PEMBUATAN PREPARAT MIKROSKOPIS DAN AWETAN

Mikroteknik n Tujuan: membuat sediaan yang dapat mendukung berbagai disiplin ilmu (histologi, fisiologi, embriologi,dsb). n Bahan kimia padat, cair, gas dengan sifat yang berbeda-beda (sangat toksik, toksik, tidak toksik) n Alat-alat: - alat gelas (staining jar, beker glass, gelas ukur, dll) - Alat bukan gelas (hot plate, oven, mikrotom, pinset, dll) Istilah-istilah dalam pembutan preparat n Fiksasi n Dehidrasi n Clearing Fiksasi adalah usaha untuk mempertahankan elemenelemen sel atau jaringan agar tetap pada tempatnya dan tidak mengalami perubahan bentuk atau jaringan. Tujuan: diperleh gambaran struktur sel/jaringan seperti pada aslinya Macam fiksatif : - Sederhana (tunggal): alkohol,formalin - Majemuk (campuran): larutan Bouin (asam pikrat, formalin, acidium aceticum glaciale/AAG) Dehidrasi Adalah penarikan molekul air dari jaringan Tujuan : agar jaringan bebas air, sehingga jaringan lebih terawetkan Dehidrasi dilakukan secara bertahap Macam dehidrant : ethyl alkohol, aseton Sediaan Utuh (wholemount) n Tujuan: melihat struktur internal suatu organisme. n Cara : Fiksasi dehidrasi staining clearing mounting labelling n Contoh: pembuatan preparat wholemount embrio ayam n Bahan: telur dengan umur tertentu, garam fisiologis, pewarna: hematoxylin&eosin, alkohol, formalin n Alat: gunting, pinset, gelas timbang (Ex: Whole mount embrio ayam)

Clearing Adalah proses penarikan molekul dehidrasi dari jaringan. Clearing agent : xylol, toluol, minyak cengkeh, dll Macam-macam sediaan n Sediaan sementara : supravital staining n Sediaan permanen - Sediaan utuh ( whole mount) - Sediaan irisan (beku, seloidin, parafin) - Sediaan untuk jaringan tipis (rentang) - Sediaan jaringan cair (apus untuk darah, limfe) - Sediaan untuk jaringan keras

SEDIAAN BEKU Metode Parafin Tujuan : melihat struktur sel Cara : narkose pengambilan bahan fiksasi washing dehidrasi toluol infiltrasi parafin penanaman (embedding) pengirisan affiksing deparafinasi staining mounting labelling Pewarnaan (staining): - Zat warna asam : acid fuchsin, eosin - Zat warna basa : hematoxylin

n 1. 2. 3. 4.

Tahapan : Koleksi serangga Mematikan serangga Memasang pada papan kayu Labelling

TEKNIS ASEPTIS
Tujuan steril dan mencegah
kontaminasi Kontaminasi? Kontaminan ? Kultur murni?

Sterilisasi suatu usaha untuk membebaskan bahanbahan dan alat-alat dari semua bentuk kehidupan mikrobia Cara sterilisasi: mekanik, fisik, kimia, Sterilisasi secara mekanik Dengan filtrasi Digunakan untuk bahan-bahan yang tidak tahan panas Misalnya : serum darah, antibiotika, gula sederhana Berkefeld filter Seitz filter Sterilisasi Fisik Alat dan bahan tahan panas Insenerasi : > 5000C Perebusan : 1000C Autoclave : 1210C, tekanan 1 atm, 15 menit Pemanasan kering Pasteurisasi (batch method & flash method) Prinsip Kerja Autoclave

Sediaan Apus n Alat : object glass n Bahan : cairan jaringan (darah, limfe) n Cara kerja: teteskan darah/limfe di atas object glass - letakkan object glass lain dengan posisi sudut 450 - Tarik dengan arah yang berlawanan

Herbarium
Tujuan? Materi herbarium Informasi : etiket tempel dan etiket gantung kolektor, nomor koleksi, nama lokal spesimen, lokasi pengambilan dan tanggal. Insektarium n n n

Sterilisasi secara kimia Bahan kimia yang berupa gas: etilen oksida dan formaldehid, senyawa kimia yang bersifat cair: glutaraldehid Teknik sterilisasi secara kimia dapat dilakuakan dengan bahan yang mempunyai daya oksidasi seperti ozon dan hidrogen peroksida. Media Pertumbuhan Nutrisi isolasi, pengujian sifat-sifat fisiologi dan perhitungan jumlah mikrobia dalam suatu bahan Media untuk bakteri media untuk jamur Syarat Media mengandung zat makanan yang mudah digunakan oleh mikrobia tidak mengandung zat penghambat pertumbuhan mempunyai tekanan osmose dan tegangan permukaan pH sesuai dengan kondisi mikrobia dalam keadaan steril. Macam Media Berdasarkan kandungan kimianya: Anorganik medium organik medium sintetik medium non sintetik Berdasarkan konsistensinya: Padat Semi padat Cair Media Pertumbuhan

Teknik Isolasi Isolasi ? memindahkan mikrobia tersebut dari lingkungannya di alam dan menumbuhkan sebagai biakan murni dalam medium buatan. Bagaimana caranya? Cara-cara Isolasi Teknik Goresan (streak plate method) Teknik taburan (pour plate method) Teknik Sebaran ( spread method) Teknik Goresan (streak plate method) Menghasilkan koloni terpisah Media agar digores dg ose yg berisi koloni bakteri/ jamur Teknik taburan (pour plate method) Pengenceran bertingkat Inokulum diteteskan di petridis dituang media Koloni terpisah Pengenceran Bertingkat

Teknik Sebaran ( spread method) Pengenceran Kultur disebarkan pada media agar plate steril penyebaran dengan alat penyebar yang telah disterilkan dengan alkohol dan dibakar

firdaus_1222@yaho o.com