuando llega al fondo, establecindose una corriente de conveccin hasta que llega un momento en que toda la temperatura de dentro del horno es prcticamente igual. INCINERACIN Es una tcnica que se utiliza rutinariamente para esterilizar por ejemplo el asa o para eliminar animales de laboratorios contaminados. CALOR HMEDO ESTERILIZACIN POR EBULLICIN La ebullicin consiste en la introduccin del material que se quiere esterilizar en el seno de un lquido que tiene una temperatura superior a 70C y de preferencia a 100C. generalmente con 5 minutos de exposicin son suficientes para destruir todas las formas vegetativas, y solo en caso de que haya esporas conviene prolongar el tiempo a 15 minutos o ms. A estas temperaturas el agua alcanza a entrar en ebullicin y donde las protenas pueden ser hidratadas y coaguladas. ESTERILIZACIN POR VAPOR A PRESIN (AUTOCLAVE) La esterilizacin por ebullicin tiene sus limitaciones sobre todo porque no es posible elevar la temperatura por encima de los 100C. sin embargo, el vapor de agua cuando es comprimido dentro de un espacio, adquiere presin logrando temperaturas altas y esta propiedad es utilizada en el aparato llamado autoclave, que es parecida en su forma y principio a una olla de presin de cocina.

Este aparato es ordinariamente de gran capacidad y tiene forma de un cilindro metlico, generalmente de doble pared. El principio sobre el cual funciona el autoclave es el siguiente: al nivel del mar el agua hierve a 100C, sin embargo en el pico de una montaa puede hervir a 35C. Si hacemos el vaco en un recipiente cerrado el agua puede hervir a 100C. Si nosotros hacemos hervir el agua y no dejamos que el vapor se escape y lo vamos dejando que se acumule en un recipiente cerrado, a medida que se genera ms vapor este ejerce fuerte presin sobre la superficie del lquido sin dejarlo que hierva. De esta manera la temperatura se puede elevar considerablemente sobre los 100C, sin que el lquido d muestras de ebullicin. Siempre hay que eliminar el aire atrapado en el autoclave al iniciar el proceso de esterilizacin ya que el aire, si no se deja escapar completamente, puede ejercer al calentarse una presin que no corresponda a la temperatura obtenida. Bastan 15 libras por pulgada cuadrada por un periodo de 15 minutos para que la esterilizacin sea completa. Este mtodo se usa para esterilizar todo tipo de material: vidriera, medios de cultivo, sondas, guantes, instrumental quirrgico, telas, batas, soluciones, etc. ESTERILIZACIN CON VAPOR DE AGUA SIN PRESIN (ARNOLDIZACIN) VAPOR FLUYENTE La esterilizacin de vapor fluyente o Arnoldizacin, consiste esencialmente en exponer el material que queremos esterilizar, no en agua hirviendo, sino a los vapores del agua hirviendo. Este proceso se puede llevar a cabo en el autoclave solo dejando las vlvulas de escape abiertas. Este proceso puede ser continuo, o bien intermitente en varios das consecutivos, o en el esterilizador de Arnold.

Esta tcnica es aplicable a medios bacteriolgicos y sustancias qumicas que no pueden calentarse a ms de 100C sin que resulten daados; sin embargo, esos materiales pueden resistir esa misma temperatura del vapor solo y as es posible esterilizarlos por medio de esterilizacin fraccionada o tyndalizacin y hubiera esporas resistentes y germinaran en la siguiente exposicin son destruidas y si persisten se sigue exponiendo por periodos de incubacin y exposicin al calor. PASTEURIZACIN Es un mtodo que es utilizado para darle tratamientos de calor controlado a la leche, crema y ciertas bebidas alcohlicas (cerveza y vino), pero que solo matan cierto tipo de microorganismos pero no a todos. En el caso de la leche pasteurizada no es estril. La temperatura seleccionada para la pasteurizacin se basa en el tiempo letal trmico representativo para los tipos ms resistentes de microorganismos patgenos que debern ser destruidos mediante este procedimiento. Hasta hace poco en el procedimiento se empleaba la temperatura de 62C por 30 minutos, pero debido a investigaciones realizadas se ha detectado que otros microorganismos como ????????? Causal de la fiebre Q. se encuentra ms frecuentemente en la leche y es ms resistente que ???? , por lo que se ha adoptado una temperatura ligeramente mayor para pasteurizar la leche a baja temperatura (62.8C). ESTERILIZACIN POR AGENTES QUMICOS En el control de los microorganismos son muy utilizados los agentes fsicos ya mencionados, pero a veces deseamos eliminar tambin microbios indeseables y que se encuentran principalmente en las superficies como lo son las mesas, paredes, pisos, etc., o

sobre la piel de los seres vivos y all no se pude hacer uso de los agentes fsicos por lo que se utilizan sustancias qumicas que inhiban o destruyan el microorganismo en cuestin. Cuando estas sustancias son usadas debe asegurarse que ataquen la microbio y no a las clulas del husped, lo que se conoce como TOXICIDAD SELECTIVA y es en lo que se basa la quimioterapia. Es necesario e importante que al hablar sobre estos agentes, se maneje la siguiente terminologa: sustancia bacteriosttica, bactericida, fungostticos o fungicida, virucida, desinfectante, antisptico, etc. En cuanto a la naturaleza qumica de los agentes qumicos es muy diversa, desde cidos, bases, oxidantes, reductores, fenoles, teres, detergentes, etc. As como su mecanismo de accin puede ser tambin variado, unos como inhibidores de grupos enzimticos, disolventes de grasas, agentes surfotensores, precipitantes de protenas, etc. Debido a que los agentes antibacterianos deben ser inocuos para todo organismo husped, en las condiciones en que son empleados (toxicidad selectiva) el nmero de agentes antibacterianos que comnmente se emplean es mucho ms bajo que el nmero de venenos celulares e inhibidores. Con respecto al cianuro, arsnico y otros venenos no se incluyen debido a sus limitaciones en su utilidad prctica. Los ms frecuentes son los alcoholes, fenoles, iones de metales pesados, agentes oxidantes, agentes alquilizantes, detergentes, etc. ALCOHOLES Los alcoholes son compuestos con estructura R-CH2OH (donde R es un grupo alquilo), estos son txicos para las clulas en concentraciones relativamente altas. Los alcoholes etlico e isoproplico son de uso comn, pero pueden emplearse en concentraciones del 70% en solucin acuosa, como desnaturalizantes de protenas y efectivo contra

microorganismos vegetativos no esporulados, el alcohol metlico es poco bactericida y el alcohol proplico e isoproplico en concentraciones del 40% al 80% se usan como desinfectantes de la piel. FENOL El fenol y muchos compuestos derivados fenlicos se consideran agentes antibacterianos fuertes. En concentraciones de 1 a 2% en solucin acuosa es como generalmente se emplea como desnaturalizante de protenas de la clula daando membranas celulares, tambin se usan para desarrollar tcnicas aspticas y con desinfectante. Las esporas bacterianas y los virus son ms resistentes a ellos que las clulas vegetativas bacterianas. Algunos compuestos fenlicos pueden ser bactericidas o fungicidas. Ciertos factores como la presencia de jabn, un pH alcalino o bajas temperaturas pueden reducir la actividad antimicrobiana de los compuestos fenlicos. IONES DE METALES PESADOS La mayora de los metales pesados, solos o en ciertos compuestos son dainos para los microorganismos. Los metales que se consideran ms efectivos son el Hg, Ag, y Cu. Las sales de estos metales a altas concentraciones desnaturalizan las protenas; estas sales son demasiado perjudiciales para los tejidos humanos por lo que no son usados en esta forma. Comnmente se emplean a bajas concentraciones, en estas condiciones actan combinndose con los grupos sulfhidrilo. El Hg combinndolo con compuestos orgnicos (p. ej. Mercurochrome, merthiolate) puede ser empleado. Excepto cuando se utilizan sobre las superficies limpias de la piel, se consideran de valor prctico dudoso, ya que son inactivados rpidamente por accin de la materia orgnica extraa.

La Ag como el Cu, aun en pequeas cantidades ejercen un efecto letal sobre las bacterias. En una placa inoculada se coloca un trozo de metal limpio (Cu o Ag), aspticamente con unas pinzas estriles, se incuba por 24 horas a temperatura de 37C y despus de la incubacin se observar una zona de inhibicin alrededor del metal (no hay crecimiento). En el caso del HgCl2, tiene efecto inhibidor en las enzimas que contienen grupos sulfhidrilo inactivndolos. A esta accin se le conoce como OLIGODINAMICA (capacidadd que tienen los metales pesados de inactivar las enzimas). AGENTES OXIDANTES Los agentes oxidantes fuertes inactivan a las clulas oxidando grupos sulfhidrilos libres. Entre los agentes tiles se pueden mencionar el H2O2, I2, hipocloritos, Cl2 y compuestos que liberan cloro lentamente (cloruro de cal). En el caso del I2 es un agente altamente efectivo y se cree que sea nico en cuanto a la efectividad contra toda clase de bacterias, esporas, hongos y virus. Tambin se usa como desinfectante de la piel. AGENTES ALQUILIZANTES Numerosos agentes reaccionan como compuestos en la clula para sustituir tomos lbiles de hidrgeno como radicales alquilo. Los dos agentes que se usan comnmente con fines de desinfeccin son el formaldehdo ( se vende como solucin acuosa al 37%, formalina) y el xido de etileno; este gas se inactiva mezclndolo con CO2 al 90% con fluorocarbono, volvindolo no explosivo. El xido constituye el desinfectante ms confiable disponible para superficies secas, en desinfeccin de instrumentos quirrgicos, etc.

DETERGENTES Son sustancias que rebajan la tensin superficial o agentes humectantes empleados principalmente para limpiar superficies, p. ej. los jabones que tienen la propiedad de concentrarse en la interfase por lo que son llamados agentes tensoactivos o detergentes. La interfase entre la membrana de una clula bacteriana que contiene lpidos y el medio acuoso que la rodea, atraen especialmente a una clase particular de compuestos tensoactivos y en forma especfica a los que tienen un grupo liposoluble y un grupo hidrosoluble. Los microorganismos quedan atrapados en la espuma del jabn. En el caso de las sales de amonio cuaternarias, modifican la carga elctrica de la membrana haciendo que la clula estalle. AGENTES QUMICOS ANTIMICROBIANOS Mucha sustancias qumicas son capaces de inhibir o matar a los microorganismos y van desde los elementos o metales pesados hasta molculas orgnicas complejas. Estas sustancias ejercen su efecto antimicrobiano por diferentes caminos y sobre diferentes grupos de microorganismos. En su efecto puede variar sobre algunas superficies y/o materiales sobre los que se aplica, esto significa que: a) Algunas son compatibles. b) Otros son destructores.

Debido a esto es necesario conocer el comportamiento de un agente qumico antes de utilizarlo, tomando en cuenta que ningn agente qumico antimicrobiano es el mejor para todas las finalidades ya que un desinfectante ideal necesitara poseer una gran cantidad de caractersticas (para tantos microorganismos). Comnmente se hace uso de los siguientes trminos en relacin con los agentes antimicrobianos y su empleo: BACTERIOSTTICO: Sustancia que tiene la propiedad de inhibir la multiplicacin o desarrollo de las bacterias sin matarlas; pero esta multiplicacin se reanuda en cuanto se retira el agente. BACTERICIDA: Sustancia que tiene la propiedad de matar a las bacterias. Su accin difiere a la de la bacteriostasis en que es irreversible; es decir, que el organismo muerto no puede reproducirse ms, aun cuando sea retirado el agente. DESINFECTANTE: Sustancia qumica empleada para matar microorganismos sobre superficies, pero demasiado txica por lo que no se aplica directamente a tejidos; capaz de matar las formas en desarrollo pero no esporas de patgenos. ANTISPTICO: El trmino asptico est caracterizado por la falta de

microorganismos patgenos. Sustancia que se opone a la spsis, impide el desarrollo o accin de microorganismos, sustancia que se puede aolicar al cuerpo. SEPSIS: Trmino caracterizado por la presencia de microorganismos perjudiciales en el tejido vivo. GERMICIDA: Agente que destruye las formas de desarrollo. Su accin es igual a la de un desinfectante, pero no destruye las esporas.

SANEAMIENTO: Los agentes utilizados para el saneamiento se aplican a objetos inanimados, para el cuidado de equipos, utensilios, lecheras, plantas de alimentos, etc. Su funcin es reducir la poblacin microbiana a niveles no peligrosos. El modo de accin de los agentes antimicrobianos es: a) Lesin al DNA b) Desnaturalizacin de la protena c) Rompimiento de la membrana o de la pared celular d) Remocin de grupos sulfhidrilo libres e) Antagonismo qumico. Fijadores como Tween 80. En cuanto este fija la muestra, se procede a teir, para su observacin al microscopio. El colorante que se va a usar, generalmente es un colorante bsico de la anilina.

Inicio
VII. IMPACTO DE LOS MICROORGANISMOS EN LA INGENIERA GENTICA

VIII. INTERACCIN E IMPACTO DE MICROORGANISMOS EN EL MEDIO AMBIENTE

BIBLIOGRAFA Michael J. Pelczar (1982), Microbiologa. Editorial Mc. Graw Hill, Cuarta Edicin, Mxico. Jawetz Ernest / Melnick y Adelberg (1985), Microbiologa Mdica, El Manual Moderno, Undcima edicin, Mxico.

Koneman / Allen (1990), Diagnstico Microbiolgico, Editorial Mdica Panamericana, Mxico. Bailey / Scott (1991), Diagnstico Microbiolgico, Editorial Mdica Panamericana, Sptima edicin, Mxico.