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Preparado por: Ileana M. Rivera

¿Qué es un buffer?
ž Es una solución que permite evita un
cambio en pH
ž Es de mucha importancia ya que cada
reacción enzimática, cada célula y cada
extracción tienen un pH óptimo
ž Se usa en cualquier experimento que se
requiera mantener la actividad y/o la
estructura de un material biológico

Seguridad en el Laboratorio
ž Nunca asumir que el material es seguro para
manejar
ž Conocer la composición y los peligros
asociados de cada material con el que se
trabaja
— Verificar el MSDS
ž Seguir las recomendaciones del fabricante al
momento del manejo
— Guantes
— Gafas
— Hood
— Mascara
— Identificación

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Diciembre 2008 1
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¿Qué agua utilizar?

ž El agua es un componente importante
en las soluciones
— La calidad, composición y pH pueden
afectar drásticamente los experimentos
ž Asumir que el agua es el solvente a
menos que se indique lo contrario

Clasificaciones para el agua:

ž De plomería:
— Contiene minerales e impurezas
○ Algunos minerales pueden inhibir algunas
reacciones químicas o prevenir el crecimiento
de bacterias
○ No es una variable reproducible en los
experimentos
ž De laboratorio:
— Tratada con osmosis reversible o destilación
— Adecuada para hacer buffers

ž Reactiva
— Mediante destilación o deionización ha sido
purificada
— Puede ser utilizada para cultivos de células,
reactivos bioquímicos y como buffers
ž Ultra-pura
— Tratada con ultrafiltración para asegurarse
que es libre de endotoxinas
○ Endotoxinas, componente de la pared celular
de las bacterias

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Diciembre 2008 2
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Términos importantes
ž Destilación
— Método mas usado para la purificación de
agua
ž Osmosis
— El agua pasa a través de una membrana
semipermeable y las impurezas no la
pueden atravesar
ž Deionización
— Remoción de iones mediante el paso por
una resina de aniones o cationes

Molaridad (M)
ž Para hacer una solución a una
molaridad en particular necesitamos
saber el volumen requerido y el peso
molecular de la substancia

Dilución
ž La mayor parte del trabajo de
laboratorio es hacer diluciones del buffer
ya preparado
ž C1V1 = C2V2
— Donde:
○ C1 = la concentración antes de la dilución
○ V1 = el volumen antes de la dilución
○ C2 = la concentración después de la dilución
○ V2 = el volumen después de la dilución

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Diciembre 2008 3
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pH
ž Todos los buffer y soluciones usadas en
biología requieren estar a un pH adecuado
ž El pH afecta la solubilidad
ž pH Meter
— Tiene un electrodo sensitivo que mide las
concentraciones de H+
— Se debe calibrar antes de cada uso
○ Se usan tres puntos pH = 4, 7 y 10
○ Se remueve el exceso de fluido con Kimwipes, sin
causar fricción
○ Se lava el electrodo usando agua destilada

Almacenamiento de Buffers
ž Se pueden guardar a 4 ºC o a
temperatura de salón
— Las soluciones concentradas se mantienen
a temperatura de salón ya que el frio las
precipita
ž Los reactivos sensibles a luz se deben
almacenar en botellas de color oscuros
y en una caja cubriendo el envase con
papel de aluminio

Razones para Descartar un

Buffer
ž Descoloración
— Asegurarse que el buffer originalmente no
sea de color
ž Contaminación
— Hongos
— Bacterias
ž Precipitación

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Diciembre 2008 4
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¿Qué vamos a hacer?

ž Preparar el MFI buffer
— 100 mM KCl
— 7 mM KH2PO4
— 18 mM K2HPO4
— 1 mM EDTA
— Disolver en agua destilada (~ 1,800 mL)
— Llevar el pH a 7 con NaOH (1 – 10 M)

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Diciembre 2008 5