3 PRAKTEK LABORATORIUM 3.

1 CONTAINMENT Mengelola agen infeksius di lingkungan laboratorium dengan aman, di mana mereka sedang ditangani dan dipelihara disebut sebagai penahanan. Tujuan penahanan adalah untuk meminimalkan atau menghilangkan risiko setelah paparan berbagai agen kepada pekerja laboratorium, atau orang lain. The "containment" istilah yang digunakan untuk menggambarkan hambatan primer dan sekunder untuk mengelola bahan berbahaya di lingkungan laboratorium. Ketiga unsur penahanan termasuk praktek laboratorium dan teknik, peralatan keselamatan dan desain fasilitas. Containments adalah seperangkat pedoman yang diusulkan dalam konferensi internasional yang diselenggarakan di Asilomarin Februari 1975 setelah permintaan dibuat oleh ilmuwan terkenal "Paul Berg" untuk membahas potensi bahaya dari agen infeksi. Dalam konferensi Konsep novel containment Biologi diberikan yang mana merekomendasikan penggunaan non aktif vektor / host sistem yang dapat bertahan hidup hanya di bawah kondisi tertentu. Sebelum konferensi ini Institut Kesehatan Nasional atau Komite RAC merumuskan seperangkat pedoman. Ini pedoman yang dikeluarkan pada tanggal 23 Juni 1976 oleh Sekretaris Negara Serikat Kesehatan, kesejahteraan Pendidikan. Pedoman ini mengatur kategori Dan definisi prosedur containment fisik dan biologis yang harus diikuti oleh para peneliti di lapangan sesuai dengan jenis vektor dan asal-usul DNA yang akan digunakan. Ada tiga risiko utama yang terlibat di laboratorium selama bekerja. 1. Risiko fisik yang meliputi dingin dan panas yang intens, kebakaran dan sengatan listrik 2. Risiko kimia meliputi paparan bahan kimia, toksisitas dan keatsirian, pelepasan aerosol, sehingga ada kebutuhan pelatihan yang tepat dalam semua aspek. 3. Biohazards termasuk risiko dari kultur itu sendiri. Hal ini disebabkan oleh patogenisitas kultur, dan teknik yang digunakan untuk prosedur containment. Teknik tes lain seperti Radioisotop, (Radioaktivitas tingkat, paruh mereka, dan Pembuangan limbah) dapat menimbulkan risiko serius bagi kesehatan. Oleh karena pertimbangan kesehatan khusus termasuk untuk kesehatan Personalia, Kehamilan, Immunodeficiency dan Alergi akibat penggunaan mantel lateks dan dipakai di laboratorium. 3.2. PENGAMANAN CONTAINMENT Terdapat dua jenis containment; level primer dan level sekunder : 3.2.1. CONTAINMENT PRIMER Containment primer merepresentasikan praktek prosedur dan peralatan yang digunakan untuk mencegah penyebaran bahan penelitian dari lokasi di mana mereka sedang digunakan. Laboratorium praktek dan teknik adalah elemen yang paling penting dari containment primer. Perlindungan pribadi dari lingkungan laboratorium segera setelah terpapar agen infeksi dapat diberikan oleh: (1) teknik aseptic yang Baik (2) Penggunaan peralatan keselamatan yang sesuai (3) penggunaan vaksin, pertahanan Primer yang ditawarkan 1. Lemari Biosafety 2. Blender 3. Cangkir Centrifuge, 4. Berbagai wadah yang ditutupi.

3.2.2. CONTAINMENT SEKUNDER Containment sekunder terdiri dari laboratorium atau fasilitas di mana pekerjaan berlangsung. Ini mencakup semua elemen yang mencegah bahan-bahan penelitian dari memasuki lingkungan. Contoh hambatan sekunder meliputi lantai, dinding, dan langit-langit, kunci udara dan menutup diri pintu, tekanan diferensial antara ruang (tekanan postive dan desain tekanan negatif untuk sistem ventilasi), filtrasi knalpot, serta perangkat untuk mengobati udara yang terkontaminasi, cairan dan zat padat. Fungsi Dari pertahanan ini adalah untuk mencegah kedua hal ini pelepasan mikro-organisme ke lingkungan dalam hal kegagalan dalam penghalang utama dan untuk mencegah organisme lingkungan mengkontaminasi tempat kerja. Perlindungan lingkungan eksternal ke laboratorium dari paparan bahan menular dapat disediakan oleh 1. Fasilitas dan desain lab, 2. Operasional praktek (bagaimana seseorang dilakukan di laboratorium). Penahanan sekunder ada dua jenis satu adalah fisik dan lainnya adalah biologis. Ada empat tingkat penahanan Fisik ditunjuk tingkat keamanan hayati dan dua containment biologi HV1 (host-vektor system) dan HV2. 3.2.2.1. Containment Fisik Containment fisik dicapai melalui penggunaan hambatan utama (laboratorium praktik dan peralatan penahanan) dan hambatan khusus (laboratorium dan desain bangunan). Empat tingkat penahanan fisik berkisar dari praktek standart microbilogical (P1) dengan kondisi laboratorium yang dirancang dengan cermat yang melibatkan tekanan negatif, kunci udara otoklaf dan sebagainya. Ini mencakup pelatihan personil di 1. Aseptic teknik; 2. Biologi dari organisme yang digunakan; 3. Potensi biohazard organisme, dan 4. Prosedur darurat dalam kasus kecelakaan. Tingkat Containment Fisik 1. BL1. Tingkat keamanan hayati 1 (BL1) tidak memerlukan fitur desain khusus di luar yang cocok untuk sebuah laboratorium yang dirancang dengan baik dan fungsional. Lemari Biologi tidak diperlukan. Pekerjaan dapat dilakukan dengan bangku terbuka dan containment dicapai melalui penggunaan praktek biasanya digunakan di laboratorium mikrobiologi dasar. Tingkat ini berlaku untuk laboratorium dasar untuk penanganan agen kelompok risiko 1. 2. BL2. Tingkat keamanan hayati 2 (BL2) cocok untuk eksperimen yang melibatkan agen dengan potensi bahaya moderat untuk personil dan lingkungan. Organisme ini umumnya tidak menular melalui rute aerosol. Akses ke laboratorium terbatas ketika eksperimen sedang dilakukan. Prosedur yang melibatkan volume besar atau konsentrasi tinggi dari agen, atau di mana aerosol kemungkinan akan dibuat, dilakukan dalam lemari keselamatan biologi. 3. BL3. Pada tingkat keamanan hayati 3 (BL3), desain fasilitas memainkan peran penting dalam keselamatan. BL3 melibatkan organisme atau sistem yang menimbulkan risiko yang signifikan atau merupakan ancaman yang serius terhadap kesehatan dan keselamatan pekerja. Fasilitas tersebut termasuk fitur desain rekayasa khusus dan peralatan penahanan. Fasilitas ini biasanya dipisahkan dari arus lalu lintas umum dengan akses koridor yang dikendalikan, kunci udara, kamar ganti, atau entri doubledoor lainnya. Lemari biosafety

yang diperlukan untuk semua manipulasi teknis yang melibatkan kultur (pekerjaan tidak diperbolehkan di bangku terbuka). Permukaan dari semua, lantai dinding dan langit-langit yang disegel dan, karena itu, tahan terhadap cairan yang mungkin tumpah ke mereka. Ini berarti bahwa semua penetrasi (telepon, lampu, garis plumbed untuk gas, vakum, garis eletrical, switch eletrical, dll) yang disegel untuk mencegah kebocoran. Kerah dan segel juga terbuat dari bahan yang dapat dibersihkan. Sistem ventilasi di fasilitas kelompok risiko 3 ini dirancang untuk membuang udara lebih dari yang disediakan, sehingga aliran udara terarah dari koridor luar, yang dianggap sebagai bersih, ke laboratorium yang dianggap terkontaminasi. Udara dibuang ke luar rumah dan tidak diresirkulasi ke pf bagian lain bangunan tanpa perlakuan filtrasi yang tepat. 4. BL4. Gedung terpisah, tidak ada jendela, knalpot udara didekontaminasi, personil dengan setelan tekanan positif, pintu kedap udara. 3.2.2.2. CONTAINMENT BIOLOGICAL 1. HV1. (host vektor sistem I) yang memberikan tingkat moderat misalnya penahanan E.coli K12 dan vektor non-conjugative plasmid. 2. HV2. (host vektor sistem II) yang menyediakan tingkat tinggi penahanan. Pada EK2 sistem dengan vektor plasmid tidak lebih dari satu dalam 108 sel inang harus mampu mengabadikan sebuah fragmen kloning di lingkungan non-laboratorium. 3.3. PRAKTIK LABORATORIUM 3.3.1. PERALATAN CONTAINMENT 1. Prosedur eksperimental yang melibatkan organisme yang membutuhkan penahanan fisik tingkat P4 akan baik dalam: (i) kelas III sistem kabinet, atau (ii) lemari kelas I atau kelas II yang terletak di daerah yang dirancang khusus. 2. Laboratorium hewan yang terlibat dalam percobaan membutuhkan penahanan fisik tingkat P4 akan ditempatkan baik kandang yang terkandung dalam lemari kelas III atau ke dalam parsial-containment sistem kandang (seperti unit Horsfall, kandang terbuka ditempatkan di kandang berventilasi, atau padat-dinding dan kandang bawah ditutupi oleh Filter topi, atau padat-dinding dan kandang bawah dilengkapi dengan lampu radiasi ultraviolet dan reflektor) yang terletak di daerah yang dirancang khusus. 3.3.1.1 KELAS I (PERLINDUNGAN PERSONEL DAN LINGKUNGAN) Lemari keselamatan biologi Kelas I dirancang untuk memberikan perlindungan lingkungan dan personel saja. Kelas I kabinet tidak melindungi produk dari kontaminasi karena "kotor" ruang udara terus masuk ke cabinet melalui ke permukaan kerja. Tidak seperti lemari asam konvensional, filter HEPA dalam kabinet Kelas I melindungi lingkungan dengan menyaring udara sebelum habis. Perlindungan personel memungkinkan oleh gerakan konstan dari udara ke dalam kabinet dan menjauh dari pengguna. 3.3.1.2 KELAS II (PERLINDUNGAN PRODUK, PERSONEL, DAN LINGKUNGAN)

Lemari Kelas II melindungi produk, personil dan lingkungan. Jenis lemari ini banyak digunakan di klinik, rumah sakit, penelitian dan laboratorium farmasi. Kabinet keselamatan biologi kelas II telah mengikuti tiga fitur utama: 1. Sebuah bukaan depan akses dengan aliran udara ke dalam hati-hati dipertahankan; 2. HEPA-filter, aliran udara vertikal, unidirectional dalam wilayah kerja; 3. HEPA-saringan pembuangan udara ke kamar; 4. Vertical, aliran udara searah dan pembukaan akses depan umum untuk lemari kelas II. Tapi, sejak kelas II di desain memungkinkan pola aliran udara yang berbeda, kecepatan, posisi HEPA filter, tingkat ventilasi dan metode knalpot, oleh karena itu, subklasifikasi jenis diperlukan untuk membedakan desain kelas II. Pada tahun 2002, Sanitasi Nasional Foundation (NSF International) direstrukturisasi sistem klasifikasi Kelas II untuk mencerminkan kinerja spesifik dan atribut instalasi. 3.3.2 Lemari Pengaman 3.3.2.1. TIPE A, KELAS II Kelas II, tipe A digunakan untuk melindungi personil, produk dan lingkungan serta dari biologiaerosols dan partikulat. Kerudung ini menawarkan perlindungan personil melalui tekanan negatif aliran udara ke dalam kabinet. Untuk melindungi produk, area kerja di kabinet terus dimandikan dengan udara ultra-bersih yang disediakan melalui pasokan HEPA filter. Sekitar 70% dari udara dari setiap siklus diresirkulasi melalui pasokan HEPA filter. Udara yang tersisa (sekitar 30%) dibuang dari kap melalui knalpot HEPA filter, melindungi lingkungan. 3.3.2.2. TIPE B2, KELAS II Kelas II, tipe B2 dilengkapi dengan kap aliran laminar vertikal. Ini melindungi dari beragam jenis bahan biohazards tanpa sirkulasi gas dan asap di area kerja. Lemari asam konvensional hanya melindungi pengguna. Kelas II, tipe A (70% sirkulasi hood) selain untuk melindungi pengguna, juga melindungi pekerjaan dalam proses dan lingkungan dari semua partikel. Kelas II, Kabinet Keamanan biologi kelas B2 membawa perlindungan ini satu langkah lebih jauh dengan ducting (ventilasi) ke luar dari gedung (100% dari udara yang masuk). Fitur knalpot keseluruhan membuat suitables hood B2 untuk tidak hanya menangani partikulat, tetapi juga asap dan gas. Hal ini terutama diinginkan untuk bekerja dengan radionuklida, limbah dari partikulat yang menyublim dan bau yang berbahaya. 3.3.2.3. KUSTOM KELAS II Aliran laminar dibuat untuk menyediakan proteksi bagi personel dan lingkungan dari bahaya aerosol yang dihasilkan saat menangani bahan padat maupun cair yang berisiko. Hal ini juga melindungi pekerjaan yang sedang berlangsung dengan iso class 5 / class 100 air. Fitur protektif ini membuat tungkup sayat berharga bagi biological dan farmatikal, banyak berfungsi pada penggunaan industri contoh untuk menangani debu dari serbuk. Filter dapat ditambahkan pada area kerja untuk memperpanjang masa kerja filter HEPA saat bekerja dengan material-material seperti itu. Lemari penyimpang barang-barang biologi dapat didesain dan dibuat untuk peralatan dengan berbagai ukuran.

3.4. PERSYARATAN LABORATORIUM LEVEL P-4 1. Pintu laboratorium harus dapat ditutup saat eksperimen berlangsung. 2. Permukaan ruang kerja harus dapat di kontaminasi berkenaan dengan penyelesaian aktivitas eksperimen dan dengan cepat mengikuti tumpahan-tumpahan organisme yang mengandung molekul DNA rekombinan. 3. Semua limbah laboratorium harus disterilisasi-uap (autoklaf) sebelum di buat. Bahan yang terkontaminasi seperti peralatan gelas, kandang hewan, peralatan laboratorium dan limbah radioaktif harus didekontaminasi dengan metode yang efektif sebelum dicuci dan digunakan. 4. Pipet mekanik harus digunakan, pipet dengan mulut dilarang. 5. Kegiatan makan, minum, merokok dan menyimpan makanan dilarang. 6. Pekerja harus mencuci tangan setelah mengerjakan organisme mengandung molekul DNA rekombinan dan saat mereka meninggalkan laboratorium. 7. Perawatan harus dilakukan untuk meminimalisir terbentuknya aerosol. Contohnya manipulasi saat memasukkan jarum ke kultur, membakar jarum inokulasi dan memaksakan ejeksi cairan dari pipet harus dihindari. 8. Materi biologi yang dibuang dari fasilitas P4 dalam bentuk utuh harus di transfer ke kontainer barang anti pecah yang ditutup, lalu dibuang dari fasilitas melewati tangki disinfeksi atau ruang fumigasi. 9. Tidak ada material, kecuali material biologi yang ditinggal utuh dapat dibuang dari fasilitas kecuali mereka telah disterilisasi (autoklaf) atau didekontaminasi efektif setelah melewati fasilitas P4. Semua limbah/material yang tidak hancur dengan temperatur tinggi harus disterilisasi selama dua kali. Sedang material yang dapat hancur dengan suhu tinggi harus melewati ruang fumigasi. 10. Material di dalam lemari kelas III harus disingkirkan dari sistem lemari setelah disterilisasi uap dengan autoklaf dua pintu atau setelah disimpan di kontainer barang tidak hancur, dimana material ini lalu melewati tangki disinfeksi atau ruang fumigasi. 11. Orang yang dapat masuk ke fasilitas P4 diharuskan bertemu dengan penanggungjawab program. Sebelum memasuki lab, orang tersebut harus diberi pemberitahuan mengenai penelitian dan harus diberi instruksi mengenai keamanan. Mereka harus menuruti instruksi dan prosedur layanan. 12. Orang dibawah umur 18 tahun tidak boleh masuk fasilitas P4. 13. Baju jalanan harus disingkirkan di luar dari area mengganti baju dan disimpan disana. Baju lab lengkap termasuk jubah, penutup kepala, sepatu dan celana, harus digunakan bagi setiap orang yang akan masuk fasilitas P4. Saat keluar, peserta harus menyimpan baju di loker yang disediakan dengan tujuan tersebut atau membuangnya ke bak pengoleksi sebelum memasuki daerah pemanduan. 14. Tanda umum biohazard dibutuhkan pada pintu fasilitas P4 dan pada seluruh interior ruangan hingga ke ruang laboratorium pribadi dimana eksperimen dilaksanakan. Tanda tersebut juga harus diposkan di freezer, kulkas, atau unit lain untuk menyimpan organisme yang mengandung molekul DNA rekombinan. 15. Program pengendalian serangga dan tikus harus ditegakkan. 16. Hewan atau tanaman yang tidak ada sangkut paut dengan penelitian tidak diizinkan masuk ke laboratorium.

17. Vacum harus diproteksi dengan filter dan cairan desinfeksi. 18. Penggunaan jarum hipodermi dan srynge harus dihindari saat metode lain masih bisa digunakan. 19. Laboratorium harus selalu bersih dan rapih. 20. Jika eksperimen menyertakan organisme lain yang mebutuhkan level kontaminasi yang lebih rendah. 3.5. MENANGAI MATERI BIOLOGICAL YANG BEKU penyimpanan dan pengambilan materi biologi beku dari cairan nitrogen diperlukan peralatan proteksi yang memadai. Tiga faktor risiko yang berhubungan dengan cairan nitrogen (-196oC) adalah, frosbite, asfiksia, dan terpapar. Saputangan yang tebal harus digunakan. Dibutuhkan ventilasi regular dan ventilasi tambahan.