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CROMATOGRAFIA CIRCULAR EN PAPEL DEEXTRACTO DE COLORANTES VEGETALES
Antonio Quirante Candelaquiran@yahoo.es
A)Introducción
El objetivo de esta actividad es describir un procedimiento sencillo de separación cromatográfica en papelde filtro y posterior detección de extractos o muestras vegetales combinando una separación cromatográficasimple y efectiva con el tratamiento de la imagen digital del cromatograma y posterior detección cuantitativade la misma con ayuda de una fotorresistencia
B) Preparación de la muestra
Se trituran 2-3 gramos de material vegetal a estudiar (jugos o cortezas de frutos, pétalos de flores, etc.) enel fondo de un vaso de 100 cc. al que se añaden 5 cc. de alcohol y 3 gotas de ácido clorhídrico diluído. Sedeja reposar media hora y se separa la parte sólida filtrando el líquido si fuera preciso.
C) Realización de cromatografía circular.
Con el extracto líquido anteriormente preparado se marca en el centro de un trozo cuadrado de papel defiltro de 8 x 8 cm. aproximadamente una una mancha circular de muestra de pequeñas dimensiones.Repitiendo la operación después de evaporado el disolvente puede conseguirse una mancha suficientementeconcentrada de pequeñas dimensiones.Se coloca el papel de filtro sobre un vidrio de reloj, haciendo coincidir la mancha con la vertical delcentro del mismo. El centro de la mancha se atraviesa con un hilo de coser que proporciona un contactoentre la mancha y el fondo del vidrio de reloj. Una vez montado este dispositivo se vierte una pequeñacantidad de líquido eluyente en el fondo del vidrio de reloj y se deja fluir por capilaridad el líquido eluyentedesde el fondo del vidrio al centro de la mancha y dispersarse después circularmente por el papel de filtroobteniéndose el correspondiente cromatograma circular tal como se muestra en la siguiente figuraFigura 1.- Esquema del dispositivo para la obtención de un cromatograma circular. A) líquido eluyente; B) papel de filtro; C) mancha; D) cromatograma obtenidoLa siguiente figura corresponde al desarrollo de un cromatograma circular obtenido con una muestra de
 
extracto alcohólico de pétalos de flores desarrollada con una mezcla alcohol-agua-HClFigura 2.- Ejemplo de cromatograma circular : A) frente de eluyente. 1,2 y 3: especies separadas
D) Revelado y tratamiento de la imagen cromatográfica
En algunos casos la coloración de algunos componentes es observable directamente por la coloración que presentan en el espectro visible. En otros hay que recurrir a algún procedimiento de revelado más o menosselectivo que permite la visualización de los componentes separados. Muchas sustacias vegetales absorben enel espectro UV y, en algunos casos, muestran fluorescencia en el visible por lo que la mera exposición a unafuente de luz UV ( de la zona próxima al visible) hace visible la existencia de bandas no observadasdirectamente.En otros casos cambios ácido-base pueden alterar o hacer aparecer coloraciones en el cromatograma o enla fluorescewncia observada, lo que aumenrta la efectividad de la cromatografía. En el caso de losflavonoides la respuesta a la luz UV y sus cambios con el pH se utilizan de forma rutinaria en laclasificación estructural de los mismos.La siguiente figura muestra las imágenes de un cromatograma circular de una muestra de extractoalcohólico de pétalos de corrihuela en distintas condiciones de observación
 
E) Medidas cuantitativas sobre el cromatograma
Para la estimación cuantitativa del color o del grado de absorción de la luz en el caso de reacciones en papelde filtro realizamos las siguientes operaciones sobre la imagen digital1) Sobre la imagen trasladada a entorno Paintseleccionamos y copiamos un rectángulo quecomprenda una banda rectangular desde el centro alextremo del cromatograma
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