Instituto Universitario de Tecnologa Jos Antonio Anzotegui PNF.

- LICENCIATURA EN QUMICA EL TIGRE EDO ANZOTEGUI

Microbiologa Seccin: LQ-01.

Profesor: Lic. Alfredo Barcel

Integrantes: Becerra Mariel C.I.: 13.753.515 Domnguez Anglica C.I: 14.132.613 Domnguez Luisa C.I: 10.938.590 Garca Julio C.I.E: 80.337.538 Patete Elimar C.I.:18.679058 Rivero Yerika C.I.: 19.142935 Spsito Odette C.I.: 20.737.563

El Tigre, Noviembre 2012. INTRODUCCIN.-

La bacteriologa es una rama de la microbiologa (que es una rama de la biologa dedicada a estudiar los organismos que son slo visibles a travs del microscopio: organismos procariotas y eucariotas simples los microorganismos, tambin conocidos como microbios). Encargada del Estudio de las bacterias y enfermedades que stas provocan. Queda incluida la cadena epidemiolgica (reservorio, mecanismos de transmisin, inmunidad, factores que hacen que existan ms o menos defensas contra ellas). Las bacterias son seres microscpicos estudiadas mediante microscopios pticos en preparaciones teidas o sin teir (en fresco) para estudiar su estructura o morfologa, pero para estudiar su estructura interna se necesita un microscopio electrnico. La bacteriologa se clasifica en Bacteriologa General, Bacteriologa Agrcola, Bacteriologa Alimenticia, Bacteriologa Farmacutica y Bacteriologa Mdica. Se inicia desde que el naturalista holands Antoni van Leeuwenhoek las describi por primera vez, con ayuda de su microscopio, aunque ms formalmente la bacteriologa comenz a desarrollarse despus de casi 200 aos de investigaciones por parte de qumicos y bilogos como Louis Pasteur quin describi el origen bacteriano de los procesos de fermentacin y de muchas enfermedades infecciosas. Tambin inici el conocimiento cientfico de la inmunidad frente a las bacterias. El objetivo de la siguiente investigacin es dar a conocer todo lo referente a las bacterias y la esta ciencia incluyendo la estructuras, metabolismo, clasificacin y tipos de bacterias, cultivos, medios de cultivos, su preparacin, factores de crecimiento entre otros aspectos.

BACTERIOLOGA.-

Parte de la microbiologa que estudia las bacterias Historia de la Bacteriologa.Anton van Leeuwenhoek, la primera persona que observ una bacteria a travs de unmicroscopio. La existencia de microorganismos fue conjeturada a finales de la Edad Media. En el Canon de medicina (1020), Ab Al ibn Sn (Avicenna) planteaba que las secreciones corporales estaban contaminadas por multitud de cuerpos extraos infecciosos antes de que una persona cayera enferma, pero no lleg a identificar a estos cuerpos como la primera causa de las enfermedades. Cuando la peste negra (peste bubnica) alcanz al-ndalus en el siglo XIV, Ibn Khatima e Ibn al-Jatib escribieron que las enfermedades infecciosas eran causadas por entidades contagiosas que penetraban en el cuerpo humano.8 9 Estas ideas sobre el contagio como causa de algunas enfermedades se volvi muy popular durante el Renacimiento, sobre todo a travs de los escritos de Girolamo Fracastoro. Las primeras bacterias fueron observadas por Anton van Leeuwenhoek en 1683 usando un microscopio de lente simple diseado por l mismo.11 Inicialmente las denomin animalculos y public sus observaciones en una serie de cartas que envi a la Royal Society.12 13 14 El nombre de bacteria fue introducido ms tarde, en 1828, por Ehrenberg. Deriva del griego -, bacterion -a, que significa bastn pequeo.15 Enfermos de clera. Louis Pasteur demostr en 1859 que los procesos de fermentacin eran causados por el crecimiento de microorganismos, y que dicho crecimiento no era debido a la generacin espontnea, como se supona hasta entonces. (Ni las levaduras, ni los mohos, ni los hongos, organismos normalmente asociados a estos procesos de fermentacin, son bacterias). Pasteur, al igual que su contemporneo y colega Robert Koch, fue uno de los primeros defensores de la teora germinal de las enfermedades infecciosas.16 Robert Koch fue pionero en la microbiologa mdica, trabajando con diferentes enfermedades infecciosas, como el clera, el ntrax y la tuberculosis. Koch logr probar la teora germinal de las

enfermedades infecciosas tras sus investigaciones en tuberculosis, siendo por ello galardonado con el premio Nobel en Medicina y Fisiologa, en el ao 1905.17 Estableci lo que se ha denominado desde entonces los postulados de Koch, mediante los cuales se estandarizaban una serie de criterios experimentales para demostrar si un organismo era o no el causante de una determinada enfermedad. Bacterias.Las bacterias son microorganismos unicelulares que presentan un tamao de unos pocos micrmetros (entre 0,5 y 5 m, por lo general) y diversas formas incluyendo esferas (cocos), barras (bacilos) y hlices (espirilos). Las bacterias son procariotas y, por lo tanto, a diferencia de las clulas eucariotas (de animales, plantas, hongos, etc.), no tienen el ncleo definido ni presentan, en general, orgnulos membranosos internos. Generalmente poseen una pared celular compuesta de peptidoglicano. Muchas bacterias disponen de flagelos o de otros sistemas de desplazamiento y son mviles. Del estudio de las bacterias se encarga la bacteriologa, una rama de la microbiologa. Las bacterias son los organismos ms abundantes del planeta. Son ubicuas, se encuentran en todos los hbitats terrestres y acuticos; crecen hasta en los ms extremos como en los manantiales de aguas calientes y cidas, en desechos radioactivos,1 en las profundidades tanto del mar como de la corteza terrestre. Algunas bacterias pueden incluso sobrevivir en las condiciones extremas del espacio exterior. Se estima que se pueden encontrar en torno a 40 millones de clulas bacterianas en un gramo de tierra y un milln de clulas bacterianas en un mililitro de agua dulce. En total, se calcula que hay aproximadamente 51030 bacterias en el mundo. Estructura Bacteriana,Las bacterias pertenecen al reino Procaryotae. Son elementos unicelulares sin un ncleo verdadero. Su tamao aproximado es de 1-3 micras. A los elementos bacterianos los podemos dividir en: Elementos obligados:

Pared bacteriana. Membrana citoplasmtica. Citoplasma. Ribosomas. Nucloide (Nucleoide) o cromosoma bacteriano.

Elementos facultativos: Capsula. Flagelos. Fimbrias o pili. Esporo. Glicocalix. Plasmidos. Transposones.

Pared celular.Se pone de manifiesto con la tincin de Gram: Tincin desarrollada por Hans Christian Gram (1853-1938). Permite dividir a las bacterias en dos grandes grupos: 1. Grampositivos y Gramnegativos. Es una estructura compleja y fundamental para la bacteria formada

porpeptidoglicanos (murena o glucopeptido), cuyos componentes bsicos son: El N-acetilglucosamina (NAG) El N-acetilmurmico (NAM). Un tetrapeptido: Compuesto por aminoacidos que se alternan en sus configuraciones L y D. De estos aminoacidos, el D-glutamato, D-alanina y el acido mesodiaminopimelico no se encuentran en otra protena conocida.

El peptidoglicano representa el 5-20 % de la composicin de la pared de las bacterias Gramnegativas y el 90 % en las Grampositivas.

Componentes del Peptidoglicano.Su espesor vara segn se trate de bacterias grampositivas o gramnegativas:

En las bacterias grampositivas es una capa slida de 50-100 molculas de peptidoglicanos. En las bacterias gramnegativas tiene un espesor de solo una o dos molculas. Por su rigidez le da su forma peculiar a la bacteria. La protege de los cambios de la presin osmtica del medio que la rodea. Es el lugar donde se localizan numerosos determinantes antignicos que permiten diferenciar a las bacterias entre s. La endotoxina de algunos grupos tambin se encuentra aqu. La pared celular se constituye (se "fabrica") mediante una serie de etapas enzimticas en las que participan al menos 30 enzimas. Es el sustrato donde actan antimicrobianos como los beta-lactmicos. Participa en la divisin celular.

Membrana citoplasmtica.Est formada por fosfolpidos y protenas, y a diferencia de las eucariotas, no contiene esteroles (excepto el mycoplasma). Las enzimas del transporte electrnico se encuentran aqu (produce energa). Componentes de la cpsula y la pared celular son sintetizados aqu. Es una barrera osmtica, selectiva y activa. Acta como barrera osmtica para la clula. Contiene sistemas de transporte para los solutos y regula el transporte de productos celulares hacia el exterior. Las bacterias gramnegativas tienen dos membranas: una interna y otra externa, mientras que las grampositivas, solo poseen una membrana (interna).

Es sitio de accin de detergentes y antibiticos polipeptdicos como la polimixina (Por ejemplo: colistin).

Citoplasma.Formado 85 % por agua. Contiene los ribosomas y el cromosoma bacteriano. Ribosomas.Compuestos por ARN ribosmico. Su importancia radica en ser el sitio de accin de numerosos antibiticos: Aminoglucosidos, tetraciclinas, cloranfenicol, macrolidos y lincosamidas. Nucleoide o cromosoma bacteriano.Llamado tambin equivalente nuclear. No posee membrana nuclear (de all el termino nucleoide). Est formado por un nico filamento de ADN apelotonado (superenrollado). Confiere sus peculiaridades genticas a la bacteria. Regula la sntesis proteica. Cpsula.Estructura polisacarida de envoltura. Factor de virulencia de la bacteria. Protege a la bacteria de la fagocitosis y facilita la invasin. Permite la diferenciacin en tipos serologicos. Flagelos.Estructuras proteicas, de mayor longitud que los pili. De estructura helicoidal y locomotores (responsables de la motilidad bacteriana). Segn la posicin de los flagelos tenemos bacterias: monotricas: un flagelo en un extremo o ambos. logotricas: varios flagelos en un extremo o ambos. Peritricas: flagelos en toda la superficie. Fimbrias o pili.Son estructuras cortas parecidas a pelos. Visibles solo al microscopio electrnico. Carentes de motilidad. Los poseen fundamentalmente las gramnegativas. Intervienen en

la adherencia de las bacterias al husped. Facilitan el intercambio de ADN durante la conjuncin bacteriana. Tiene capacidad antignica.

Esporas.Estructura presente en algunas especies bacterianas exclusivamente bacilares. Le permite a la clula sobrevivir en condiciones extremadamente duras. El material gentico de la clula se concentra y es rodeado por una capa protectora, que hace que la clula sea impermeable a la desecacin, al calor y numerosos agentes qumicos. Se coloca en una situacin metablica de inercia. Puede permanecer meses o aos as. Cuando las condiciones son ms favorables se produce la germinacin, con la formacin de una clula nica que despus se reproduce con normalidad. El esporo no se tie con los colorantes habituales y se identifica como una zona clara, redondeada u ovalada, que contrasta con el resto de la bacteria que aparece coloreada. Glicocalix.Entramado de fibrillas polisacaridas situadas en posicin extracelular. Facilita la adherencia. Plsmidos y transposones.Los plsmidos (plasmidios) son elementos extracromosmicos compuestos por ADN de doble cadena, con frecuencia circular, autoreplicativos y autotransferibles. Los transposones (genes saltarines o mviles) son elementos compuestos de ADN que pueden moverse de forma autosuficiente a diferentes partes del genoma bacteriano. No poseen la capacidad de autoreplicarse pero pueden transferirse a travs de plasmidios. El transposon al cambiar de posicin puede arrastrar una secuencia de ADN contigua y originar cambios fenotpicos en la bacteria. Metabolismo de las Bacterias.Todos los seres vivos llevan a cabo el procesamiento de los nutrientes que los mantienen vivos. A este conjunto de procesos, se le conoce como metabolismo y consiste de un gran

nmero de reacciones qumicas destinadas a transformar las molculas nutritivas en elementos que posteriormente sern utilizados para la sntesis de los componentes estructurales; como pueden ser las protenas. Otra parte importante del metabolismo es la de transformar y conservar la energa que est contenida en una reaccin qumica en algn proceso que requiera de energa, como puede ser el trabajo o el movimiento. Es evidente que los nutrientes son transformados cuando entran en un organismo, ya que en ningn caso el alimento contiene todas las molculas que una clula requiere. Esto se vio con claridad al observar el crecimiento normal de levaduras en un medio de cultivo que slo contena glucosa como nica fuente de energa. As pues, se pens que la sntesis de todos los componentes celulares se llevaba a cabo en el interior de las levaduras. Hoy sabemos que las transformaciones que sufre la glucosa no ocurren en un solo paso, sino que, por el contrario, se forman varios productos intermedios que en muchas ocasiones no tienen una funcin especfica a no ser la de formar parte de lo que se conoce como va metablica. La transformacin de los nutrientes en compuestos tiles para la subsistencia de un organismo se lleva a cabo por medio de las reacciones qumicas que realizan unas protenas conocidas como enzimas. De tal forma que no podemos hablar del metabolismo si no describimos brevemente qu son y cmo funcionan las enzimas. Morfologa Bacteriana.Existen bacterias con mltiples morfologas. Las bacterias presentan una amplia variedad de tamaos y formas. La mayora presentan un tamao diez veces menor que el de las clulas eucariotas, es decir, entre 0,5 y 5 m. Sin embargo, algunas especies como Thiomargarita namibiensis y Epulopiscium fishelsoni llegan a alcanzar los 0,5 mm, lo cual las hace visibles al ojo desnudo.41 En el otro extremo se encuentran bacterias ms pequeas conocidas, entre las que cabe destacar las pertenecientes al gnero Mycoplasma, las cuales llegan a medir solo 0,3 m, es decir, tan pequeas como los virus ms grandes.

La forma de las bacterias es muy variada y, a menudo, una misma especie adopta distintos tipos morfolgicos, lo que se conoce como pleomorfismo. De todas formas, podemos distinguir tres tipos fundamentales de bacterias: Coco (del griego kkkos, grano): de forma esfrica. Diplococo: cocos en grupos de dos. Tetracoco: cocos en grupos de cuatro. Estreptococo: cocos en cadenas. Estafilococo: cocos en agrupaciones irregulares o en racimo. Bacilo (del latn baculus, varilla): en forma de bastoncillo.

Formas helicoidales: Vibrio: ligeramente curvados y en forma de coma, juda o cacahuete. Espirilo: en forma helicoidal rgida o en forma de tirabuzn. Espiroqueta: en forma de tirabuzn (helicoidal flexible). Algunas especies presentan incluso formas tetradricas o cbicas.43 Esta amplia variedad de formas es determinada en ltima instancia por la composicin de la pared celular y el citoesqueleto, siendo de vital importancia, ya que puede influir en la capacidad de la bacteria para adquirir nutrientes, unirse a superficies o moverse en presencia de estmulos.44 45 A continuacin se citan diferentes especies con diversos patrones de asociacin:

Neisseria gonorrhoeae en forma diploide (por pares). Streptococcus en forma de cadenas. Staphylococcus en forma de racimos. Actinobacteria en forma de filamentos. Dichos filamentos suelen rodearse de una vaina que contiene multitud de clulas individuales, pudiendo llegar a ramificarse, como el gnero Nocardia, adquiriendo as el aspecto del micelio de un hongo.

Las bacterias presentan la capacidad de anclarse a determinadas superficies y formar un agregado celular en forma de capa denominado biopelcula o biofilme, los cuales pueden tener un grosor que va desde unos pocos micrmetros hasta medio metro. Estas biopelculas pueden congregar diversas especies bacterianas, adems de protistas y arqueas, y se caracterizan por formar un conglomerado de clulas y componentes extracelulares, alcanzando as un nivel mayor de organizacin o estructura secundaria denominada microcolonia, a travs de la cual existen multitud de canales que facilitan la difusin de nutrientes. En ambientes naturales tales como el suelo o la superficie de las plantas, la mayor parte de las bacterias se encuentran ancladas a las superficies en forma de biopelculas.49 Dichas biopelculas deben ser tenidas en cuenta en las infecciones bacterianas crnicas y en los implantes mdicos, ya que las bacterias que forman estas estructuras son mucho ms difciles de erradicar que las bacterias individuales. Por ltimo, cabe destacar un tipo de morfologa ms compleja an, observable en algunos microorganismos del grupo de las mixobacterias. Cuando estas bacterias se encuentran en un medio escaso en aminocidos son capaces de detectar a las clulas de alrededor, en un proceso conocido como quorum sensing, en el cual todas las clulas migran hacia las dems y se agregan, dando lugar a cuerpos fructferos que pueden alcanzar los 0,5 mm de longitud y contener unas 100.000 clulas.51 Una vez formada dicha estructura las bacterias son capaces de llevar a cabo diferentes funciones, es decir, se diferencian, alcanzando as un cierto nivel de organizacin pluricelular. Por ejemplo, entre una y diez clulas migran a la parte superior del cuerpo fructfero y, una vez all, se diferencian para dar lugar a un tipo de clulas latentes denominadas mixosporas, las cuales son ms resistentes a la desecacin y, en general, a condiciones ambientales adversas. Clasificacin de las Bacterias segn su Agrupacin: Es la clasificacin ms antigua en la que se consideran: bacilos, cocos, espirilos y espiroquetas.

 Bacilos: se pueden encontrar en grupos de dos denominados diplobacilos, o en cadenas similares a las que presentan los cocos por los que se les llama estreptobacilos. El gnero ms representativo de esta morfologa lleva el nombre Bacillus, el cual se caracteriza por la formacin de endosporas. Son tiles en la produccin de antibiticos tales como bacitracina, gramicidina y polimixina, entre otros. Tambin se han utilizado como biocontroladores en la erradicacin de ciertas plagas en cultivos de importancia econmica, de las cuales son parsitos. Los bacilos se encuentran en diferentes ambientes y solo se pueden observar con un microscopio. Los bacilos se suelen dividir en:

Bacilos Gram: fijan el violeta de genciana (tincin de Gram) en la pared celular porque carecen de capa de lipopolisacrido.

Bacilos Gram negativos: no fijan el violeta de genciana porque poseen la capa de lipopolisacrido(peptidoglicano).

Aunque muchos bacilos son patgenos para el ser humano, algunos no hacen dao, pues son los encargados de producir algunos productos lcteos como el yogurt (lactobacilos). Cocos o micrococos: generalmente son aerobios estrictos. Algunas veces estas bacterias tienden a agruparse. Cuando se presentan asociadas dos bacterias reciben el nombre de diplococos como por ejemplo el diplococo Neisseria gonorrhoeae que es el agente causal de la gonorrea, el Pneumococo que es responsable de la neumona infecciosa, etc. En otras ocasiones los micrococos se renen formando grupos de cuatro elementos dispuestos en cuadro, y se denominan entonces tetracocos, tetrgenos o ttradas. Las sarcinas, son especies de bacterias cocales que se dividen en tres planos perpendiculares para formar paquetes de ocho, diecisis, treinta y dos, o ms micrococos. Son anaerobios obligados y cido-tolerantes por lo que pueden crecer en un pH inferior a 2 despus de fermentar azcar. Algunas especies como Sarcina ventriculi producen una capa fibrosa y gruesa de celulosa que se dispone alrededor de la pared celular y funciona como

cemento para mantenerse adheridas entre s. Esta especie habita en sitios muy cidos como suelos, barro, heces y en el contenido estomacal. Espirilos: se clasifican dentro de las Gram negativas. Para su clasificacin taxonmica se utilizan criterios como la forma de la clula, el tamao, la flagelacin y las relaciones simbiticas entre otras. Los espirilos con muchas vueltas a pesar de su semejanza morfolgica con las espiroquetas, se diferencian de ellas porque poseen flagelos bacterianos tpicos externos mientras las espiroquetas poseen flagelos periplsmicos o filamentos axiales internos. Dentro de este grupo se pueden encontrar especies benficas y patgenas. La especie Azospirillum lipoferum es un organismo fijador de nitrgeno, de importancia agronmica debido a que establece una relacin simbitica laxa con plantas herbceas tropicales y con cereales cultivados. Un ejemplo de espirilo patgeno es el gnero Helicobacter asociado con las lceras pilricas en los humanos. Espiroquetas: Habitualmente se hallan en ambientes acuticos o en el cuerpo de animales. El cilindro protoplsmico de estas clulas se encuentra rodeado por una membrana de tres capas conocida como cubierta celular externa, adems poseen una estructura nica que le permite la movilidad llamada filamento axial, compuesta de un flagelo que atraviesa el cuerpo celular y se sita entre la pared delgada flexible y la envoltura externa. Las espiroquetas pueden encontrarse como parsitos en humanos mientras otras viven libres en agua o madera. Los vibrios: Son bacilos Gram negativos, dotados de flagelo polar que les permite una elevada movilidad. No forman esporas, varias especies marinas son bioluminiscentes, tanto de vida independiente como simbitica o parasitaria. Soportan medios alcalinos y concentraciones de sal. Son anaerobios facultativos y oxidasa positiva, se pueden encontrar unidas en sus puntos distales, por lo que forman agregados espirales o en forma de S. Arreglos de las clulas. Solas.

Pares. Tetadras. Octadas. Cadenas. Paquetes.

Tipos de locomocin. Flagelos.: son apndices filamentosos y muy finos compuestos por la protena flagelina dispuesta en fibras helicoidales y con apariencia lisa, anclados a la pared celular. Presentan un gancho, que une el filamento al cuerpo basal (parte motora). Su funcin es el desplazamiento de la clula mediante movimientos variables de rotacin. Su distribucin es variable, as como su nmero. Independientemente del mecanismo de locomocin que desplieguen las bacterias, ste les permite responder en sentido positivo o negativo a gradientes fisicoqumicos (quimiotropismo, fototropismo). Son muy antignicos. Pili y Fimbrias: Conocidos tambin como (Latn: cabellos), fimbriae (Latn:

flecos). Estructuras ms delgadas y cortas que los flagelos. Actan como rganos de fijacin entre clulas (bacteria - bacteria, bacteria - clula eucariota) Tambin se les relaciona con la formacin de biopelculas y la conjugacin (pilis sexuales). Factores de relevancia en la colonizacin. Ejemplo: las fimbrias de Streptococcus pyogenes contienen el principal factor de virulencia, la protena M. Pigmentos de la colonia.

Pigmentacin: algunas bacterias producen pigmentos en sus colonias como el

Staphilococcus aureus (pigmento de color amarillo dorado) y la Pseudomona (pigmento verdoso). Hemlisis: algunas bacterias tienen la capacidad de hemolizar los hematies en un medio como agar sangre, por ejemplo algunos Streptococos. Olor: algunas bacterias descompone sustratos que utilizan para su metabolismo desprendiendo sustancias que proporcionan un olor caracterstico a los cultivos.

Fijacin y tincin de clulas.El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de clulas o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc. Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas, proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms corriente, aunque tambin puede fijarse con sustancias qumicas como formaldehido, cidos y alcoholes. Despus de la fijacin, si se aade el colorante, no se producen ulteriores cambios estructurales en el protoplasma. La fijacin se realiza habitualmente en clulas que han sido fijadas sobre un portaobjetos. Tratando despus ste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el proceso de tincin. La fijacin produce habitualmente el encogimiento de las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcan mayores que lo que es realmente, de manera que las medidas de las clulas que han sido fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha precisin. La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucledos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son molculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas protenas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materiales lipdicos de la clula, usndose a menudo para revelar la localizacin de las gotculas o depstos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudn.

Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada con otra sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente hbitual es el cido tnco. El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de ta1 modo que ahora s podr atacar el colorante. Si se desea simplemente incrementar el contraste de las clulas para la microscopa, son suficientes los procedimientos simples de tincin. EI azul de metileno es un buen colorante simple que acta sobre todas las clulas bacterianas rpidamente y que no produce un color tan intenso que oscurezca los detalles celulares. Es especialmente til para detectar la presencia de bacterias en muestras naturales, puesto que la mayor parte del material no celular no se tie. La tincin negativa es el reverso del procedimiento de tincin usual: las clulas se dejan sin teir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las clulas. La sustancia utilizada para la tincin negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las clulas, tal como la tinta china (que es una suspensin de partculas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua). La tincin negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las clulas en la microscopia ptica, pero su mxima utilidad est en revelar la presencia de cpsulas alrededor de las clulas bacterianas. Los mtodos de tincin son de gran utilidad, pero deben usarse siempre con precaucin, ya que pueden conducir a errores. Las molculas de colorante forman en ocasiones precipitados o agregados que parecen estructuras celulares autnticas, pero que son formaciones completamente artificiales inducidas por el mismo colorante. Tales estructuras se denominan artefactos, y deben tomarse muchas precauciones para tener la seguridad de que no nos estamos equivocando al creer que un artefacto es una estructura realmente existente. Tipos de tinciones. Tincin Simple: utiliza un solo colorante.

Tincin de Gram: Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado

con alcohol, Safranina 30 seg). Tincin cido Resistente: Una vez teidos, conservan su color resistiendo al

lavado con cido mineral reducido. En esta tincin las bacterias cido resistentes conservan el colorante primario color rosa o rojo, los dems microorganismos son decolorados por el cido y toman el color azul.

Tincin de Giensa: El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza cuando

se sospeche de protozoos en la sangre para observar materias ncleos de las clulas. Tincin de Esporas: Se usa verde de malaquita en contraste con safranina para Tincin de Cpsula: Colorante nigrosuna, aqu se observa microorganismos Tincin de Flagelos: Se usa mordiente el cual aumenta el tamao del

detectar presencia de estructuras de supervivencia. encapsulados creando resistencias. microorganismo. Clasificacin metabolismo. Segn la respiracin: de bacterias segn su respiracin, necesidades de crecimiento y

1. Bacterias aerobias: para respirar, este tipo de bacterias se valen del oxgeno. Estas forman parte de un tipo de organismos que necesitan un ambiente que contenga oxgeno diatmico (un gas compuesto por dos tomos de oxgeno) para existir y desarrollarse. El metabolismo aerobio de muchos organismos es una consecuencia evolutiva de la fotosntesis, que comenz a liberar grandes cantidades de oxgeno y que inicialmente resulto txico para muchos seres vivientes. Sin embargo muchos aprendieron a utilizarlo, oxidando con el qumicos tales como la glucosa, lo cual permiti liberar mucha ms energa que los procesos anaerobios (aquellos que no utilizan oxgeno) haciendo de los organismos aerobios los predominantes sobre la faz de la tierra. Aerobiosis, es un proceso conocido como respiracin celular, usa el oxgeno para oxidacin del sustrato (por ejemplo azcares y grasas para obtener energa).

Un buen ejemplo podra ser la oxidacin de la glucosa (un monosacrido) en la respiracin aerbica. C6H12O6 + 6 O2 -> 6 CO2 + 6 H2O + 38 ATP Dando alrededor de 2.880 kJmol-1. El oxgeno es usado durante la oxidacin de la glucosa y produce agua. Se denominan aerobios o aerbicos a los organismos que pueden vivir o desarrollarse en presencia de oxgeno diatmico, mientras que si lo necesitan se denominan aerobios estrictos. El adjetivo "aerobio" se aplica no slo a organismos sino tambin a los procesos implicados ("metabolismo aerobio") y a los ambientes donde se realizan. Un "ambiente aerobio" es aquel rico en oxgeno, a diferencia de uno anaerobio, donde el oxgeno est ausente, o uno microaeroflico, donde el oxgeno se encuentra a muy baja concentracin. El metabolismo aerobio (respiracin) surgi en la evolucin despus de que la fotosntesis oxignica, la forma ms comn de fotosntesis, liber a la atmsfera oxgeno, el cual haba sido muy escaso hasta entonces. Inicialmente represent una forma de contrarrestar la toxicidad del oxgeno, ms que una manera de aprovecharlo. Como la oxidacin de la glucosa y otras sustancias libera mucha ms energa que su utilizacin anaerobia por ejemplo, la fermentacin, los seres aerobios pronto se convirtieron en los organismos dominantes en la Tierra. El antepasado comn de los organismos eucariontes (con clulas nucleadas) adquiri la capacidad de realizar el metabolismo aerobio integrando a una bacteria aerobia como orgnulo permanente, la mitocondria (teora de la endosimbiosis). Aerobiosis, es un proceso conocido como respiracin celular, usa el oxgeno para oxidacin del sustrato (por ejemplo azcares y grasas para obtener energa). Un buen ejemplo podra ser la oxidacin de la glucosa (un monosacrido) en la respiracin aerbica. C6H12O6 + 6 O2 -> 6 CO2 + 6 H2O + 38 ATP

Dando alrededor de 2.880 kJmol-1. El oxgeno es usado durante la oxidacin de la glucosa y produce agua.

Cmo se realiza la respiracin Aerobia? La respiracin aerobia es la que utiliza oxgeno para extraer energa de la glucosa. Se efecta en el interior de las clulas, en los organelos llamados mitocondrias. El siguiente es el proceso:

Durante el proceso respiratorio, parte de la energa contenida en la glucosa pasa a las molculas de ATP. Con esta energa se alimentan, excretan los desechos, se reproducen y realizan todas las funciones que les permiten vivir. Tanto el dixido de carbono como el agua salen de la clula y del cuerpo del ser vivo (Si se trata de un organismo pluricelular) por que constituyen sustancias de desecho. La energa puede utilizarse de inmediato o almacenarse para su uso posterior.

Las bacterias no tienen mitocondrias, por lo cual la respiracin se efecta en su citoplasma. En el resto de los organismos pertenecientes a los 4 reinos (Protistas, hongos, plantas y animales) si existen estos organelos. Algunas clulas tienen ms mitocondrias que otras; por ejemplo, las neuronas, las clulas musculares y los espermatozoides requieren de altas cantidades de energa y por ello tienen numerosas mitocondrias. La respiracin anaerobia consiste en que la clula obtiene energa de una sustancia sin utilizar oxgeno; al hacerlo, divide esa sustancia en otras; a la respiracin anaerobia tambin se le llama fermentacin. Probablemente la respiracin anaerobia ms conocida sea la de las lavaduras de la cerveza (Saccharomyces cerevisiae), que son hongos unicelulares. Para elaborar la cerveza se utilizan semillas de cebada, las cuales contienen glucosa, sustancia de la cual las levaduras obtienen la energa. Las semillas de cebada se combinan con agua y la flor de una planta llamada lpulo, que le da sabor a esta bebida. Los ingredientes se mezclan y luego se filtran. El lquido resultante, que contiene la glucosa, se deposita en barriles de madera, junto con las levaduras y se deja reposar varios meses o aos; durante ste tiempo, las levaduras utilizan la glucosa para obtener energa y la transforman en un tipo de alcohol llamado etanol. 2. Bacterias anaerobias: estas, en cambio, no utilizan oxgeno, sino que deben

sustituirlo por molculas inorgnicas como las del sulfato o carbonato. La respiracin anaerobia consiste en que la clula obtiene energa de una sustancia sin utilizar oxgeno; al hacerlo, divide esa sustancia en otras; a la respiracin anaerobia tambin se le llama fermentacin. Probablemente la respiracin anaerobia ms conocida sea la de las lavaduras de la cerveza (Saccharomyces cerevisiae), que son hongos unicelulares. Para elaborar la cerveza se utilizan semillas de cebada, las cuales contienen glucosa, sustancia de la cual las levaduras obtienen la energa. Las semillas de cebada se combinan con agua y la flor de una planta llamada lpulo, que le da sabor a esta bebida. Los ingredientes se mezclan y luego se filtran.

El lquido resultante, que contiene la glucosa, se deposita en barriles de madera, junto con las levaduras y se deja reposar varios meses o aos; durante ste tiempo, las levaduras utilizan la glucosa para obtener energa y la transforman en un tipo de alcohol llamado etanol. Supongamos que una levadura toma una molcula de glucosa Qu hace con ella?

1.

Segn sus necesidades de crecimiento: Bacterias auttrofas: estas bacterias tienen la capacidad de sintetizar las sustancias

que necesitan para su metabolismo de sustancias inorgnicas. Dentro de este tipo se encuentran las fotosintetizantes que, gracias a los pigmentos que las componen, se valen de la energa de las radiaciones luminosas. Tambin existen las quimiosintetizantes que utilizan la energa generada a partir de las reacciones qumicas generadas por la oxidacin. El metabolismo en las clulas fotoauttrofas se puede resumir en los siguientes pasos: 1. Las clulas fotoauttrofas pueden transformar la energa luminosa en energa qumica (ATP). Este proceso del anabolismo tiene lugar en el cloroplasto. La energa obtenida la utilizan para sintetizar materia orgnica a partir de sustancias inorgnicas (agua, dixido de carbono y sales minerales). Este proceso se denomina fotosntesis. 2. Parte de la materia orgnica obtenida es utilizada en las mitocondrias, donde se produce el catabolismo. Mediante la respiracin celular esta materia orgnica es oxidada, obtenindose energa y sustancias inorgnicas. 3. Como resultado del catabolismo se produce dixido de carbono, que es expulsado. 4. Con la energa y las molculas sencillas se sintetizan grandes molculas orgnicas (anabolismo). 1. Bacterias auttrofas: La energa obtenida la utilizan para sintetizar materia orgnica a partir de sustancias inorgnicas (agua, dixido de carbono y sales minerales).

2. Bacterias hetertrofas: este tipo de bacterias parasitan a los seres vivos y usan los

compuestos orgnicos que estos elaboran. Dentro de este grupo existen las bacterias patgenas o parasitarias y son las causantes de enfermedades en los seres vivos. Tambin estn aquellas bacterias de la putrefaccin o saprfitas que descomponen las sustancias orgnicas en las que viven y se valen de su materia orgnica muerta para poder alimentarse. 3. Otro tipo de bacterias son las simbiticas, que viven en cooperacin con otros organismos. Por ltimo estn aquellas que realizan fermentaciones, de las que se vale el humano, como el cido actico, fermentos lcticos, entre otros. Por su tipo de metabolismo, las bacterias se clasifican en tres grupos principales:

1. Segn la fuente del carbono, las bacterias se pueden clasificar como: Hetertrofas, cuando usan compuestos orgnicos. Auttrofas, cuando el carbono celular se obtiene mediante la fijacin del dixido de carbono. Las bacterias auttrofas tpicas son las cianobacterias fotosintticas, las bacterias verdes del azufre y algunas bacterias prpura. 2. Segn la fuente de energa, las bacterias pueden ser. Fototrofas o fotosintticas, es decir, que emplean la luz a travs de la fotosntesis. Quimiotrofas o quimiosintticas, es decir, que obtienen energa a partir de de electrones alternativos (respiracin aerobia o anaerobia).

sustancias qumicas que son oxidadas principalmente a expensas del oxgeno o de otros receptores

3. Segn los donadores de electrones. Un criterio adicional para clasificar a los microorganismos que respiran es el receptor de electrones usado en la respiracin. En los organismos aerobios, el oxgeno se utiliza como receptor de electrones. En los organismos anaerobios se utilizan como receptores de electrones otros compuestos inorgnicos tales como nitratos, sulfatos o dixido de carbono.

Las 5 bacterias que ms se estn fortaleciendo a raz de nuestras ingestiones irresponsables de antibiticos y que se prodigan cada vez ms en nuestro ambiente, sobre todo en hospitales, son las siguientes: 1) La Streptococcus pneumoniae, que es una de las causantes de la sinusitis, la otitis y la neumona. A veces provoca enfermedades ms graves, como la septicemia o la meningitis. Resiste los antibiticos que se acostumbran a usar para tratarlas: penicilina y macrlidos. 2) La Enterococcus sp, forma parte de la flora intestinal y puede originar infecciones en el tracto urinario y, adems, endocarditis, peritonitis y abscesos intraabdominales. 3) La Escherichia coli, que es la primera causante de infecciones del tracto urinario y de la septicemia. Las formas resistentes a los antibiticos tipo penicilina, cefalosporina y aminoglicosida son cada vez ms habituales. 4) La Klebsiella pneumoniae, que coloniza la piel, el tracto gastrointestinal y las vas respiratorias de los pacientes hospitalizados. Est asociada a infecciones urinarias y respiratorias en pacientes con las defensas bajas. 5) La Pseudomonas aeruginosa, que provoca infecciones nosocomiales y complicaciones bacterianas en pacientes con fibrosis qustica. Caractersticas de las bacterias. Son microorganismos unicelulares, de forma diferente y hbitat variable. Algunas son capaces de formarse una envoltura o cpsula. Todas se multiplican por divisin. Algunas bacterias son capaces de formar endoporos ms resistentes a las formas El oxigeno es indispensable para las bacterias aerbicas y resulta nocivo para las

adversas de vida. anaerbicas que lo toman de compuestos oxigenados. Las bacterias son capaces de generar mutantes.

La mayora de las bacterias poseen una pared que les confiere su tamao y forma Carecen de una estructura nuclear definida. Las envolturas bacterianas son muy importantes y complejas. Estn contenidas en una Pared Celular. Poseen ambos tipos de cidos nucleicos (ADN y ARN). Se multiplican por fisin binaria (tipo de reproduccin asexual, donde la replicacin Pueden ser: Aerobias o Anaerobias, Mviles o Inmviles, y Patgenas.

es lineal, comenzando en un extremo de la cadena de ADN y terminando en el otro.

Control de crecimiento de las bacterias.Fundamentos del control de los microorganismos.Los materiales alimenticios cuya composicin es utilizada por el hombre con fines nutritivos, son tambin utilizados para los mismos fines por los microorganismos. La intervencin microbiana sobre los diversos alimentos trae como consecuencia modificaciones en la calidad, que se conoce como deterioro, ocasionando prdidas econmicas muy importantes. La supervivencia y el crecimiento microbiano pueden potenciar la presencia de algunos microorganismos que afectan la inocuidad de los alimentos, trayendo consigo enfermedades de origen alimentario, como son las infecciones y las intoxicaciones de origen microbiano. Estas circunstancias han conducido a desarrollar una serie de tecnologas que buscan prevenirlos procesos de deterioro y la ocurrencia de las enfermedades microbianas transmitidas por los alimentos. La mayor parte de los procesos tecnolgicos utilizados en la industria alimentaria se basan en fundamentos fsicos, qumicos y biolgicos que permiten un control del crecimiento microbiano. El conocimiento de los reservorios naturales, de su sistema ecolgico y de las tcnicas que permitan su identificacin y cuantificacin son temas que complementan tales tecnologas y coadyuvan al mejor entendimiento de herramientas como la limpieza y desinfeccin en plantas industriales, la aplicacin de buenas prcticas de manipulacin de alimentos (BPMA) y la implementacin del sistema de anlisis de peligros y puntos crticos de control (APPCC), la cual es un proceso sistemtico preventivo para garantizar la seguridad alimentaria, de forma lgica y objetiva.

Las razones principales para controlar los microorganismos son: Prevenir la transmisin de la infeccin y la enfermedad. Prevenir la contaminacin o la proliferacin de microorganismos perjudiciales. Prevenir el deterioro o destruccin de materiales por los microorganismos. Controlar las algas en las piscinas recreacionales y en los sistemas acuticos de refrigeracin. Los microorganismos se eliminan, inhiben o matan por medio de: Agentes fsicos. Procedimientos fsicos. Agentes qumicos.

Factores fsicos que controlan el crecimiento microbiano. Altas Temperaturas: Esterilizacin por calor hmedo: Autoclave. Tindalizacin o esterilizacin Pasteurizacin. Hervir. Esterilizacin por calor seco: Horno. Incineracin. Esterilizacin por calor hmedo: Autoclave: El calor en forma de vapor a saturacin y a presin proporciona temperaturas superiores a las que se obtienen por ebullicin. El aparato utilizado se llama autoclave (una olla que regula la presin interna y el tiempo). Los autoclaves de laboratorio: Presin de vapor de una atmsfera por encima de la presin atmosfrica lo cual corresponde a una temperatura de 121C. El tiempo de exposicin depende del volumen del lquido, de tal manera que para volmenes

pequeos (hasta unos 3 litros) se utilizan 15 a 20 minutos a 121 C; si los volmenes son mayores debe alargarse el tiempo de tratamiento. Usualmente 15 minutos a 121C. La Tindalizacin o esterilizacin: comienza cuando se ha alcanzado la temperatura ptima en el interior del aparato (autoclave o estufa). Segn el contenido, una autoclave puede requerir tiempos ms largos para alcanzar la temperatura de esterilizacin. Pasteurizacin: Es un proceso que reduce la poblacin microbiana de un lquido. La leche, y ciertas bebidas alcohlicas (cerveza y vino), los jugos, se someten a tratamientos de calor controlado que slo matan a ciertos tipos de microorganismos pero no a todos; 62.8 grados centgrados. Esterilizacin por calor seco: Horno: La esterilizacin seca se logra a 160-170 C por 2-3 hrs. El calor seco se utiliza principalmente para esterilizar material de vidrio y otros materiales slidos estables al calor. Para el material de vidrio de laboratorio se consideran suficientes dos horas de exposicin a 160 C. Incineracin: La destruccin de los microorganismos por combustin. En los laboratorios, las asas de siembra se calientan a la llama de mecheros Bunsen. La incineracin tambin se utiliza en la eliminacin de residuos hospitalarios. Radiaciones: Rayos ionizantes: Rayos no ionizantes Rayos ionizantes: Rayos gamma: Las radiaciones gamma tienen mucha energa y son emitidas por ciertos istopos radiactivos como es el Co60. Son difciles de controlar porque este istopo emite constantemente los rayos en todas direcciones. Estos rayos pueden penetrar materiales, por lo que un producto se puede empaquetar primero y despus esterilizar.

Rayos catdicos: Radiacin con haz de electrones. Se usan para esterilizar material quirrgico, medicamentos y otros materiales. Su ventaja es que el material se puede esterilizar despus de empacado (ya que stas radiaciones penetran las envolturas) y a la temperatura ambiente.

Rayos no ionizantes: La luz ultravioleta- Lmparas germicidas: Son muy utilizadas para reducir la poblacin bacteriana de los hospitales , salas de envasado asptico de la industria farmacutica y en la industria lechera para el tratamiento de superficies contaminadas

La luz UV es absorbida por muchos componentes celulares pero de manera ms significativa por los cidos nucledos, a los que causa el mayor dao, predominantemente en las pirimidinas. A menos que los dmeros de pirimidinas sean separados por enzimas intracelulares especificas, se inhibe la replicacin de ADN y se presentan mutaciones.

Se usan para reducir la poblacin microbiana en: Quirfanos. Cuartos de llenado aspticos en la industria farmacutica. Superficies contaminadas en la industria de alimentos y leche. Bodegas de carne refrigeradas.

Filtros: Desecacin: La desecacin de las clulas vegetativas microbianas paraliza su actividad metablica. Este proceso se utilizaba ampliamente antes del desarrollo de la refrigeracin. Desecador: El tiempo de supervivencia de los microorganismos despus de desecados depende de muchos factores, entre ellos la especie microbiana. En general, los cocos Gram (-) son ms susceptibles a la desecacin que los cocos

Gram (+). Las endoesporas bacterianas son muy resistentes a la desecacin pudiendo permanecer viables indefinidamente. Presin osmtica: La pared celular de las bacterias las protege de cambios en la presin osmtica del medio. Pero si la presin osmtica externa es alta el organismo puede morir. Altas concentraciones de sal interrumpen los procesos de transporte a travs de la membrana y desnaturalizan las protenas.

Factores qumicos para el control de microorganismos.Dentro de los compuestos qumicos podemos encontrar agentes: Esterilizante. Aparato, solucin, que esteriliza instrumentales, equipos, materiales, objetos, etc. eliminando microorganismos y grmenes patgenos. Los Desinfectantes: Son preparaciones con propiedades germicidas y bactericidas, que eliminan microorganismos patgenos. Entre los principales activos: El fenol, cresol, etc. Antisptico: Son sustancias antimicrobianas que se aplican a un tejido vivo o sobre la piel para reducir la posibilidad de infeccin, sepsis o putrefaccin. Sustancia antisptica sobre una herida (Yodo). La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las que actan: Concentracin: Vara con el tipo de agente y de microorganismo: una misma concentracin del agente puede producir un efecto diferente en distintos microorganismos. Tiempo: Los microorganismos no son susceptibles a un agente en la misma forma, por lo que no todos los microorganismos mueren al mismo tiempo. pH: Afecta tanto a los microorganismos como a los agentes qumicos. El aumento de pH por encima de 7 incrementa la carga negativa de los microorganismos afectando la concentracin del agente sobre la clula. El pH determina el grado de

disociacin y la efectividad del agente qumico, pues a menor disociacin mayor permeabilidad y mayor efectividad. El desinfectante ideal. Actividad antimicrobiana a baja concentracin. Solubilidad. Estabilidad. No ser txico para personas y animales. Homogeneidad. No combinarse con materia orgnica extraa. Actividad a temperatura ambiente o del cuerpo. Capacidad de penetracin. No ser corrosivo ni teir. Poder desodorante. Capacidad detergente. Disponible y barato. Cultivo.Es un mtodo para la multiplicacin de microorganismos, tales como bacterias, hongos y parsitos, en el que se prepara un medio ptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado como un mtodo fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos que causan enfermedades en medicina humana y veterinaria. Medios De Cultivo.Es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado (es decir, se le aaden organismos) y a continuacin incubado en condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano. Caractersticas.-

Muchas especies bacterianas son tan parecidas morfolgicamente que es imposible diferenciarlas slo con el uso del microscopio. En este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus caractersticas bioqumicas sembrndolas en medios de cultivo especiales. As, algunos medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayora de las especies bacterianas, pero no la del tipo que se los paleontlogos comen ciertas especias diversas, estas utilizadas en el cultivo de dicho objeto desea averiguar si est presente. Otras veces, el medio de cultivo contiene determinados azcares especiales que slo pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se aaden indicadores de pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y se generan catabolitos cidos. Si las bacterias son capaces de producir fermentacin, generan gases que pueden ser detectados cuando el cultivo se realiza en un tubo cerrado. Con otros medios de cultivo se puede identificar si las bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes. As, algunas bacterias con enzimas hemolticas (capaces de romper los glbulos rojos) producen hemlisis y cambios apreciables macroscpicamente en las placas de agar-sangre. Los diferentes medios y tcnicas de cultivo son esenciales en un laboratorio de microbiologa de un hospital, pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibiticos a los que son sensibles esas bacterias. Los cultivos suelen usarse en medicina para determinar la presencia de agentes patgenos en fluidos corporales (como por ejemplo la sangre o la orina). Requerimientos.Los medios de cultivo, para poder ser utilizados y garantizar que los resultados obtenidos a partir de ellos sean confiables, deben cumplir con los siguientes requisitos:

 Fuente de energa.- Las bacterias pueden ser fottrofas o quimiottrofas. Las fotottrofas absorben energa del sol y las quimiottrofas de compuestos orgnicos. Fuente de carbono. Fuente de nitrgeno.- Las bacterias pueden obtener el nitrgeno atmosfrico a travs de las protenas o por la degradacin de aminocidos o pptidos. Azufre y fosfatos.- La obtienen como elemento (S), y como fosfatos en sales (P). Vitaminas. Agua.- Medio de transporte que permite una mejor absorcin de los nutrimentos. Tambin requiere de los requerimientos nutricionales ptimos para su desarrollo: Protenas.- Se suministran generalmente peptonas, que se encuentran disponibles en el comercio, preparadas por digestin parcial de carne con enzimas peptdicas; consisten en polipptidos, dipptidos y aminocidos. Carbohidratos.- Sumistran carbono para la sntesis, y adems su fermentacin libera energa utilizable en el metabolismo. Factores accesorios de crecimiento.- Son tambin requerimientos por algunas bacterias. Entre ellos estn las vitaminas del complejo B; estas suministran enzimas necesarias para que las bacterias que son incapaces de sintetizar otros factores necesarios para algunas bacterias son obtenidos de los nutrimentos ms complejos. Sales minerales.- Elementos como K, Ca, Na, etc.; tambin son requeridas por algunas bacterias en su desarrollo. Atmsfera.- Algunos microorganismos precisan oxgeno para su desarrollo, otros son incapaces de reproducirse en presencia de este elemento, en cambio otros organismos pueden crecer en una atmsfera con oxgeno, logran sobrevivir y crecer sin l, se les llama anaerobios facultativos. Presin osmtica.- Las clulas pueden encogerse y ser destruidas en soluciones hipertnicas; inversamente se rompen por entrada de agua, en las soluciones hipotnicas. Temperatura.- La temperatura para la cual los organismos microbianos crecen mejor, es considerada como temperatura ptima.

 Luz.- La mayora de las bacterias se desarrollan mejor en ausencia de luz. La luz ultravioleta puede ser letal. Reaccin.- La mayora de las bacterias crece en un medio ligeramente alcalino (pH 7.2 a 7.6). Los hongos crecen con facilidad en los medios cidos (pH 5). Almacenamiento y Conservacin De Los Medios De Cultivo.Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados bajo las condiciones que seale el fabricante. Generalmente se almacenan en un lugar fresco (entre 15 y 25C), con poca humedad y protegidos de la luz solar directa. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente de calor o vapor. Los medios de cultivo deshidratados son higroscpicos. Cuando los envases de estos medios de cultivo deshidratados son abiertos para su uso inicial, se debe tener la precaucin de cerrarlos tan pronto como sea posible y mantenerlos bien cerrados para prevenir la entrada de humedad. La absorcin de agua produce cambios de pH, formacin de grumos, decoloraciones del polvo, etc., lo cual indica que deben ser descartados porque pueden haber sufrido cambios qumicos o estar contaminados. Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado, puede almacenarse a temperatura ambiente por un periodo mximo de 2 semanas protegido de la luz, o por periodos mayores a 12 -15C. Sin embargo, almacenados bajo refrigeracin entre 2 y 8C se prolonga la vida til de los mismos, (nunca por debajo de 0C porque se destruye la estructura del gel). Los medios de cultivo se deben mantener en recipientes bien cerrados para evitar su deshidratacin y cuando se usa tapn de algodn, se debe colocar por encima una envoltura de papel (Craft). Otro punto importante a tomar en cuenta, es que cada lote de medio de cultivo preparado debe pasar por un riguroso proceso de control de calidad, en donde se determinan sus propiedades fisicoqumicas (apariencia, pH, etc.) y microbiolgicas (esterilidad y promocin de crecimiento) verificando que cumplan con los requisitos de calidad establecidos y por ende demostrar que son aptos para su uso. Clasificacin de los medios de cultivo.De acuerdo a su finalidad, los medios de cultivo pueden clasificarse en:

 Definidos: Es aqul medio de cultivo del cual se conoce su composicin exacta. Son muy utilizados en estudios fisiolgicos. Los medios mnimos son medios definidos que nicamente le proporcionan al microorganismo los nutrientes necesarios para crecer, pero no para desarrollarse ptimamente. Complejos: Es aqul del cual no se conoce la composicin exacta del medio. A menudo, los medios complejos emplean sangre, leche, extracto de levaduras, extracto de carne u otras sustancias muy nutritivas pero de las cuales se desconoce la composicin qumica exacta. Estos medios son muy utilizados para cultivar bacterias desconocidas o bacterias de requerimientos nutricionales muy complejos. De acuerdo a su funcin, los medios de cultivo se clasifican como: 1. Medios selectivos: Son aqullos que poseen uno o ms componentes aadidos, los cuales inhibirn o prevendrn el crecimiento de ciertos tipos de especies de bacterias y/o promovern el crecimiento de las especies deseadas. Uno puede ajustar las condiciones fsicas de un medio de cultivo tales como el pH, la temperatura, para hacerlo selectivo para los organismos de inters. 2. Medios diferenciales: Permiten al investigador distinguir entre diferentes tipos de bacterias con base en alguna caracterstica observable en su patrn de crecimiento en el medio, ya sea por produccin de algn pigmento o por cambios de color en el medio debido a indicadores de pH, o por halos de degradacin de algn componente en el medio de cultivo. 3. Medios de enriquecimiento: Contienen algn componente que permite el crecimiento de cierto tipo especfico de bacteria, pero no contienen sustancias inhibidoras. 4. Medios enriquecidos: Se emplean para cultivar microorganismos que requieren un gran nmero de factores de crecimiento. Generalmente contienen extractos biolgicos poco usuales como sangre, suero en polvo, extracto de cerebro de res, yema de huevo, etc. Formas y Mtodos De Cultivo. Mtodo de placas.- El propsito de usar medios slidos pulverizados en cajas petris,

consiste en inocular cantidades sucesivas menores de material en el medio, de manera

que en algn tiempo sean colocados en una capa tan delgada que les permita el crecimiento de colonias individuales aisladas. Medios inclinados.- Este tipo de cultivo es empleado principalmente para resembrar

cepas aisladas, sea para identificacin interior o para base cultivo. Cultivos por agitacin.- Este medio de cultivo es empleado particularmente en el

aislamiento de anaerobios esporulado. Se calienta un tubo o botella a 50C y luego se deja enfriar. Cultivos por picadura.- En este mtodo el material de laboratorio es colocado en un

alambre recto e introducido al medio. El mtodo puede ser tambin empleado para conservar los cultivos patrn. Cultivos lquidos.- Al inocular en un medio lquido como el agua con peptona o el

caldo con tioglicolato, el tubo se inclina y el material se extrae del asa por frotamiento contra la pared del tubo. Diferentes Medios De Cultivos.1. Medios de cultivo para cualquier tipo de bacteria. Finalidad. Agente solidificante en medios de cultivo

Medios de Cultivos. Agar- Agar

bacteriolgicos y en otras aplicaciones (cultivo de tejido, difusin inmunolgica, estudios nutricionales, etc.).

Peptona de Carne

Se obtiene a partir de una digestin enzimtica de tejido animal. Es utilizada para trabajos generales en bacteriologa y como fuente de nitrgeno para una gran

Peptona Bacteriolgica Bilis de Buey

diversidad de organismos Est indicada como fuente de nitrgeno en el cultivo de microorganismos sin exigencias especiales. Polvo de color amarillo verdoso utilizado para estimular el crecimiento de bacterias del grupo tifus/paratifus/enteritidis e inhibir el de la flora grampositiva, con excepcin de los Enterococos. Ingrediente para trabajos generales en bacteriologa y

Extracto de Levadura

como base nutritiva en los medios de cultivo para el crecimiento de diversos microorganismos. es rico en vitaminas del grupo B aminocidos y otros factores de crecimiento Se emplea para favorecer y conservar la viabilidad de los microorganismos laboratorio. mientras son transportados al Se trata de un medio no nutritivo,

Transporte Amies sin Carbn, Medio

semislido y reductor que previene la destruccin de los grmenes y los mantiene en Estado estacionario. Su composicin salina permite conservar la muestra hasta su Bordet Gengou, Base de Agar WL, Agar Diferencial entrega al laboratorio. Se emplea para la identificacin y aislamiento El medio con glicerina y sangre est indicado para el crecimiento de Bordetella pertussis y Bordetella parapertussis. Medio de cultivo diferencial de bacterias en la industria cervecera y otras industrias de fermentacin. 1. Medios de cultivo para bacterias en especfico. Medios de Cultivos. Sangre Azida, Base de Agar Bilis-Rojo NeutroVioleta Cristal con Glucosa (VRBG), Agar (Ph.Eur.) Sulfito Bismuto, Agar Se emplea como medio altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella typhi y de otras Salmonellas Base de Agar (UNE-EN 12780:2003) Desoxicolato, Agar en gran diversidad de muestras muy contaminadas. Medio selectivo para el recuento de Pseudomonas aeruginosa segn UNE-EN 12780:2003 de aguas. Se emplea para el aislamiento de bacilos entricos GramFinalidad. Se emplea para el aislamiento de Streptococcus y Staphylococcus en muestras de distintos orgenes. Se emplea para el recuento de Enterobacterias en productos lcteos, crnicos y otros alimentos.

Preparacin de algunos medios de cultivos.1. Transporte Amies sin Carbn, Medio. Frmula (por litro). Composicin (g/l): Calcio Cloruro..................................................... 0,1. Magnesio Cloruro................................................ 0,1. Potasio Cloruro.................................................... 0,2. Potasio di-Hidrgeno Fosfato............................... 0,2. Sodio Cloruro........................................................ 3,0. Di-Sodio Hidrgeno Fosfato.................................. 1,1. Sodio Tioglicolato................................................ 1,0. Agar................................................................... 7,5. pH: 7,30,2 Preparacin: Disolver 13,2 g en 1 l de agua destilada. Distribuir en tubos o viales con tapn de rosca llenndolos casi por completo y esterilizar en autoclave (121C de 10-15 minutos). Dejar enfriar y solidificar en posicin vertical. Reapretar los tapones, si fuese necesario, cuando el medio este fro.

Modo de empleo: La recogida del material se hace con un hisopo de algodn esterilizado. Este hisopo se introduce en el tubo que contiene el medio de transporte, se cierra hermticamente y se conserva en fro hasta su transporte. 2. Bilis-Rojo Neutro-Violeta Cristal con Lactosa (VRBL), Agar (ISO 4832) Frmula (por litro) Sales Biliares n3..........................................1,5 Violeta Cristal...........................................0,002 Rojo Neutro................................................ 0,03 Lactosa........................................................10,0 Extracto de Levadura.................................... 3,0 Peptona de Gelatina..................................... 7,0 Sodio Cloruro................................................. 5,0 Agar..............................................................15,0 pH: 7,40,2 Preparacin: Suspender 41,5 g en 1 l de agua destilada; calentar y agitar hasta ebullicin y hervir durante 1 minuto. Se puede esterilizar con cuidado (30 minutos vapor fluente, 118C durante 15 min, por ejemplo). NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Modo de empleo: Transferir 1 ml de la muestra a analizar y/o 1 ml de sus sucesivas diluciones a tantas placas como correspondan. Con el medio enfriado a una temperatura entre 44 y 47C, aadir a cada placa 15 ml del medio lquido. Homogeneizar girando lateralmente las placas en un sentido y otro. Dejar enfriar hasta solidificacin. Aadir a cada placa 10 ml ms del medio lquido y volver a dejar solidificar. Incubar entre 30 y 37C durante 24 horas para el recuento de Coliformes. 3. Giolitti-Cantoni, Caldo Frmula (por litro). Extracto de Carne................................................ 5,0 Extracto de Levadura............................................5,0 Glicina................................................................ 1,2

Litio Cloruro.........................................................5,0 D(-)-Manita....................................................... 20,0 Sodio Cloruro......................................................5,0 Sodio Piruvato..................................................... 3,0 Triptona.............................................................10,0 pH: 6,90,2 Preparacin: Suspender 54,2 g en 1 l de agua destilada; calentar suavemente y agitar hasta disolucin total. Distribuir en tubos de ensayo con 19 ml de caldo y esterilizar a 121C durante 15 minutos. Aadir a cada tubo 0,3 ml de Potasio Telurito al 3,5% (0,03 ml cuando se analice carne o productos crnicos) antes de usarlo. El medio no se puede conservar completado; si no se utiliza de inmediato conservar en nevera sin el Potasio Telurito no ms de 10-15 das. Modo de empleo: Sembrar el material en estudio (habitualmente 1 g para lcteos y 0,1 g en crnicos) y sellar los tubos con aceite de vaselina estril. Incubar anaerbicamente a 37C durante 48 horas. Si no se produce ennegrecimiento del medio, el ensayo se considera negativo; en caso contrario, ser necesaria la confirmacin mediante resiembra en BairdParker, Vogel-Johnson o cualquier otro medio selectivo de Estafilococos. El ennegrecimiento o precipitado negro se deben a la reduccin del telurito a teluro metlico. Tipo de Pruebas o Ensayos Bioqumicos.Las pruebas o ensayos bioqumicos, son pruebas simples que se han desarrollado para demostrar en forma clara una determinada caracterstica bioqumica como presencia o ausencia de una determinada actividad enzimtica, grupo de enzima o determinada va metablica, crecimiento a una determinada temperatura, crecimiento en presencia de inhibidores, entre otros. No significan de ninguna manera un estudio profundo del metabolismo bacteriano. Entre estas tenemos:

Catalasa. Oxidasa.

 Rojo de metilo. KOH. Extraccin de pigmentos con cloroformos. Tincin de Gram. Crecimiento en citrato de Simmons. Hidrolisis de la gelatina. Crecimiento a 45C. Crecimiento a 50C. Crecimiento a 65C. Crecimiento en agar de hierro triple azcar. Tincin de Gram.Es la tincin diferencial ms til en un laboratorio de microbiologa para identificar a una bacteria. Dependiendo del resultado de la tincin las bacterias se dividen en dos grupos: Gram positivas (color purpura) y Gram negativas (color rojo). Las distincin entre estos dos grupos se basa en la diferencias de composicin qumica que presentan sus paredes celulares y en la presencia de las membranas externas (La Gram positivas carecen de membranas externas). Crecimiento en citrato de Simmons, agar.Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como nica fuente de nitrgeno en su metabolismo, provocando una alcalinizacin del medio. Entre las eterobacterias estas caractersticas se dan en los siguientes gneros: Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Citrobacter, y algunas especies de Salmenella. Sin embargo, Escherichia, Shigella, Salmonella typhiparatyphi son incapaces de crecer con esos nutrientes. Solo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrn multiplicarse en este medio y liberaran iones amonio lo que junto con la eliminacin del citrato (acido), genera una fuerte basificacin del medio que ser aparente por un cambio de color del indicador de pH, de verde a azul. Prueba de oxidasa.-

Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reaccin de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidacin del citocromo que es reducido por el oxgeno molecular que produce agua o perxido de hidrogeno segn la especie bacteriana. El oxgeno acta por tanto como aceptor final de electrones en la cadena transportadora de electrones. Por lo general, el sistema citocromooxidasa solo se encuentra en los organismos aerbicos, algunos aerobios facultativos y excepcionalmente, en algn microaerofilo Vidrio fetus), pero los anaerobios estrictos carecen de actividad oxidasa. As mismo, degrada el perxido de hidrogeno que se produce como consecuencia de la reduccin del oxgeno y cuya acumulacin es toxica. Prueba de KOH.Con la prueba de KOH (hidrxido de portasio) basada en la reaccin diferencial rpidamente las bacterias darn su resultado, si son Gram positiva y Gram negativa. La formacin de un hilo lechoso indica que la bacteria es Gram negativa, si el hilo no se forma el indicador es Gram positiva. Rojo de Metilo.Esta prueba forma parte del IMVIC de las colimetrias y permite la diferenciacin dentro de la enterobacterias del grupo coli y aeregenes. Las enterobacterias son anaerobios facultativos que utiliza la glucosa en dos fase: primero la metabolizacin aerbicamente (respiracin oxibiontica) consumiendo rpidamente el oxgeno del medio, para en segundo lugar, continuar metabolizando por va anaerbica (fermentacin). Importancias de los ensayos o pruebas bioqumicas.Lograr la identificacin de la cepas que son consideradas actas para la fabricacin de medicina (antibiticos), utilizando los diferentes reactivos, indicadores y reveladores qumicos, con el fin de conocer las caractersticas, condiciones, virulencias y reacciones del organismo o especie en particular que afecta la naturaleza, de esta manera poder controlar enfermedades, eliminando inhibiendo su reproduccin para evitar que se pierdan vidas por causas de estos microorganismos.