Manual de Parasitologia

UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUMICA FARMACUTICA BIOLGICA
MANUAL DE PRACTICAS DE PARASITOLOGIA
M.E. Yolanda Medina Romero.
XALAPA -ENRIQUEZ, VER.
FEBRERO- 2009
MANUAL DE PRCTICAS DE PARASITOLOGIA
"Estudia el pasado y conocers el futuro"

Proverbio chino
INDICE
Introduccin 8
Objetivos
Reglamento de laboratorio Medidas 11 Recomendaciones Capitulo 1. Generalidades Capitulo 2. El laboratorio de parasitologa 12 14 18 de
10 bioseguridad
Practica No. 1. Organizacin y funcionamiento de laboratorio de parasitologa. Capitulo 3. Mtodos Parasitolgicos Capitulo 4. Mtodos coproparasitoscopicos cualitativos Prctica No. 2. Examen directo en fresco Prctica No. 3. Identificacin de Balantidium coli Prctica No. 4. Mtodo de Willis Prctica No. 5. Mtodo de Faust Prctica No. 6. Mtodo de Ritchie Prctica No. 7. Mtodo de Sheather sugar Prctica No. 8. Mtodo de Charles Capitulo 5. Mtodos coproparasitoscopicos cuantitativos Prctica No. 9. Metodo de Stoll Capitulo 6. Mtodos especiales para el diagnstico de parasitosis del aparato digestivo Prctica No. 10. Amiba en fresco Prctica No. 11. Estudio citolgico de moco fecal Practica No. 12. Mtodo de Graham Prctica No. 13. Mtodo de Concentracin de larvas por Termotropismo e higrotropismo
25 29 34 35 38 41 44 48 52 55 60 61 66 67 70 72 75
Capitulo 7. Mtodos para el diagnstico de parsitos tisulares y de cavidades Prctica No. 14. Identificacin de Trichomonas vaginalis Prctica No. 15. Identificacin de Plasmodium Prctica No. 16. Identificacin de Trypanosoma y leishmania Practica No. 17. Bsqueda de Toxoplasma gondii Practica No. 18.Coprologico Vinculacin Conclusin
81 82 85 88 96 99 109 113 5
Bibliografa Anexo A. Principales parsitos intestinales del hombre Anexo B. Algoritmos para el examen parasitolgico Anexo C. Micrometria Anexo D. Claves de identificacin de protozoarios Anexo E. Elementos que se pueden confundir con parsitos Intestinales Anexo F. Preparacin de reactivos Anexo G. Norma Oficial Mexicana 087
114 117 121 125 127 131 135 138
INDICE DE TABLAS
Tabla1.Envo de muestras para parasitologa Tabla 2. Requisitos para remisin de muestras para examen Parasitolgico Tabla 3. Factores de correccin para el reporte del mtodo de Stoll Tabla 5. Diferencia entre larvas filariformes 21 22 63 78 6
INDICE DE FIGURAS
Figura 1. Mtodo de Ritchie Figura 2. Toma de muestra de raspado perianal Figura 3. Sistema de Baerman Figura 4. Dispositivo de Baerman modificado Figura 5. Diferencias entre larvas Rabditiformes Figura 6. Lamina para diagnstico de paludismo Figura 7. Interpretacin de resultados de Chagas 50 76 73 77 78 87 94
INTRODUCCIN
Las enfermedades parasitarias han producido a travs de los tiempos ms muertes y dao econmico a la humanidad que todas las guerras juntas. Generalmente en los pases con poco o nulo desarrollo socioeconmico, es en donde las enfermedades parasitarias y las parasitosis se presentan con mayor frecuencia, vindose favorecidos esto por las condiciones climticas calidas o templadas y por la falta de cultura medica. Ya que en los pases desarrollados social, medica, y econmicamente, las enfermedades parasitarias han sido erradicadas o tienen muy poca significacin.1 Un nmero considerable de parasitosis, entre las cuales se encuentra la amibiasis, malaria, trypanosomosis americana, leishmaniosis en sus diferentes formas, y la cisticercosis, persisten como problema de salud pblica en varias regiones de Mxico, se encuentran entre las enfermedades infecciosas y parasitarias con mayor morbi-letalidad, con dificultades para su 7
prevencin y control. Por otra parte, factores como la pandemia del sndrome de inmunodeficiencia adquirida, el incremento en el uso de medicamentos inmunosupresores y algunos de los avances logrados en el diagnstico y recursos teraputicos, han facilitado la aparicin de parasitosis nuevas o la reactivacin de otras que antes se consideraban de ocurrencia relativamente rara, como cryptosporidiosis, toxoplasmosis y strongyloidosis, entre otras. Lo anterior ha determinado que muchos de los padecimientos originados por parsitos sean motivo de consulta diaria en la medicina general, constituyndose en desafos desde el punto de vista de diagnstico, tratamiento y de medidas preventivas en el paciente individual, en el grupo familiar y en el mbito de la Salud Pblica. El Qumico Farmacutico Bilogo como parte del equipo de profesionales que proporcionan servicios para la salud, esta involucrado en el diagnstico de laboratorio de las enfermedades parasitarias. Por lo tanto durante su formacin profesional debe desarrollar las competencias bsicas conceptuales, procedimientos mentales y actitudinales que le permitan discernir sobre los diversos parsitos, las enfermedades que causan, las metodologas analticas, as como la aplicacin de criterios para interpretar los resultados obtenidos bajo una actitud de compromiso, responsabilidad y tica. Para estar en mejores posibilidades de participar en la solucin de los problemas respectivos. La Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica regin Xalapa, incluye en su plan de estudios en el rea disciplinar la Parasitologa, siendo una experiencia educativa que los estudiantes deben cursar en el laboratorio y que le permitir desarrollar actividades de vinculacin con comunidades que presenten problemas de parasitosis, contempla la realizacin de prcticas en el laboratorio que requieren de un manual que contenga las diferentes tcnicas que aplicara cuando realice el anlisis parasitolgico. De acuerdo a la concepcin de los proyectos pedaggicos el desarrollo de prcticas de laboratorio como mtodos de aprendizaje en escenarios educativos no es una idea novedosa; sin embargo, con el propsito de que los estudiantes adquieran, amplen y verifiquen sus conocimientos es necesario contar con un conjunto ordenado de tcnicas y procedimientos que les permita realizar prcticas experimentales o de campo, sobre una o varias unidades del programa de una asignatura. Por lo antes expuesto, este manual presenta una serie de mtodos de laboratorio no solo para el Qumico Farmacutico Bilogo sino para todos aquellos interesados o involucrados en el anlisis parasitolgico; la mayora de los mtodos presentados es el resultado de una seleccin cuidadosa atendiendo los contenidos temticos del programa de estudios de esta experiencia educativa y de las propias necesidades de nuestra facultad. El manual de prcticas esta conformado por siete captulos; en el primero se presentan las generalidades sobre la parasitologa, en el segundo una introduccin al laboratorio, en el capitulo tres se abordan los mtodos parasitolgicos, en el cuatro, cinco, seis y siete las tcnicas coproparasitoscopicas cualitativas, cuantitativas, especiales y el diagnstico de parsitos tisulares y de cavidades respectivamente, en este mismo capitulo se incluye una prctica que permite diferenciar el examen coprolgico del coproparasitoscopico a travs del examen qumico de las heces, para finalizar un apartado sobre el trabajo de vinculacin entre los estudiantes que cursan 8
esta experiencia educativa con una comunidad rural o suburbana que presenten problemas de parasitosis intestinal, con la finalidad de conocer la incidencia de esta parasitosis en una poblacin escolar, as como promover la atencin de los servicios de salud para su tratamiento.
OBJETIVOS
General Realizar un manual para el laboratorio de la experiencia educativa de Parasitologa. Especficos 1. Compilar una serie de tcnicas vigente para identificar e investigar la presencia de parsitos que causan infecciones en el hombre. 2. Aplicar los fundamentos tericos de las diferentes tcnicas especializadas en el diagnstico de los parsitos. 3. Ejecutar las diferentes tcnicas utilizadas en el diagnstico parasitario coproparasitoscopico y coprologico. 4. Manejar normas bsicas de bioseguridad y control de calidad en el laboratorio de parasitologa 5. Interpretar correctamente los resultados obtenidos en las diferentes tcnicas de diagnstico parasitario 6. Aplicar control de calidad en el trabajo de laboratorio de Parasitologa. 7. Contribuir en el mejoramiento del proceso enseanza aprendizaje de los estudiantes de la Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica a travs del desarrollo de un manual de prcticas para el laboratorio de parasitologa.
REGLAMENTO DE LABORATORIO
1. El maestro y los estudiantes de esta experiencia educativa (EE) debern llegar con puntualidad a la hora indicada para la sesin de laboratorio. 2. Los estudiantes que cursan esta experiencia educativa, estn en la obligacin de realizar todas las prcticas establecidas en el programa de estudio; por representar una complementacin de los conocimientos tericos adquiridos en esta EE. 3. La inasistencia a una prctica de laboratorio debe ser justificada en el plazo mximo de 72 horas posteriores a la misma; presentando al maestro el documento correspondiente 4. Es imprescindible y obligatorio el uso de la bata, para todo trabajo en el laboratorio. 5. El uso de equipo de seguridad especificado para la realizacin de prcticas en este laboratorio ser obligatorio para estudiantes y maestros. 6. Queda estrictamente prohibido comer, beber y fumar dentro del laboratorio. 7. Los estudiantes debern presentarse a la prctica con todos los materiales necesarios para su realizacin. 8. Con respecto a los equipos, instrumentos, reactivos y materiales que se requieran para la prctica, los estudiantes deben solicitarlos al laboratorio a travs de un vale y con su credencial o arancel de inscripcin que los identifica como alumnos de esta Facultad. 9
9. Antes de realizar una prctica debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara de su objetivo, fundamento y tcnica. 10. El uso de los equipos e instrumentos, que se utilicen durante la prctica debe reportarse en la bitcora de control y registro correspondiente. 11. Todos los equipos especialmente los aparatos delicados como microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos. 12. Todos los objetos personales debern colocarse fuera del rea de trabajo para evitar accidentes y contaminaciones. 13. Todos los estudiantes debern mantener un comportamiento acorde con su calidad de estudiante universitario, que no ponga en riesgo la integridad fsica de los ah presentes, la seguridad de las actividades que se realizan y el buen estado de materiales, reactivos, equipo e instrumentos del laboratorio. 14. Cualquier conducta inapropiada de los estudiantes dentro del laboratorio ser sancionada de acuerdo al estatuto de los alumnos vigente. 15. Antes de iniciar la prctica los estudiantes deben sanitizar su mesa de trabajo utilizando un desinfectante. 16. En caso de algn percance o accidente se debe comunicar inmediatamente al maestro. 17. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados, a fin de evitar contaminaciones, asegurarse de que queden bien cerrados. 18. Todo material contaminado despus de inactivarse se depositara en los recipientes biolgicos infecciosos segn la Norma Oficial Mexicana. (NOM 087) 19. Es importante destacar que es de obligado cumplimiento las normas de bioseguridad que estn contempladas en el manual de seguridad de los laboratorios del rea de microbiologa. 20. Durante y al finalizar la prctica los estudiantes deben mantener y dejar limpia sus reas de trabajo. 21. Al concluir la prctica los estudiantes deben devolver a este laboratorio los materiales, equipo, reactivos utilizados. 22. Al finalizar el curso y como requisito para acreditar esta experiencia educativa los estudiantes deben desocupar incubadores, refrigeradores, estufas y gavetas que contengan material contaminado, as como no tener adeudos de material en este laboratorio.
MEDIDAS DE BIOSEGURIDAD
1. Los riesgos en el laboratorio de parasitologa, son escasos si se respetan las consignas de seguridad. Atendiendo la NOM 166 y NOM 087, tambin son intiles los consejos si no existe voluntad de cumplir con ciertas normas de conducta. 2. Tambin es importante considerar que el material biolgico que se maneja es potencialmente infectante, por eso se recomienda someter el material a la accin germicida enrgica. 3. Las precauciones que hay que tomar para evitar cualquier clase de contaminacin corresponden ms bien a una disciplina general de trabajo, que a unas reglas precisas. a) Es imprescindible que cuando se proceda al manejo de muestras de copro, el laboratorio este ventilado debido al mal olor que despiden. b) Evitar la entrada en el laboratorio de personas ajenas a l cuando se est trabajando. 1 0
c) Evitar entradas y salidas en el laboratorio con una frecuencia innecesaria. Mientras se realiza el anlisis, sobre todo en las fases ms delicadas del mismo. d) En cuanto a peligro de contaminacin se refiere, se evitara tocar con las manos la ropa, cara, cabello y objetos personales. e) Se evitara estrechar la mano a posibles visitas, abrir grifos, abrir y cerrar puertas, tocar el telfono y todo aquello que exija contacto manual ajeno al anlisis cuando se estn ejecutando fases delicadas de ste. f) El lavado de manos ser cuidadoso y frecuente. g) El secado se har con toallas desechables. h) Esta prohibido el uso de guantes, despus de procesar la muestra, sobre todo cuando se maneje el microscopio. i) Es indispensable el uso de mantel individual de papel para colocar las muestras ya preparadas y que sern revisadas en el microscopio. j) Cada estudiante debe llevar al laboratorio un recipiente de metal para depositar temporalmente los materiales de desecho que emplearon durante el procesamiento de la muestra (aplicadores de madera, algodn, papel desechable etc.,) k) Despus de la centrifugacin de un producto contaminado, la decantacin del centrifugado se har sobre un lquido antisptico y nunca sobre un fregadero. l) La rotura de placas o tubos que contengan parsitos, requiere que se proceda inmediatamente a recoger de forma cuidadosa, adecuadamente protegidos, y a depositar los restos en cubetas con antispticos, lavando a continuacin el lugar del accidente con desinfectante. m) Las muestras de copro se desechan colocando en el recipiente cal con la finalidad de inactivar este RPBI, despus se deposita en bolsa negra de acuerdo a la NOM 087 n) Terminado el trabajo, hay que procurar que no quede en la mesa ningn material ms que el estrictamente necesario para facilitar la limpieza y desinfeccin diaria. o) Evita llevar a la boca lapiceros, rotuladores, etiquetas etc., sobre todo si han estado en contacto con la mesa de trabajo. p) La bata se utilizara exclusivamente para el trabajo en el laboratorio. Nunca se llevara puesta para salir a la calle. q) Finalmente, es necesario resaltar que el trabajo en el rea de Parasitologa es eminentemente vocacional. r) El mal hacer de una sola persona puede conducir a resultados y consecuencias desfavorables.
RECOMENDACIONES
1. Al tratar con el personal docente, tcnico, manual y compaeros de seccin, lo hars con respeto. 2. Demuestra en todo momento tu disciplina, orden y tolerancia. 3. Procura presentarte bien aseado y con ropa formal. 1 1
4. 5. 6. 7.
No distraigas a tus compaeros y evita las bromas que terminen en accidentes. Por tu propio beneficio cuida el material que uses en cada prctica. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material. Concentra toda tu atencin en las indicaciones dadas por el maestro y en las actividades que desarrolles. 8. Respeta y cumple con las indicaciones dadas por los compaeros que desempeen alguna comisin asignada por el maestro para cada prctica. 9. Suspende tus actividades cuando se te indique, a fin de estar atento a los comentarios del maestro. 10. No olvides tus pertenencias al concluir la sesin de laboratorio. 11. Recuerda traer los materiales que se te soliciten para la siguiente prctica. 12. Que tu actitud en el laboratorio siempre sea optimista y de buen humor. 13. Si tienes algn problema, antes de entrar al laboratorio, trata de dejarlo afuera.
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CAPITULO 1
GENERALIDADES
La Parasitologa es una disciplina que estudia a organismos eucariontes que viven a expensas de un husped, al que le pueden producir dao. Comprende agentes biolgicos de diferentes formas y tamao, los parsitos se dividen en tres grandes grupos: protozoos, helmintos y artrpodos. La importancia de la disciplina radica en la gran prevalencia de las infecciones en humanos y animales, en la cantidad y heterogeneidad de los agentes biolgicos, en la diversidad de los ciclos biolgicos, y en la distribucin geogrfica de stos agentes en el mundo.7 La presencia de una infeccin parasitaria se asocia en forma estrecha a factores geogrficos y climticos, as como a factores antropolgicos y sociales de las poblaciones humanas. Actualmente la importancia de las parasitosis ha aumentado con la presencia de inmunodeprimidos, y con el aumento de poblaciones migrantes y de viajeros. El diagnstico de las parasitosis es uno de los complementos necesarios para llevar a cabo en forma adecuada el tratamiento de las mismas. Algunas de las tcnicas utilizadas para tal objeto son aquellas en las que identifican los parsitos o sus fases en los productos biolgicos requeridos y que se conocen como diagnstico parasitolgico. No existe un solo mtodo adecuado para encontrar todos los parsitos intestinales, hepticos, pulmonares o sanguneos del humano, en este caso. De manera que se hace necesario contar con una variedad mnima de alternativas, de fcil ejecucin, sencilla, econmica, que utilizan materiales accesibles, probadas en varios laboratorios de diferentes pases. Los mtodos 1 3
demostrados aqu constan de un nmero variable de vistas o diapositivas, dependiendo de su facilidad o complejidad de ejecucin. Aunque cada profesional tiene su preferencia de mtodo o forma de ejecutarlo, se ha tratado de evitar desviaciones de las descripciones originales. Otros exmenes en los que se utiliza la materia fecal para poder efectuar los se describen a continuacin, aunque por el mtodo usado en cada caso no quedan dentro de los coproparasitoscopicos propiamente dichos, pues el diagnostico de las parasitosis se hace indirectamente con estas tcnicas, como la utilizacin del termo e higrotropismo para hacer una concentracin, el cultivo en papel filtro y las diversas tcnicas de tincin de frotis de heces. Los parsitos intestinales del hombre son protozoarios y/o helmintos, llamados comnmente gusanos intestinales .Estos helmintos o gusanos pueden ser cilndricos (nemtodos), anillados o segmentados (cestodos). Para observar los trofozotos, quistes u ooquistes de los protozoarios, as como las larvas y huevos de helmintos, se debe usar un microscopio; en cambio, la mayor parte de los gusanos o helmintos adultos son macroscpicos y su morfologa puede estudiarse directamente, con ayuda de un estereoscopio o una lupa. Los protozoarios intestinales eliminan con las heces sus formas evolutivas (trofozoto, quiste, ooquiste y espora), segn la especie involucrada. Los helmintos intestinales adultos (progltidos de Taenia sp., Enterobius vermicularis y Ascaris lumbricoides) pueden salir al exterior espontneamente o despus del tratamiento. Los gusanos intestinales se eliminan con las heces.
Los mtodos de diagnstico de los parsitos intestinales pueden ser: directo o por concentracin de los elementos parasitarios que se eliminan en las heces. En las heces podemos encontrar formas adultas y microscpicas (huevos, larvas, trofozoitos, quistes, ooquistes y esporas) de los parsitos intestinales; por ello, es importante obtener una buena muestra fecal, as como la conservacin ptima del espcimen.3 Protozoos De los protozoarios simbiontes con el hombre, las amiba, los ciliados y algunos flagelados se localizan, segn la especie, en la superficie de la mucosa del tubo digestivo, o en la de la vagina y uretra. Estos protozoarios requieren de un solo tipo de husped, se transmiten de persona a persona a travs del medio o por contacto directo. No presentan modificaciones morfolgicas significativas en su estadio vegetativo (trofozoito) todos ellos forman quistes para su transmisin excepto el flagelado trichomona que es el nico que parasita la vagina y uretra y se transmite por contacto sexual directo. Otros protozoarios parasitan los rganos y tejidos profundos del hombre incluyendo la sangre, desarrollan ciclos vitales complejos, generalmente en dos hospedadores de los que el parasito es estrictamente dependiente. 1 4
La trasmisin entre los hospedadores se hace a travs de artrpodos que son a la vez hospedador y vector, o a travs del medio libre, en este ltimo caso tambin se desarrollan formas qusticas de resistencia. Helmintos Los helmintos o gusanos son animales invertebrados de cuerpo alargado con simetra bilateral y rganos definidos, sin extremidades, con reproduccin sexuada durante el estadio adulto y con un tamao variable que oscila entre dcimas de milmetro a varios metros. Evolutivamente se sitan en los niveles inferiores del reino animal. Los helmintos pueden dividirse en dos grupos, los platelmintos o helmintos planos y los nematelmintos o helmintos redondos, de aparicin posterior y mayor complejidad. Se reproducen sexualmente formando huevos frtiles, que dan lugar a larvas de diversa morfologa y tamao variable, algunas de las cuales pueden presentar varios estadios muy diferenciados entre s en uno o diversos huspedes intermediarios hasta transformarse en adultos. Los helmintos pueden ser de vida libre o parasitaria, algunos se hallan extraordinariamente bien adaptados a este tipo de vida en uno o ms huspedes. Presentan grandes diferencias morfolgicas y fisiolgicas los distintos grupos parsitos entre s y con sus semejantes de vida libre, como consecuencia de la adaptacin a sus huspedes.
La localizacin de los parsitos humanos puede ser en la luz del tubo digestivo, las formas adultas, o en los rganos profundos, invadidos ya sea por las formas adultas o las larvarias. Las helmintosis son poco frecuentes en zonas desarrolladas y frecuentes en las zonas agrarias de los pases subdesarrollados debido a la falta de higiene para prevenir su transmisin y a la existencia de los huspedes intermediarios. En esas zonas algunos helmintos son muy importantes por la gran frecuencia y gravedad de la patologa que causan, en general procesos crnicos debilitantes. El diagnstico etiolgico de las enfermedades causadas por helmintos se hace por observacin macroscpica de las formas adultas o microscpicas de los huevos o larvas, cuya morfologa permite en general su identificacin a nivel de especie.5 Se recomienda tener a mano libros de texto o manuales de consulta que permitan aclarar dudas o asegurar la ejecucin y utilidad de los mtodos en el diagnstico de laboratorio.
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CAPITULO 2
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El LABORATORIO DE PARASITOLOGIA
INTRODUCCIN El Laboratorio de Parasitologa es un lugar que cuenta con las reas de diagnstico parasitolgico coprolgico convencional, de muestras biolgicas, que llegan para descartar enfermedades parasitarias de una poblacin determinada. Para ello se cuenta con personal capacitado, equipamiento e infraestructura moderna que nos permiten hacer un trabajo de calidad. El adecuado manejo de las muestras biolgicas que se utilizan en el laboratorio resulta de especial inters, pues ya sea materia fecal (utilizada ms comnmente) y/o muestra sangunea se consideran potencialmente infecciosas, por lo que es importante que el alumno conozca el reglamento, organizacin y funcionamiento del laboratorio, ya que del comportamiento y cuidado con que se desempee dentro de este, dependern la precisin y exactitud de los resultados que obtenga.3 Condiciones Infraestructura correspondiente a un laboratorio Parasitologa. 1 7
Personal especializado Equipado con superficies e instalaciones adecuadas Normas de seguridad (Bioseguridad) Controles de calidad Normas de bioseguridad 80% infecciones en tareas rutinarias: Inoculaciones Manejo animales Manipulacin muestras 20% accidentes: Mal manejo de agujas, jeringas etc Derrames accidentales Rotura viales / frascos Pipeteado (aspirado por boca) Control de calidad Necesario en todo laboratorio Muy importante en laboratorios con funcin docente (normalizacin de tcnicas)
Control de calidad externo Participacin de diferentes laboratorios (comparacin resultados) Control de calidad interno Debe contemplar; Manual procedimientos o protocolos que incluirn detalles sobre: Toma, transporte, conservacin y manipulacin de las muestras clnicas Preparacin de diferentes soluciones y reactivos Metodologa empleada en cada caso
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El manual de protocolos estar al alcance de los profesionales del laboratorio, de los estudiantes y de los comits de evaluacin del laboratorio Revisiones peridicas de todas las actividades, (recepcin muestra informacin resultados) Calibracin y chequeo peridico de los equipos e instrumentos (baos, neveras, analizadores) Etiquetado o rotulado de los reactivos y soluciones, con detalles de su preparacin. Disponibilidad de material didctico (diapositivas, lminas fijas, atlas, CD. etc.) Coleccin de especmenes, manuales En el caso de pruebas de Serologa, disponibilidad muestras positivas y negativas, internacionales o no, debidamente estandarizadas Mantenimiento adecuado de autoanalizadores Realizacin de los controles que exija cada fabricante Empleo de reactivos comerciales seleccionados, independientes, de ser posible oficiales.9 Control de calidad en el examen de heces Para conseguir resultados precisos y fiables, debe controlarse la calidad de los procedimientos de laboratorio en el diagnostico de las parasitosis. Los controles deben comprender la toma de muestras, la preparacin de los reactivos, la ejecucin de las tcnicas y el examen de las preparaciones finales. Muestra para examen parasitolgico Comprende las siguientes muestras: heces, frotis perianal, bilis o jugo duodenal, esputo, secrecin, biopsia o preparaciones histolgicas, siendo heces, la ms frecuente. Toma de muestras Si las muestras no se recogen y manipulan adecuadamente antes de examinarlas, su valor para un diagnstico exacto ser escaso o nulo, sobre todo en el caso de los protozoos. Los trofozotos amebianos comienzan a degenerar al cabo de 1-2 horas de la defecacin y las alteraciones en el aspecto pueden dar lugar a confusiones en la identificacin. Los trofozotos de flagelados tambin pueden sufrir cambios que dificulten la diferenciacin. Los quistes se deterioran si las muestras fecales quedan sin tratar durante muchas horas o de un da para otro, especialmente a temperaturas elevadas. Aunque los huevos y las larvas de helmintos se ven menos afectaos por la edad de la muestra que los protozoos, pueden sufrir alteraciones que afecten a la identificacin. Por ejemplo, los huevos de anquilostomas pueden transformarse en embriones y nacer las larvas. Incluso los huevos de 1 9 probados por organismos
Ascaris lumbricoides pueden desarrollarse hasta las fases pluricelulares. Adems, es posible que las larvas degeneren en las muestras viejas impidiendo la identificacin de las especies. 9 Para cerciorarse de que se dispone de especimenes adecuados para el examen, debe prestarse atencin a los siguientes puntos. 1. La muestra debe obtenerse antes del uso de medicamentos antiparasitarios, o hasta 2 a 5 das despus de su administracin. 2. Utilcense recipientes limpios y secos para la recogida de las heces (La suciedad interfiere con el examen y puede introducir microorganismos de desarrollo libre procedentes del suelo que plantearan problemas a la hora de identificar las especies. La orina y el agua destruyen los trofozotos que pudieran existir.) 3. Procurar que la muestra llegue al laboratorio tan fresca como sea posible para evitar que se deterioren los protozoos y que se altere la morfologa de los protozoos y los helmintos. Antese en la muestra el nombre del paciente, la fecha y la hora de la defecacin. 4. Slo deben aceptarse muestras frescas para el examen. Nunca debe intentarse examinar especimenes antiguos o contaminados con suciedad agua u orina. Es preferible pedir al paciente que traiga una muestra reciente. 5. Las heces depositadas en el suelo no son las recomendadas para el diagnstico, debido a que pueden contaminarse con formas biolgicas, como por ejemplo: larvas similares a los enteroparsitos del hombre, larvas de nemtodes, huevos de caros o insectos, etc. 6. Si las muestras no pueden examinarse en cuanto llegan, colquese en el refrigerador (4-5C) o en la zona ms fresca y sombreada del laboratorio. Nunca dejarse al sol. 7. Si el paciente no es regular en la evacuacin de sus deposiciones y ha evacuado en la noche anterior al examen, se recomienda guardar la muestra en un refrigerador o en un lugar fresco no expuesto a la luz solar, para que no se alteren las formas parasitarias. Cuando la muestra va a tardar en llegar al laboratorio varias horas o das, se recomienda adicionarle lquido fijador y/o conservador (PAF, PVA, formalina 10%, SAF, acetato de sodio, etc.). 8. Examine en cuanto lleguen al laboratorio los excrementos diarreicos y los que contengan sangre y mucosidades.9 Rechazo de una muestra No indicar el tipo de muestra o procedencia. No indicar el examen requerido. Demora en el envo al laboratorio.
Muestra sin rotular o mal rotulada. Muestra que presente evidencia de haber sido derramada. Recipiente o contenedor inapropiado. Muestra con contaminacin. Muestra escasa o seca en el hisopo o contenedor. 2 0
Presencia de una sola muestra, a pesar de la presencia de varias rdenes. Volumen o cantidad inadecuada. En casos de rechazar una muestra, el personal de laboratorio debe explicar al solicitante las observaciones y motivos en la ficha de solicitud de diagnstico. Si no fuera posible la obtencin de otra muestra, revisar nuevamente los exmenes realizados.9 Tabla 1. Envo de muestras para parasitologa Muestras Endoparsitos Materia fecal fresca Hemoparsitos Frotis finos y gruesos de sangre perifrica. Improntas de rganos (bazo, rin, hgado, cerebro) Remitir en Recipientes de boca ancha Bolsa de Nylon sin aire Secos, envueltos en papel absorbente Forma de envo Refrigerado
Temperatura Ambiente
Protozoarios (Trichomonas) Raspados prepuciales
Medio de transporte para Trichomonas. Sol. De Sorensen sin formol Porta objetos
Temperatura Ambiente
Ectoparsitos Raspados de piel
Temperatura ambiente
Tabla 2. Requisito para la remisin de muestras para examen parasitolgico
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Preparacin de reactivos Los reactivos han de prepararse exactamente de acuerdo con la formula y las instrucciones. No deben modificarse los ingredientes, ni su cantidad, ni el mtodo de preparacin en modo alguno. Almacnense los reactivos como se recomienda en el procedimiento de preparacin. Algunos reactivos se conservan indefinidamente si se mantienen bien tapados y fuera de la luz del sol directa. Entre estos reactivos se encuentran las soluciones de formalina, la solucin salina isotnica, los fijadores y las soluciones alcohlicas (a menos que se produzca evaporacin). Otros reactivos duran muy poco tiempo y despus quedan inutilizados. La vida de cada solucin viene indicada en las instrucciones de preparacin.9 1. Rotlense todos los reactivos con su fecha de preparacin 2. Rellnese y consrvese una ficha para cada solucin. 3. Examnese una vez a la semana y trense las soluciones pasadas de fecha.
Ejecucin de las tcnicas
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No existe ningn procedimiento de examen de especimenes fecales que sea eficaz al 100%; los procedimientos no siempre recuperan todas las especies presentes y, si una especie en particular esta representada por unos pocos ejemplares, cabe la posibilidad de que la tcnica empleada no consiga ponerlo de manifiesto en una sola muestra. Dado que las tcnicas no son perfectas, deben aplicarse con todo el cuidado que sea posible para conseguir un resultado ptimo. Asimismo, es preciso velar por que se utilice la tcnica mas apropiada para el material que se esta examinando.9 Resultados Los resultados indicarn el(los) mtodo(s) empleado(s), el gnero o la especie del parsito observado y su estadio evolutivo. La densidad parasitaria puede expresarse como el nmero de formas parasitarias observadas por campo de microscopio con objetivo de 10X y 40X. Todo formato de respuesta de resultados debe contener los datos de identificacin: nombre, edad, sexo, fecha, las caractersticas organolpticas de las heces (consistencia, color, presencia de sangre y moco), datos de la observacin microscpica (presencia de leucocitos, eritrocitos, levaduras, fibras musculares no digeridas y parnquima de clulas vegetales en cantidad considerable), ya que esta informacin facilitar un mejor diagnstico clnico. Los resultados obtenidos deben registrarse en un libro de registros del laboratorio. En el caso de los laboratorios de la Red Nacional de Laboratorios de Salud Pblica, siguiendo las normas de control de calidad, el 10% de las muestras deben conservarse en el fijador, siendo mensual, trimestral y anualmente remitidas al laboratorio inmediato en jerarqua para establecer la concordancia de los resultados. Para la vigilancia de las infecciones parasitarias establecida por el Instituto Nacional de Salud llenar las fichas correspondientes. 9 Resultado positivo El informe debe contener el nombre del paciente, los agentes observados y su estadio o forma evolutiva: quistes (q), ooquistes (o), trofozotos (t), esporas (e), huevos (h) o larvas (l).9 La intensidad parasitaria puede expresarse cualitativa o semicuantitativamente: Cualitativamente: Escaso, regular o buena cantidad, segn sea el grado de facilidad o dificultad para ubicarlos. Semicuantitativamente: Contando las formas parasitarias: Si se observan 1 2 elementos en toda la lmina, escribir el nombre del agente y su estadio evolutivo (+) Si se observan de 2 a 5 elementos por campo microscpico 10x 40x. (++) Si se observan de 6 a 10 elementos por campo microscpico 10x 40x. (+++) Si se observan >10 elementos por campo microscpico 10x 40x. 2 3
Resultado negativo Informar que no se observaron quistes, trofozotos, ni huevos de parsitos. El diagnstico de una parasitosis no depende tan solo de la tcnica empleada, sino tambin de las precauciones que se observen al colectar la muestra, las cuales, deben ser colectadas en recipientes limpios y secos, de boca ancha, sin restos de detergente, o en un recipiente para muestras fecales (copropack), evitando se contamine con la orina, tierra u otra sustancia extraa. El recipiente debe ser etiquetado, anotando el nombre del paciente, la hora en que se colecto la fecha, el nmero de la muestra (si se est haciendo una serie de exmenes) e -indicar el tipo de examen que se desea, dado que la muestra puede ser empleada para varios propsitos. No se recomienda el uso de purgantes o supositorios. En nios con diarrea o disentera, es conveniente tomar la muestra con la cucharilla rectal Las heces diarreicas deben examinarse de inmediato, las dems antes de 34 hrs. refrigerarse para su conservacin9 Errores El que los reactivos no estn en condiciones ptimas (Frascos con fecha de elaboracin). Confusin de artefactos con formas parasitarias. Confusin de genero yo especie del parsito observado9
PRACTICA No. 1
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MANUAL DE PRCTICAS DE PARASITOLOGIA TIEMPO DE PRCTICA: 2 H
Organizacin y Funcionamiento del Laboratorio de Parasitologa

Introduccin Los anlisis clnicos son una parte esencial para el diagnstico, tratamiento, prevencin e investigacin de las enfermedades, y por tanto de las ciencias de la salud. Los laboratorios de anlisis clnicos desarrollan funciones especficas como: la toma de muestras, su identificacin, transporte, almacenamiento, proceso analtico y el informe de resultados. Tambin debe incluir asesora preanaltica y consultora postanaltica, de tal forma que se asegure que la informacin suministrada por el laboratorio sea clnicamente til. Los laboratorios de Anlisis Clnicos juegan un papel esencial en el diagnstico, tratamiento y seguimiento de enfermedades, y por ello los mtodos aplicados en los mismos deben ser exactos, precisos, especficos y comparables con los de otros laboratorios. Se debe seguir una poltica de garanta de la calidad en todas las actividades tcnicas, metodolgicas y de gestin. Esto supone asegurar la calidad de cada una de las etapas del procedimiento analtico, desde la preparacin del paciente para la toma de muestra hasta la realizacin del informe de resultados, y adems asegurar que las actividades de Control de Calidad se llevan a cabo adecuada y eficazmente. As pues, se hace cada vez ms necesario, cambiar el sistema de gestin y se ha de introducir el concepto de Gestin de Calidad para que se coordinen adecuadamente todos los recursos del laboratorio. An es ms reciente el impulso que se ha dado a los laboratorios con la mejora contina de la calidad, cuyo propsito es alcanzar la idoneidad del resultado analtico a travs de una revisin contina de los procedimientos; la correccin de los problemas cuando se detectan (acciones correctoras) e incluso la prevencin de dichos problemas (acciones preventivas); as como un estudio de la eficacia de la informacin generada. La apuesta por la calidad implica una organizacin estructurada, con una secuencia cclica de decisiones y acciones basadas en una Poltica de Calidad. Los Sistemas de Calidad se implantan utilizando normas de calidad y tienen su pilar en la documentacin. En el laboratorio clnico, las actividades a implantar, documentar y realizar pueden clasificarse en dos bloques: Actividades tcnicas que incluyen tres fases: Fase preanaltica, analtica y postanaltica y Actividades de gestin.17, 18,19
Fundamento 2 5
Las buenas prcticas en el laboratorio y la aplicacin de la normatividad vigente, juegan un papel indispensable en la obtencin de resultados confiables y fidedignos que garantizan y dan seguridad al paciente. Objetivo Conocer y familiarizarse con el laboratorio de parasitologa, el equipo y materiales que se emplean para el diagnstico de las enfermedades parasitarias. Material El necesario para realizar la metodologa convencional para el diagnstico parasitolgico. Reglamentos, normatividad, manuales de seguridad, control de calidad, diapositivas etc. Equipo Refrigeradores Centrifugas Microscopios Tcnica 1. Identificacin de los materiales y equipos que encuentran en este laboratorio, as como el uso y los cuidados que debe proporcionarle a cada uno de ellos 2. Conocimiento del reglamento interno de laboratorio, el cual se aplicar para marcar la pauta de comportamiento dentro y fuera del mismo. 3. Identificacin de la Normatividad que rige a este laboratorio NOM 166, NOM 087. 4. Aplicacin de la Norma 087 sobre el manejo de los R. P. B. I. (Residuos Peligroso Biolgico Infecciosos). 5. Identificacin de los controles de calidad para este laboratorio. Observaciones Se realizara un cuadro sinptico, mapa conceptual o mapa mental que contenga la informacin generada durante esta prctica-terica, la cual es fundamental para el curso de laboratorio de esta experiencia educativa.
Resultados 2 6
Se realizar un listado de los materiales, reactivos, equipos con los que cuenta el laboratorio, as como una descripcin detallada de los recipientes que se emplearan para desechar los RPBI, los controles de calidad que se llevaran a cabo en cada prctica. Bitcora 1. 2. 3. 4. 5. Que me pareci el laboratorio? Cul es la normatividad que rige a este laboratorio? A que me comprometo en este laboratorio? Mis propuestas de mejoramiento al laboratorio serian? Cmo me sent en el laboratorio?
Bibliografa 1. Craig - Faust Parasitologa Clnica Edit. Salvat Barcelona, 1984 2. Brown, H. W. Parasitologa Clnica Edit. Interamericana. Mxico, 1985 3. Buenas Prcticas de Higiene en el Manejo de los RPBI,NOM-087-SEMARNAT-SSA12002 4. Organizacin y funcionamiento de los Laboratorios Clnicos, NOM-166-SSA1-1997 5. Programa de Aseguramiento de la Calidad PACAL.
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CAPITULO 3 MTODOS PARASITOLGICOS
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INTRODUCCIN
Los exmenes parasitolgicos se pueden clasificar segn diversos parmetros y si se toma en cuenta el tipo y procedencia del producto biolgico en: Coproparasitoscopico (CPS) mediante los que se diagnostican las parasitosis intestinales y cuyo producto biolgico es la materia fecal. Los de cavidades, en los que los productos biolgicos son exudados. Los tisulares, en los cuales los productos biolgicos pueden ser una biopsia, el raspado de una ulcera, sangre, secreciones de lesiones etc.3 Examenes coproparasitoscopicos (CPS) El conjunto de tcnicas para llevar a cabo estos exmenes se conocen desde el siglo pasado, no obstante siguen siendo de las herramientas ms adecuadas para diagnosticar las parasitosis del aparato digestivo. En general, son todas aquellas tcnicas en las que se utiliza la materia fecal para alcanzar su objetivo pueden clasificar segn los diversos aspectos: Por el momento de su realizacin. Pueden ser inmediatos, como los coproparasitoscopicos (CPS) en fresco. Mediatos son aquellos en los que se utilizan muestras con una solucin conservadora y los que se hacen con la muestra tal y como la entregan los pacientes. Por el tipo de proceso de la muestra. Pueden ser por examen directo macroscpico o microscpico. los de concentracin son aquellos en los que se aplica flotacin, sedimentacin y termotropismo. Otros ms son los de dilucin, por cultivo, por aclaramiento y por tincin Por su expresin numrica pueden ser cualitativos y cuantitativos, y por la aplicacin de colorantes, se clasifican en los que se utiliza una preparacin hmeda y en los que la tincin es ms elaborada, pues requieren usar agentes fijadores y deshidratantes de la muestra. Estas tcnicas son las ideales para material museogrfico y para confirmar diagnsticos dudosos.3 Los mtodos coproparasitoscopicos se dividen en: 1) Cualitativos: Son aquellos que solo nos informan si hay o no formas parasitarias en el producto estudiado. 2) Cuantitativos: Nos dan a conocer numricamente cuantas formas parasitarias estn presentes, las cuales se reportan por gramo o mililitro de heces, segn la tcnica que se utilice.
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3) Especiales: Son mtodos que consideran procedimientos que simplifican y favorecen la recoleccin de formas parasitarias, de sitios poco usuales, como por ejemplo la regin perianal.
El examen coproparasitoscpico comprende: A) Examen macroscpico o fsico B) Examen microscpico A) Examen macroscpico o fisico Es muy importante determinar la consistencia de la materia fecal (formada, semiformada, suave o lquida), ya que puede orientar hacia el tipo de organismos que pudiera estar presentes; los trofozotos se encuentran habitualmente en muestras blandas o lquidas, rara vez en heces formadas, lo contrario para las formas qusticas. Fundamento Permite observar directamente las caractersticas morfolgicas de los parsitos adultos, enteros o fraccionados, as como los cambios en las caractersticas organolpticas de las heces eliminadas, (Color, Presencia de sangre y/o moco, Consistencia, etc.). Observaciones Determinar las caractersticas organolpticas de las heces, tiles para el diagnstico (consistencia, color, presencia de moco, sangre, alimento sin digerir), as como la presencia de gusanos cilndricos, anillados o aplanados (enteros o parte de ellos). Cantidad y frecuencia: La cantidad debe de ser de 100 a 200 gr. y la frecuencia de cada 24hrs. Forma y consistencia: La forma debe de ser pastosa y de olor caracterstico o ftido y la consistencia blanda, liquida y slida. Color: El color normal es amarillo claro pero puede mostrarse en caf, verde, amarillo obscuro. Olor : Este se presenta de dos formas caracterstico (Suie generis) o ftido. Moco : La presencia de moco nos indica gastritis, ulcera o amibiasis. Sangre : La sangre nos indica hemorragia intestinal por ulceras perforadas intoxicacin con medicamentos o cidos, hemorroides y en ocasiones amibiasis. 3 0
Resultado En caso que la muestra no sea normal, es decir, contenga informacin til para el diagnstico (ejemplo: presencia de glbulos rojos, fibras musculares no digeridas, mucus, etc.), se debe adicionar al informe del examen parasitolgico las caractersticas macroscpicas de las heces. Color. El color normal del excremento es marrn, aunque vara segn la dieta del individuo o la administracin de medicamentos. Consistencia. Las heces pueden presentar tres consistencias bsicas: Pastosa o heces formadas Semidiarreica o heces liquidas Diarreicas o heces semilquidas o lquidas con presencia de moco y/o sangre Presencia de objetos o elementos macroscpicos. Pueden estar presentes en la matria fecal diversos elementos, tales como: sangre, moco, restos de tejido, clulas epiteliales, alimentos no digeridos, etc. Podemos observar adultos de helmintos. B) Examen microscpico Fundamento Buscar, principalmente en muestras frescas, la presencia de formas evolutivas mviles de parsitos de tamao microscpico (trofozotos, quistes de protozoos: Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Balantidium coli, etc.; as como larvas o huevos de helmintos: Strongyloides stercoralis, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Trichostrongylus sp., Paragonimus, Fasciola, etc.). Observaciones Parasitos: Estos pueden ser cestodos, nematodos y protozoarios, Dibujar y describir detalladamente las formas evolutivas de los parsitos encontrados en el examen microscpico. Restos alimenticios: Estas son fibras de carne residuos de grasas y restos vegetales. Eritrocitos : Estos se deben a ulceras y hemorragias en los intestinos. Bacterias : Estas por lo regular son Gram negativas y Gram positivas Resultado 3 1
En un formato y en el cuaderno de registro correspondiente, se anotar el nombre de la especie del parsito y su estadio evolutivo, indicando la densidad (nmero de formas parasitarias por campo microscpico) expresado en cruces. Clasificacin de tcnicas coproprarasitoscopicas: Para efectuar este examen existen numerosas y diferentes tcnicas coproparasitoscpicas (CPS) con indicadores precisos segn el tipo, especie y fase del parsito que se pretende detectar, as como, el manejo de la muestra desde que se recibe hasta que se entrega el resultado.3 Tcnicas coproparasitoscpicas cualitativas: Examen Directo De flotacin con solucin de sacarosa Mtodo de la salmuera de Willis De concentracin por centrifugacin flotacin (Faust y Charles) De concentracin por sedimentacin con centrifugacin (Ritchie) Mtodo de sedimentacin simple en copas De concentracin por sedimentacin de muestras preservadas con MIF
Tcnicas coproparasitoscpicas cuantitativas Por dilucin de Stoll De Ferreira Mtodo de frote grueso de Kato y Miura Directo cuantitativo
Tcnicas coproparasitoscpicas especiales Amiba en fresco Mtodo de Graham Examen de contenido duodenal Mtodo de concentracin con el dispositivo de Baerman Tamizado de heces Cultivo de Harada Mori
Exmenes para el diagnstico de parasitosis tisulares y de cavidades Los parsitos tisulares son los que habitan en tejidos y cavitaros viven en cavidades del organismo como: intestino, vagina, boca, vasos sanguneos. Los parsitos tisulares dada sus mltiples ubicaciones y migraciones por los rganos y tejidos del cuerpo, pueden afectar,segn la especie, invadiendo y destruyendo las clulas (citolisis) como en el caso de Trypanosoma cruzi, o por la accin txica y/o enzimtica sobre los tejidos (histolisis.) los exmenes para el diagnstico pueden ser directos e indirectos.28 3 2
CAPITULO 4 METODOS COPROPARASITOSCOPICOS CUALITATIVOS
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INTRODUCCIN
Como ya se menciono los mtodos cualitativos son aquellos que nos informan si hay o no formas parasitarias en la muestra estudiada. Dentro de estos mtodos se emplean procedimientos que favorecen que los trofozotos, quistes, ooquistes, larvas y huevos, puedan concentrarse por diversas formas, lo cual permite corroborar el hallazgo del mtodo directo y conocer la intensidad del enteroparasitismo. Mtodos de concentracin. Estos procedimientos de concentracin pueden ser; de flotacin, sedimentacin, o por combinacin de ambos mtodos. La eleccin de cada procedimiento depender de las facilidades del laboratorio, el adiestramiento del personal, la procedencia de la muestra (zona geogrfica), el conocimiento de la prevalencia de los parsitos (zona costea, andina y selvtica o rea rural o urbana), y la especie del parsito que se desea investigar. Los mtodos de concentracin, que se realizan cuando los parsitos son escasos o no se encuentran en las preparaciones hmedas. Pueden aplicarse para huevos y larvas de helmintos y quistes de protozoarios. Las tcnicas de concentracin se dividen en mtodos de flotacin y de sedimentacin.1,3 Mtodos de concentracin por sedimentacin Se basa en la gravidez que presentan todas las formas parasitarias para sedimentar espontneamente en un medio menos denso y adecuado como la solucin fisiolgica. Para las tcnicas de sedimentacin las soluciones deben permitir que dichos elementos se renan en el fondo del tubo, en este mtodo es posible la deteccin de quistes, trofozotos de protozoarios, huevos y larvas de helmintos. Mtodos de concentracin por flotacin Para las tcnicas de flotacin las soluciones deben tener densidad mayor que los huevos, larvas quistes, as estos flotaran en la superficie de la solucin.
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PRACTICA No. 2 Examen directo en fresco

TIEMPO DE PRCTICA: 2 H
Introduccin El examen CPS directo en fresco se hace en dos variantes. En una de ellas se utiliza la solucin salina isotnica, y se recomienda para todos aquellos casos en que se desea investigar trofozoitos de protozoos como los de, Entamoeba histolytica, o larvas de Strongyloides stercoralis. No obstante se pueden identificar tambin otras formas parasitarias, aunque se requiere cierta experiencia. En la otra se usa solucin yodo-yodurada (lugol).esta es una excelente tcnica para identificar cualquier forma de parsitos intestinales, siempre y cuando se haga una buena homogenizacin de la materia fecal antes de tomar la muestra.3 Objetivo Realizar el mtodo directo en fresco con solucin salina y lugol para observar la presencia de parsitos intestinales. Fundamento Este examen se basa en utilizar cantidades pequeas de materia fecal y analizarla con solucin salina isotnica, la cual tiene la propiedad de considerarse el medio ideal para conservar todo tipo de parsitos y en cualquier fase de su desarrollo. El lugol permite la observacin de sus caractersticas y coloracin de los ncleos. Material biolgico Materia fecal humana Equipo Microscopio compuesto Material Porta objetos Cubre objetos Papel seda 3 5
Aplicadores de madera Toallas de papel Mantel individual de papel Reactivos Solucin salina isotnica Lugol parasitolgico Hipoclorito de sodio Tcnica 1. Colocar en un porta objetos, separadamente una gota de lugol y una de solucin salina. 2. Con el aplicador de madera, tomar una pequea porcin de la muestra (1-4 mg) y mezclar con la solucin salina. 3. Con el mismo aplicador, retirar las fibras y otros fragmentos gruesos. 4. Colocar el cubre objetos. 5. Realizar lo mismo en la gota de lugol 6. Observar al microscopio a 10x y 40x. Observaciones Dibujar los parsitos y los elementos no parasitarios observados durante la realizacin de esta prctica individual o grupal, as como las preparaciones permanentes mostradas por el profesor. Reporte Protozoarios: 1a4 Trofozoitos por campo (+) 5a8 Trofozoitos por campo (++) 9 o ms Trofozoitos por campo (+++) Helmintos: 1 a 5 Huevos en la preparacin (+) 9 a 15 Huevos en la preparacin (++) 15 o ms Huevos en la preparacin (+++) Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito 1 a 4 Quistes por campo (+) 5 a 8 Quistes por campo (++) 9 o ms Quistes por campo (+++)
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Resultado
Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente: ________________________________________________________________________ Sexo: ___________________Edad:___________Localidad:_________________________________________ Mtodo empleado: ___________________________________Fecha de recepcin de la muestra__________ Examen macroscpico: Olor: Color: Aspecto: Consistencia: Restos de alimentos y parsitos: Examen microscpico:
Fecha del examen_____________________________Responsable__________________________________
Bitcora 1-Qu me pareci la tcnica? 2- Qu sent al trabajar con este tipo de muestra biolgica? 3- Hubo alguna actividad con la que me haya costado trabajo involucrarme? 4.- Cmo considero que fue m desempeo en esta prctica? Conclusin Bibliografa 1. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998 2. De Haro Irene, Salazar Paz Mara, Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis, Edit. Mndez Editores Mxico D.F.1995 3. Romero Cabello Ral, Microbiologa y Parasitologa Humana, Bases Etiolgicas de las Enfermedades infecciosas, Edit. Panamericana, Mxico D.F. 1993 4. http://www.cecyt15.ipn.mx/polilibros/parasit/documentos/programa.htm 3 7
PRACTICA No. 3 Identificacin de Balantidium coli

Introduccin La balantidiosis es una protozoosis cuyas manifestaciones clnicas son muy similares a las que se presentan en la amibiasis, shigelosis y otras, por lo que debe recurrirse a exmenes de laboratorio para demostrar el agente etiolgico: Balantidium coli. Esta protozoosis es quiz la ms fcil de diagnosticar con exmenes de laboratorio que son sencillos, rpidos y baratos. El tipo de examen depender de la consistencia de la materia fecal que es el producto que debe examinarse; si es lquida o pastosa debe recurrirse al examen microscpico directo en fresco. En el que se debern buscar trofozotos grandes (58-120 m) de forma ovoidal, rodeados de cilios. En su citoplasma es posible observar vacuolas alimenticias y contrctiles, as como un macroncleo en forma de rin. Si la materia fecal es formada, deber estudiarse por mtodos de concentracin para buscar quistes. stos presentan forma esfrica o ligeramente ovoidal y miden de 40 a 65 m y se encuentran rodeados por una pared qustica gruesa transparente en el interior de la cual se observa al macroncleo y una hilera de cilios. 1 Objetivo Identificar protozoarios ciliados intestinales a partir de heces fecales de porcino. Fundamento Este mtodo se basa en la accin que presenta el lugol, reteniendo el colorante en los ncleos y al mismo tiempo establecer su nmero en los quistes de protozoarios, as mismo la solucin salina hace que estos aparezcan como cuerpos refringentes. Equipo Microscopio compuesto Material biolgico Muestra de material fecal de porcino. Material Portaobjetos Cubreobjetos Aplicadores de madera Mantel individual de papel 3 8
Reactivos Solucin salina normal. Solucin de lugol. Hipoclorito de sodio Tcnica 1.- Colocar una gota de solucin salina en un portaobjetos. 2.- Agregar 1 mg. de materia fecal y homogeneizar bien. 3.- Colocar el cubreobjetos procurando que no queden burbujas. 4.- Hacer lo mismo con una gota de lugol. 5.- Observar al microscopio con objetivo 10x y 40x. Observaciones Dibujar los parsitos observados durante esta prctica individual o grupal, as como las preparaciones permanentes mostradas por el profesor, en particular Balantidium coli Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito Resultado
Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Examen macroscpico: Olor: Color: Aspecto: Consistencia: Examen microscpico:
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Bitcora 1. 2. 3. 4. Qu aprend en esta prctica? Cmo fue mi actitud en cuanto a las actividades que realice? En que actividades me compromet? Cules fueron las dificultades para obtener la muestra?
Conclusin Bibliografa 1. De Haro, A. l., Salazar, S. P. M. Cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995. 2. Tood - Sanford - Davidsohn. Diagnstico y tratamiento clnico por el laboratorio. Edit. Salvat. Espaa, 1984. Tay Lara, Velazco Gutirrez, Parasitologa Mdica, Edit. Mndez Editores, Mxico D.F. 1999. 3. Faust, E. Parasitologa Clnica, Edit. Salvat Mexicana, Mxico D.F. 1998 4. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998
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PRACTICA No. 4 Mtodo de Willis

CPS de concentracin por flotacin simple
Introduccin Esta tcnica es cualitativa de concentracin; se conoce como flotacin de Wills. Es muy antigua, ya que se utiliza desde 1921 y, adems, es ideal para trabajo de campo, pues la solucin saturada de NaCl (sal comn o de mesa) se puede hacer en cualquier recipiente el mtodo indicado para cualquier forma parasitaria, excepto para trofozoitos. La lectura se debe tomar pasado el tiempo sealado para evitar deformaciones de las fases de parsitos. La materia fecal se puede utilizar con soluciones conservadoras o sin ellas. 3 Objetivo Realizar una tcnica coproparasitoscpica para observar helmintos y algunos protozoarios que por flotacin simple se hacen presentes, utilizando cloruro de sodio. Fundamento Este mtodo se basa en un principio de flotacin simple utilizando una solucin de cloruro de sodio de una densidad alta de 1.200 y 1.250 B en la cual los quistes, huevos y larvas de los parsitos menos densos flotan. Equipo Microscopio compuesto Densmetro Material biolgico Heces fecales humanas Material Portaobjetos Cubreobjetos Tubos de ensaye 13 x 100 Aplicadores de madera Mantel individual de papel 4 1
Reactivos Solucin sobresaturada de cloruro de sodio(salmuera) Lugol parasicolgico Hipoclorito de sodio Tcnica 1. 2. 3. 4. Colocar de 2 a 3 gr. Aproximadamente, de heces fecales en un tubo de ensaye 13 x 100 Agregar 5 ml. De cloruro de sodio, se homogeniza con el aplicador de madera. Se aade ms salmuera y se sigue agitando hasta que se llene al tope. Colocar un portaobjetos sobre la boca del tubo de ensaye, de tal manera que quede en contacto con la suspensin y se deja reposar de 15 a 30 min. 5. Se toma el portaobjetos, se agrega una gota de lugol y se coloca el cubreobjetos 6. Observar al microscopio en objetivo 10x y 40 x Observaciones Dibujar las estructuras parasitarias y elementos no parasitarios observados durante esta prctica individual o grupal, as como las preparaciones permanentes mostradas por el profesor. Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito Reporte Protozoarios: 1a4 Trofozoitos por campo (+) 5a8 Trofozoitos por campo (++) 9 o ms Trofozoitos por campo (+++) Helmintos: 1 a 5 Huevos en la preparacin (+) 9 a 15 Huevos en la preparacin (++) 15 o ms Huevos en la preparacin (+++) 1 a 4 Quistes por campo (+) 5 a 8 Quistes por campo (++) 9 o ms Quistes por campo (+++)
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Resultado
Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente: _______________________________________________________________________ Sexo: ___________________Edad:___________Localidad:_________________________________________ Metodologa empleada: _________________________________Fecha recepcin de la muestra___________ Examen macroscpico: Olor: Color: Aspecto: Consistencia: Restos de alimentos y parsitos: Examen microscpico:
Bitcora 1. 2. 3. 4. 5. Qu aprend en esta prctica? Cmo fue mi actitud en cuanto a las actividades que realice? Se como preparar el reactivo que emplee? Le la prctica antes de llegar al laboratorio? Qu dificultades se presentaron durante la prctica?
Conclusin Bibliografa 1. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998 2. De Haro, A. L Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995 4 3
3. Craig - Faust Parasitologa Clnica Edit. Salvat Barcelona, 1984
PRACTICA No. 5 Mtodo de Faust

CPS de Concentracin por Centrifugacin y Flotacin
Introduccin El coproparasitoscopico de concentracin por centrifugacin por flotacin, se conoce como tcnica de Faust, ya que fue l quien la diseo en 1938. Es una de las ms populares; se utiliza prcticamente en todos los laboratorios de sector salud y privados. Debido a que concentra una buena cantidad de quistes huevos y larvas, estas formas parasitarias son encontradas con facilidad, debido a que las preparaciones quedan con pocos artefactotes, es poco eficaz para huevos pesados como los de Taenia spp., Faciola hepatica y ovulos de A. lumbricoides. El sulfato de zinc en solucin con una densidad de 1.10 B, adems de tener mayor peso que algunos parsitos, no produce deformacin de los mismos cuando se suspenden heces en esta solucin, los huevos, quistes y larvas flotan sin sufrir alteraciones morfolgicas.1,7 Objetivo Realizar la tcnica cualitativa de centrifugacin por flotacin de Faust para la bsqueda de quistes, huevos y larvas de menor peso que el sulfato de Zinc. Fundamento Este mtodo se basa en una combinacin de los principios de flotacin y gravitacin, ya que permite una mejor separacin de los parsitos. En los mtodos de flotacin los parsitos existentes son recogidos en la pelcula superficial, debido a que presentan menor peso que la solucin empleada. Equipo Microscopio compuesto Centrfuga Material biolgico Heces fecales humanas Material Tubos de ensaye 13 x 100 4 4
Porta objetos Cubre objetos Pipeta Pasteur tallo corto Bulbo de goma Pizeta Papel seda Densmetro Aplicadores de madera Gradilla metlica Embudo tallo corto Gasa o manta de cielo Toallas de papel Mantel individual de papel.
Reactivos Sulfato de zinc al 33 % ( 1.180 B) Lugol parasitolgico Agua destilada Hipoclorito de sodio
Tcnica 1. Colocar en un recipiente adecuado, la materia fecal y homogenizar con agua. 2. Pasar a un tubo de 13 x 100 una parte de muestra homogenizada en proporcin 1:10 con agua. 3. Centrfugar a 2500 rpm. Durante un minuto. 4. Decantar y resuspender con agua. 5. Centrifugar a 2500 rpm. Durante un minuto. 6. Decantar. 7. Colocar cuidadosamente el tubo en la gradilla y agregar el Sulfato de Zinc hasta 1 cm antes del borde. 8. Centrifugar a 2500 rpm. durante un minuto. 9. Colocar cuidadosamente el tubo en la gradilla y agregar el Sulfato de Zinc hasta el borde, de modo que forme un menisco que sobresalga ligeramente del tubo. 10. Dejar reposar por 3 minutos. 11. Colocar en un portaobjetos limpio una gota de lugol. 12. Tomar por oposicin, la superficie del menisco con un cubre objetos y colocarlo sobre la gota de lugol en el porta objetos. 13. Observar al microscopio a 10x y 40x. Observaciones Dibujar las estructuras parasitarias y elementos no parasitarios observados durante esta prctica de forma individual o grupal, as como las preparaciones mostradas por el profesor. 4 5
Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito Reporte Protozoarios: 1a4 Trofozoitos por campo (+) 5a8 Trofozoitos por campo (++) 9 o ms Trofozoitos por campo (+++) Helmintos: 1 a 5 Huevos en la preparacin (+) 9 a 15 Huevos en la preparacin (++) 15 o ms Huevos en la preparacin (+++) Resultado
1 a 4 Quistes por campo (+) 5 a 8 Quistes por campo (++) 9 o ms Quistes por campo (+++)
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Bitcora 1. 2. 3. 4. 5. Qu habilidades desarrolle en esta prctica? Cul fue mi actitud ante los problemas que se me presentaron? Cmo fue mi participacin en las actividades que realice? Con qu actividades me compromet? Qu es lo que ms me distrae en el laboratorio?
Conclusin Bibliografa 1. Tay Lara, Velazco Gutirrez, Parasitologa Mdica, Edit. Mndez Editores, Mxico D.F. 1999. 2. Tood - Sanford - Davidsohn. Diagnstico y Tratamiento Clnico por el Laboratorio. Edit. Salvat. Espaa, 1984. 3. Faust, E. Parasitologa Clnica, Edit. Salvat Mexicana, Mxico D.F. 1998 4. De Haro, A. L Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995. 5. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998
4 7
PRACTICA No. 6 Mtodo de Ritchie

CPS de Concentracin por Centrifugacin y Sedimentacin
Introduccin Se le conoce en los laboratorios de diagnstico como la tcnica del formol ter. Se utiliza una solucin de formalina al 10%, la cual sirve para fijar las formas parasitarias y el ter para liberarlas. Se recomienda la utilizacin de tubos de centrifuga cnicos, lo que hace que la tcnica no sea muy popular por la carencia de los mismos. No obstante, es posible utilizar los tubos de 13X 100 mm. con resultados satisfactorios.1,3 Objetivo Desarrollar la tcnica de Ritchie, para demostrar la importancia que tiene en la mayora de los casos el anlisis del sedimento en un examen de este tipo. Fundamento El empleo de ter, permite que las formas parasitas se separen de las grasas por disolucin de las mismas, y con el formol se fijan y conservan. Hacindose la concentracin por centrifugacin sucesiva Esto debido a que a veces las formas parasitarias son un poco ms pesadas y no flotan, por lo tanto en el sedimento las podemos localizar. Equipo Microscopio compuesto Centrifuga Material biolgico Heces fecales humanas Material Tubos de ensaye Porta objetos 4 8
Cubre objetos Pipeta Pasteur tallo corto Bulbo de goma Pizeta Densmetro Papel seda Aplicadores de madera Gradilla metlica Embudo tallo corto Gasa o manta de cielo Toallas de papel Mantel individual de papel
Reactivos ter sulfrico o ter de petroleo Solucin de formaldehdo 10% Solucin salina isotnica Lugol parasitolgico Hipoclorito de sodio Jabn
Tcnica 1. Colocar en un recipiente adecuado, una pequea porcin de materia fecal (1a2g aproximadamente). 2. Aadir 10 ml de solucin salina isotnica y homogeneizar. 3. Tamizar la suspensin y recibir el contenido en tubo. 4. Centrifugar a 2000 rpm durante 1 minuto. 5. Decantar el sobrenadante y resuspender el sedimento con solucin salina, centrifugar y decantar nuevamente (lavar). 6. Agregar al sedimento 3 ml de solucin de formaldehdo al 10%, mezclar y dejar reposar durante 5 minutos. 7. Aadir 2.5 ml de ter, tapar el tubo con el tapn y agitar por inversin durante 30 seg. 8. Destapar con cuidado. 9. Centrifugar a 1500 rpm. durante 2 minutos. 10. Despus de centrifugar se observan 4 capas: ter en la superficie Un tapn de restos fecales Formaldehdo Sedimento conteniendo los elementos parasitarios 1. En un porta objetos colocar una gota de lugol. 2. Introducir una pipeta Pasteur a travs de las primeras capas hasta llegar al sedimento extraer con cuidado una gota del mismo 3. Colocar la gota de sedimento sobre la de lugol y un cubre objetos sobre ellas. 4 9
4. Observar al microscopio a 10x y 40x.
Fig. 1. Mtodo de Ritchie
Observaciones Dibujar las estructuras parasitarias y elementos no parasitarios observados durante esta prctica de forma individual o grupal, as como las preparaciones mostradas por el profesor. Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito Reporte Protozoarios: 1a4 Trofozoitos por campo (+) 5a8 Trofozoitos por campo (++) 9 o ms Trofozoitos por campo (+++) Helmintos: 1 a 5 Huevos en la preparacin (+) 5 0 1 a 4 Quistes por campo (+) 5 a 8 Quistes por campo (++) 9 o ms Quistes por campo (+++)
9 a 15 Huevos en la preparacin (++) 15 o ms Huevos en la preparacin (+++)
Resultado
Bitcora 1. 2. 3. 4. Qu me pareci esta prctica? Qu opino de los resultados obtenidos? En que actividades me compromet? Cules fueron las dificultades durante el desarrollo del mtodo?
Conclusin Bibliografa
5 1
1. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998 2. De Haro, A. L Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995 3. Craig - Faust Parasitologa Clnica Edit. Salvat Barcelona, 1984
PRACTICA No. 7
Mtodo de Sheather Sugar

Tcnica de concentracin por flotacin Introduccin Otra tcnica muy utilizada, es la de flotacin simple en solucin saturada de sacarosa (azcar de mesa). Algunos parasitlogos recomiendan una densidad de la solucin sacarosa de 1.200B. Esta tcnica, como la Willis, tambin puede provocar la deformacin de las formas parasitarias, por lo que la lectura se debe de hacer 15 a 20 minutos despus de hacer el homogeneizado. Tambin es posible utilizar muestras con diversos conservadores. Este examen es apropiado para la observacin y registro de ooquistes de Isospora, Cryptosporidium, Cyclospora y Sarcocystis.1,3 Objetivo Realizar un mtodo de concentracin por flotacin con centrifugacin en una solucin de azcar. Fundamento Se basa en la flotacin de quistes, ooquistes y huevos de parsitos en una solucin de azcar que posee mayor densidad que ellos. Esta tcnica es til para la concentracin de quistes y ooquistes de protozoos y huevos de helmintos y se usa como mtodo preferencial en el diagnstico de los coccidios; Cryptosporidium, Cyclospora, Isospora, etc. Material biolgico Heces fecales humanas Materiales Tubos de ensayo 13 x 100. Portaobjetos. Cubreobjetos. Aplicadores de madera Asa de platino. Gradilla para tubos de ensayo. 5 2
Embudo de vidrio. Gasa. Toallas desechables Manteles individuales de papel. Reactivos Solucin sobresaturada de azcar Solucin salina Lugol parasitologico Tcnica 1. Homogeneizar 1 a 2 g de materia fecal en suero fisiolgico. 2. Colocar un embudo de vidrio con una gasa doblada en la abertura del tubo de ensayo y filtrar el material homogeneizado. 3. Centrifugar el tubo con el material homogeneizado a 1 500 r.p.m. durante 2 a 5 minutos. 4. Eliminar el sobrenadante, y agregar la solucin de azcar hasta 1 cm del borde del tubo, agitar hasta disolver el sedimento, centrifugar como en el paso anterior, completar con la solucin de azcar hasta el borde y esperar de 2 a 5 minutos la formacin de un menisco. 5. Con la ayuda del asa de platino, tomar una muestra de la superficie del menisco y colocarla en una lmina portaobjeto, agregar lugol, cubrir con una laminilla y observar al microscopio. 6. Si se observan coccidios, de la superficie del preparado, tomar con la asa de platino o con una pinza curva, una muestra para preparar un frotis para teir por el mtodo de ZiehlNeelsen modificado. Observaciones Dibujar las estructuras parasitarias y elementos no parasitarios observados durante esta prctica individual o grupal. Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito Reporte Protozoarios: 1a4 Trofozoitos por campo (+) 5a8 Trofozoitos por campo (++) 9 o ms Trofozoitos por campo (+++) Helmintos: 5 3 1 a 4 Quistes por campo (+) 5 a 8 Quistes por campo (++) 9 o ms Quistes por campo (+++)
1 a 5 Huevos en la preparacin (+) 9 a 15 Huevos en la preparacin (++) 15 o ms Huevos en la preparacin (+++)
Resultado
Bitcora 1. 2. 3. 4. Cules fueron las dificultades durante el desarrollo del mtodo? Qu aprend en esta prctica? Cmo fue mi actitud en cuanto a las actividades que realice? Qu ventajas ofrece el mtodo con otras tcnicas de este tipo?
Conclusin Bibliografa 5 4
1. De Haro, A. L Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico morfolgico de las parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995 2. Becerril Flores, Romero Cabello. Parasitologa Medica de las Molculas a la Enfermedad Edit. Mc. Graw Hill 2004 3. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998
PRACTICA No. 8 Mtodo de Charles

CPS de Concentracin por Centrifugacin y Sedimentacin
Introduccin Es una tcnica utilizadas con frecuencia en los laboratorios El mtodo se usa para huevos, quistes y larvas, no importa la densidad que tengan, hace muy buena concentracin de estas formas parasitarias, pues eliminan bastantes detritus orgnicos con el ter; el motivo por el cual se utiliza formol es para mantener la integridad de las formas parasitarias que concentra, por sus caractersticas de fijador. Una desventaja de esta tcnica es que las preparaciones quedan con muchos artefactos que sedimentan e interfieren con la lectura.6, 10 Objetivo Realizar la tcnica de Charles para la bsqueda de formas parasitarias. Fundamento Mtodo basado en la propiedad que tienen las soluciones de densidad baja, de precipitar objetos ms densos, lo que hace que muchas formas parasitarias sedimenten. Equipo Microscopio compuesto Centrfuga Material biolgico Heces fecales humanas Material 5 5
Tubos de ensaye Porta objetos Cubre objetos Pipeta Pasteur tallo corto Bulbo de goma Tapn de hule Pizeta Papel seda Aplicadores de madera Gradilla metlica Embudo tallo corto Gasa o manta de cielo Manteles individuales de papel
Reactivos Charles I Charles II ter sulfrico Lugol parasitolgico Hipoclorito de sodio
Tcnica 1. 2. 3. 4. 5. 6. Colocar en un recipiente adecuado una pequea cantidad de materia fecal (1 a 2gr.). Agregar reactivo de Charles I, en porcin 1:10 y homogeneizar. Colar la suspensin y recoger en tubo de ensaye. Centrifugar a 2000 rpm. durante un minuto. Decantar. Agregar al sedimento, reactivo de Charles II hasta la mitad del volumen del tubo y homogeneizar. 7. Agregar 0.5 ml de ter sulfrico, colocar un tapn de hule y agitar por inversin. (Precaucin: el ter es muy voltil) 8. Quitar el tapn y centrifugar a 2000 rpm. durante 30 seg. 9. Romper, con un aplicador, el tapn de grasas y heces que se forme. 10. Centrifugar a 2000 rpm. durante 20 seg. 11. Decantar 12. Tomar con pipeta Pasteur una gota del sedimento, agregar una gota de lugol, cubrir con cubreobjetos. 13. Observar al microscopio a 10x y 40x Observaciones Realizar dibujos de todas las fases parasitarias observadas durante la prctica. 5 6
Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito
Reporte Protozoarios: 1a4 Trofozoitos por campo (+) 5a8 Trofozoitos por campo (++) 9 o ms Trofozoitos por campo (+++) Helmintos: 1 a 5 Huevos en la preparacin (+) 9 a 15 Huevos en la preparacin (++) 15 o ms Huevos en la preparacin (+++) Resultado
5 7
Bitcora 1. 2. 3. 4. Qu ventajas ofrece este mtodo? Qu desventajas presenta esta tcnica? Cmo fue mi actitud en cuanto a las actividades que realice? Qu problemas se me presentaron en esta Prctica?
Conclusin Bibliografa 1. Craig - Faust Parasitologa clnica Edit. Salvat Barcelona, 1984 2. Brown, H. W. Parasitologa clnica. Edit. Interamericana. Mxico. 1985 3. De Haro, A. L Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995
5 8
CAPITULO 5
METODOS COPROPARASITOSCOPICOS CUANTITATIVOS
INTRODUCCIN
5 9
Los exmenes coproparasitoscopicos cuantitativos son utilizados para hacer una evaluacin de la intensidad de ciertas helmintosis como Ascarosis, Tricocefalosis, Uncinariosis, Himenolepiosis y Estrongiloidiosis Algunos mtodos que se utilizan para relacionar la eliminacin de huevos de un helminto con la masividad de la parasitosis, la cual se entiende como aquella en la que los signos y sntomas son muy especficos de la misma. Cuando se describi el CPS directo en fresco, se trato tambin la variable cuantitativa. Debido a que solo se evala masividad en las helmintiasis, las tcnicas cuantitativas son las mejores para las mismas. Existen diversas tcnicas como se menciona en la clasificacin de los exmenes coproparasitoscopicos en este capitulo se incluyeron dos; el Mtodo de Stoll uno de los ms frecuentemente usados y el examen directo. Una aplicacin ms del CPS directo en fresco es que se puede utilizar para informes cuantitativos, siempre y cuando se estandarice la cantidad de materia fecal necesaria para efectuar la tcnica, y mediante una regla de tres simple se obtiene el nmero de huevos por gramos de heces que contiene la muestra. Por lo regular, la cantidad necesaria para aplicar un mtodo como este es de 2 a 3 mg. de materia fecal para un cubre objetos. Estas tcnicas cuantitativas para el recuento de parsitos permiten obtener datos en los casos de que se sospeche un parasitosis significativa. La produccin de huevecillos estar en relacin directa con el nmero de hembras fecundadas que deponen huevos. Este mtodo es una simplificacin del mtodo estndar de Beaver. La simplificacin deriva del conocimiento que las preparaciones directas que se utilizan en la rutina para el examen de heces contienen entre 1.5 mg y 2.5 mg. El Mtodo consiste en colocar 1-2 gotas de solucin salina en cada extremo del portaobjeto. Con un aplicador de madera, tomar un proporcin de heces y emulsificar en cada una de las gotas de la solucin salina. Cubrir cada preparacin con cubreobjetos. Contar de forma individual los huevos de scaris, Trichuris y/o uncinaria presentes en cada preparacin. Sacar la media. Los Resultados se reportan como: nmero de huevos por frotis de heces o bien multiplicar este resultado por 500 y multiplicar por 500 e informar como nmero de huevos/gramo de heces.1, 3,22
PRCTICA No. 9
6 0
Mtodo Coproparasitoscopico de Stoll

Introduccin El examen coproparasitoscopico por dilucin se conoce en todo el mundo como tcnica de Stoll. En ella se emplea una solucin de hidrxido de sodio 0.1 N (dcimo normal). Originalmente se ideo y se diseo para cuantificar huevos de Ancylostoma duodenale y Necator americanus; despus se popularizo y desde 1923, en que se publico la tcnica original, hasta la actualidad se sigue utilizando. Este mtodo requiere de probetas y pipetas calibradas, pues se debe hacer una suspensin de materia fecal-solucin de hidrxido de sodio 1:15; de esta dilucin se obtiene un factor por el que se multiplica el nmero de huevos encontrados para reportarlos como h/ml/h (huevos por mililitro o gramos de heces). Debido a que la cantidad de muestra para hacer la dilucin es pequea en comparacin con el relativamente grande de la solucin de hidrxido de sodio, las posibilidades de valuar con xito las helmintosis moderadas estn disminuidas, pues todava se manejan volmenes de materia fecal ms pequeos que los que se utilizan en el examen directo. Por el hecho de no utilizar tincin temporal, no se observan los quistes, pues se aclaran con el hidrxido de sodio, por tanto es un mtodo especifico para helmintosis.1, 3 Objetivo Realizar una tcnica cuantitativa por dilucin que nos permita determinar especficamente helmintosis masiva, que se presentan con manifestaciones severas. Fundamento Su fundamento es bsicamente aritmtico, los clculos son muy simples se basan en las diluciones empleadas y en los principios de saponificacin, homogeneizacin y aclaramiento producido por el uso del hidrxido de sodio. Material Biolgico Muestra de materia fecal humana Material Probeta graduada con tapn esmerilado de 100 ml. Pipeta graduada de 1 a 2 ml en 0.01 ml. Portaobjetos Cubreobjetos Varilla de vidrio de 20 cm. de longitud
Reactivos 6 1
Hidrxido de sodio al 0.l N Luqol parasitologico Equipo Microscopio compuesto Tcnica 1. Colocar 56 ml. de NaOH al 0.1 N en una probeta de 100 ml. 2. Aadir 4 grs. de materia fecal con la varilla de vidrio, o hasta aforar a 60 ml. procurando no ensuciar la boca de la probeta, pues esto aumentara la cantidad de heces contenidas en la deteccin. 3. Esperar un tiempo a que las heces fecales reblandezcan si son duras. 4. Agregar las perlas de vidrio. 5. Tapar la probeta con el tapn esmerilado o de hule y agitar fuertemente, de arriba abajo, durante 1min., hasta formar una suspensin homognea. 6. Tomar inmediatamente 0.150 ml. o 0.075 ml. de la suspensin en cuanto haya cesado la agitacin y los restos fecales y huevos comiencen a bajar al fondo; con una pipeta colocarlos en un portaobjetos. 7. Aadir una gota de lugol, asegurando una tincin uniforme colocar el cubreobjetos procurando no hacer vaco. 8. Observar la preparacin al microscopio en 10 x y 40 x. Recomendaciones Dada la dilucin de las muestras tomar de preferencia 0.150 ml de la suspensin y verificar que el pipteo sea exacto, para no alterar el factor de dilucin. Observaciones Dibujar los elementos parasitarios y artefactos encontrados en la preparacin de forma individual y grupal.
Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito
Forma de reportar 6 2
El nmero de huevos o larvas contados en todos los campos de la preparacin se multiplica por los siguientes factores, segn se hayan tomado 0.075 0.15 ml de la suspensin, y tambin en consideracin a la consistencia de la muestra de materia fecal. Tabla 3. Factores de correccin para el reporte del Mtodo de Stoll heces Duras Pastosas Lquidas Duras Pastosas Lquidas muestra 0.75 0.75 0.75 0.150 0.150 0.150 factor 200 400 800 100 200 400
El resultado se expresa en huevos o larvas por mililitro de heces (h/ml/h). Por ejemplo, si la materia fecal es pastosa y se encontraron en todos los campos 4 huevos de Uncinaria 4 x 200 = 800 Se reportara as: 800 h/ml/h de uncinarias. Resultado
Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente: _______________________________________________________________________ Sexo: ___________________Edad:___________Localidad:_________________________________________ Metodologa empleada: _________________________________Fecha recepcin de la muestra___________
Examen macroscpico: Olor: Color: Aspecto: Consistencia: Restos de alimentos y parsitos:
Examen microscpico: Fecha del examen_____________________________Responsable__________________________________
6 3
Bitcora 1. 2. 3. 4. Qu aprend en esta prctica? Cmo fue mi actitud en cuanto a las actividades que realice? En que actividades me compromet? Cules fueron las dificultades durante el desarrollo del mtodo?
Conclusin Bibliografa 1. Craig - Faust Parasitologa Clnica Edit. Salvat Barcelona, 1984 2. Brown, H. W. Parasitologa Clnica. Edit. Interamericana. Mxico. 1985 3. De Haro, A. L Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995 4. Dreyer, G., Fernndez-Silva, E, Alves, S., Rocha, A, Albuquerque, R. and Addiss, D. 1996. Patterns of detection of Strongyloides stercoralis in stool specimens: implications for diagnosis and clinical trials. J. Clin. Microbiol. 5. Giovanni J. Xool Castellanos, Responsable de rea de coproanalisis Universidad Autonoma de Yucatn. Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de coproanlisis. 2009
6 4
CAPITULO 6 METODOS ESPECIALES PARA DIAGNOSTICO DE PARASITOS DEL APARATO DIGESTIVO
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INTRODUCCIN
En este grupo de exmenes se encuentran todas aquellas tcnicas que auxilian para establecer el diagnstico de parasitosis cuyas formas parasitarias requieren de tcnicas especiales para lograrlo. Por ejemplo en los casos de Fasciolosis, Giardiosis y Estrongiloidosis, para asegurar su diagnstico se requerirn, adems de los coproparasitocopicos, otras tcnicas. En este grupo de mtodos se consideran procedimientos que simplifican y favorecen la recoleccin de formas parasitarias, de sitios poco usuales como la regin perianal. Tambin la recoleccin de parsitos adultos, progltidos o estrbilos de cstodos ameritar el uso de mtodos adicionales. En este capitulo se incluyen el mtodo de amiba en fresco, estudio citolgico de moco fecal, mtodo de Graham los cuales en seguida se describirn.
6 6
PRACTICA No. 10 Amiba en fresco

Introduccin Una de las protozoosis intestinales con las que se enfrenta el mdico con cierta frecuencia es la amibiasis. Desde el punto de vista clnico esta parasitosis es similar a otras entidades por lo que es muy importante recurrir a diferentes exmenes de laboratorio, que permitan poner en evidencia al agente etiolgico que es E. histolytica. Ahora bien, es relativamente fcil la bsqueda de trofozotos y quistes de este protozoo, en la materia fecal. Los trofozotos miden de 10 a 65 micrmetros de dimetro. En su citoplasma se puede diferenciar el ectoplasma hialino hacia la periferia, as como un endoplasma granuloso con aspecto de vidrio molido. Su ncleo, localizado hacia el centro muestra un endosoma central, con grnulos de cromatina pequeos adosados a la membrana nuclear. Los trofozotos poseen movimiento activo, resultante de la formacin de seudpodos (prolongaciones digitiformes de endoplasma) Los quistes de E. histolytica miden de 5 a 20 micrmetros con una forma ovoide o esfrica dada por su pared qustica. En los quistes maduros se pueden observar cuatro ncleos con cariosoma central y cromatina fina perifrica. 20, 5,
7,2
Recomendaciones Cuando se trata de lactantes, no es conveniente obtener la muestra del paal, por que con frecuencia ya se habrn destruido los trofozotos. Se puede realizar una toma directa en la cual se introducen una cucharilla rectal o hisopo en el recto del lactante (aprox. 5 cm), se har girar suavemente para obtener la muestra de materia fecal, se saca y se deposita en un tubo de ensaye que contenga solucin salina (el volumen deber ser suficiente para cubrir la muestra recolectada). Luego de realizar la toma directa de la muestra esta se centrfuga durante 5 min. a 1000 r.p.m. Posteriormente se decanta el sobrenadante y observar el sedimento con el objetivo de 10x y 40x. En caso de que el sobrenadante presente mucha turbidez, se puede mezclar para homogenizar y tomar una gota del sobrenadante para la observacin microscpica. Objetivo Realizar y comprender la importancia de la tcnica especial de amiba en fresco, as como el procedimiento para efectuarla y los cuidados que deben observarse durante su desarrollo Fundamento El anlisis que se realiza en el laboratorio es de suma importancia ya que ayuda a diferenciar a una amibiasis de distintos procesos de disenteras y enfermedades del tracto gastrointestinal. Gracias a esta tcnica se pueden detectar los trofozoitos de Entamoeba histolytica, resultando de gran utilidad en el servicio de urgencias donde es importante realizar un diagnstico rpido y eficaz para ofrecer un tratamiento seguro. Material biolgico 6 7
Materia fecal recientemente emitida preferentemente diarreica y muco sanguinolenta Material Porta objetos y Cubre objetos Cucharilla rectal (en caso de ser necesario) Toallas de papel Mantel individual de papel
Equipo Microscopio compuesto Reactivos: Solucin salina isotnica a 37 C Hipoclorito de sodio Tcnica 1. Tomar una muestra de materia fecal recientemente emitida en un recipiente adecuado segn la procedencia de la muestra. 2. En caso de ser necesario utilizar cucharilla rectal la cual se introduce unos dos centmetros en el recto del paciente, hacindolo girar y dndole otros movimientos con tal de recoger materia fecal. 3. El material recogido, a travs de la cucharilla rectal se deposita en solucin salina colocada con anterioridad en un tubo. 4. Con la muestra se puede hacer examen directo y/o siembra para protozoarios. 5. Para el caso del examen directo; se coloca una gota de solucin salina fisiolgica 0.9 % a 37C en un portaobjetos. 6. Tomar una pequea porcin de la muestra con un aplicador de madera, especialmente de las partes donde existe moco sanguinolento. 7. Hacer una suspensin fina con la materia fecal y la solucin salina. 8. Colocar un cubre objetos, procurando no hacer vacos. 9. Observar al microscopio la preparacin, recorrindola sistemticamente con objetivo 10 x y 40 x. Observaciones Dibujar el parasito observado y las caractersticas fsicas de la muestra. Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito. 6 8
Resultado
Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente: ________________________________________________________________________ Sexo: ___________________Edad:___________Localidad:_________________________________________ Mtodo empleado: ___________________________________Fecha de recepcin de la muestra___________ Examen macroscpico: Olor: Color: Aspecto: Consistencia: Restos de alimentos y parsitos: Examen microscpico:
Bitcora 1-Qu caractersticas debe reunir la muestra para esta determinacin 2-Que factores influyeron en el resultado obtenido? 3-Cules fueron las dificultades que se me presentaron al realizar esta prctica? 4-Que dificultades tuve para la obtencin de la muestra? 5-Cmo considero que fue m desempeo en esta prctica? Conclusin Bibliografa 1. De Haro, A. l., Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995. 2. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998 3. Craig - Faust Parasitologa clnica Edit. Salvat Barcelona, 1984
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PRACTICA No. 11 Estudio citolgico de moco fecal

Introduccin En condiciones normales, las heces no suelen contener clulas epiteliales, ni leucocitos, ni eritrocitos. Es fcil apreciar la presencia de leucocitos. En la deposicin mucosa de los que sufren alergia intestinal se observa un exceso de eosinfilos. La presencia de clulas epiteliales es un indicador de irritacin gastrointestinal. La observacin microscpica del moco fecal en fresco con azul de metileno tiene utilidad para evaluar la clularidad de la muestra y la posible presencia de parsitos. Aunque la positividad de la citologa de moco fecal es relativamente baja en la mayora de las diarreas agudas que son de etiologa viral, al igual que el bajo porcentaje del aislamiento en coprocultivos6,10 Objetivo Determinar en procesos parasitarios la presencia de clulas polimorfonucleares, en pacientes con cuadros diarreicos o desinteriformes. Fundamento En muestras mucosanguinolentas el colorante policromtico de Wright, acta especficamente sobre algunas estructuras celulares aclarndolas y al mismo tiempo favoreciendo la identificacin de los parsitos. Material biolgico Muestra de materia fecal mucosanguinolenta. Material Puente de vidrio. Cubreobjetos Portaobjetos. Aplicadores de madera. Mechero de Bunsen. Equipo Contador de clulas sanguineas Microscopio compuesto.
7 0
Tcnica 1. Hacer dos o ms frotis delgados, procurando tomar de la parte mucosa de la evacuacin. 2. Si es una muestra recogida con cucharilla rectal, se hace directamente el frotis, procurando que no pase 15 min. entre la toma de muestra y la realizacin del frotis ya que las clulas se destruyen. 3. Dejar secar el frotis cerca de la flama del mechero. 4. Teir con colorante de Wright, como cualquier frotis sanguneo. 5. Observar al microscopio recorriendo la muestra sistemticamente con objetivo 40 x e inmersin. Observaciones Anotar el nmero de clulas observadas y hacer dibujos. Forma de reportar 100 x No. de clulas = Abundancia celular Resultado 1. Se realiza un conteo de 100 clulas y se informa el porcentaje de clulas polimorfonucleares observadas 2. En caso de no encontrarse leucocitos en la muestra se informar como No se observo clularidad. 3. En caso de encontrarse un nmero mnimo de leucocitos polimorfonucleares en la muestra se informa como escasos polimorfonucleares. 4. En casos de encontrase las clulas necesarias para realizar el conteo, reportar de la siguiente manera: Polimorfonucleares ________ % Mononucleares ___________ % Bitcora 1- Cules fueron las habilidades que desarrolle en la preparacin del frotis? 2- Qu dificultades se me presentaron al realizar esta prctica? 3- Cmo las resolv? 4- Qu paso durante la prctica? 5- Qu sent al finalizar el experimento? Conclusin Bibliografa 1. De Haro, A. l., Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995 7 1
PRCTICA No. 12
Mtodo de Graham
Introduccin La enterobiasis es una parasitosis que afecta frecuentemente a grupos de personas que viven en hacinamiento; se adquiere por la ingestin de huevos de E. vermicularis, a travs de la contaminacin de las manos al rascarse la regin perianal y posteriormente llevrselas a la boca; otro mecanismo es por contagio por la convivencia con individuos portadores del parsito o por diseminacin de huevos por el polvo. Los gusanos adultos se localizan en la regin leocecal del intestino, donde permanecen adosados por medio de sus expansiones cuticulares ceflicas. Para establecer el diagnstico de certeza, es necesario demostrar los adultos en heces o huevos del parsito en la regin perianal del husped, mediante el mtodo de Graham. Por este mtodo, los huevos quedan adheridos a un trozo de cinta adhesiva transparente. Los huevos de E. vermicularis miden aproximadamente 60 m de largo por 20 a 30 de ancho. Son de forma ovalada, aplanados por uno de sus lados, con uno de sus extremos ms ancho que el otro. Se encuentran rodeados por una capa transparente refringente con dos cubierta El estudio debe realizarse por la maana, antes de que el sujeto haya defecado o se haya baado, es recomendable hacerlo en tres das sucesivos. Tambin es conveniente recomendar a la madre que no le aplique talcos ni aceites al nio en la regin perianal ya que esto puede interferir con la lectura de las muestras. El diagnstico especfico, tambin puede establecerse mediante la identificacin de adultos (hembras) que abandonan el intestino durante la noche. Estos gusanos son pequeos, blanquecinos y de aspecto filiforme. La hembra de Enterobius vermicularis deposita sus huevos en las mrgenes del ano durante la noche. La tcnica de Graham tiene por objeto adherir estos huevos a la cinta adhesiva transparente o cinta scotch, la que se extender posteriormente en una lmina portaobjeto para su observacin microscpica1,3 Recomendaciones Se recomienda al paciente antes de practicarle los estudios que no evacue, se bae ni camine, para evitar que se pierdan los huevos de este parasito. Objetivo Realizar una tcnica que nos permita la recoleccin de huevos de Enterobius vermicularis, para su identificacin. Fundamento Para esta identificacin se utiliza el verde de malaquita que acta como colorante de contraste porque permite la diferenciacin morfolgica del citoplasma, actuando a su vez como aclarador
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Material biolgico Raspado perianal humano Raspado perianal de rata Heces fecales humanas Material Portaobjetos Cinta de celulosa transparente adhesiva de 12 cm. de ancho o diurex. Abatelenguas Reactivos Verde de malaquita .5 % Equipo Microscopio Tcnica 1. Cortar aproximadamente 6 cm. de cinta adhesiva y colocarla en un extremo del abatelenguas. 2. Colocar al paciente en posicin genupectoral exponiendo el esfnter, anal y perin. 3. Colocar la cinta con la parte adherente hacia afuera sujetan do los extremos con los dedos pulgar e ndice. 4. Tomar la muestra presionando la superficie adhesiva de la cinta contra varios puntos de la regin perianal del paciente. 5. Separar cuidadosamente la cinta del abatelenguas y adherirla a un portaobjetos a modo de cubreobjetos poniendo entre ambos una gota de verde de malaquita para aclarar. 6. Observar la preparacin al microscopio recorrindola sistemticamente con objetivo 10 x y 40 x.
Fig. 2.Toma de muestra de raspado perianal
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Observaciones Dibujar los huevos larvados, no larvados o hembra adulta de E. vermicularis. Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito Forma de reportar helmintos 1 a 4 huevos de E. vermicularis en la preparacin (+) 5 a 8 Huevos de E. venmicularis en la preparacin (++) 9 o ms Huevos de E. vermcularis en la preparacin (+++) Resultado
Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente: _______________________________________________________________________ Sexo: ___________________Edad:___________Localidad:_________________________________________ Metodologa empleada: _________________________________Fecha recepcin de la muestra___________ Examen microscpico:
Bitcora 1. 2. 3. 4. Cules fueron las dificultades durante la obtencin de la muestra? Se me facilita el trabajo con animales de laboratorio? Cmo fue mi actitud en cuanto a las actividades que realice? En que actividades me compromet?
Bibliografa 1. De Haro, A. L Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995 7 4
2. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998
Prctica No. 13
Mtodo de Concentracin de larvas por Termotropismo e Higrotropismo (Baermann para la concentracin de larvas rhabditoides y filariformes)
Introduccin Este mtodo se basa fundamentalmente en movimiento que presentan las larvas en respuesta a un factor externo, el cual puede ser bitico y abitico siendo positivo cuando el movimiento se efecta en direccin del factor externo, y negativo en el caso opuesto. Objetivo Utilizar una tcnica por medio del sistema conocido como de Baerman con la cual se pueda demostrar como se infecta el hombre y los animales con larvas rhabditoides y filariformes que se encuentran en el suelo. Fundamento Las larvas al tener un termotropismo e higrotropismo positivo, se concentran en el agua o la solucin salina fisiolgica, la cual se recolecta en un tubo que se centrifuga y en el sedimento se identifica las larvas. Material biolgico Tierra contaminada con materia fecal Material Cubreobjetos Portaobjetos Soporte universal Pinzas para ropa Abatelenguas o aplicadores de madera Gradilla metlica Embudo tallo corto Un trozo de manguera de ltex Tubo de ensaye de 13 x 100 7 5
Gasa o manta de cielo Toallas de papel Equipo Microscopio compuesto Centrfuga Aparato de Baerman (ver sistema) Reactivos Solucin salina Isotnica Lugol parasitolgico Tcnica 1.- Sujetar el embudo en un soporte universal. 2.-Asegurar en el extremo inferior del embudo un pedazo de manguera y cerrar con unas pinzas. 3.- Colocar sobre el embudo una gasa doble. 4.- Poner la muestra de tierra con solucin salina o agua hasta cubrir completamentamente. 5.- Dejar reposar 24 hrs. a temperatura ambiente. 6.- Transcurrido el tiempo abrir las pinzas y depositar en un tubo de ensaye. 7.- Centrifugar a 1500 rpm durante 1 min. 8.- Colocar una gota del sedimento en un portaobjetos con una gota de lugol. 9.- Colocar un cubreobjetos procurando no hacer vacos 10.- Observar al microscopio en objetivos 10x y 40 x Fig. 3. Sistema de Baerman
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Mtodo de Baerman modificado 1. En un tubo de ensaye (A) de 16 x 100 poner 2 g de heces fecales y aadir 8 ml de solucin salina isotnica. 2. En otro tubo de ensaye (B) de 16 x 100 depositar 6 ml de solucin salina isotnica. 3. Hacer una perforacin en un tapn de un tubo para vacutainer de tal forma que entre por ste orificio una punta de micropipeta. 4. Se monta un dispositivo como se muestra en la figura de abajo. 5. El nuevo dispositivo de Baerman deber mantenerse en bao a una temperatura de 37C durante 2 horas. 6. Transcurrido este tiempo, centrifugar el tubo en donde se colect la muestra a 1500 rpm x 5 minutos y tomar del sedimento un poco de muestra y observar al microscopio con lugol en 10 x y 40x Fig. 4. Dispositivo de Baerman modificado
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Tabla 4. Diferencias entre larvas filariformes
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Fig. 5. Diferencia entre larvas rabditiformes
Observaciones Dibujar las larvas filariformes o rabditiformes encontradas Limites de reporte 7 9
1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito Forma de reportar helmintos 1 a 2 larvas por campo (+) 3 a 4 larvas por campo (++) 5 o ms larvas por campo ( +++) Resultado
Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Metodologa empleada: _________________________________Fecha recepcin de la muestra___________ Examen microscpico:
Bitcora 1. 2. 3. 4. 5. Qu aprend en esta prctica? Cmo fue mi actitud en cuanto a las actividades que realice? Dnde Colecte la muestra? En que actividades me compromet? Cules fueron las dificultades durante el desarrollo del mtodo?
Conclusin Bibliografa 1. De Haro, A. L Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995 2. Dreyer, G., Fernndez-Silva, E, Alves, S., Rocha, A, Albuquerque, R. and Addiss, D. 1996. Patterns of detection of Strongyloides stercoralis in stool specimens: implications for diagnosis and clinical trials. J. Clin. Microbiol.
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CAPITULO 7 METODOS PARA EL DIAGNSTICO DE PARSITOS TISULARES Y DE CAVIDADES
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INTRODUCCIN
Examen en fresco de secreciones de cavidades Se utiliza para la observacin de protozoos de cavidades como E. gingivalis, T. tenax y T. Vaginalis; en este tipo de examen, se observan los trofozoitos con sus movimientos caracteristicos. En general se obtienen los productos biolgicos de las cavidades y se pueden utilizar para el examen directo o inclusive para hacer cultivos o preparaciones para teir, siempre se tendrn en mente todos los exmenes que, en un momento dado, se pueden llevar a cabo con una muestra. Los exmenes parasitoscopicos de cavidades, son los que requieren cierto manejo para la obtencin de la muestra, como es el espejo vaginal para la toma de muestra de la secrecin vaginal o el masaje prosttico para el uretral. 1,3 Exmenes para la bsqueda de parsitos en sangre Examen en fresco de sangre perifrica Este mtodo es til para observar hemoflagelados como T. cruzi y M. ozzardi, la bsqueda de tripomastigotes sanguneos y microfilarias es importante en este examen. Frotis de sangre Este mtodo es til para identificar parsitos en sangre como hemoflagelados y Plasmodium spp. Se utiliza sangre perifrica obtenida mediante puncin en el pulpejo con lanceta desechable. Por lo regular se obtiene del dedo cordial. Una sola gota basta para hacer el frotis; se arrastra la gota extendida por capilaridad mediante un portaobjetos y, deslizndolo usualmente hasta llegar a un lmite en que no queden barbas, se deja secar. Se fija con metanol absoluto y se tie con Giemsa o Wright. Gota gruesa Este mtodo esta indicado sobre todo para el diagnostico de paludismo, pues la clave de una gota gruesa bien hecha esta en la hemlisis completa de los glbulos rojos para que aparezcan los parsitos desnudos. Es una tcnica de concentracin para la bsqueda de parsitos sanguneos que se encuentran en baja proporcin. Se fundamenta en que al laquear los glbulos rojos pierden toda la hemoglobina, lo que hace que los eritrocitos que estn acumulados se vean como fantasmas y no impiden la observacin de los parsitos, lo que aumenta las posibilidades de observarlos es precisamente la cantidad de sangre que se utiliza, que es mayor que para el frotis.
PRCTICA No.14
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Identificacin de Trichomonas vaginalis

Mtodo Parasitoscpico Inmediato (PSC) Introduccin La Trichomona vaginalis es la especie patgena para el hombre, causando dao especialmente en vas genitourinarias, tanto en la mujer como en el hombre. A este protozoario solo se le conoce fase de trofozoito el cual posee cuatro flagelos en su porcin anterior y una membrana ondulante, lo que le da la propiedad de moverse sacudindose, girando en crculos o dando saltos. Para visualizar esta gran movilidad el mtodo mas utilizado es el PSC inmediato, el cual utiliza una solucin salina a temperatura ambiente lo cual permite observar al parasito.1, 2,3 Objetivo Aplicar la metodologa recomendada para la identificacin de Trichomonas vaginalis en productos biolgicos de genitales femeninos o masculinos. Fundamento El diagnstico de trichomoniasis en la mujer se basa en la toma de un exudado vaginal y su observacin directa en fresco, el cual permite detectar la movilidad de este parasito. Se recomienda realizar la tcnica de PSC (Mtodo Parasitoscopico Inmediato). En el hombre, la muestra que se toma es de orina, la cual se tiene que centrifugar para despus observar el sedimento, o bien exudado uretral Equipo Centrifuga Microscopio compuesto Material biolgico Muestra de secrecin vaginal, orina o exudado uretral Material Tubos de ensaye Tapn de hule. Hisopos estriles Espejo vaginal Recipiente de plstico limpio Pipeta Pasteur Portaobjetos Cubreobjetos 8 3
Reactivos Solucin salina fisiolgica. Tcnica 1. Del tubo de ensayo que contiene la muestra de exudado vaginal, orina o exudado uretral centrifugada, se toma con un aplicador o con un asa bacteriolgica aproximadamente lo de tres gotas. 2. Se colocan sobre un portaobjetos. 3. Se cubre con un cubreobjetos y se observa al microscopio en 10x y 40x. Tcnica para teir tricomonas: 1. Con un hisopo, se toma la muestra de la cavidad vaginal. 2. Se hace un frotis haciendo valos en el portaobjetos, mientras se va extendiendo la muestra. 3. Se aplica el colorante de Wright o a travs del mtodo de Gram modificado. 4. Se enjuaga el frotis y se deja secar. 5. Observar la preparacin en 40X e Inmersin. Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito. Observaciones Dibujar el parasito observado y describir el tipo de muestra que se trabajo.
Resultado 8 4
Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente:________________________________________________________________________ Sexo: ___________________Edad:___________Localidad:_________________________________________ Mtodo empleado: ___________________________________fecha de recepcin de la muestra___________ Examen macroscpico: Olor: Color: Aspecto: Consistencia: Examen microscpico:
Bitcora 1. 2. 3. 4. Cul es la forma de tomar un exudado vaginal? Cuales son las recomendaciones para la toma de estas muestras? Qu me pareci la Tcnica? Qu sent al realizar este experimento?
Conclusin Bibliografa 1. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998 2. Brown, H. W. Parasitologa clnica. Edit. Interamericana. Mxico. 1985 3. Ash L, Orihel T; Atlas of Human Parasitology. 4th Edition, American Society of Clinical Parasitology, Chicago, 1997 4. Direccin Atlas en lnea: http://orbita.starmedia.com/~forobioq/atlasparasito.html
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PRCTICA No. 15
Identificacin de Plasmodium
Tcnica de Gota gruesa y Frotis teido Introduccin El diagnstico del paludismo, debe sospecharse en un paciente con sndrome febril de etiologa no determinada y que viva o haya permanecido en zonas donde el paludismo, sea endmica o que haya sido transfundido. El diagnstico de certeza se establece mediante la demostracin de plasmodios en la sangre, esto se logra, realizando un frote y gota gruesa de sangre obtenida momentos antes del acceso febril. Es conveniente tomar varias muestras en cada caso, para tener una mayor seguridad de encontrarlos. Este mtodo permite la identificacin morfolgica de las fases evolutivas del ciclo eritroctico y la diferenciacin entre las especies de Plasmodium. Tanto en pacientes en los que la parasitema es baja resulta difcil encontrar a los parsitos por los mtodos rutinarios, as como algunos casos en que los datos epidemiolgicos y clnicos sean muy sugestivos, se puede recurrir a la concentracin de una muestra de sangre y a partir de esta realizar el frote y gota gruesa (mtodo de Knott) o bien, tambin se puede realizar la tcnica de QBC (Cuantitative Buffy Coat). Objetivo Realizar la bsqueda de Plasmodium empleando dos de las tcnicas al mismo tiempo. Fundamento El colorante de Giemsa o Wright, por ser un colorante policromtico neutro se considera especfico para teir gota gruesa en el estudio del paludismo, debido a que acta sobre los glbulos rojos destruyndolos, y al mismo tiempo favoreciendo el teido en leucocitos y el parsito. Material biolgico muestra de sangre venosa o capilar Material Puente de vidrio Caja petri Lancetas desechables Torundas con alcohol Porta objetos
Reactivos 8 6
Solucin buffer pH: 7-7.2 Solucin madre de Giemsa Colorante de Wrigtht Alcohol metlico
Equipo microscopio compuesto Tcnica Frotis sanguneo 1. Se coloca en el extremo de un portaobjetos perfectamente desengrasado, una gota de sangre proveniente de puncin capilar o venosa. 2. Con la ayuda de otro portaobjetos, se arrastra la gota a lo largo del primero tratando de hacerlo con un movimiento firme. 3. Dejar secar el frotis 4. Se fija con alcohol metlico durante dos minutos, desechando el sobrenadante. 5. Dejar secar por evaporacin. 6. Cubrir el frotis con colorante de Giemsa o Wright. 7. Dejar actuar el colorante durante 10 min. 8. Lavar con agua corriente procurando que no le llegue directamente el chorro del agua, para evitar que se despegue. 9. Escurrir y dejar secar 10. Observar al microscopio con objetivo 40x e inmersin Gota Gruesa 1. Tomar una torunda con alcohol y limpiar la yema del dedo pulgar o lbulo de la oreja. 2. Puncionar con una lanceta desechable. 3. Se procede al mismo tiempo para hacer el frotis y la gota gruesa, en el mismo portaobjetos en un extremo la gota gruesa y el resto el frotis. 4. Colocar una gota grande o dos gotas de regular tamao en uno de los extremos del portaobjetos, con el ngulo de otro se dan giros en la gota de tal manera que se desfibrine la sangre y con el mismo ngulo se hace un pequeo extendido de 5 x 5 mm o 1cm2. 5. Dejar secar y en seguida se coloca en agua de la llave para laquear la sangre, cuando la gota se observa como una pelcula blanquecina, se procede a dejarla secar nuevamente. 6. Una vez seca la gota gruesa, se fija con alcohol metlico absoluto durante dos minutos, desechando el sobrenadante. 7. Dejar secar por evaporacin 8. Cubrir la gota gruesa con colorante de Giemsa o Wright durante 10 min. 9. Lavar con agua corriente procurando que no le llegue directamente el chorro del agua, para evitar que se despegue. 10. Escurrir, dejar secar y observar al microscopio con objetivo 40x e inmersin. 8 7
Fig. 6. Lamina para diagnstico de paludismo
Observaciones Hacer dibujos de lo que visualices al microscopio durante la realizacin de esta prctica. Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito Resultado
Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente:________________________________________________________________________ Sexo: ___________________Edad:___________Localidad:_________________________________________ Mtodo empleado: ___________________________________Fecha de recepcin de la muestra__________ Examen microscpico:
Bitcora 1. Qu tipo de muestra maneje para esta metodologa? 2. Qu grado de dificultad presento la prctica? 3. Por qu es importante esta determinacin? Conclusin Bibliografa 1. De Haro, A. l., Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis.
Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995. 2. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998
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PRACTICA No. 16
Identificacin de Trypanosorna cruzi y Leishmania mexicana

Introduccin La trypanosomosis americana o enfermedad de Chagas es causada por el flagelado T. cruzi, que generalmente es transmitido al humano por las heces de un artrpodo. El parsito en el humano, afecta clulas del sistema retculo endotelial, particularmente las de miocardio, esfago y colon. Si bien en un paciente, los datos clnicos y epidemiolgicos pueden hacer sospechar de la trypanosomosis, los exmenes parasicolgicos pertinentes confirman la presencia del agente causal.. Las pruebas clsicas para la deteccin de tripomastigotes, son el examen directo y los extendidos (delgados o gruesos) teidos con Giemsa; sin embargo, es recomendable hacer tcnicas de concentracin de sangre mediante los mtodos de Stront o Woo (hematocrito) Objetivo Observar hemoflagelados en sangre y tejidos. Fundamento En esta prctica se describen varios mtodos utilizados para el diagnstico de los parsitos en sangre, el empleo de colorantes policromticos neutros tienen la ventaja de actuar sobre algunas estructuras celulares, por lo que se consideran idneos para la identificacin de las fases evolutivas de estos parsitos (amastigotes y trypomastigote). Equipo Microscopio compuesto Material biolgico Sangre o tejido de ratn Sangre o tejido de rana Materiales Preparaciones fijas de Trypanosoma y Leishmania Torundas alcoholada Tubos de ensaye 13 x 100 Puente de tincin Ligadura 8 9
Vacutainer Portaobjetos Papel seda Toallas de papel Mantel individual de papel
Reactivos Colorante de Giemsa Solucin madre de Giemsa Alcohol metilico absoluto libre de acetona Colorante de Wright. Buffer de fosfatos Hipoclorito de sodio Jabn
Tcnica Tincin de Wright 1. 2. 3. 4. Se coloca el frotis seco, sin fijar, en un puente de varillas de vidrio para tincin. Se pone el colorante hasta cubrir la preparacin. Se deja actuar el colorante de 1 a 5 minutos. Se le agrega la misma cantidad que se uso de colorante, de un buffer de fosfatos de pH 7, se deja actuar de 1a5 min. Se debe observar una pelcula metlica. 5. Se lava suavemente con agua de la llave. 6. Se deja secar y se observa en objetivo de inmersin. Tincin rpida de Giemsa 1. Con la solucin madre de Giemsa se cubre la preparacin y se deja actuar el colorante durante 3 a 5 min. 2. Se lava y se observa en objetivo de inmersin. NOTA: Si la tincin queda muy plida, se dejar actuar 1 o 2 minutos ms el colorante. Si la tincin queda muy colorida, se decolorar con unas gotas de metanol, extendindolo delicadamente hasta que el frotis adquiera un color azul rosado. Tincin Giemsa Mtodo clsico de tincin para parsitos tisulares y hemticos, tambin es til para flagelados intestinales.
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Mtodo de Strout para diagnosticar la enfermedad de Chagas 1. 2. 3. 4. Esta es una tcnica de concentracin de hemoflagelados. Se obtiene, mediante puncin venosa, cinco mililitros de sangre. Esta se vaca en un tubo de ensaye 13 x 100. Se deja coagular a temperatura ambiente, se retrae el coagulo, se saca y el suero se centrifuga tres minutos a 500 rpm. 5. Se elimina el sobrenadante y el sedimento se vuelve a centrifugar a 1500 rpm durante un minuto. 6. Se decanta una vez ms y el botn se examina para buscar los tripanosomas. Observaciones Hacer dibujos de lo que visualices al microscopio durante la realizacin de esta prctica. Limites de reporte 1. Estadio del parsito. 2. Gnero del parsito 3. Especie del parsito Resultado
Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente:________________________________________________________________________ Sexo: ___________________Edad:___________Localidad:_________________________________________ Mtodo empleado: ___________________________________fecha de recepcin de la muestra___________ Examen microscpico:
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Bitcora 1. Qu tipo de muestra se empleo en este mtodo? 2. Le la prctica antes de realizarla? 3. Se presentaron dificultades durante la ejecucin? 4. Que actividades me permitieron alcanzar el objetivo de la prctica? 5. Cmo fue mi desempeo? Conclusin Bibliografa 1. De Haro, A. l., Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995. 2. Tood - Sanford. Diagnstico y Tratamiento Clnico por el Laboratorio. Edit. Salvat. Espaa, 1984. 3. Becerril Flores, Romero Cabello, Parasitologa Mdica de las Molculas a la Enfermedad Edit. Mc. Graw Hill 2004
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Ensayo rpido inmunocromatogrfico para la deteccin de anticuerpos al Trypanosoma cruzi en sangre, suero o plasma. Bio-Chagas Cdigo: 5001205 Introduccin El Trypanosoma cruzi es un organismo que est indicado como agente etiolgico de la enfermedad de Chagas, en un tema de gran preocupacin para la sanidad de Amrica Latina. El Trypanosoma cruzi, un protozoo de la familia Kinetoplantidia, es parasitario tanto de los insectos como de una amplia variedad de mamferos. Los reduvios que chupan sangre sirven como principales vectores de transmisin pasando de las heces infectadas con Trypanosoma cruzi a heridas por picaduras a la superficie de las mucosas. La transfusin de sangre infectada es otro camino de transmisin. La enfermedad fue descrita por primera vez en 1909 por Carlos Chagas (3). En Amrica Latina, se estima que 65 millones de personas habitan reas endmicas en las que existe peligro de infeccin. Se piensa que de quince a 20 millones de habitantes de las zonas rurales urbanas estn infectadas con Trypanosoma cruzi. Su manifestacin ms importante es la miocarditis crnica con alta morbilidad y mortalidad. Un mtodo de gran sensibilidad y especificidad para detectar la infeccin con Tryponosoma cruzi implica la deteccin de inmunoglobulinas contra el organismo. Se han empleado numerosas tcnicas, incluyendo ensayos de inmunofluorescencia indirecta, hematoglutinacin, fijacin por complementacin, radioinmunoensayo y Elisa. Este ensayo se utiliza para el diagnstico de infecciones causados por el Trypanosoma cruzi. El ensayo emplea una exclusiva combinacin de antgenos recombinantes altamente especficos. 1,3 Fundamento El ensayo rpido de Bio-Chagas es una prueba rpida de ensayo apantallado inmunocromatogrfico para la deteccin de anticuerpos de Trypanosoma cruzi. Puede utilizarse con sangre, suero plasma. El mtodo emplea una exclusiva combinacin una protena unida a anticuerpos especficos, que se enlazan sobre partculas de colorante y antgenos que estn unidos a la fase slida de la membrana. A medida que la muestra de ensayo fluye lateralmente a travs de la membrana, el anticuerpo especfico unido al conjunto protena-colorante se une a la inmunoglobulina humana en la muestra. Entonces, si la muestra contiene cualquier anticuerpo al Trypanosoma cruzi, el complejo se une a los antgenos sobre la fase slida en la zona de ensayo, dando lugar a una banda de color rosa/prpura. En ausencia de anticuerpos Tripanosoma cruzi, el complejo se une a los antgenos sobre la fase slida en la zona de ensayo, dando lugar a una banda de color rosa/prpura. 9 3
En ausencia de anticuerpos Trypanosoma cruzi, no aparecer lnea alguna en la zona de reaccin positiva. El lquido continuar migrando por la membrana y producir una banda de color rosa/prpura en la zona de CONTROL, demostrando que los reactivos funcionan correctamente. Objetivo Realizar el ensayo rpido Bio-Chagas, es una prueba rpida inmunocromatogrfica, es una de las pruebas ms sencillas de realizar para diagnsticar la enfermedad de Chagas. Reactivos Cada equipo de Bio-Chagas contiene 10 pruebas Almacenamiento Este ensayo rpido, por etapas, Bio-Chagas puede guardarse a temperatura ambiente de entre 8 y 30C en su bolsa sellada original. NO CONGELE EL EQUIPO. La estabilidad de este equipo de ensayo rpido Bio-Chagas es de 24 meses en las condiciones de almacenamiento mencionadas. Material Pipetas desechables. Instructivo. Precauciones generales Este ensayo est diseado slo para Diagnsticos In Vitro. No pipetear el material con la boca. No fumar, comer beber en zonas donde se manipularn las muestras los reactivos del equipo. Utilizar ropas protectoras adecuadas (guantes, batas de laboratorio, gafas de seguridad) cuando se manipule el equipo las muestras y al realizar los ensayos. Tratar todos los materiales utilizados durante el ensayo como si fueran infecciosos. Pasar por el autoclave durante 1 hora a 121.5C todos los materiales. Agregar hipoclorito de sodio al desecho y los materiales de desecho, con el fin de alcanzar una concentracin final del 1%. No utilizar el equipo despus de que se haya cumplido la fecha de caducidad que aparece en la etiqueta del paquete. Toma de muestra El ensayo Bio-Chagas puede realizarse con sangre, suero plasma. Se sugiere llevar a cabo la prueba inmediatamente despus de haber realizado la toma de muestra. En caso contrario, almacene hasta por 3 das a temperatura de 2 C- 8 C congele a 20 C para almacenajes en perodos mayores a 3 das. En caso de transporte de muestra, se deber llevar a cabo bajo normatividades internacionales de transporte de agentes etiolgicos. 9 4
Tcnica 1. Retirar el nmero deseado de unidades de ensayo de su bolsa y colocarlas sobre una superficie plana. 2. Etiquetar la unidad de ensayo con el nombre del paciente el nmero de identificacin. Agregar la muestra del espcimen al orificio de la muestra utilizando una pipeta de 5 10 microlitros. Suero plasma 5 microlitros sangre total 10 microlitros 3. Dado que el volumen de la muestra es crtico, se debe utilizar una pipeta de precisin. Si se agrega ms cantidad de lo arriba indicado, la muestra perder sensibilidad. 4. Agregue lentamente 6 gotas (aprox. 240 microlitros) del diluyente suministrado usando un cuentagotas, en el orificio de la muestra. 5. Interprete resultados despus de 15 minutos de haber agregado el diluyente. Fig. 7. Interpretacin de resultados
Control de calidad Las buenas prcticas de laboratorio recomiendan el uso de materiales de control para garantizar el correcto funcionamiento. Los controles debern utilizarse de la misma forma que con una muestra de paciente. Limitaciones El procedimiento de ensayo rpido Bio-Chagas y la interpretacin de los resultados deben seguirse muy de cerca. Este ensayo est diseado para detectar anticuerpos contra Trypanosoma cruzi en suero en plasma humano. Cualquier resultado de los ensayos en otros fluidos corporales de un fondo comn de sueros plasmas podr no dar lugar a resultados correctos en base a los criterios actuales. Por lo tanto, no se recomienda el uso en este ensayo de otros fluidos corporales y de un conjunto de muestras de sueros. El ensayo rpido por s solo no debe utilizarse como diagnstico de la infeccin por Trypanosoma cruzi, incluso si estuvieran presentes anticuerpos Trypanosoma cruzi. 9 5
Un resultado negativo, sea cual sea la dosis, no excluye la posibilidad de infeccin por Trypanosoma cruzi. Confirmacin visual del ensayo y de los reactivos de control El ensayo rpido Bio-Chagas es una prueba que proporciona la confirmacin visual del ensayo y de los reactivos de control antes de efectuar el ensayo. Cuando mire el dispositivo de ensayo, ver una banda de color amarillo visible en el receptculo de control de la tarjeta de reaccin. Este complejo coloreado indica que los anticuerpos necesarios para que el ensayo funcione correctamente estn presentes y activos. Tras la adicin de la muestra, estas bandas coloreadas emigran a travs de la membrana por el extremo puntero del conjugado colorante y desaparecen completamente de la tarjeta de ensayo. Una vez finalizado el ensayo, ver la familiar banda de color rosa/prpura de los receptculos ensayo y control de las muestras que den positivo. Observaciones Hacer dibujos de lo que visualices al interpretar la prueba. Resultado
Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente:________________________________________________________________________ Sexo: ___________________Edad:___________Localidad:_________________________________________ Mtodo empleado: ___________________________________fecha de recepcin de la muestra___________ Interpretacin de la prueba:
Bitcora 1. 2. 3. 4. 5. Porque es importante realizar este tipo de metodologa? Que inconvenientes se presentaron? Que ventajas ofrecen estos metidos? Que me aprecio la prctica? Cmo fue mi desempeo durante esta prctica?
Conclusin Bibliografa 9 6
1. Cypress Diagnostics, Importado y Distribuido por: Grupo MexLab S.R.L. de C.V. www.grupomexlab.com Rev. 08-2005
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PRACTICA No. 17
Bsqueda de Toxoplasma gondii

Introduccin El diagnstico clnico de esta protozoosis no es fcil debido entre otras causas a que el agente etiolgico, Toxoplasma gondii, es el parsito ms diseminado en el mundo. Esto trae como consecuencia que la toxoplasmosis pueda coexistir con cualquier otra enfermedad, sin una relacin causa-efecto entre esta parasitosis y la sintomatologa del paciente. Resulta muy difcil y con frecuencia imposible, establecer el diagnstico sin la ayuda del laboratorio y an as en muchas ocasiones, tampoco se logra. Los mtodos de laboratorio pueden ser directos e indirectos. Los primeros ayudan a demostrar la presencia del parsito y los segundos a detectar anticuerpos especficos. Mtodos directos Toxoplasma gondii se puede encontrar por medio del examen microscpico en fresco, con tincin y en presenta grandes dificultades y rara vez es concluyente. En este sentido, la tcnica de la inmunoperoxidasa es muy til ya que es altamente sensible y especfica, sin embargo, tiene la desventaja de que es muy laboriosa, costosa y no se prctica en cualquier laboratorio de anlisis clnicos. El aislamiento del parsito en animales de experimentacin a partir de productos tales como: lesiones papulosas de piel, ganglios, aspirado de mdula sea, placenta, tero, lquido cefalorraqudeo, humor acuoso, lgrimas, saliva, orina, leche, materia fecal, a pesar de ser un mtodo de diagnstico directo muy til, tiene la desventaja de que es muy laborioso, requiere de mucho tiempo para obtener el resultado y su rendimiento es muy bajo. Tambin se recomienda la demostracin del parsito en cultivo de tejidos, el cual tiene entre otras desventajas, el de que solamente se practica en laboratorios especializados. Mtodos indirectos En la prctica mdica el diagnstico de la toxoplasmosis se basa fundamentalmente, en la deteccin de anticuerpos especficos mediante reacciones serolgicas como la de Sabin-Feldman, tambin conocida como prueba del colorante o dyetest, es altamente especfica y sensible, sin embargo, las dificultades tcnicas en su realizacin limitan su empleo, por lo que en la actualidad prcticamente est en desuso. Otras reacciones utilizadas son: inmunofluorescencia indirecta, hemaglutinacin indirecta, fijacin del complemento y ELISA. La variedad de antgenos que posee T. gondii explica el empleo de diferentes tcnicas serolgicas. Cada una de ellas tiene su valor y limitantes, por eso es indispensable asociar por lo menos dos, para establecer de manera confiable el diagnstico. En los casos con sospecha de toxoplasmosis evolutiva, es recomendable repetir los exmenes con dos a tres semanas de intervalo para seguir la cintica de los anticuerpos. 9 8
Objetivo Realizar el examen en fresco de heces de gato para la bsqueda de Toxoplasma gondii Fundamento Este mtodo se basa en una combinacin de materia fecal con solucin salina, que por considerarse el medio ms eficaz tiene la ventaja de revelar al parasito en cualquier fase de su desarrollo y a la vez puede conservar en cortos periodos la celularidad de este protozoario. Material biolgico Heces fecales de gato Preparaciones fijas de toxopalsma gondii Material Portaobjetos Cubreobjetos Aplicadores de madera Reactivos Solucin salina fisiolgica Aceite de inmersin Equipo Microscopio compuesto Tcnica 1.- Diluir 1 mg. de materia fecal con una gota de solucin salina, haciendo una mezcla homognea. 2.- Hacer lo mismo en otro portaobjetos con una gota de lugol. 3.- Colocar un cubreobjetos. 4.- Observar con objetivos 10 x y 40 x. Observaciones Realizar dibujos sobre lo observado durante la prctica y las preparaciones fijas.
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Resultado
Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Examen macroscpico: Olor: Color: Aspecto: Consistencia: Examen microscpico:
Bitacora 1. 2. 3. 4. Cules fueron los obstculos que se me presentaron? Qu observaciones realice? Cmo fue mi participacin? Qu paso con los resultados?
Conclusin Bibliografa 1. De Haro, A. l., Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995. 2. Tood Sanford, Diagnstico y Tratamiento Clnico por el Laboratorio. Edit. Salvat. Espaa, 1984. 3. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998
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PRACTICA No. 18
Tiempo de prctica. 2 H
Examen coprolgico
Introduccin Existen dos tipos de examen de sangre oculta en heces, el examen de frotis de Guayacol tradicional (Hemoccult, Seracult, Coloscreen) y el ms nuevo, examen desechable con reactivo para sangre oculta en heces (EZ Detec-ColoCare). Ambos don de utilidad en la deteccin de sangre oculta en las heces y se usa principalmente para la exploracin de cncer colorectal. Los exmenes difieren en la forma en que se realizan. Las almohadillas desechables con reactivo estn disponibles en la lnea OTC en muchas farmacias. En contraste, el examen tradicional de frotis de guayacol es realizado e interpretado por u profesional de la salud y por lo general esta disponible n laboratorios o consultorios mdicos. Muchos consumidores prefieren las al mohadillas con reactivo desechables por no requerir de manipulacin de las heces ni de procesamiento de laboratorio. Sin embargo, los mdicos aun prefieren los exmenes de guayacol. Este examen se lleva a cabo principalmente para exploracin de cncer colorectal. Tambin puede ser recomendado en el diagnstico de la anemia. Consideraciones especiales. Por lo general se recomienda la colonoscopia como el examen de exploratorio de preferencia despus de un examen de sangre oculta en heces (ESOH) positivo. Los siguientes factores pueden afectar la precisin de este examen: Encas sangrantes despus de un procedimiento dental. Haber ingerido carnes rojas en los tres das previos al examen (sucede en la mayora de los ESOH), pescado, nabo o rbano picante. Entre los medicamentos que pueden causar sangrado GI se encuentran los anticoagulantes, la aspirina, la colchicina, los suplementos de hierro en dosis grandes los AINES (Analgsicos antiinflamatorios no esteroides), y los corticosteroides. Algunos de los medicamentos que pueden causar falsos-positivos son: la colchicina, el hierro, las drogas oxidantes (Yodo, bromuros, acido brico) y la reserpina. La vitamina C en grandes cantidades puede causar falsos-negativos en la mayora de los ESOH. 1 0
Objetivo Realizar un examen coprolgico que incluye un examen microscpico de la muestra de materia fecal. Fundamento Es un examen no invasivo que detecta la presencia de sangre oculta en las heces. Esta sangre puede provenir de cualquier sitio del tracto digestivo. La sangre oculta en las heces es con frecuencia y, en muchos casos, el nico signo de alarma de enfermedades colorectales como el cncer de colon. Fundamentalmente este examen es utilizado como material de desecho de nuestro organismo dada la naturaleza del material. Pero incluso su simple observacin nos puede conducir a importantes indicios de alguna patologa. Las heces fecales sufren modificaciones en cuanto a su contenido; volumen, color, cantidad, consistencia, etc. Lo que nos conduce a un examen de inspeccin de las heces. Toma de muestra Los pacientes que no han sido instruidos previamente en ocasiones muestran una ingenuidad considerable en la toma de la muestra de heces, pero unas simples indicaciones bastan para que las muestras recogidas sean satisfactorias. Un orinal bien lavado es conveniente para recoger la muestra. En caso de carecer de el, puede servir un tarro de vidrio de tamao adecuado y cuidadosamente limpio. Ha de advertirse a los pacientes que no deben orinar en el mismo recipiente por que pueden contaminar la muestra. La cantidad de la muestra debe ser del tamao de una nuez, si son liquidas aproximadamente 10ml. Para trasladar las muestras de heces al recipiente de transporte se utiliza un abatelenguas. El material de transporte de preferencia debe ser un tarro o frasco de boca ancha con tapn de rosca para evitar el olor y facilitar al abrirlo. Debe recomendarse a los pacientes que no contaminen la parte exterior del recipiente, ni lo llenen demasiado, ya que un recipiente excesivamente lleno puede dar lugar a una liberacin explosiva del contenido debido al gas producido. Material biolgico El paciente debe de consumir leche, mantequilla, papas, vegetales crudos, no debe comer carne ni frijoles; esto es por tres das. Heces fecales humanas. Material 10 tubos de ensayo de 13x100mm con tapn. 1 gradilla 5 pipetas de 5ml 2 Pipetas de 10ml 1 perilla 1 pinza para tubo de ensayo 1 0 macroscopio o fsico, qumico y
Equipo
1 probeta de 100ml 1 caja petri o capsula 2 vasos de pp. de 250ml 1 varilla de vidrio Porta y cubreobjetos Mechero Bao Mara Tela de asbesto Tripie Papel Whatman no. 1 papel pH
Microscopio compuesto Reactivos Tcnica Caracteres organolpticos a) Consistencia: Normalmente las heces son moldeadas y blandas (pastosas). Cuando hay estreimiento son duras y a veces en forma de escibalos (pequeos fragmentos duros). En las diarreas son liquidas, tambin puede haber heces de consistencia untuosa, debido a una insuficiencia biliar o pancretica. Reactivo de Benedict Acido actico concentrado Acido actico al 30% Alcohol al 96 Lugol ter dietilico Acido Clorhdrico 2N Ferrocianuro de potasio al 0.25% Agua oxigenada al 3% Jabn medicinal al 5% Bencidina pura Reactivo de Saathoff Reactivo de Bencina Reactivo de Lorish Sudan III
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b) Aspecto: Si la consistencia es normal, las heces semejan un cilindro que se repliega sobre si mismo conservando su forma. La superficie del cilindro no es lisa, presenta depresiones y relieves. Las heces no son viscosas ni adherentes. En los aspectos anormales se puede considerar a los escibalos como resultado de un colon irritable, la presencia de unas heces estrechas, como encintadas sugieren la posibilidad de un intestino espstico, un estrechamiento o estenosis rectal. Hay heces que son uniformes que se presentan en montn. Heteromorfas como su nombre lo indica no tienen forma determinada, pueden ser porciones liquidas con porciones slidas, mucosas, etc. c) Color: Es variable desde el castao al oscuro (marrn). La bilirrubina de la bilis pasa al intestino sin modificacin. Al nivel de la vlvula es trasformada en estercobilinogeno y estercobilina. Que es el principal pigmento de las heces. En los nios las heces son mas claras por influencia de la alimentacin lctea. En general las heces de fermentacin son claras, amarillentas, pero las de putrefaccin son de color oscuro. Ciertos alimentos modifican el color de las heces, por ejemplo: el chocolate, la remolacha, la morcilla, etc. As mismo hay medicamentos que modifican el color. En algn proceso patolgico, como ciertas ictericias de tipo obstructivo enfermedades o en enfermedades pancreticas las heces son incoloras aparece un color amarillo claro. Cuado hay hemorragias, sean gstricas o del intestino delgado toman un color oscuro (negro), pero si la hemorragia en baja (rectal), las heces tienen un color que pueden variar del marrn castao al rojo. d) Olor: El olor normal fecal es Sui-Generis muy particular debido a ciertos productos aromticos originados en el intestino por accin de microorganismos de fermentacin o de putrefaccin que actan sobre hidratos de carbono y sobre protenas, el olor se puede deber al indol o escatol, fenol, cidos grasos voltiles, hidrgeno saturado, metano, bixido de carbono, pptidos, amoniaco, aminocidos, etc. La deposicin de los nios de pecho tiene escaso olor; el meconio es prcticamente inodoro. La deposicin de grandes cantidades de excremento gris, esponjoso de olor desagradable y que flota en el agua es caracterstico de la esteatorrea. Examen macroscpico La observacin macroscpica de las heces permite demostrar ciertas anomalas groseras, como la presencia de macroparsitos, sangre, grasa, pus, moco, etc. Para una mejor apreciacin es aconsejable efectuar una dilucin de las heces con solucin salina fisiolgica o con agua, en un mortero o caja Petri. Se les observa colocando el recipiente en una lmpara elctrica. Los restos de los alimentos que pueden observarse son: restos de carne, fibras musculares, tejido conjuntivo, restos feculentos, mucus, etc. Examen microscpico a) Parasitos: se realiza con una gota de lugol parasitolgico y una gota de suspensin fecal sobre un portaobjetos y se observa con cubreobjetos en seco dbil y seco fuerte. b) Fibras musculares: La observacin revela fibras musculares con diversos grados de digestin. De modo normal se observan fibras musculares digeridas con la estriacin algo borrosa, sobre todo la trasversal; la longitudinal tarda algo ms al borrarse. 1 0
c) Tejido conjuntivo: No debe de hallarse en las heces, su presencia es ndice de insuficiencia gstrica y se manifiesta al microscopio en forma de fibrillas de color nacarado, a veces teidas con la bilis. Agregando al preparado unas gotas de acido actico glacial al 30% el tejido conjuntivo se aclara, transparentndose. El mucus en cambio se opaca. d) Grasas neutras: Se observan al microscopio como gotas redondas. Conviene hacer un reactivo de Saathoff y observando al microscopio, el reactivo tie sin distincin a las grasas neutras de los cidos grasos y jabones. e) cidos grasos: Adoptan formas de agujas o cristales muy finos, pero a veces se muestran con aspecto similar al de las grasas neutras. En este caso una gota de suspensin fecal se le agrega una solucin alcohlica de Sudan III y se observa al microscopio. Si quedan pocas gotas teidas de rojo por el sudan III es ndice de que hay predominio de cidos grasos que desaparecen al disolverse en alcohol de la solucin colorante, se admite que normalmente debe haber dos a tres gotas de grasa por campo microscpico. Para diferenciar microscpicamente las grasas neutras de los cidos grasos y los jabones se utiliza el reactivo Lorish, haciendo un preparado con una gota de suspensin fecal y una gota de reactivo, la observacin microscpica revela que las grasas se tien de color rosa, los cidos grasos de color azul y los jabones de color gris azulado. f) Restos vegetales: Pueden observarse almidn, celulosa y cristales. El almidn se presenta con diversos aspectos segn si es ingerido crudo o cosido y si se encuentra aislado o en el interior de la clula. Una gota de suspensin mezclada con una gota de lugol y observada al microscopio permite poner de manifiesto el almidn por la coloracin violcea intensa g) Eritrocitos : Normalmente no existen hemates en las heces y su aparicin es ndice de lesiones sangrantes en especial de las porciones bajas de intestino h) Leucocitos: Se encuentran en muy pequea cantidad as como las clulas epiteliales. La presencia de cantidades elevadas de elementos celulares puede ponerse de manifiesto por la reaccin de la catalasa. En un tubo de ensaye poner 2 ml de dilucin fecal al 2%, 2ml de jabn medicinal al 5% y 2ml de agua oxigenada. Se mezcla haciendo rotar el tubo entre las manos evitando la formacin de espuma. Esperar 10min por lo comn aparece sobre la superficie del liquido una delgada capa espumosa, pero cuando hay gran cantidad de detritos celulares, al estar aumentada la catalasa se forma una espuma de 2 a 3 cm de espesor. Examen qumico En este examen se determinara el pH, la sangre oculta y los azucares reductores. a) pH: Para el pH se realiza con papel tornasol o papel indicador de pH. Por lo general las heces son neutras o a veces ligeramente acidas o alcalinas. El pH vara de 6.9-7.2. al 1 0
tornasol las heces se manifiestan neutras o algo alcalinas. Segn Goiffon el pH es producido por el acido fosforico provenientes de alimentos y secreciones, el carbnico originado en los tejidos. Tambin ejercen su influencia los cidos grasos de bajo peso molecular, voltiles o no que se originan en el intestino por la flora sacarolitica o de fermentacin y los cidos grasos de alto peso molecular de los alimentos, sobre todo cuando hay trastornos de digestin de las grasas o falta de absorcin. b) Sangre oculta en heces: Los compuestos heme (derivados de la hemoglobina) catalizan la oxidacin de sustancias orgnicas como bencidina, ortotoluidina, etc. Por el peroxido de hidrogeno. La reaccin es similar a las que catalizan las peroxidasas verdaderas pero las pruebas se vuelven especficas hirviendo las materias fecales lo que destruyen las peroxidasas verdaderas, dejando solamente los compuestos de heme que son termoestables. 1.- Se pone en un tubo de ensayo una cantidad de heces aproximadamente el equivalente al tamao de una nuez, y se aaden unos 3 ml de acido actico al 30%. Se agita con una varilla de vidrio y se hierve sobre una llama pequea durante 2 min; tambin puede calentarse a bao de agua a ebullicin durante 10 min, estas maniobras destruyen las peroxidasas verdaderas. 2.- Despus de enfriar a temperatura ambiente a 3 ml se le aaden 3 ml de ter dietilico y se extraen los compuestos de heme invirtiendo en tubo varias veces sin agitar. 3.- Este es un extracto etreo que se aplica a la reaccin de bencidina o guayaco. 4.- Para bencidina agregar 3 ml de reactivo recientemente preparado y el extracto etreo de heces la reaccin positiva se manifiesta por la aparicin de un anillo verde o azul en la interfase. 5.- Para guayaco agregar 5ml de reactivo de guayaco y 3 ml de extracto etreo de heces. Si la reaccin es positiva se manifiesta por la aparicin de un anillo azul oscuro en la interfase. Empleo de tiras reactivas Ocultest y Hematest, estas pruebas a base de ortotoluidina, son ampliamente difundidas. Ideadas inicialmente para orina, pero tambin se pueden ocupar para heces, el ocultets es mas sensible que el hematest por lo tanto hay que tener cuidado al dar una buena interpretacin o lectura de la tira. c) Azucares reductores: Para esta determinacin se utiliza el reactivo de Benedit 1. Hacer una dilucin de materia fecal con un volumen de heces por dos volmenes de agua, mezclar vigorosamente. 2. Transferir 30 gotas a un tubo limpio agregarle 5ml del reactivo 1 0
3. Colocar el tubo en un bao Mara hirviendo durante 5 min. o calentar con llama hasta su ebullicin durante 1 o 2 min. y dejar enfriar. 4. Leer inmediatamente en caso positivo parece un color que va desde el amarillo hasta el naranja e incluso rojo ladrillo. Se reporta en cruces.
Interpretacin Azul- negativo Azul verdoso- trazas Verde- positivo (+) Amarillo a verde (++) Amarillo- anaranjado (+++) Amarillo- rojo ladrillo (++++) Significado de los resultados anormales Los resultados positivos pueden indicar: Varices esofgicas sangrantes Plipos de colon o cncer de colon Esofagitis Gastritis Trauma GI (gastrointestinal) Tumor GI Hemorroides Fisuras Enfermedad inflamatoria del intestino Ulcera pptica Complicaciones en una ciruga de GI reciente Angiodisplasia del colon Puede haber falsos-positivos Otras condiciones por las que se puede realizar este examen: Deteccin de cncer de colon Evaluacin de la anemia Cuales son los riegos? Aun cuando los resultados sean negativos, ello no significa la ausencia de enfermedades col rectales, porque no todos los plipos sangran continuamente. Por esa razn, el ESOH debe 1 0
hacerse en combinacin con otro examen exploratorio ms agresivo tal como una sigmoidoscopa, una colonoscopa o un doble enema de bario.
Valores de referencia pH: 6.9-7.2 Color: marrn Olor: Sui Generis Consistencia: compacta Sangre Oculta: negativo Azucares Reductores: negativo Restos Alimenticios: escasos elementos Fibras Musculares: moderadas Tejido Conjuntiva: negativo Flora Iodofila: negativa Moco: negativo Cristales: negativo Leucocitos: escasos Observaciones Realizar dibujos de lo observado en el examen microscpico y macroscopio de las heces. y reportar resultados del examen qumico. Resultado Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa
Examen macroscpico
Olor: Color: Aspecto:
Consistencia:
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Examen qumico pH Azucares reductores Sangre oculta Examen microscpico Restos alimenticios Fibras musculares Tejido conjuntivo Flora iodofila Moco Cristales Leucocitos Parsitos
Bitcora 1. 2. 3. 4. Cules fueron los obstculos que se me presentaron? Qu observaciones realice? Cmo fue mi participacin? Qu paso con los resultados?
Conclusin Bibliografa 1. De Haro, A. l., Salazar, S. P. M. cabrera, B. M. Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis. Mndez Editores, S. A. de C. V. Mxico, 1995. 1 0
2. Manual de Bioqumica Clnica Facultad de Q.F.B.-Xalapa Ver. Mxico
Vinculacin Estudio a Comunidad Prcticas escolares
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Introduccin Las parasitosis intestinales son un grupo de enfermedades del aparato digestivo causadas por diversos agentes parasitarios, que incluyen tanto a organismos pequeos unicelulares, los protozoarios (amibas, giardias, etc.), como a grandes agentes multicelulares, los helmintos "lombrices" (tenias, scaris, oxiuros, etc.). La mayora de ellas produce altos niveles de morbilidad. Su frecuencia e importancia varan de pas en pas de acuerdo a la geografa y al desarrollo econmico, afecta a hombres y mujeres de todas las edades, especialmente en nios, encontrndose tambin en este grupo el mayor ndice de poliparasitismo. Las parasitosis gastrointestiales son comunes en el estrato socioeconmico mas bajo, principalmente en pases en vas de desarrollo, con escasas condiciones higinicas y de educacin. La infeccin puede ser identificada mediante un examen coproparasitolgico, siendo la educacin sanitaria importante en las medidas profilticas de las parasitosis intestinales. Fundamento La contaminacin fecal de la tierra o el agua es frecuente en zonas de escasos recursos, carentes de servicios sanitarios y en donde la defecacin se hace en el suelo, favoreciendo que huevos y larvas de helmintos se hagan infectantes (geohelmintiasis), otros pueden ser transmitidos por contaminacin fecal de las manos o los alimentos. Las condiciones ambientales, clima clido, precipitacin pluvial y vegetacin abundante, propician la diseminacin de geohelmitos. Viviendas precarias, sin condiciones de salubridad (agua potable y disposicin adecuada de excretas), aglomeracin familiar, ignorancia de la poblacin, extensas reas rurales, junto a la cria inadecuada de animales alrededor de la casa, son factores favorables para la alta prevalencia de las parasitosis y diseminacin de zoonosis parasitarias. Los factores que determinan la presentacin y distribucin de estas enfermedades parasitarias son importantes para comprender, interpretar y disear programas de control. Los estudiantes de la facultad de Qumica Farmacutica Biolgica desarrollara actividades decampo, desde la recoleccin de material biolgico en zonas de alto riesgo parasitario, debido al tipo de condiciones sanitarias que prevalecen, con el fin de realizar los estudios coproparasitoscpicos necesarios para diagnosticar las parasitosis intestinales que afectan a una comunidad..Con base en los conocimientos adquiridos durante el curso prctico de parasitologa, 1 1
los alumnos realizaran una de las pruebas coproparastoscpicas cualitativas de su eleccin a una muestra representativa de la comunidad, para determinar la incidencia parasitaria que prevalece en dicha comunidad. Objetivo Determinar la prevalencia de helmintos y protozoarios intestinales en escolares Equipo Microscopio compuesto Centrfugas Material biolgico Materia fecal humana Material Tubos de ensaye Portaobjetos Cubreobjetos Pipetas Pasteur tallo corto Bulbo de goma Pizeta Etiquetas Copropack Aplicadores de madera Gradilla metlica Tapn de hule # 000 Embudo tallo corto Gasa Mantel individual de papel
Reactivos Hipoclorito de sodio Agua destilada Solucin salina isotnica Solucin de ZnS04 Lugol parasitolgico ter sulfrico Solucin de formaldehdo Jabn 1 1
Trabajo prctico: El estudiante se vinculara con su entorno y ubicara zonas rurales, o suburbanas que presenten problemas parasitarios sobre todo en nios escolares, aunque tambin a veces la participacin de los padres de familia solicitan que sea a toda la familia a quienes se les practique el estudio , pueden ser escuelas primarias, comunidades, casas de salud etc. Habiendo reconocido el sitio en el que colaborar, se efectuara una platica con los pobladores de la comunidad, sobre los problemas de salud que causan los parsitos y la necesidad de realizar pruebas de laboratorio para establecer el diagnstico y su posterior tratamiento. Se darn las indicaciones y recomendaciones a los pacientes acerca de la toma de muestra de heces fecales y su conservacin. Se trasladaran las muestras de la comunidad objeto de estudio, al laboratorio y se conservara en refrigeracin si el examen no se realiza inmediatamente. Se realizara el examen coproparasitoscopico de las muestras (examen macroscopio o fsico y el examen microscpico) por el mtodo que de mejores resultados o el indicado para estos casos. Realizar esquemas y dibujos de todas las fases parasitarias observadas tanto en el examen macroscpico como en el microscpico. Reportar los resultados obtenidos de acuerdo al siguiente formato. Reporte Protozoarios: 1a4 Trofozoitos por campo (+) 5a8 Trofozoitos por campo (++) 9 o ms Trofozoitos por campo (+++) Helmintos: 1 a 5 Huevos en la preparacin (+) 9 a 15 Huevos en la preparacin (++) 15 o ms Huevos en la preparacin (+++) Resultados
Universidad Veracruzana Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica Laboratorio de Parasitologa Nombre del paciente:________________________________________________________________________ Sexo:___________________Edad:___________Localidad:___________________________________________ Examen macroscpico: Olor:
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Color: Aspecto: Consistencia: Restos de alimentos y parsitos: Examen microscpico:
Fecha del examen_______________Responsable__________________________Vo.Bo. __________________
Bitcora 1. 2. 3. 4. 5. Cual fue mi experiencia en este trabajo Que dificultades se me presentaron con la comunidad? Como fue la participacin de la comunidad? Como fue el trabajo del grupo frente a la comunidad? Que hara para mejorar esta experiencia?
Conclusin Bibliografa 1. Tay Lara, Velasco Gutirrez, Parasitologa Mdica, Edit. Mndez Editores, Mxico D.F. 1999. 2. De Haro Irene, Salazar Paz Mara, Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis, Edit. Mndez Editores Mxico D.F.1995 3. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998
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CONCLUSIN La realizacin de este manual de prcticas da respuesta a la necesidad de contar con un conjunto ordenado de tcnicas y procedimientos que les permita a los estudiantes y personal interesado en el rea de parasitologa, desarrollar prcticas experimentales, de campo o profesionales convencionales y de uso frecuente en el laboratorio. Con este material didctico se pretende resaltar el carcter de aplicacin de las cuestiones explicadas en la teora para que el estudiante se involucre ms en aspectos tecnolgicos y pueda aprovechar al mximo estos conocimientos durante su actividad profesional, sin embargo es conveniente que cada maestro que imparta esta experiencia educativa haga su propia seleccin de las prcticas. A travs de los resultados obtenidos en cada prctica y de acuerdo a los parsitos encontrados se establecer el diagnstico de laboratorio para que junto con el dato clnico, determine el medico el tratamiento a seguir. Es necesario que este trabajo se enriquezca, con nuevas metodologas que incluyan los avances que existen en esta rea y que pueden resultar ms ventajosos para la bsqueda de parsitos que causan enfermedades en el hombre; se sugiere que en otra investigacin se profundice sobre la compilacin de tcnicas como las de cultivo, antgenos parasitarios y moleculares para el estudio de parsitos y sobre la factibilidad de su implementacin en el laboratorio de Biomdicas de la facultad de Q.F.B.
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BIBLIOGRAFA
1. Becerril Flores, Romero Cabello, Parasitologa Medica de las Molculas a la Enfermedad Edit. Mc. Graw Hill.2004 2. Rodrguez Prez Elba, Manual Ilustrado de Parasitologa Mdica, Edit. Cuellar, Mxico D.F. 1998. 3. De Haro Irene, Salazar Paz Mara, Diagnstico Morfolgico de las Parasitosis, Edit. Mndez Editores Mxico D.F.1995 4. Romero Cabello Ral, Microbiologa y Parasitologa Humana, Bases Etiolgicas de las Enfermedades Infecciosas, Edit. Panamericana, Mxico D.F. 1993 5. Tay Lara, Velazco Gutirrez, Parasitologa Mdica, Edit. Mndez Editores, Mxico D.F. 1999. 6. Tood Sanford, Diagnstico y Tratamiento Clnico por el Laboratorio. Edit. Salvat. Espaa, 1984. 7. Faust, E. Parasitologa Clnica, Edit. Salvat Mexicana, Mxico D.F. 1998 8. Chester, B. P., Clifton, J. R., Wayne, C. E. Parasitologa Clnica. Edit. Salvat. Mxico, 1986 9. Mara Beltrn Fabin Estrada, Manual de Procedimientos de Laboratorio para el Diagnstico de los Parsitos Intestinales del Hombre, Instituto Nacional de Salud Lima Per 2003 10. Martnez Bez Manuel. Manual de Tcnicas de Laboratorio, Volumen H. Micologa, Parasitologa e Inmunologa. Instituto Nacional de Diagnstico y Referencia Epidemiolgica (INDRE). Secretaria de Salud 1998. 11. Biagi F. Enfermedades Parasitarias, Edit. Prensa Mdica Mexicana Mxico D.F. 1994 12. Koneman, Allen, Diagnstico Microbiolgico, Edit. Panamericana S.A. Mxico D.F. 1995 13. Melvin D. Mtodos de Laboratorio para Diagnstico de Parsitos Intestinales, Edit. Interamericana Mxico D.F. 1971 14. Madigan, M., J. Brock, et al. Biologa de los Microorganismos. Dcima Edicin. Pearson Educacin, S.A. Espaa 2004. 15. Murray P. et al., Manual of Clinical Parasitology,7th Edition, A. S. for Microbiology, Washington, 1999 16. Dreyer, G., Fernndez-Silva, E, Alves, S., Rocha, A, Albuquerque, R. and Addiss, D. 1996. Patterns of detection of Strongyloides stercoralis in stool specimens: implications for diagnosis and clinical trials. J. Clin. Microbiol. 17. Giovanni J. Xool Castellanos, Responsable de rea de coproanalisis Universidad Autonoma de Yucatn. Instructivo para el procesamiento de muestras del rea de coproanlisis. 2009 18. Mtodos Bsicos de Laboratorio en Parasitologa Mdica. OMS, Ginebra 1992. 19. Zaman, V. Atlas Color de Parasitologa Clnica. Editorial Mdica Panamericana. 1988 20. Buenas Prcticas de Higiene en el Manejo de los RPBI-NOM-087-SEMARNAT-SSA12002 21. Organizacin y Funcionamiento de los Laboratorios Clnicos, NOM-166-SSA1-1997 22. Programa de Aseguramiento de la Calidad PACAL.
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23. Trujillo Utrera, Hernndez Velasco, Manual de Tcnicas de Parasitologa Clnica, Facultad de Q.F.B.-Xalapa Ver Mxico 1985 24. Manual de Bioqumica Clnica Facultad de Q.F.B. Xalapa Ver. Mxico 25. Ash, L. & Orihel, T. (1997). Atlas of Human Parasitology, 4th Ed. ASCP Press, Chicago. 26. Beaver, P.C. (1986). Parasitologa Clnica. Salvat, Barcelona. 27. Fleck, S.L., Moody, A.H. (1988). Diagnostic Techniques in Medical Parasitology. Wright, London. 28. Garca, L.S. & Bruckner, D.A. (1997). Diagnostic Medical Parasitology, 3rd Ed. ASM Press, Washington. 29. Garca, L.S. & Bruckner, D.A. (2001). Diagnostic Medical Parasitology, 4th Ed. ASM Press, Washington. 30. Goldsmith, R. & Heyneman, D. (1989). Tropical Medicine and Parasitology. Prentice Hall, London. 31. Katz, M., Despommier, D.D. & Gwadz, R.W. (1989). Parasitic Diseases, 2nd Ed. Springer-Verlag, New York. 32. http://www.cecyt15.ipn.mx/polilibros/parasit/documentos/programa.htm 33. www.bc.inter.edu/facultad/iferrer/GuiaLaboratorioParasitologia 34. http://www.cdc.gov/ 35. http://www.cdfound.to.it/html/manager.htm 36. http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/default.htm 37. http://www.med.cmu.ac.th/dept/parasite/default.htm 38. http://www.biosci.ohio-state.edu/~parasite/home.html 39. http://www.biosci.ohio-state.edu/~parasite/images.html 40. http://iain.umsmed.edu/~micro/lushb/web/parasite%20web/paramast.htm 41. http://www.who.int/health-topics/idindex.htm. 42. http://www.uniovi.es/bos/Asignaturas/Parasit/Practicas/PRACTICA%20Platelmintos.ppt 43. http://www.uniovi.es/bos/Asignaturas/Parasit/fichaPlatelmintos.htm 44. http://www.google.com 45. http://www.cdfound.to.it/HTML/atlas.htm 46. http://www.med.cmu.ac.th/dept/parasite/image.htm 47. http://www.med.cmu.ac.th/dept/parasite/trematodes/Frame_fluke.htm 48. http://www.angelfire.com/co/semiologia/ 49. http://www.veterinaria.org/revistas/parasitologiaveterinaria/ 50. http://www.dpd.cdc.gov/DPDx/ 51. http://home.austarnet.comau/wormman/wlimages.htm 52. http://www.cvm.okstate.edu/~users/jcfox/htdocs/clinpara/lecture.htm 53. http://home.austarnet.com.au/wormman/paraimg/fbuskadt.jpg 54. http://www.filariasis.org/index.pl 55. http://www.paru.cas.cz/helminti/Nematoda.html 56. http://www.entornomedico.org 57. http://www.smu.org.uy/publicaciones/rmu/1996v1/lopez.htm
1 1
ANEXOS
1 1
ANEXO A
1 1
1 2
1 2
1 2
1 2
1 2
ALGORITMO B4
1 2
ANEXO C
1 2
1 2
ANEXO D 1 2
1 2
1 3
1 3
1 3
ANEXO E
1 3
1 3
1 3
Anexo A, B, C, D y E, Mara Beltrn Fabin Estrada, Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnstico de los parsitos intestinales del hombre, Instituto Nacional de Salud, Lima Per 2003
1 3
ANEXO F
COLORANTE DE WRIGHT Colorante de Wright en polvo 0.60 gr Alcohol metlico absoluto, libre de acetona 360 ml. Se pesan 0.60 g de colorante de Wright y se disuelven en 360 ml de alcohol metlico absoluto libre de acetona LUGOL PARASITOLOGICO Solucin madre Yoduro de potasio Yodo metlico (cristal) Agua destilada 10 g 0.5 gr 100 ml
Se disuelve el yoduro en el agua destilada y enseguida se agrega el yodo, se agita para homogeneizar. Se guarda en frasco mbar. No importa que quede exceso de yodo en el fondo. SOLUCION MADRE DE MERTHIOLATE-FORMALDEHIDO (MF) Formaldehdo Glicerol Tintura de merthiolate no.99 lilly (1:1000) Agua destilada 25 ml 0.5 ml 200 ml 250 ml
Disolver el merthiolate en el agua, agregar el formaldehdo y el glicerol. Se guarda en frascos mbar. Puede conservarse hasta un ao. MIF (Colorante fijador) 1) 2) 3) 4) Colocar 2.35 ml de la solucin madre de merthiolate formaldehdo (MF). Aadir 0.15 ml de solucin de lugol, inmediatamente antes de su uso. Agitar por inversin hasta una homogeneizacin completa Conservar esta solucin, en un frasco mbar esmerilado
SOLUCIN DE TRABAJO DE GIEMSA Se mezclan volumen a volumen solucin madre de Giemsa y buffer. Esta solucin se prepara en el momento de empezar el proceso de tincin. REACTIVO DE FAUST Sulfato de zinc heptahidratado 333 gr 1 3
Agua destilada
1000 ml
Se disuelve el sulfato en el agua. Se mide la densidad y se ajusta a 1.18 B agregando ms agua o ms sulfato. Debe rectificarse la concentracin cada mes. REACTIVO DE CHARLES I Solucin salina al 0.85% Formol comercial 90 ml 10 ml
Mezclar las dos soluciones. Se envasa en frascos con tapn de hule. REACTIVO DE CHARLES II cido ctrico (cristal) Formol comercial Agua destilada 02 gr 12 ml 86 ml
Mezclar el cido ctrico con el Formol y el agua, homogeneizar. Guardarlo en frascos con tapn de hule. SOLUCIN DE FENOL AL 5% cido fnico (cristal) Agua destilada 5 gr 95 ml
Disolver el fenol en un poco de agua, aforar a 100 ml. Guardar en un frasco mbar. El cido fnico es corrosivo. SOLUCIN DE FORMOL AL 10% Formol Agua destilada 10 ml 90 ml
Disolver el formol en el agua y guardar en frascos con tapn hermtico no metlico. SOLUCIN DE HIPOCLORITO DE SODIO AL 5% Hipoclorito de sodio (13%) Agua destilada 400 ml 600 ml
Disolver el hipoclorito en agua. Se usa como desinfectante. SOLUCIN SALINA ISOTNICA Cloruro de sodio Agua destilada 8.5 gr 1000 ml 1 3
Se disuelve el cloruro de sodio en el agua y se afora
SOLUCIN SATURADA DE AZCAR

Sacarosa (azcar de mesa) Agua destilada Formol 40% REACTIVO DE SAATHOFF Sudn III Alcohol al 96 Acido Actico glacial 2gr 10ml 20ml 500,00 g 500,00 ml 10,00 ml
Mezclar todos los reactivos, homogeneizar y guardar. REACTIVO DE GUAYACO Se prepara antes del uso. En un tubo de ensayo se colocan 5 ml. de peroxido de hidrogeno al 3% y algunas gotas de una solucin alcohlica de resina de guayaco. La solucin es ligeramente opalescente y no debe volverse azul. La solucin alcohlica de Guayaco debe prepararse cada vez dejando caer una pequea cantidad de resina en polvo en unos ml.. de alcohol etlico al 96 y agitando. REACTIVO DE BENCIDINA Debe prepararse al momento de usar Bencidina pura 0.1 gr, Acido actico al 50% 10ml Agua oxigenada al 3% 1 ml. Se mezcla la bencidina en acido actico agitando hasta disolucin y aadiendo 1 ml de agua oxigenada al 3%. Si aparece un color azul o verde, se debe a contaminacin del tubo de ensaye y se prepara una solucin nueva. REACTIVO DE LORISH Sulfato de azul de Nilo Agua destilada 1gr 100ml.
Mezclar y alcalinizar este reactivo agregando unas gotas de carbonato de sodio al 20% REACTIVO DE BENEDICT Utilizar el mismo que para azucares reductores. 1 3
ANEXO G NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002, Proteccin Ambiental-Salud Ambiental-Residuos Peligrosos Biolgico-Infecciosos-Clasificacin y Especificaciones de manejo

MANEJO DE RESIDUOS PELIGROSOS BIOLOGICO-INFECCIOSOS (RPBIs) Los lugares pblicos, sociales o privados, fijos o mviles, que estn relacionados con servicios de salud tales como hospitales o centros de salud que presten servicios de atencin mdica ya sea ambulatoria o para internamiento de seres humanos y utilizacin de animales de bioterio, y prestadores de servicios, deben de cumplir con las siguientes fases de manejo, segn el caso: 1. Identificacin y envasado En las reas de generacin de RPBIs, se debern separar y envasar, de acuerdo con sus caractersticas fsicas y biolgicas infecciosas, considerando lo sealado en la siguiente tabla:
TIPO DE RESIDUOS Sangre Cultivos y cepas de agentes infecciosos Patolgicos ESTADO FISICO Lquidos Slidos Slidos Lquidos Residuos no anatmicos Slidos Lquidos Objetos punzocortantes Slidos ENVASADO Recipientes hermticos Bolsas de polietileno Bolsas de polietileno Recipientes hermticos Bolsas de polietileno Recipientes hermticos Recipientes rgidos polipropileno COLOR Rojo Rojo Amarillo Amarillo Rojo Rojo Rojo
Durante el envasado, los RPBIs no debern mezclarse con ningn otro tipo de residuos municipales o peligrosos, e identificado con el smbolo universal de riesgo biolgico y la leyenda RESIDUOS PELIGROSOS BIOLGICOINFECCIOSOS, llenar las bolsas a un 80 % de su capacidad, y cerrarlas antes de ser transportadas al sitio de almacenamiento temporal y no podrn ser abiertas o vaciadas. Las bolsas deben cumplir con los parmetros tcnicos establecidos en la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002. Proteccin ambiental. Salud ambiental-Residuos peligrosos biolgico-infecciosos- Clasificacin y especificaciones de manejo. Para los residuos peligrosos punzocortantes y residuos peligrosos lquidos se debe utilizar recipientes rgidos, con las caractersticas tcnicas de composicin, diseo, ensamble y cierre establecidos en la NOM-087-SEMARNATSSA1-2002, destructibles por mtodos fsicos, e identificados con la leyenda "RESIDUOS PELIGROSOS PUNZOCORTANTES BIOLOGICO-INFECCIOSOS" y marcados con el smbolo universal de riesgo biolgico. Los recipientes se llenarn hasta el 80% de su capacidad, asegurando de no abrir o vaciar stos..
1 4
2. Almacenamiento Destinar un rea exclusiva para el almacenamiento temporal de los RPBIs, una vez envasados, almacenar en contenedores metlicos o de plstico con tapa e identificar con rtulos que contengan el smbolo universal de riesgo biolgico, con la leyenda "RESIDUOS PELIGROSOS BIOLOGICO-INFECCIOSOS". Almacenar temporalmente los RPBIs, conforme al nivel del establecimiento generador, como sigue: (a) Nivel I: Mximo 30 das. (b) Nivel II: Mximo 15 das. (c) Nivel III: Mximo 7 das. Los residuos patolgicos, humanos o de animales (que no estn en formol) se deben conservar a una temperatura no mayor de 4C, en las reas de patologa, o en almacenes temporales con sistemas que puedan conservar esa temperatura. El rea de almacenamiento temporal de RPBIs, debe tener las siguientes condiciones: a) Estar separada de las reas de pacientes, almacn de medicamentos y materiales para la atencin de los mismos, cocinas, comedores, instalaciones sanitarias, sitios de reunin, reas de esparcimiento, oficinas, talleres y lavanderas. b) Estar techada, ser de fcil acceso, para la recoleccin y transporte, sin riesgos de inundacin e ingreso de animales. c) Contar con sealamientos y letreros que identifiquen la peligrosidad de los mismos, en lugares y formas visibles, nicamente podr acceder el personal responsable de estas actividades. d) Su diseo, construccin y ubicacin debe cumplir con las disposiciones establecidas en la NOM-087-SEMARNATSSA1-2002 e) En caso de no contar con espacios disponibles para construir un almacenamiento temporal, utilizar contenedores plsticos o metlicos, y almacenarlos conforme a las disposiciones sealadas en los incisos antes referidos. Los RPBIs, podrn ser almacenados en centros de acopio, autorizados por la SEMARNAT, mismos que debern contar con sistemas de refrigeracin para mantenerlos a una temperatura mxima de 4C . El tiempo de estancia de los RPBIs en un centro de acopio no podr ser mayor a treinta das. 3. Recoleccin y transporte externo

La recoleccin y el transporte de los RPBIs se realiza como sigue: Recolectarse los residuos que cumplan con el envasado, embalado y etiquetado o rotulado. No compactar los RPBIs. Lavar y desinfectar los contenedores utilizados, despus de cada ciclo de recoleccin. Los vehculos deben cumplir con las disposiciones establecidas en la NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 y contar con al autorizacin de la SEMARNAT
No mezclar los RPBIs sin tratamiento con ningn otro tipo de residuos municipales o de origen industrial.
1 4
4. Tratamiento

Los RPBIs deben ser tratados por mtodos fsicos o qumicos garantizando la eliminacin de microorganismos patgenos y quedar irreconocibles para su disposicin final en los sitios autorizados. La operacin de sistemas de tratamiento requieren autorizacin previa de la SEMARNAT. Los residuos patolgicos sern incinerados o inhumados. En caso de ser inhumados debe realizarse en sitios autorizados por la SSA.
5. Disposicin final Los RPBIs tratados e irreconocibles, podrn disponerse como residuos no peligrosos en sitios autorizados por las autoridades competentes. SMBOLO UNIVERSAL DE RIESGO BIOLGICO
1 4
OBSERVACIONES Y NOTAS
OBSERVACIONES Y NOTAS 1 4
1 4

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Protozoarios (Trichomonas) Raspados prepuciales

Ectoparsitos Raspados de piel

Tabla 2. Requisito para la remisin de muestras para examen parasitolgico

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Ejecucin de las tcnicas

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MANUAL DE PRCTICAS DE PARASITOLOGIA TIEMPO DE PRCTICA: 2 H

Organizacin y Funcionamiento del Laboratorio de Parasitologa

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CAPITULO 3 MTODOS PARASITOLGICOS

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CAPITULO 4 METODOS COPROPARASITOSCOPICOS CUALITATIVOS

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PRACTICA No. 2 Examen directo en fresco

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Fecha del examen_____________________________Responsable__________________________________

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PRACTICA No. 3 Identificacin de Balantidium coli

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Fecha del examen_____________________________Responsable__________________________________

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PRACTICA No. 4 Mtodo de Willis

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Fecha del examen_____________________________Responsable__________________________________

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3. Craig - Faust Parasitologa Clnica Edit. Salvat Barcelona, 1984

PRACTICA No. 5 Mtodo de Faust

Fecha del examen_Responsable______

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Examen microscpico: Fecha del examen_Responsable______

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