USP30 NF25 Spanish Suplemento 1

Primer Suplemento, USPNF
Contenido
3815
Contenido
Integrantes
Funcionarios (20052010) . . . . . . . . . . . . . . . . . . Junta Directiva (20052010) . . . . . . . . . . . . . . . . Consejo de Expertos (20052010) . . . . . . . . . . . . . Comite Ejecutivo del Consejo de Expertos (20052010) Comite s de Expertos (20052010) . . . . . . . . . . . . . Paneles Asesores Ad Hoc (20052010) .........
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3817 3817 3817 3818 3818 3821
Incorporaciones
Monograf as Nuevas que Aparecen en Este Suplemento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Monograf as, Cap tulos Generales, Reactivos y Tablas de Referencia Afectadas por Cambios que Aparecen en Este Suplemento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3823 3825
Advertencias
Introduccio n
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3832
Erratas
Fe de Erratas de USPNF
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3834
Cap tulos Generales
Pruebas y Valoraciones Generales . . . . . . . . . Requisitos Generales para Pruebas y Valoraciones Pruebas y Valoraciones Qu micas . . . . . . . . . Otras Pruebas y Valoraciones . . . . . . . . . . Pruebas y Determinaciones F sicas . . . . . . . . Informacio n General . . . . . . . . . . . . . . . . .
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3838 3838 3908 3908 3908 3927
Reactivos
Reactivos, Indicadores y Soluciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4009
Tablas de Referencia
Envases para Tabletas y Ca psulas . . . . . . . . . . . . . . . . Especicaciones del Envase para Tabletas y Ca psulas . . Descripcio n y Solubilidad . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Descripcio n y Solubilidad Relativa de Art culos de la USP
.......... .......... .......... y del NF . . .
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Suplementos Diete ticos

Monograf as Ociales
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4054
3816
Contenido
Excipientes
Excipientes USP y NF, Agrupados por Categor a
...............................................
4057
Monograf as, NF 25
Monograf as Ociales de NF 25
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4059
Monograf as, USP 30
Monograf as Ociales de USP 30
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4066
ndice . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . I-1 I .
Integrantes / Comite s
3817
Integrantes
Funcionarios de la Convencio n de la USP, Junta Directiva rganos y el Consejo de Expertos, Comite s de Expertos y O Anes
Funcionarios (20052010)
Darrell R. Abernethy, M.D., Ph.D. Presidente Baltimore, MD, EE.UU. Larry L. Braden, R.Ph., D.Sc. Tesorero Acworth, GA, EE.UU. D. Craig Brater, M.D. Presidente Saliente Indianapolis, IN, EE.UU. Susan S. de Mars Secretario Rockville, MD, EE.UU.
Roger L. Williams, M.D. Vicepresidente Ejecutivo y Director Ejecutivo (ex-ocio) Rockville, MD, EE.UU.
Consejo de Expertos (20052010)

NotaAl momento de la impresio n, 40 presidentes de los 41 Comite s de Expertos en el desarrollo de Normas y 14 de los 16 Comite s de Expertos en Informacio n hab an sido elegidos. Au n quedan por elegir 3 presidentes de los Comite s de Expertos en Informacio n, por lo que no esta n incluidos en esta lista. Roger L. Williams, M.D. Vicepresidente EjecutivoDirector Ejecutivo; Presidente, Consejo de Expertos Rockville, MD, EE.UU. James E. Akers, Ph.D. Kansas City, MO, EE.UU. Loyd V. Allen, Ph.D. Edmond, OK, EE.UU. Gregory E. Amidon, Ph.D. Kalamazoo, MI, EE.UU. Bruce R. Bacon, M.D. St. Louis, MO, EE.UU. Anthony C. Bevilacqua, Ph.D. Bedford, MA, EE.UU. Lawrence H. Block, Ph.D. Pittsburgh, PA, EE.UU. Judy P. Boehlert, Ph.D. Arlington, VT , EE.UU. Nancy Jo Braden, M.D. Phoenix, AZ, EE.UU. Mitchell F. Brin, M.D., FAAN Irvine, CA, EE.UU. Barbara A. Burtness, M.D. Philadelphia, PA, EE.UU. Karim A. Calis, Pharm.D. Bethesda, MD, EE.UU. David H. Campen, M.D. Oakland, CA, EE.UU. Robert C. Capen, Ph.D. West Point, PA, EE.UU. Zak T. Chowhan, Ph.D. Gaithersburg, MD, EE.UU.
Junta Directiva (20052010)

John W. Mauger, Ph.D. Presidente Representante del Sector Farmacia Salt Lake City, UT, EE.UU. Carolyn H. Asbury, Ph.D., Sc.M.P.H. Representante del Intere s Pu blico New York, NY, EE.UU. Rene H. Bravo, M.D. Representante At Large San Luis Obispo, CA, EE.UU. Carmen A. Catizone, M.S., R.Ph., D.Ph. Representante At Large Mt. Prospect, IL, EE.UU. Ellen M. Cosgrove, M.D., FACP Representante del Sector Medicina Albuquerque, NM, EE.UU. Duane M. Kirking, Pharm.D., Ph.D. Representante At Large Ann Arbor, MI, EE.UU. Mary Anne Koda-Kimble, Pharm.D. Representante del Sector Farmacia San Francisco, CA, EE.UU. June E. Osborn, M.D. Representante del Sector Medicina New York, NY, EE.UU.
3818
Comite s / Integrantes
Edward M. Cohen, Ph.D. Newtown, CT, EE.UU. Michael A. Cutrera, M.Sc. South Plaineld, NJ, EE.UU. James E. DeMuth, Ph.D. Madison, WI, EE.UU. Patricia M. Dowling, D.V.M. Saskatoon, SK, Canada Bonnie B. Dunn, Ph.D. Bethesda, MD, EE.UU. Thomas S. Foster, Pharm.D. Lexington, KY, EE.UU. Peter R. Ganz, Ph.D. Ottawa, ON, Canada Barry D. Garnkle, Ph.D. West Point, PA, EE.UU. John D. Grabenstein, M.D. Falls Church, VA, EE.UU. Joseph T. Hanlon, Pharm.D. Pittsburgh, PA, EE.UU. Samir A. Hanna, Ph.D. Sea Girt, NJ, EE.UU. Anthony J. Hickey, Ph.D., D.Sc. Chapel Hill, NC, EE.UU. Elliott Israel, M.D. Boston, MA, EE.UU. Joy A. Joseph, M.S. San Fernando, CA, EE.UU. Paul R. Keller, Ph.D. Norwich, NY, EE.UU. A. Douglas Kinghorn, Ph.D. Columbus, OH, EE.UU. David F. Long, Ph.D. Greeneld, IN, EE.UU. Tieraona Low Dog, M.D. Tucson, AZ, EE.UU. Douglas W. MacPherson, M.D. Cheltenham, ON, Canada Carol S. Marcus, M.D., Ph.D. Los Angeles, CA, EE.UU. Patrick A. McKee, M.D. Oklahoma City, OK, EE.UU. Michael D. Murray, Pharm.D. Chapel Hill, NC, EE.UU. Steven L. Nail, Ph.D. West Lafayette, IN, EE.UU. David W. Newton, Ph.D. Winchester, VA, EE.UU. Sharon J. Northup, Ph.D. Highland Park, IL, EE.UU. Philip J. Palermo, Ph.D. Bethel, CT, EE.UU. Mark G. Papich, D.V.M. Raleigh, NC, EE.UU. William F. Popin, M.S. Lehi, UT, EE.UU. Thomas P. Reinders, Pharm.D. Richmond, VA, EE.UU. Susan J. Schniepp, B.S. San Diego, CA, EE.UU. Amy H. Schwartz, Pharm.D., B.C.P.S. Henderson, NV, EE.UU. Eli Shefter, Ph.D. San Diego, CA, EE.UU. Sarah A. Spinler, Pharm.D. Philadelphia, PA, EE.UU. Salomon Stavchansky, Ph.D. Austin, TX, EE.UU. C. Jeanne Taborsky, B.S. Columbia, MD, EE.UU. Henry S. I. Tan, Ph.D. Cincinnati, OH, EE.UU. Dennis P. West, Ph.D., F.C.C.P. Chicago, IL, EE.UU. Timothy J. Wozniak, Ph.D. Indianapolis, IN, EE.UU.
Lynn C. Yeoman, Ph.D. Houston, TX, EE.UU.
Comite Ejecutivo del Consejo de Expertos (20052010)

Estos 15 miembros representan a los Comite s de Expertos en Normas y a los Comite s de Expertos en Informacio n. ROGER L. WILLIAMS, M.D., Presidente James E. Akers, Ph.D.; Loyd V. Allen, Ph.D.; Anthony C. Bevilacqua, Ph.D.; Nancy Jo Braden, M.D.; Mitchell F. Brin, M.D.; David H. Campen, M.D.; Zak T. Chowhan, Ph.D.; James E. DeMuth, Ph.D.; John D. Grabenstein, M.D.; Joy A. Joseph, M.S.; Michael D. Murray, Pharm.D.; Stephen J. Nail, Ph.D.; Susan J. Schniepp, B.S.; Salomon Stavchansky, Ph.D.; Lynn C. Yeoman, Ph.D.
Comite s de Expertos (20052010)

Aerosoles (AER) ANTHONY J. HICKEY, PH.D, D.SC., Presidente Harris S. Cummings, Ph.D.; Paul D. Curry, Jr., Ph.D.; Bo L. Olsson, Ph.D.; Guirag Poochikian, Ph.D.; John K. Simons, Ph.D.; Charles G. Thiel, B.A.; Caroline Vanneste, B.Sc. Productos Biolo gicos y Biotecnolog a: Sangre y Productos Hemoderivados (BB BBP) PETER GANZ, PH.D., Presidente Christopher P. Bryant, Ph.D.; Pamela Clark, M.D., J.D.; Timothy K. Hayes, Ph.D.; Jean F. Huxsoll, Ph.D.; Patrick A. McKee, M.D.; Michael E. Passwater, B.S.; Patrick N. Shaklee, Ph.D.; John J. Sokolowski, B.S., M.S. Productos Biolo gicos y Biotecnolog a: Terapia Ge nica y Celular (BB CGT) WILLIAM E. TENTE, M.S., Presidente Flavia Borellini, Ph.D.; Scott R. Burger, M.D.; Nancy H. Collins, Ph.D.; Maria A. Croyle, Ph.D.; Gary C. du Moulin, Ph.D.; Joseph F. Gallelli, Ph.D.; Beth M. Hutchins, Ph.D.; Ann A. Jakubowski, Ph.D.; Elizabeth J. Read, M.D.; Anthony A.G. Ridgway, Ph.D.; Darin J. Weber, Ph.D. Productos Biolo gicos y Biotecnolog a: Prote nas y Polisaca ridos (BB PP) LYNN C. YEOMAN, PH.D., Presidente Janice T. Brown, M.S.; Jo Demeester, Pharm.D.; John J. Dougherty, M.S.; Julia S. Goldstein, M.D.; Anne Munk Jespersen, B.Sc.; Young-Phil Lee, Ph.D.; Venkat R. Mukku, Ph.D.; Michael G. Mulkerrin, Ph.D.; Harold N. Rode, Ph.D.; Martin Schiestl, Ph.D.; Wesley E. Workman, Ph.D. Productos Biolo gicos y Biotecnolog a: Vacunas y Virolog a (BB VV) BARRY D. GARFINKLE, PH.D., Presidente William M. Egan, Ph.D.; John D. Grabenstein, Ph.D.; Niranjan M. Kumar, Ph.D., EMTM; Douglas C. Lee, Ph.D.; Joan C. May, Ph.D.; Brian K. Nunnally, Ph.D.; Rafaella Romeo, M.D., Ph.D.; John Saldanha, Ph.D.; Phillip C. Thomas, B.A. Biofarmacia (BPC) THOMAS S. FOSTER, PHARM.D., Presidente Diane J. Burgess, Ph.D.; G. Bryan Crist, B.S.; Mario A. Gonzalez, Ph.D.; Vivian A. Gray, B.S.; Johannes Kraemer, Ph.D.; Lewis J. Leeson, Ph.D.; Alan F. Parr, Pharm.D., Ph.D.; James E. Polli, Ph.D.; Leon Shargel, Ph.D.; Eli Shefter, Ph.D.; W. Craig Simon, Ph.D.; Clarence T. Ueda, Pharm.D., Ph.D.; David Young, Pharm.D., Ph.D.
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Farmacia Magistral (CRX) LOYD V. ALLEN, PH.D., Presidente Lisa D. Ashworth, B.S.; Robin H. Bogner, Ph.D.; Gigi S. Davidson, R.Ph.; Deborah R. Holly, Ph.D.; Mary Ann F. Kirkpatrick, Ph.D.; Mark G. Klang, R.Ph., M.S.; Lawson G. Kloesel, R.Ph.; Judith E. Thompson, R.Ph.; Lawrence A. Trissel, B.S. Suplementos Diete ticos: Biodisponibilidad (DS BA) ELI SHEFTER, PH.D., Presidente Hans-Konrad Biesalski, Ph.D., M.D.; Seymour D. Levine, Ph.D.; Raimar Loebenberg, Ph.D.; Phillip C. Smith, Ph.D.; Francis L. Tse, Ph.D.; Mehran Yazdanian, Ph.D. Suplementos Diete ticos: Bota nicos (DSB) A. DOUGLAS KINGHORN, PH.D., Presidente Veronika Butterweck, Ph.D.; George H. Constantine, Ph.D.; Dean Gray, Ph.D.; Mahabir Prashad Gupta, Ph.D.; Ikhlas A. Khan, Ph.D.; Paul Kucera, Ph.D.; Paul L. Schiff, Jr., Ph.D.; Fabio Soldati, Ph.D.; Yoshuiyuki Tokiwa, Ph.D. Suplementos Diete ticos: Cap tulos Generales (DS GC) WILLIAM F. POPIN, M.S., Presidente Josef A. Brinckmann; John H. Cardellina, II, Ph.D.; Steven J. Dentali, Ph.D.; Edward J. Fletcher; Dennis K. J. Gorecki, Ph.D.; Greg A. Pennyroyal; Eike Reich, Ph.D.; James W. Rushing, Ph.D.; Roy Upton Suplementos Diete ticos: Informacio n (DSI) TIERAONA LOW DOG, M.D., Presidente Marilyn L. Barrett, Ph.D.; Mary L. Chavez, Pharm.D.; Paula Gardiner, M.D.; Richard Ko, Pharm.D., Ph.D.; Gail B. Mahady, Ph.D.; Robin J. Marles, Ph.D.; Linda S. Pellicore, Ph.D. Suplementos Diete ticos: No Bota nicos, Nutricio n y Electrolitos (DSN) JOY A. JOSEPH, M.S., Presidente Roger A. Clemens, Ph.D.; Patrick Dunn, M.S.; Carol Johnston, Ph.D.; Richard A. Myers, Ph.D.; Peter J. Rice, Pharm.D., Ph.D.; Wayne Wolf, Ph.D. Cap tulos Generales de Excipientes (EGC) GREGORY E. AMIDON, PH.D., Presidente Harry G. Brittain, Ph.D.; Stephen W. Hoag, Ph.D.; Richard H. Meury, B.S.; Garnet E. Peck, Ph.D.; Eric Schmitt, Ph.D.; Dale E. Wurster, Ph.D. Monograf as de Excipientes 1 (EM1) ZAK T. CHOWHAN, PH.D., Presidente Harold Davis, Ph.D.; Steven H. Edelmuth, Ph.D.; Bruno C. Hancock, Ph.D.; Xiaorong He, Ph.D.; Mary C. Houck, Ph.D.; Ashok V. Katdare, Ph.D. Monograf as de Excipientes 2 (EM2) LAWRENCE BLOCK, PH.D., Presidente Shireesh P. Apte, Ph.D.; Joseph R. Creekmore, Ph.D.; Richard C. Moreton, Ph.D.; Eric J. Munson, Ph.D.; Indira V. Persaud, Ph.D.; Richard H. Wendt, Ph.D. Cap tulos Generales (GC) JAMES E. DEMUTH, PH.D., Presidente David E. Bugay, Ph.D.; Robert T. Cambron, Ph.D.; Geoffrey P. R. Carr, Ph.D.; Thomas J. DiFeo, Ph.D.; Peter R. Grifths, D.Phil.; Gary M. Hieftje, Ph.D.; Robert L. Iser, M.S.; Nancy Lewen, B.S.; Gregory P. Martin, M.S.; Oscar A. Quattrocchi, M.S.; Galen Radebaugh, Ph.D.; Vijaya Ramesh, B.Pharm.; Van D. Reif, Ph.D.; Dennis J. Runser, Ph.D., D.D.S.; Timothy L. Shelbourn, B.S., M.S.; Bobby G. Snider, Ph.D.; Sharon V. Snorek, M.S.; Fred Xi, Ph.D.
Toxicolog a General y Biocompatibilidad de Dispositivos Me dicos (GTMDB) SHARON J. NORTHUP, PH.D., Presidente John Ademola, Ph.D.; Vasudev P. Anand, Ph.D.; Charles Barton, Ph.D., DABT; Paul T. Fawcett, Ph.D.; Lawrence H. Hecker, Ph.D.; Judith Weissinger, Ph.D. Salud Internacional (IH) SALOMON STAVCHANSKY, PH.D., Presidente Anthony Boni; Denis D. Broun, M.D.; Laura Ceron, Pharm.D.; J. C. Craft, M.D.; Prashant M. Dikshit, Ph.D.; Maurice N. G. Dukes, M.D.; Enrique Fefer, Ph.D.; Stan N. Finkelstein, M.D.; Jose Aparcio B. Funck, Ph.D.; Joseph F. Gallelli, Ph.D.; Jeffrey Gren, M.A.; Roman S. Kozlov, M.D., Ph.D.; Howard Levy, Ph.D.; Robert B. Myers, B.S.; Kate K. T. Nguyen, Pharm.D.; Iruka N. Okeke, Ph.D.; Andreas Seiter, Ph.D.; Andrew Walubo, M.D.; Zhong-Yuan Yang Microbiolog a y Garant a de Esterilidad (MSA) JAMES E. AKERS, PH.D., Presidente James P. Agalloco, M.B.A.; Ivan W. Chin, B.A.; Anthony M. Cundell, Ph.D.; Joseph K. Farrington, Ph.D.; Dennis E. Guilfoyle, Ph.D.; David Hussong, Ph.D.; Leonard W. Mestrandrea, Ph.D.; Donald C. Singer, M.S.; Scott V. W. Sutton, Ph.D. Comite de Expertos en Directrices Modelos (MGEC) ROGER L. WILLIAMS, M.D., Presidente Bruce Bacon, M.D.; Nancy Jo Braden, M.D.; Mitchell F. Brin, M.D.; Barbara A. Burtness, M.D.; Karim A. Calis, Pharm.D., M.P.H.; David H. Campen, M.D.; John D. Grabenstein, Ph.D.; Joseph T. Hanlon, Pharm.D.; Elliott Israel, M.D.; Douglas W. MacPherson, M.D.; Patrick A. McKee, M.D.; Amy H. Schwartz, Pharm.D., B.C.P.S.; Sarah A. Spinler, Pharm.D.; Dennis P. West, Ph.D. Desarrollo de Monograf as: Antibio ticos (MD ANT) SAMIR A. HANNA, PH.D., Presidente Rupa Iyer, M.S.; John M. Kovaleski, Ph.D.; William C. Larkins, Ph.D.; Thomas B. May, Ph.D.; Shrikant N. Pagay, Ph.D.; Jeffrey Rohrer, Ph.D. Desarrollo de Monograf as: Antivirales y Antimicrobianos (MD AA) HENRY S. I. TAN, PH.D., Presidente David A. Fay, Ph.D.; Scott C. Messner, B.A.; Andrew C. Plasz, Ph.D.; Ramnarayan Randad, Ph.D.; Timothy S. Tracy, Ph.D.; Danny L. Tuck, Ph.D. Desarrollo de Monograf as: Cardiovascular (MD CV) PAUL R. KELLER, PH.D., Presidente Gary J. Allmaier, Ph.D.; Allan D. Bokser, Ph.D.; Scott A. Goodberlet; Eugene J. McGonigle, Ph.D.; Aloka Srinivasan, Ph.D.; Patricia A. Tapler, B.S. Desarrollo de Monograf as: Tos, Resfriado y Analge sicos (MD CCA) TIMOTHY J. WOZNIAK, PH.D., Presidente Mahmoud M. H. Al Omari, Ph.D.; Tina M. Engel, Ph.D.; Ernest Parente, Ph.D.; Ahalya Wise, M.S.; Joseph E. Yakupkovich, Ph.D.; Patrick N. Yat, Ph.D. Desarrollo de Monograf as: Gastrointestinal, Renal y Endo crino (MD GRE) JUDY P. BOEHLERT, PH.D., Presidente Salah M. Blaih, Ph.D.; Richard A. Blessing, M.S.; Yuri Goldberg, Ph.D.; Ramaswamy Murari, Ph.D.; David G. Reed, B.S., M.B.A.; Stephen G. Schulman, Ph.D.
3820
Desarrollo de Monograf as: Oftalmolog a, Oncolog a y Dermatolog a (MD OOD) EDWARD M. COHEN, PH.D., Presidente Thomas A. Broadbent, Ph.D.; J. Michael Cannon, Ph.D.; John E. Daniels, B.S., M.S.; Gregory C. Doggett, B.S.; Assad J. Kazeminy, Ph.D.; Linda L. Ng, Ph.D.; Bernard A. Olsen, Ph.D. Desarrollo de Monograf as: Psiquia tricos y Psicoactivos (MD PP) SUSAN J. SCHNIEPP, B.S., Presidente David D. Allen, R.Ph., Ph.D., FASHP; Costin C. Camarasu, Ph.D.; Donald L. Lech, M.S.; Marian L. Meyer, Ph.D., M.B.A.; Alaparthi L. Prasad, M.Pharm.; James T. Stewart, Ph.D.; Martin J. Williamson, Ph.D. Desarrollo de Monograf as: Pulmonar y Esteroides (MD PS) MICHAEL A. CUTRERA, M.S., Presidente Quanyin Gao, Ph.D.; Sa ndor Go ro g., Ph.D.; Peter C. Ruenitz, Ph.D.; Michael J. Skibic, B.S., M.S.; Saleh A. Turujman, Ph.D.; Terry D. Wilson, Ph.D. Nomenclatura (NOM) THOMAS P. REINDERS, PHARM.D., Presidente Loyd V. Allen, Jr., Ph.D.; Mary B. Baker, Pharm.D.; Dawn M. Boothe, D.V.M., Ph.D.; Herbert S. Carlin, D.Sc.; Mrunal S. Chapekar, Ph.D.; Edward M. Cohen, Ph.D.; Stephanie Y. Crawford, Ph.D.; Everett Flanigan, Ph.D.; Thomas S. Foster, Pharm.D.; Michael J. Groves, Ph.D.; William Heller, Ph.D.; David F. Long, Ph.D.; Ginette A. Pepper, Ph.D.; Jerry Phillips, B.S.; Philip D. Walson, M.D.; Chao-Mei Yu, Ph.D. Envasado y Almacenamiento (P&S) CARYL JEANNE TABORSKY, B.S., Presidente Clint Bullock, B.S.; Joe Ciezkowski, B.S., M.S.; Steven M. Cobb, B.S.; Michael N. Eakins, Ph.D.; Mary G. Foster, Pharm.D.; Judith Haber, B.A.; Edward L. McKinley, B.S.; Regina Peacock, R.Ph., Ph.D.; Angi S. Rosenberry, B.A. Productos Parenterales: Industriales (PPI) STEVEN NAIL, PH.D., Presidente Michael J. Akers, Ph.D.; D. Scott Aldrich, B.S.; James C. Boylan, Ph.D.; David F. Driscoll, Ph.D.; Linda Felver, Ph.D.; Michael J. Groves, Ph.D.; Dana M. Guazzo, Ph.D.; Mary Joan Hampson-Carlin, B.S., M.B.A.; Stephen E. Langille, Ph.D.; Russell E. Madsen, M.S. Formas Farmace uticas (PDF) DAVID F. LONG, PH.D., Presidente Kenneth S. Alexander, Ph.D.; Paul M. Bummer, Ph.D.; Pramod K. Gupta, Ph.D.; Ralph A. Heasley, Ph.D.; Keith Marshall, Ph.D.; Kathi Rinesmith, R.Ph., M.S.; Allen Rudman, Ph.D.; J. Howard Rytting, Ph.D.; Thomas R. Tice, Ph.D. Aguas para Uso Farmace utico (PW) ANTHONY C. BEVILACQUA, PH.D., Presidente Max S. Lazar, B.A.; Nrapendra Nath, Ph.D.; Carl C. Roe, B.S.; Bruno Rossi; Rostyslaw O. Slabicky, B.S.; Teri C. Soli, Ph.D. Informacio n Radiofarmace utica (RI) CAROL S. MARCUS, M.D., PH.D., Presidente Jorge R. Barrio, Ph.D.; R. Edward Coleman, M.D.; Alvin J. Lorman, J.D.; Donald M. Lyster, Ph.D.; James A. Ponto, M.S.; Laura L. Ponto, Ph.D.; Barry A. Siegel, M.D.; Edward B. Silberstein, M.D.; James B. Stubbs, Ph.D., Mathew Thakur, Ph.D. Radiofa rmacos y Agentes para Ima genes Me dicas (RMI) BONNIE B. DUNN, PH.D., Presidente Thomas E. Boothe, Ph.D.; Patricia E. Cole, M.D., Ph.D.; Joseph C. Hung, Ph.D.; Ravindra K. Kasliwal, Ph.D.; Hank Kung, Ph.D.; Jerome M. Lewis, M.D., Ph.D.; Steve Zigler, Ph.D.
Esta ndares de Referencia (RS) PHILIP J. PALERMO, PH.D., Presidente Richard E. Ashley, B.S.; Mark S. Bailey, MRSC; Matthew W. Borer, Ph.D.; Raymond A. Cox, M.A.; David A. Fay, Ph.D.; Mamta Gautam-Basak, Ph.D.; Antony Raj Gomas, M.S.; Ralph Gomez, Ph.D.; Gyongyi S. Gratzl, Ph.D.; Vivian A. Gray, B.S.; Samir A. Hanna, Ph.D.; Ruth E. Homan, Ph.D., J.D.; Shaohong Jin, B.A.; Gregory T. Kaster, M.B.A.; Pauline M. Lacroix, M.Sc.; Judy A. Lee, Ph.D.; Dorota Matecka, Ph.D.; Moshe Nulman, M.Sc.; Brian K. Nunnally, Ph.D.; Raphael Ornaf, Ph.D.; Reenie Parris; Hasmuth B. Patel, Ph.D.; Guirag Poochikian, Ph.D.; Michael A. Ribick, M.A.; Maria Ine s R. M. Santoro, Ph.D.; Richard H. Wendt, Ph.D.; Manfred E. Wolff, Ph.D.; Wesley E. Workman, Ph.D. Uso Seguro de Medicamentos (SMU) MICHAEL D. MURRAY, PHARM.D., Presidente Suzanne C. Beyea, Ph.D., R.N.; Maureen Cahill B.S.N., M.S.N.; William Elliot, M.D.; Elizabeth A. Flynn, Ph.D., R.Ph.; Howard E. Greenberg, M.D.; Matthew C. Grissinger, B.S.; Mark L. Horn, M.D.; William N. Kelly, Pharm.D.; Gerald McEvoy, Pharm. D.; Ronald A. Nosek, R.Ph., M.S.; Marjorie A. Phillips, M.S. R.Ph.; Joanne G. Schwartzberg, M.D.; Deborah Simmons, R.N., M.S.N., CCRN, CCNS; Carl A. Sirio, M.D.; John Straumanis, M.D.; Mark Sullivan, Pharm.D.; Kathleen Uhl, M.D. Estad stica (STAT) ROBERT C. CAPEN, PH.D., Presidente Robert F. Dillard, M.S.; Kristi L. Grifths, Ph.D.; Anthony G. Okinczyz, M.P.H., M.B.A.; Trace W. Searls, Ph.D.; Robert Singer, M.S.; Charles Y. Tan, Ph.D.; Lynn D. Torbeck, M.S. Preparaciones Magistrales Este riles (SCC) DAVID W. NEWTON, PH.D., Presidente Samuel C. Augustine, Pharm.D.; Mary B. Baker, Pharm.D.; James F. Cooper, Pharm.D.; Donald J. Filibeck, Pharm.D.; Larry W. Grifn, B.S.; Kenneth L. Hughes, B.S.; Eric S. Kastango, M.B.A.; Keith H. St. John, M.S.; Laura A. Thoma, Pharm.D.; Lawrence A. Trissel, B.S.; James Wagner Medicamentos Veterinarios (VET) MARK G. PAPICH, D.V.M., M.S., Presidente Dawn M. Boothe, D.V.M., Ph.D.; Gigi Davidson, Ph.D.; Carol A. Davis, Ph.D.; Arthur J. Faulkner, M.S.; Brian J. Fichter, Pharm. D., R.Ph.; Todd P. Foster, Ph.D.; Krishan Kumar, Ph.D.; Luis Ocampo, D.V.M.; Cathy L. Wood, B.S. Informacio n sobre Medicina Veterinaria (VMI) PATRICIA M. DOWLING, D.V.M., Presidente Terrence P. Clark, D.V.M., Ph.D.; Devin Wade Elias; Ronette Gehring, B.V.Sc., MmedVet, MRCVS; Dinah G. Jordan, Pharm.D.; Vernon Cory Langston, D.V.M., Ph.D.; Katrina L. Mealey, D.V.M., Ph.D.; Mark G. Papich, D.V.M., M.S.; M. Gatz Riddell, D.V.M., Ph.D.
Comite s de Expertos en Informacio n (20052010)

Comite de Expertos en Cardiolog a SARAH A. SPINLER, Pharm.D., Presidente Joseph R. Carver, M.D.; Mark Cziraky, Pharm.D.; Cynthia Kirman, Pharm.D.; Nancy M. Allen LaPointe, Pharm.D.; Alexander Shepherd, M.D., Ph.D.; Barbara S. Wiggins, Pharm.D. Comite de Expertos en Dermatolog a DENNIS P. WEST, Ph.D., F.C.C.P., Presidente Robert J. Anderson, J.D.; Robert J. Anderson, Pharm.D.; Frederick A. Curro, D.M.D., Ph.D.; Steven R. Feldman, M.D., Ph.D.; Ali Moiin, M.D.
3821
Comite de Expertos en Endocrinolog a KARIM ANTON CALIS, Pharm.D., M.P.H., Presidente Glenn Braunstein, M.D.; Lawrence Frohman, M.D.; Frederick G. Hom, M.D.; Charles D. Ponte, Pharm.D.; Frank Pucino, Pharm.D.; Robert E. Ratner, M.D. Comite de Expertos en Gastroenterolog a BRUCE R. BACON, M.D., Presidente Karl E. Anderson, M.D.; Roger Clemens, Ph.D.; Neal M. Davies, Ph.D.; Arthur I. Jacknowitz, Pharm.D.; Cynthia Kirman, Pharm.D. Comite de Expertos en Hematolog a PATRICK A. MCKEE, M.D., Presidente Joseph E. Addiego, M.D.; Judith C. Anderson, M.D.; Philip C. Comp, M.D., Ph.D.; Kevil L. Moore, M.D.; Gabriel A. Shapiro, M.D. Comite de Expertos en Inmunolog a JOHN D. GRABENSTEIN, Ph.D., Presidente Roy D. Altman, M.D.; Cheston M. Berlin, M.D.; Leonard Bielory, M.D.; Philip Marcus, M.D., M.P.H.; Dennis M. Williams, Pharm.D. Enfermedades Infecciosas DOUGLAS W. MACPHERSON, M.D., Presidente William B. Baine, M.D.; Shukai Bala, Ph.D.; Paul O. Gubbins, Pharm.D.; Paul D. Holtom, M.D.; Marisel Segarra-Newnham, Pharm.D., M.P.H. Neurolog a/Otorrinolaringolog a/Oftalmolog a MITCHELL F. BRIN, M.D., FAAN, Presidente Andrew Blitzer, Ph.D.; Neil M. Bressler, M.D.; Vinay Chaudhry, M.D.; David A. Lee, M.D.; Joel Mindel, M.D., Ph.D.; Randal A. Otto, M.D.; Melody Ryan, Pharm.D. Oncolog a BARBARA ANN BURTNESS, M.D., Presidente Christine H. Chung, M.D.; Michael S. Edwards, Pharm.D., M.B.A.; Alok A. Khrana, M.D.; Nancy L. Lewis, M.D.; Sandra Swain, M.D. Psiquiatr a AMY H. SCHWARTZ, Pharm.D., Presidente Lawrence J. Cohen, Pharm.D.; M. Lynn Crismon, Pharm.D.; William Fann, M.D.; Marty Mattei, Pharm.D.; Paul M. Packman, M.D.; J. Russell Teagarden, M.A. Enfermedades Pulmonares y Alergias ELLIOT ISRAEL, M.D., Presidente Leonard Bernstein, M.D.; Leonard Bielory, M.D.; David Lorber, M.D.; Karen J. Tietze, Pharm.D.; Dennis M. Williams, Pharm.D. Reumatolog a DAVID H. CAMPEN, M.D., Presidente Gregory J. Dennis, M.D.; Evelyn V. Hess, M.D.; Gail S. Kerr, M.D.; Lee S. Simon, M.D.; Fredrica Smith; Steve Zlotnick, Pharm.D. Poblaciones Especiales/Farmacolog a Cl nica JOSEPH T. HANLON, Pharm.D., Presidente Darrell Abernathy, M.D., Ph.D.; Rudi Ansbacher, M.D.; Frederick A. Curro, Ph.D., D.M.D.; G. Robert DeYoung, Pharm.D.; Melvin B. Heyman, M.D.; Michael J. Koronkowski, Pharm.D.; William Troutman, Pharm.D.; Wayne Snodgrass, M.D. Ph.D.
Proceso de Decisio n Terape utica NANCY JO BRADEN, M.D., Presidente Elizabeth Chrischilles, Ph.D.; Trinka Coster, M.D.; Brian L. Erstad, Pharm.D.; Sandra L. Kane-Gill, Pharm.D.; David B. Lorber, M.D.; Edward Westrick, M.D., Ph.D.
Paneles Asesores Ad Hoc (20052010)

NotaEl siguiente listado corresponde a los Paneles Asesores Ad Hoc, y sus respectivos miembros, que se constituyeron y aprobaron hasta el mes de mayo de 2006. Los Paneles Asesores Ad Hoc se forman continuamente durante el ciclo de revisio n de la USP y en el futuro se publicara n otros listados de miembros. Panel Asesor Ad Hoc de Ana lisis Bioestad stico h111i ROBERT SINGER, M.S., Presidente Janice D. Callahan, Ph.D.; James E. DeMuth, Ph.D.; Henry Hsu, Ph.D.; David Lansky; Venkat R. Mukku, Ph.D.; Doris Weissman, N.P. Comisio n sobre los Derechos de Propiedad Intelectual, Innovacio n y Salud Pu blica (CIPIH) STAN N. FINKELSTEIN, M.D., Presidente Linda Carrier-Walker; Mei Ling Chen, Ph.D.; Patricia M. Danzon, Ph.D.; Peter Gund, Ph.D.; Victoria Hale, Ph.D.; Chris Hentschel, Ph.D.; Ton Hoek; Precious Matsoso; Carl C. Peck, M.D.; Sauwakon Ratanawijitrasin, Ph.D.; Prof. Sir Michael Rawlins; Andreas Seiter, M.D.; Prof. Amor Toumi; Prof. Stuart Walker; Krisantha Weerasuriya, M.D. Desarrollo de Valoraciones Biolo gicas h1032i JANICE T. BROWN, M.S., Presidente Jo Demeester, Ph.D.; John Hill; Anthony Mire-Sluis, Ph.D.; David M. Lansky, Ph.D.; Venkat R. Mukku, Ph.D.; Karen J. Roberts, R.Ph.; Nancy Sajjadi; Mark Schenerman; Robert Singer, M.S.; Wesley E. Workman, Ph.D. Desarrollo de Monograf as de Heparina y Heparinoides PATRICK N. SHAKLEE, Ph.D., Presidente Gyo ngyi Gratzl, Ph.D.; Elaine Gray, Ph.D.; Kristian Johansen, Ph.D.; Jeanine M. Walenga, Ph.D. Calibradores de Disolucio n VIVIAN A. GRAY, B.S., Presidente Larry L. Augsburger, Ph.D.; William Barr; Cynthia K. Brown; G. Bryan Crist, B.S.; Paul Fackler, Ph.D.; Elisabeth Kovacs; Johannes Kraemer, Ph.D.; Herman Lam, Ph.D.; Lewis J. Leeson, Ph.D.; Mary D. Oates, Ph.D.; Rennie Parris; Thomas S. Savage, B.S. Suero Fetal Bovino GARY C. DUMOULIN, Ph.D., Presidente Joseph A. Albanese, Ph.D.; Firelli Alonso-Caplen, Ph.D.; Anthony H. Davies, Ph.D.; Kimberly Dezura, M.S.; Bill Fisher; Joyce L. Frey-Vasconcells, Ph.D.; Barry D. Garnkle, Ph.D.; Mario Gorziglia; Kendall Graber; Greg Hanson; Niranjan M. Kumar, Ph.D, EMTM; Cindy Miller; Rod Monroy, Ph.D.; Yvonne A. Reid, Ph.D.; Mario Romano; Joseph D. Santangelo, Ph.D.; Bill Siegel; Mark J. Stramaglia R.Ph., M.B.A.; William E. Tente, M.S.; Phillip C. Thomas, B.A.; Stephen Wessman Citometr a de Flujo h1027i ELIZABETH J. READ, M.D., Presidente David Anderson; Scott R. Burger, M.D.; Nancy H. Collins, Ph.D.; Gary C. duMoulin, Ph.D.; Burt Houtz, CLS; Ann A. Jakubowski, Ph.D., M.D.; William Telford, Ph.D; William E. Tente, M.S.
3822
Metales Pesados h231i NANCY LEWEN, Presidente Catherine W. Andersen, M.S.; Charles Barton, Ph.D., DABT; Molly Chacko; John Geary; Assad Kazeminy, Ph.D.; Mindi Osgatharp, M.S.; Timothy L. Shelbourn, M.B.A; Robert Wiens, M.S.; Fred Xi, Ph.D. Plasma Humano JEAN F. HUXSOLL, Ph.D., Presidente Joseph Bertolini, Ph.D.; Pamela Clark, M.D., J.D.; Peter R. Ganz, Ph.D.; Elaine Gray, Ph.D.; Timothy K. Hayes, Ph.D.; Mary Ann Lamb, Ph.D.; Elizabeth J. Read, M.D.; John Saldanha, Ph.D.; John J. Sokolowski, B.S., M.S.; Gerold Zerlauth, Ph.D. Me todos de Prueba Inmunolo gicos h1067i NIRANJAN M. KUMAR, Ph.D., EMTM Arun Arunachalam, Ph.D.; Anu Bansal, Ph.D.; Ronald L. Bowsher, Ph.D.; Connie Cullen, Ph.D.; Subhash Dhawan, Ph.D.; David Good; Sydney Grossberg, M.D.; Sahlini Gupta; Kelledy Manson, M.S.; John R. Mascola, M.D.; Hersh Mehta, Ph.D.; Robert Strouse, Ph.D.; Robin Thorpe, Ph.D.; Jennifer Waters, Ph.D.; Ying Zhang, Ph.D. Ana lisis de los Datos de Errores en la Administracio n y Toma de Medicamentos CDR. RONALD A. NOSEK, R.Ph, M.S. W. Ray Bullman; Barbara Mark, Ph.D., R.N., FAAN; Dan Morrow, Ph.D.; Gordy Schiff, M.D.; Andrew C. Seger, Pharm.D.; Patricia Sokol, R.N., J.D.; Robert J. Weber, R.Ph., M.S., FASHP Espectrofotometr a en el Infrarrojo Cercano h1119i ROBERT T. CAMBRON, Ph.D., Presidente David E. Bugay, Ph.D.; Mr. Emil W. Ciurczak; Peter R. Grifths, D.Phil.; Zhijun Jiang, Ph.D.; Ronald W. Miller, Ph.D. cidos Nucleicos h1125i Te cnicas Basadas en A JOHN SALDANHA, Ph.D., Presidente Margaret C. Cam, Ph.D.; Carole Foy, Ph.D.; Indira Hewlett, Ph.D.; Marcia Holden, Ph.D.; Dirk Loeffert, Ph.D.; Todd Martinsky, Ph.D.; Brian K. Nunnally, Ph.D.; Charles Y. Tan, Ph.D.; Wesley E. Workman, Ph.D.; Gerold Zerlauth, Ph.D. Pruebas de Desempen oV a Inhalatoria VIVIAN A. GRAY, B.S.; ANTHONY HICKEY, Ph.D., D.SC., Copresidentes Neal Davies, Ph.D.; Craig Dunbar, Ph.D.; Frank M. Etzler, Ph.D.; Marc D. Finn; Bo L. Olsson, Ph.D.; Michael T. Riebe, Ph.D.; Masahiro Sakagami, Ph.D.; Michael J. Smurthwaite; David C. Thompson, Ph.D.; John Veranth, Ph.D. Pruebas de Desempen oInyectables LEON SHARGEL, Ph.D., Presidente Diane J. Burgess, Ph.D.; Brian C. Clark, Ph.D.; Mary Joan Hampson-Carlin, B.S., M.B.A.; Pankaj Shah, Ph.D.; Mary Stickelmeyer, Ph.D.; Thomas R. Tice, Ph.D.; David Young, Pharm.D., Ph.D. Pruebas de Desempen oV a Mucosa ELI SHEFTER, Ph.D., JOHANNES KRAEMER, Ph.D., Copresidentes Bruce Aungst, Ph.D.; Stuart Bates; Sarath Chandar, M.B.A.; Pramod K. Gupta, Ph.D.; Munir Hussain, Ph.D.; Stig R. Knudsen, M.Sc. Pruebas de Desempen oProductos To picos CLARENCE T. UEDA, Ph.D., Presidente Kris Derdzinski, Ph.D.; Gary Ewing, Ph.D.; Gordon Flynn, Ph.D.; Howard Maibach, Ph.D.; J. Howard Rytting, Ph.D.; Steve Shaw, Ph.D.; Kailas Thakker, Ph.D.; Avi Yacobi, Ph.D.
Prote na A MICHAEL G. MULKERRIN, Ph.D., Presidente James Bingham, Ph.D.; Tomas Bjo rkman, Ph.D.; Russell Hart, Ph.D.; Kenneth Hoffman, Ph.D.; David Hutton, Ph.D.; Anders Larsson, M.D.; Duncan Low, Ph.D.; Jay Madan; Ariane Marolewski, Ph.D.; Victor Van Cleave, Ph.D.; Helen Wood, Ph.D. Anticuerpos Monoclonales Recombinantes de Uso Terape utico h1260i MICHAEL G. MULKERRIN, Ph.D., Presidente Richard Francis, Ph.D.; Venkat R. Mukku, Ph.D.; Thomas Patapoff, Ph.D.; Ruth Wolff, Ph.D.; Lynn C. Yeoman, Ph.D. Resolucio n 3Nuevas Ciencias y Tecnolog as JAMES E. AKERS, Ph.D., Presidente Amir Attaran, J.D.; Prabir Basu, Ph.D.; J. Lyle Bootman, Ph.D.; Alan E. Guttmacher, M.D.; Rodney Ho, Ph.D.; Melvin V. Koch, Ph.D.; William F. Koch, Ph.D.; Carol Kovac; Steve Leeder, Ph.D., Pharm.D; Peter J. Neumann, Sc.D.; Thomas R. Oliver, Ph.D.; Bernard Pe coul, M.D., M.P.H.; Cosette J. Serabjit-Singh, Ph.D.; Henry Steger, Ph.D.; Peter W. Swaan, Ph.D.; Garold S. Yost, Ph.D. Traduccio n al Ruso ROMAN S. KOZLOV, M.D. y ALEXANDER P. ARZAMASTSEV, Copresidentes Ricardo Cabeza de Vaca; Victor A. Dmitriev Sergey V. Boll; Professor Alexander A. Firsov; Valery A. Bykov; Alexander N. Schavlinsky; Liliya V. Titiova Traduccio n al Espan ol ENRIQUE FEFER, Ph.D., Presidente Peggy Casanova, M.Sc.; Ofelia Espejo, Ph.D.; Lidiette Fonseca Gonzalez, M.Sc.; Jose Jua rez Eyzaguirre, Ph.D.; Jose Maria Parisi, M.Sc.; Regina Pezoa, Ph.D.; Luisa Fernanda Ponce DLeo n Quiroga, Ph.D.; Oscar Quattrocchi, M.Sc.; Doris Rivera, M.Sc. Vacunas y Me todos de Prueba para Vacunas h1235i WILLIAM EGAN, Ph.D. Presidente Kathy Coelingh, Ph.D.; Maurice W. Harmon, Ph.D.; John P. Hennessey, Jr., Ph.D.; Niranjan M. Kumar, Ph.D., EMTM; Jack Love, Ph.D.; Joan C. May, Ph.D.; Sridhar Pennathur, Ph.D.; Cecile Ponsar, Ph.D.; Susan Powers, Ph.D. Validacio n de Valoraciones Biolo gicas h1033i ROBERT SINGER, M.S.; Presidente Janice D. Callahan, Ph.D.; David Lansky, Ph.D.; Brian R. Peterson; Nancy Sajjadi; Timothy Schoeld Sistema de Clasicacio n Biofarmace utica para Productos Veterinarios MARK G. PAPICH, D.V.M., M.S., Presidente Gordon L. Amidon, Ph.D.; Dawn M. Boothe, D.V.M., Ph.D.; Carol A. Davis, Ph.D.; Raafat Fahmy, Ph.D.; Marilyn N. Martinez, Ph.D.; Sanja Modric, Ph.D.; James E. Polli, Ph.D. Farmacopea de Medicina Veterinaria VERNON CORY LANGSTON, D.V.M., Ph.D. Dawn M. Boothe, D.V.M., Ph.D.; Gigi S. Davidson, R.Ph.; Patricia M. Dowling, D.V.M.; Mark G. Papich, D.V.M., M.S. Me todos de Pruebas Virolo gicas h1237i BARRY D. GARFINKLE, Ph.D., Presidente Inter no Robert Bell, Ph.D.; Flavia Borellini, Ph.D.; Todd M. Gierman, Ph.D.; Kendall Graber; Douglas C. Lee, Ph.D.; Raymond Nims, Ph.D; Mario J. Marcon; Raffaella Romeo, M.D., Ph.D.; Mike Rubino; John Saldanha, Ph.D.; Phillip C. Thomas; Martin Wisher, Ph.D.
Incorporaciones
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Incorporaciones
Art culos Nuevos que Aparecen en Este Suplemento
TULOS GENERALES CAPI h1052i Art culos Obtenidos Aminoa cidos h1053i Art culos Obtenidos Capilar h1054i Art culos Obtenidos h1055i Art culos Obtenidos h1056i Art culos Obtenidos Gel de Poliacrilamida por Biotecnolog aAna lisis de por por por por h1057i Art culos Obtenidos por Biotecnolog aValoracio n de Prote nas Totales Biotecnolog aElectroforesis h1070i Ambulancias y Veh culos para Servicios Me dicos de EmergenciaAlmacenamiento de Preparaciones Biotecnolog aIsoelectroenfoque h1080i Excipientes Farmace uticos a GranelCerticado de Ana lisis Biotecnolog aMapeo de Pe ptidos h1184i Pruebas de Sensibilizacio n Biotecnolog aElectroforesis en h1217i Fuerza de Ruptura de las Tabletas
TICOS SUPLEMENTOS DIETE Metilsulfonilmetano Metilsulfonilmetano, Tabletas
NF 25 Copol mero de Amino Metacrilato Aceite de Coco Eritritol Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo
USP 30 Alu mina, Magnesia y Carbonato de Calcio, Tabletas Masticables Alu mina, Magnesia y Simeticona, Tabletas Masticables Alu mina, Magnesia, Carbonato de Calcio y Simeticona, Tabletas Masticables Sulfato de Aluminio y Acetato de Calcio para Solucio n To pica Besilato de Amlodipino Subsalicilato de Bismuto, Suspensio n Oral Subsalicilato de Bismuto, Tabletas Bisoctrizol Budeso nida Carbonato de Calcio, Magnesia y Simeticona, Tabletas Masticables tica Ciprooxacino y Dexametasona, Suspensio n O Dantroleno So dico Dantroleno So dico para Inyeccio n Acetato de Desmopresina Acetato de Desmopresina, Inyeccio n Desogestrel y Etinil Estradiol, Tabletas Didanosina Didanosina para Solucio n Oral Carbonato So dico de Dihidroxialuminio, Tabletas Masticables Doxazosina, Tabletas Drospirenona Estradiol y Acetato de Noretindrona, Tabletas Famotidina, Inyeccio n Fosinopril So dico Fosinopril So dico, Tabletas Fosinopril So dico e Hidroclorotiazida, Tabletas Acetato de Gonadorelina Bitartrato de Hidrocodona y Metilbromuro de Homatropina, Tabletas Suspensio n de Insulina Humana Iso fana e Inyeccio n de Insulina Humana Irbesarta n, Tabletas Irbesarta n e Hidroclorotiazida, Tabletas Mononitrato de Isosorbida, Tabletas Acetato de Leuprolida Lidoca na y Priloca na, Crema Magaldrato y Simeticona, Tabletas Masticables Meloxicam Mupirocina, Crema Mupirocina Ca lcica Clorhidrato de Nefazodona, Tabletas Nevirapina, Tabletas Norgestimato y Etinil Estradiol, Tabletas Pentazocina y Acetaminofeno, Tabletas Prednicarbato, Crema Prednicarbato, Ungu ento Clorhidrato de Ropivaca na, Inyeccio n Tiabendazol, Tabletas Masticables
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Incorporaciones
USP 30 Fenito na, Tabletas Masticables Clorhidrato de Fexofenadina, Tabletas Acetato de Fluorometolona
Topiramato cido Valproico, Inyeccio A n
Cambios en T tulos Ociales que Aparecen en Este Suplemento

Los siguientes cambios de t tulos sera n ociales a partir del 18 de febrero de 2010 T tulo Nuevo Alu mina, Magnesia y Carbonato de Calcio, Tabletas Masticables Alu mina, Magnesia y Simeticona, Tabletas Masticables Alu mina, Magnesia, Carbonato de Calcio y Simeticona, Tabletas Masticables Carbonato de Calcio, Magnesia y Simeticona, Tabletas Masticables Carbonato So dico de Dihidroxialuminio, Tabletas Masticables Fenito na, Tabletas Masticables Magaldrato y Simeticona, Tabletas Masticables Tiabendazol, Tabletas Masticables T tulo Anterior Alu mina, Magnesia y Carbonato de Calcio, Tabletas Alu mina, Magnesia y Simeticona, Tabletas Alu mina, Magnesia, Carbonato de Calcio y Simeticona, Tabletas Carbonato de Calcio, Magnesia y Simeticona, Tabletas Carbonato So dico de Dihidroxialuminio, Tabletas Fenito na, Tabletas Magaldrato y Simeticona, Tabletas Tiabendazol, Tabletas
Incorporaciones
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LISTA DETALLADA
Advertencias Generales, Monograf as, Cap tulos Generales, Reactivos y Tablas Afectadas por los Cambios que Aparecen en Este Suplemento
Los nu meros de pa gina se reeren a este Suplemento. NotaLa siguiente tabla indica, entre pare ntesis, seguido del t tulo de la seccio n o subseccio n, si la seccio n es nueva o si la subseccio n se agrego o elimino de una seccio n ya existente. Las entradas que aparecen sin ninguna designacio n de la forma nueva, agregada o eliminada tienen cambios en la redaccio n que se incluyeron en el texto ocial existente.
Cap tulos Generales Pruebas y Valoraciones Generales

REQUISITOS GENERALES PARA PRUEBAS Y VALORACIONES
h1i Inyectables, 3838 Etiquetas y Etiquetado Envasado h11i Esta ndares de Referencia USP, 3841
MICAS PRUEBAS Y VALORACIONES QUI OTRAS PRUEBAS Y VALORACIONES

h311i Valoracio n de Alginatos, 3908 Aptitud del Sistema
Temperatura h1184i Pruebas de Sensibilizacio n (nuevo), 3991 h1208i Pruebas de EsterilidadValidacio n de Sistemas Aisladores, 3999 Introduccio n Disen o y Construccio n del Aislador Validacio n del Sistema Aislador Vericacio n de la Integridad del Envase Mantenimiento de la Asepsia en el Entorno del Aislador Interpretacio n de los Resultados de las Pruebas de Esterilidad Capacitacio n y Seguridad h1217i Fuerza de Ruptura de las Tabletas (nuevo), 4003 h1222i Productos Farmace uticos con Esterilizacio n TerminalLiberacio n Parame trica, 4005 Introduccio n Generalidades Formas de Esterilizacio n Resumen
Reactivos, Indicadores y Soluciones

ESPECIFICACIONES DE LOS REACTIVOS
Aceite de Cedro, 4009 Acetaldeh do, 4009 Acetanilida, 4009 Acetato Cobaltoso, 4009 Acetato Cu prico, 4009 Acetato de Amilo, 4009 Acetato de Amonio, 4009 Acetato de Butilo Normal, 4009 Acetato de Cadmio, 4009 Acetato de Calcio, 4010 Acetato de Etilo, 4010 Acetato de Gadolinio (Gd III) Hidrato, 4010 Acetato de Isobutilo, 4010 Acetato de Magnesio, 4010 Acetato de Metilo, 4010 Acetato de Plomo, 4010 Acetato Mercu rico, 4010 Acetilacetona, 4010 Acetofenona, 4010 Acetona, 4010 Acetonitrilo, 4010 p-Acetotoluidida, 4010 cido Ace A tico Glacial, 4010 cido Acr A lico, 4011 cido Ad A pico, 4011 cido 4-Amino-2-clorobenzoico, 4011 A cido 4-Amino-3-hidroxi-1-naftalensulfo A nico, 4011 cido Aminoace A tico, 4011 cido Arsenazo III, 4011 A cido Benzoico, 4011 A cido 3-Benzoilbenzoico, 4011 A cido Benzoilfo cido Fenilgliox A rmico (A lico), 4011 cido 4,4-Bis(4-amino-1-naftilazo)-2,2-estilbenodisulfo A nico, 4011 cido Bis(2-etilhexil)fosfo A rico, 4011 cido Bo A rico, 4012 cido But A rico, 4012 cido dl-10-Canforsulfo A nico, 4012 cido Ca A prico, 4012 cido Cianoace A tico, 4012 cido C A trico Anhidro, 4012
SICAS PRUEBAS Y DETERMINACIONES FI h611i Determinacio n de Alcohol, 3908 Me todo IIMe todo de Cromatograf a de Gases h621i Cromatograf a, 3909 Reactivos Cromatogra cos (Rellenos L1, L7, L11 y L60) h730i Espectroqu mica de Plasma, 3912 h785i Osmolalidad y Osmolaridad, 3917 Osmolaridad Medicio n de la Osmolalidad (subseccio n Procedimiento) h905i Uniformidad de Unidades de Dosicacio n, 3919 Introduccio n Uniformidad de Contenido Variacio n de Peso Criterios h921i Determinacio n de Agua, 3924 Me todo 1 (Volume trico) [subt tulo Me todo 1a (Valoracio n Volume trica Directa)]
Informacio n General
h1047i Art culos Obtenidos por Biotecnolog aPruebas (eliminado), 3927 h1052i Art culos Obtenidos por Biotecnolog aAna lisis de Aminoa cidos (nuevo), 3954 h1053i Art culos Obtenidos por Biotecnolog aElectroforesis Capilar (nuevo), 3964 h1054i Art culos Obtenidos por Biotecnolog aIsoelectroenfoque (nuevo), 3968 h1055i Art culos Obtenidos por Biotecnolog aMapeo de Pe ptidos (nuevo), 3970 h1056i Art culos Obtenidos por Biotecnolog aElectroforesis en Gel de Poliacrilamida (nuevo), 3975 h1057i Art culos Obtenidos por Biotecnolog aValoracio n de Prote nas Totales (nuevo), 3979 h1065i Cromatograf a Io nica, 3983 Aparatos h1070i Ambulancias y Veh culos para Servicios Me dicos de EmergenciaAlmacenamiento de Preparaciones (nuevo), 3985 h1080i Excipientes Farmace uticos a GranelCerticado de Ana lisis (nuevo), 3985 h1118i Dispositivos de MonitoreoTiempo, Temperatura y Humedad, 3991 Registradores Electro nicos de Historial de Tiempo
3826
Incorporaciones
cido Clorh A drico, 4012 cido Clorh A drico Diluido, 4012 cido 4-Clorobenzoico, 4012 A cido m-Clorobenzoico, 4012 A cido Cloroge A nico, 4012 cido 2-Cloronicot A nico, 4012 cido Cloroplat A nico, 4012 cido 5-Clorosalic A lico, 4013 cido Cromotro A pico, 4013 cido 2,6-Diclorofenilace A tico, 4013 cido 2,5-Dihidroxibenzoico, 4013 A cido Etanosulfo A nico, 4013 cido Fluorh A drico, 4013 cido Fo A rmico, 4013 cido Fo A rmico al 96 por ciento, 4013 cido Glico A lico, 4013 cido D-Gluco A nico al 50 por ciento en Agua, 4013 cido p-Hidroxibenzoico, 4013 A cido 4-Hidroxiisofta A lico, 4013 cido Hipofosforoso al 50 por ciento, 4014 A cido Isonicot A nico, 4014 cido Litoco A lico, 4014 cido Maleico, 4014 A cido Metacr A lico, 4014 cido Metafosfo A rico, 4014 cido Metanosulfo A nico, 4014 cido 5,5-Metilendisalic A lico, 4014 cido 5-Metoxi-2-metil-3-indolace A tico 4014 cido Mol A bdico, 4014 cido Monocloroace A tico, 4014 cido 2-Naftalenosulfo A nico, 4014 cido N A trico, 4014 cido N A trico Diluido, 4014 cido N A trico Fumante, 4015 cido Nitrilotriace A tico, 4015 cido Nonanoico, 4015 A cido Quenodesoxico A lico, 4015 cido Yodh A drico, 4015 cido Yo A dico, 4015 Acrilato de Etilo, 4015 Alcohol Am lico, 4015 Alcohol terc-Am lico, 4015 Alcohol But lico, 4015 Alcohol But lico Secundario, 4015 Alcohol But lico Terciario, 4015 Alcohol 2-Hidroxibenc lico, 4015 Alcohol Isobut lico, 4015 Alcohol Isoprop lico, 4015 Alcohol Isoprop lico Deshidratado, 4016 Aleacio n de Devarda, 4016 Alumbre, 4016 Alu mina Activada, 4016 Alu mina Anhidra, 4016 Aluminio, 4016 Alumino n, 4016 Amaranto, 4016 4-Amino-6-cloro-1,3-bencenodisulfonamida, 4016 2-Amino-5-clorobenzofenona, 4016 3-Amino-1-propanol, 4016 4-Aminoantipirina, 4016 4-Aminobenzoato de Metilo, 4016 1-(2-Aminoetil)piperazina, 4016 m-Aminofenol, 4017 p-Aminofenol, 4017 N-Aminohexametilenimina, 4017 Anh drido Ace tico, 4017 Anilina, 4017 Anisol, 4017 Antraceno, 4017 Antrona, 4017 Aprobarbital, 4017 Araquidato de Metilo, 4017 L-Asparagina, 4018 Azul Brillante Coomassie R-250, 4018 Azul de Anilina, 4018 Azul de Hidroxinaftol, 4018
Azul de Metileno, 4018 Azul de Tetrazolio, 4018 Behenato de Metilo, 4018 Benceno, 4018 Bencenosulfonamida, 4018 2-Bencilaminopiridina, 4018 1-Bencilimidazol, 4018 Benzaldeh do, 4019 Benzanilida, 4019 Benzhidrol, 4019 Benzoato de Butilo, 4019 Benzoato de Colesterilo, 4019 Benzoato de Etilo, 4019 Benzofenona, 4019 p-Benzoquinona, 4019 Bibencilo, 4019 Bicarbonato de Aminoguanidina, 4019 Bifenilo, 4020 2,2-Bipiridina, 4020 Bis(trimetilsilil)acetamida, 4020 Bis(trimetilsilil)triuoroacetamida, 4020 Bis(trimetilsilil)triuoroacetamida con Trimetilclorosilano, 4020 Bisulfato de Amonio, 4020 Bromo, 4020 p-Bromoanilina, 4020 N-Bromosuccinimida, 4020 Bromuro de Amonio, 4020 Bromuro de Ciano geno, 4021 Bromuro Mercu rico, 4021 1,3-Butanodiol, 4021 2,3-Butanodiona, 4021 ter, 4021 terc-Butil Metil E n-Butilamina, 4021 terc-Butilamina, 4021 4-terc-Butilfenol, 4021 Butiraldeh do (nuevo), 4021 Butirolactona, 4021 Caprato de Metilo, 4022 Caprilato de Metilo, 4022 Carbamato de Metilo, 4022 Carbazol, 4022 Carbonato de Amonio, 4022 Carbonato de Calcio, 4022 Carbonato de Calcio, Esta ndar de Quelatometr a, 4022 Case na, 4022 Catecol, 4022 Cianoacetato de Etilo, 4022 Ciclohexano, 4022 Ciclohexanol, 4023 Cinconidina, 4023 Cinconina, 4023 L-Cistina, 4023 Citrato Cu prico, 4023 Citrato de Calcio, 4023 Citrato Diba sico de Amonio, 4023 Cloramina T, 4023 Clorhidrato de Alprenolol, 4023 Clorhidrato de Benzamidina Hidrato, 4023 Clorhidrato de Benzfetamina, 4024 Clorhidrato de 3,3-Diaminobenzidina, 4024 Clorhidrato de Dihidroquinidina, 4024 Clorhidrato de 2-Etilaminopropiofenona, 4024 Clorhidrato de Fenilhidrazina, 4024 Clorhidrato de Guanidina, 4024 Clorhidrato de Guanina, 4024 Clorhidrato de Hidroxilamina, 4024 Clorhidrato de 1-Naftilamina, 4024 Cloro, 4024 2-Cloro-4-nitroanilina al 99%, 4025 1-Cloroadamantano, 4025 3-Cloroanilina, 4025 Clorobenceno, 4025 4-Clorobenzofenona, 4025 Cloroformiato de 9-Fluorenilmetilo, 4025 Cloroformo, 4025 1-Cloronaftaleno, 4025
Incorporaciones
3827
Clorotrimetilsilano, 4025 Cloruro Cu prico, 4025 Cloruro de Acetilcolina, 4025 Cloruro de Acetilo, 4026 Cloruro de Amonio, 4026 Cloruro de Bario, 4026 Cloruro de Bario Anhidro, 4026 Cloruro de Bencenosulfonilo, 4026 Cloruro de Benciltrimetilamonio, 4026 Cloruro de Benzo lo, 4026 Cloruro de n-Butilo, 4026 Cloruro de Calcio, 4026 Cloruro de Calcio Anhidro (para secado), 4026 Cloruro de Cobalto, 4026 Cloruro de Colina, 4026 Cloruro de 3,5-Dinitrobenzoilo, 4026 Cloruro de Lantano, 4027 Cloruro de Litio, 4027 Cloruro de Magnesio, 4027 Cloruro de Metileno, 4027 Cloruro de Oro, 4027 Cloruro Fe rrico, 4027 Cloruro Mercu rico, 4027 Cobre, 4027 Colestano, 4027 Cortisona, 4027 Decanol, 4027 Dextrano de Alto Peso Molecular, 4027 Dextrina, 4027 Di(2-etilhexil)ftalato, 4027 2,3-Diaminonaftaleno, 4028 2,6-Dibromoquinona-clorimida, 4028 Dibutilamina, 4028 Diciclohexilamina, 4028 Diclorhidrato de N,N-Dimetil-p-fenilendiamina, 4028 Diclorhidrato de 4,4-Dipiridilo, 4028 Diclorhidrato de Hidrazina, 4028 Diclorhidrato de N-(1-Naftil)etilendiamina, 4028 2,4-Dicloro-1-naftol, 4028 2,5-Dicloroanilina, 4028 2,6-Dicloroanilina, 4028 o-Diclorobenceno, 4029 2,6-Diclorofenol-indofenol So dico, 4029 Diclorouoresce na, 4029 Diclorouorometano, 4029 Dicloruro de Etileno, 4029 Dietilamina, 4029 N,N-Dietilanilina, 4029 Dietilenglicol, 4029 Dietilentriamina, 4029 Difenilamina, 4030 Difenilcarbazida, 4030 Difenilcarbazona, 4030 2,2-Difenilglicina, 4030 Digitonina, 4030 10-11-Dihidrocarbamazepina (eliminado), 4030 Dihidroquinina, 4030 Diisopropilamina, 4030 Diisopropiletilamina, 4030 Dimetil Sulfona, 4030 Dimetil Sulfo xido, Grado Espectrofotome trico, 4030 5,5-Dimetil-1,3-ciclohexanodiona, 4030 N,N-Dimetil-1-naftilamina, 4030 N,N-Dimetilacetamida, 4031 p-Dimetilaminoazobenceno, 4031 p-Dimetilaminobenzaldeh do, 4031 2,6-Dimetilanilina, 4031 N,N-Dimetilanilina, 4031 3,4-Dimetilbenzofenona, 4031 2,6-Dimetilfenol, 4031 Dimetilformamida, 4032 N,N-Dimetilformamida Dietil Acetal (eliminado), 4032 N,N-Dimetiloctilamina, 4032 2,5-Dimetoxibenzaldeh do, 4032 1,2-Dimetoxietano, 4032 (3,4-Dimetoxifenil)-acetonitrilo, 4032
m-Dinitrobenceno, 4032 2,4-Dinitroclorobenceno, 4032 2,4-Dinitrofenilhidrazina, 4032 2,4-Dinitrouorobenceno, 4032 Dioxano, 4032 Dio xido de Manganeso Activado, 4032 Disulfuro de Carbono, CS2, 4032 cido 2-Nitrobenzoico), 4032 5,5-Ditio bis (A Ditiotreitol, 4033 Ditizona, 4033 Diyodouoresce na, 4033 Docusato So dico, 4033 1-Dodecanol, 4033 n-Eicosano, 4033 Eicosanol, 4033 Eosina Y (Eosina Amarillenta Y), 4033 Epiandrosterona, 4033 Equilenina, 4033 Eriocromo Cianina R, 4033 Erucato de Metilo, 4033 xido Nitroso, 4033 Esta ndar Certicado de O Estearato de Metilo, 4034 ster Isoprop cido 4-Hidroxibenzoico, 4034 E lico del A ter But E lico, 4034 ter de Petro E leo, 4034 ter Difen E lico, 4034 ter Diisoprop E lico, 4034 ter Et E lico, 4034 ter Et E lico Anhidro, 4034 Etilbenceno, 4034 4-Etilbenzaldeh do, 4034 Etilenglicol, 4034 2-Etoxietanol, 4035 Fluoreno, 4035 Fluorescamina, 4035 4-Fluoroacetofenona, 4035 Fluoruro de Amonio, 4035 Formamida, 4035 Fosfato Diba sico de Amonio, 4035 Fosfato Monoba sico de Amonio, 4035 Ftalato de Bis(2-etilhexilo), 4035 Ftalato de Dibutilo, 4035 Ftalato de Diisodecilo, 4035 Ftalato de Dimetilo, 4035 Ftalato de Dipropilo, 4036 Fucsina Ba sica, 4036 Gel de S lice Octadecilsilanizada para Cromatograf a, 4036 Gitoxina, 4036 Glicerina, 4036 Glucosa, 4036 D-Glucuronolactona, 4036 Guayacol, 4036 Hemate na, 4036 Hematoxilina, 4036 Hemiclorhidrato de Carboximetoxilamina, 4037 Heptadecanoato de Metilo, 4037 n-Heptano para Cromatograf a, 4037 Hexadecanoato de Hexadecilo, 4037 Hexametildisilazano, 4037 Hexametilenimina, 4037 Hexanitrodifenilamina, 4037 n-Hexano, 4037 Hexanofenona, 4037 Hidrazina Hidrato al 85% en Agua, 4037 Hidroquinona, 4038 3-Hidroxiacetofenona, 4038 4-Hidroxiacetofenona, 4038 1-Hidroxibenzotriazol Hidrato, 4038 Hidro xido de Amonio, 4038 Hidro xido de Amonio, 4038 Hidro xido de Amonio al 25 por ciento, 4038 Hidro xido de Bario, 4038 Hidro xido de Calcio, 4038 Hidro xido de Litio, 4038 4-(4-Hidroxifenil)-2-butanona, 4038 D-a-4-Hidroxifenilglicina, 4038
3828
Incorporaciones
8-Hidroxiquinolina, 4038 Imidazol, 4038 Iminoestilbeno (eliminado), 4038 Indeno, 4038 Inosina, 4039 Inositol, 4039 Isopropilamina, 4039 Lactato de Calcio, 4039 Lactosa, 4039 Laurato de Metilo, 4039 Lignocerato de Metilo, 4039 Linoleato de Metilo, 4039 Linolenato de Metilo, 4039 L-Lisina, 4040 Magnesio, 4040 Maleato de Bis(2-etilhexilo), 4040 Mercurio, 4040 Metaborato de Litio, 4040 Metacrilato de Butilo, 4040 Metacrilato de 2-Dimetilaminoetilo, 4040 Metacrilato de Metilo, 4040 Metanol, 4040 Metil Cloroformo, 4040 Metil Etil Cetona, 4040 Metil Sulfo xido, 4040 4-Metil-2-pentanona, 4040 2-Metil-2-propil-1,3-propanodiol, 4040 Metilamina al 40 por ciento en Agua, 4040 N-Metilpirrolidina, 4041 Metoxietanol, 4041 2-Metoxietanol, 4041 Miristato de Isopropilo, 4041 Miristato de Metilo, 4041 Molibdato de Amonio, 4041 Monobromuro de Yodo, 4041 Monocloruro de Yodo, 4041 Mono xido de Plomo, 4041 Morfolina, 4041 Naftaleno, 4041 1,3-Naftalenodiol, 4042 2,7-Naftalenodiol, 4042 2-Naftil Cloroformiato, 4042 1-Naftol, 4042 2-Naftol, 4042 p-Naftolbence na, 4042 Naftoresorcinol, 4042 b-Nicotinamida Adenina Dinucleo tido, 4042 Ninhidrina, 4042 N quel, 4042 Nitrato de Amonio, 4042 Nitrato de Bario, 4042 Nitrato de Cadmio, 4042 Nitrato de Calcio, 4043 Nitrato de Cobalto, 4043 Nitrato de Litio, 4043 Nitrato de Magnesio, 4043 Nitrato de Plomo, 4043 Nitrato Fe rrico, 4043 Nitrato Mercu rico, 4043 5-Nitro-1,10-fenantrolina, 4043 4-Nitroacetofenona, 4043 o-Nitroanilina, 4043 p-Nitroanilina, 4043 Nitrobenceno, 4044 4-(p-Nitrobencil)piridina, 4044 Nitrometano, 4044 1-Nitroso-2-naftol, 4044 Nonadecano, 4044 Oleato de Metilo, 4044 Oxalato de Amonio, 4044 xido de Aluminio, Lavado con A cido, 4044 O xido de Deuterio, 4044 O xido de Magnesio, 4044 O xido de Mesitilo, 4045 O xido Mercu O rico Amarillo, 4045 Palmitato de Metilo, 4045
Pentacloruro de Antimonio, 4045 Perclorato de Litio, 4045 Perclorato de Magnesio Anhidro, 4045 Pero xido de Hidro geno al 30 por ciento, 4045 Persulfato de Amonio, 4045 Polie ster de Succinato de Dietilenglicol, 4045 Pu rpura de m-Cresol, 4046 Queroseno, 4046 Reineckato de Amonio, 4046 Rojo Congo, 4046 Sal de Fast Blue B, 4046 Sal de Fast Blue BB, 4046 cido Cromotro Sal Diso dica de A pico, 4046 Sal Nitroso R, 4046 Salicilato de Etilo, 4046 Sebacato de Bis(2-etilhexilo), 4046 S lice de Diatomeas Calcinado, 4046 Sulfamato de Amonio, 4047 Sulfato Ce rico, 4047 Sulfato Cu prico Anhidro, 4047 Sulfato de Aluminio y Potasio, 4047 Sulfato de Amonio, 4047 Sulfato de Brucina, 4047 Sulfato de Calcio, 4047 Sulfato de Litio, 4047 Sulfato de Magnesio, 4047 Sulfato de Magnesio Anhidro, 4047 Sulfato de p-Metilaminofenol, 4047 Sulfato de N quel, 4048 Sulfato Fe rrico, 4048 Sulfato Ferroso, 4048 Sulfato Mercu rico, 4048 Sulfuro de Hidro geno, 4048 Tetracloruro de Carbono, 4048 Tetrauoroborato de p-Nitrobencenodiazonio, 4048 Tierra de Diatomeas Fundido-Calcinada, 4048 Tierra de Diatomeas Silanizada, 4048 Tiocianato de Amonio, 4049 Tiocianato Mercu rico, 4049 Tornasol, 4049 Tricloruro de Antimonio, 4049 Triuoruro de Boro, 4049 Triuoruro de Boro al 14% en Metanol, 4049 Trio xido de Arse nico, 4049 Trio xido de Cromo, 4049 Vanadato de Amonio, 4049 Verde Brillante, 4049 Yodo, 4049 Yoduro de 1-Etilquinaldinio, 4049 Yoduro de Metilo, 4049 Yoduro Mercu rico Rojo, 4050
TRICAS SOLUCIONES VOLUME

Hidro xido de Potasio, Normal (1 N), 4050 Hidro xido de Sodio, Normal (1 N), 4050 Tiosulfato de Sodio, De cimo Normal (0,1 N), 4050
ESPECIFICACIONES DEL ENVASE PARA TABLETAS Y PSULAS CA
Bitartrato de Hidrocodona y Metilbromuro de Homatropina, Tabletas (agregada), 4051 Clorhidrato de Fexofenadina, Tabletas (agregada), 4051 Clorhidrato de Fexofenadina y Clorhidrato de Pseudoefedrina, Tabletas de Liberacio n Prolongada (agregada), 4051 Clorhidrato de Nefazodona, Tabletas (agregada), 4051 Desogestrel y Etinil Estradiol, Tabletas (agregada), 4051 Doxazosina, Tabletas (agregada), 4051 Estradiol y Acetato de Noretindrona, Tabletas (agregada), 4051 Fosinopril So dico, Tabletas (agregada), 4051 Fosinopril So dico e Hidroclorotiazida, Tabletas (agregada), 4051 Irbesarta n, Tabletas (agregada), 4051 Irbesarta n e Hidroclorotiazida, Tabletas (agregada), 4051
Incorporaciones
3829
Metilsulfonilmetano, Tabletas (agregada), 4051 Mononitrato de Isosorbida, Tabletas (agregada), 4051 Nevirapina, Tabletas (agregada), 4051 Norgestimato y Etinil Estradiol, Tabletas (agregada), 4051 Pentazocina y Acetaminofeno, Tabletas (agregada), 4051 Quinapril, Tabletas (agregada), 4051
N Y SOLUBILIDAD RELATIVA DE ARTI CULOS DESCRIPCIO DE LA USP Y DEL NF

Aceite de Coco (agregada), 4052 Acetato de Desmopresina (agregada), 4052 Acetato de Gonadorelina (agregada), 4052 Besilato de Amlodipino (agregada), 4052 Budeso nida (agregada), 4052 Copol mero de Amino Metacrilato (agregada), 4052 Dantroleno So dico (agregada), 4052 Didanosina (agregada), 4052 Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo (agregada), 4052 Drospirenona (agregada), 4053 Eritritol (agregada), 4053 Estro genos Conjugados Sinte ticos (agregada), 4053 Meloxicam (agregada), 4053 Metilsulfonilmetano (agregada), 4053 Milrinona, 4053 Sevourano (agregada), 4053 Topiramato (agregada), 4053
Impurezas que absorben luz (subseccio n Solucio n de prueba) Valoracio n Copol mero de Amino Metacrilato (nueva), 4060 Silicato de Calcio, 4061 Denicio n pH L mite de uoruro Valoracio n de dio xido de silicio Valoracio n de o xido de calcio Aceite de Coco (nueva), 4062 Eritritol (nueva), 4062 Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo (nueva), 4063 xido de Polietileno, 4064 O Envasado y almacenamiento Identicacio n (prueba B) L mite de o xido de etileno libre (subsecciones Sistema cromatogra co y Procedimiento) Poliisobutileno, 4065 Pe rdida por secado Fosfato Triba sico de Sodio, 4065 Pe rdida por incineracio n
Monograf as (USP 30)

Agua Este ril para Inhalacio n, 4066 pH (eliminada) Amon aco (eliminada) Calcio (eliminada) Dio xido de carbono (eliminada) Cloruros (eliminada) Sulfatos (eliminada) Conductividad (agregada) Agua Este ril para Irrigacio n, 4066 pH (eliminada) Amon aco (eliminada) Calcio (eliminada) Dio xido de carbono (eliminada) Cloruros (eliminada) Sulfatos (eliminada) Conductividad (agregada) Agua Puricada Este ril, 4067 pH (eliminada) Amon aco (eliminada) Calcio (eliminada) Dio xido de carbono (eliminada) Cloruros (eliminada) Sulfatos (eliminada) Conductividad (agregada) Alopurinol, 4067 Denicio n Envasado y almacenamiento Esta ndares de referencia USP Pureza cromatogra ca (eliminada) Compuestos relacionados (agregada) Valoracio n Alu mina, Magnesia y Carbonato de Calcio, Tabletas, 4069 Cambio de t tulo Alu mina, Magnesia y Carbonato de Calcio, Tabletas Masticables (nueva), 4069 Alu mina, Magnesia y Simeticona, Tabletas, 4070 Cambio de t tulo Alu mina, Magnesia y Simeticona, Tabletas Masticables (nueva), 4070 Alu mina, Magnesia, Carbonato de Calcio y Simeticona, Tabletas, 4071 Cambio de t tulo Alu mina, Magnesia, Carbonato de Calcio y Simeticona, Tabletas Masticables, (nueva), 4071 Sulfato de Aluminio y Acetato de Calcio para Solucio n To pica (nueva), 4073 Amifostina, 4074 Compuestos relacionados (subseccio n Procedimiento) Amifostina para Inyeccio n, 4074 Denicio n Compuestos relacionados (subsecciones Solucio n de prueba y
Monograf as (Suplementos Diete ticos)

Extracto de Tomate con Licopeno, 4054 Recuento microbiano L mite de aatoxinas Metilsulfonilmetano (nueva), 4054 Metilsulfonilmetano, Tabletas (nueva), 4055 Valeriana, 4055 Envasado y almacenamiento Sustancias extra bles Recuento microbiano Valeriana en Polvo, 4056 Envasado y almacenamiento Etiquetado Caracter sticas bota nicas Valeriana, Tabletas, 4056 Envasado y almacenamiento Esta ndares de referencia USP
Excipientes
Agente Edulcorante Eritritol, 4057 Agente Emulsionante y/o Solubilizante Aceite de Coco, 4057 Agente de Recubrimiento Aceite de Coco, 4057 Copol mero de Amino Metacrilato, 4057 Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo, 4057 Aglutinante de Tabletas Copol mero de Amino Metacrilato, 4058 Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo, 4058 Humectante Eritritol, 4058 Pol mero de Membrana Copol mero de Amino Metacrilato, 4058 Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo, 4058
Monograf as (NF 25)

Alfadex, 4059 Denicio n Envasado y almacenamiento (agregada) Pe rdida por secado (eliminada) Agua (agregada) Azu cares reductores (subseccio n Solucio n de prueba)
3830
Incorporaciones
Procedimiento) Besilato de Amlodipino (nueva), 4075 Besilato de Atracurio, 4076 Pureza cromatogra ca (subseccio n Procedimiento) Valoracio n (subseccio n Sistema cromatogra co) Azitromicina, 4077 Etiquetado Esta ndares de referencia USP L mite de sustancias relacionadas Subsalicilato de Bismuto, Suspensio n Oral (nueva), 4078 Subsalicilato de Bismuto, Tabletas (nueva), 4079 Bisoctrizol (nueva), 4079 Budeso nida (nueva), 4080 Clorhidrato de Bupropio n, Tabletas de Liberacio n Prolongada, 4082 Disolucio n Carbonato de Calcio, Magnesia y Simeticona, Tabletas, 4083 Cambio de t tulo Carbonato de Calcio, Magnesia y Simeticona, Tabletas Masticables (nueva), 4083 Cefadroxilo para Suspensio n Oral, 4084 Disolucio n (agregada) Clorhidrato de Cefepima, 4085 L mite de N-metilpirrolidina (subsecciones Solucio n de enjuague de la columna, Sistema cromatogra co y Procedimiento) Compuestos relacionados (subsecciones Solucio n A, Solucio n B, Sistema cromatogra co y Procedimiento) Cimetidina, 4086 Identicacio n (prueba A) Pureza cromatogra ca (subseccio n Procedimiento) Ciprooxacino, 4086 Pureza cromatogra ca Valoracio n (subsecciones Solucio n de resolucio n y Sistema cromatogra co) Ciprooxacino, Inyeccio n, 4087 L mite de ana logo etilendiam nico de ciprooxacino Valoracio n Clorhidrato de Ciprooxacino, 4087 Pureza cromatogra ca Valoracio n (subsecciones Solucio n de resolucio n y Sistema cromatogra co) tica (nueva), 4088 Ciprooxacino y Dexametasona, Suspensio n O Cladribina, 4090 Agua Claritromicina, Tabletas de Liberacio n Prolongada, 4090 Disolucio n Gluconato de Clorhexidina, Enjuague Oral, 4092 Valoracio n (subseccio n Procedimiento) Gluconato de Clorhexidina, Solucio n, 4092 Valoracio n (subseccio n Procedimiento) Complejo de ClorolinaCobre So dico, 4093 Contenido de cobre total (subseccio n Soluciones esta ndar) Resina de Colestiramina, 4093 Aminas cuaternarias dializables (subsecciones Solucio n esta ndar y Solucio n de prueba) Dantroleno So dico (nueva), 4094 Dantroleno So dico para Inyeccio n (nueva), 4095 Acetato de Desmopresina (nueva), 4096 Acetato de Desmopresina, Inyeccio n (nueva), 4098 Desogestrel y Etinil Estradiol, Tabletas (nueva), 4099 Diazepam, Ca psulas de Liberacio n Prolongada, 4100 Esta ndares de referencia USP Valoracio n (subsecciones Solucio n del esta ndar interno y Procedimiento) Didanosina (nueva), 4101 Didanosina para Solucio n Oral (nueva), 4101 Clorhidrato de Difenoxilato y Sulfato de Atropina, Solucio n Oral, 4102 Identicacio n Valoracio n (eliminada) Valoracio n de sulfato de atropina (eliminada) Valoracio n (agregada) Clorhidrato de Difenoxilato y Sulfato de Atropina, Tabletas, 4103 Identicacio n Valoracio n de clorhidrato de difenoxilato (eliminada) Valoracio n de sulfato de atropina (eliminada) Valoracio n (agregada)
Carbonato So dico de Dihidroxialuminio, Tabletas, 4105 Cambio de t tulo Carbonato So dico de Dihidroxialuminio, Tabletas Masticables (nueva), 4105 Doxazosina, Tabletas (nueva), 4105 Clorhidrato de Doxepina, 4105 Esta ndares de referencia USP Identicacio n (prueba B) Intervalo de fusio n (eliminada) Contenido de cloruro (eliminada) Compuestos relacionados (agregada) Dronabinol, 4106 Esta ndares de referencia USP Identicacio n L mite de delta-8-tetrahidrocannabinol (eliminada) Compuestos relacionados (agregada) Valoracio n Drospirenona (nueva), 4108 Espironolactona e Hidroclorotiazida, Tabletas, 4109 Disolucio n Estradiol y Acetato de Noretindrona, Tabletas (nueva), 4109 Etoto na, Tabletas, 4111 Esta ndares de referencia USP Valoracio n Famotidina, Inyeccio n (nueva), 4112 Fenito na, Tabletas, 4113 Cambio de t tulo Fenito na, Tabletas Masticables (nueva), 4113 Clorhidrato de Fexofenadina, Tabletas (nueva), 4114 Fluconazol, 4115 Compuestos relacionados (subsecciones Prueba 1 y Prueba 2) Flumazenil, 4117 Esta ndares de referencia USP Compuestos relacionados Valoracio n Acetato de Fluorometolona (nueva), 4118 Propionato de Fluticasona, 4119 Denicio n Contenido de bromouorometano (eliminada) Maleato de Fluvoxamina, 4119 cido maleico (eliminada) A Valoracio n (subseccio n Sistema cromatogra co) Maleato de Fluvoxamina, Tabletas, 4120 Compuestos relacionados (agregada) Fosinopril So dico (nueva), 4121 Fosinopril So dico, Tabletas (nueva), 4123 Fosinopril So dico e Hidroclorotiazida, Tabletas (nueva), 4124 Acetato de Gonadorelina (nueva), 4126 Bitartrato de Hidrocodona, 4128 Esta ndares de referencia USP Impurezas comunes (eliminada) Bitartrato de Hidrocodona y Metilbromuro de Homatropina, Tabletas (nueva), 4128 Ibuprofeno, 4130 Esta ndares de referencia USP L mite de compuesto relacionado C de ibuprofeno Valoracio n Ibuprofeno, Suspensio n Oral, 4130 Esta ndares de referencia USP L mite de compuesto relacionado C de ibuprofeno Valoracio n (subseccio n Preparacio n de valoracio n) Ibuprofeno, Tabletas, 4131 Esta ndares de referencia USP L mite de compuesto relacionado C de ibuprofeno Valoracio n Sulfato de Indinavir, 4132 Metales pesados (eliminada) Metales pesados (agregada) Pureza cromatogra ca (subsecciones Sistema cromatogra co y Procedimiento) Valoracio n (subseccio n Solucio n amortiguadora de fosfato de dibutilamonio) Verde de Indocianina, 4133 Denicio n Suspensio n de Insulina Humana Iso fana e Inyeccio n de Insulina Humana
Incorporaciones
3831
(nueva), 4133 Irbesarta n, 4134 L mite de azida (subseccio n Sistema cromatogra co) Compuestos relacionados (subseccio n Solucio n de prueba) Irbesarta n, Tabletas (nueva), 4135 Irbesarta n e Hidroclorotiazida, Tabletas (nueva), 4136 Mononitrato de Isosorbida, Tabletas (nueva), 4137 Lamivudina, 4138 Valoracio n (subseccio n Solucio n de aptitud del sistema) Acetato de Leuprolida (nueva), 4139 Lidoca na y Priloca na, Crema (nueva), 4140 Clorhidrato de Loperamida, Solucio n Oral, 4141 Valoracio n (subseccio n Preparacio n esta ndar) Magaldrato y Simeticona, Tabletas, 4141 Cambio de t tulo Magaldrato y Simeticona, Tabletas Masticables (nueva), 4141 Leche de Magnesia, 4142 L mite de calcio (eliminada) Meloxicam (nueva), 4143 Metildopa, Suspensio n Oral, 4145 Esta ndares de referencia USP L mite de producto de reaccio n de metildopa-glucosa (eliminada) Metilprednisolona, 4145 Pureza cromatogra ca (subseccio n Procedimiento) Mitoxantrona, Inyeccio n, 4146 Envasado y almacenamiento Tartrato de Morantel, 4146 pH Mupirocina, Crema (nueva), 4146 Mupirocina Ca lcica (nueva), 4147 Clorhidrato de Nefazodona, 4148 Compuestos relacionados (agregada) Clorhidrato de Nefazodona, Tabletas (nueva), 4149 Nevirapina, Tabletas (nueva), 4150 Nimodipino, 4151 Identicacio n (prueba B) Compuestos relacionados Nitrofuranto na, Ca psulas, 4152 Disolucio n Norgestimato y Etinil Estradiol, Tabletas (nueva), 4153 Ondansetro n, 4154 Envasado y almacenamiento (agregada) Cloruro de Oxibutinina, 4155 Compuestos relacionados (subseccio n Procedimiento) Clorhidrato de Paroxetina, 4155 Valoracio n (subsecciones Fase mo vil y Sistema cromatogra co) Pentazocina y Acetaminofeno, Tabletas (nueva), 4156 Pentobarbital So dico, Inyeccio n, 4157 Identicacio n
Valoracio n Clorhidrato de Piridoxina, Inyeccio n, 4157 Valoracio n (subseccio n Procedimiento) Perclorato de Potasio, 4158 Esta ndares de referencia USP (eliminada) Valoracio n (subsecciones Preparacio n esta ndar y Procedimiento) Prednicarbato, Crema (nueva), 4158 Prednicarbato, Ungu ento (nueva), 4159 Fosfato So dico de Prednisolona, 4160 Esta ndares de referencia USP Identicacio n (prueba A) Quazepam, Tabletas, 4160 Esta ndares de referencia USP Valoracio n (subsecciones Solucio n del esta ndar interno y Sistema cromatogra co) Quinapril, Tabletas, 4161 Envasado y almacenamiento Ritonavir, 4161 Identicacio n (prueba A) Compuestos relacionados Clorhidrato de Ropivaca na, Inyeccio n (nueva), 4162 Saquinavir, Ca psulas, 4163 Disolucio n cido Fosfo Fluoruro de Sodio y A rico, Solucio n (eliminada), 4163 Salicilato de Sodio, Tabletas, 4164 Disolucio n (subseccio n Procedimiento) Tiabendazol, Tabletas, 4164 Cambio de t tulo Tiabendazol, Tabletas Masticables (nueva), 4164 Topiramato (nueva), 4165 Triclosa n, 4166 Valoracio n (subsecciones Preparacio n esta ndar, Preparacio n de valoracio n y Procedimiento) Tripsina Cristalizada, 4166 Denicio n cido Valproico, Inyeccio A n (nueva), 4166 Vasopresina, 4167 Identicacio n (prueba B) Clorhidrato de Verapamilo, Inyeccio n, 4167 Esta ndares de referencia USP Compuestos relacionados (subsecciones Solucio n esta ndar y Procedimiento) Clorhidrato de Verapamilo, Tabletas, 4168 Esta ndares de referencia USP Compuestos relacionados (subsecciones Solucio n esta ndar y Procedimiento) Vinorelbina, Inyeccio n, 4169 Denicio n Valoracio n
3832
Introduccio n
Primer Suplemento de USP 30 y de NF 25

N INTRODUCCIO
Informacio n GeneralLas revisiones de la USPNF se publican en la edicio n anual, en alguno de los dos Suplementos de la edicio n anual, o en alguno de los Anuncios de Revisio n Intermedia que aparecen en las ediciones bimestrales del Pharmacopeial Forum o en un Bolet n de Revisio n (Revision Bulletin) que aparece en el sitio web de la USP. Las revisiones entran en vigencia en la fecha ocial de la publicacio n, a menos que se especique algo diferente. La USP y el NF se publican en medios impresos y electro nicos. La edicio n anual y ambos Suplementos tienen numeracio n consecutiva. Los Suplementos impresos no son acumulativos. Para asegurar la referencia acumulada, el ndice del Primer Suplemento proporciona citas de pa ginas del mismo Suplemento y, cuando corresponde, de la edicio n anual. El ndice del Segundo Suplemento proporciona citas de pa ginas del mismo Suplemento y, cuando corresponde, de la edicio n anual y del Primer Suplemento. Los productos electro nicos (Internet y CD-ROM) son acumulativos al igual que sus ndices. Las revisiones de este Suplemento son ociales y entran en vigencia el 18 de agosto de 2007, excepto que se especique algo diferente. Anuncios de Revisio n IntermediaLos Anuncios de Revisio n Intermedia se publican, segu n sea necesario, en el Pharmacopeial Forum y se incorporan al siguiente Suplemento o edicio n anual. Los Anuncios de Revisio n Intermedia tambie n pueden obtenerse solicita ndolos a la USP. S mbolos que Indican Cambios en el Texto OcialSon los s mbolos que identican el comienzo y el nal de cada revisio n. En los Suplementos, un super ndice cuadrado de color negro marca el inicio de una revisio n y un sub ndice cuadrado de color negro marca el nal. Para los Anuncios de Revisio n Intermedia, que se publican seis veces por an o, se utilizan c rculos de color negro. Junto al sub ndice hay un nu mero que relaciona la fecha ocial de la revisio n con el Suplemento o Anuncio de Revisio n Intermedia correspondiente. Por ejemplo, un sub ndice cuadrado de color negro con el nu mero 1 junto a e l indica que la revisio n sera ocial mediante el Primer Suplemento. La tabla siguiente muestra s mbolos y fechas ociales para los Anuncios de Revisio n Intermedia y los Suplementos de USP 30NF 25: USP 30NF 25 Documento de Revisio n Anuncio de Revisio n Intermedia Suplemento PF 33(1) 1 PF 33(2) PF 33(3) 2 PF 33(4) USP 30NF 25 Documento de Revisio n Anuncio de Revisio n Suplemento Intermedia PF 33(5) PF 33(6)
Fecha Ocial 18 de octubre de 2007 18 de diciembre de 2007
S mbolos
.y .y .5 .6
Cambios en el T tulo OcialLa frase Cambio de t tulo de la monograf a signica que el nuevo t tulo ocial reemplaza al t tulo anterior dondequiera que aparezca la monograf a afectada. En los textos ociales posteriores, so lo se usara el nuevo t tulo ocial, lo que puede cambiar el orden alfabe tico de las monograf as. Los cambios de t tulo de una monograf a a menudo no se ocializan de inmediato, sino que pueden posponerse a una fecha futura para que las partes afectadas puedan adoptar la nueva terminolog a y cualquier cambio de etiquetado relacionado. La fecha de entrada en vigencia generalmente es dieciocho (18) meses despue s de la fecha ocial y se indica en la seccio n de Incorporaciones del Suplemento y en la propia monograf a. Si el cambio de t tulo es la u nica revisio n en una monograf a, entonces el t tulo actualmente en vigencia estara seguido de una referencia al nuevo nombre ocial que entrara en vigencia en la fecha especicada. Adema s, y segu n fuera necesario, estas u ltimas monograf as se presentara n en su totalidad para representar sin ninguna ambigu edad la norma completa a partir de la fecha de entrada en vigencia. Para indicar e sto, aparece un super ndice cuadrado de color negro al inicio de la monograf a y un sub ndice cuadrado de color negro marcando el nal. Nuevos Esta ndares de Referencia USPLos siguientes Esta ndares de Referencia USP, no disponibles a la fecha de ocializacio n de la monograf a asociada, se encuentran ahora a disposicio n. La respectiva fecha ocial de cada norma, prueba o valoracio n de USP 30 o NF 25 que requiera el uso de los siguientes Esta ndares de Referencia USP se indica entre pare ntesis luego del nombre del Esta ndar de Referencia. ER Bromhidrato de Citalopram USP (18 de mayo de 2007) ER Cladribina USP (18 de agosto de 2007) ER Compuesto Relacionado A de Cladribina USP (18 de julio de 2007) ER Escina USP (18 de enero de 2007) ER Microfotograf as de Referencia de Cultivo de Feocromocitoma de Ratas USP (18 de mayo de 2007) ER Fluvastatina So dica USP (18 de marzo de 2007) ER Compuesto Relacionado B de Gabapentina USP (18 de julio de 2007) ER Monooleato de Glicerilo USP (18 de agosto de 2007) ER Hexacosanol USP (18 de marzo de 2007) ER Irbesarta n USP (18 de agosto de 2007) ER Compuesto Relacionado A de Irbesarta n USP (18 de julio de 2007) ER Compuesto Relacionado A de Mecamilamina USP (18 de marzo 2007) ER Mezcla de Resolucio n de Naratripta n USP (18 de mayo de 2007) ER Nimodipino USP (18 de julio de 2007)
Fecha Ocial 18 de febrero de 2007 18 de agosto de 2007 18 de abril de 2007 18 de junio de 2007 18 de diciembre de 2007 18 de agosto de 2007
S mbolos
.y
&
.1
(USP30)
y &1S
.2 .3
.y .y
&
y &2S
.4
(USP30)
.y
Introduccio n
3833
ER Compuesto Relacionado A de Nimodipino USP (18 de julio de 2007) ter Polioxil 10 Ole ER E lico USP (18 de agosto de 2007) ER Compuesto Relacionado B de Ramipril USP (18 de mayo 2007) ER Sacarina So dica USP (18 de marzo de 2007) ER Sulisobenzona USP (18 de enero de 2007) ER Clorhidrato de Tizanidina USP (18 de agosto de 2007) ER Compuesto Relacionado A de Tizanidina USP (18 de julio 2007) ER Compuesto Relacionado B de Tizanidina USP (18 de julio 2007) ER Compuesto Relacionado C de Tizanidina USP (18 de julio 2007)
de de
de de de
Esta ndares de Referencia USP Ociales por Primera Vez, No DisponiblesLas fechas ociales de cualquier norma, prueba o valoracio n USP 30 o NF 25 que requiera el uso de los siguientes nuevos Esta ndares de Referencia USP se posponen hasta nuevo anuncio de disponibilidad de los respectivos Esta ndares de Referencia. A continuacio n se presenta el listado actualizado al primero de diciembre de 2006. ER Albu mina Humana USP ER Alteplasa USP ER Amifostina USP ER Amifostina Tiol USP ER Antitrombina III Humana USP ER Aprotinina USP ER Aptitud del Sistema de Aprotinina USP ER Bromuro de Cetrimonio USP ER Calibrador de Infrarrojo Cercano USP ER Copol mero de Polipropileno USP ER Decoquinato USP ER Microfotograf as de Referencia de Sustituto De rmico Crioconservado Derivado de Fibroblastos Humanos USP ER Microfotograf as de Referencia de Sustituto De rmico Temporal Derivado de Fibroblastos Humanos USP ER Difosfato de Dietilestilbestrol USP ER Ferulato de Docosilo USP ER Extracto en Polvo de Equina cea pa lida USP ER Clorhidrato de Eucatropina USP ER Lactonas Terpe nicas de Ginkgo USP ER Extracto en Polvo de Ginseng Americano USP ER Monolinoleato de Glicerilo USP ER Clorhidrato de Gonadorelina USP ER Hemoglobina USP ER Mononitrato de Isosorbida USP ER Compuesto Relacionado A de Mononitrato de Isosorbida USP cido Alfa Lipoico USP ER A
ER Extracto de Pino Mar timo USP ER Menotropinas USP ER Mibolerona USP ER Narasina USP ER Extracto de Piretro USP ER Clorhidrato de Quinapril USP ER Extracto en Polvo de Hierba de San Juan USP ER Sargramostim USP ER Sincalida USP ER 9- Tetrahidrocannabinol USP ER Valrubicina USP ER Compuesto Relacionado A de Valrubicina USP ER Vasopresina USP Comentarios Las propuestas de revisio n que se publican en el Pharmacopeial Forum a menudo originan comentarios pu blicos que se remiten al Comite de Expertos correspondiente para su revisio n y respuesta. Algunas propuestas de revisio n pueden llegar a convertirse en texto ocial con modicaciones menores, segu n sea necesario, sin que requieran una revisio n pu blica adicional. En tales casos, se publica un resumen de los comentarios recibidos y de las respuestas del Comite en el apartado Comentarios del Suplemento o de la edicio n anual en la que la revisio n se ocializa. En el caso de las propuestas que requieran una revisio n adicional y una nueva publicacio n en el Pharmacopeial Forum, se incluyen un resumen de los comentarios y las respuestas del Comite en la informacio n que acompan a a cada art culo. El apartado Comentarios no forma parte del texto ocial de la monograf a. Ma s bien, explica los fundamentos de la respuesta del Comite a los comentarios del pu blico. Si existen diferencias entre el contenido del apartado Comentarios y la monograf a ocial, el texto de la monograf a ocial prevalece. En caso de controversias o problemas de interpretacio n, prevalece el texto ocial, independientemente de lo expresado en el apartado Comentarios. Cuando resulta apropiado, el apartado Comentarios incluye, por separado, las discusiones acerca de las propuestas referidas a la armonizacio n internacional de la USP, la Farmacopea Europea y la Farmacopea Japonesa con el n de destacar tales propuestas. Si desea obtener mayores detalles, favor contactar: Ofce of the Executive Secretariat U.S. Pharmacopeia 12601 Twinbrook Parkway Rockville, MD 20852-1790 USA
AS COMENTARIOS A MONOGRAFI
Los comentarios que antes se encontraban en esta seccio n ahora esta n disponibles en el sitio web de la USP: http://www.usp.org/.
3834
Erratas
FE DE ERRATAS
A continuacio n se presenta una lista de erratas y correcciones a los compendios USPNF. El nu mero de pa gina indica do nde y en cua l publicacio n ocial o pendiente de USPNF se encuentra el tem. Si fuera necesario, la lista se actualizara en cada nu mero del PF. Esta informacio n tambie n se encontrara disponible como tabla acumulativa en los pro ximos Suplementos y aparecera corregida en la pro xima edicio n anual de USPNF. Las erratas se consideran tems que se publicaron equivocadamente, que no han sido aprobados por el Consejo de Expertos y que no reejan el requisito ocial. El personal de USP se encuentra a su disposicio n para responder preguntas referentes a la exactitud de cualquier requisito, llamando al nu mero de tele fono 1-800-822-USPC. Pa gina 144 USPNF USP 30 T tulo Seccio n Descripcio n h121i Valoracio n de Insu- Me todo de la Glucemia en Co- En Ca lculos, l neas 7 y 8 del tercer lina nejosCuantitativo pa rrafo: Cambiar Dilucio n esta ndar y Dilucio n de valoracio n por: Solucio n esta ndar y Solucio n de valoracio n L nea 6 en Ape ndice: Cambiar la fo rmula
por:
348
USP 30
351
USP 30
817
USP 30
1000
USP 30
L neas 4-7 en Determinacio n del Punto Final: Cambiar Si en uno cualquiera de los tamices hay menos del 5% del total de la muestra, aumentar el punto nal para ese tamiz hasta un 20% del peso previo obtenido en ese mismo tamiz por: Si en cualquiera de los tamices hay menos del 5% del total de la muestra, aumentar el punto nal para ese tamiz hasta un cambio de peso de no ma s de 20% del peso previo obtenido en ese tamiz. ltima l h788i Part culas en Inyec- Normalizacio n del Instrumento U nea del segundo pa rrafo: tables Cambiar Estos procedimientos se deben llevar a cabo cada seis meses como m nimo por: Efectuar estos procedimientos a intervalos no mayores de 6 meses. Reactivos, Indicadores y Soluciones Volume tricas L nea 5 en Bromo, De cimo Normal (0,1 Soluciones N): Cambiar matraz con 500 mL de yodo por: matraz para yodo de 500 mL Extracto de Ciruelo Afri- Contenido de esteroles L nea 11 en Procedimiento: Cambiar la cano fo rmula 200 C/W ( R U / R S ), por: 1000C/W(RU / RS)
ticos h786i Estimacio n de la Tamices Anal Distribucio n del Taman o de Part cula por Tamizado Anal tico
Erratas
3835
Pa gina 1021
USPNF USP 30
1053 1766 2234 2986
USP 30 USP 30 USP 30 USP 30
3385
USP 30
Descripcio n L neas 1623 en Procedimiento: Cambiar La presencia de glico sidos de avonol en la Solucio n de prueba se observa a trave s de tres zonas uorescentes de color marro n amarillento a verde, y apenas ma s arriba, una zona uorescente de color azul a verde por debajo de la zona correspondiente a la rutina, una zona uorescente azul claro aparece en el mismo lugar que la correspondiente al a cido cloroge nico, as como dos zonas uorescentes de color marro n verdoso a amarillo, ubicadas arriba. En el cromatograma de la Solucio n de prueba se pueden observar otras zonas menos intensas. por: El cromatograma de la Solucio n de prueba presenta una zona uorescente marro n amarillenta y una zona uorescente de color azul claro con RF similares a los de la rutina y el a cido cloroge nico, respectivamente, en el cromatograma de la Solucio n esta ndar. Se detectan zonas verdes amarillentas adicionales debido a avonoides en el cromatograma de la Solucio n de prueba. Estas zonas incluyen una debajo de la zona de la rutina, dos entre las zonas de la rutina y el a cido cloroge nico, y cuatro arriba de la zona del a cido cloroge nico. Otras zonas menos intensas pueden observarse en el cromatograma de la Solucio n de prueba. Pino Mar timo Identicacio n B L nea 2 en Reactivo para rociado: Cambiar vanilina por: vainillina Carbenicilina Indanilo Identicacio n L nea 7: Cambiar solucio n de prueba So dica, Tabletas por: solucio n Maleato de Ergonovina, Alcaloides relacionados L neas 4 y 15: Cambiar Fase mo vil Inyeccio n por: Mezcla de disolventes nea 23: Cambiar ferrocianuro por: Clorhidrato de Naloxona Clorhidrato de noroximorfona L [Clorhidrato de ()-4,5a-epoxi- ferricianuro 3,14-dihidroximornan-6-ona] y otras impurezas Ramipril Compuestos relacionados L nea 1 en Preparacio n esta ndar: Cambiar Preparacio n esta ndar por: Solucio n esta ndar L nea 13 en Procedimiento: Cambiar ER Compuesto Relacionado B de Ramipril por: ER Ramipril USP
T tulo Ginkgo
Seccio n Prueba de identicacio n por cromatograf a en capa delgada h201i
3836
Erratas
Pa gina 3386
USPNF USP 30
T tulo Ranitidina, Inyeccio n
Seccio n Pureza cromatogra ca
Valoracio n
Descripcio n L nea 10 en Procedimiento: Cambiar Cromatograar segu n se describe en Pureza cromatogra ca en Clorhidrato de Ranitidina. por: Dejar que las manchas se sequen y desarrollar los cromatogramas en una fase mo vil que contenga una mezcla de acetato de etilo, alcohol isoprop lico, hidro xido de amonio y agua (25 : 15 : 5 : 1) hasta que el frente de la fase mo vil haya recorrido no menos de 15 cm desde el origen. Retirar la placa de la ca mara de desarrollo, marcar el frente de la fase mo vil y dejar secar al aire. Exponer la placa a vapores de yodo en una ca mara cerrada hasta que el cromatograma se revele por completo. Borrar la subseccio n que comienza con Fase mo vil, Preparacio n esta ndar, Solucio n de resolucio n y Sistema cromatogra co. Reemplazarla por: Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y degasicada de metanol y acetato de amonio acuoso 0,1 M (85:15). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Clorhidrato de Ranitidina USP en Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,112 mg (equivalente a 0,100 mg de ranitidina base) por mL. Solucio n de aptitud del sistemaDisolver cantidades, pesadas con exactitud, de ER Clorhidrato de Ranitidina USP y de ER Compuesto Relacionado C de Ranitidina USP en Fase mo vil para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,112 mg por mL y 0,01 mg por mL, respectivamente. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromatografo de l quidos con un detector a 322 nm y una columna de 4,6 mm 6 20 a 30 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre clorhidrato de ranitidina y N-[2-[[[5-[(dimetilamino)metil]-2-furanil]metil]sulnil]etil]- Nmetil-2-nitro-1,1-etenodiamina (compuesto relacionado C de ranitidina) no es menor de 1,5. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a para el pico de clorhidrato de ranitidina no es mayor de 2,0; la eciencia de la columna, determinada a partir del pico de clorhidrato de ranitidina, no es menos de 700 platos teo ricos; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2%.
Erratas
3837
Pa gina 3387
USPNF USP 30
T tulo Ranitidina, Solucio n Oral
Seccio n Pureza cromatogra ca
Valoracio n
3388
USP 30
Ranitidina, Tabletas
Valoracio n
3389
USP 30
Ranitidina y Cloruro de Pureza cromatogra ca Sodio, Inyeccio n
Valoracio n de ranitidina
Descripcio n L nea 9 en Procedimiento: Cambiar Efectuar la cromatograf a como se describe en Pureza cromatogra ca en Clorhidrato de Ranitidina. por: Dejar que las manchas se sequen y desarrollar los cromatogramas en una fase mo vil que contenga una mezcla de acetato de etilo, alcohol isoprop lico, hidro xido de amonio y agua (25 : 15 : 5 : 1) hasta que el frente de la fase mo vil haya recorrido no menos de 15 cm desde el origen. Retirar la placa de la ca mara de desarrollo, marcar el frente de la fase mo vil y dejar secar al aire. Exponer la placa a vapores de yodo en una ca mara cerrada hasta que el cromatograma se revele por completo. L neas 1-3: Cambiar Fase mo vil, Preparacio n esta ndar, Solucio n de resolucio n y Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en la Valoracio n en Clorhidrato de Ranitidina por: Fase mo vil, Preparacio n esta ndar, Solucio n de aptitud del sistema y Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en la Valoracio n en Ranitidina, Inyeccio n, L neas 1-3: Cambiar Fase mo vil, Preparacio n esta ndar, Solucio n de resolucio n y Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en la Valoracio n en Clorhidrato de Ranitidina por: Fase mo vil, Preparacio n esta ndar, Solucio n de aptitud del sistema y Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en la Valoracio n en Ranitidina, Inyeccio n, L neas 9 y 10 en Procedimiento: Cambiar Efectuar la cromatograf a tal como se describe en Pureza cromatogra ca en Clorhidrato de Ranitidina. por: Dejar que las manchas se sequen y desarrollar los cromatogramas en una fase mo vil que contenga una mezcla de acetato de etilo, alcohol isoprop lico, hidro xido de amonio y agua (25 : 15 : 5 : 1) hasta que el frente de la fase mo vil haya recorrido no menos de 15 cm desde el origen. Retirar la placa de la ca mara de desarrollo, marcar el frente de la fase mo vil y dejar secar al aire. Exponer la placa a vapores de yodo en una ca mara cerrada hasta que el cromatograma se revele por completo. L neas 1-3: Cambiar Fase mo vil, Preparacio n esta ndar, Solucio n de resolucio n y Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en la Valoracio n en Clorhidrato de Ranitidina por: Fase mo vil, Preparacio n esta ndar, Solucio n de aptitud del sistema y Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en la Valoracio n en Ranitidina, Inyeccio n,
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h1i Inyectables / Requisitos Generales
Cap tulos Generales

Pruebas y Valoraciones Generales
Requisitos Generales para Pruebas y Valoraciones
u otra preparacio n a la que se va a agregar un diluyente antes de utilizarla, la cantidad de cada ingrediente, la composicio n del diluyente o diluyentes recomendados [so lo el nombre o nombres, si la fo rmula se especica en la monograf a individual], la cantidad que se va a emplear para alcanzar una concentracio n espec ca de ingrediente activo y el volumen nal de la solucio n as obtenida, una breve descripcio n del aspecto f sico de la solucio n reconstituida, instrucciones para el almacenamiento adecuado de la solucio n reconstituida y una fecha de caducidad que limite el per odo durante el cual se espera que la solucio n reconstituida tenga la potencia requerida o declarada si se ha almacenado como se indica. Los envases de Inyecciones destinadas a dia lisis, hemoltracio n, o soluciones de irrigacio n que contienen un volumen de ma s de 1 L declaran que el contenido no esta destinado para la infusio n intravenosa. Las Inyecciones para uso veterinario declaran ese n. El envase se etiqueta de modo que una supercie suciente del envase quede sin cubrir en toda su longitud o circunferencia para permitir la inspeccio n del contenido.
N Y VOLUMEN TOTAL DE PRODUCTOS CONCENTRACIO UTICOS INYECTABLES MONODOSIS Y MULTIDOSIS FARMACE
&
h1i INYECTABLES
Cambio en la redaccio n:
ETIQUETAS Y ETIQUETADO Etiquetado

NOTAVer las deniciones de etiqueta y etiquetado en Etiquetado en el apartado Conservacio n, Envasado, Almacenamiento y Etiquetado de las Advertencias y Requisitos Generales. La etiqueta indica el nombre de la preparacio n; en el caso de una preparacio n l quida, el contenido porcentual de fa rmaco o la cantidad de un fa rmaco en un volumen espec co; en el caso de una preparacio n seca, la cantidad de ingrediente activo; la v a de administracio n; una leyenda con las condiciones de almacenamiento y la fecha de caducidad; el nombre y el domicilio comercial del fabricante, envasador o distribuidor; y un nu mero de lote identicatorio. El nu mero de lote puede proporcionar toda la historia de fabricacio n del envase espec co, incluyendo todas las operaciones de fabricacio n, llenado, esterilizacio n y etiquetado. Cuando una monograf a individual permita variar las concentraciones de los ingredientes activos en la preparacio n parenteral de gran volumen, se indica la concentracio n de cada ingrediente nombrado en el t tulo ocial como si fuera parte del t tulo ocial, por ejemplo, Dextrosa 5%, Inyeccio n; o Dextrosa (5%) y Cloruro de Sodio (0,2%), Inyeccio n. El etiquetado incluye la siguiente informacio n si no se especica la fo rmula completa en la monograf a individual: (1) En el caso de una preparacio n l quida, el contenido porcentual de cada ingrediente o la cantidad de cada ingrediente en un volumen especicado, salvo que los ingredientes agregados para ajustar a un pH dado o para hacer isoto nica la solucio n se puedan declarar por el nombre y una leyenda cerca de su efecto; y (2) en el caso de una preparacio n seca
Para productos farmace uticos inyectables monodosis y multidosis, la cantidad por el volumen total debe ser la expresio n principal y prominente en el espacio principal de visualizacio n de la etiqueta, seguido muy cerca de la cantidad por mL entre pare ntesis. Para envases que contienen un volumen de menos de 1 mL, la cantidad por fraccio n de mL debe ser la u nica expresio n de concentracio n. La concentracio n por un so lo mL debe expresarse como mg/mL y no como mg/1 mL. Los siguientes formatos son aceptables para contenidos de ma s de 1 mL: Cantidad total/volumen total: 500 mg/10 mL Cantidad/mL: 50 mg/mL o Cantidad total/volumen total: 25 000 Unidades/5 mL Cantidad/mL: 5000 Unidades/mL El siguiente formato es aceptable para contenidos de menos de 1 mL: 12,5 mg/0,625 mL Existen, no obstante, algunas excepciones para la expresio n de la cantidad por volumen total. En algunos casos, la expresio n principal y prominente del contenido total de un fa rmaco por envase puede no ser efectiva en la prevencio n de errores en la administracio n y toma de medicamentos (por ej., insulina). Un ejemplo de ello es el uso de la lidoca na u otros medicamentos similares empleados como aneste sicos locales, casos en que el producto se ordena y administra por porcentaje (por ej., 1%, 2%), o un aneste sico local en combinacio n con epinefrina que se expresa como una relacio n (e.g., 1 : 100 000). En tales casos, la concentracio n debe expresarse: por ejemplo, 1% (100 mg/10 mL). Los so lidos secos, los cuales necesitan reconstituirse, deben tambie n seguir este formato, con la excepcio n de que so lo se menciona la cantidad total del fa rmaco y no la cantidad/volumen total o la cantidad/mL.&1S (USP30) (Ocial a partir del 18 de febrero de 2009)

&
Requisitos Generales / h1i Inyectables
3839
Aluminio en Preparaciones Parenterales de Gran Volumen (PPGV), Preparaciones Parenterales de Pequen o Volumen (PPPV) y Envasados Farmace uticos a Granel (EFG) Usados en Terapia de Nutricio n Parenteral Total (NPT)
(a) El contenido de aluminio de las PPGV usadas en terapia de NPT no debe exceder de 25 mg por L (mg/L). (b) El prospecto del envase de las PPGV usadas en terapia de NPT debe declarar que el producto farmace utico no contiene ma s de 25 mg de aluminio por L. Esta informacio n debe incluirse en la seccio n Precauciones del etiquetado de todas las PPGV usadas en terapia de NPT. (c) Si la cantidad ma xima de aluminio en las PPPV y en los EFG es 25 mg por L (mg/L) o menos, en lugar de declarar la cantidad exacta de aluminio que contiene cada uno, tal como en el pa rrafo (d), la etiqueta del envase primario de las PPPV y los EFG usados en la preparacio n de preparaciones parentales de NPT (con las excepciones que se indican ma s adelante) pueden declarar: Contiene no ma s de 25 mg/L de aluminio. Si la PPPV o el EFG es un polvo liolizado, la etiqueta del envase primario puede declarar lo siguiente: Cuando se reconstituye segu n las instrucciones del prospecto adjunto, la concentracio n de aluminio no sera ma s de 25 mg/L. (d) El nivel ma ximo de aluminio a la fecha de caducidad debe declararse en la etiqueta del envase primario de todas las PPPV y los EFG usados en la preparacio n de preparaciones parenterales y emulsiones inyectables de NPT. El contenido de aluminio debe declararse de la siguiente manera: No contiene ma s de __ mg/L de aluminio. La etiqueta del envase primario de todas las PPPV y los EFG que son polvos liolizados usados en la preparacio n de soluciones de NPT deben declarar lo siguiente: Cuando se reconstituye de acuerdo con las instrucciones del prospecto adjunto, la concentracio n de aluminio no sera ma s de __ mg/L. El contenido ma ximo de aluminio debe declararse como el ma s alto entre los tres niveles siguientes:&1S (USP30) (1) El nivel ma s alto de las partidas producidas durante los u ltimos tres an os. (2) El nivel ma s alto de las u ltimas cinco partidas. (3) El nivel ma ximo con respecto a los niveles histo ricos, pero so lo hasta completar la produccio n de las primeras cinco partidas despue s &del &1S (USP30) 26 de julio de 2004. El prospecto adjunto en los envases de todas las PPGV, PPPV y los EFG usados en la preparacio n &&1S (USP30) de productos para NPT debe contener una leyenda de advertencia. Esta advertencia debe estar incluida en la seccio n Advertencias del etiquetado y debe declarar lo siguiente: ADVERTENCIA: Este producto contiene aluminio que puede ser to xico. El aluminio puede alcanzar niveles to xicos con la administracio n parenteral prolongada si existe insuciencia renal. Los neonatos prematuros en particular tienen mayor riesgo por la inmadurez de sus rin ones y requieren grandes cantidades de soluciones de calcio y fosfato que contienen aluminio. Los estudios indican que los pacientes con insuciencia renal, incluidos los neonatos prematuros, que reciben niveles de aluminio por v a parenteral mayores de 4 mg a 5 mg por kg por d a acumulan aluminio a niveles asociados con toxicidad o sea y del sistema nervioso central. La acumulacio n en los tejidos puede ocurrir incluso con niveles ma s bajos de administracio n de productos de NPT.
& &1S
cio n, calidad, o pureza mas alla de los requisitos ociales en condiciones usuales u ordinarias de manejo, transporte, almacenamiento, venta y uso. Los envases deben estar hechos de un material que permita la inspeccio n del contenido. Por lo general, el tipo de vidrio preferible para cada preparacio n parenteral se indica en la respectiva monograf a. A menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, se pueden emplear envases pla sticos para envasar las inyecciones (ver Envases h661i). Para deniciones de envases monodosis y multidosis, ver Envases en Advertencias y Requisitos Generales. Los envases cumplen con los requisitos establecidos en Envases h661i. Los envases deben estar cerrados o sellados de tal modo que impidan la contaminacio n o la pe rdida del contenido. La validacio n de la integridad del envase debe demostrar que no existe penetracio n de microorganismos o impurezas qu micas o f sicas. Adema s, el envase debe ser capaz de mantener las cantidades totales y relativas o concentraciones especicadas de solutos y del veh culo cuando se expone a condiciones extremas previstas en la fabricacio n y procesamiento, almacenamiento, transporte y distribucio n. Los cierres para envases multidosis deben permitir la extraccio n del contenido sin remover o destruir el cierre. El cierre debe permitir la penetracio n de una aguja y el cerramiento de inmediato luego de retirarla, protegiendo el envase de la contaminacio n. La validacio n de la integridad del envase multidosis debe incluir una vericacio n de que un envase de ese tipo impide la contaminacio n microbiana o la pe rdida del contenido del producto en condiciones previstas de mu ltiples entradas y usos. Los envases para venoclisis en ta ndem (piggyback containers) son por lo general envases de infusio n intravenosa empleados para administrar una segunda infusio n a trave s de un conector de algu n tipo o a trave s de un inyector en el equipo de administracio n del primer l quido, evita ndose as la necesidad de inyectar en otro sitio al paciente. Los envases para venoclisis en ta ndem son tambie n conocidos como envases de infusio n secundaria.
Concentrado de Cloruro de Potasio para Inyeccio n

El uso de un sistema de cierre negro en un vial (por ejemplo, una tapa negra de fa cil desprendimiento adherida al casquillo (tapa ipoff) y un casquillo negro para sostener el cierre elastome rico) o el uso de una banda o una serie de bandas negras sobre la constriccio n en una ampolla se reserva so lo para el Concentrado de Cloruro de Potasio para Inyeccio n y esta prohibido su uso en cualquier otra inyeccio n.
Agentes de Bloqueo Neuromuscular y Paralizantes

Todas las preparaciones inyectables de agentes de bloqueo neuromuscular y agentes paralizantes se deben envasar en viales con una advertencia impresa en los casquillos o en las tapas de sobresello. Tanto el casquillo del frasco como la tapa de sobresello deben llevar impresas en blanco o negro (lo que proporcione el mayor contraste con el color del casquillo o la tapa) la leyenda: Advertencia: Agente Paralizante o Agente Paralizante (dependiendo del taman o del sistema de cierre). Alternativamente, la tapa de sobresello puede ser transparente y sin impresio n, de manera que permita la visualizacio n de la leyenda de advertencia sobre el casquillo de cierre.
(USP30)
Envases para So lidos Este riles

Los envases, incluyendo los cierres, para so lidos secos destinados para uso parenteral no deben ejercer sobre el contenido ninguna accio n f sica o qu mica que pueda alterar de alguna manera la concentracio n, calidad o pureza ma s alla de los requisitos ociales, en condiciones normales o habituales de manejo, transporte, almacenamiento, venta y uso. Un envase para un so lido este ril debe permitir la adicio n de un disolvente adecuado y la extraccio n de porciones de la solucio n o suspensio n resultante de tal modo que se mantenga la esterilidad del producto.
ENVASADO Envases para Inyecciones

Los envases, incluyendo los cierres, para preparaciones para inyecciones no deben ejercer sobre el contenido ninguna accio n f sica o qu mica que pueda alterar de alguna manera la concentra-
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h1i Inyectables / Requisitos Generales

&
Primer Suplemento, USPNF Etiquetado en los Casquillos y las Tapas de Sobresello
Cuando la Valoracio n en una monograf a indica un procedimiento para la Preparacio n de valoracio n, donde se deba tomar el contenido total extra ble de un envase monodosis con una jeringa y aguja hipode rmica, se extraera ese contenido en la forma ma s completa posible con una jeringa hipode rmica seca, de una capacidad nominal que no exceda de tres veces el volumen a extraer, y prevista con una aguja nu mero 21 de una longitud no menor de 2,5 cm (1 pulgada), tomando la precaucio n de expeler cualquier burbuja de aire, y se descargara en un recipiente para dilucio n y valoracio n.
Volumen en Envase
Cada envase de una inyeccio n se llena con suciente exceso sobre el volumen declarado o sobre el volumen que se deba extraer. Ver Inyecciones en Formas Farmace uticas h1151i.
N DEL VOLUMEN DE INYECCIO N EN LOS DETERMINACIO ENVASES
Seleccionar uno o ma s envases si el volumen del envase es de 10 mL o ma s, tres o ma s si el volumen es ma s de 3 mL y menos de 10 mL, o cinco o ma s si el volumen es 3 mL o menos. Tomar individualmente el contenido de cada envase seleccionado con una jeringa hipode rmica seca de una capacidad nominal que no exceda de tres veces el volumen a medir y que lleva adosada una aguja nu mero 21 de longitud no menos de 2,5 cm (1 pulgada). Expeler cualquier burbuja de aire de la jeringa y la aguja, y luego descargar el contenido de la jeringa, sin vaciar la aguja, en una probeta calibrada y seca (calibrada para contener y no para verter los volu menes marcados) de un taman o tal que el volumen que se va a medir ocupe al menos 40% del volumen nominal total de la probeta. Alternativamente, el contenido de la jeringa se puede descargar en un vaso de precipitados seco, tarado, calculando el volumen, en mL, como el peso, en g, de la Inyeccio n tomado dividido por su densidad. Para envases con un volumen nominal de 2 mL o menos, el contenido de una cantidad suciente de envases puede combinarse para obtener el volumen requerido para la medicio n, siempre que, para cada envase, se emplee un conjunto diferente y seco de jeringa y aguja. El contenido de los envases de 10 mL o ma s se puede determinar abrie ndolos y vaciando el contenido directamente en una probeta graduada o un vaso de precipitados tarado. El volumen no es menor que el volumen declarado en el caso de envases examinados individualmente o, en el caso de envases de 1 mL y 2 mL, no es menor que la suma de los volu menes declarados que se toman colectivamente. Para inyecciones en envases multidosis que declaran producir un nu mero espec co de dosis de un volumen determinado, proceder segu n se indico anteriormente, empleando un nu mero de jeringas individuales igual al nu mero de dosis especicadas. El volumen es tal que cada jeringa descarga no menos de la dosis indicada. Para inyecciones que contienen aceite, entibiar los envases, si fuera necesario, y agitarlos bien inmediatamente antes de retirar el contenido. Enfriar entre 208 y 258 antes de medir el volumen. Para inyecciones en cartuchos o jeringas prellenadas, ensamblar el envase con los accesorios requeridos, como por ejemplo una aguja o un e mbolo. Siguiendo el mismo procedimiento anterior, y sin vaciar la aguja, transferir todo el contenido de cada envase a un vaso de precipitados tarado y seco empujando el e mbolo en forma lenta y continua. Pesar y calcular el volumen segu n lo descrito anteriormente. El volumen de cada envase no es menor que el volumen declarado. Para soluciones intravenosas de gran volumen, seleccionar 1 envase y transferir el contenido a una probeta graduada seca, de un taman o tal que el volumen que se va a medir ocupe al menos 40% de su volumen nominal. El volumen no es menor que el volumen declarado.
So lo deben aparecer leyendas de advertencia en la supercie superior (c rculo) del casquillo o la tapa de sobresello de un vial que contenga un producto farmace utico inyectable. Una leyenda de advertencia es aquella que intenta prevenir una situacio n de peligro de muerte inminente si el medicamento inyectable se usa de modo inapropiado. Algunos ejemplos de tales leyendas son los siguientes: Advertencia, Diluir Antes de Usar, Agente Paralizante, So lo para Uso I.M. y Quimioterapia, entre otros. El texto de la leyenda debe aparecer en un color que contraste y sea llamativo en condiciones de uso normales. La leyenda de advertencia puede aparecer so lo en el casquillo, siempre que la tapa de sobresello se fabrique de modo que la leyenda de advertencia en el interior sea inmediatamente legible. Los nu meros o letras de identicacio n, como por ejemplo co digos, nu meros de lote, etc., pueden aparecer en la supercie lateral (falda) del casquillo en viales que contengan productos inyectables. La presencia de estos datos de identicacio n en la falda del casquillo, donde no distraen o intereren con la leyenda de advertencia en la supercie superior, debe considerarse un elemento benecioso del control de la calidad de proceso durante todo el proceso de fabricacio n de un producto. Cualquier estrategia destinada a evitar la falsicacio n no debe distraer o interferir con las leyendas de advertencia. Bajo ninguna circunstancia se permitira que aparezca publicidad, como por ejemplo nombres de empresas, logotipos o nombres de productos, en la supercie superior (c rculo) de los casquillos o las tapas de sobresello.&1S (USP30) (Ocial a partir del 18 de febrero de 2009)
Envasado y Almacenamiento
El volumen de inyeccio n en envases monodosis proporciona la cantidad especicada de administracio n parenteral de una vez y en ningu n caso es mayor del suciente para permitir la extraccio n y administracio n de 1 L. Las preparaciones para administracio n intrarraqu dea, intracisternal o peridural se envasan so lo en envases monodosis. A menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, un envase multidosis contiene un volumen de Inyeccio n suciente para permitir la extraccio n de no ma s de 30 mL. & Las siguientes inyecciones esta n exentas de la restriccio n de 1 L de los requisitos anteriores relacionados con el envasado: 1. Inyecciones envasadas para uso extravascular como soluciones de irrigacio n o soluciones para dia lisis peritoneal 2. Inyecciones envasadas para uso intravascular como nutricio n parenteral o como l quido de reemplazo o sustitucio n para ser administrado en forma continua durante una hemoltracio n Las inyecciones envasadas para uso intravascular que pudieran usarse como l quido de reemplazo durante una hemodia lisis u otros procesos, mediante administracio n intermitente, continua o en bolo, deben cumplir con la restriccio n de 1 L, a menos que se trate de una de las excepciones mencionadas anteriormente.&1S (USP30) Cuando se declara que las inyecciones esta n destinadas para uso veterinario, e stas esta n exentas de los requisitos de envasado y almacenamiento en lo referente a las limitaciones para envases monodosis y de las limitaciones de volumen para los envases multidosis.
Requisitos Generales / h11i Esta ndares de Referencia USP
3841
NDARES DE h11i ESTA REFERENCIA USP
estrechamente con la OMS para minimizar las diferencias inevitables en las unidades de potencia reales y, en algunos casos, para compartir la preparacio n de un esta ndar de referencia. Dado que algunos Esta ndares de Referencia USP se normalizan segu n los Esta ndares Internacionales correspondientes, las Unidades USP pertinentes y las Unidades Internacionales de potencia suelen ser ide nticas.&1S (USP30) Eliminar lo siguiente:
& Los Esta ndares de Referencia USP son muestras bien caracterizadas de fa rmacos, excipientes, impurezas que requieren informarse, productos de degradacio n, reactivos farmacopeicos y calibradores de desempen o. Se requieren expl citamente para muchas valoraciones y pruebas Farmacopeicas y se suministran u nicamente para este uso. Queda a criterio del usuario evaluar la aptitud para su uso en otras aplicaciones.&1S (USP30)
&
LOTES VIGENTES
Eliminar lo siguiente:
&
Referencia Visual Aute ntica
A diferencia de los esta ndares de referencia qu mica, las Referencias Visuales Aute nticas (AVR por sus siglas en ingle s) no se emplean en los ana lisis qu micos. En cambio, las AVR son ima genes visuales utilizadas por los analistas para comparar ciertos art culos de prueba y asegurar que cumplen con los requisitos farmacopeicos y se incorporan como referencia en la monograf a. El Comite de Expertos que aprueba una monograf a espec ca es el que decide la aprobacio n de las AVR para su inclusio n en una monograf a.&1S (USP30) Eliminar lo siguiente:
Es responsabilidad de cada analista constatar que su suministro particular de Esta ndar de Referencia USP este vigente. So lo se debe comprar la cantidad suciente para el uso inmediato y se debe evitar el almacenamiento a largo plazo. Para asegurar el acceso ra pido a la u ltima informacio n, la USPC publica bimestralmente el Cata logo Ocial de Esta ndares de Referencia y Sustancias Aute nticas, as como las designaciones de lotes en el Pharmacopeial Forum.* Este sistema ofrece mejor control y exibilidad que las fechas de vencimiento para responder a las revisiones del uso del Esta ndar de Referencia. El cata logo que aparece en el Pharmacopeial Forum ma s reciente identica art culos que son ociales en la recopilacio n de Esta ndares de Referencia USP al momento de su publicacio n. En el Cata logo aparecen dos columnas para identicar los lotes ociales vigentes. En una de las columnas se identica el lote ocial que la USPC esta distribuyendo en este momento. En algunos casos, el lote anterior au n puede considerarse ocial. Si es as , se identica en la segunda columna. Normalmente, el lote anterior sigue conservando su estado ocial durante aproximadamente un an o despue s de comenzar la distribucio n del lote vigente, a menos que se determine que ya no es apto debido a un cambio en los requisitos de la monograf a o por limitaciones de estabilidad.
NDARES DE REFERENCIA USP USO CORRECTO DE LOS ESTA
&
Otras Sustancias de Referencia
Como parte de su servicio, la USPC analiza y distribuye sustancias autenticadas adicionales que actualmente no son reque stas tambie ridas como Esta ndares de Referencia USP o NF. E n se suministran bajo supervisio n del Comite de Esta ndares de Referencia USP. Las sustancias adicionales se dividen en tres grupos: (1) Esta ndares de Referencia USP y NF antiguos, que no son requeridos en la USP o el NF vigente pero que au n tienen suciente demanda; (2) Esta ndares de Referencia FCC, especicados en la edicio n vigente del Food Chemicals Codex; y (3) Sustancias Aute nticas (AS, por sus siglas en ingle s), que son muestras de sustancias qu micas altamente puricadas, incluidas las sustancias de abuso, que se prueban conjuntamente y se ponen a disposicio n como un servicio, principalmente para los laboratorios anal ticos, cl nicos, farmace uticos y de investigacio n. La distribucio n de sustancias controladas esta sujeta a las reglamentaciones y provisiones vigentes para el otorgamiento de licencias de la Administracio n para el Control de Drogas (DEA, por sus siglas en ingle s) del Departamento de Justicia. Como servicio adicional, la USPC distribuye varios reactivos no comerciales requeridos en ciertas monograf as USP. Estos reactivos se preparan especialmente para su uso previsto y so lo los distribuira la USPC hasta que este n comercialmente disponibles. La Organizacio n Mundial de la Salud, organismo de las Naciones Unidas, mantiene un programa internacional que suministra esta ndares biolo gicos y sustancias qu micas de referencia. El programa de la OMS se ocupa de materiales de referencia para antibio ticos, productos biolo gicos y agentes quimioterape uticos. Como norma, un Esta ndar Internacional para un material de origen natural se descontinu a una vez que la sustancia responsable de su actividad caracter stica se haya aislado, identicado y preparado de forma que pueda caracterizarse completamente por medios qu micos y f sicos. El Comite de Esta ndares de Referencia USP coopera
A menos que la etiqueta de un Esta ndar de Referencia declare una potencia o contenido espec cos, se considera que dicho Esta ndar de Referencia es 100,0% puro para nes farmacopeicos. La aptitud de un Esta ndar de Referencia USP para aplicaciones no farmacopeicas queda a criterio del usuario. Cada Esta ndar de Referencia USP se debe almacenar, manipular y utilizar correctamente para que sirva al n deseado. En general, los Esta ndares de Referencia deben almacenarse en sus envases originales con tapo n, lejos del calor y protegidos de la luz. Deben evitarse, en especial, lugares de almacenamiento hu medos. Cuando se necesitan condiciones de almacenamiento especiales, las instrucciones se indican en la etiqueta. Ni los Esta ndares de Referencia ni las Sustancias Aute nticas esta n destinados para uso como fa rmacos o dispositivos me dicos. Muchas pruebas y valoraciones farmacopeicas se basan en la comparacio n de una muestra de prueba con un Esta ndar de Referencia USP. En estos casos, las determinaciones se realizan con preparaciones de la muestra y del Esta ndar de Referencia. Cuando se indica que se debe preparar una Solucio n esta ndar o una Preparacio n esta ndar para realizar una determinacio n cuantitativa en diluciones sucesivas o de otro modo, esta previsto que la sustancia del Esta ndar de Referencia se pese con exactitud (ver Pesas y Balanzas h41i y Aparatos Volume tricos h31i). Tambie n se debe tomar debida nota de los errores relativamente importantes que se producen al pesar masas pequen as (ver tambie n Dilucio n en Pruebas y Valoraciones en Advertencias y Requisitos Generales). Los resultados de las valoraciones y las pruebas se determinan mediante comparaciones entre la muestra en ana lisis y un Esta ndar de Referencia USP cuyos residuos vola tiles o contenido de agua se
*
Para quienes no esta n suscritos, el Cata logo Ocial ma s reciente esta disponible en: U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Reference Standards Order Department, 12601 Twinbrook Parkway, Rockville, MD 20852. Tele fono 1-301-881-0666. Fax 1-301-816-8148. L nea gratuita en Estados Unidos 1-800-227-USPC o en el sitio web de la USP: www.usp.org/dsd/ refstd.
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h11i Esta ndares de Referencia USP / Requisitos Generales
han eliminado o corregido de acuerdo con las instrucciones de la etiqueta. Cuando se encuentren requisitos especiales de secado para los Esta ndares de Referencia en apartados espec cos de monograf as de la USP o del NF, e stos reemplazan las instrucciones habituales (ver Procedimientos en Pruebas y Valoraciones en Advertencias y Requisitos Generales). Si se exige secar un Esta ndar de Referencia USP antes de usarlo, se debe transferir una cantidad que sea suciente despue s del secado a un recipiente limpio y seco. No usar el envase original como recipiente de secado y no secar una muestra repetidas veces a temperaturas superiores a 258. Si se exige una determinacio n volume trica de agua en el momento de usar el Esta ndar de Referencia, proceder segu n se indica en el Me todo I en Determinacio n de Agua h921i. Para ello se aceptan me todos instrumentales o microanal ticos. Al usar cantidades habituales, aproximadamente 50 mg, del Esta ndar de Referencia, valorar volume tricamente con una solucio n del Reactivo cuatro veces ma s diluida. La seccio n Esta ndares de referencia USP de una monograf a individual de la USP o del NF o de un cap tulo general nombra cada Esta ndar de Referencia USP que se requiere para los procedimientos de prueba y valoracio n, y hace referencia a dicho cap tulo para obtener informacio n e instrucciones adicionales. La siguiente lista contiene las instrucciones para el uso y almacenamiento correctos de cada Esta ndar de Referencia USP. Estas instrucciones deben ser las mismas que aparecen en la etiqueta del Esta ndar de Referencia USP correspondiente. En un caso aislado, si las instrucciones de la etiqueta espec ca dieren del texto que gura en la siguiente lista, tienen prioridad las instrucciones de la etiqueta del art culo del lote vigente. Con poca frecuencia se presenta una situacio n en que, por razones cient cas, es necesario cambiar de inmediato las instrucciones. Este cambio se puede realizar fa cilmente en la etiqueta del Esta ndar de Referencia, pero el proceso formal de revisio n del texto farmacopeico requiere ma s tiempo. Por lo tanto, resulta especialmente importante consultar el Suplemento vigente de la USP y el NF para las revisiones ociales de la siguiente lista.&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
enzima (Pepsina) en 1936; la primera sulfonamida (Sulfanilamida) y las primeras hormonas (Insulina; Pituitaria Posterior) en 1942; los primeros esta ndares de desempen o (Esta ndares de Punto de Fusio n) en 1947; la primera penicilina (Penicilina G So dica) en 1950; la primera prote na de tecnolog a de ADN recombinante (Insulina Humana) en 1985, etc. El aumento continuo en el nu mero de Esta ndares de Referencia USP (ma s de 100 nuevos se desarrollan cada an o) reeja no so lo el aumento en el nu mero de monograf as y Cap tulos Generales, sino tambie n el desarrollo y amplio uso de metodolog as anal ticas modernas (como por ejemplo la cromatograf a, la espectrofotometr a, las valoraciones biolo gicas y bioqu micas, etc.) que requieren mediciones relativas a un esta ndar de referencia.&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
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NOMENCLATURA
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AUTORIDAD PARA EL ESTABLECIMIENTO Y N LA DISTRIBUCIO
Los Esta ndares de Referencia USP se establecen y distribuyen con la autorizacio n de la Junta Directiva de la USPC (Convencio n de la Farmacopea de los Estados Unidos) por recomendacio n del Comite de Esta ndares de Referencia USP, el cual aprueba la aptitud para uso en aplicaciones farmacopeicas de cada lote. Para algunos Esta ndares de Referencia, se busca una revisio n preliminar y aprobacio n de otros Comite s de Expertos del Consejo de Expertos. La distribucio n de sustancias controladas esta sujeta a las reglamentaciones y provisiones para el otorgamiento de licencias de la Administracio n para el Control de Drogas (DEA, por sus siglas en ingle s) del Departamento de Justicia. Los Paneles Asesores de la Industria y otros grupos de expertos (como Equipos de Proyectos) pueden reunirse para asesorar a la USP en distintos aspectos del Programa de Esta ndares de Referencia.&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
En las monograf as USPNF o en los Cap tulos Generales, se requiere el uso de los esta ndares designados Esta ndares de Referencia USP (ER USP), salvo algunas excepciones. Estas excepciones incluyen: lotes actuales de Esta ndares de Referencia USP y NF para los que no se especica uso alguno en los compendios actuales USP o NF pero que au n cuentan con suciente demanda (lotes futuros, una vez agotados los actuales, se denominara n Sustancias Aute nticas); Esta ndares de Referencia especicados en las monograf as desarrolladas por la USP que no pretenden publicarse en los compendios USPNF; Esta ndares de Referencia especicados en la edicio n vigente del Food Chemicals Codex [Co digo de Sustancias Qu micas Alimentarias] (con la designacio n adicional FCC); y Dentr cos de Fluoruro (evaluados y distribuidos por el acuerdo con la FDA y la Cosmetics, Toiletries, and Fragrances Association [Asociacio n de Cosme ticos, Art culos de Tocador y Fragancias]). Se puede distribuir un Esta ndar de Referencia USP que se requiera en una monograf a o Cap tulo General propuesto en el Pharmacopeial Forum antes de la fecha ocial de la revisio n del PF propuesta. Los Esta ndares de Referencia declarados actualmente Esta ndares de Referencia NF nalmente se designara n y declarara n Esta ndares de Referencia USP conforme a la consolidacio n de la USP y el NF dentro de la USPC a partir del 2 de enero de 1975. Mientras tanto, cuando sea necesario un Esta ndar de Referencia USP, se puede emplear la sustancia correspondiente declarada Esta ndar de Referencia NF. Como parte de su servicio, la USPC analiza y distribuye Sustancias Aute nticas adicionales (denominadas AS) que no se requieren actualmente en ninguna monograf a USP o Cap tulo stas tambie General. E n se suministran bajo supervisio n del Comite de Esta ndares de Referencia USP. Son muestras de sustancias qu micas altamente caracterizadas, incluidas las sustancias de abuso, que se analizan en un esfuerzo colaborativo y se ponen a disposicio n como un servicio primariamente para los laboratorios de investigacio n, farmace uticos y anal ticos. Estos materiales pueden usarse en la identicacio n, el desarrollo de me todos, la evaluacio n del desempen o de me todos, u otras aplicaciones que sean adecuadas y este n validadas por el usuario.
Referencias Visuales Aute nticas

A diferencia de los esta ndares de referencia qu mica, las Referencias Visuales Aute nticas (AVR, por sus siglas en ingle s) no se emplean en los ana lisis qu micos. En cambio, las AVR son ima genes visuales utilizadas por los analistas para comparar ciertos art culos de prueba y asegurar que cumplen con los requisitos farmacopeicos y se incorporan como referencia en la monograf a. El Comite de Expertos que aprueba una monograf a espec ca es el que decide la aprobacio n de las AVR para su inclusio n en una monograf a.&1S (USP30)
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HISTORIA
La futura disponibilidad de los primeros Esta ndares de Referencia USP se anuncio en el an o 1926 (USP X) . . . para falicitar la adopcio n de los esta ndares de valoracio n biolo gica de la Farmacopea y para proporcionar una mayor uniformidad en su aplicacio n. La lista de Esta ndares de Referencia USP que consist a en el an o 1936 de 6 elementos, aumento a casi 1650 en el an o 2004, recoleccio n que le ha seguido la pista al progreso de los ciencias farmace uticas: las primeras vitaminas (Aceite de H gado de Bacalao) y la primera
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Agregar lo siguiente:
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DIVERSIDAD Y SUS IMPLICACIONES
La coleccio n de Esta ndares de Referencia USP es muy diversa en cuanto a apariencia, estructura qu mica, composicio n y uso. Esta diversidad tiene implicaciones signicativas en la forma en que se analizan, envasan, almacenan y utilizan los materiales. Los Esta ndares de Referencia USP pueden ser polvos cristalinos o amorfos, l quidos vola tiles o viscosos, soluciones o suspensiones, geles o pastas, la minas de pla stico, etc. En cuanto a la estructura qu mica, var an desde sales inorga nicas simples hasta prote nas producidas mediante tecnolog a de ADN recombinante. Algunos son compuestos individuales altamente puros, mientras que otros son mezclas ma s complejas (en la mayor a de los casos obtenidos a partir de plantas o animales).&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
fabricante principal del art culo. El material se analiza y caracteriza mediante un estudio colaborativo entre laboratorios organizado segu n el protocolo disen ado en la sede de la USP. El personal de la USP evalu a los resultados, realiza los ana lisis o investigaciones adicionales, segu n sea necesario, y prepara un reporte que se presenta al Comite de Expertos en Esta ndares de Referencia USP para su revisio n y aprobacio n. Luego de su aprobacio n, el material se subdivide (si no se ha envasado antes del estudio colaborativo) y etiqueta, se verica su calidad, y el esta ndar se pone a la disposicio n para su distribucio n. Si el personal cient co de la USP o el Comite en Esta ndares de Referencia determinara que el material propuesto no es adecuado, se obtiene y analiza un nuevo material a granel.&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
ESTUDIO COLABORATIVO PARA LA N DE UN MATERIAL PROPUESTO EVALUACIO COMO ER USP

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NDARES DE REFERENCIA USOS DE LOS ESTA USP
Los usos ociales y autorizados de los Esta ndares de Referencia USP se especican en las monograf as USP y en los Cap tulos Generales e incluyen los siguientes: usos cuantitativos en valoraciones para fa rmacos y formulaciones, pruebas de l mite, o blancos y controles usos cualitativos, como por ejemplo pruebas de identicacio n, pruebas de aptitud del sistema, marcadores de picos cromatogra cos, etc. calibradores y esta ndares de desempen o, como por ejemplo calibradores de disolucio n, esta ndares de punto de fusio n, conjuntos de conteo de part culas, etc. Segu n se indica en Nomenclatura, la USP tambie n establece y distribuye esta ndares cuyo uso no se especica en monograf as USP o Cap tulos Generales. Los Esta ndares de Referencia USP se aplican con ma s frecuencia en las metodolog as espectrocosco picas y cromatogra cas. Sin embargo, tambie n se utilizan extensamente en aplicaciones biolo gicas y bioqu micas, como por ejemplo valoraciones microbiolo gicas para antibio ticos, reacciones enzima ticas, pruebas de cultivo celular, pruebas en animales completos; en ana lisis te rmicos para pol meros; y en valoraciones volume tricas, etc. Algunos de los ER USP que se usan con mayor frecuencia son los utilizados en las pruebas de los Cap tulos Generales como por ejemplo Disolucio n h711i, Prueba de Endotoxinas Bacterianas h85i, Carbono Orga nico Total h643i y Part culas en Inyectables h788i.&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
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PASOS EN EL ESTABLECIMIENTO DE UN NDAR DE REFERENCIA USP ESTA
El establecimiento de un nuevo Esta ndar de Referencia USP se inicia con la propuesta de una nueva monograf a o de la revisio n de una monograf a existente mediante la inclusio n de una prueba que requiere un nuevo ER USP. La necesidad de un nuevo lote de un Esta ndar de Referencia USP existente se identica cuando su inventario alcanza el umbral preestablecido. El nuevo lote se denomina lote de reemplazo cuando se debe adquirir el nuevo material a granel o se denomina lote de continuacio n cuando el material propuesto es una porcio n adicional del material a granel usado en el lote ocial existente. Los cient cos de la USP generan un conjunto de documentos que incluyen las especicaciones para la adquisicio n y un protocolo de ana lisis. El material a granel se adquiere, por lo general, de un
Los objetivos del estudio de evaluacio n son: conrmar la identidad y evaluar la pureza del material, determinar la aptitud para su uso en aplicaciones ociales, proveer al usuario toda la informacio n necesaria y las instrucciones de uso, y adquirir informacio n inicial (a tiempo cero) para estudios futuros de aptitud continua para su uso. Los cient cos de la USP disen an un protocolo de ana lisis detallado que incluye los siguientes elementos: tipos de pruebas, nu mero de pruebas, nu mero de colaboradores, nu mero de determinaciones repetidas y referencias a los procedimientos a utilizar. Cuando se disen a un protocolo de estudio, se consideran los siguientes factores: el estado farmacopeico del esta ndar, sus usos ociales, el historial del esta ndar, su composicio n y complejidad, las caracter sticas de la metodolog a y la disponibilidad del material y de los laboratorios competentes. El protocolo de ana lisis puede comprender una evaluacio n visual y microsco pica; pruebas de identicacio n (ma s elaboradas para los esta ndares que se desarrollan por primera vez); determinacio n de las constantes f sicoqu micas (por ej., intervalo de fusio n, rotacio n espec ca, ndice de refraccio n, peso espec co, etc); pruebas de pureza electrofore tica y cromatogra ca; determinacio n de contaminantes inorga nicos; pruebas de sustancias vola tiles (agua, solventes); ana lisis de grupos funcionales (como por ejemplo valoraciones volume tricas, absortividad UV, ana lisis elemental); ana lisis te rmico; y valoraciones contra otro esta ndar bien caracterizado (un lote anterior, un esta ndar internacional, etc.). Las pruebas especializadas se implementan cuando sea necesario, como por ejemplo para calibradores de disolucio n y el set de recuento de part culas, para los esta ndares que denen un atributo (reaccio n biolo gica negativa y positiva, capacidad de intercambio io nico, dia metro de permeabilidad) y para esta ndares biolo gicos que denen una Unidad de actividad (heparina, endotoxina, enzimas, antibio ticos complejos). El ana lisis de sorcio n de vapor tambie n puede realizarse para colaborar en la determinacio n de las condiciones de envasado y almacenamiento, y las instrucciones de uso. Para los ER USP liolizados unitarios, se demuestran la reproducibilidad aceptable del contenido del vial y la estabilidad de la forma liolizada. El nu mero de colaboradores por lo general no es menor de 3 (dos externos a la USP); aunque puede aumentar signicativamente, especialmente cuando la metodolog a es compleja o no posee un alto nivel de precisio n, o cuando usuarios potenciales expresan intere s en participar en la evaluacio n del material propuesto. (La participacio n en todo estudio de evaluacio n es una actividad abierta a todas las partes competentes e interesadas.) Si fuera necesario, se ejerce control estad stico en el disen o del estudio de evaluacio n y en el ana lisis de los resultados. El Laboratorio de Esta ndares de Referencia USP y los laboratorios de la FDA participan en casi todos los estudios de evaluacio n. Entre otros colaboradores se encuentran: Health Canada, el USP Research and Development Laboratory (Laboratorio de Investigacio n y Desarrollo de la USP) y laboratorios acade micos e industriales de los Estados Unidos y del exterior.&1S (USP30)
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NDARES DE REFERENCIA BIOLO GICOS ESTA
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TEXTO DE LA ETIQUETA
La Organizacio n Mundial de la Salud, organismo de las Naciones Unidas, administra un programa que suministra Esta ndares Internacionales para materiales biolo gicos. La USP coopera estrechamente con la OMS en la armonizacio n de metodolog a anal tica, en la denicio n de las unidades de potencia y, en algunos casos, participa en la preparacio n de un esta ndar de referencia. En repetidas oportunidades las Unidades USP y las Unidades Internacionales de potencia son ide nticas.&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
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N DE APTITUD PARA SU USO Y ASIGNACIO LA PUREZA
Se analizan los datos obtenidos en el estudio de evaluacio n colaborativo para determinar la aptitud para el uso designado en la monograf a del material. Los datos de caracterizacio n y los resultados deben contemplarse como un todo cuando se evalu a la aptitud para el uso destinado, la estrategia de asignacio n y el valor asignado. Para los Esta ndares de Referencia utilizados en aplicaciones cuantitativas, e sto incluye la determinacio n de un valor de ca lculo a emplear en el uso farmacopeico del esta ndar. El me todo a elegir en el ca lculo del valor asignado es un ana lisis de balance de masas, en el que se utilizan componentes determinados independientemente como por ejemplo humedad, residuos de disolvente, residuos inorga nicos, impurezas cromatogra cas y contenido de iones. Los resultados de la valoracio n contra un lote anterior u otro esta ndar validado y los resultados del ana lisis de grupo funcional son so lo de cara cter conrmatorio. Entre las excepciones al enfoque de balance de masas se encuentran muchos Esta ndares de Referencia biolo gicos, especialmente aquellos que denen la Unidad de actividad. El nu mero de cifras signicativas en el valor de ca lculo declarado es una funcio n del uso del esta ndar y el nu mero de cifras signicativas en el intervalo o l mite de aceptacio n. Por lo general, los Esta ndares de Referencia usados en las valoraciones declaran tres cifras signicativas y los esta ndares usados en las pruebas de l mite dos cifras signicativas. Puede que los Esta ndares de Referencia con aplicaciones mu ltiples en distintas metodolog as requieran diferentes asignaciones espec cas a cada valoracio n. Se declara el valor asignado sin incertidumbre asociada alguna. Sin embargo, para los esta ndares de calibracio n, el valor declarado es un intervalo, determinado mediante un ana lisis estad stico de los resultados. Los enfoques anteriores usaban un umbral de pureza, que al ser superior, el contenido no se declaraba y se le instru a al analista usar un valor predenido de 100,0%. Este enfoque es obsoleto hoy d a; sin embargo, au n no se han modicado las declaraciones de los lotes de esta ndares viejos y los usuarios continuara n aplicando el valor predenido de 100,0% en aplicaciones farmacopeicas cuantitativas. Para antibio ticos, a veces se utiliza la designacio n mg/mg como unidad de actividad biolo gica y pueden asignarse valores de ma s de 1000 mg/mg a algunos de estos esta ndares. Esto puede suceder cuando al primer esta ndar se le asigna un valor superior al de su pureza real y los esta ndares subsiguientes de pureza superior se denen con relacio n al lote anterior. Tambie n se puede obtener un valor asignado relativamente exagerado cuando se reemplazan te cnicas de separacio n menos selectivas por metodolog as modernas ma s selectivas. Como resultado, se pudiera haber asumido un contenido original superior a su nivel real. No se le asigna ningu n valor a los esta ndares con aplicaciones so lo cualitativas. Un informe que recopila los resultados del estudio de evaluacio n y que incluye una propuesta para el texto de la etiqueta se presenta al Comite de Expertos en Esta ndares de Referencia USP para su revisio n y aprobacio n.&1S (USP30)
El texto de la etiqueta se disen a para proporcionar al usuario toda la informacio n necesaria en cuanto al correcto almacenamiento y uso del Esta ndar de Referencia en la o las aplicaciones de la monograf a. La etiqueta incluye instrucciones de uso, advertencias de seguridad, informacio n requerida para las sustancias controladas y un valor de ca lculo para los esta ndares con aplicaciones cuantitativas. Para los calibradores, se proveen intervalos de aceptacio n. Si fuera necesario, los Esta ndares de Referencia USP esta n acompan ados de documentacio n adicional, como por ejemplo Hojas Te cnicas o Cromatogramas T picos. La USP generalmente no proporciona Certicados de Ana lisis ya que toda la informacio n que el usuario necesita para las aplicaciones ociales o autorizadas del esta ndar se proveen en el texto de la etiqueta y, si fuera necesario, en la documentacio n adicional. Las instrucciones de uso son espec cas para cada lote y preceden cualquier otra indicacio n en el compendio. Se generan Hojas de Datos de Seguridad del Material para cada stas se encuentran disponibles en el esta ndar que distribuye la USP. E sitio Web de la USP.&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
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DE EXPERTOS EN ESTA NDARES DE COMITE REFERENCIA USP
El Comite de Expertos en Esta ndares de Referencia USP esta constituido por profesionales de la industria, agencias gubernamentales y acade micos de los Estados Unidos de Ame rica y del exterior. Se organiza en grupos y puede recibir ayuda de un Panel Asesor de la Industria en la revisio n de los estudios de evaluacio n. La aprobacio n del informe de evaluacio n debe ser una nime.&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
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ENVASADO
El proceso de produccio n de los Esta ndares de Referencia USP opera bajo un Sistema de Calidad ISO 9001 : 2000 registrado y principios de Buenas Pra cticas de Fabricacio n vigentes adecuadas. Los Esta ndares de Referencia USP se envasan en unidades individuales disen adas para mantener la integridad del material contenido de Esta ndar de Referencia. Las condiciones de envasado y almacenamiento para los Esta ndares de Referencia USP proveen proteccio n a todos los materiales au n cuando e ste no requiera tan excepcional proteccio n debido a su estabilidad inherente. Las conguraciones de envasado ma s comunes son viales para materiales so lidos y ampollas para los l quidos. El ambiente de envasado se determina por la sensibilidad del material a la luz, la oxidacio n o a la humedad atmosfe rica y por su toxicidad. Si fuera necesario, los envases se llenan en una ca mara cerrada bajo gas inerte en condiciones de humedad residual baja controlada. (En la etiqueta se declara la necesidad de almacenar estos esta ndares bajo proteccio n de una atmo sfera de gas inerte.) Tambie n se pueden envolver en una bolsa de papel de aluminio sellada como barrera protectora adicional. Las ampollas se llenan y sellan en un dispositivo automa tico y normalmente se purgan con un gas inerte. Los taman os de ampollas ma s comunes son 2 mL y 5 mL. Los viales pueden llenarse mediante operaciones manuales, semi-automa ticas stos pueden ser de diferentes o completamente automa ticas. E taman os dependiendo de la cantidad de material. La cantidad de material por envase individual depende de la aplicacio n farmacopeica del esta ndar y es, por lo general, suciente para varias
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determinaciones repetidas. Se proporcionan cantidades mayores cuando se requieren experimentos adicionales (como por ejemplo una determinacio n volume trica del contenido de agua al momento de uso). En general, se sobrepasa ligeramente el llenado de los envases de los Esta ndares de Referencia de manera que el usuario pueda retirar la cantidad nominal declarada del material. Los viales se cierran con tapones con recubrimiento interno de Teo n y se aseguran con precintos de aluminio y un sello que evidencia su alteracio n intencional con el logotipo de la USP. Es posible que au n se distribuyan lotes con conguraciones anteriores de cierre de viales. Distintas consideraciones pueden determinar la necesidad de suministrar el esta ndar en un envase unitario, principalmente materiales con problemas de manipulacio n signicativos o aquellos disponibles solamente en pequen as cantidades. Dichos envases unitarios por lo general se llenan mediante liolizacio n y su contenido se declara en Unidades de masa o actividad por envase. Cuando as se declara, el contenido del envase debe reconstituirse en su totalidad sin la necesidad de pesarlo nuevamente. Las instrucciones de reconstitucio n se proveen en la etiqueta o en las monograf as en que se usa el esta ndar.&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
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PROGRAMA DE APTITUD CONTINUA PARA SU USO
Para asegurar que los Esta ndares de Referencia mantienen las propiedades determinadas en la evaluacio n inicial, la USP mantiene un Programa de Aptitud Continua para Su Uso. Los intervalos y protocolos para volver a analizar el esta ndar son una funcio n de sus usos y propiedades as como de la informacio n disponible acerca de su estabilidad. Los protocolos abreviados emplean la metodolog a indicadora de estabilidad usada en la caracterizacio n inicial del material para conrmar la uniformidad de atributos como por ejemplo la apariencia, la pureza cromatogra ca o el contenido de sustancias vola tiles.&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
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USO CORRECTO
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NDARES DE REFERENCIA DE ESTA IMPUREZAS
El tema de las impurezas se discute en varias secciones de la USP, como por ejemplo Advertencias Generales y en Cap tulos Generales como Impurezas Comunes h466i, Impurezas en Art culos Ociales h1086i, etc. Adema s, la mayor a de las monograf as de fa rmacos y muchas de las de formulaciones incluyen pruebas espec cas para la identicacio n o cuanticacio n de impurezas. Dichas pruebas generalmente requieren un Esta ndar de Referencia ocial. El desarrollo de estos Esta ndares de Referencia de impurezas es una de las razones del crecimiento acelerado y continuo de los Esta ndares de Referencia USP. En muchos casos, los materiales para los Esta ndares de Referencia de impurezas son costosos y dif ciles de obtener. Es posible que so lo este disponible una cantidad limitada del material la obtencio n podr a requerir una s ntesis especialy puede ser de menor calidad que los Esta ndares de Referencia para el art culo ocial, por lo que se requerir a puricacio n. La cantidad limitada de material disponible puede afectar el protocolo de ana lisis y el envasado. Los Esta ndares de Referencia de impurezas pudieran estar disponibles como materiales de compuesto individual puricado, soluciones, dispersiones so lidas o mezclas de ma s de una impureza. Otras opciones incluyen muestras del art culo ocial con el contenido declarado de impureza(s), la generacio n in situ de la impureza a partir del art culo ocial mediante un procedimiento espec co validado, el uso de movilidades cromatogra cas relativas y factores de respuesta relativa o de valores teo ricos como por ejemplo absortividades UV a longitudes de onda selectivas. En ediciones anteriores del compendio, se designaban a las impurezas con sus nombres qu micos. Para facilitar bu squeda y el orden en el ndice, la designacio n de las impurezas gradualmente se ha reemplazado con ER Compuesto Relacionado X de Y, donde Y es el nombre del art culo ocial y X es una letra del alfabeto secuencial. Los Esta ndares de Referencia de mezclas de impurezas pudieran designarse segu n su uso, como por ejemplo ER Aptitud del Sistema de Y. Se hace una referencia cruzada entre los nombres convencionales y los nombres qu micos al nal de la seccio n de este cap tulo y en una seccio n especial del Ofcial USP Reference Standards Catalog (Cata logo Ocial de Esta ndares de Referencia USP).&1S (USP30)
Ni los Esta ndares de Referencia ni las Sustancias Aute nticas esta n destinadas para uso como fa rmacos o dispositivos me dicos. Los Esta ndares de Referencia USP en distribucio n no llevan una fecha de caducidad. Un lote de ER USP puede usarse en sus aplicaciones ociales siempre que se publique como Current Lot (Lote Vigente) en la versio n vigente (u ltima versio n) del Ofcial USP Reference Standards Catalog (Cata logo Ocial de Esta ndares de Referencia USP). Al agotarse, se designa a este lote en el cata logo como Previous Lot (Lote Anterior y se le asigna una Valid Use Date (Fecha de Uso Va lida). La USP publica bimestralmente el Ofcial Catalog of Reference Standards (el cual tambie n incluye las Sustancias Aute nticas) como un folleto separado* Se puede encontrar una versio n actualizada del cata logo en el sitio Web de la USP: www.usp.org. Es responsabilidad del usuario constatar que un suministro particular de Esta ndar de Referencia USP tiene un estado ocial como Current Lot (Lote Vigente) o como Previous Lot (Lote Anterior) dentro de la fecha de uso va lida. Muchas pruebas y valoraciones farmacopeicas esta n basadas en la comparacio n de una muestra de prueba con un Esta ndar de Referencia USP. En estos casos, las mediciones se realizan en preparaciones de la muestra de prueba y del Esta ndar de Referencia. Cuando se indica que se debe preparar una Solucio n esta ndar o una Preparacio n esta ndar para realizar una determinacio n cuantitativa en diluciones sucesivas o de otro modo, esta previsto que la sustancia del Esta ndar de Referencia se pese con exactitud (ver Pesas y Balanzas h41i y Aparatos Volume tricos h31i). Tambie n se debe tomar debida nota de los errores relativamente importantes que se producen al pesar masas pequen as (ver tambie n Dilucio n en Pruebas y Valoraciones en Advertencias y Requisitos Generales). El texto de la etiqueta provee instrucciones al usuario en cuanto al uso correcto del Esta ndar de Referencia. Las instrucciones incluyen una de las siguientes opciones. Un Esta ndar de Referencia se puede emplear de la siguiente manera: Tal como se encuentra, es decir, sin ningu n tratamiento previo o correccio n por sustancias vola tiles. Esta es la opcio n de preferencia y se escoge siempre que los datos validados muestren que el contenido de sustancias vola tiles es constante en el tiempo. Inmediatamente despue s de un per odo de secado bajo las condiciones declaradas. El secado no debe realizarse en el envase original. Se debe transferir una porcio n del material a un recipiente de secado aparte.
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Para quienes no esta n suscritos, el Cata logo Ocial ma s reciente esta disponible en: U.S. Pharmacopeial Convention, Inc., Reference Standards Order Department, 12601 Twinbrook Parkway, Rockville, MD 20852. Tele fono 1-301-881-0666. Fax 1-301-816-8148. L nea gratuita en Estados Unidos 1-800-227-USPC o en el sitio Web de la USP: www.usp.org/ dsd/refstd.
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Con una correccio n por el contenido de agua o la pe rdida por secado determinada en una porcio n aparte del material. Si se exige una determinacio n volume trica de agua al momento de usar el Esta ndar de Referencia, proceder segu n se indica en el Me todo I en Determinacio n de Agua h921i. Para ello se aceptan me todos instrumentales o microanal ticos. Al usar cantidades habituales (aproximadamente 50 mg del Esta ndar de Referencia), valorar volume tricamente con una solucio n del reactivo diluida de dos a cinco veces ma s. Si se exige la determinacio n de la pe rdida por secado de una porcio n aparte del Esta ndar de Referencia USP, proceder segu n se indica en la etiqueta. Se pueden usar taman os de muestra ma s pequen os que los requeridos en el Cap tulo General Pe rdida por Secado h731i para un ER Esta ndar de Referencia USP, siempre que el usuario pueda obtener un resultado sucientemente exacto. Siempre que las instrucciones de uso declaradas requieran un secado preliminar o una correccio n por sustancias vola tiles, se debe realizar al momento de uso. Detalles experimentales adicionales deben controlarse mediante los Procedimientos Operativos Esta ndares y las buenas pra cticas de laboratorio del usuario.&1S (USP30)
NDARES DE REFERENCIA USP ESTA AS DE LA ESPECIFICADOS EN MONOGRAFI TULOS GENERALES USP Y DEL NF Y CAPI
NOTAConsultar el u ltimo Suplemento o Interim Revision Announcement (Anuncio de Revisio n Intermedia) correspondiente a la USP y al NF para informarse sobre las revisiones, adiciones o eliminaciones. Las revisiones, adiciones y eliminaciones de Esta ndares de Referencia USP individuales se listan acumulativamente en cada Suplemento de los compendios USPNF. De esta manera, so lo es necesario consultar &la edicio n vigente de los compendios USP NF&1S (USP30) y el u ltimo Suplemento para obtener la lista completa de Esta ndares de Referencia USP vigentes, especicados en las monograf as y cap tulos generales de los compendios USPNF. Esta lista proporciona los nombres completos y actualizados, y la informacio n qu mica &&1S (USP30) de los Esta ndares de Referencia USP distribuidos a partir de la fecha ocial de dicho Suplemento. Las revisiones de este cap tulo se llevan a cabo continuamente a trave s de los Anuncios de Revisio n Intermedia publicados en el Pharmacopeial Forum. Estas revisiones interinas de los Esta ndares de Referencia USP se incluyen acumulativamente en el pro ximo Suplemento de los compendios USPNF. La siguiente lista alfabe tica constituye un ndice de todas las revisiones de este cap tulo. Por lo tanto, no es necesario nombrar repetidamente los Esta ndares de Referencia revisados en el ndice general del Suplemento. En la lista siguiente, se indican los nombres qu micos de muchas sustancias (por ej., compuestos relacionados) que no son art culos de monograf as de la USP o del NF. Despue s del nombre de una sustancia qu mica ER, se pueden indicar entre pare ntesis su fo rmula emp rica y su peso molecular, si se dispone de estos datos, separados por el s mbolo .
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ALMACENAMIENTO
Cada Esta ndar de Referencia USP se debe almacenar, manipular y utilizar correctamente para que sirva al n deseado. En general, los Esta ndares de Referencia deben almacenarse en sus envases originales con tapo n, lejos del calor y protegidos de la luz. Deben evitarse, en especial, lugares de almacenamiento hu medos. Cuando se necesitan condiciones de almacenamiento especiales, las instrucciones se indican en la etiqueta.&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
RELACIONES CON OTRAS ORGANIZACIONES DE ESTABLECIMIENTO NDARES DE ESTA

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ER Aceite de Ricino Polioxilado 35 USP. Cambio en la redaccio n: ER Acesulfamo Pota sico USP. Cambio en la redaccio n: ER Acetaminofeno USP.
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&1S
(USP30)
La USP mantiene contacto continuo con otras organizaciones que establecen Materiales de Referencia con nes farmacopeicos, entre otros, como por ejemplo las Farmacopeas Europea y Japonesa (a trave s del Grupo de Discusio n Farmacopeico), la Organizacio n Mundial de la Salud, el National Institute for Science and Technology (Instituto Nacional de Ciencia y Tecnolog a), el Reference Materials Committee (Comite sobre Materiales de Referencia, REMCO) de la ISO, etc. ISO-REMCO ha reconocido ocialmente la naturaleza espec ca de las sustancias de referencia farmacopeica en la introduccio n de la Gu a ISO 34General requirements for the competence of reference material producers [Requisitos Generales para la Competencia de los Productores de Material de Referencia] (Segunda Edicio n 2000): Las autoridades farmacopeicas establecen y distribuyen los esta ndares y sustancias farmacopeicas siguiendo el principio general de esta gu a. Se debe tomar en cuenta, no obstante, que las autoridades farmacopeicas toman un enfoque distinto para proveer al usuario la informacio n contenida en el certicado de ana lisis y las fechas de caducidad. Adema s, no se declara la incertidumbre de los valores asignados ya que es inapreciable en relacio n a los l mites denidos de las valoraciones de me todos espec cos de las farmacopeas para las cuales se emplean. El apartado Esta ndares de referencia USP de una monograf a individual de la USP o del NF o de un cap tulo general nombra a cada Esta ndar de Referencia USP requerido para los procedimientos de prueba y valoracio n, y hace referencia a este cap tulo para obtener informacio n e instrucciones adicionales. Es importante consultar el Suplemento vigente de la USP y el NF para las revisiones ociales en la siguiente lista.&1S (USP30)
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Acetato de Alfa Tocoferilo USP. Agregar lo siguiente:

& & &1S
(USP30)
ER Acetato de Anecortava USP.&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Acetato de Betametasona USP.

& &1S
(USP30)
3847
Cambio en la redaccio n: ER Acetato de Celulosa USP. Cambio en la redaccio n: ER Acetato de Clorhexidina USP. Cambio en la redaccio n: ER Acetato de Cortisona USP. Agregar lo siguiente:
& & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Acetato de L-Lisina USP. Agregar lo siguiente:

&
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Acetato de Leuprorelina USP.&1S
(USP30)
(USP30)
ER Acetato de Mafenida USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
ER Acetato de Desmopresina USP.&1S
(USP30)
ER Acetato de Medroxiprogesterona USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Acetato de Desoxicorticosterona USP. Cambio en la redaccio n: ER Acetato de Dexametasona USP. Cambio en la redaccio n: ER Acetato de Flecainida USP. Cambio en la redaccio n: ER Acetato de Fludrocortisona USP. Cambio en la redaccio n: ER Acetato de Fluorometolona USP. Agregar lo siguiente:
& & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Acetato de Megestrol USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Acetato de Metilprednisolona USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Acetato de Noretindrona USP. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
&
&1S
(USP30)
ER Acetato de Parametasona USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Acetato de Prednisolona USP. Cambio en la redaccio n: ER Acetato de Trenbolona USP. Cambio en la redaccio n:
&
&
&1S
(USP30)
ER Acetato de Gonadorelina USP [C55H75N17O13 xCH3COOH 1182,3 (libre de acetatos)].&1S (USP30)
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Acetazolamida USP. ER Acetato de Guanabenzo USP. Cambio en la redaccio n: ER Acetilciste na USP. ER Acetato de Hidrocortisona USP. Cambio en la redaccio n: ER Acetilo de Sulsoxazol USP. ER Acetato de Isoupredona USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Acetohexamida USP.

& &1S
(USP30)
3848
Cambio en la redaccio n: ER Aceto nido de Fluocinolona USP. Cambio en la redaccio n: ER Aceto nido de Triamcinolona USP. Cambio en la redaccio n: ER Aciclovir USP.
& &1S & &1S & &1S
(USP30)
cido Aspa ER A rtico USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
cido Benzoico USP. ER A
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido C ER A trico USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Acetohidroxa ER A mico USP. Cambio en la redaccio n: cido Ad ER A pico USP.
& &1S & &1S
(USP30)
cido Dehidroco ER A lico USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
cido Diatrizoico USP. ER A Cambio en la redaccio n: (C7H4I3NO2 cido Ede ER A tico USP.
&
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido 3-Amino-2,4,6-triyodobenzoico USP ER A 514,83). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: cido 5-Amino-2,4,6-triyodo- N-metilisoftala ER A mico USP 571,88). &&1S (USP30) (C9H7I3N2O3 Cambio en la redaccio n: cido Aminobenzoico USP. ER A Cambio en la redaccio n: cido Aminocaproico USP. ER A Cambio en la redaccio n: cido Aminohipu ER A rico USP. Cambio en la redaccio n: cido Aminosalic ER A lico USP. Cambio en la redaccio n: cido Arsan ER A lico USP.
& &1S & &1S
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Estea ER A rico USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Etacr ER A nico USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Etidro ER A nico Monohidrato USP 224,04). &&1S (USP30)
(USP30)
(C2H8O7P2 H2O
Cambio en la redaccio n: cido Fenilbenzimidazol Sulfo ER A nico USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Fluoroquinolo ER A nico USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Fo ER A lico USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: cido Asco ER A rbico USP. cido 10-Formilfo ER A lico USP.
& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
3849
Cambio en la redaccio n: cido Fuma ER A rico USP.

& &1S
(USP30)
cido Sulfan ER A lico USP (C6H7NO3S Cambio en la redaccio n:
173,19).
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Glic ER A rrico USP.

& &1S
(USP30)
cido Trisalic ER A lico USP Cambio en la redaccio n:
(C21H14O7
378,34).
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Gluta ER A mico USP.

& &1S
(USP30)
cido Undecile ER A nico USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Iotala ER A mico USP. Cambio en la redaccio n: cido Maleico USP. ER A
& &1S & &1S
(USP30)
cido Valere ER A nico USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
cido Valproico USP. ER A
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Ma ER A lico USP.

& &1S
(USP30)
cido Xantanoico USP (C14H10O3 ER A Cambio en la redaccio n:
226,23).
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Mefena ER A mico USP. Cambio en la redaccio n: cido Nalid ER A xico USP.
& &1S & &1S
(USP30)
cido o-Yodohipu ER A rico USP

& &1S
(C9H8 INO3
305,07).
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Adenina USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Palm ER A tico USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Adenosina USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Pamoico USP (C23H16O6 ER A Cambio en la redaccio n: cido Pente ER A tico USP.
& &1S
388,38).
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Agigenina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Agno sido USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Qu ER A nico USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER L-Alanina USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Salic ER A lico USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Alanto na USP.

& &1S
(USP30)
3850
Cambio en la redaccio n: ER Albendazol USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Almido n Glicolato de Sodio Tipo A. Cambio en la redaccio n: ER Almido n Glicolato de Sodio Tipo B. Cambio en la redaccio n: ER Alopurinol USP.
& &1S & &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Albuterol USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Alcohol USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Alcohol Benc lico USP. Cambio en la redaccio n: ER Alcohol Cet lico USP.
& &1S & &1S
(USP30)
ER Alprazolam USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Alprostadil USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Alcohol Deshidratado USP. Cambio en la redaccio n: ER Alcohol Estear lico USP. Cambio en la redaccio n: ER Alcohol Fenilet lico USP &(C8H10O Cambio en la redaccio n: ER Alcoholes de Lanolina USP. Cambio en la redaccio n: ER Alendronato So dico USP. Cambio en la redaccio n: ER Alfa Ciclodextrina USP. Cambio en la redaccio n: ER Alfa Tocoferol USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Altretamina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Amcino nida USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: 122,17).&1S

(USP30)
ER Amfotericina B USP.
& &1S
(USP30)
(USP30)
ER Amifostina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Amifostina Tiol USP aminopropil)amino]-etanotiol ]

& &1S
[ diclorhidrato de 2-[(3(C 5 H 16 N 2 SCl 2 207,17).
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Amikacina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Amilasa y Proteasa de Pancreatina USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Ali na USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER 2-Amino-5-clorobenzofenona USP (C13H10ClNO 231,68).

&
Cambio en la redaccio n: ER S-Alil-L-Ciste na USP.

& &1S
&1S
(USP30)
(USP30)
3851
Cambio en la redaccio n: ER Aminobenzoato Pota sico USP. Cambio en la redaccio n: ER Aminobutanol USP (C4H11NO Cambio en la redaccio n: ER N-(Aminocarbonil)-N-[([5-nitro-2-furanil]-metileno)-amino]glicina USP. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER m-Aminofenol USP.
& &1S & &1S
(USP30)
ER Amprolio USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: 89,14).

& &1S
(USP30)
ER Ana logo Etilendiamina de Ciprooxacino USP [clorhidrato de a cido 1-ciclopropil-6-uoro-1,4-dihidro-4-oxo-7-[(2aminoetil)amino]-3-quinolin carbox lico] (C15H16FN3O3 HCl 341,77). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Ana logo Nitrofenilpirid nico de Nifedipino USP [4-(2nitrofenil)-2,6-dimetilpiridin-3,5-dicarboxilato de dimetilo ] 344,33). &&1S (USP30) (C17H16N2O6
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Aminoglutetimida USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER m-Aminoglutetimida USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Amitraz USP.
& &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Ana logo Nitrosofenilpirid nico de Nifedipino USP [4-(2nitrosofenil)-2,6-dimetilpiridin-3,5-dicarboxilato de dimetilo ] (C17H16N2O5 328,33). &&1S (USP30)
(USP30)
ER Antipirina USP.
& &1S
(USP30)
(USP30)
ER Antralina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Amobarbital USP.

& &1S
(USP30)
ER Apigenina-7-Gluco sido USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Amoxapina USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Amoxicilina USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Ampicilina USP.

& &1S
(USP30)
ER Aptitud del Sistema de Clorhidrato de Cefepima USPEs una mezcla del compuesto relacionado A de clorhidrato de cefepima (cloruro de [6R-[6a,7b(E)]]-1-[[7-[[(2-amino-4-tiazolil) (metoxiimino)acetil]amino]-2-carboxi-8-oxo-5-tia-1-azabiciclo[4.2.0]oct-2-en3-il]metil]-1-metilpirrolidinio, monoclorhidrato, monohidrato; (C19H25ClN6O5S2 HCl H2O 571,50); compuesto relacionado B de cefepima (a cido [6 R-trans ]-7-[[[2-[[(2-amino-4-tiazolil) (metoxiimino)acetil]amino]-4-tiazolil](metoxiimino)acetil]amino]-3(1-metilpirrolidinio-1-il)metil]-5-tia-1-azabiciclo[4.2.0]oct-3-en-2carbox lico, sal interna; (C25H29N9O7S3 663,75); y clorhidrato de cefepima. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
Cambio en la redaccio n: ER Ampicilina So dica USP. Cambio en la redaccio n: ER Ampicilina Trihidrato USP.
& &1S & &1S
(USP30)
ER Aptitud del Sistema de Valoracio n de Vitamina D USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
ER L-Arginina USP.
&
&1S
(USP30)
3852
Cambio en la redaccio n: ER Ascorbato de Calcio USP. Cambio en la redaccio n: ER Ascorbato de Sodio USP. Cambio en la redaccio n: ER Aspartamo USP.
& &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Azo-aminoglutetimida USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Aztreonam USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Aztreonam de Anillo Abierto USP (C18H19N5O9S2

& &1S
(USP30)
453,46).
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Acesulfamato de Aspartamo USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Aspirina USP.
& &1S & &1S
(USP30)
ER Azul de Metileno USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Bacitracina Cinc USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Astemizol USP.

& &1S
(USP30)
ER Baclofeno USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Atenolol USP.

& &1S
(USP30)
ER Behenato de Glicerilo USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Atovacuona USP.

& &1S
(USP30)
ER Bencilato de 3-Quinuclidinilo USP

& &1S
(C21H23NO3
337,42).
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Aurotioglucosa USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Bendroumetiazida USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Avobenzona USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Benzoato de Bencilo USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Azaeritromicina A USP. Cambio en la redaccio n: ER Azaperona USP.

& &1S & &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Benzoato de Betametasona USP. Cambio en la redaccio n: ER Benzoato de Denatonio USP.
& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Azatioprina USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Benzoato de Metronidazol USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Azitromicina USP.

& &1S
(USP30)
3853
Cambio en la redaccio n: ER Benzoca na USP.

& &1S
&
(USP30)
ER Bisoctrizol USP.&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Benzonatato USP.

& &1S
(USP30)
ER Bitartrato de Colina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER 1,4-Benzoquinona USP. Agregar lo siguiente:

& & &1S
(USP30)
ER Bitartrato de Dihidrocode na USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
ER Besilato de Amlodipino USP.&1S
(USP30)
ER Bitartrato de Epinefrina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Besilato de Atracurio USP. Cambio en la redaccio n: ER Besilato de Mesoridazina USP. Cambio en la redaccio n: ER Beta Ciclodextrina USP. Cambio en la redaccio n: ER Betametasona USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Bitartrato de Fenilpropanolamina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Bitartrato de Hidrocodona USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Bitartrato de Metaraminol USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Bitartrato de Nicotina Dihidrato USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Biorreaccio n Positiva USP. Cambio en la redaccio n: ER Biotina USP.

& &1S & &1S
(USP30)
ER Bitartrato de Norepinefrina USP. Cambio en la redaccio n: ER Brinzolamida USP.

& &1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Biperideno USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Bromhidrato de Cefelina USP. Cambio en la redaccio n: ER Bromhidrato de Dextrometorfano USP. Cambio en la redaccio n: ER Bromhidrato de Escopolamina USP.
& &1S & &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER 4,4-Bis[1,2,3,6-tetrahidro-4-(2-oxo-1-benzimidazolinil)-1574,69). &&1S (USP30) piridil]butirofenona USP (C34H34N6O3 Cambio en la redaccio n: ER Bisacodilo USP.
& &1S
(USP30)
(USP30)
(USP30)
3854
Cambio en la redaccio n: ER Bromhidrato de Hidroxianfetamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Bromhidrato de Homatropina USP. Cambio en la redaccio n: ER 8-Bromoteolina USP [8-bromo-3,7-dihidro-1,3-dimetil-1H259,06). &&1S (USP30) purina-2,6-diona] (C7H7N4O2Br Cambio en la redaccio n: ER Bromuro de Clidinio USP. Cambio en la redaccio n: ER Bromuro de Demecario USP. Cambio en la redaccio n: ER Bromuro de Metescopolamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Bromuro de Neostigmina USP. Cambio en la redaccio n: ER Bromuro de Piridostigmina USP. Cambio en la redaccio n: ER Bromuro de Propantelina USP. Cambio en la redaccio n: ER Bromuro de Vecuronio USP. Cambio en la redaccio n: ER Bumetanida USP.
& & & & & & & & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Butambe n USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER 2-terc-Butil-4-hidroxianisol USP
& &1S
(C11H16O2
180,25).
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER 3-terc-Butil-4-hidroxianisol USP

& &1S
(C11H16O2
180,25).
(USP30)
(USP30)
ER 3-(Butilamino)-4-fenoxi-5-sulfamoilbenzoato de Butilo USP 420,53). &&1S (USP30) (C21H28N2O5S Cambio en la redaccio n:
&1S
(USP30)
ER Butilparabeno USP.
&
&1S
(USP30)
&1S
(USP30)
ER Butirato de Hidrocortisona USP. Cambio en la redaccio n:

&1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Butirato de Sodio USP. Cambio en la redaccio n:

&1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Cafe na USP.
&
&1S
(USP30)
&1S
(USP30)
ER Calcifediol USP.
&
&1S
(USP30)
&1S
(USP30)
&
ER Calcitonina Salmo n USP.&1S
(USP30)
&1S
(USP30)
~
ER Calcitrol USP.
&
&1S
(USP30)~USP30
Cambio en la redaccio n: ER Butabarbital USP.

&
&1S
(USP30)
ER Calibracio n de Dextrano 4 USP. Cambio en la redaccio n: ER Butalbital USP.

&
& &1S
(USP30)
&1S
(USP30)
ER Calibracio n de Dextrano 10 USP.
&
&1S
(USP30)
3855
Cambio en la redaccio n: ER Calibracio n de Dextrano 40 USP. Cambio en la redaccio n: ER Calibracio n de Dextrano 70 USP. Cambio en la redaccio n: ER Calibracio n de Dextrano 250 USP. Cambio en la redaccio n: ER Caprato de Metilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Caprilato de Colesterilo USP
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Carbenicilina Monoso dica Monohidrato USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Carbidopa USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Carbonato de Litio USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Carbonato de Propileno USP. Cambio en la redaccio n: (C35H60O2 512,86). ER Carboplatino USP.

& &1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Caprilato de Metilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Caproato de Hidroxiprogesterona USP. Cambio en la redaccio n: ER Caproato de Metilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Capsaicina USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S
Cambio en la redaccio n: ER Carisoprodol USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Casticina USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Cefaclor USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Cefadroxilo USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Captopril USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Cefalexina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Carbacol USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Cefalotina So dica USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Carbamazepina USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Cefamandol de Litio USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Carbenicilina Indanilo So dica USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Cefapirina Benzat nica USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
3856
Cambio en la redaccio n: ER Cefapirina So dica USP. Cambio en la redaccio n: ER Cefazolina USP.

& &1S & &1S
(USP30)
ER Ceftizoxima USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Ceftriaxona So dica USP. Cambio en la redaccio n: ER Cefuroxima Axetilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Cefuroxima So dica USP. Cambio en la redaccio n:
& &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Cexima USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Cefmetazol USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Cefonicida So dica USP. Cambio en la redaccio n: ER Cefoperazona Dihidrato USP. Cambio en la redaccio n: ER Ceforanida USP.
& &1S & &1S
(USP30)
ER Celaburato USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Celacefato USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: n Celular USP ER Ce lulas F1 para la Prueba de Proliferacio (L nea celular ATCC FDCP-F1 enviada con autorizacio n de la USP).
& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Cefotaxima So dica USP. Cambio en la redaccio n: ER Cefoteta n USP.

& &1S & &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Cera de Candelilla USP. Cambio en la redaccio n: ER Cianocobalamina USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Cefoxitina USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Ciclandelato USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Cefpiramida USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Ciclofosfamida USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Cefpodoxima Proxetilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Cefradina USP.

& &1S & &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Ciclometicona 4 USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Ceftazidima Pentahidrato USP.

& &1S
(USP30)
3857

& &1S
(USP30)
ER Citrato de Acetiltributilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Citrato de Acetiltrietilo USP. Cambio en la redaccio n:
&
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Ciclopirox USP.

& &1S
(USP30)
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Ciclopirox Olamina USP. Cambio en la redaccio n: ER 2-Ciclopropilmetilamino-5-clorobenzofenona USP.

& &1S & &1S
(USP30)
ER Citrato de Bismuto USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
ER Citrato de Clomifeno USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Citrato de Dietilcarbamazina USP. ER Cicloserina USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Citrato de Difenhidramina USP. ER Ciclosporina USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Citrato de Feniltoloxamina USP. ER Cimetidina USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Citrato de Fentanilo USP. ER Cinoxacino USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Citrato de Orfenadrina USP. ER Cipionato de Estradiol USP. Cambio en la redaccio n: ER Citrato de Sufentanilo USP. ER Cipionato de Testosterona USP. Cambio en la redaccio n: ER Citrato de Tamoxifeno USP. ER Ciprooxacino USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Citrato de Tributilo USP. ER Cisplatino USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Citrato de Trietilo USP. ER Citarabina USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Claritromicina USP.

& &1S
(USP30)
3858
Cambio en la redaccio n: ER Clavam-2-Carboxilato Pota sico USP. Cambio en la redaccio n: ER Clavulanato de Litio USP. Cambio en la redaccio n: ER Clioquinol USP.
& &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Acebutolol USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Amantadina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Amilorida USP. Cambio en la redaccio n:
&
&
&1S
(USP30)
(USP30)
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clofazimina USP.

& &1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Amitriptilina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Amodiaquina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clobrato USP.

& &1S
(USP30)
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clonazepam USP.

& &1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Anileridina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Apomorna USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clonidina USP.

& &1S
(USP30)
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clorambucilo USP.

& &1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Apraclonidina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Cloranfenicol USP.

& &1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Arginina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clorazepato Dipota sico USP. Cambio en la redaccio n: ER Clordiazepo xido USP.
& &1S & &1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Bacampicilina USP. Cambio en la redaccio n:
& &1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Benazepril USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clorhexidina USP.

& &1S
(USP30)
ER Clorhidrato de 1-Bencil-3-metil-5-aminopirazol USP (C11H13N3 HCl 223,71). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Benoxinato USP.
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de 5-Aminoimidazol-4-carboxamida USP (C4H6N4O HCl 162,58). &&1S (USP30)
(USP30)
3859
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Betahistina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Beta na USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Betaxolol USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Biperideno USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Bromodifenhidramina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Bupivaca na USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Buprenorna USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Bupropio n USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Buspirona USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Carteolol USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Catinona USP [clorhidrato de a aminopropiofenona] (C9H11NO HCl 185,65). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Cefotiam USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Ciclizina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Ciclobenzaprina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Ciclopentolato USP. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
&
&1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Cimetidina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Ciprooxacino USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Ciproheptadina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
na USP. ER Clorhidrato de L-Ciste Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Clindamicina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Clomipramina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Clonidina USP. Cambio en la redaccio n:
& &1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Clordiazepo xido USP. ER Clorhidrato de Cefepima USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Cloroproca na USP. ER Clorhidrato de Cefmenoxima USP.
& &1S & & &1S
& &1S
(USP30)
(USP30)
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Clorpromazina USP.

& &1S
(USP30)
3860
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Clortetraciclina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Coca na USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Colestipol USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Daunorrubicina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Demeclociclina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Desacetil Diltiazem USP (C20H24N2O3S HCl 408,95). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Difenoxilato USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Diltiazem USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Dipivefrina USP. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
&
&1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Dobutamina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Dopamina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Dorzolamida USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Doxapram USP.

&
&
&1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Deshidrocarteolol USP [clorhidrato de 5-(3terc-butilamino-2-hidroxi)-propoxicarbostirilo] (C16H22N2O3 HCl 326,82). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Desipramina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Dibuca na USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Diciclomina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Diclonina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Dietilpropio n USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Difenhidramina USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Doxepina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Doxorrubicina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Emetina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de 4-Epianhidrotetraciclina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Espectinomicina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Etambutol USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Eucatropina USP.

& &1S
(USP30)
3861
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Fenazopiridina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Fenilefrina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Fenilpropanolamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Fenmetrazina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Fenoxibenzamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Fentermina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Fexofenadina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Flufenazina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Fluoxetina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Flurazepam USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Gemcitabina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Glucosamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Guanfacina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Hidralazina USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Hidromorfona USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Hidroxizina USP. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
&
&1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Idarrubicina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Imipramina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Isoetarina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Isoproterenol USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Isoxsuprina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Ketamina USP. Cambio en la redaccio n:
& &1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Labetalol USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Levamisol USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Levobunolol USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de L-Lisina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Lincomicina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Loperamida USP.
&
&1S
(USP30)
3862
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Maprotilina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Mecamilamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Meclizina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Mecloretamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Melfala n USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Meperidina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Mepivaca na USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Metaciclina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Metadona USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Metanfetamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Metformina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Metildopa USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Metilfenidato USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Metoclopramida USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Metodilazina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Mexiletina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Minociclina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Mitoxantrona USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Molindona USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Moricizina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Nafazolina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Naftina USP. Cambio en la redaccio n:
& &1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Nalorna USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Naratripta n USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Noroximorfona USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Nortriptilina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Ondansetro n USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Oximetazolina USP.
&
&1S
(USP30)
3863
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Oxprenolol USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Palmitato de Clindamicina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Papaverina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Paroxetina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Pilocarpina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Piridoxina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Pramoxina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Prazosina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Priloca na USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Proca na USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Procainamida USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Procarbazina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Prociclidina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Promazina USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Prometazina USP. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
&
&1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Propafenona USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Proparaca na USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Propoxica na USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Propoxifeno USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Propranolol USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Protriptilina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Pseudoefedrina USP. Cambio en la redaccio n:
& &1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Quinapril USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Ranitidina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Ritodrina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Selegilina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Sotalol USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Tacrina USP.
&
&1S
(USP30)
3864
Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Terazosina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Tetraca na USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Tetraciclina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Tetrahidrozolina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Tiagabina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Tiamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Tiletamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Tioridazina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Tocainida USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Tolazolina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Trazodona USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Trientina USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorhidrato de Triuoperazina USP.
& & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Clorhidrato de Triupromazina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Trihexifenidilo USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Trimetobenzamida USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Tripelenamina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Triprolidina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Vancomicina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Verapamilo USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Xilazina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Xilometazolina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Yohimbina USP. Cambio en la redaccio n:
& &1S
(USP30)
(USP30)
ER Clorhidrato de Zolazepam USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER 2-Cloro-3,5-dimetilfenol USP
& &1S
(C8H9ClO
156,61).
(USP30)
&1S
(USP30)
ER Clorobutanol USP.
&
&1S
(USP30)
3865
Cambio en la redaccio n: ER b-Clorogenina USP.

& &1S
(USP30)
ER Cloruro de Edrofonio USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clorotiazida USP.

& &1S
(USP30)
ER Cloruro de Oxibutinina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Cloroxilenol USP.

& &1S
(USP30)
ER Cloruro de Pralidoxima USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clorpropamida USP.

& &1S
(USP30)
ER Cloruro de Succinilcolina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER (E)-Clorprotixeno USP. Cambio en la redaccio n: ER Clorsulo n USP.

& &1S & &1S
(USP30)
ER Cloruro de Succinilmonocolina USP. Cambio en la redaccio n: ER Cloruro de Tubocurarina USP. Cambio en la redaccio n:
& &1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Clortalidona USP.

& &1S
(USP30)
ER Clorzoxazona USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Cloruro de Acetilcolina USP. Cambio en la redaccio n: ER Cloruro de Amonio USP. Cambio en la redaccio n: ER Cloruro de Benzalconio USP. Cambio en la redaccio n: ER Cloruro de Betanecol USP. Cambio en la redaccio n: ER Cloruro de Cetilpiridinio USP. Cambio en la redaccio n: ER Cloruro de Colina USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Clotrimazol USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Cloxacilina Benzatina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Cloxacilina So dica USP. Cambio en la redaccio n:
& &1S
(USP30)
(USP30)
ER Clozapina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Colchicina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Colecalciferol USP.
&
&1S
(USP30)
3866
Cambio en la redaccio n: ER -Colestadienol USP [colesta-4,6-dien-3b-ol] (C27H44O 384,64). &&1S (USP30)

4,6
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Aspartamo USP [a cido 5bencil-3,6-dioxo-2-piperazin ace tico] (C13H14N2O4 262,27).
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Colistimetato So dico USP. Agregar lo siguiente: ER Compuesto Relacionado A de Acetato de Gonadorelina USP [ a cido libre de g ona dore lina ] (C 5 5 H 7 4 N 1 6 O 1 4 1183,3).&1S (USP30)
& &
&1S
(USP30)
ER Compuesto Relacionado A de Atovacuona USP [cis-2[4-(4clorofenil)ciclohexil]-3-hidroxi-1,4-naftoquinona]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Baclofeno USP clorofenil)-2-pirrolidinona] (C10H10ClNO 195,65). &&1S Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Benazepril USP [a cido (3R) 3[[(1R) 1-(etioxicarbonil)-3-fenilpropil]amino]-2,3,4,5-tetrahidro-2oxo-1H-1-benzazepin-1-ace tico, monoclorhidrato] (C24H28N2O5 HCl 460,95). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Benzotiadiazina USP [4amino-6-cloro-1,3-bencenodisulfonamida ] (C6H8ClN3 O4S2 285,73). &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
&
[4-(4(USP30)
&
ER Compuesto Relacionado A de Acetato de Anecortava USP.&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Acetato de Medroxiprogesterona USP [acetato de 4,5bdihidromedroxiprogesterona] (C24H36O4 388,54). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Acetato de Melengestrol USP [ 17-acetato de 16-metilen-17 a -hidroxi-4-pregnen-3,20-diona ] .
& &1S
(USP30)
ER Compuesto Relacionado A de Bisoctrizol USP.&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido Diatrizoico USP [a ER Compuesto Relacionado A de A cido 5-acetamido-3-amino-2,4,6-triyodobenzoico ] (C 9 H 7 I 3 N 2 O 3 571,88). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: cido Fo ER Compuesto Relacionado A de A lico USP [formiltetrahidrofolato de calcio]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: cido Valproico USP [a ER Compuesto Relacionado A de A cido 140,18). &&1S (USP30) dialilace tico] (C8H12O2 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Alopurinol USP [hemisulfato 350,32). de 3-amino-4-carboxamidopirazol] (C4H6N4O)2 H2SO4
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Bitartrato de Hidrocodona USP. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Brinzolamida USP [iso mero (S) de brinzolamida] (C12H21N3O5S3 383,52). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Bromuro de Clidinio USP [bromuro de 3-hidroxi-1-metilquinuclidinio] (C8 H16 BrNO 222,13). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Bromuro de Propantelina USP [bromuro de 9-hidroxipropantelina] (C23H30BrNO4 464,39).
& &1S
(USP30)
(USP30)
3867
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Bumetanida USP [a cido 3amino-4-fenoxi-5-sulfamoilbenzoico] (C13H12N2O5S 308,31).
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Clorhidrato de Bupropio n USP [clorhidrato de 2-(terc-butilamino)-4-cloropropiofenona] & 276,21). &1S (USP30) (C13H18ClNO HCl Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Clorhidrato de Dorzolamida USP [(4R,6R)-4-(etilamino)-5,6-dihidro-6-metil-4H-tieno[2,3b ]tiopiran-2-sulfonamida-7,7-dio xido, monoclorhidrato ] (C10H16N2O4S3 HCl 360,91). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Cloroxilenol USP [2-cloro-3,5dimetilfenol]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Clortalidona USP [a cido 4cloro-3-sulfamoil-2-benzofenona carbox lico]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Clorzoxazona USP [2-amino4-clorofenol] (C6H6ClNO 143,57). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Clotrimazol USP [(oclorofenil)difenilmetanol] (C19H15ClO 294,78). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Dacarbazina USP [clorhidrato de 5-aminoimidazol-4-carboxamida]. &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
&
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Buprenorna USP [21-[3-(1propenil)]-7a-[(S)-1-hidroxi-1,2,2-trimetilpropil]-6,14-endo-etano6,7,8,14-tetrahidrooripavina] (C29H41NO4 467,65). &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
& ER Compuesto Relacionado A de Calcitonina Salmo n USP [Nacetil-cis1-calcitonina] (C146H243N44O49S2 3463).&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Carbidopa USP [3-Ometilcarbidopa] (C11H16N2O4 240,26). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Ciclopirox USP ciclohexil-4,5-dihidro-5-metil-5-isoxazolil ace tico]. &&1S Agregar lo siguiente:
&
[a cido-3(USP30)
ER Compuesto Relacionado A de Citalopram USP [1-(3dimetilaminopropil)-1-(4-uorofenil)-1,3-dihidroisobenzofurano-5carboxamida] (C20H23FN2O2 342,22).&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Claritromicina USP [6,11-di762,00). &&1S (USP30) O-metileritromicina A] (C39H71NO13 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Clomifeno USP [clorhidrato de ( E , Z )-2-[4-(1,2-difeniletenil)fenoxi]- N , N -dietiletanamina ] (C26H29NO HCl 407,98). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Clonazepam USP [3-amino-4(2-clorofenil)-6-nitrocarbostirilo] (C15H10ClN3O3 315,72).
& &1S
ER Compuesto Relacionado A de Dantroleno USP nitrofenil)furaldeh do azina] (C22H14N4O6).&1S (USP30)
[5-(4-
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Desurano USP [bis-(1,2,2,2218,05). &&1S (USP30) tetrauoroetil)e ter] (C4H2F8O Agregar lo siguiente:
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Clordiazepo xido USP [4-o xido de 7-cloro-1,3-dihidro-5-fenil-2 H -1,4-benzodiazepin-2-ona ] & (C15H11ClN2O2 286,72). &1S (USP30)
ER Compuesto Relacionado A de Desogestrel USP [13-etil-11metileno-18, 19-dinor-5a, 17a-pregn-3-en-20-in-17-ol, 3-iso mero de desogestrel] (C22H30O 310,48).&1S (USP30)
&
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Diazepam USP [2-metilamino5-clorobenzofenona] (C14H12ClNO 245,71). &&1S (USP30)
3868
& ER Compuesto Relacionado A de Didanosina USP [hipoxantina].&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Fenoldopam USP [6-cloro2,3,4,5-tetrahidro-1-(4-hidroxifenil)-metanosulfonato de 1-metil-3415,89). benzazepin-7,8-diol (sal)] (C17H18ClNO3 CH4SO3
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Diclofenaco USP [N-(2,6diclorofenil)indolin-2-ona] (C14H9Cl2NO 278,14). &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
&
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Fexofenadina USP [a cido 4-[1oxi-4-[4-(hidroxidifenilmetil)-1-piperidinil]butil]- a , a -dimetil & 499,65). &1S (USP30) bencenoace tico,] (C32H37NO4 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Fludesoxiglucosa USP [ 4,7,13,16,21,24-hexaoxa-1,10-diazabiciclo[8.8.8.]hexacosano ] 376,49). &&1S (USP30) (C18H36N2O6 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Fluoxetina USP [clorhidrato de N -metil-3-fenil-3-[( a , a , a -(triuoro- m -tolil)oxi]propilamina ] 345,79). &&1S (USP30) (C17H18F3NO HCl Cambio en la redaccio n:
ER Compuesto Relacionado A de Doxepina USP.&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Etidronato Diso dico USP [fosto diba sico de sodio pentahidrato] (Na2HPO3 5H2O 216,04 CAS-13708-85-5). &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
&
ER Compuesto Relacionado A de Etinil Estradiol USP [6-cetoetinil estradiol] (C20H23O3 311,39).&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Etodolaco USP [a cido (+)-8etil-1-metil-1,3,4,9-tetrahidropirano [3,4- b ]-indol-1-ace tico ] 273,33). &&1S (USP30) (C16H19NO3 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Etopabato USP [metil-4209,20). &&1S (USP30) acetamido-2-hidroxibenzoato] (C10H11NO4 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Felodipino USP [metil 4-(2,3diclorofenil)-2,6-dimetilpiridin-3,5-dicarboxilato de etilo ] (C18H17Cl2NO4 382,24). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Fenbendazol USP [metil (1Hbencimidazol-2-il)carbamato] (C9H9N3O2 191,19). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Feniltoloxamina USP [clorhidrato de 2-(2-benzilfenoxi)etilmetilamina] (C16H19NO HCl 277,79). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Fenito na USP [difenilglicina] (C14H15NO2 227,26). &&1S (USP30)
ER Compuesto Relacionado A de Flurbiprofeno USP [a cido 2-(4226,28). &&1S (USP30) bifenilil)propio nico] (C15H14O2 Agregar lo siguiente:
&
ER Compuesto Relacionado A de Fosinopril USP.&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Furosemida USP [a cido 2cloro-4-N-furfurilamino-5-sulfamoilbenzoico] (C12H11ClN2O5S & 330,74). &1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Gabapentina USP [2-azaespiro[4.5]decan-3-ona] (C9H15NO 153,22). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Gadodiamida USP [monometilamida del a cido dietilentriamina pentaace tico de sodio 582,60). &&1S (USP30) y gadolinio] (C15H22GdN4NaO9 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Gadoversetamida USP [ hidro geno [8,11,14-tris(carboximetil)-6-oxo-2-oxa-5,8,11,14tetraazahexadecan-16-oato(4-)]gadolinio]. &&1S (USP30)
3869
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Ganciclovir USP [(RS)-2amino-9-(2,3-dihidroxi-propoximetil)-1,9-dihidro-purin-6-ona ] .

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Ioxila n USP [a cido 5-amino2,4,6-triyodo-3 N-(2-hidroxietil)carbamo l benzoico] (C10H9I3N2O4 & 601,90). &1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Isradipino USP [4-(4benzofurazanil)-2,6-dimetil-3,5-piridinodicarboxilato de isopropilo 369,38). &&1S (USP30) y metilo] (C19H19N3O5 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Ketamina USP [1-[(2clorofenil)(metilimino)metil]ciclopentanol ] (C 13 H 16 NOCl 237,73). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Lansoprazol USP [2-[[[3metil-4-(2,2,2-triuoroetoxi)-2-piridil]metil]sulfonil]bezimidazol] 385,36). &&1S (USP30) (C16H14F3N3O3S Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Letrozol USP [4,4-(1H-1,3,4285,31). &&1S (USP30) triazol-1-ilmetilen)dibenzonitrilo] (C17H11N5 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Levocarnitina USP [cloruro de 3-carboxi- N,N ,N-trimetil-2-propen-1-aminio] (C7 H 14 ClNO 2 179,65). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Levodopa USP [3-(3,4,6trihidroxifenil)alanina] (C9H11NO5 213,19). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Gembrozilo USP [a cido 2,2dimetil-5-[2,5-dimetil-4-propen-1-il)fenoxi]vale rico] (C18H26O3 & 290,40). &1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Glipizida USP [N-{2-[(4aminosulfonil)fenil]etil}-5-metil-pirazincarboxamida] (C14H16N4O3S 320,37). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Haloperidol USP [4,4-bis[4-pclorofenil)-4-hidroxipiperidin]butirofenona] (C32H36Cl2N2O3 567,56). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Hidroxizina USP [p clorobencidrilpiperazina]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Inamrinona USP [5carboxamido[3,4-bipiridin]-6(1H)-ona] (C11H9N3O2 215,21).
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Iohexol USP [5-(acetilamino)N,N-bis(2,3-dihidroxipropil)-2,4,6-triyodo-1,3bencenodicarboxamida]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Iopamidol USP [N,N-bis-(1,3dihidroxi-2-propil)-5-amino-2,4,6-triyodoisoftalamida] (C14H18I3N3O6 705,03). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Iopromida USP. Cambio en la redaccio n:
& &1S
ER Compuesto Relacionado A de Loratadina USP [8-cloro-6,11dihidro-11(4-piperidiliden)-5H-benzo[5,6]ciclohepta[1,2-b] piridina] (C19H19ClN2 310,83). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Lorazepam USP [7-cloro-5-(oclorofenil)-1,3-dihidro-3-acetoxi-2 H -1,4-benzodiazepin-2-ona ] (C17H12Cl2N2O3 363,20). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
(USP30)
ER Compuesto Relacionado A de Ioversol USP.
&
&1S
(USP30)
ER Compuesto Relacionado A de Lovastatina USP [[dihidrolovastatina] [e ster 2-metil-, 1,2,3,4,4a,7,8,8a-octahidro-3,7-dimetil8-[2(tetrahidro-4-hidroxi-6-oxo-2H-piran-2-il)-etil]-1-naftalen lico del a cido butanoico [1 S -[1 a ( R *),3a ,7 b,8 b(2 S *,4 S *),-8 ab]]]- ] (C24H38O5 406,56). &&1S (USP30)
3870
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Mafenida [4185,20). &&1S (USP30) formilbencenosulfonamida] (C7H7NO3S Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Mangafodipir USP [ dipiridoxal monofosfato de manganeso(II) sal de sodio ] .
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Naltrexona USP [clorhidrato de N-(3-butenil)-noroximorfona] (C20H23NO4 HCl 377,87).
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Naratripta n USP [clorhidrato de 3-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-indol] (C14H18N2 HCl 250,8).
& &1S
(USP30)
(USP30)
Agregar lo siguiente: ER Compuesto Relacionado A de Meloxicam USP [a cido de 4hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazina-3-carbox lico e ter et lico 1,1dio xido].&1S (USP30)
&
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Nevirapina USP [5,11-dihidro6 H -11-etil-4-metil-dipirido[3,2- b : 2 ,3 - e ][1,4]diazepin-6-ona ] (C14H14N4O 254,29). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Nitrofuranto na USP [N(aminocarbonil)- N- [([5-nitro-2-furanil]metilen)amino]glicina ] .
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Mesilato de Dolasetro n USP [clorhidrato de hexahidro-8-hidroxi-2,6-metano-2H-quinolizin3 (4H)-ona]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Metformina USP [ 1cianoguanidina]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Meticlotiazida USP [4-amino6-cloro-N3-metil-m-bencenodisulfonamida] (C7H10ClN3O4S2 299,76). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Metilfenidato USP [clorhidrato del a cido a-fenil-2-piperidinace tico] (C13H17NO2 HCl 255,75).
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Nitrofurazona USP [5-nitro-2furfuraldazina] (C10H6N4O6 278,18). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Ondansetro n USP [3[(dimetilamino)metil]-1,2,3,9-tetrahidro-9-metil-4H-carbazol-4& ona]. &1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Oxibutinina USP [a cido fenilciclohexilglico lico] (C14H18O3 234,30). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Paclitaxel USP [cefalomanina].
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Metoprolol USP [(+)1etilamino)-3-[4-(2-metoxietil)fenoxi]-propan-2-ol] (C14H23NO3 253,34). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Milrinona USP [1,6-dihidro-2metil-6-oxo-(3,4 -bipiridin)-5-carboxamida ] (C 12 H 11 N 3 O 2 229,23). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Nabumetona USP [1-(6226,27). &&1S (USP30) metoxi-2-naftil)-but-1-en-3-ona] (C15H14O2
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Prazicuantel USP [2-benzoil1,2,3,6,7,11b-hexahidro-4 H-pirazino [2,1- a ]isoquinolin-4-ona ] 306,37). &&1S (USP30) (C19H18N2O2 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Prednicarbato USP dihidroprednicarbato]. &&1S (USP30) [1,2-
3871
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Priloca na USP [clorhidrato de o -toluidina ] (CH 3 C 6 H 4 NH 2 HCl 143,62 CAS-636-21-5).
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Sevourano USP [1,1,1,3,3179,97). pentauoroisopropenil uorometil e ter] (C4H2F6O
& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Probucol USP [2,2,6,6-tetraterc-butildifenoquinona] (C28H40O2 408,63). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Propionato de Clobetasol USP [9a-uoro-11b-hidroxi-16b-metil 3-oxo-androsta-1,4-dien-17(R)espiro-2 -[4 -cloro-5 -etilfuran-3 (2 H )-ona] ] (C 25 H 30 ClFO 4 448,96). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Propofol USP tetraisopropildifenol]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Propoxifeno USP [clorhidrato de a-d-4-dimetilamino-1,2-difenil-3-metil-2-butanol] (C19H25NO HCl 319,87). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Quazepam USP [7-cloro-1(2,2,2-triuoroetil)-5-(2-uorofenil)-1,3-dihidro-2 H -1,4benzodiazepin-2-ona]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Quinapril USP [[3S-[(2R*), 3a, 11ab]]-1,3,4,6,11,11a-hexahidro-3-metil-1,4-dioxo-a-(2-feniletil)2H-pirazino[1,2-b]isoquinolin-2-acetato de etilo] (C25H27N2O4 419,49). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Ramipril USP. [a cido (2S,3aS,6aS)-1-[(S)2-[[(S)1-(metoxicarbonil)-3-fenilpropil]amino]-1oxopropil]-octahidrociclopenta[b]pirrol-2-carbox lico] (C22H30N2O5 402,48). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Ranitidina USP [sal de hemifumarato de 5-[[(2-aminoetil)tio]metil]- N , N -dimetil-2furanmetanamina]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Repaglinida USP [sal N-acetilL -glutamato de (S )-3-metil-1-[2-(1-piperidinil)fenil]butilamina] (C16H26N2 C7H11NO5 435,6). &&1S (USP30) [3,3-5,5-
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Sotalol USP [monoclorhidrato de N [(4-[[(1-metiletil)amino]acetil]fenil]metanosulfonamida ] 306,81). &&1S (USP30) (C12H18N2O3S HCl Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Succinato de Sumatripta n USP [ sal succinato de [3-[2-(dimetilamino)etil]-2-[[3-[2(dimetilamino)etil]-1 H -indol-5-il]metil]-1 H -indol-5-il]- N metilmetansulfonamida] (C27H37N5O2S C4H6 O4 613,77).
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Sulfaquinoxalina USP [N1-N2diquinoxalin-2-ilsulfanilamida ] (C 22 H 16 N 6 SO 2 428,50).

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Terazosina USP [diclorhidrato d e 1 - ( 4 - a m i n o - 6 , 7 - d i m e t o x i - 2 - q u i n a z o l i n i l ) p i pe r a z i n a ] 362,25). &&1S (USP30) (C14H19N5O2 2HCl Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Terbutalina USP [sulfato de 3,5-dihidroxi-o-t-butilaminoacetofenona]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Tiagabina USP [1-[4,4-bis(3metil-2-tienil)-3-butenil]-3-piperidincarboxilato de ( R )-etilo ] 440,0). &&1S (USP30) (C22H29NO2S2 HCl Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Tiamulina USP pleuromutilina]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Tinidazol USP [(2-metil-5nitroimidazol] (C4H5N3O2 127,10). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Tioconazol USP [clorhidrato de 1-[2,4-dicloro-b-[(3-tenil)-oxi]fenetil]imidazol] (C16H14Cl2N2OS HCl 389,73). &&1S (USP30) [tosil
3872
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Tolcapona USP [(4N-metil-3,4228,24). &&1S (USP30) dihidroxibenzofenona] (C14H12O3 Agregar lo siguiente: ER Compuesto Relacionado A de Topiramato USP [2,3 : 4,5bis- O -(1-metiletilideno)- b - D -fructopiranosa ] (C 1 2 H 2 0 O 6 260,28).&1S (USP30)
&
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Zileuto n USP [N-(1-Benzo220,30). &&1S (USP30) [b]tien-2-iletil)urea] (C11H12N2OS Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Acetato de Melengestrol USP [17-acetato de 17a-hidroxi-6,16-dimetilenprogna-4-en-3,20-diona ].
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Torsemida USP [4-[(3metilfenil)amino]-3-piridinsulfonamida] (C12H13N3O2S 263,32).

& &1S
& ER Compuesto Relacionado B de Alopurinol USP [5(formilamino)-1 H -pirazol-4-carboxamida ] (C 5 H 6 N 4 O 2 154,13).&1S (USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Triuridina USP [5-carboxi-2desoxiuridina] (C10H12N2O7 272,22). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Valrubicina USP [Ntriuoroacetil-14-bromodaunorrubicina-13,13-dimetilcetal ] .
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Benazepril USP [a cido (3S) 3[[(1R) 1-(etioxicarbonil)-3-fenilpropil]amino]-2,3,4,5-tetrahidro-2oxo-1H-1-benzazepin-1-ace tico, monoclorhidrato] (C24H28N2O5 HCl 460,95). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Brinzolamida USP [(etanodioato de R-4-amino)-2,3-dihidro-2-(3-metoxipropil)-4Htieno[3,2,-e]-tiazin-6-sulfonamida-1,1-dio xido 1 : 1] (C10H17N3O5S3 C2H2O4 445,49). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Bumetanida USP [a cido 3338,29. nitro-4-fenoxi-5-sulfamoilbenzoico] (C13H10N2O7S
& &1S
(USP30)
~
ER Compuesto Relacionado A de Valsarta n USP [(R-N-valerilN -([2 -(1 H -tetrazol-5-il)bifen-4-il]metil)valina] (C24 H29 N 5 O 3 & 435,52). &1S (USP30)~USP30 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Verapamilo USP [monoclorhidrato de 3,4-dimetoxi-a-[3-(metilamino)propil]-a-(1metiletil)-bencenacetonitrilo] (C17H26N2O2 HCl 326,87).
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Ciclopirox USP [6-ciclohexil4-metil-2-pirona]. &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Verteporna USP [a cido trans( + )-18-etenil-4,4a-dihidro-3,4-bis(metoxicarbonil)-4a,8,14,19tetrametil-23H,25H-benzo[b]porn-9,13-dipropio nico] (C40H40N4O8 704,77). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Vinorelbina USP [4-Odesacetilvinorelbina ] (C 43 H 52 N 4 O 7 2C 4 H 6 O 6 1037,07).
& &1S
ER Compuesto Relacionado B de Citalopram USP [1-(3dimetilaminopropil)-1-(4-uorofenil)-3-hidroxi-1,3dihidroisobenzofurano-5-carbonitrilo ] (C 2 0 H 2 1 FN 2 O 2 340,22).&1S (USP30)

&
(USP30)
ER Compuesto Relacionado B de Clonazepam USP [2-amino-2cloro-5-nitrobenzofenona] (C13H9ClN2O3 276,68). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Clonidina USP [2-[(E)-2,6diclorofenilimino]-1-(1-{2-[(E)-2,6-diclorofenilimino]-imidazolidin~ 1-il}-etil)-imidazolidina] (C 20 H 20 Cl 4 N 6 486,23). ~ USP30
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado A de Warfarina USP [3-(ohidroxifenil)-5-fenil-2-ciclohexen-1-ona] (C18H16O2 264,33).

& &1S
(USP30)
(USP30)
3873
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Clorhidrato de Bupropio n USP [clorhidrato de 2-(terc-butilamino)-3-bromopropiofenona] 320,66). &&1S (USP30) (C13H18BrNO HCl Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Dacarbazina USP 137,10). &&1S (USP30) azahipoxantina] (C4H3N5O Agregar lo siguiente:
&
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Fluconazol USP uorofenil)-1,3-bis(1H-1,2,4-triazol-1-il)-propan-2-ol]. &&1S Cambio en la redaccio n: [2ER Compuesto Relacionado B de Fludesoxiglucosa USP (C6H11ClO5 198,60). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Fluoxetina USP [N-metil-3fenilpropilamina] (C10H15N 149,24). &&1S (USP30) Agregar lo siguiente: [2-(4(USP30)
ER Compuesto Relacionado B de Dantroleno USP [5-(4nitrofenil)-2-furaldeh do-2-carboximetil semicarbazona ] (C14H12N4O6).&1S (USP30)
&
&
ER Compuesto Relacionado B de Fosinopril USP.&1S
(USP30)
ER Compuesto Relacionado B de Desogestrel USP [3-hidroxidesogestrel] (C22H30O2 326,48).&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Furosemida USP [a cido 4cloro-5-sulfamoilantran lico ] (C 7 H 7 ClN 2 O 4 S 250,66).
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Diazepam USP [3-amino-6cloro-1-metil-4-fenilcarbostirilo] (C16H13ClN2O 284,74).

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Gadodiamida USP [a cido dietilentriamina pentaace tico de disodio y gadolinio ] & (C14H18GdN3Na2O10 591,54). &1S (USP30)
(USP30)
&
ER Compuesto Relacionado B de Doxepina USP.&1S
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Fenbendazol USP [metil [5(6)225,63). clorobenzimidazol-2-il]carbamato] (C9H8ClN3O2
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Inamrinona USP [N-(1,6dihidro-6-oxo-(3,4 -bipiridin)-5-il)-2-hidroxipropanamida ] (C13H13N3O3 259,3). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Iohexol USP [5-amino-N,Nbis(2,3-dihidroxipropil)-2,4,6-triyodo-1,3-bencenodicarboxamida].
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Fenito na USP [a cido 270,29). &&1S (USP30) difenilhidantoico] (C15H14N2O3 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Fenoldopam USP [2,3,4,5tetrahidro-1-(4-hidroxifenil)-metanosulfonato de 1H-3-benzazepin366,42). &&1S (USP30) 7,8-diol (sal)] (C16H16NO3 CH4SO3 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Fexofenadina USP [clorhidrato del a cido 3-[1-hidroxi-4-[4-(hidroxidifenilmetil)-1-piperidinil]butil]a ,a -dimetil bencenoace tico ] (C 32 H39 NO 4 HCl 538,12).
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Iopamidol USP [ 5glicolamido- N , N -bis[2-hidroxi-1-(hidroximetil)etil]-2,4,6triyodoisoftalamida] (C16H20I3N3O7 747,07). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Iopromida USP [ 5(acetilamino)-N,N-bis(2,3-dihidroxipropil)-2,4,6-triyodo-N-metil1,3-bencenodicarboxamida]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Ioversol USP.
& &1S
(USP30)
(USP30)
3874
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Isourano USP [e ter de 2,2,2150,05). &&1S (USP30) triuoroetildiuorometilo] (C3H3F5O Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Levodopa USP metoxitirosina] (C10H13NO4 211,22). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Loratadina USP [8-cloro-6,11dihidro-11(N-metil-4-piperiniliden)-5H-benzo[5,6]ciclohepta[1,2-b] piridina] (C20H21ClN2 324,88). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Lorazepam USP [2-amino2,5-diclorobenzofenona] (C13H9ClNO 266,13). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Mangafodipir USP [dipiridoxal difosfato mono sobrealquilado de manganeso(II) sal de sodio]. &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
&
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Paclitaxel USP [10-deacetil-7epipaclitaxel]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: [ 3ER Compuesto Relacionado B de Paroxetina USP [clorhidrato de trans-4-fenil-3-[(3,4-metilendioxi)fenoxi]metilpiperidina ] .
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Prazicuantel USP [2(ciclohexilcarbonil)-2,3,6,7-tetrahidro-4 H -pirazino [2,1a]isoquinolin-4-ona] (C19H22N2O2 310,40). &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
& ER Compuesto Relacionado B de Prednicarbato USP [prednisolona-17-etilcarbonato].&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Priloca na USP [(ER)-N-(4220,31). metilfenil)-2-(propilamino)propanamida] (C13H20N2O

& &1S
(USP30)
ER Compuesto Relacionado B de Meloxicam USP [2-amino-5metil-tiazol].&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Probucol USP [4,4474,78). &&1S (USP30) (ditio)bis(2,6-di-terc-butilfenol)] (C28H42O2 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Propofol USP diisopropilbenzoquinona]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Propoxifeno USP [a-d-2acetoxi-4-dimetilamino-1,2-difenil-3-metilbutano] (C21H27NO2 325,45). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Quinapril USP [a cido [3S[2[ R* ( R* )],3 R* ]] ] 2-[2-[(1-carboxi-3-fenilpropil)amino]-1oxopropil]-1,2,3,4-tetrahidro-3-isoquinolincarbox lico. (C23H26N2O5 410,47). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Ramipril USP [a cido (2S,3aS,6aS)-1-[(S)2-[[(S)1-(metiletoxi)carbonil-3fenilpropil]amino]-1-oxopropil]-octahidrociclopenta[ b ]pirrol-2carbox lico] (C24H34N2O5 430,54). &&1S (USP30) [2,6-
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Metoprolol USP [(+)1-cloro2-hidroxi-3-[4-(2-metoxietil)fenoxi]-propano ] (C12 H 17 ClO 3 244,71). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Naratripta n USP [metilamida oxalato del a cido 2-[3-(1-metil-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-il)-1H423,5). indol-5-il]etanosulfo nico] (C17H23N3O2S C2H2O4
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Nevirapina USP [5,11-dihidro4-metil-6 H -dipirido[3,2- b : 2 ,3 - e ][1,4]diazepin-6-ona ] 226,23). &&1S (USP30) (C12H10N4O Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Oxibutinina USP [e ster met lico del a cido fenilciclohexilglico lico, o CHMME (e ster met lico del a cido ciclohexil mande lico)]. &&1S (USP30)
3875
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Ranitidina USP [N,N-bis[2[[[5-[(dimetilamino)metil]-2-furanil]metil]tio]etil]-2-nitro-1,1etendiamina]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Verapamilo USP [monoclorhidrato de a-[2-[[2-(3,4-dimetoxifenil)etil]metilamino]etil]-3,4-dimetoxi-a-(1-metiletil)-bencenacetonitrilo] (C26H36N2O4 HCl 477,05). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
ER Compuesto Relacionado B de Repaglinida USP [a cido 3252,27). &&1S (USP30) etoxi-4-etoxicarbonilfenilace tico] (C13H16O5 Cambio en la redaccio n:
ER Compuesto Relacionado B de Zidovudina USP [3-cloro-3260,68). &&1S (USP30) desoxitimidina] (C10H13ClN2O4 Cambio en la redaccio n:
ER Compuesto Relacionado B de Sevourano USP [1,1,1,3,3,3hexauoro-2-metoxi-propano]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
ER Compuesto Relacionado B de Zileuto n USP [2-(benzo[b]tien294,40). &&1S (USP30) 2-oil)benzo[b]tiofeno] (C17H10OS2 Agregar lo siguiente:
ER Compuesto Relacionado B de Sotalol USP [ N -(4formilfenil)metanosulfonamida ] (C 8 H 9 NO 3 S 199,23).

& &1S
(USP30)
& ER Compuesto Relacionado C de Alopurinol USP [N-(4H1,2,4-triazol-4-il)-1 H -pirazol-4-carboxamida ] (C 6 H 6 N 6 O 178,15).&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Terazosina USP [1-(4-hidroxi6,7-dimetoxi-2-quinazolinil)-4-[(tetrahidro-2furanil)carbonil]piperazina] (C19H24N4O5 388,42). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Agregar lo siguiente: ER Compuesto Relacionado B de Tinidazol USP sulfoniletil)-2-metil-4-nitroimidazol] (C8H13N3O4S
& &1S
ER Compuesto Relacionado C de Benazepril USP [a cido 3-(1carboxi-3-fenil-1(S)-propil)amino-2,3,4,5-tetrahidro-2-oxo-1H-1(3S)-benzazepin-1-ace tico] (C22H24N2O5 396,44). &&1S (USP30)
[1-(2-etil247,28).
&
(USP30)
ER Compuesto Relacionado C de Citalopram USP [3-(3-N,Ndimetilamino)-1-(4-uorofenil)-6-ciano-1(3H)-isobenzofuranona] (C20H19FN2O2 338,22).&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Tioconazol USP [clorhidrato de 1-[2,4-dicloro- b -[(2,5-dicloro-3-tenil)oxi]fenetil]imidazol ] (C16H12Cl4N2OS HCl 458,62). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Tolcapona USP [4-hidroxi-3metoxi-4-metil-5-nitrobenzofenona] (C15H13NO5 287,27).
& &1S
ER Compuesto Relacionado C de Clonazepam USP [2-bromo-2(2-clorobenzoil)-4-nitroacetanilida]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Clorhidrato de Bupropio n USP [1-(3-clorofenil)-2-hidroxi-1-propanona ] (C9H9 O2Cl 184,62). &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
&
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Torsemida USP [N-[(nbutilamino)carbonil]-4-[(3-metilfenil)amino]-3-piridinsulfonamida] (C17H22N4O3S 362,45). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
~
ER Compuesto Relacionado C de Dantroleno USP nitrofenil)-1-furancarboxialdeh do] (C11H7NO4).&1S (USP30)
[5-(4-
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado B de Valsarta n USP [(S-N-butirilN-([2-(1H-tetrazol-5-il)bifen-4-il]metil)-valina] (C23H27 N5O3 421,49). &&1S (USP30)~USP30 ER Compuesto Relacionado C de Desogestrel USP [3-ceto324,46). &&1S (USP30) desogestrel] (C22H28O2 Agregar lo siguiente:
&
ER Compuesto Relacionado C de Doxepina USP.&1S
(USP30)
3876
& ER Compuesto Relacionado C de Flumazenil USP dimetilformamida dietil acetal].&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: [N,NER Compuesto Relacionado C de Oxibutinina USP [ana logo metil-et lico de cloruro de oxibutinina, o (clorhidrato de 4(etilmetilamino) but-2-inil ( + ) 2-ciclohexil-2-hidroxi-2fenilacetato)]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Paroxetina USP [clorhidrato de (+)-trans-paroxetina]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Fluoxetina USP [a cido Nmetil-N-[3-fenil-3-(4-triuorometil-fenoxi)-propil] succina mico] (C21H22F3NO4 409,40). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Flurazepam USP [clorhidrato de 5-cloro-2-(2-dietilaminoetil(amino)-2 -uorobenzofenona ] (C19H22ClFN2O HCl 385,31). &&1S (USP30) Agregar lo siguiente: Agregar lo siguiente:
&
ER Compuesto Relacionado C de Prazicuantel USP [2-(Nformilhexahidrohipuroil-1,2,3,4-tetrahidroisoquinolin-1-ona ] 342,39). &&1S (USP30) (C19H22N2O4
ER Compuesto Relacionado C de Fosinopril USP.&1S
(USP30)
& ER Compuesto Relacionado C de Prednicarbato USP [prednisolona-21-propionato].&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Inamrinona USP [1,6-dihidro6-oxo-(3,4-bipiridin)-5-carbonitrilo] (C11H7N3O 197,20).

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Probucol USP [4-[(3,5-di-tercbutil-2-hidroxifeniltio)isopropilidentio]-2,6-di- terc -butilfenol ] (C31H48O2S2 516,86). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Propofol USP [e ter de 2,6diisopropilfenilisopropilo] (C14H22O 206,32). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Ramipril USP [a cido (2S,3aS,6aS)-1-[(S)2-[[(S)1-etoxicarbonil-3-ciclohexilpropil]amino]1-oxopropil]-octahidrociclopenta[ b ]pirrol-2-carbox lico ] (C23H38N2O5 422,56). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Ranitidina USP [N-[2-[[[5[(dimetilamino)metil]-2-furanil]metil]sulnil]etil]-N-metil-2-nitro1,1-etendiamina]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Repaglinida USP [a cido (S)-2etoxi-4-[2-[[2-fenil-1-[2-(1-piperidinil)fenil]etil]amino]-2& oxoetil]benzoico] (C30H34N2O4 486,61). &1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Sevourano USP [1,1,1,3,3,3hexauoro-2-propanol]. &&1S (USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Iohexol USP [N,N-bis(2,3dihidroxipropil)-5-nitro-1,3-bencenodicarboxamida]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Lorazepam USP [6-cloro-4-(o303,15). clorofenil)-2-quinazolincarboxaldeh do] (C15H8Cl2N2O
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Mangafodipir USP [dipiridoxal difosfato de manganeso(II)sal de sodio]. &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
&
ER Compuesto Relacionado C de Meloxicam USP [isopropil-4hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazina-3-carboxilato-1,1dio xido].&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Metoprolol USP [(+)4-[2hidroxi-3-(1-metiletil)aminopropoxi]benzaldeh do] (C13H19NO3 237,29). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Ondansetro n USP [1,2,3,9tetrahidro-9-metil-4H-carbazol-4-ona]. &&1S (USP30)
3877
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Sotalol USP [monoclorhidrato de N -[4-[2-[(1-metiletil)amino]etil]fenil]metanosulfonamida ] 292,83). &&1S (USP30) (C12H20N2O2S HCl Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Terazosina USP [diclorhidrato de 1,4-bis(4-amino-6,7-dimetoxi-2-quinazolinil)piperazina ] 565,45). &&1S (USP30) (C24H28N8O4 2HCl Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Tioconazol USP [clorhidrato de 1-[2,4-dicloro-b-[(5-bromo-2-cloro-3-tenil)-oxi]-fenetil]imidazol] 468,63). &&1S (USP30) (C16H13BrCl2N2OS HCl Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Torsemida USP [N[(etilamino)carbonil]-4-[(3-metilfenil)amino]-3-piridinsulfonamida] 334,39). &&1S (USP30) (C15H18N4O3S Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Valsarta n USP [e ster benc lico (S -N-valeril-N-([2 -(1 H-tetrazol-5-il)bifen-4-il]metil)valina] (C31H35N5O3 525,64). &&1S (USP30)~USP30 Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Zidovudina USP (C5H6N2O2 126,12). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado C de Zileuto n USP [1-benzo-[b]tien2-iletanona] (C10H8OS 176,24). &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
& ~
& ER Compuesto Relacionado D de Meloxicam USP [4-metoxi-2metil-N-(5-metil-1,3-tiazol-2il)-2H-1,2-benzotiazina-3-carboxamida1,1-dio xido].&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado D de Metoprolol USP [(+) N,Nbis[2-hidroxi-3-[4-(2-metoxietil)fenoxi]propil](1-metiletil)amina] (C27H41NO6 475,62). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado D de Ondansetro n USP [1,2,3,9tetrahidro-9-metil-3-metilen-4H-carbazol-4-ona]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado D de Ramipril USP [(2S)2[(3S,5aS,8aS, 9aS)-3-metil-1,4-dioxodecahidro-1Hciclopenta[e]pirrolo[1,2-a]pirazin-2-il]-4-fenil-butanoato de etilo] Ramipril Dicetopiperazina (C23H30N2O4 398,50). &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
&
ER Compuesto Relacionado D de Verapamilo USP.&1S
(USP30)
&
[timina]
ER Compuesto Relacionado E de Alopurinol USP (formilamino)-1H-pirazol-4-carboxilato].&1S (USP30)
[etil 5-
&
ER Compuesto Relacionado E de Citalopram USP [1-(3dimetilaminopropil)-1-(4-uorofenil)-1,3-dihidrobenzofurano-5carbonitrilo-N-o xido] (C20H21FN2O2 340,22).&1S (USP30)
&
ER Compuesto Relacionado D de Alopurinol USP [etil 5amino-1H-pirazol-4-carboxilato] (C6H9N3O2 155,15).&1S (USP30)
ER Compuesto Relacionado E de Fosinopril USP.&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Agregar lo siguiente:

&
ER Compuesto Relacionado D de Fosinopril USP.&1S
ER Compuesto Relacionado E de Lorazepam USP [6-cloro-4-(oclorofenil)-2-quinazol n metanol] (C15H10Cl2N2O 305,16).

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado D de Lorazepam USP [a cido 6cloro-4-(o-clorofenil)-2-quinazolincarbox lico] (C15H8Cl2N2O2 & 319,15). &1S (USP30)
&
ER Compuesto Relacionado E de Verapamilo USP dimetoxibenzaldeh do].&1S (USP30)
[3,4-
&
ER Compuesto Relacionado F de Alopurinol USP [etil 3-(2carbetoxi-2-cianoetenil)amino-1H-pirazol-4-carboxilato].&1S (USP30)
3878
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado F de Clorhidrato de Bupropio n 184,62). USP [1-(3-clorofenil)-1-hidroxi-2-propanona] (C9H9O2
& &1S
Cambio en la redaccio n: cido Metacr ER Copol mero de A lico, Tipo B USP. Cambio en la redaccio n:
& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado F de Flurazepam USP [7-cloro-5-(2uorofenil)-1,3-dihidro-2H-1,4-benzodiazepin-2-ona] (C15H10Cl FN2O 288,71). &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
&
cido Metacr ER Copol mero de A lico, Tipo C USP. Agregar lo siguiente:

&
&
&1S
(USP30)
ER Copol mero de Metacrilato de Amino USP.&1S
(USP30)
ER Compuesto Relacionado F de Fosinopril USP.&1S
(USP30)
ER Copol mero de Metacrilato de Amonio, Tipo A USP.

&
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado F de Paroxetina USP [trans()-1metil-3-[1,3-benzodioxol-5-iloxi)metil]-4-(uorofenil)piperidina] (C20H22FNO3 343,39). &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Copol mero de Metacrilato de Amonio, Tipo B USP.

& &1S
(USP30)
ER Compuesto Relacionado F de Verapamilo USP dimetoxifenil)metanol].&1S (USP30)
[(3,4-
Cambio en la redaccio n: ER Copovidona USP.

& &1S
(USP30)
&
(USP30)
ER Compuesto Relacionado G de Fosinopril USP.&1S
ER Corticotropina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado G de Paroxetina USP [clorhidrato de (+)trans-3-[(1,3-benzodioxol-5-iloxi)metil]-4-(4-uorofenil-4405,46). &&1S (USP30) fenil)piperidina] (C25H24FNO3 Agregar lo siguiente:
&
Cambio en la redaccio n: ER Creatinina USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Cromol n So dico USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
ER Compuesto Relacionado H de Fosinopril USP.&1S
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Compuesto Relacionado N de Eritromicina USP desmetileritromicina A] (C36H65NO13 719,91). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Compuestos Relacionados de Clorhexidina USP. Cambio en la redaccio n: ER Condroitina Sulfatada So dica USP. Cambio en la redaccio n: cido Metacr ER Copol mero de A lico, Tipo A USP.
& &1S & &1S & &1S
ER Crospovidona USP. [ N-
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Crotamito n USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Dacarbazina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Dactinomicina USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
3879
Cambio en la redaccio n: ER Danazol USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Dexpantenol USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
&
(USP30)
ER Dantroleno USP.&1S
ER Dextrano 1 USP.
&
&1S
(USP30)
&
(USP30)
ER Dantroleno So dico USP.&1S
ER Dextrano T-10 USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Dantro n USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Dextrometorfano USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Dapsona USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Dextrosa USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Decanoato de Nandrolona USP. Cambio en la redaccio n: ER Desurano USP.

& &1S & &1S
(USP30)
ER Diacetato de Diorasona USP. Cambio en la redaccio n: ER Diacetato de Etinodiol USP. Cambio en la redaccio n:
&
&
&1S
(USP30)
(USP30)
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Deslano sido USP.

& &1S
(USP30)
ER Diacetato de Nitrofurfural USP

& &1S
(C9H9NO7
243,17).
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Desoaminilazitromicina USP. Agregar lo siguiente: Cambio en la redaccio n:
& & &1S
(USP30)
ER Diacetato de Triamcinolona USP.
&
&1S
(USP30)
ER Desogestrel USP.&1S
(USP30)
ER Diacetiluoresce na USP (C24H16O7 Cambio en la redaccio n:
416,39).
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Desoximetasona USP.

& &1S
(USP30)
ER Dia metro de Permeabilidad de Griseofulvina USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Determinacio n de AlcoholAcetonitrilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Determinacio n de AlcoholAlcohol USP. Cambio en la redaccio n: ER Dexametasona USP.
& &1S & &1S & &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Diazepam USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Diazo xido USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
3880
Cambio en la redaccio n: ER Diclofenaco So dico USP. Cambio en la redaccio n: ER Diclorfenamida USP.

& &1S & &1S
(USP30)
ER Diunisal USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Difumarato de Emedastina USP. Cambio en la redaccio n:

& &1S
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Diclorhidrato de Decanoato de Flufenazina USP. Cambio en la redaccio n: ER Diclorhidrato de Enantato de Flufenazina USP 622,63). &&1S (USP30) (C29H38F3N3O2S 2HCl Cambio en la redaccio n:
(USP30)
ER Digital USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Digitoxina USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Digoxina USP. ER Diclorhidrato de Histamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Dihidrocapsaicina USP. ER Dicloxacilina So dica USP. Agregar lo siguiente: ER 17a-Dihidroequilina USP (C18H22O2
& & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)

& &1S
(USP30)
ER Didanosina USP.&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Dihidrotaquisterol USP. ER Didrogesterona USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Dihidroxiacetona USP. ER Dienestrol USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Dimenhidrinato USP. ER Dietanolamina USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Dimetil Sulfo xido USP. ER Dietilestilbestrol USP.
& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Dinitrato de Isosorbida Diluido USP. ER Dietiltoluamida USP.
& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Dinoprost Trometamina USP. ER Dilina USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Dioxibenzona USP.

& &1S
(USP30)
3881
Cambio en la redaccio n: ER Dipiridamol USP.

& &1S
(USP30)
ER Droperidol USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Dipropionato de Alclometasona USP. Cambio en la redaccio n: ER Dipropionato de Beclometasona USP. Cambio en la redaccio n: ER Dipropionato de Betametasona USP. Agregar lo siguiente:
& & &1S & &1S & &1S
(USP30)
&
ER Drospirenona USP.&1S
(USP30)
(USP30)
ER Edetato Ca lcico Diso dico USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Edetato Diso dico USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Enalaprilat USP.

& &1S
ER Dispersio n Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo USP.&1S (USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Enantato de Testosterona USP. ER 2,4-Disulfamil-5-triuorometilanilina USP (C7H8F3N3O4S2 319,29). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Disulram USP.
& &1S & &1S
(USP30)
ER Endotoxina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Disulfuro de Amifostina USP [tetraclorhidrato de N,N-(ditiodi2,1 etandi l)bis 1,3-propandiamina] (C10H30N4S2Cl4 412,32).
& &1S
ER Enurano USP.
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Epilactosa USP.

& &1S
(USP30) (USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Disulfuro de Captopril USP. Cambio en la redaccio n: ER Disulfuro de Penicilamina USP Cambio en la redaccio n: ER Docusato Ca lcico USP. Cambio en la redaccio n: ER Docusato Pota sico USP. Cambio en la redaccio n: ER Docusato So dico USP.
& & & &
&1S
(USP30)
ER Equilina USP.
&
&1S
(USP30)
(C10H20N2O4S2).
&
&1S
(USP30)
ER Ergocalciferol USP.
&
&1S
(USP30)
&1S
(USP30)
ER Ergosterol USP (C28H44O Cambio en la redaccio n:

&1S
396,66).
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Ergotaminina USP.
&
&1S
(USP30)
&1S
(USP30)
ER Eritromicina USP.
&
&1S
(USP30)
3882
Cambio en la redaccio n: ER Eritromicina B USP.

& &1S
(USP30)
ER Estriol USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Eritromicina C USP.

& &1S
(USP30)
ER Estrona USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Escopoletina USP.

& &1S
(USP30)
ER Estropipato USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Escualano USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ter Sevomet ER E lico USP propano]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
&1S
(USP30)
[1,1,1,3,3,3-hexauoro-2-metoxi-
Cambio en la redaccio n: ER Espironolactona USP.

&
(USP30)
ER Etidronato Diso dico USP. Cambio en la redaccio n: ER Estanozolol USP.

&
&
&1S
(USP30)
&1S
(USP30)
ER Etil Vainillina USP. Cambio en la redaccio n: ER Estavudina USP.

&
&
&1S
(USP30)
&1S
(USP30)
ER Etilcelulosa USP. Cambio en la redaccio n: ER Estearato de Eritromicina USP. Cambio en la redaccio n: ER Estearato de Metilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Estearato de Polioxilo 40 USP. Cambio en la redaccio n: ER Estearil Fumarato de Sodio USP. Cambio en la redaccio n: ER Estolato de Eritromicina USP. Cambio en la redaccio n: ER Estradiol USP.
& & & & & & &1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Etilparabeno USP.
&
&1S
(USP30)
&1S
(USP30)
ER Etilsuccinato de Eritromicina USP. Cambio en la redaccio n:

&1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Etinil Estradiol USP.
&
&1S
(USP30)
&1S
(USP30)
ER Etionamida USP.
&
&1S
(USP30)
&1S
(USP30)
ER Etodolaco USP.
&
&1S
(USP30)
&1S
(USP30)
ER Etopabato USP.
&
&1S
(USP30)
3883
Cambio en la redaccio n: ER Etopo sido USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Fenbendazol USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Etosuximida USP.

& &1S
(USP30)
ER L-Fenilalanina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Etoto na USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Fenilbutazona USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Extracto de Pino Mar timo USP. Cambio en la redaccio n: ER Extracto en Polvo de Cardo Mariano USP. Cambio en la redaccio n:
& &1S & &1S
(USP30)
ER 5-Fenilhidanto na USP. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
& &1S
(USP30)
ER Fenilpropanodiol USP [1-fenil-1,2-propanodiol] (C9H12O2 152,19). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
ER Extracto en Polvo de Cimic fuga Racemosa USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
ER Fenito na USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Extracto en Polvo de Eleuterococo USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Extracto en Polvo de Equina cea angustifolia USP. &&1S Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Extracto en Polvo de Equina cea purpu rea USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Extracto en Polvo de Ginseng Asia tico USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Extracto en Polvo de Tre bol Rojo USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Famotidina USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Fenito na So dica USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Fenobarbital USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Fenoprofeno Ca lcico USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Fenoprofeno So dico USP.
& &1S
(USP30)
(USP30)
ER Fenoxietanol USP [2-fenoxietanol].
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Fenpropionato de Nandrolona USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Felodipino USP.

& &1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Fensuximida USP.
&
&1S
(USP30)
3884
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Finasterida USP.

& &1S
ER Fluoruro de Sodio USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Fitonadiona USP.

& &1S
ER Fluoximesterona USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Floxuridina USP.

& &1S
ER Flurandrenolida USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Flucitosina USP.

& &1S
ER Flurbiprofeno USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Fluconazol USP.

& &1S
ER Flurbiprofeno So dico USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Fludesoxiglucosa USP.

& &1S
ER Flutamida USP.
(USP30)
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Flumazenil USP.

& &1S
(USP30)
ER o-Flutamida USP [2-metil-N-[6-nitro-3276,22). (triuorometil)fenil]propanamida] (C11H11F3N2O3

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Flunisolida USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Formononetina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Flunixino Meglum nico USP. Cambio en la redaccio n: ER Fluocino nida USP.
& &1S & &1S
(USP30)
ER Fosfato de Antazolina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Fosfato de Clindamicina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Fluoresce na USP.

& &1S
(USP30)
ER Fosfato de Cloroquina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Fluorometolona USP.

& &1S
(USP30)
ER Fosfato de Code na USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Fluorouracilo USP.

& &1S
(USP30)
ER Fosfato de Dexametasona USP.
&
&1S
(USP30)
3885
Cambio en la redaccio n: ER Fosfato de Disopiramida USP. Cambio en la redaccio n: ER Fosfato de Fludarabina USP. Cambio en la redaccio n: ER Fosfato de Hidrocortisona Trietilamina USP C6H15N 543,64). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Fosfato de Primaquina USP. Cambio en la redaccio n: ER Fosfato So dico de Betametasona USP. Cambio en la redaccio n: ER Fosfenito na So dica USP. Agregar lo siguiente:
& & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Fumarato de Metoprolol USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Fumarato de Tiamulina USP. Cambio en la redaccio n: (C21H31O8P ER Furazolidona USP.

& &1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Furoato de Diloxanida USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Furoato de Mometasona USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Furosemida USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Gabapentina USP.

&1S & &1S
ER Fosinopril So dico USP.
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Fructosa USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Gadodiamida USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Ftalato de Dibutilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Ftalato de Dietilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Ftalato de Hipromelosa USP. Cambio en la redaccio n: ER Fumarato de Bisoprolol USP. Cambio en la redaccio n: ER Fumarato de Clemastina USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
Cambio en la redaccio n: ER Gadoversetamida USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Galactosa USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Galato de Propilo USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Ganciclovir USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Gel de Hidro xido de Aluminio Desecado USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
3886
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Gembrozilo USP.

& &1S
na USP. ER g-Glutamil-(S)-Alil-L-Ciste
(USP30)
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Gitoxina USP (C41H64O14 Cambio en la redaccio n: ER Gliburida USP.
& &1S
ER Glutamina USP. 780,96).

& &1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Gonadotropina Corio nica USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Glicerina USP.
& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
ER Gramicidina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Glicina USP.

& &1S
ER Griseofulvina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Glicopirrolato USP.

& &1S
ER Guaifenesina USP.
(USP30)
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Glipizida USP.

& &1S
ER Guayacol USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Glucago n USP.

& &1S
ER Guayacolsulfonato de Potasio USP. Cambio en la redaccio n:
& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Gluceptato de Calcio USP. Cambio en la redaccio n: ER Gluceptato de Eritromicina USP. Cambio en la redaccio n: ER Gluconato de Potasio USP. Cambio en la redaccio n: ER Gluconato de Quinidina USP. Cambio en la redaccio n: ER N4-Gluco sido de Sulfametoxazol USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
ER Halcino nida USP.

(USP30)
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Haloperidol USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Halotano USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Hemisuccinato de Hidrocortisona USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Hemisuccinato de Metilprednisolona USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Hemisuccinato de Prednisolona USP.

& &1S
(USP30)
3887
Cambio en la redaccio n: ER Heparina So dica USP.

& &1S
(USP30)
ER Hidroxipropil Celulosa USP. Cambio en la redaccio n: ER Hidroxiurea USP.

& &1S
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Hetacilina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Hexaceto nido de Triamcinolona USP. Cambio en la redaccio n: ER Hexaclorofeno USP.
& &1S & &1S
(USP30)
ER Hipromelosa USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Hipurato de Metenamina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Hexilenglicol USP.

& &1S
(USP30)
ER L-Histidina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Hexilresorcinol USP.

& &1S
(USP30)
ER Homopol mero de Polipropileno USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Hialuronidasa USP.

& &1S
(USP30)
ER Homosalato USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Hiclato de Doxiciclina USP. Cambio en la redaccio n: ER Hidrato de Terpina USP. Cambio en la redaccio n: ER Hidroclorotiazida USP. Cambio en la redaccio n: ER Hidrocortisona USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Ibuprofeno USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
(USP30)
ER Identidad de Azitromicina USP [ Una mezcla de azitromicina, 3 -( N-N -dimetil-3 - N -formil-azitromicina, 3 - N demetil-3-N-formilazitromicina (Rota mero 1), 3-N-demetil-3-Nformilazitromicina (Rota mero 2), 3 -de(dimetilamino)-3 oxoazitromicina, 2-desetil-2-propilazitromicina, 3deoxiazitromicina y 3-N-demetil-3-N-[(4metilfenil)sulfonil]azitromicina].&1S (USP30)
&
(USP30)
ER Idoxuridina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Hidroumetiazida USP. Cambio en la redaccio n: ER Hidroquinona USP.

& &1S & &1S
(USP30)
ER Ifosfamida USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Imidazol USP.
&
&1S
(USP30)
3888
Cambio en la redaccio n: ER Imidurea USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Insulina Humana USP. Cambio en la redaccio n: 195,28).

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Iminodibencilo USP (C14H13N Cambio en la redaccio n: ER Imipenem Monohidrato USP. Cambio en la redaccio n: ER Impurezas Relacionadas de Succinato de Sumatripta n USP [Mezcla de succinato de sumatripta n, sal de maleato de [3-[2(metilamino)etil)]-1 H -indol-5-il]- N -metilmetansulfonamida, compuesto relacionado C de succinato de sumatripta n, [3-[2(dimetilamino-N-o xido)etil]-1H-indol-5-il]-Nmetilmetansulfonamida y [3-[2-(aminoetil)-1 H -indol-5-il]- N metilmetansulfonamida]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Inamrinona USP.
& &1S & &1S
(USP30)
ER Insulina (Porcina) USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Iodipamida USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Iodixanol USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Iodoquinol USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Iohexol USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Indapamida USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Iopamidol USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Indigotindisulfonato So dico USP. Cambio en la redaccio n: ER Indinavir USP.

& &1S & &1S
Cambio en la redaccio n: ER Iopodato de Sodio USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Iopromida USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Indinavir Aptitud del Sistema USP. Cambio en la redaccio n: ER Indometacina USP.
& &1S & &1S
Cambio en la redaccio n: ER Ioxila n USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Irbesarta n USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Insulina USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: cido 2 E ,4 E -Hexadienoico USP. ER Isobutilamida del A

&
(USP30)
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Insulina (Bovina) USP.

& &1S
(USP30)
ER Isourano USP.
&
&1S
(USP30)
3889
Cambio en la redaccio n: ER L-Isoleucina USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Isradipino USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Isomalatio n USP (C10H19O6PS2 330,37).

& &1S
(USP30)
ER Ivermectina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Iso mero Delta-3 de Cefaclor USP. Cambio en la redaccio n: ER Iso mero Delta-3 de Ceftazidima USP. Cambio en la redaccio n: ER Iso meros Delta-3 de Cefuroxima Axetilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Iso mero E de Aztreonam USP. Cambio en la redaccio n: ER Iso mero (E) de Cefprozilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Iso mero E de Ceftriaxona So dica USP. Cambio en la redaccio n: ER Iso mero
L
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Jengibre en Polvo USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Ketoconazol USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Ketoprofeno USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Ketorolaco Trometamina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Lactasa USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Lactato de Sodio USP.
& &1S
(USP30)
& &1S
de Loracarbef USP.
(USP30)
ER Lactobionato de Calcio USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Iso mero (Z) de Cefprozilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Iso mero Z de Clorhidrato de Triprolidina USP. Cambio en la redaccio n: ER Isoniazida USP.
& &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Lactobionato de Eritromicina USP. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
&
&1S
(USP30)
ER Lactosa Anhidra USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Lactosa Monohidrato USP. Cambio en la redaccio n: ER Lactulosa USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Isosorbida USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Isotretino na USP.

& &1S
(USP30)
ER Lamivudina USP.
&
&1S
(USP30)
3890
Cambio en la redaccio n: ER Lanolina USP.

& &1S
& ER Linestrenol USP [(17a)-19-Norpregn-4-en-20-in-17-ol] (C20H28O 284,42).&1S (USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Lansoprazol USP (C16H14F3N3O2S Cambio en la redaccio n: ER Laurato de Metilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Letrozol USP.
& &1S & &1S

& &1S
(USP30)
ER Linoleato de Metilo USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Linolenato de Metilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Liotironina USP.

& &1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER L-Leucina USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Lipasa de Pancreatina USP. Cambio en la redaccio n:

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Leucovorina Ca lcica USP. Cambio en la redaccio n: ER Levmetanfetamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Levocarnitina USP.
& &1S & &1S
(USP30)
ER Lisinopril USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Loracarbef USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Loratadina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Levodopa USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Lorazepam USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Levonordefrina USP.

& &1S
(USP30)
ER Lovastatina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Levotiroxina USP.

& &1S
(USP30)
ER Lute na USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Lidoca na USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Magaldrato USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Lindano USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Malatio n USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
3891
Cambio en la redaccio n: ER Maleato de Acepromazina USP. Cambio en la redaccio n: ER Maleato de Azatadina USP. Cambio en la redaccio n: ER Maleato de Bis(2-etilhexilo) USP
& &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Maleato de Metisergida USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Maleato de Monoestearilo USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(C20H36O4
340,51).
ER Maleato de Pirilamina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Maleato de Proclorperazina USP. ER Maleato de Bromfeniramina USP. Cambio en la redaccio n: ER Maleato de Tietilperazina USP. ER Maleato de Carbinoxamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Maleato de Timolol USP. ER Maleato de Clorfeniramina USP. Cambio en la redaccio n: ER Maltitol USP. ER Maleato de Dexbromfeniramina USP. Cambio en la redaccio n: ER Maltosa USP. ER Maleato de Dexclorfeniramina USP. Cambio en la redaccio n: ER Maltosa Monohidrato USP. ER Maleato de Enalapril USP. Cambio en la redaccio n: ER Mandelato de Metenamina USP. ER Maleato de Ergonovina USP. Cambio en la redaccio n: ER Maleato de Feniramina USP. Cambio en la redaccio n: ER Maleato de Fluvoxamina USP.. Cambio en la redaccio n: ER Maleato de Metilergonovina USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Mangafodipir Triso dico USP manganeso(II)]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
(USP30)
[dipiridoxal difosfato de
(USP30)
ER Manitol USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Mazindol USP.
&
&1S
(USP30)
3892
Cambio en la redaccio n: ER Mebendazol USP.

& &1S
(USP30)
ER Mesilato de Deferoxamina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Mebrofenina USP.

& &1S
(USP30)
ER Mesilato de Dihidroergotamina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Meclofenamato So dico USP. Cambio en la redaccio n: ER Mefobarbital USP.

& &1S & &1S
(USP30)
ER Mesilato de Dolasetro n USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Mesilato de Fenoldopam USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
&
ER Meloxicam USP.&1S
(USP30)
ER Mesilato de Fentolamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Mesilato de Pergolida USP. Cambio en la redaccio n: ER Mesilatos de Ergoloides USP. Cambio en la redaccio n:
&
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Menadiona USP.

& &1S
(USP30)
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Mentol USP.

& &1S
(USP30)
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Meprednisona USP.

& &1S
(USP30)
ER Mestranol USP.
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Meprobamato USP.

& &1S
(USP30)
ER Metazolamida USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Mercaptopurina USP.

& &1S
(USP30)
ER Metenamina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Meropenem USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Meticilina So dica USP. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Mesalamina USP.

& &1S
ER Meticlotiazida USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Mesilato de Benzatropina USP. Cambio en la redaccio n: ER Mesilato de Bromocriptina USP.
& &1S & &1S
(USP30)
ER 5-Metil-3-Isoxazolcarboxilato de Metilo USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
3893
Cambio en la redaccio n: ER Metilbromuro de Homatropina USP. Cambio en la redaccio n: ER Metildopa USP.

& &1S & &1S
(USP30)
ER Metohexital USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Metolazona USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER 3-O-Metilmetildopa USP (C11H15NO4 Cambio en la redaccio n: ER Metilparabeno USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: 225,25). &&1S

(USP30)
ER Metotrexato USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Metotrimeprazina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Metilprednisolona USP. Cambio en la redaccio n: ER Metilsulfato de Neostigmina USP. Agregar lo siguiente: ER Metilsulfonilmetano USP 94,13).&1S (USP30)
& & &1S & &1S
(USP30)
ER Metoxaleno USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Metoxiurano USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: [dimetil sulfona] (C2H6O2S ER Metrifonato USP [triclorfo n]. Cambio en la redaccio n:
& &1S & &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Metiltestosterona USP. Cambio en la redaccio n: ER Metimazol USP.

& &1S
ER Metronidazol USP.
(USP30)
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Metsuximida USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER L-Metionina USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Mezcla de Aptitud del Sistema de Estavudina USPEs una mezcla de estavudina y los siguientes compuestos relacionados: timidina, timina, alfa-estavudina y xilo-timidina. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Metirapona USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Metirosina USP.

& &1S
ER Mezcla de Aptitud del Sistema de Mitoxantrona USP [clorhidrato de 8-amino-1,4-dihidroxi-5[[2-[(2hidroxietil)amino]etil]amino]-9,10-antracendiona] (C18H19N3O5 HCl 393,83). &&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Metocarbamol USP.

& &1S
&
(USP30)
ER Mezcla de Aptitud del Sistema de Risperidona USP Contiene risperidona y aproximadamente 0,2% de cada uno de los siguientes: Z-oxima-3-[2-[4-[(Z)-(2,4-diuorofenil)(hidroxiimino)metil]piperidina-1-il]etil]-2-metil-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2-a]pirimidin4-ona;
3894
9-hidroxirisperidona-(6RS)-3-[2-[4-(6-uoro-1,2-benzisoxazol-3il)piperidina-1-il]etil]-2,6-dimetil-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2a]pirimidin-4-ona; 6-metilrisperidona-(6RS)-3-[2-[4-(6-uoro-1,2-benzisoxazol-3il)piperidina-1-il]etil]-2,6-dimetil-6,7,8,9-tetrahidro-4H-pirido[1,2a]pirimidin-4-ona.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Mezcla de Compuesto Relacionado E de Paroxetina USP [clorhidrato de paroxetina al que se le ha agregado una cantidad conocida de 1-metil-4-(p-uorofenil)-1,2,3,6-tetrahidropiridina].
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Miconazol USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Milrinona USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Minoxidil USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Mezcla de Resolucio n A de Lamivudina USP. Cambio en la redaccio n: ER Mezcla de Resolucio n B de Lamivudina USP. Agregar lo siguiente:
& & &1S & &1S
(USP30)
ER Miristato de Isopropilo USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Miristato de Metilo USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
ER Mezcla de Resolucio n de Bisoctrizol USP.&1S
(USP30)
ER Mirtazapina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Mezcla de Resolucio n de Ciclosporina USP [Este material es una mezcla 100 : 1 de ciclosporina y ciclosporina U.]&&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Mezcla de Resolucio n de Etopo sido USP. Cambio en la redaccio n: ER Mezcla de Resolucio n de Ondansetro n USPClorhidrato de ondansetro n con aproximadamente 0,4% p/p tanto del compuesto relacionado A de ondansetro n, como de 6,6-metilen bis-[(1,2,3,9tetrahidro-9-metil-3-[(2-metil-1H-imidazol-1-il)-metil]-4H-carbazol4-ona)]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Mezcla de Resolucio n de Propionato de Fluticasona USP.
& &1S & &1S
Cambio en la redaccio n: ER Mitomicina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
ER Mitotano USP.
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Monobenzona USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Monoetanolamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Monoglice ridos USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Mezcla Race mica de Clorhidrato de Tiagabina USP [clorhidrato del a cido (S)-(+), (R)-()-1-[4,4-bis(3-metil-2-tienil)-3butenil]nipeco tico] (C20H25NO2S2 HCl 412,0). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Mezlocilina So dica USP.
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Monoglice ridos Diacetilados USP. Cambio en la redaccio n: ER Monosulfato de Guanetidina USP.
(USP30)
& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Mupirocina USP.

& &1S
(USP30)
3895
Cambio en la redaccio n: ER Mupirocina de Litio USP. Cambio en la redaccio n: ER Nabumetona USP.

& &1S & &1S
(USP30)
ER Niacina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Niacinamida USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Nadolol USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Nifedipino USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Nafato de Cefamandol USP. Cambio en la redaccio n: ER Nafcilina So dica USP.
& &1S & &1S
(USP30)
ER Nistatina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Nitrato de Butoconazol USP. Cambio en la redaccio n: ER Nitrato de Econazol USP. Cambio en la redaccio n: ER Nitrato de Miconazol USP. Cambio en la redaccio n: ER Nitrato de Pilocarpina USP. Cambio en la redaccio n: ER Nitrato de Sulconazol USP. Cambio en la redaccio n:
& & &
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Naloxona USP.

& &1S
(USP30)
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Naltrexona USP.

& &1S
(USP30)
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Nandrolona USP.

& &1S
& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Naproxeno USP.

& &1S
(USP30)
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Naproxeno So dico USP. Cambio en la redaccio n: ER Napsilato de Propoxifeno USP. Cambio en la redaccio n: ER Natamicina USP.
& &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Nitrofuranto na USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Nitrofurazona USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Nitroglicerina Diluida USP. Cambio en la redaccio n:

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Nevirapina Anhidra USP. Cambio en la redaccio n: ER Nevirapina Hemihidrato USP.
& &1S
(USP30)
ER Nitroprusiato de Sodio USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
3896
Cambio en la redaccio n: ER Nizatidina USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Octinoxato USP [metoxicinamato de octilo]. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Nonoxinol 9 USP.

& &1S
ER Octisalato USP [salicilato de octilo]. Cambio en la redaccio n: ER Octocrileno USP.

& &1S
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Nordazepam USP [ 7-cloro-1,3-dihidro-5-fenil-2H -1,4270,72). &&1S (USP30) benzodiazepin-2-ona] (C15H11ClN2O Cambio en la redaccio n: ER Noretindrona USP.
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Octoxinol 9 USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Noretinodrel USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Ooxacino USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Noroxacino USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Oleato de Metilo USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Norgestimato USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Omeprazol USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Norgestrel USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Oxacilina So dica USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Noscapina USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Oxandrolona USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Novobiocina USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Oxaprozina USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Octasulfato Pota sico de Sacarosa USP [NOTAEl nombre Sucrosofato Pota sico es USAN] [sal octapota sica de tetrakis (sulfato a cido) de 1,3,4,6-tetra- O -sulfo- b - D -fructofuranosil - a - D glucopirano sido, heptahidrato] (C12H14K8O35S8 7H2O 1413,64 CAS-76578-81-9). (C12H14K8O35S8 anhidro 1287,53 CAS73264-44-5). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Octildodecanol USP.
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Oxazepam USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Oxfendazol USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
ER Oxibenzona USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Oxicodona USP.

& &1S
(USP30)
3897
&
(USP30)
xido de Azitromicina USP.&1S ER N-O
ER Palmitato de Isopropilo USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: xido de Code ER N-O na USP (C18H21NO4 Cambio en la redaccio n: xido de Polietileno USP. ER O Cambio en la redaccio n: ER Oximetolona USP.
& &1S & &1S
315,37). &&1S
(USP30)
ER Palmitato de Metilo USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Palmitoleato de Metilo USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Pamoato de Hidroxizina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Oximorfona USP.

& &1S
(USP30)
ER Pamoato de Pirantel USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Oxitetraciclina USP.

& &1S
(USP30)
ER Pamoato de Pirvinio USP. Cambio en la redaccio n: ER Pantenol Race mico USP. Cambio en la redaccio n: ER Pantolactona USP.
& &1S &
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Oxitocina USP.

& &1S
(USP30)
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Oxtrilina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Paclitaxel USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Pantotenato de Calcio USP. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Padimato O USP.

& &1S
ER Papa na USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Palmitato de Cetilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Palmitato de Cloranfenicol USP. Cambio en la redaccio n: ER Palmitato de Cloranfenicol No Polimorfo A USP. &&1S Cambio en la redaccio n: ER Palmitato de Cloranfenicol Polimorfo A USP.
& &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Parbendazol USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Partenolida USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Penicilamina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Penicilina G Benzat nica USP.
&
&1S
(USP30)
3898
Cambio en la redaccio n: ER Penicilina G Pota sica USP. Cambio en la redaccio n: ER Penicilina G Proca nica USP. Cambio en la redaccio n: ER Penicilina G So dica USP. Cambio en la redaccio n: ER Penicilina V USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Piperacilina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Pirazinamida USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Pirimetamina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Piroxicam USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Penicilina V Pota sica USP. Cambio en la redaccio n: ER Pentazocina USP.
& &1S & &1S
(USP30)
ER Pituitaria Posterior USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Pivalato de Clocortolona USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Pentobarbital USP.

& &1S
(USP30)
ER Pivalato de Desoxicorticosterona USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Pentoxilina USP.

& &1S
(USP30)
ER Pivalato de Flumetasona USP. Cambio en la redaccio n: ER Plicamicina USP.

& &1S
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Perfenazina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Perubro n USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Polacrilina Pota sica USP. Cambio en la redaccio n:

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Picolinato de Cromo USP. Cambio en la redaccio n: ER Pilocarpina USP.

& &1S
(USP30)
ER Polidimetilsiloxano USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Polietileno de Alta Densidad USP. Cambio en la redaccio n: ER Polietileno de Baja Densidad USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Pimozida USP.

& &1S
(USP30)
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Pindolol USP.

& &1S
(USP30)
ER Polioxilglice ridos de Caprilocaproilo USP.
&
&1S
(USP30)
3899
Cambio en la redaccio n: ER Polioxilglice ridos de Estearoilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Polioxilglice ridos de Lauroilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Polioxilglice ridos de Linoleoilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Polioxilglice ridos de Oleoilo USP. Cambio en la redaccio n: ER Poloxaleno USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER L-Prolina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Propilenglicol USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Propilparabeno USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Propiltiouracilo USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Propionato de Clobetasol USP. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Prazicuantel USP.

& &1S
ER Propionato de Sodio USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Prednicarbato USP.

& &1S
(USP30)
ER Propionato de Testosterona USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Prednisolona USP.

& &1S
(USP30)
ER Propofol USP.
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Prednisona USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Prostaglandina A1 USP. Cambio en la redaccio n: ER Prostaglandina B1 USP (C20H32O4 Cambio en la redaccio n: ER Punto de Fusio n de Acetanilida USP. Cambio en la redaccio n: ER Punto de Fusio n de Cafe na USP. Cambio en la redaccio n:
(USP30)
& &1S & &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Primidona USP.

& &1S
(USP30)
336,47).
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Probenecid USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Probucol USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
&
ER Producto de Reaccio n de Metildopa-Glucosa USP.&1S
ER Punto de Fusio n de Fenacetina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Progesterona USP.

& &1S
(USP30)
3900
Cambio en la redaccio n: ER Punto de Fusio n de Sulfanilamida USP. Cambio en la redaccio n: ER Punto de Fusio n de Sulfapiridina USP. Cambio en la redaccio n: ER Punto de Fusio n de Vainillina USP. Cambio en la redaccio n: ER Quazepam USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Resina Polacrilex USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Resorcinol USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Ribavirina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Riboavina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Quercetina USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Riboavina Fosfatada USP. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Quimotripsina USP.

& &1S
ER Rifabutina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Quininona USP (C20H22N2O2 Cambio en la redaccio n: ER Ramipril USP.

& &1S

& &1S
(USP30)
ER Rifamp n USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Rifamp n Quinona USP. Cambio en la redaccio n:

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Rauwola Serpentina USP. Cambio en la redaccio n: ER Recuento de Part culas USP (2 blancos y 2 suspensiones).
& &1S
(USP30)
ER Rimexolona USP.
&
&1S
(USP30)
Agregar lo siguiente: ER Risperidona USP [3-[2-[4-(6-uoro-1,2-benzisoxazol-3il)piperidino]etil]-6,7,8,9-tetrahidro-2-metil-4 H -pirido[1,2a]pirimidin-4-ona] (410,48 CAS-106266-06-2).&1S (USP30)

&
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Repaglinida USP.

& &1S
(USP30)
ER Roxarsona USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Reserpina USP.

& &1S
(USP30)
ER Rutina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Resina de Colestiramina USP.

& &1S
(USP30)
ER Sacarato de Calcio USP.
&
&1S
(USP30)
3901
Cambio en la redaccio n: ER Sacarina USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER L-Serina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Sacarina Ca lcica USP.

& &1S
(USP30)
ER Sevourano USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Sacarina So dica USP.

& &1S
(USP30)
ER Silibina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Sacarosa USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Silidianina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: cido 3-Mercapto-2ER Sal 1,2-Difeniletilam nica del A metilpropanoico USP (C 4 H 7 O 2 S C 14 H 16 N 317,45).
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Simeticona USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Sal de Amonio de Cilastatina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sales Biliares USP.
& &1S & &1S
ER Simvastatina USP.
(USP30)
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER b-Sitosterol USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Agregar lo siguiente: Cambio en la redaccio n: ER Salicilamida USP.

& &1S ~
ER Solucio n de Calcitrol USP.
& &1S
(USP30)~USP30
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Salicilato de Fisostigmina USP. Cambio en la redaccio n: ER Salicilato de Magnesio USP. Cambio en la redaccio n: ER Salsalato USP.
& &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Solucio n de Iso mero Eritro de Clorhidrato de Metilfenidato USPEsta solucio n contiene 0,5 mg de iso mero eritro de clorhidrato de metilfenidato por mL en metanol. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
(USP30)
ER Somatropina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER 1,4-Sorbita n USP (C6H12O5 164,16).

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Secobarbital USP.

& &1S
(USP30)
ER Sorbitol USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Seno sidos USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Subsalicilato de Bismuto USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
3902
Cambio en la redaccio n: cido de Alfa Tocoferilo USP. ER Succinato A Cambio en la redaccio n: ER Succinato de Doxilamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Succinato de Loxapina USP. Cambio en la redaccio n: ER Succinato de Metoprolol USP. Cambio en la redaccio n: ER Succinato de Sumatripta n USP [butandioato de 3-[2(dimetilamino)etil]-N-metil-, 1H-indol-5-metansulfonamida (1 : 1)] (C14H21N3O2S C4H6O4 413,49). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Sucralosa USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Sulfadimetoxina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Sulfadoxina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Sulfamerazina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Sulfametazina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Sulfametizol USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Sulfametoxazol USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Sulbactam USP.

& &1S
ER Sulfanilamida USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Sulfabenzamida USP.

& &1S
ER Sulfapiridina USP.
(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Sulfacetamida USP.

& &1S
ER Sulfasalazina USP.
(USP30)
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Sulfacetamida So dica USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfaclorpiridazina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfadiazina USP.
& &1S & &1S & &1S
ER Sulfatiazol USP.
(USP30)
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Albuterol USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Aminopentamida USP.

(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Sulfadiazina de Plata USP.

& &1S
ER Sulfato de Atropina USP.

(USP30)
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Bleomicina USP.

& &1S
(USP30)
3903
Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Capreomicina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Code na USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Colistina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Dextroanfetamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Dihidroestreptomicina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Efedrina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Estreptomicina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Fenelzina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Gentamicina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Guanadrel USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Hidroxicloroquina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Hiosciamina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Kanamicina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfato de Metaproterenol USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Sulfato de Morna USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Sulfato de Neomicina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Sulfato de Netilmicina USP. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
&
&1S
(USP30)
ER Sulfato de Oxiquinolina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Sulfato de Paromomicina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Sulfato de Penbutolol USP. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
&
&1S
(USP30)
ER Sulfato de Polimixina B USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Sulfato de Pseudoefedrina USP. Cambio en la redaccio n:
& &1S
(USP30)
(USP30)
ER Sulfato de Quinidina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Sulfato de Quinina USP. Cambio en la redaccio n:

(USP30)
&
&1S
(USP30)
ER Sulfato de Sisomicina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Sulfato de Terbutalina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Sulfato de Vinblastina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Sulfato de Vincristina USP.
&
&1S
(USP30)
3904
Cambio en la redaccio n: ER Sulnpirazona USP.

& &1S
(USP30)
ER Tartrato de Butorfanol USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Sulsoxazol USP.

& &1S
(USP30)
ER Tartrato de Ergotamina USP. Cambio en la redaccio n:

& &1S
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Sulfosalicilato de Meclociclina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfo xido de Perfenazina USP. Cambio en la redaccio n: ER Sulfo xido de Pergolida USP [(8b)-8-[(metilsulnil)metil]-6propil-D-ergolina]. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
& &1S
(USP30)
ER Tartrato de Fendimetrazina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Tartrato de Levorfanol USP. Cambio en la redaccio n: ER Tartrato de Metoprolol USP. Cambio en la redaccio n: ER Tartrato de Morantel USP.
&
&
&1S
(USP30)
&
&1S
(USP30)
ER Sulindaco USP.
&
&1S
(USP30)
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Tartrato de Tilosina USP. ER Sumatripta n USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Tartrato de Trimeprazina USP. ER Suprofeno USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: cido Salic ER Tabletas de A lico USP (Calibrador de Disolucio n, No desintegrables). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Tabletas de Liberacio n Prolongada de Clorfeniramina USP (Calibrador para la Liberacio n de Fa rmacos, Unidad Simple).
& &1S
ER Tartrato de Vinorelbina USP. Cambio en la redaccio n: ER Taurina USP.

& &1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Tebutato de Prednisolona USP.

& &1S
(USP30) (USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Tabletas de Prednisona USP (Calibrador de Disolucio n, Desintegrable). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Tagatosa USP.
& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Temazepam USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Teolina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Talidomida USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Terconazol USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
3905
Cambio en la redaccio n: ER Tereftalato de Polietileno USP. Cambio en la redaccio n: ER Tereftalato G de Polietileno USP. Cambio en la redaccio n: ER Testolactona USP.
& &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Tioconazol USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Tioguanina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Tiopental USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Testosterona USP.

& &1S
(USP30)
ER Tioridazina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER 8-Tetrahidrocannabinol USP. Cambio en la redaccio n: ER 9-Tetrahidrocannabinol USP. Agregar lo siguiente:
& ER exo-Tetrahidrocannabinol USP [(6aR, 10aR)-6,6-dimetil-9metileno-3-pentil-6a,7,8,9,10,10a-hexahidro-6H-benzo[c]cromen-1ol] (C21H30O2 314,46).&1S (USP30) & &1S & &1S
(USP30)
ER Tiostrepto n USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Tiotepa USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Tiotixeno USP.

& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Tiabendazol USP.

& &1S
ER (E)-Tiotixeno USP.
(USP30)
& &1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Ticarcilina Monoso dica Monohidrato USP O6S2 H2O 424,43). &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ER Tilmicosina USP.
& &1S
ER L-Tirosina USP. (C15H15N2Na
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Tobramicina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Tolazamida USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Tiloxapol USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Tolbutamida USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Timerosal USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Tolcapona USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Tinidazol USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Tolmetina So dica USP.

& &1S
(USP30)
3906
Cambio en la redaccio n: ER Tolnaftato USP.

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Triamcinolona USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER o-Toluenosulfonamida USP

& &1S
Cambio en la redaccio n: (C7 H9NO2 S 171,22). ER Triamtereno USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Triazolam USP. ER p-Toluenosulfonamida USP

& &1S &
(C7 H9NO2 S
171,22).
&1S
(USP30)
(USP30)

&
ER Triclormetiazida USP.
(USP30)
&
&1S
(USP30)
ER Topiramato USP.&1S
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Torsemida USP (Forma 1). Cambio en la redaccio n: ER Triclosa n USP. ER Tosil Pleuromutilina USP. Cambio en la redaccio n: ER Trietioduro de Galamina USP. ER Tosilato de Bretilio USP. Agregar lo siguiente: ER Triuridina USP.
& & & &1S & &1S & &1S & &1S & &1S
ER Tricloroaminoplatinato de Potasio USP 357,58). &&1S (USP30)

(USP30)
(Cl3H3KNPt
(USP30)
(USP30)
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Tosilato Disulfato de Ademetionina USP.&1S

&1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Trimetoprima USP. ER Transplatino USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Trioxaleno USP. ER Trenbolona USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Tripsina Cristalizada USP. ER L-Treonina USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: fano USP. ER L-Tripto ER Tretino na USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Trolamina USP. ER Triacetina USP.

& &1S & &1S
(USP30)
(USP30)
3907
Cambio en la redaccio n: ER Troleandomicina USP.

& &1S
(USP30)
ER Valrubicina USP.
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Trometamina USP.

& &1S
~
(USP30)
ER Valsarta n USP.
&
&1S
(USP30)~USP30
Cambio en la redaccio n: ER Tropicamida USP.

& &1S
(USP30)
&
ER Vancomicina B con M on odeclorovancomicina USP.&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Ubidecarenona USP.

& &1S
(USP30)
ER Verde de Indocianina USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Ubidecarenona para Aptitud del Sistema USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Uracilo Arabino sido USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Urea USP.
& &1S & &1S & &1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Verteporna USP (C41H42N4O8
718,79).
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Vidarabina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Violeta de Genciana USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Urea C 13 USP.

& &1S
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Vitamina A USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Ursodiol USP.

& &1S
(USP30)
ER Vitexina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Vainillina USP.

& &1S
(USP30)
ER Warfarina USP. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Valerato de Betametasona USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Valerato de Estradiol USP. Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: ER Valerato de Hidrocortisona USP. Cambio en la redaccio n: ER L-Valina USP.
& &1S & &1S & &1S & &1S
(USP30)
ER Xantona USP (C13H8O2
196,21).
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Xilazina USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
ER Xilitol USP.
&
&1S
(USP30)
(USP30)
3908
h311i Valoracio n de Alginatos / Pruebas Qu micas
Cambio en la redaccio n: ER Xilosa USP.

& &1S
(USP30)
Pruebas y Determinaciones F sicas

& &1S
Cambio en la redaccio n: ER Yoduro de Isopropamida USP. Cambio en la redaccio n: ER Zalcitabina USP.

& &1S
(USP30)
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Zidovudina USP.

& &1S
N DE h611i DETERMINACIO ALCOHOL
(USP30)
Cambio en la redaccio n: ER Zileuto n USP.

& &1S
(USP30)
TODO IIME TODO DE CROMATOGRAFI A ME & DE GASES&1S (USP30)

& Usar el Me todo IIa cuando el Me todo II &1S (USP30) se especica en la monograf a individual. Para obtener un ana lisis de los principios en los que se basa, ver Cromatograf a de Gases en Cromatograf a h621i. Esta ndares de referencia USPER Determinacio n de Alcohol Acetonitrilo USP. ER Determinacio n de AlcoholAlcohol USP.
Pruebas y Valoraciones Qu micas

OTRAS PRUEBAS Y VALORACIONES
&
Me todo IIa&1S (USP30)
N DE h311i VALORACIO ALGINATOS
APTITUD DEL SISTEMA

Empleando D-glucuronolactona como el esta ndar, proceder como se indica en el Procedimiento, pero no realizar los pasos previos a la ebullicio n. El sistema es adecuado si se cumplen los siguientes criterios: (1) la determinacio n con un blanco da como resultado un valor neto de volumetr a, C, de entre 0,02 y 0,06 mEq, &&1S (USP30) calculado de la siguiente manera: Ab Bb en donde Ab es el nu mero de mEq de hidro xido de sodio 0,25 N en los 25 mL utilizados y Bb es el nu mero de mEq de a cido clorh drico 0,1 N utilizado en la volumetr a con un blanco; y (2) el porcentaje de dio xido de carbono, CO2, obtenido a partir del esta ndar esta entre & 24,2% y 25,7%.&1S (USP30)
AparatoEn condiciones t picas, usar un cromato grafo de gases equipado con un detector de ionizacio n a la llama y una columna de vidrio de 4 mm 6 1,8 m rellena con soporte S3 de malla 100 a 120, usando nitro geno o helio como gas transportador. Antes de usar, acondicionar la columna durante la noche a 2358 con un ujo lento de gas transportador. Mantener la temperatura de la columna a 1208 y la temperatura del inyector y el detector a 2108. Ajustar el ujo del gas transportador y la temperatura de modo que el acetonitrilo, el esta ndar interno, eluya entre 5 y 10 minutos. Soluciones Preparacio n Madre de PruebaDiluir la muestra en ana lisis en diluciones sucesivas con agua para obtener una solucio n que contenga aproximadamente 2% (v/v) de alcohol. Preparacio n de PruebaPipetear 5 mL de la Preparacio n Madre de Prueba y de ER Determinacio n de AlcoholAcetonitrilo USP [NOTAAlternativamente, se puede usar una solucio n acuosa de acetonitrilo al 2% de calidad adecuada como solucio n de esta ndar interno], transferir a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Preparacio n Esta ndarPipetear 5 mL de ER Determinacio n de AlcoholAlcohol USP y de ER Determinacio n de Alcohol Acetonitrilo USP [NOTAAlternativamente, se puede usar una solucio n acuosa de acetonitrilo al 2% de calidad adecuada como solucio n de esta ndar interno], transferir a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. ProcedimientoInyectar por duplicado en el cromato grafo de gases aproximadamente 5 mL de la Preparacio n de Prueba y de la Preparacio n esta ndar, registrar los cromatogramas y determinar los cocientes entre las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de alcohol (v/v) en la muestra en ana lisis, por la fo rmula: CD(RU / RS) en donde C es la concentracio n declarada de ER Determinacio n de AlcoholAlcohol USP; D es el factor de dilucio n (cociente entre el volumen de la Preparacio n Madre de Prueba y el volumen de muestra tomado); y RU y RS son los cocientes de respuesta entre los
Pruebas F sicas / h621i Cromatograf a
3909
picos obtenidos a partir de la Preparacio n de Prueba y de la Preparacio n Esta ndar, respectivamente. Prueba de Aptitud del SistemaEn un cromatograma adecuado, el factor de resolucio n, R, no es menor de 2; el factor de asimetr a del pico de alcohol no es mayor de 2,0; y seis inyecciones repetidas de la Preparacio n Esta ndar presentan una desviacio n esta ndar relativa de no ma s de 2,0% en el cociente entre los picos de alcohol y del esta ndar interno.
&
A h621i CROMATOGRAFI
Me todo IIb
FICOS REACTIVOS CROMATOGRA

La siguiente lista de rellenos (L), fases (G) y soportes (S) pretende ser una referencia u til para el te cnico en cromatograf a. [NOTALos taman os de part cula que se proporcionan en esta lista son los que se pueden obtener generalmente. Cuando se requiera otro taman o, normalmente ma s no, la monograf a individual especica el taman o de part cula deseado. Dentro de cualquier categor a de materiales de relleno o de fases que se enumeran a continuacio n, puede existir una amplia variedad de columnas disponibles. Cuando es necesario denir ma s espec camente las condiciones cromatogra cas, la monograf a individual as lo indica.]
AparatoEquipar un cromato grafo de gases con un detector de ionizacio n a la llama y una columna capilar de 0,53 mm 6 30 m recubierta con una pel cula de 3,0 mm de fase G43. Usar helio como gas transportador a una velocidad de ujo de 34,0 cm por segundo y una relacio n de particio n de 5 : 1. Programar el cromato grafo para mantener la temperatura de la columna a 508 durante 5 minutos, luego aumentar la temperatura a una velocidad de 108 por minuto hasta 2008, y mantener a esa temperatura durante 4 minutos. Mantener la temperatura del inyector a 2108 y la del detector a 2808. Soluciones Preparacio n Madre de PruebaDiluir la muestra en ana lisis en diluciones sucesivas con agua para obtener una solucio n que contenga aproximadamente 2% (v/v) de alcohol. Preparacio n de PruebaPipetear 5 mL de la Preparacio n Madre de Prueba y de ER Determinacio n de AlcoholAcetonitrilo USP [NOTEAlternativamente, se puede usar una solucio n acuosa de acetonitrilo al 2% de calidad adecuada como solucio n de esta ndar interno], y transferir a un matraz volume trico de 25 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Preparacio n Esta ndarPipetear 5 mL de ER Determinacio n de AlcoholAlcohol USP y de ER Determinacio n de Alcohol Acetonitrilo USP [NOTEAlternativamente, se puede usar una solucio n acuosa de acetonitrilo al 2% de calidad adecuada como solucio n de esta ndar interno], y transferir a un matraz volume trico de 25 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. ProcedimientoInyectar por duplicado en el cromato grafo de gases aproximadamente de 0,2 a 0,5 mL de la Preparacio n de Prueba y de la Preparacio n Esta ndar, registrar los cromatogramas y determinar los cocientes de respuesta de los picos. Calcular el porcentaje de alcohol (v/v) en la muestra en ana lisis, por la fo rmula: CD(RU / RS) en donde C es la concentracio n declarada de ER Determinacio n de AlcoholAlcohol USP; D es el factor de dilucio n (cociente entre el volumen de la Preparacio n Madre de Prueba y el volumen de muestra tomado); y RU y RS son los cocientes de respuesta entre los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de Prueba y de la Preparacio n Esta ndar, respectivamente. Prueba de Aptitud del SistemaEn un cromatograma adecuado, el factor de resolucio n, R, entre alcohol y el esta ndar interno no es menor de 4; el factor de asimetr a del pico de alcohol no es mayor de 2,0; y seis inyecciones repetidas de la Preparacio n Esta ndar presentan una desviacio n esta ndar de no ma s de 4,0% en el cociente entre los picos de alcohol y del esta ndar interno.&1S (USP30)
Rellenos
L1Octadecilsilano unido qu micamente a micropart culas de s lice o cera mica porosas, de &1,5&1S (USP30) mm a 10 mm de dia metro, o una varilla sil cea monol tica. L2Octadecilsilano unido qu micamente a gel de s lice de una porosidad de supercie controlada, que se ha unido a un nu cleo esfe rico so lido, de 30 mm a 50 mm de dia metro. L3Part culas de s lice porosas de 5 mm a 10 mm de dia metro. L4Gel de s lice de una porosidad de supercie controlada que se ha unido a un nu cleo esfe rico so lido, de 30 mm a 50 mm de dia metro. L5Alu mina de una porosidad de supercie controlada que se ha unido a un nu cleo esfe rico so lido, de 30 mm a 50 mm de dia metro. L6Relleno de intercambio catio nico fuertepol mero de uorocarbono sulfonado recubierto sobre un nu cleo esfe rico so lido, de 30 mm a 50 mm de dia metro. L7Octilsilano unido qu micamente a part culas de s lice totalmente porosas, de &1,5&1S (USP30) mm a 10 mm de dia metro. L8Capa esencialmente monomolecular de aminopropilsilano unida qu micamente a un soporte de gel de s lice totalmente poroso, de 3 mm a 10 mm de dia metro. L9Gel de s lice totalmente poroso, irregular o esfe rico, unido qu micamente a un recubrimiento de intercambio catio nico fuertemente a cido, de 3 mm a 10 mm de dia metro. L10Grupos nitrilo unidos qu micamente a part culas de s lice porosas, de 3 mm a 10 mm de dia metro. L11Grupos fenilo unidos qu micamente a part culas de s lice porosas, de &1,5&1S (USP30) mm a 10 mm de dia metro. L12Relleno de intercambio anio nico fuerte obtenido uniendo qu micamente un grupo amino cuaternario a un nu cleo esfe rico de s lice so lido, de 30 mm a 50 mm de dia metro. L13Trimetilsilano unido qu micamente a part culas de s lice porosas, de 3 mm a 10 mm de dia metro. L14Gel de s lice unido qu micamente a un recubrimiento de intercambio anio nico de amonio cuaternario fuertemente ba sico, de 5 mm a 10 mm de dia metro. L15Hexilsilano unido qu micamente a part culas de s lice totalmente porosas, de 3 mm a 10 mm de dia metro. L16Dimetilsilano unido qu micamente a part culas de s lice porosas, de 5 mm a 10 mm de dia metro. L17Resina de intercambio catio nico fuerte que consta de un copol mero sulfonado entrecruzado de estireno-divinilbenceno, en forma de hidro geno, de 7 mm a 11 mm de dia metro. L18Grupos amino y ciano unidos qu micamente a part culas de s lice porosas, de 3 mm a 10 mm de dia metro. L19Resina de intercambio catio nico fuerte que consta de un copol mero sulfonado entrecruzado de estireno-divinilbenceno, en la forma ca lcica, de aproximadamente 9 mm de dia metro. L20Grupos dihidroxipropano unidos qu micamente a part culas de s lice porosas, de 5 mm a 10 mm de dia metro.
3910
h621i Cromatograf a / Pruebas F sicas
L21Un copol mero r gido, esfe rico de estireno-divinilbenceno, de 5 mm a 10 mm de dia metro. L22Resina de intercambio catio nico constituida por gel de poliestireno poroso con grupos a cidos sulfo nicos, de un taman o aproximado de 10 mm. L23Resina de intercambio anio nico constituida por gel de poliacrilato o polimetacrilato poroso con grupos de amonio cuaternario, de un taman o aproximado de 10 mm. L24Gel hidro lo semirr gido que consta de pol meros de vinilo con numerosos grupos hidroxilo sobre la supercie de la matriz, de 32 mm a 63 mm de dia metro. [NOTAEsta disponible como YMC-Pack PVA-SIL, fabricado por YMC Co., Ltd. y lo distribuye Waters Corp. (www.waters.com).] L25Relleno con capacidad para separar compuestos en un intervalo de peso molecular de 100 a 5000 (determinado con o xido de polietileno), aplicable a pol meros hidrosolubles neutros, anio nicos y catio nicos. Se determino que una base de resina de polimetacrilato, entrecruzada con e ter polihidroxilado (la supercie contiene algunos grupos funcionales carboxilo residuales) es adecuada. L26Butilsilano unido qu micamente a part culas de s lice totalmente porosas, de 3 mm a 10 mm de dia metro. L27Part culas de s lice porosas, de 30 mm a 50 mm de dia metro. L28Un soporte multifuncional, que consiste en un sustrato de , unido a un intercambiador s lice esfe rico de alta pureza, de 100 A anio nico, con funcionalidad amina, adema s de una funcionalidad en fase reversa convencional de C8. L29Gamma alu mina de fase reversa con bajo porcentaje, en peso, de carbono y part culas esfe ricas de polibutadieno con base de . alu mina, de 5 mm de dia metro con un volumen de poro de 80 A L30Etilsilano unido qu micamente a part culas de s lice totalmente porosas, de 3 mm a 10 mm de dia metro. L31Resina de intercambio anio nico fuerte, hidro xido-selectivo, unida por amina cuaternaria a part culas de la tex ligadas a un nu cleo de part culas macroporosas de 8,5 mm con un taman o de poro de y constituidas de etilvinilbenceno entrecruzado con 55% de 2000 A divinilbenceno. L32Relleno de intercambio con ligando quiralcomplejo de Lprolina y cobre unido covalentemente a part culas de s lice irregulares, de 5 mm a 10 mm de dia metro. L33Relleno con capacidad para separar dextranos de un taman o molecular en un intervalo de entre 4000 y 500 000 Da. Es esfe rico con base de s lice y tiene un procesamiento que le proporciona estabilidad frente al pH. [NOTAEsta disponible como TSKgel G4000 SWXL que se puede obtener de Tosoh Biosep (www.tosohbiosep.com).] L34Resina de intercambio catio nico fuerte que consiste de un copol mero sulfonado entrecruzado de estireno-divinilbenceno en la forma de plomo, de aproximadamente 9 mm de dia metro. L35Relleno de s lice esfe rica estabilizada con zirconio con una fase unida que consta de una monocapa molecular hidro la (tipo . diol), con un taman o de poro de 150 A L36Derivado 3,5-dinitrobenzoilo de L-fenilglicina unido covalentemente a s lice aminoprop lica de 5 mm. L37Relleno con capacidad para separar prote nas por taman o molecular en un intervalo de entre 2000 y 40 000 Da. Es un gel de polimetacrilato. L38Relleno para exclusio n por taman o a base de metacrilato para muestras hidrosolubles. L39Gel de polihidroximetacrilato hidro lo de resina esfe rica totalmente porosa. L40Part culas de s lice porosas cubiertas con tris-3,5-dimetilfenilcarbamato de celulosa, de 5 mm a 20 mm de dia metro. L41Glicoprote na a1-a cida inmovilizada sobre part culas esfe ricas de s lice, de 5 mm de dia metro. L42Grupos octilsilano y octadecilsilano unidos qu micamente a part culas de s lice porosas, de 5 mm de dia metro. L43Grupos pentauorofenilo unidos qu micamente a part culas de s lice mediante un espaciador propilo, de 5 mm a 10 mm de dia metro. L44Soporte multifuncional, que consiste en un sustrato de s lice , unido a un intercambiador catio esfe rico de alta pureza, 60 A nico, con funcionalidad sulfo nica a cida, adema s de una funcionalidad en fase reversa convencional de C8. L45Beta ciclodextrina unida a part culas de s lice porosas, de 5 mm a 10 mm de dia metro.
L46Sustrato de poliestireno y divinilbenceno aglomerado con perlas de la tex con funcionalidad de aminas cuaternarias, de aproximadamente 10 mm de dia metro. L47Sustrato microporoso de intercambio anio nico de alta capacidad, totalmente funcionalizado con grupos trimetilamino, de 8 mm de dia metro. [NOTAEsta disponible como CarboPac MA1 y lo distribuye Dionex Corp. (www.dionex.com).] L48Poliestireno entrecruzado sulfonado, con una capa exterior de microperlas de intercambio anio nico porosas submicrome tricas, de 15 mm de dia metro. L49Relleno en fase reversa obtenido por recubrimiento con una capa na de polibutadieno sobre part culas porosas esfe ricas de zirconio, de 3 mm a 10 mm de dia metro. [ NOTA Esta disponible como Zirchrom PBD, fabricado por ZirChrom Separations, Inc. y lo distribuye Alltech, www.Alltechweb.com.] L50Resina multifuncional, con retencio n en fase reversa y funcionalidades de intercambio de aniones fuerte. La resina consta de etilvinilbenceno, entrecruzado al 55% con copol mero de divinilbenceno, de 3 mm a 15 mm de dia metro, y una supercie de no menos de 350 m2 por g. El sustrato esta recubierto de part culas de la tex con funcionalidad de amonio cuaternario que constan de estireno entrecruzado con divinilbenceno. [NOTAEsta disponible como OmniPac PAX-500 y lo distribuye Dionex Corp. (www.dionex.com).] L51Part culas de s lice esfe ricas, porosas, recubiertas con amilosa tris-3,5-dimetilfenilcarbamato, de 5 mm a 10 mm de dia metro. [NOTAEsta disponible como Chiralpak AD que se puede obtener de Chiral Technologies, Inc., (www.chiraltech.com).] L52Resina de intercambio catio nico fuerte de s lice porosa con grupos sulfopropilo, de 5 mm a 10 mm de dia metro. [NOTAEsta disponible como TSK IC SW Cation que se puede obtener de Tosoh Biosep (www.tosohbiosep.com).] L53Resina de intercambio catio nico de bil que consta de etilvinilbenceno, entrecruzado al 55% con copol mero de divinilbenceno, de 3 mm a 15 mm de dia metro. El sustrato esta injertado en la supercie con a cido carbox lico y/o mono meros funcionalizados de a cido fosfo rico. La capacidad es de no menos de 500 mEq/ columna. [NOTAEsta disponible como IonPac CS14 lo distribuye Dionex Corp. (www.dionex.com).] L54Medio de exclusio n por taman o constituido por dextrano unido covalentemente a perlas de agarosa porosa altamente entrecruzada, de aproximadamente 13 mm de dia metro. [NOTAEsta disponible como Superdex Peptide HR 10/30 que se puede obtener de Amersham Pharmacia Biotech (www.amershambiosciences.com).] L55Resina de intercambio catio nico fuerte hecha de s lice porosa recubierta con copol mero de polibutadienoa cido maleico, de aproximadamente 5 mm de dia metro. [NOTAEsta disponible como IC-Pak C M/D que se puede obtener de Waters Corp. (www.waters.com).] L56Propilsilano unido qu micamente a part culas de s lice totalmente porosas, de 3 mm a 10 mm de dia metro. [NOTAEsta disponible como Zorbax SB-C3 que se puede obtener de Agilent Technologies. (www.agilent.com/chem).] L57Prote na de reconocimiento quiral, ovomucoide, unida qu micamente a part culas de s lice, de aproximadamente 5 mm de . dia metro, con un taman o de poro de 120 A [NOTAEsta disponible como Ultron ES-OVM que se puede obtener de Agilent Technologies (www.agilent.com/chem).] L58Resina de intercambio catio nico fuerte, que consiste de copol mero sulfonado entrecruzado de estireno-divinilbenceno en la forma so dica, de aproximadamente 7 mm a 11 mm de dia metro. [NOTAEsta disponible como Aminex HPX-87N que se puede obtener de Bio-Rad Laboratories, (N8 125-0143 del cata logo 2000/ 01) www.bio-rad.com.] L59Relleno con capacidad para separar prote nas por peso molecular en un intervalo de entre 10 y 500 kDa. Es esfe rico (10 mm), con base de s lice y tiene un procesamiento que le proporciona caracter sticas hidro las y estabilidad de pH.
Pruebas F sicas / h621i Cromatograf a
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[NOTA Esta disponible como TSKgel G3000SW Column (columna anal tica) y como TSKgel Guard (guarda columna) que se pueden obtener de Tosoh Biosep (nu mero de pieza 05789 y 05371, respectivamente) (www.tosohbiosep.com).] & L60Gel de s lice poroso, esfe rico, de 10 mm o menos&1S (USP30) de dia metro, cuya supercie se ha modicado covalentemente con grupos &alquil amida&1S (USP30) y se ha recubierto exhaustivamente. [NOTAEsta disponible como Supelcosil ABZ que se puede obtener de Supelco (www.sigmaaldrich.com/supelco).] L61Resina de intercambio anio nico fuerte hidro xido-selectiva compuesta de un nu cleo altamente entrecruzado de part culas microporosas de 13 mm con un taman o de poro de menos de 10 A y que consiste en etilvinilbenceno entrecruzado con divinilbenceno al 55%, con un recubrimiento de la tex compuesto de microperlas de 85 nm de dia metro unidas con iones alcanol amonio cuaternario (6%). [NOTAEsta disponible como Ion Pac AS 11 y como AG 11 que se pueden obtener de Dionex (www.dionex.com).] L62Fase de silano C30 unida a s lice esfe rica, totalmente porosa, de 3 mm a 15 mm de dia metro.
Fases
G1Aceite de dimetilpolisiloxano. G2Goma de dimetilpolisiloxano. G350% de fenilpolisiloxano y 50% de metilpolisiloxano. G4Polie ster de succinato de dietilenglicol. G53-Cianopropilpolisiloxano. G6Triuoropropilmetilpolisiloxano. G750% de 3-cianopropilsilicona y 50% de fenilmetilsilicona. G880% de bis(3-cianopropil)polisiloxano y 20% de 3-cianopropilfenilpolisiloxano (los porcentajes hacen referencia a la sustitucio n molar). G9Metilvinilpolisiloxano. G10Poliamida formada por reaccio n de un a cido dicarbox lico de C36 con 1,3-di-4-piperidilpropano y piperidina en una relacio n molar de 1,00 : 0,90 : 0,20. G11Polie ster de sebacato de bis(2-etilhexilo). G12Polie ster de succinato de fenildietanolamina. G13Sorbitol. G14Polietilenglicol (peso molecular promedio de 950 a 1050). G15Polietilenglicol (peso molecular promedio de 3000 a 3700). G16Compuesto de polietilenglicol (peso molecular promedio de aproximadamente 15 000). Un compuesto de polietilenglicol de alto peso molecular con un enlazador diepo xido. [NOTAEsta disponible comercialmente como Polyethylene Glycol Compound 20M, o como Carbowax 20M, que se pueden obtener de proveedores de reactivos para cromatograf a.] G1775% de fenilpolisiloxano y 25% de metilpolisiloxano. G18Polialquilenglicol. G1925% de fenilsilicona, 25% de cianopropilsilicona y 50% de metilsilicona. G20Polietilenglicol (peso molecular promedio de 380 a 420). G21Succinato de neopentilglicol. G22Ftalato de bis(2-etilhexilo) G23Adipato de polietilenglicol. G24Ftalato de diisodecilo. G25Compuesto de polietilenglicol y a cido terefta lico (TPA, por sus siglas en ingle s). Un compuesto de alto peso molecular de un polietilenglicol y un diepo xido que se esterica con a cido terefta lico. [NOTAEsta disponible comercialmente como Carbowax 20MTPA que se puede obtener de proveedores de reactivos para cromatograf a.] G2625% de 2-cianoetilpolisiloxano y 75% de metilpolisiloxano. G275% de fenilpolisiloxano y 95% de metilpolisiloxano. G2825% de fenilpolisiloxano y 75% de metilpolisiloxano. G293,3-Tiodipropionitrilo. G30Tetraetilenglicol dimetil e ter. G31Nonilfenoxipoli(etilenoxi)etanol (la longitud promedio de la cadena etilenoxi es 30); Nonoxinol 30. G3220% de fenilmetilpolisiloxano y 80% de dimetilpolisiloxano. G3320% de carboranosilicona y 80% de metilsilicona.
G34Polie ster de succinato de dietilenglicol estabilizado con a cido fosfo rico. G35Compuesto de alto peso molecular de un polietilenglicol y un diepo xido que se esterica con a cido nitroterefta lico. G361% de vinilpolisiloxano y 5% de fenilmetilpolisiloxano. G37Poliimida. G38Fase G1 que contiene un pequen o porcentaje de inhibidor de asimetr a. [NOTAUn grado adecuado esta disponible comercialmente como SP2100/0.1% Carbowax 1500 que se puede obtener de Supelco, Inc., (www.sigmaaldrich.com/supelco).] G39Polietilenglicol (peso molecular promedio aproximadamente 1500). G40Adipato de etilenglicol. G41Fenilmetildimetilsilicona (sustituida al 10% por fenilo). G4235% de fenilpolisiloxano y 65% de dimetilpolisiloxano (los porcentajes hacen referencia a la sustitucio n molar). G436% de cianopropilfenilpolisiloxano y 94% de dimetilpolisiloxano (los porcentajes hacen referencia a la sustitucio n molar). G442% de grasa de hidrocarburos de vaselina de bajo peso molecular y 1% de solucio n de hidro xido de potasio. G45Divinilbenceno-etilenglicol-dimetilacrilato. G4614% de cianopropilfenilpolisiloxano y 86% de metilpolisiloxano. G47Polietilenglicol (peso molecular promedio aproximadamente 8000). G48Cianopolisiloxano altamente polar y parcialmente entrecruzado.
Soportes
NOTAA menos que se especique algo diferente, se indican taman os de malla de 80 a 100 o alternativamente de 100 a 120. S1ATierra sil cea para cromatograf a de gases que ha sido fundida-calcinada mezclando diatomita con ujo de Na2CO3 y calcinada a una temperatura superior a 9008. La tierra sil cea se lava con a cido, luego se lava con agua hasta lograr la neutralidad, pero no se lava con bases. La tierra sil cea puede ser silanizada al tratarla con un agente como dimetildiclorosilano [NOTAA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, se indica un soporte silanizado.] para enmascarar los grupos silanoles superciales. S1ABTierra sil cea conforme a la descripcio n anterior pero lavada con a cido y base. [NOTAA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, se indica un soporte silanizado.] S1CSoporte preparado con ladrillo refractario molido y calcinado o quemado con arcilla como aglutinante, a una temperatura por encima de los 9008 y lavado posteriormente con a cido. Puede estar silanizado. S1NSTierra sil cea no tratada. S2Copol mero de estireno-divinilbenceno con un a rea nominal 2 de menos de 50 m por g y un dia metro de poro promedio de 0,3 mm a 0,4 mm. S3Copol mero de etilvinilbenceno y divinilbenceno con un a rea nominal de 500 m2 a 600 m2 por g y un dia metro de poro promedio de 0,0075 mm. S4Copol mero de estireno-divinilbenceno con grupos aroma ticos O y N con un a rea nominal de 400 m2 a 600 m2 por g y un dia metro de poro promedio de 0,0076 mm. S5Pol mero de tetrauoroetileno de alto peso molecular de malla 40 a 60. S6Copol mero de estireno-divinilbenceno con un a rea nominal de 250 m2 a 350 m2 por g y un dia metro de poro promedio de 0,0091 mm. S7Carbono gratizado que tiene un a rea nominal de 12 m2 por g. S8Copol mero de 4-vinil-piridina y estireno-divinilbenceno. S9Pol mero poroso a base de o xido de 2,6-difenil-p-fenileno. S10Copol mero altamente polar entrecruzado con acrilonitrito y divinilbenceno. S11Carbono gratizado que tiene un a rea nominal de 100 m2 por g modicado con cantidades pequen as de vaselina y compuestos de polietilenglicol.
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h730i Espectroqu mica de Plasma / Pruebas F sicas
[NOTAEsta disponible comercialmente como SP1500 en Carbopack B que se puede obtener de Supelco (www.sigmaaldrich.com/ supelco).] S12Carbono gratizado que tiene un a rea nominal de 100 m2 por g.
MICA DE h730i ESPECTROQUI PLASMA
& Las te cnicas instrumentales basadas en plasma que se utilizan en el ana lisis farmace utico se clasican en dos grandes grupos: a) las te cnicas que se basan en plasma inductivamente acoplado y b) las te cnicas en las que el plasma se genera en la supercie de la muestra o cerca de ella. El plasma inductivamente acoplado (ICP, por sus siglas en ingle s) es una fuente de excitacio n de alta temperatura que desolvata, vaporiza y atomiza muestras aerosolizadas e ioniza los a tomos resultantes. Estos iones y a tomos excitados pueden detectarse posteriormente mediante la observacio n de sus l neas de emisio n, un me todo denominado espectroscop a de emisio n ato mica de plasma inductivamente acoplado (ICPAES, por sus siglas en ingle s), que tambie n se conoce como espectroscop a de emisio n o ptica de plasma inductivamente acoplado (ICPOES, por sus siglas en ingle s), o los iones excitados o en estado fundamental pueden determinarse mediante una te cnica que se denomina espectrometr a de masas de plasma inductivamente acoplado (ICPMS, por sus siglas en ingle s). La ICPAES y la ICPMS son te cnicas que permiten analizar uno o varios elementos y constituyen procedimientos generales apropiados, tanto para ana lisis secuenciales como para ana lisis simulta neos, con un amplio intervalo lineal y buena sensibilidad. Una nueva te cnica de espectroscop a de plasma es la espectroscop a de descomposicio n inducida por la ser (LIBS, por sus siglas en ingle s). La te cnica LIBS consiste en calentar directamente la muestra en estado l quido, so lido o gaseoso con un la ser pulsado o indirectamente por un plasma generado por el la ser. Como resultado, en el plasma que se forma en la supercie de la muestra o un poco ma s arriba de ella, la muestra se volatiliza en el punto de contacto con el rayo la ser, reduciendo los constituyentes volatilizados a a tomos, fragmentos moleculares y grupos ma s grandes. La emisio n de los a tomos e iones de la muestra se recolecta, generalmente con bra o ptica u otro sistema de visualizacio n remota y se mide con un dispositivo detector, como por ejemplo un dispositivo de acoplamiento de carga (CCD, por sus siglas en ingle s). La LIBS se puede utilizar para realizar ana lisis cualitativos o cuantitativos con una curva esta ndar de trabajo. Aunque la industria farmace utica au n no ha incorporado la utilizacio n generalizada de la LIBS, e sta puede resultar adecuada para realizar mediciones tanto en el a rea de produccio n como en el laboratorio, en el lugar f sico o en l nea. Su potencial la convierte en una te cnica viable para la espectroqu mica de plasma en el laboratorio farmace utico, pero como la LIBS es una te cnica relativamente nueva, este cap tulo general no la tratara de forma detallada.1
N DE LA MUESTRA PREPARACIO
La preparacio n de la muestra es de suma importancia en el ana lisis mediante te cnicas basadas en plasma y es el primer paso en todo
ana lisis por ICPAES o ICPMS. Los resultados de las te cnicas basadas en plasma dependen en gran medida del transporte de la muestra al plasma. Como el sistema de introduccio n de muestra de la ICPAES y la ICPMS es el mismo, los me todos mediante los cuales se preparan las muestras pueden aplicarse a ambas te cnicas. El me todo ma s convencional para introducir la muestra en el plasma es la nebulizacio n de la solucio n. Si se emplea la nebulizacio n de la solucio n, es necesario disolver las muestras so lidas para introducirlas en el plasma para su ana lisis. Las muestras se pueden disolver en cualquier disolvente apropiado. Existe una gran preferencia por el uso de soluciones acuosas o diluidas de a cido n trico porque sus interferencias son m nimas en comparacio n con otros disolventes. Para disolver la muestra tambie n se pueden emplear pero xido de hidro geno, a cido clorh drico, a cido sulfu rico, a cido perclo rico, distintas combinaciones de a cidos o mezclas de a cidos con distintas concentraciones. El a cido uorh drico diluido tambie n se puede usar, aunque cuando se emplea es necesario tomar las precauciones necesarias para garantizar la seguridad del analista y proteger el equipamiento de cuarzo para introduccio n de muestra; espec camente, el nebulizador, la ca mara de roc o y el tubo interno de la antorcha los cuales deben estar fabricados con materiales resistentes al a cido uorh drico. Se pueden emplear otras alternativas para disolver la muestra, tales como bases diluidas, disolventes orga nicos puros o diluidos, combinaciones de a cidos o bases y distintas combinaciones de disolventes orga nicos, entre otras. Cuando las muestras se introducen en el plasma por nebulizacio n de la solucio n, es importante considerar los posibles efectos de la matriz e interferencias que el disolvente pueda generar. En casos en los que la exactitud y la precisio n no sean adecuadas, se debe emplear un esta ndar interno apropiado y/o se debe homologar la matriz del esta ndar con la matriz de las muestras en los ana lisis ICP AES e ICPMS. En todo caso, la seleccio n de un esta ndar interno apropiado debe tener en cuenta el analito en cuestio n, la energ a de ionizacio n, las longitudes de onda o las masas y la naturaleza de la matriz de la muestra. Cuando una muestra no es soluble en ninguno de los disolventes aceptables, se pueden emplear diferentes te cnicas de digestio n. Entre ellas cabe mencionar la digestio n por calentamiento en placa o la digestio n asistida por microondas, tanto en recipientes cerrados como abiertos. La seleccio n del tipo de te cnica de digestio n depende de la naturaleza de la muestra a digerir y de los analitos en estudio. Por lo general no se recomienda la digestio n en recipientes abiertos en los ana lisis de metales vola tiles; por ejemplo, selenio y mercurio. La aptitud de una te cnica de digestio n, sea en un recipiente abierto o cerrado, debe respaldarse con experimentos de recuperacio n de cantidades conocidas agregadas para comprobar que, en un intervalo de tolerancia aceptable, los metales vola tiles no se han evaporado durante la preparacio n de la muestra. Utilizar a cidos, bases y pero xido de hidro geno ultra puros, especialmente cuando se emplea la ICPMS. El agua desionizada debe tener 18 megaohmios como m nimo. Vericar las posibles interferencias del diluyente antes de utilizarlo en un ana lisis. Seleccionar los disolventes orga nicos de la calidad ma s alta disponible con respecto al contenido de contaminantes meta licos, ya que no siempre es posible obtener estos disolventes exentos de metales. Es importante tomar en cuenta la seleccio n del tipo, material de construccio n, tratamiento previo y limpieza del instrumental de laboratorio anal tico empleado en los ana lisis ICPAES e ICPMS. El material debe ser inerte y, dependiendo de la aplicacio n espec ca, resistente a ca usticos, a cidos y/o disolventes orga nicos. En algunos ana lisis, se debe proceder con la diligencia debida para prevenir la adsorcio n de analitos sobre la supercie de los recipientes, especialmente en los ana lisis a nivel de ultratraza. La contaminacio n de soluciones de muestra con metales o iones presentes en el envase puede tambie n generar resultados inadecuados. El uso de instrumental que no ha sido certicado para cumplir con las tolerancias Clase A de matraces volume tricos es aceptable si se ha demostrado experimentalmente que la linealidad, exactitud y precisio n del me todo son adecuadas para el estudio a realizar.
N DE LA MUESTRA INTRODUCCIO
1
Yueh F-Y, Singh JP, Zhang H. Laser-induced breakdown spectroscopy, elemental analysis. En: Encyclopedia of Analytical Chemistry: Instrumentation and Applications. New York: Wiley; 2000 : 20662087.
Existen dos formas de introducir la muestra en el nebulizador: con una bomba perista ltica o por autosuccio n. Se preere el uso de la bomba perista ltica, la cual garantiza que la velocidad de ujo de la
Pruebas F sicas / h730i Espectroqu mica de Plasma
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muestra y de la solucio n esta ndar hacia el nebulizador es la misma, independientemente de la viscosidad de la muestra. En algunos casos, cuando no es indispensable emplear la bomba perista ltica, puede utilizarse la autosuccio n. Existen varios tipos de nebulizadores disponibles: neuma ticos (conce ntricos y de ujo cruzado), de rejilla y ultraso nicos. Tambie n esta n disponibles los micronebulizadores, los nebulizadores de alta ecacia, los nebulizadores de alta ecacia por inyeccio n directa y los nebulizadores de inyeccio n de ujo. La seleccio n del nebulizador para cada ana lisis se debe hacer en funcio n de la matriz de la muestra, del analito y de la sensibilidad deseada. Algunos nebulizadores son mejores para las soluciones viscosas o las que contengan so lidos disueltos en altas concentraciones, mientras que otros son mejores para soluciones orga nicas. Tener en cuenta que la autosuccio n de un uido se debe a los efectos de Bernoulli o de Venturi. No se puede obtener autosuccio n con todos los tipos de nebulizadores. Por ejemplo, se requiere de un nebulizador conce ntrico para la autosuccio n de una solucio n. Una vez que la muestra sale del nebulizador en forma de aerosol, ingresa a la ca mara de roc o que esta disen ada para seleccionar so lo las gotitas ma s pequen as de la solucio n de muestra para que ingresen al plasma, como resultado, normalmente so lo de 1% a 2% del aerosol de muestra llega al ICP, aunque algunos nebulizadores con nes espec cos esta n disen ados para permitir que pra cticamente todo el aerosol de la muestra ingrese al ICP. Al igual que con los nebulizadores, existen varios tipos de ca maras de roc o disponibles para ICPAES o ICPMS, como por ejemplo la ca mara de roc o de doble pasaje de Scott y las ca maras de roc o ciclo nica con distintas conguraciones. Seleccionar una ca mara de roc o compatible con la muestra y el disolvente, considerando que es necesario que se equilibre y vac e en el menor tiempo posible. Cuando se seleccione una ca mara de roc o, se debe tener en cuenta la naturaleza de la matriz de la muestra, la sensibilidad deseada y el analito. Los sistemas de cromatograf a de l quidos o de gases pueden interconectarse con ICPAES e ICPMS para lograr especiacio n molecular, io nica u otros modos de separacio n qu mica basados en emisio n elemental o espectrometr a de masas. En u ltima instancia, se debe demostrar experimentalmente que la seleccio n del equipo de introduccio n de la muestra ofrece suciente especicidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y precisio n en el ana lisis. Adema s de soluciones nebulizadas, tambie n es posible analizar muestras so lidas por ablacio n la ser (LA, por sus siglas en ingle s). En esos casos, la muestra ingresa directamente a la antorcha en forma de humo. En vista de las dicultades que presenta la obtencio n de esta ndares apropiados, las te cnicas de LAICP y LAICPMS se consideran ma s adecuadas para los ana lisis cualitativos de compuestos farmace uticos. Sin embargo, se pueden realizar ana lisis cuantitativos si se demuestra mediante un me todo de validacio n 2 apropiado que los esta ndares disponibles son adecuados.
muestra ocasionan demasiadas inexactitudes, los esta ndares, blancos y soluciones de muestra deben ser lo ma s parecidos posible a la matriz para reducir al m nimo las interferencias. Cuando no sea posible homologar la matriz, se recomienda utilizar para la ICPAES o ICPMS un esta ndar interno apropiado o el me todo de esta ndar adicionado. Tambie n se pueden introducir esta ndares internos a trave s de un conector "T" en el tubo de subida de la muestra. En cualquier caso, en la seleccio n de un esta ndar interno apropiado se debe tener en cuenta los analitos en cuestio n, sus energ as de ionizacio n y excitacio n, sus comportamientos qu micos, sus longitudes de onda o masas y la naturaleza de la matriz de la muestra. En u ltima instancia, se debe demostrar experimentalmente que la seleccio n del esta ndar interno ofrece suciente especicidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y precisio n en el ana lisis. El me todo de esta ndar adicionado consiste en el agregado a la muestra de una concentracio n conocida del elemento analito a no menos de dos niveles de concentracio n adema s de una preparacio n de la muestra sin el agregado de cantidades conocidas. La respuesta del instrumento se graca en funcio n de la concentracio n del elemento analito agregado y se traza la recta de regresio n lineal correspondiente a los datos. La concentracio n del analito en la muestra se obtiene multiplicando el valor absoluto del punto donde la recta corta el eje x por el factor de dilucio n que corresponda. La presencia de carbo n disuelto a concentraciones de pequen o porcentaje en soluciones acuosas eleva la ionizacio n de selenio y de arse nico en un plasma de argo n inductivamente acoplado. Este feno meno por lo general resulta en el sesgado positivo de las medidas cuantitativas de selenio y arse nico mediante ICPAES e ICPMS, las cuales pueden corregirse mediante el me todo de esta ndar adicionado o el agregado de un pequen o porcentaje de carbo n, como el a cido ace tico glacial anal ticamente puro, a los esta ndares de linealidad.
ICP
La fuente de excitacio n de ICP esta compuesta por un suministro de gas argo n, una antorcha, una bobina de induccio n de radio frecuencia (RF), una unidad apareadora de impedancia y un generador RF. El gas que se utiliza ma s comu nmente en la ICP es el argo n. La antorcha de plasma consiste en tres tubos de cuarzo conce ntricos, denominados tubo interno, intermedio y exterior. Los tubos intermedios y externos por lo general esta n hechos de cuarzo. El tubo interno puede estar hecho de cuarzo o alu mina si el ana lisis se realiza con soluciones con a cido uorh drico. El ujo del gas nebulizador transporta el aerosol de la solucio n de muestra a trave s del tubo interno de la antorcha y lo introduce en el plasma. El tubo intermedio transporta el gas intermedio (a veces denominado auxiliar). El ujo del gas intermedio ayuda a elevar el plasma y a hacerlo salir de los tubos intermedio e interno para evitar que se fundan y que se depositen carbono y sales en el tubo interno. El tubo exterior transporta el gas exterior (a veces denominado plasma o refrigerante) que se utiliza para crear y mantener el plasma toroidal. El ujo tangencial del gas refrigerante a trave s de la antorcha mantiene el plasma donde debe estar, impidiendo que el ICP se expanda hacia el tubo exterior y lo llene y que la antorcha se funda. Alrededor de la antorcha se encuentra la bobina de induccio n RF, tambie n denominada bobina de carga, que genera un campo magne tico oscilatorio. Este campo genera a su vez una corriente oscilatoria en los iones y electrones formados a partir del argo n. La unidad apareadora de impedancia permite acoplar ecientemente la energ a RF del generador con la de la bobina de carga. La unidad puede ser de tipo activa o pasiva. Una unidad apareadora activa ajusta la impedancia de la energ a RF mediante una red capacitiva, mientras que la de tipo pasiva ajusta la impedancia directamente a trave s del circuito generador. La transferencia de energ a entre la bobina y el argo n que se produce dentro de la bobina de carga del generador RF genera un plasma auto nomo. Los iones y electrones del argo n colisionan con los a tomos del analito que esta n en el plasma a alta temperatura, ioniza ndolos y excita ndolos. La temperatura del plasma es de 6000 a 10 000 K, tal que ba sicamente todas las uniones covalentes y las interacciones entre los analitos se han eliminado.
N ESTA NDAR PREPARACIO

Se pueden adquirir soluciones esta ndar de uno o mu ltiples elementos, con concentraciones rastreables a esta ndares de referencia primarios, como los del Instituto Nacional de Normas y Tecnolog a (NIST, por sus siglas en ingle s), para emplearlas en la preparacio n de soluciones esta ndar de trabajo. Como alternativa, se pueden preparar soluciones esta ndar de elementos a partir de materiales esta ndar y determinar independientemente sus concentraciones, segu n corresponda. Las soluciones esta ndar de trabajo, especialmente aquellas empleadas en los ana lisis a nivel de ultratraza, pueden tener una vida u til limitada. Como regla general, las soluciones esta ndar de trabajo deben conservarse por un per odo no mayor a 24 horas a menos que se demuestre estabilidad experimentalmente. La seleccio n de la matriz de la preparacio n esta ndar es de vital importancia. Los experimentos de recuperacio n de cantidades conocidas agregadas deben realizarse sobre matrices espec cas para la muestra para determinar la exactitud del me todo. Si los efectos de matriz de la
Para informacio n adicional acerca de la ablacio n la ser, ver Russo R, Mao X, Borisov O, Liu H. Laser ablation in atomic spectrometry. En: Encyclopedia of Analytical Chemistry: Instrumentation and Applications. New York: Wiley; 2000.
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ICPAES
El plasma inductivamente acoplado puede emplearse en sistemas de deteccio n o pticos o de espectrometr a de masas. En el primer caso, ICPAES, la deteccio n del analito se realiza a alguna de las longitudes de onda de emisio n del analito en cuestio n. Existe una amplia variedad de sistemas ICPAES disponibles con distintas tecnolog as, cada uno con distintas capacidades y con sus propias ventajas y desventajas. Los sistemas de deteccio n simulta nea permiten analizar varios elementos al mismo tiempo, reduciendo los tiempos de ana lisis, y mejorando la deteccio n y correccio n de ruido de fondo. Los sistemas secuenciales funcionan con una longitud de onda a la vez y luego pasan a la siguiente y, a menudo, ofrecen una variedad ma s amplia de bandas anal ticas para seleccionar la de trabajo. Los detectores en arreglo, incluyendo los dispositivos de acoplamiento de carga y los de inyeccio n de carga, con detectores dispuestos en un chip, brindan la posibilidad de combinar las ventajas que ofrecen los sistemas secuenciales y los simulta neos. Estos tipos de dispositivos de deteccio n se usan con los espectro metros ma s potentes, ofreciendo un ana lisis ra pido y una amplia seleccio n de bandas anal ticas. El ICP puede observarse en planos axiales o radiales (tambie n llamados laterales). La antorcha se coloca por lo general en posicio n horizontal en plasmas de observacio n axial y la muestra se observa desde el a pice; la antorcha se coloca en posicio n vertical en plasmas de observacio n radial y la muestra se observa lateralmente. La observacio n axial del plasma puede ofrecer relaciones sen al ruido mayores (mejores l mites de deteccio n y precisio n); no obstante, tambie n incurre en mayores interferencias espectrales y de matriz. Los me todos validados con un instrumento de conguracio n radial probablemente no sera n cien por ciento aplicables a un instrumento de conguracio n axial y viceversa. Tambie n existen sistemas con ambas conguraciones de observacio n, lo que permite al analista aprovechar la conguracio n de antorcha ma s ventajosa. La seleccio n de la conguracio n de la antorcha o ptima dependera de la matriz de la muestra, del analito en cuestio n, de la(s) longitud(es) de onda anal tica seleccionada(s), del costo de la instrumentacio n, de la sensibilidad requerida y de los instrumentos disponibles en cada laboratorio. Independientemente de la conguracio n de la antorcha o de la tecnolog a del detector, la ICPAES es una te cnica que proporciona una medicio n cuantitativa y/o cualitativa de la emisio n o ptica de a tomos e iones excitados a longitudes de onda espec cas. Estas mediciones luego se utilizan para determinar la concentracio n del analito en la muestra en estudio. Un a tomo o io n ato mico excitado emite un conjunto de diferentes frecuencias de luz caracter sticas de la transicio n energe tica t pica de ese elemento. En general, la intensidad de la luz es proporcional a la concentracio n del analito. Es necesario realizar correcciones por emisio n de fondo proveniente del plasma. Las concentraciones de la muestra se determinan por lo general a partir de una curva de trabajo de esta ndares conocidos sobre el intervalo de concentraciones similar al intervalo de intere s. Sin embargo, es posible realizar calibraciones de un u nico punto en determinadas circunstancias, como por ejemplo en el caso de las pruebas de l mite, si la metodolog a se ha validado en cuanto a su suciente especicidad, sensibilidad, linealidad, exactitud, precisio n, tolerancia y robustez. Debido a que las transiciones entre los niveles de energ a ato mica esta n bien denidas y a que los a tomos en ICP esta n bastante diluidos, las l neas de emisio n tienen anchos de bandas estrechos. Sin embargo, dado que los espectros de emisio n de la ICP contienen muchas l neas y que alas de estas l neas se superponen para producir un ruido de fondo casi continuo por encima del ruido continuo que resulta de la recombinacio n de iones de argo n con electrones, se requiere un espectro metro de alta resolucio n en la ICPAES. La decisio n respecto a que l nea espectral se va a medir debe incluir una evaluacio n de las potenciales interferencias espectrales. En la muestra, todos los a tomos se excitan simulta neamente, de manera que la presencia de mu ltiples elementos puede producir una superposicio n de espectros. Las interferencias espectrales tambie n pueden deberse a emisiones de fondo de la muestra o del plasma. Los ICP modernos generalmente cuentan con un dispositivo que permite realizar las correcciones de ruido de fondo as como se pueden aplicar varias te cnicas de correccio n de ruido de fondo. La correccio n de ruido de fondo simple generalmente consiste en medir la intensidad de la emisio n de fondo en algu n punto que no
se encuentre cercano al pico principal y restar el valor obtenido de la sen al total. Los modelos matema ticos para restar la sen al de la interferencia como correccio n de ruido de fondo tambie n pueden emplearse con ciertos tipos de espectro metros ICPAES. La seleccio n de la l nea espectral apropiada para el ana lisis es fundamental para un buen ana lisis por ICPAES, independientemente de la conguracio n de antorcha o del tipo de detector que se utilice. Aunque por lo general se preeran ciertas longitudes de onda, la seleccio n nal debe hacerse en el contexto de la matriz de la muestra, el tipo de instrumento y la sensibilidad requerida. El analista podr a comenzar con las longitudes de onda recomendadas por el fabricante del instrumento y luego seleccionar otras longitudes de onda alternativas segu n las recomendaciones del fabricante o en funcio n de las tablas de longitudes de onda publicadas.3,4,5,6,7 En u ltima instancia, se debe demostrar experimentalmente que la seleccio n de longitudes de onda para el ana lisis ofrece suciente especicidad, sensibilidad, linealidad, exactitud y precisio n en cada caso particular. Se pueden optimizar la potencia, las velocidades de ujo del gas, la altura de la visualizacio n y la posicio n de la antorcha a n de obtener la mejor sen al. Sin embargo, se debe tener en cuenta que estas variables pueden inuir en las interferencias espectrales y de matriz. En general, es recomendable utilizar la ICP en condiciones robustas, las cuales se pueden evaluar basa ndose en el par de l neas MgII / MgI a (280,270 nm / 285,213 nm). Si el cociente de las intensidades es mayor de 6,0 en una solucio n acuosa, la ICP es robusta, y menos susceptible a interferencias de la matriz. Generalmente se busca un cociente de aproximadamente 10,0. Tener en cuenta que el te rmino condiciones robustas no guarda relacio n alguna con el te rmino robustez aplicado a la validacio n de me todos anal ticos. No es obligatorio utilizar un instrumento con un cociente MgII / MgI mayor de 6,0, sin embargo, se sugiere para optimizar los para metros del instrumento en circunstancias diversas. El ana lisis de los elementos del Grupo I puede considerarse una excepcio n a esta estrategia. Cuando se forman iones ato micos a partir de elementos de este grupo, e stos asumen una conguracio n electro nica de gas noble, con la correspondiente alta energ a de excitacio n. Dado que el primer estado de excitacio n de estos iones es extremadamente alto, se excitan so lo unos pocos, por lo que la intensidad de la emisio n es baja. Esta situacio n puede mejorarse reduciendo la ionizacio n fraccionada, lo que puede lograrse ajustando a una potencia menor en combinacio n con ajustes en la altura de la visualizacio n o el ujo del gas nebulizador, o mediante el agregado de un agente supresor de la ionizacio n a las muestras y esta ndares. Cuando se utilizan disolventes orga nicos, a menudo es necesario usar ma s potencia, ma s ujo del gas intermedio e interno y menos ujo del gas nebulizador que con soluciones acuosas, y reducir el ujo del gas nebulizador. Cuando se emplean disolventes orga nicos, puede ser necesario inyectar pequen as cantidades de ox geno para que no se acumule carbo n en la antorcha.
Calibracio n
La exactitud de la longitud de onda en ICPAES debe determinarse de acuerdo con los procedimientos operativos del fabricante. Debido a las diferencias inherentes entre los distintos tipos de instrumentos disponibles, no se puede establecer un procedimiento de aptitud del sistema general. Deben efectuarse las rutinas de calibracio n recomendadas por el fabricante de cada ICP AES. Estas pruebas pudieran incluir, de manera no taxativa, la calibracio n de la longitud de onda para varios elementos con una solucio n de referencia, la calibracio n de la longitud de onda interna
Payling R, Larkins P. Optical Emission Lines of the Elements. New York: Wiley; 2000. 4 Harrison GR. Massachusetts Institute of Technology Wavelength Tables [tambie n conocida como MIT Wavelength Tables]. Cambridge, MA: MIT Press; 1969. 5 Winge RK, Fassel VA, Peterson VJ, Floyd MA. Inductively Coupled Plasma Atomic Emission Spectroscopy: An Atlas of Spectral Information. New York: Elsevier; 1985. 6 Boumans PWJM. Spectrochim Acta A. 1981;36B:169. 7 Boumans PWJM. Line Coincidence Tables for Inductively Coupled Plasma Atomic Emission Spectrometry. 2nd ed.; Oxford, UK: Pergamon; 1984.
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Pruebas F sicas / h730i Espectroqu mica de Plasma
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con mercurio (Hg) y el barrido espectral para ubicar los picos. El analista debe vericar el sistema segu n las recomendaciones del fabricante.
Estandarizacio n
El instrumento debe estandarizarse para la cuanticacio n al momento de utilizarlo. Sin embargo, dado que la ICPAES es una te cnica considerada en general lineal en el intervalo de 6 a 8 o rdenes de magnitud, no siempre es necesario demostrar continuamente la linealidad con una curva esta ndar compuesta por varios esta ndares. Una vez que el me todo se ha desarrollado y se emplea de forma rutinaria, el instrumento se puede calibrar con un blanco y un u nico esta ndar. Es apropiado emplear la calibracio n de un u nico punto en las pruebas de l mite de materiales de produccio n y productos nales si la metodolog a se ha validado de forma rigurosa en cuanto a su suciente especicidad, sensibilidad, linealidad, exactitud, precisio n, tolerancia y robustez. Tambie n es aceptable el empleo de estandarizacio n de un u nico punto en ana lisis cualitativos ICP AES en los que el propo sito del experimento es conrmar la presencia o ausencia de elementos sin el requisito de una cuanticacio n exacta. Se deben valorar un blanco y soluciones esta ndares que abarquen el intervalo esperado de concentraciones de la muestra y gracar la respuesta del detector en funcio n de la concentracio n del analito, tal como en el caso en que la concentracio n de un componente conocido se determina dentro de una tolerancia espec ca. Sin embargo, no siempre es posible emplear un esta ndar que abarque estas concentraciones cuando se realiza un ana lisis en el l mite de deteccio n o en su cercan a. En ana lisis realizados para demostrar la ausencia o eliminacio n de elementos por debajo de un l mite espec co es aceptable prescindir de un conjunto de esta ndares que abarquen todas las concentraciones. Es necesario elegir la cantidad y las concentraciones de las soluciones esta ndar utilizadas segu n el propo sito de la cuanticacio n, el analito en estudio, la sensibilidad deseada y la matriz de la muestra. Se debe emplear el ana lisis de regresio n de la gra ca del esta ndar para evaluar la linealidad de la respuesta del detector y, a menudo, las monograf as individuales pueden establecer criterios para el error residual de la l nea de regresio n. En un escenario o ptimo, se debe demostrar un coeciente de correlacio n para la curva de trabajo no menor de 0,99 u otro valor distinto si as se especica en la monograf a individual. Sin embargo, la naturaleza de la matriz de la muestra, el o los analitos, la sensibilidad deseada y el tipo de instrumentacio n disponible pueden hacer que un coeciente de correlacio n inferior a 0,99 sea aceptable. En estos casos se recomienda que el analista proceda con sumo cuidado y que utilice esta ndares de trabajo adicionales. A n de demostrar la estabilidad de la estandarizacio n inicial del sistema, se debe volver a determinar una solucio n de las usadas para trazar la curva esta ndar inicial, a modo de esta ndar de vericacio n, a intervalos apropiados durante el ana lisis de todo el conjunto de muestras. El esta ndar nuevamente analizado debe concordar con una aproximacio n de +10% con su valor esperado, o segu n se especique en la monograf a individual, para el caso de ana lisis de un u nico elemento, con longitudes de onda anal ticas comprendidas entre 200 y 500 nm o con concentraciones de 41 mg por mL. El esta ndar nuevamente analizado debe concordar con una aproximacio n de +20% con su valor teo rico, o segu n se especique en la monograf a individual, para el caso de ana lisis de varios elementos con longitudes de onda anal ticas de 5200 o 4500 nm o con concentraciones de 51 mg por mL. Si la monograf a individual proporciona pautas diferentes para el nuevo ana lisis del esta ndar de vericacio n, rige lo que especica la monograf a.
utilizacio n de condiciones alternativas, y para nes ociales, las condiciones especicadas en la monograf a tienen precedencia. La informacio n obtenida de cada introduccio n de una u nica muestra se ste puede ser el promedio de lecturas considera un u nico resultado. E secuenciales y repetidas de una u nica introduccio n de la solucio n de la muestra o del esta ndar apropiado. Las concentraciones de la muestra se calculan a partir de la curva de trabajo que se obtiene gracando la respuesta del detector en funcio n de la concentracio n del analito en las soluciones esta ndar. Con frecuencia, el instrumento realiza este ca lculo directamente.
ICPMS
Cuando el plasma inductivamente acoplado emplea un sistema de deteccio n de espectrometr a de masas, la te cnica se denomina de plasma inductivamente acoplado y espectrometr a de masas (ICP MS, por sus siglas en ingle s). En esta te cnica, los analitos se detectan directamente a sus masas ato micas. Como estas masas deben estar cargadas para que se puedan detectar en la ICPMS, el me todo depende de la capacidad de la fuente del plasma de atomizar e ionizar los componentes de la muestra. Al igual que en la ICP AES, se encuentra disponible una amplia variedad de sistemas ICP MS. Los sistemas ma s comunes son los de cuadrupolo. Los sistemas de ICPMS de "tiempo de vuelo" cobran cada vez mayor importancia. Si bien au n no se utilizan de forma generalizada, es muy probable que aumente su uso en el futuro. Adicionalmente, tambie n se encuentran disponibles instrumentos de alta resolucio n por sectores de campo. La ICPMS, cualquiera sea el disen o o la conguracio n del instrumento, proporciona una medida cuantitativa y cualitativa de los componentes de la muestra. Los a tomos del analito generan iones por efecto del plasma. Estos iones se extraen del plasma que se encuentra a presio n atmosfe rica a trave s de un cono de muestreo y se transeren a una zona de baja presio n, que normalmente se mantiene a una presio n cercana a 1 Torr. En este proceso de extraccio n, se forma un haz superso nico a partir de los gases del plasma muestreados conteniendo los analitos que determina muchas de las propiedades de los iones resultantes del analito. El cono de seleccio n, ubicado detra s del cono de muestreo, selecciona los iones de haz superso nico a medida que emergen del cono de muestreo. Detra s del cono de seleccio n se encuentra una zona de baja presio n, que normalmente se mantiene cercana a un miliTorr. Finalmente, los iones seleccionados atraviesan el oricio de una tercera etapa e ingresan a una zona que se mantiene cercana a un microTorr, donde encuentran la o ptica para iones y pasan al espectro metro de masas. All los iones se separan segu n su relacio n masa-carga: (m/z). El intervalo de masas de ICPMS comprende hasta 240 unidades de masa ato mica (uma). Segu n la conguracio n del equipo, se pueden formar aductos de analito con diluyentes, argo n o sus productos de descomposicio n. Tambie n se forman o xidos e iones de analito de carga mu ltiple, los cuales pueden aumentar la complejidad de los espectros de masa resultantes. La optimizacio n de los para metros operativos reduce las interferencias; estos para metros incluyen los ujos de gas (velocidades de ujo del gas central, intermedio y exterior), ujo de la solucio n de la muestra, potencia de RF, voltaje del lente de extraccio n, etc.; o mediante la utilizacio n de celdas de colisio n o de reaccio n, u operando con plasma fr o, si estuviera disponible en el instrumento. Salvo que el laboratorio genere o analice iso topos que no existen en la naturaleza, una lista de iso topos naturales proporcionara al analista iso topos aceptables para nes anal ticos. Los perles isoto picos tambie n facilitan la identicacio n y conrmacio n de elementos. Adema s, existen tablas de interferencias comunes y de interferencias isoba ricas poliato micas con factores de correccio n. La ICPMS generalmente ofrece l mites de deteccio n considerablemente ma s bajos (mejores) que la ICPAES, en gran medida gracias a que genera un ruido de fondo extremadamente bajo. Esta capacidad es una de las grandes ventajas de la ICPMS en la determinacio n de concentraciones muy bajas de un analito o cuando se requiere la eliminacio n de interferencias de la matriz. En el u ltimo caso, algunas interferencias se pueden evitar simplemente con una dilucio n adicional de la solucio n de muestra. En algunas aplicaciones, se pueden detectar analitos a concentraciones inferiores a ng
Procedimiento
Utilizar los para metros del instrumento especicados en la monograf a individual. Sin embargo, debido a las diferencias en las conguraciones de los equipos, los para metros recomendados por el fabricante pueden emplearse y modicarse segu n sea necesario. Aunque una monograf a especique los para metros a utilizar, se pueden utilizar otros para metros operativos adecuados y ajustar las condiciones de trabajo cuando sea necesario. Pero es necesario contar con datos de validacio n adecuados que respalden la
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por L (ppt) empleando la ICPMS. Como regla general, la ICPMS como te cnica requiere que las muestras contengan sustancialmente menos so lidos totales disueltos que los que requiere la ICPAES. El e xito de un ana lisis ICPMS depende de la seleccio n correcta de la masa anal tica, independientemente del disen o del instrumento. Si bien algunas masas se consideran primariamente, dada su rica abundancia natural, a veces se utiliza una masa alternativa para un elemento determinado a n de evitar la superposicio n de espectros (interferencias isoba ricas). La seleccio n de la masa anal tica siempre se debe realizar en funcio n de la matriz de la muestra, del tipo de instrumento y de las concentraciones a medir. El analista podr a comenzar con las masas recomendadas por el fabricante del instrumento en particular y luego seleccionar otras masas alternativas segu n las recomendaciones del fabricante o en funcio n de las tablas de iso topos naturales publicadas.8 La optimizacio n de un me todo de ICPMS depende de los para metros del plasma y el medio de introduccio n de la muestra. Estos instrumentos permiten regular la potencia, las velocidades de ujo del gas y la posicio n de la antorcha a n de obtener la sen al ma s adecuada. Cuando se utilizan disolventes orga nicos, a menudo es necesario utilizar ma s potencia y menos ujo del gas nebulizador que con soluciones acuosas. En algunos casos puede que sea necesario agregar pequen as cantidades de ox geno en el gas central o intermedio para que no se deposite carbo n en la antorcha o en el oricio del cono de muestreo. Con algunos disolventes orga nicos puede ser necesario usar conos de muestreo o de seleccio n con punta de platino para disminuir la degradacio n del cono.
A n de demostrar la estabilidad del sistema desde la normalizacio n inicial, se debe volver a determinar una solucio n de las usadas para trazar la curva esta ndar inicial, a modo de esta ndar de vericacio n, a intervalos apropiados durante el ana lisis de todo el conjunto de muestras. Se pueden establecer intervalos apropiados, como por ejemplo cada 5 o 10 muestras o segu n lo considere satisfactorio el analista, teniendo en cuenta el tipo de ana lisis en cuestio n. El esta ndar nuevamente analizado debe concordar con una aproximacio n de +10% con su valor esperado para el caso de ana lisis de un u nico elemento, con masas anal ticas exentas de interferencias o con concentraciones de 41 ng por mL. El esta ndar nuevamente analizado debe concordar con su valor esperado con una aproximacio n de +20% para ana lisis de mu ltiples elementos o cuando las concentraciones son de 51 ng por mL. Si la monograf a individual proporciona pautas diferentes para el nuevo ana lisis del esta ndar de vericacio n, rige lo que especica la monograf a. El me todo de esta ndar adicionado debe usarse en situaciones en que se esperan o sospechan interferencias de la matriz. Este me todo implica agregar una concentracio n conocida del elemento analito a la solucio n de muestra a no menos de dos niveles de concentracio n. La respuesta del instrumento se graca en funcio n de la concentracio n del elemento analito agregado y se traza la recta de regresio n lineal correspondiente a los datos. La concentracio n del analito en la muestra se obtiene multiplicando el valor absoluto del punto donde la recta corta el eje x por el factor de dilucio n que corresponda.
Calibracio n
En las determinaciones por ICPMS, la exactitud del espectro de masas debe estar de acuerdo con lo indicado en los procedimientos operativos aplicables. Debido a las diferencias inherentes en los distintos tipos de instrumentos disponibles, no se ha establecido un procedimiento de aptitud del sistema general. Se deben consultar las pruebas recomendadas por el fabricante de cada instrumento de ICP MS. Estas pruebas pueden incluir, de manera no taxativa, la puesta a punto con una o ma s masas de referencia, el barrido espectral para ubicar los picos y la calibracio n de masas. El analista debe vericar el sistema segu n las recomendaciones del fabricante del instrumento.
Procedimiento
Utilizar los procedimientos que se indican en la monograf a individual para el modo de deteccio n y los para metros del instrumento. Aunque una monograf a especique los para metros a utilizar, se pueden utilizar otros para metros operativos adecuados y ajustar las condiciones de trabajo segu n sea necesario. Pero es necesario contar con datos de validacio n adecuados que respalden la utilizacio n de condiciones alternativas, y para nes ociales, las condiciones especicadas en la monograf a tienen precedencia. Sin embargo, debido a las diferencias en las conguraciones de los equipos, el analista puede comenzar con los para metros por defecto sugeridos por el fabricante y modicarlos segu n sea necesario. La informacio n obtenida de cada introduccio n de una u nica muestra se ste puede ser el promedio de lecturas considera un u nico resultado. E secuenciales y repetidas de una u nica introduccio n de la solucio n de la muestra o del esta ndar apropiado. Las concentraciones de la muestra se calculan a partir de la curva de trabajo que se obtiene gracando la respuesta del detector en funcio n de la concentracio n del analito en las soluciones esta ndar. Los instrumentos ma s modernos cuentan con dispositivos que realizan este ca lculo.
Estandarizacio n
Se debe estandarizar el instrumento para la cuanticacio n al momento de su uso. Como la respuesta (sen al en funcio n de la concentracio n) de la ICPMS normalmente se considera lineal en el intervalo de 6 a 8 o rdenes de magnitud, no siempre es necesario demostrar continuamente la linealidad mediante una curva de trabajo. Una vez que el me todo se ha desarrollado y se emplea de forma rutinaria, el instrumento se puede calibrar con un blanco y un u nico esta ndar. Es apropiado emplear la calibracio n de un u nico punto en las pruebas de l mite de materiales de produccio n y productos nales si la metodolog a se ha validado de forma rigurosa en cuanto a su suciente especicidad, sensibilidad, linealidad, exactitud, precisio n, tolerancia y robustez. Se deben valorar un blanco y soluciones esta ndares que abarquen el intervalo esperado de concentraciones de la muestra y gracar la respuesta del detector en funcio n de la concentracio n del analito. La seleccio n de la cantidad y concentracio n de las soluciones esta ndar utilizadas se realizara segu n el analito en estudio, las concentraciones esperadas y la matriz de la muestra y quedan a criterio del analista. En un escenario o ptimo, se debe demostrar un coeciente de correlacio n para la curva esta ndar de trabajo no menor de 0,99 u otro valor distinto si as se especica en la monograf a individual. Sin embargo, la naturaleza de la matriz de la muestra, el analito, la sensibilidad deseada y el tipo de instrumentacio n disponible pueden hacer que un coeciente de correlacio n inferior a 0,99 sea aceptable. En estos casos se recomienda que el analista proceda con sumo cuidado y que utilice esta ndares de trabajo adicionales.
GLOSARIO
Serie de tres tubos conce ntricos, generalmente de cuarzo, donde se genera el plasma inductivamente acoplado. N: Caracter CELDA DE COLISIO stica de disen o de algunos de los instrumentos de ICPMS. Las celdas de colisio n permiten reducir las interferencias causadas por el argo n o iones poliato micos y facilitan el ana lisis de los elementos que podr an estar afectados por esas interferencias. N: Es similar a la Celda de Colisio CELDA DE REACCIO n, pero funciona bajo un principio diferente. Esta disen ada para reducir o eliminar las interferencias de espectro. CONO DE MUESTREO: Un cono de metal (generalmente con la punta de platino, aluminio o n quel) con una pequen a abertura a trave s de la cual uye la muestra ionizada una vez que emergio del plasma. N: Un cono meta CONO DE SELECCIO lico con una abertura por donde uye la muestra ionizada luego de pasar por el cono de muestreo y antes de ingresar a la zona de alto vac o de ICPMS. NDAR ADICIONADO: Me ESTA todo que se utiliza para determinar la concentracio n real del analito en la muestra cuando la viscosidad o los efectos de la matriz pueden causar determinaciones erro neas.
ANTORCHA:
Horlick G, Montaser A. Analytical characteristics of ICPMS. En: Montaser A, Editor. Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry. New York: WileyVCH; 1998 : 516518.
Pruebas F sicas / h785i Osmolalidad y Osmolaridad
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NDAR INTERNO: El elemento que se agrega o esta ESTA presente en la misma concentracio n en los blancos, esta ndares y muestras, y se usa como referencia de intensidad en el ana lisis. Es un requisito indispensable en los ana lisis cuantitativos por ICPMS y es recomendable para trabajar con ICPAES. GAS AUXILIAR: Ver Gas Intermedio (o Auxiliar). GAS CENTRAL (O NEBULIZADOR): Uno de los tres ujos de argo n en una antorcha ICP. El gas central se emplea para nebulizar la solucio n de la muestra, formando una neblina de n simas part culas, que luego pasa al tubo central de la antorcha para ingresar al plasma. GAS DE PLASMA: Ver Gas Externo (o Refrigerante o de Plasma). GAS EXTERNO (O REFRIGERANTE O DE PLASMA): Fuente principal de suministro de gas para el plasma. GAS INTERMEDIO (O AUXILIAR): Gas que se utiliza para despegar el plasma de la supercie de la antorcha, y as se impide que el tubo intermedio se funda y se acumulen carbo n y sales en el tubo interno. GAS REFRIGERANTE: Ver Gas Externo (o Refrigerante o de Plasma). tomos que se convierten en iones LTIPLE: A IONES CON CARGA MU con carga doble o triple (X++, X+++, etc.) cuando se someten a la alta temperatura de ionizacio n de la ICP. Cuando se detectan por MS, la masa aparente de estos iones sera o 1 mica. 3 de la masa ato NEBULIZADOR: El dispositivo que se utiliza para transformar la muestra en un aerosol homoge neo que se mezcla con el argo n, que posteriormente se env a a la ICP. O: Condiciones para el plasma empleado por ICPMS PLASMA FRI que producen un plasma ma s fr o que lo habitual en estos ana lisis. Esta condicio n se obtiene mediante menos potencia y mayor velocidad de ujo del gas central, y se emplea para contribuir en la reduccio n de interferencias isoto picas ocasionadas por el argo n y algunos iones poliato micos. POTENCIA: El nu mero de vatios necesario para encender el gas y mantener el plasma durante un ana lisis. Los requisitos de potencia var an segu n la matriz de la muestra y cada analito. m: La masa del io n en estudio. SECUENCIAL: Una de las posibles conguraciones para la AES o MS en la que las l neas de emisio n discretas o picos isoto picos se observan mediante un barrido o salteo del intervalo espectral con un monocromador o por barrido del espectro metro de masas. NEA: Una de las posibles conguraciones para la AES SIMULTA o MS en la que las l neas de emisio n escogidas o picos isoto picos se observan al mismo tiempo con un policromador o espectro metro de masas simulta neo, con lo cual aumenta la velocidad del ana lisis en un ana lisis de muestras con varios elementos. N AXIAL: Conguracio OBSERVACIO n del plasma en la te cnica de AES en la que el plasma esta orientado hacia el recorrido o ptico del espectro metro, tambie n conocida con el nombre de observacio n desde el a pice. N LATERAL: Ver Observacio OBSERVACIO n Radial. N RADIAL: Conguracio OBSERVACIO n del plasma en la te cnica de AES en la que el plasma se visualiza de forma ortogonal con respecto al recorrido o ptico del espectro metro. Tambie n se denomina observacio n de lado. Ver tambie n Observacio n Lateral.&1S (USP30)
h785i OSMOLALIDAD Y OSMOLARIDAD
OSMOLARIDAD
La osmolaridad de una solucio n es una cantidad teo rica expresada en osmoles por L (Osmol por L) de una solucio n y se usa ampliamente en la pra ctica cl nica porque expresa los osmoles en funcio n del volumen. La osmolaridad no se puede medir pero se calcula teo ricamente a partir del valor de osmolalidad medido experimentalmente. A veces, la osmolaridad (c) se calcula teo ricamente a partir de las concentraciones molares: c = ici en donde i es la que se dene anteriormente y ci es la concentracio n molar del ie simo soluto (el nu mero ordinal del soluto) en solucio n. Por ejemplo, la osmolaridad de una solucio n que se prepara disolviendo 1 g de vancomicina en 100 mL de solucio n de cloruro de sodio al 0,9% se puede calcular de la siguiente manera:
& [3 6 10 g/L/1449,25(peso mol. de vancomicina) + 2 6 9 g/L/ 58,44(peso mol. de cloruro de sodio)] 6 1000 = 329 mOsmol/ L&1S (USP30)
El resultado sugiere que la solucio n es ligeramente hiperosmo tica dado que la osmolalidad de la sangre esta entre 285 y 310 mOsmol por kg. Sin embargo, la solucio n ha resultado ser hipoosmo tica y tiene una osmolalidad determinada experimentalmente de 255 mOsmol por kg.1 El ejemplo ilustra que los valores de osmolaridad calculados teo ricamente a partir de la concentracio n de una solucio n se deben interpretar con cautela y este valor puede no representar las propiedades osmo ticas de las soluciones de infusio n. La discrepancia entre los resultados teo ricos (osmolaridad) y los experimentales (osmolalidad) se debe, en parte, al hecho de que la presio n osmo tica esta relacionada con la osmolalidad y no con la osmolaridad. Ma s signicativamente, la discrepancia entre los resultados experimentales y los ca lculos teo ricos se debe a que la presio n osmo tica de una solucio n real es menor que la de una solucio n ideal debido a las interacciones entre las mole culas del soluto o entre las mole culas del soluto y del disolvente en una solucio n. Estas interacciones reducen la presio n que ejercen las mole culas del soluto sobre la membrana semipermeable, lo que reduce los valores experimentales de la osmolalidad en comparacio n con los valores teo ricos. Esta diferencia esta relacionada con el coeciente osmo tico molal (m,i). El ejemplo tambie n ilustra la importancia de determinar experimentalmente la osmolalidad de una solucio n, en vez de calcular el valor teo ricamente. Cambio en la redaccio n:
N DE LA OSMOLALIDAD MEDICIO
Normalmente, el valor de osmolalidad de una solucio n se determina midiendo el descenso del punto de congelacio n de una solucio n. AparatoEl aparato, un osmo metro para medir el descenso del punto de congelacio n, consiste en lo siguiente: un medio para enfriar el recipiente utilizado para la medicio n; un resistor sensible a la temperatura (termistor), con un dispositivo adecuado para medir la
1
Kastango, E.S. y Hadaway, L. International Journal of Pharmaceutical Compounding 5, (2001) 465-469.
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h785i Osmolalidad y Osmolaridad / Pruebas F sicas
diferencia de potencial o de corriente y que puede graduarse en funcio n de cambios de temperatura o en osmolalidad; y un mecanismo para mezclar la muestra. Los osmo metros que miden la presio n de vapor de las soluciones se emplean con menor frecuencia. Requieren un volumen de muestra ma s pequen o (generalmente aproximadamente 5 mL), aunque la exactitud y precisio n de los resultados de las determinaciones de osmolalidad son comparables a las obtenidas mediante el uso de osmo metros que dependen de la observacio n del punto de congelacio n de las soluciones. Soluciones Esta ndarPreparar las Soluciones Esta ndar como se indica en la Tabla 1, segu n sea necesario. Solucio n de PruebaEn el caso de un so lido para inyeccio n, reconstituir con el diluyente apropiado segu n se indica en las instrucciones del etiquetado. En el caso de soluciones, usar la muestra tal como se encuentra. [NOTASe puede diluir una solucio n para que quede dentro del intervalo de medicio n del osmo metro, si fuera necesario, pero el resultado se debera expresar como el de la solucio n diluida y NO se debe multiplicar por un factor de dilucio n para calcular la osmolalidad de la solucio n original, &a menos que se especique algo diferente en la monograf a.&1S (USP30) El coeciente osmo tico molal es una funcio n de la concentracio n. Por lo tanto, cambia con la dilucio n.] Procedimiento&Primero, calibrar el instrumento segu n las instrucciones del fabricante. Conrmar la calibracio n del instrumento con, por lo menos, dos soluciones de la Tabla 1 de manera que las osmolalidades de las Soluciones Esta ndar abarquen el intervalo de osmolalidad esperado de la Solucio n de Prueba. La lectura del instrumento debe estar dentro de +2 mOsmol/kg de la Solucio n Esta ndar (sobre el intervalo esta ndar de 100 a 700 mOsmol/kg).&1S (USP30) Introducir un volumen adecuado de cada Solucio n Esta ndar en la celda de medicio n conforme a las instrucciones del fabricante y poner en marcha el sistema de enfriamiento. En general, el dispositivo de mezcla se programa para que opere a una temperatura inferior a la temperatura ma s baja esperada de descenso del punto de congelacio n. El aparato indica cuando se ha logrado el equilibrio. Calibrar el osmo metro utilizando un dispositivo de ajuste adecuado de modo que la lectura corresponda a la osmolalidad o al valor de descenso del punto de congelacio n de la Solucio n Esta ndar que aparece en la Tabla 1.
[NOTAAlgunos instrumentos indican la osmolalidad y otros muestran el descenso del punto de congelacio n.] Antes de cada medicio n, enjuagar la celda de medicio n por lo menos dos veces con la solucio n a analizar. Repetir el procedimiento con cada Solucio n de Prueba. Leer la osmolalidad de la Solucio n de Prueba directamente o calcularla a partir del valor obtenido para el descenso del punto de congelacio n. Suponiendo que el valor del coeciente osmo tico es esencialmente el mismo ya sea que la concentracio n se exprese en molalidad o molaridad, la osmolalidad de una solucio n determinada experimentalmente se puede convertir en osmolaridad de la misma manera que la concentracio n de una solucio n se convierte de molalidad a molaridad. A menos que una solucio n este muy concentrada, la osmolaridad de una solucio n (c) se puede calcular a partir de su osmolalidad determinada experimentalmente (m): c = 1000m / (1000 / r + wi i) donde wi es el peso en g; y i es el volumen espec co parcial, en mL por g, del ie simo soluto (el nu mero ordinal del soluto). El volumen espec co parcial de un soluto es el cambio en volumen de una solucio n cuando se disuelve 1 g adicional de soluto en la solucio n. Este volumen se puede determinar midiendo las densidades de la solucio n antes y despue s de agregar el soluto. Los volu menes espec cos parciales de las sales son generalmente muy pequen os, alrededor de 0,1 mL por g. Sin embargo, los otros solutos son generalmente mayores. Por ejemplo, los volu menes espec cos parciales de los aminoa cidos esta n entre 0,6 mL y 0,9 mL por g. &Se puede demostrar por la ecuacio n anterior que correlaciona la osmolaridad con la osmolalidad que, c = m (r c ) donde r es la densidad de la solucio n y c es la concentracio n de soluto total, ambas expresadas en g por mL. Por lo tanto, alternativamente, la osmolaridad puede calcularse tambie n a partir de la osmolalidad determinada experimentalmente a partir de la medicio n de la densidad de la solucio n mediante un me todo adecuado y el peso total del soluto, despue s de la correccio n por contenido de agua, disuelto por mL de la solucio n.&1S (USP30)
Tabla 1. Soluciones Esta ndar para Calibracio n del Osmo metro2

Soluciones Esta ndar (Peso en g de cloruro de sodio por kg de agua)
Osmolalidad (mOsmol/kg) (m) 100 200 300 400 500 600 700
Coeciente Osmo tico Molal (m, NaCl) 0,9463 0,9337 0,9264 0,9215 0,9180 0,9157 0,9140
Descenso del Punto de Congelacio n (8 ) Tf 0,186 0,372 0,558 0,744 0,930 1,116 1,302
3,087 6,260 9,463 12,684 15,916 19,147 22,380

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Adaptado de la Farmacopea Europea, 4a Edicio n, 2002, pg. 50.
Pruebas F sicas / h905i Uniformidad de Unidades de Dosicacio n
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h905i UNIFORMIDAD DE N UNIDADES DE DOSIFICACIO
(W3)
(W4) Cambio en la redaccio n: [NOTAEn este cap tulo, los te rminos unidad y unidad de dosicacio n son sino nimos.] Para garantizar la uniformidad de las unidades de dosicacio n, cada unidad en un lote debe tener un contenido de fa rmaco dentro de un intervalo estrecho alrededor de la cantidad declarada. Las unidades de dosicacio n se denen como formas farmace uticas que contienen una u nica dosis o parte de una dosis de un fa rmaco en cada unidad. .Para suspensiones, emulsiones or geles en envases de dosis u nica destinadas para administracio n to pica no se aplica la especicacio n de la uniformidad de las unidades de dosicacio n..1S (USP30) El te rmino uniformidad de unidades de dosicacio n se dene como el grado de uniformidad en el contenido del fa rmaco entre las unidades de dosicacio n. Por lo tanto, los requisitos de este cap tulo son aplicables a cada fa rmaco incluido en unidades de dosicacio n que contengan uno o ma s fa rmacos, a menos que se especique algo diferente en la monograf a individual. La uniformidad de las unidades de dosicacio n se puede demostrar mediante uno de los siguientes me todos, Uniformidad de Contenido o Variacio n de Peso (ver Tabla 1). La prueba de Uniformidad de Contenido se basa en la valoracio n individual del contenido de un fa rmaco o fa rmacos en un nu mero de unidades de dosicacio n para determinar si el contenido individual se encuentra dentro de los l mites jados. El me todo de Uniformidad de Contenido se puede aplicar en todos los casos. La prueba de Uniformidad de Contenido se requiere para las formas farmace uticas que se describen en (C1)(C6) a continuacio n: (C1) tabletas recubiertas, excepto las tabletas recubiertas con pel cula que contengan 25 mg o ma s de un fa rmaco que corresponda al 25% o ma s (en peso) de una tableta; sistemas transde rmicos; suspensiones, emulsiones o geles en envases .unitarios.1S (USP30) o en ca psulas blandas destinadas exclusivamente para administracio n siste mica (no aplicable a los medicamentos destinados para administracio n .to pica); .1S (USP30) inhalaciones envasadas en unidades de dosis ja (excepto las soluciones para inhalacio n envasadas en ampollas de vidrio o de pla stico destinadas para usar en nebulizadores). Para inhaladores y unidades de dosis ja que declaran estar destinadas para ser utilizadas con un dispositivo de inhalacio n espec co, ver tambie n Aerosoles, Atomizadores Nasales, Inhaladores de Dosis Fija e Inhaladores de Polvo Seco h601i; so lidos (incluidos los so lidos este riles) envasados en envases unitarios y que contienen sustancias agregadas inactivas o activas, excepto cuando se pueda aplicar la prueba de Variacio n de Peso en los .casos .1S (USP30) especiales que se indican a continuacio n en (W3)..1S (USP30); y supositorios.
so lidos (incluidos los so lidos este riles) envasados en envases unitarios, con o sin sustancias agregadas, activas o inactivas, que hayan sido preparados por liolizacio n a partir de soluciones verdaderas en sus envases nales y que declaran este me todo de preparacio n; y ca psulas duras, tabletas sin cubierta o tabletas recubiertas con pel culas que contengan 25 mg o ma s de un fa rmaco que corresponda al 25% o ma s, en peso, de la unidad de dosicacio n o, en el caso de ca psulas duras, el contenido de las ca psulas, excepto que se demuestre la uniformidad de otros fa rmacos presentes en proporciones menores en cumplimiento de los requisitos de Uniformidad de Contenido.
La prueba de Uniformidad de Contenido se requiere para todas las formas farmace uticas que no cumplen las condiciones enumeradas anteriormente para la prueba de Variacio n de Peso. .Cuando se requiere el cumplimiento con la prueba de Uniformidad de Contenido, aplicando la cla usula que permite el uso de me todos alternativos provista en la seccio n Advertencias Generales de esta Farmacopea, los fabricantes pueden cumplir con este requisito mediante la aplicacio n de la prueba de Variacio n de peso, cuando la desviacio n esta ndar relativa (RSD, por sus siglas en ingle s) de la concentracio n del fa rmaco en las unidades de dosicacio n nal no es ma s de 2%. La determinacio n de la RSD puede basarse en datos de validacio n del proceso y de desarrollo del producto en poder del fabricante..1S (USP30) La RSD de la concentracio n es la RSD de la concentracio n por unidad de dosicacio n (p/p o p/v), en donde la concentracio n por unidad de dosicacio n es igual al resultado de la valoracio n por unidad de dosicacio n dividido por el peso de la unidad de dosicacio n individual. Ver la fo rmula de la RSD en la Tabla 2. .Sin embargo, aunque se emplee la prueba de Variacio n de peso con tales propo sitos, si fuera analizado, el producto debera cumplir con la prueba farmacopeica ocial de Uniformidad de Contenido..1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
(C2) (C3)
UNIFORMIDAD DE CONTENIDO
Seleccionar no menos de 30 unidades y proceder como se indica a continuacio n para cada forma farmace utica especicada. Cuando la cantidad de fa rmaco en una u nica unidad de dosicacio n diera de la cantidad requerida para la Valoracio n, ajustar el grado de dilucio n de las soluciones y/o el volumen de las al cuotas de manera que la concentracio n de los fa rmacos en la solucio n nal sea del mismo orden que la obtenida en el procedimiento de Valoracio n; o, en el caso de una volumetr a, usar una solucio n volume trica de distinta concentracio n, si fuera necesario, de manera que se requiera un volumen adecuado de solucio n volume trica (ver Volumetr a h541i); ver tambie n Procedimientos en Pruebas y Valoraciones en Advertencias y Requisitos Generales. Si se realizan tales modicaciones en el procedimiento de Valoracio n establecido en la monograf a individual, hacer los cambios correspondientes en la fo rmula de ca lculo y en el factor de valoracio n volume trica. Cuando se especica un Procedimiento especial para uniformidad de contenido en la prueba de Uniformidad de unidades de dosicacio n en la monograf a individual, hacer las correcciones necesarias de los resultados obtenidos como se indica a continuacio n. (1) Preparar una muestra compuesta por un nu mero suciente de unidades de dosicacio n para proporcionar la cantidad de muestra requerida en la Valoracio n en la monograf a individual ma s la cantidad requerida para el Procedimiento especial para uniformidad de contenido en la monograf a, reduciendo a polvo no las tabletas o mezclando el contenido de las ca psulas o las soluciones orales, las suspensiones, las emulsiones, los geles o los so lidos en envases unitarios para obtener una mezcla homoge nea. Si no se puede obtener una mezcla homoge nea de
(C4)
(C5)
(C6)
La prueba de Variacio n de Peso es aplicable para las siguientes formas farmace uticas: (W1) soluciones para inhalacio n envasadas en ampollas de vidrio o de pla stico, destinadas para usar en nebulizadores, y soluciones orales envasadas en envases de dosis u nica y en ca psulas blandas; so lidos (incluidos los so lidos este riles) envasados en envases unitarios y que no contienen sustancias agregadas, ya sea activas o inactivas;
(W2)
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h905i Uniformidad de Unidades de Dosicacio n / Pruebas F sicas
Tabla 1. Aplicacio n de las Pruebas de Uniformidad de Contenido (UC) y Variacio n de Peso (VP) para Formas Farmace uticas Dosis y Proporcio n de Fa rmaco !25 mg y !25% Forma Farmace utica Tabletas Tipo Sin cubierta Recubiertas Duras Blandas Subtipo Pel cula Otras Suspensio n, emulsio n o gel Soluciones VP VP UC VP UC VP VP VP UC UC VP UC UC UC UC UC VP VP VP UC UC VP 525 mg o 525%
Ca psulas
So lidos en envases unitarios
Componente u nico Varios componentes
Solucio n liolizada en envase nal Otros
Suspensio n, emulsio n o gel para uso siste mico exclusivamente, envasado en envases unitarios Soluciones para inhalacio n envasadas en ampollas de vidrio o de pla stico y destinadas para usar en nebulizadores, y soluciones orales envasadas en envases de dosis u nica y en ca psulas blandas Inhalaciones (que no sean soluciones para inhalacio n envasadas en ampollas de vidrio o de pla stico y destinadas para usar en nebulizadores) envasadas en unidades de dosicacio n prejadas Sistemas transde rmicos Supositorios Otros esta manera, emplear disolventes adecuados u otros procedimientos para preparar una solucio n que contenga todo el fa rmaco y usar al cuotas apropiadas de esta solucio n para los procedimientos especicados. (2) Valorar porciones separadas, medidas con exactitud, de la muestra compuesta de ca psulas o tabletas o suspensiones o inhalaciones o so lidos en envases unitarios, (a) como se indica en Valoracio n y (b) empleando el Procedimiento especial para uniformidad de contenido en la monograf a. (3) Calcular el peso del fa rmaco equivalente a 1 unidad de dosicacio n promedio, usando: (a) los resultados obtenidos mediante el procedimiento de Valoracio n y (b) los resultados obtenidos mediante el procedimiento especial. (4) Calcular el factor de correccio n, F, por la fo rmula: F = W/P en donde W es el peso del fa rmaco equivalente a 1 unidad de dosicacio n promedio obtenido mediante el procedimiento de Valoracio n y P es el peso del fa rmaco equivalente a 1 unidad de dosicacio n promedio obtenido mediante el procedimiento especial. Si
UC
UC
UC UC UC
UC UC UC
(6) Si F esta entre 1,030 y 1,100, o entre 0,900 y 0,970, calcular el peso del fa rmaco en cada unidad de dosicacio n multiplicando por F cada uno de los pesos hallados usando el procedimiento especial. Tabletas Sin Cubierta, Recubiertas o Moldeadas, Ca psulas, nica, Suspensiones, Soluciones Orales en .Envases de Dosis U Emulsiones o Geles en Envases Unitarios (destinadas exclusivamente para administracio n siste mica),.1S (USP30) y So lidos (incluidos So lidos Este riles) en Envases Unitarios Valorar 10 unidades individualmente como se indica en Valoracio n en la monograf a individual, a menos que se especique algo diferente en Procedimiento para uniformidad de contenido en la monograf a individual. Calcular el valor de aceptacio n como se indica a continuacio n. . Para soluciones orales en envases de dosis u nica y para suspensiones, emulsiones o geles en envases unitarios destinados exclusivamente para administracio n siste mica,.1S (USP30) realizar la Valoracio n sobre la cantidad de material bien mezclado que escurre de un envase individual en no ma s de 5 segundos o, para productos con valores altos de viscosidad, realizar la Valoracio n sobre la cantidad de material bien mezclado que se obtiene retirando cuantitativamente el contenido de un envase individual y expresar los resultados como la dosis entregada. Ca lculo del Valor de Aceptacio nCalcular el valor de aceptacio n, por la fo rmula:
es mayor de 10, el uso de un factor de correccio n no es va lido. (5) El factor de correccio n so lo se aplica si F no es menor de 1,030 ni mayor de 1,100, o no es menor de 0,900 ni mayor de 0,970. Si F esta comprendido entre 0,970 y 1,030, no se requiere correccio n.
en donde los te rminos se denen en la Tabla 2.
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Supositorios, Sistemas Transde rmicos e Inhalaciones Envasados en Unidades de Dosis Fija[NOTAPara estas formas farmace uticas no se requiere el ca lculo de valores de aceptacio n.] Valorar 10 unidades individualmente como se indica en Valoracio n en la monograf a individual, a menos que se indique algo diferente en Procedimiento para uniformidad de contenido. Cambio en la redaccio n:
w1, w2,..., wn A W
= = =
pesos individuales de las unidades analizadas, .por variacio n de peso,.1S (USP30) contenido de fa rmaco (% de la cantidad declarada) determinado como se describe en la Valoracio n y media de pesos individuales . ( w1, w2,..., wn ) de las unidades utilizadas en la Valoracio n..1S (USP30)
N DE PESO VARIACIO
Seleccionar no menos de 30 unidades de dosicacio n y proceder como se indica a continuacio n para la forma farmace utica especicada. El resultado de la Valoracio n, obtenido como se indica en la monograf a individual, se designa como resultado A, y se expresa como % de la cantidad declarada (ver Ca lculo del Valor de Aceptacio n). Suponer que la concentracio n (el peso del fa rmaco por el peso de la unidad de dosicacio n) es uniforme. [NOTAPara determinaciones de valoracio n se pueden extraer del mismo lote muestras diferentes de estas unidades de prueba.] Tabletas sin Cubierta o Recubiertas con Pel culaPesar con exactitud 10 tabletas individualmente. Calcular el contenido de fa rmaco de cada tableta, expresado como % de la cantidad declarada, a partir del peso de la tableta individual y del resultado de la Valoracio n. Calcular el valor de aceptacio n. Ca psulas DurasPesar con exactitud 10 ca psulas individualmente, teniendo cuidado de preservar la identidad de cada ca psula. Retirar el contenido de cada ca psula por un medio adecuado. Pesar individualmente con exactitud las cubiertas vac as y calcular para cada ca psula el peso neto de su contenido restando el peso de la cubierta del peso bruto respectivo. Calcular el contenido de fa rmaco de cada ca psula, expresado como % de la cantidad declarada, a partir del peso neto del contenido de la ca psula individual y del resultado de la Valoracio n. Calcular el valor de aceptacio n. Ca psulas BlandasPesar con exactitud 10 ca psulas intactas individualmente para obtener sus pesos brutos, teniendo cuidado de preservar la identidad de cada ca psula. Luego cortar y abrir las ca psulas con ayuda de un instrumento cortante seco, limpio y adecuado, como por ejemplo una tijera o una cuchilla alada, y retirar el contenido lavando con un disolvente adecuado. Dejar que el disolvente ocluido se evapore de las cubiertas a temperatura ambiente durante un periodo de aproximadamente 30 minutos, tomando precauciones para evitar la absorcio n o la pe rdida de humedad. Pesar las cubiertas individuales y calcular el contenido neto. Calcular el contenido de fa rmaco en cada ca psula, expresado como % de la cantidad declarada, a partir del peso neto del producto retirado de la ca psula individual y del resultado de la Valoracio n. Calcular el valor de aceptacio n. So lidos (Incluidos los So lidos Este riles) en Envases UnitariosProceder como se indica para Ca psulas Duras, tratando cada unidad como all se describe. Calcular el valor de aceptacio n. Soluciones Orales Envasadas en Envases . de Dosis nica.1S (USP30)Pesar con exactitud la cantidad de l U quido que escurre durante no ma s de 5 segundos de cada uno de 10 envases individuales. Si fuera necesario, calcular el volumen equivalente despue s de determinar la densidad. Calcular el contenido de fa rmaco del l quido que escurre de cada unidad, expresado como % de la cantidad declarada, a partir del peso neto del contenido del envase individual y del resultado de la Valoracio n. Calcular el valor de aceptacio n. Ca lculo del Valor de Aceptacio nCalcular el valor de aceptacio n como se muestra en Uniformidad de Contenido con la excepcio n de que el contenido individual de las unidades se reemplaza por el contenido estimado individual, como se dene ma s adelante. 1, 2,..., n = contenido estimado individual de las unidades analizadas, en donde i = wi 6 A / W,
Soluciones para Inhalacio n Envasadas en Ampollas de Vidrio o de Pla stico y Destinadas para Usar en Nebulizadores[NOTA Para estas formas farmace uticas no se requiere el ca lculo de valores de aceptacio n.] Pesar con exactitud 10 envases individualmente, teniendo cuidado de preservar la identidad de cada envase. Retirar el contenido de cada envase por un medio adecuado. Pesar individualmente con exactitud los envases vac os y calcular para cada envase el peso neto de su contenido, restando el peso del envase del peso bruto respectivo. A partir de los resultados de la Valoracio n, obtenidos como se indica en la monograf a individual, calcular el contenido de fa rmaco, expresado como % de la cantidad declarada, en cada uno de los envases. Cambio en la redaccio n:
CRITERIOS
Aplicar los siguientes criterios, a menos que se especique algo diferente en la monograf a individual. Tabletas Sin Cubierta, Recubiertas o Moldeadas, Ca psulas, nica, Suspensiones, Soluciones Orales en .Envases de Dosis U Emulsiones o Geles en Envases Unitarios (destinadas exclusivamente para administracio n siste mica),.1S (USP30) y So lidos (incluidos So lidos Este riles) en Envases UnitariosSe cumple con los requisitos de uniformidad de dosicacio n si el valor de aceptacio n de las primeras 10 unidades de dosicacio n es menor o igual a L1%. Si el valor de aceptacio n es mayor que L1%, analizar las siguientes 20 unidades y calcular el valor de aceptacio n. Se cumple con los requisitos si el valor de aceptacio n nal de las 30 unidades de dosicacio n es menor o igual a L1%, y si el contenido individual de ninguna unidad de dosicacio n es menor de .[1 (0,01)(L2)] M.1S (USP30) ni mayor de .[1 + (0,01)(L2)] M.1S (USP30) como se especica en Ca lculo del Valor de Aceptacio n en Uniformidad de Contenido o en Variacio n de Peso. A menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, L1 es 15,0 y L2 es 25,0. Supositorios L mite A (si el promedio de los l mites especicados en la denicio n de potencia en la monograf a individual es 100,0 por ciento o menos)A menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, los requisitos para uniformidad de dosicacio n se cumplen si la cantidad de fa rmaco en cada una de las 10 unidades de dosicacio n, como se determina en el me todo de Uniformidad de Contenido, esta n comprendidas entre 85,0% y 115,0% de la cantidad declarada, y la RSD es menor o igual a 6,0%. Si 1 unidad esta fuera del intervalo de 85,0% a 115,0% de la cantidad declarada y ninguna unidad esta fuera del intervalo de 75,0% a 125,0% de la cantidad declarada, o si la RSD es ma s de 6,0%, o si ambas condiciones prevalecen, analizar 20 unidades adicionales. Los requisitos se cumplen si no ma s de 1 unidad de las 30 esta fuera del intervalo de 85,0% a 115,0% de la cantidad declarada y ninguna unidad esta fuera del intervalo de 75,0% a 125,0% de la cantidad declarada y la RSD de 30 unidades de dosicacio n no es ma s de 7,8%. L mite B (si el promedio de los l mites especicados en la denicio n de potencia en la monograf a individual es ma s de 100,0 por ciento)
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Tabla 2 Denicio n Condiciones Valor
Variable
1, 2, . . ., n
n Si n = 10, entonces k = Si n = 30, entonces k =
k Desviacio n esta ndar de la muestra
Media de los contenidos individuales (1, 2, . . ., n), expresados como el porcentaje de la cantidad declarada Contenido individual de las unidades analizadas, expresado como porcentaje de la cantidad declarada Taman o de la muestra (nu mero de unidades en una muestra) Constante de aceptabilidad 2,4 2,0
RSD
Desviacio n esta ndar relativa (la desviacio n esta ndar de la muestra expresada como porcentaje de la media)
M (caso 1) a aplicar cuando T 5101,5 Valor de referencia
Si 98,5% 5X 5101,5%, entonces Si X 598,5%, entonces Si X 4101,5%, entonces Valor de referencia Si 98,5 5X 5T, entonces Si X 598,5%, entonces Si X 4T, entonces
h905i Uniformidad de Unidades de Dosicacio n / Pruebas F sicas
M=X (AV = ks) M = 98,5% (AV = 98,5 X + ks) M = 101,5% (AV = X 101,5 + ks) M=X (AV = ks) M = 98,5% (AV = 98,5 X + ks) M = T% (AV = X T + ks)
M (caso 2) a aplicar cuando T 4101,5
Tabla 2 (Continuacio n) Denicio n fo rmula general: Condiciones Valor
Variable
Valor de Aceptacio n (AV)
L1 Ma ximo intervalo permitido para la desviacio n de cada unidad de dosicacio n analizada a partir del valor calculado de M Para los valores inferiores, ningu n resultado de unidad de dosicacio n puede ser menor de & [1 (0,01)(L2)]M,&1S (USP30) mientras que para los valores superiores ningu n resultado de unidad de dosicacio n puede ser mayor de & [1 + (0,01)(L2)]M.&1S (USP30) (Esto esta basado en un valor de L2 de 25,0.)
Ma ximo valor de aceptacio n permitido
L2
(Ma s arriba se especican ca lculos para cada uno de los casos.) L1 = 15,0 a menos que se especique algo diferente en la monograf a individual L2 = 25,0 a menos que se especique algo diferente en la monograf a individual
T
& Contenido&1S (USP30) deseado &por unidad de dosicacio n al momento de la fabricacio n, expresado como porcentaje de la cantidad declarada.&1S (USP30) A los efectos de esta Farmacopea, a menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, T es &el promedio de los l mites especicados en la denicio n de potencia en la monograf a individual.&1S (USP30)
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h921i Determinacio n de Agua / Pruebas F sicas
(1) Si el valor promedio de las unidades de dosicacio n analizadas es 100,0 por ciento o menos, los requisitos son los especicados en el L mite A. (2) Si el valor promedio de las unidades de dosicacio n analizadas es mayor o igual al promedio de los l mites especicados en la denicio n de potencia en la monograf a individual, los requisitos son los especicados en el L mite A, excepto que la frase cantidad declarada se reemplaza por la frase cantidad declarada multiplicada por el promedio de los l mites especicados en la denicio n de potencia en la monograf a individual dividido por 100. (3) Si el valor promedio de las unidades de dosicacio n analizadas esta entre 100 por ciento y el promedio de los l mites especicados en la denicio n de potencia de la monograf a individual, los requisitos son los especicados en el L mite A, excepto que la frase cantidad declarada se reemplaza por la frase cantidad declarada multiplicada por el valor promedio de las unidades de dosicacio n analizadas (expresado como un porcentaje de la cantidad declarada) dividido por 100. Sistemas Transde rmicos e Inhalaciones Envasadas en Unidades de Dosis Fija L mite A (si el promedio de los l mites especicados en la denicio n de potencia en la monograf a individual es 100,0 por ciento o menos)A menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, se cumple con los requisitos de uniformidad de dosicacio n si la cantidad de fa rmaco en no menos de 9 de las 10 unidades de dosicacio n, como se determina a partir del me todo Uniformidad de Contenido (o en el caso de soluciones para inhalacio n envasadas en ampollas de vidrio o de pla stico y destinadas para usar en nebulizadores, a partir ya sea del me todo de Uniformidad de Contenido o del me todo Variacio n de Peso), esta comprendida en el intervalo de 85,0% a 115,0% de la cantidad declarada, y ninguna unidad esta fuera del intervalo de 75,0% a 125,0% de la cantidad declarada y la RSD de las 10 unidades de dosicacio n es menor o igual a 6,0%. Si 2 o 3 unidades de dosicacio n esta n fuera del intervalo de 85,0% a 115,0% de la cantidad declarada pero no fuera del intervalo de 75,0% a 125,0% de la cantidad declarada, o si la RSD es ma s de 6,0%, o si ambas condiciones prevalecen, analizar 20 unidades adicionales. Los requisitos se cumplen si no ma s de 3 unidades de las 30 esta n fuera del intervalo de 85,0% a 115,0% de la cantidad declarada y ninguna unidad esta fuera del intervalo de 75,0% a 125,0% de la cantidad declarada y la RSD de las 30 unidades de dosicacio n no excede de 7,8%. L mite B (si el promedio de los l mites especicados en la denicio n de potencia en la monograf a individual es ma s de 100,0 por ciento) (1) Si el valor promedio de las unidades de dosicacio n analizadas es 100,0 por ciento o menos, los requisitos son los especicados en el L mite A. (2) Si el valor promedio de las unidades de dosicacio n analizadas es mayor o igual al promedio de los l mites especicados en la denicio n de potencia en la monograf a individual, los requisitos son los especicados en el L mite A, excepto que la frase cantidad declarada se reemplaza por la frase cantidad declarada multiplicada por el promedio de los l mites especicados en la denicio n de potencia en la monograf a individual dividido por 100. (3) Si el valor promedio de las unidades de dosicacio n analizadas esta entre 100 por ciento y el promedio de los l mites especicados en la denicio n de potencia de la monograf a individual, los requisitos son los especicados en el L mite A, excepto que la frase cantidad declarada se reemplaza por la frase cantidad declarada multiplicada por el valor promedio de las unidades de dosicacio n analizadas (expresado como un porcentaje de la cantidad declarada) dividido por 100.
N DE h921i DETERMINACIO AGUA
TODO I (VOLUME TRICO) ME

Determinar el agua mediante el Me todo Ia, a menos que se especique algo diferente en la monograf a individual.
Me todo Ia (Valoracio n Volume trica Directa)

PrincipioLa determinacio n volume trica del agua esta basada en la reaccio n cuantitativa del agua con una solucio n anhidra de dio xido de azufre y yodo en presencia de una solucio n amortiguadora que reacciona con los iones hidro geno. En la solucio n volume trica original, conocida como Reactivo de Karl Fischer, el dio xido de azufre y el yodo se disuelven en piridina y metanol. La muestra de prueba puede valorarse volume tricamente con el Reactivo directamente o el ana lisis puede realizarse mediante un procedimiento de volumetr a residual. La estequiometr a de la reaccio n no es exacta y la reproducibilidad de la determinacio n depende de factores tales como las concentraciones relativas de los ingredientes del Reactivo, la naturaleza del disolvente inerte utilizado para disolver la muestra y la te cnica utilizada en la determinacio n en cuestio n. Por lo tanto, para conseguir la exactitud deseada se utiliza una te cnica emp ricamente estandarizada. La precisio n del me todo depende en gran parte de la medida en que la humedad atmosfe rica es eliminada del sistema. Normalmente la volumetr a del agua se realiza utilizando metanol anhidro como disolvente para la muestra de prueba, aunque tambie n pueden utilizarse otros disolventes adecuados para muestras de prueba especiales o no habituales. AparatoPuede utilizarse cualquier aparato que garantice una exclusio n de la humedad atmosfe rica y una determinacio n del punto nal adecuadas. En el caso de valoraciones volume tricas directas de una solucio n incolora, el punto nal se puede observar visualmente como un cambio de color de amarillo canario a a mbar. El caso inverso se observa cuando se realiza una volumetr a residual de una muestra de prueba. Sin embargo, de forma ma s habitual el punto nal se determina de forma electrome trica utilizando un aparato con un circuito ele ctrico simple que genera un potencial aplicado de aproximadamente 200 mV entre un par de electrodos de platino sumergidos en la solucio n que se desea valorar volume tricamente. En el punto nal de la volumetr a un ligero exceso de reactivo aumenta el ujo de corriente entre 50 y 150 microamperios durante un per odo de 30 segundos a 30 minutos, dependiendo de la solucio n que se este valorando volume tricamente. Este per odo es menor en el caso de sustancias que se disuelven en el reactivo. En algunos tituladores automa ticos el cambio abrupto de corriente o de potencial en el punto nal hace cerrar una va lvula operada por solenoide que controla la bureta que suministra la solucio n volume trica. Los aparatos comerciales generalmente comprenden un sistema cerrado que consta de una o dos buretas automa ticas y un vaso para la volumetr a cubierto herme ticamente equipado con los electrodos necesarios y un mezclador magne tico. El aire en el sistema se mantiene seco con un desecante adecuado y el vaso para la volumetr a puede purgarse mediante una corriente de nitro geno seco o de aire seco. ReactivoPreparar el Reactivo de Karl Fischer como se indica a continuacio n. Agregar 125 g de yodo a una solucio n que contenga 670 mL de metanol y 170 mL de piridina y enfriar. Colocar 100 mL de piridina en una probeta graduada de 250 mL y, manteniendo la piridina fr a en un ban o de hielo, introducir dio xido de azufre seco hasta alcanzar un volumen de 200 mL. Agregar lentamente esta solucio n, agitando, a la mezcla de yodo enfriada. Agitar para disolver el yodo, transferir la solucio n al aparato y dejar la solucio n en reposo durante la noche antes de estandarizar. Un mL de esta
Pruebas F sicas / h921i Determinacio n de Agua
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solucio n recie n preparada equivale aproximadamente a 5 mg de agua. La solucio n se deteriora gradualmente, por lo que se recomienda estandarizarla dentro de un per odo de 1 hora antes de su uso o diariamente si su uso es continuo. Proteger la solucio n de la luz mientras se este utilizando. Conservar el reactivo a granel en un recipiente adecuado sellado y con tapo n de vidrio, totalmente protegido de la luz y refrigerado. Puede utilizarse una solucio n estabilizada de reactivo de tipo Karl Fischer disponible comercialmente. Tambie n pueden utilizarse reactivos disponibles comercialmente que contengan disolventes o bases diferentes a la piridina o alcoholes diferentes al metanol. Estos pueden ser soluciones individuales o reactivos creados in situ combinando los componentes de los reactivos presentes en dos soluciones distintas. El Reactivo diluido requerido en algunas monograf as debe diluirse de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Como diluyente puede utilizarse metanol u otro disolvente adecuado, como el e ter monomet lico de etilenglicol. Preparacio n de PruebaA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, utilizar una cantidad pesada o medida con exactitud de la muestra en ana lisis con un contenido de agua estimado de &2 a 250 mg. La cantidad de agua depende del factor de equivalencia de agua del Reactivo y del me todo de determinacio n del punto nal. En la mayor a de los casos, se puede calcular la cantidad m nima de la muestra, en mg, por la fo rmula: FCV / KF en donde F es el factor de equivalencia de agua del Reactivo, en mg por mL; C es el volumen usado, en porcentaje, de la capacidad de la bureta; V es el volumen de la bureta, en mL; y KF es el l mite o contenido razonable de agua esperado en la muestra, en porcentaje. C es entre 30% y 100% para la volumetr a manual, y entre 10% y 100% para el me todo instrumental de determinacio n del punto nal.&1S (USP30) Si la muestra en ana lisis es un aerosol con propelente, conservarla en el congelador durante no menos de 2 horas, abrir el envase y analizar 10,0 mL de la muestra bien mezclada. Para valorar volume tricamente la muestra, determinar el punto nal a una temperatura de 108 o mayor. Si la muestra en ana lisis son ca psulas, utilizar una porcio n del contenido mezclado de no menos de 4 ca psulas. Si la muestra en ana lisis son tabletas, utilizar el polvo de no menos de 4 tabletas molidas hasta polvo no en una atmo sfera con valores de temperatura y humedad relativa que se sepa que no afectan los resultados. En los casos en los que la monograf a especique que la muestra en ana lisis es higrosco pica, utilizar una jeringa seca para inyectar un volumen adecuado de metanol, u otro disolvente adecuado, medido con exactitud, a un recipiente tarado y agitar para disolver la muestra. Con la misma jeringa retirar la solucio n del recipiente y transferirla a un vaso de volumetr a preparado segu n se indica en el Procedimiento. Repetir el procedimiento con una segunda porcio n de metanol, u otro disolvente adecuado, medido con exactitud, agregar el volumen de lavado al vaso de volumetr a y valorar inmediatamente. Determinar el contenido de agua, en mg, de una porcio n de disolvente con el mismo volumen total que el utilizado para disolver la muestra y para lavar el recipiente y la jeringa, segu n se indica en Estandarizacio n de la Solucio n de Agua para Valoraciones Volume tricas Residuales, y restar este valor del contenido de agua, en mg, obtenido en la volumetr a de la muestra en ana lisis. Secar el recipiente y su cierre a 1008 durante 3 horas, dejar enfriar en un desecador y pesar. Determinar el peso de la muestra analizada a partir de la diferencia en peso con respecto al peso inicial del recipiente. Estandarizacio n del ReactivoColocar una cantidad suciente de metanol o de otro disolvente adecuado en el vaso de volumetr a para cubrir los electrodos y agregar suciente Reactivo para obtener el color del punto nal caracter stico, o 100 + 50 microamperios de corriente continua con un potencial aplicado de aproximadamente 200 mV. Para determinar cantidades de trazas de agua (menos de 1%) &es preferible usar Reactivo con un factor de equivalencia de agua de no ma s de 2,0. Puede&1S (USP30) utilizarse tartrato de sodio como sustancia adecuada de referencia de agua. Agregar ra pidamente de & 75 a 125 mg &1S (USP30) de tartrato de sodio (C4H4Na2O6 2H2O),
pesados con exactitud por diferencia, y valorar volume tricamente hasta el punto nal. El factor de equivalencia de agua F, en mg de agua por mL de reactivo, se calcula por la fo rmula: 2(18,02/230,08)(W/V) en donde 18,02 y 230,08 son los pesos moleculares del agua y del tartrato de sodio dihidrato, respectivamente; W es el peso, en mg, del tartrato de sodio dihidrato; y V es el volumen, en mL, del Reactivo consumido en la segunda volumetr a. Para una determinacio n precisa de cantidades signicativas de agua (1% o ma s), utilizar Agua puricada como sustancia de referencia. Agregar ra pidamente entre 25 y 250 mg de agua, pesados con exactitud por diferencia, con una pipeta de pesada o con una jeringa o micropipeta precalibrada. La cantidad tomada depende de la concentracio n del reactivo y del taman o de la bureta, como se indica en Aparatos Volume tricos h31i. Valorar volume tricamente hasta el punto nal. Calcular el factor de equivalencia de agua F, en mg de agua por mL de reactivo, por la fo rmula: W/V en donde W es el peso, en mg, del agua; y V es el volumen, en mL, del reactivo necesario. ProcedimientoA menos que se especique algo diferente, transferir de 35 a 40 mL de metanol o de otro disolvente adecuado al vaso de volumetr a y valorar con el Reactivo hasta el punto nal electrome trico o visual para consumir la humedad que pudiera estar presente. (No tener en cuenta este volumen consumido, ya que no se utiliza en los ca lculos). Agregar ra pidamente la Preparacio n de Prueba, mezclar y volver a valorar volume tricamente con el Reactivo hasta el punto nal electrome trico o visual. Calcular el contenido de agua de la muestra tomada, en mg, por la fo rmula: SF en donde S es el volumen, en mL, del Reactivo consumido en la segunda volumetr a; y F es el factor de equivalencia de agua del Reactivo.
Me todo Ib (Valoracio n Volume trica Residual)

PrincipioVer la informacio n que gura en la seccio n Principio en Me todo Ia. En la volumetr a residual se agrega un exceso de Reactivo a la muestra de prueba, se espera un tiempo suciente para que se complete la reaccio n y se valora volume tricamente el Reactivo no consumido con una solucio n esta ndar de agua en un disolvente como el metanol. El procedimiento de volumetr a residual se aplica de forma general y evita los problemas que pueden surgir en la volumetr a directa de aquellas sustancias en las que el agua unida se libera lentamente. Aparato, Reactivo y Preparacio n de PruebaUtilizar el Me todo Ia. Estandarizacio n de la Solucio n de Agua para Valoraciones Volume tricas ResidualesPreparar una Solucio n de Agua diluyendo 2 mL de agua con metanol u otro disolvente adecuado hasta 1000 mL. Estandarizar esta solucio n valorando volume tricamente 25,0 mL con el Reactivo, previamente estandarizado como se indica en Estandarizacio n del Reactivo. Calcular el contenido de agua, en mg por mL, de la Solucio n de Agua tomada, por la fo rmula: VF/25 en donde V es el volumen del Reactivo consumido y F es el factor de equivalencia de agua del Reactivo. Determinar el contenido de agua de la Solucio n de Agua semanalmente y estandarizar perio dicamente el Reactivo contra e ste segu n sea necesario. ProcedimientoSi la monograf a individual especica que el contenido de agua debe ser determinado por el Me todo Ib, transferir de 35 a 40 mL de metanol o de otro disolvente adecuado al vaso de volumetr a y valorar con el Reactivo hasta el punto nal electrome trico o visual. Agregar ra pidamente la Preparacio n de Prueba, mezclar y agregar un exceso medido con exactitud de Reactivo. Esperar un tiempo suciente para que se complete la reaccio n y valorar volume tricamente el Reactivo no consumido con
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h921i Determinacio n de Agua / Pruebas F sicas
la Solucio n de Agua estandarizada hasta el punto nal electrome trico o visual. Calcular el contenido de agua de la muestra tomada, en mg, por la fo rmula: F(X XR) en donde F es el factor de equivalencia de agua del Reactivo; X es el volumen, en mL, del Reactivo agregado despue s de introducir la muestra; X es el volumen, en mL, de la Solucio n de Agua estandarizada necesaria para neutralizar el Reactivo no consumido; y R es el cociente, V/25 (mL de Reactivo/mL de Solucio n de Agua), determinado a partir de la Estandarizacio n de la Solucio n de Agua para Valoraciones Volume tricas Residuales.
Me todo Ic (Valoracio n Culombime trica)

PrincipioPara la determinacio n culombime trica del agua se utiliza la reaccio n de Karl Fischer. El yodo, sin embargo, no se agrega en forma de solucio n volume trica sino que se obtiene por oxidacio n ano dica en una solucio n que contiene yoduro. La celda de reaccio n consta normalmente de un amplio compartimiento ano dico y de un pequen o compartimiento cato dico, separados entre s por un diafragma. Tambie n pueden utilizarse otros tipos adecuados de celdas de reaccio n (p. ej., sin diafragma). Cada compartimiento tiene un electrodo de platino que conduce la corriente a trave s de la celda. El yodo, que se produce en el electrodo ano dico, reacciona inmediatamente con el agua que esta presente en el compartimiento. Cuando se ha consumido toda el agua, se produce un exceso de yodo que normalmente se detecta electrome tricamente, lo que indica el punto nal. La humedad se elimina del sistema mediante preelectro lisis. No es necesario cambiar la solucio n de Karl Fischer despue s de cada determinacio n ya que las diferentes determinaciones pueden realizarse de forma sucesiva en la misma solucio n reactivo. Un requisito de este me todo es que cada componente de la muestra de prueba tiene que ser compatible con los dema s componentes y que no se produzcan reacciones secundarias. Normalmente las muestras son transferidas al vaso en forma de solucio n mediante la inyeccio n a trave s de un septo. Los gases se pueden introducir en la celda utilizando un tubo de entrada de gas adecuado. La precisio n del me todo depende fundamentalmente del grado de eliminacio n de
la humedad atmosfe rica en el sistema; por tanto no se recomienda la introduccio n de so lidos en la celda salvo que se tomen serias precauciones tales como trabajar en una ca mara cerrada en una atmo sfera de gas inerte seco. El control del sistema se puede monitorizar midiendo el desplazamiento de la l nea base. Este me todo es especialmente adecuado para sustancias qu micas inertes como hidrocarburos, alcoholes y e teres. En comparacio n con la volumetr a de Karl Fischer, la culombimetr a es un microme todo. AparatoResulta adecuado cualquier aparato comercialmente disponible que conste de un sistema absolutamente herme tico equipado con los electrodos necesarios y un mezclador magne tico. El microprocesador del instrumento controla el procedimiento anal tico y muestra los resultados. No es necesario calibrar el instrumento ya que la corriente consumida puede medirse de forma absoluta. ReactivoVer Reactivo en Me todo Ia. Preparacio n de pruebaSi la muestra es un so lido soluble, disolver una cantidad adecuada, pesada con exactitud, en metanol anhidro o en otros disolventes adecuados. Los l quidos pueden utilizarse tal cual o como soluciones preparadas con exactitud en disolventes anhidros adecuados. Si la muestra es un so lido insoluble, el agua puede extraerse utilizando un disolvente anhidro adecuado del cual puede inyectarse una cantidad adecuada, pesada con exactitud, en la solucio n del anolito. De forma alternativa, puede utilizarse una te cnica de evaporacio n en la que el agua se libera y se evapora calentando la muestra en un tubo en una corriente de gas inerte seco, pasando a continuacio n este gas a la celda. ProcedimientoCon una jeringa seca, inyectar ra pidamente en el anolito la Preparacio n de Prueba, medida con exactitud y con un contenido estimado de 0,5 a 5 mg de agua, o de acuerdo con las instrucciones del fabricante del instrumento, mezclar y realizar la valoracio n culombime trica hasta el punto nal electrome trico. Leer el contenido de agua de la Preparacio n de Prueba directamente en la pantalla del instrumento y calcular el porcentaje presente en la sustancia. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias.
Informacio n General / h1047i Art culos Obtenidos por Biotecnolog a
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Cap tulos Generales

Informacio n General
la instrumentacio n cromatogra ca automatizada disen ada para las metodolog as anal ticas. Un instrumento de ana lisis de aminoa cidos t pico es un cromato grafo de l quidos de baja presio n o de alta presio n, capaz de generar gradientes de fase mo vil que separan los aminoa cidos en una columna cromatogra ca. El instrumento debe tener la capacidad de derivatizar los aminoa cidos despue s de pasar por la columna, a menos que la muestra se analice con derivatizacio n anterior a la columna. El detector generalmente es de luz UV-visible o de uorescencia, segu n el me todo de derivatizacio n usado. Se usa un dispositivo de registro (por ejemplo, un integrador) para transformar la sen al analo gica del detector y para la cuanticacio n. Es preferible que los instrumentos utilizados para el ana lisis de aminoa cidos se destinen espec camente a esos nes.
&
CULOS OBTENIDOS h1047i ARTI A POR BIOTECNOLOGI PRUEBAS
El advenimiento de fa rmacos macromoleculares obtenidos a trave s de procesos biotecnolo gicos ha producido un conjunto de pruebas y valoraciones especializadas para determinar la calidad, identidad, pureza y potencia de estos art culos, que se suman a los me todos tradicionalmente usados para otros productos farmace uticos. Estas pruebas especiales que se presentan a continuacio n son el Ana lisis de Aminoa cidos, la Electroforesis Capilar, el Isoelectroenfoque, el Mapeo de Pe ptidos, la Electroforesis en Gel de Poliacrilamida y la Valoracio n de Prote nas Totales.
Precauciones Generales
La contaminacio n es siempre una preocupacio n en el ana lisis de aminoa cidos. Se requieren reactivos de alta pureza (por ejemplo, el a cido clorh drico de baja pureza puede contribuir a la contaminacio n con glicina). Los reactivos anal ticos se cambian rutinariamente cada varias semanas y se usan solamente disolventes para cromatograf a de l quidos de alta presio n (grado HPLC). La posible contaminacio n microbiana y los materiales extran os presentes en los disolventes se reducen por ltracio n antes de usarlos, cubriendo los recipientes y colocando el instrumental para ana lisis de aminoa cidos alejado de la luz solar directa. Las pra cticas de laboratorio pueden determinar la calidad del ana lisis de aminoa cidos. Colocar los instrumentos en una zona de poco tra nsito del laboratorio. Mantener limpio el laboratorio. Hay que limpiar y calibrar las pipetas segu n un plan de mantenimiento. Mantener las puntas de las pipetas en una caja cubierta; los analistas no deben manipular las puntas de las pipetas con las manos. Los analistas pueden usar guantes de la tex sin polvo o similares. Limitar la cantidad de veces que se abre y se cierra un vial de muestra ya que el polvo puede hacer que aparezcan niveles elevados de glicina, serina y alanina. Se necesitan instrumentos bien mantenidos para que los resultados de los ana lisis de aminoa cidos sean aceptables. Si el instrumento se usa de modo rutinario, se debe revisar diariamente para detectar pe rdidas, vericar la estabilidad del detector y la la mpara y la capacidad de la columna para lograr una buena resolucio n de los aminoa cidos individuales. Limpiar o reemplazar, de acuerdo a un plan de rutina, todos los ltros de los instrumentos y dema s art culos de mantenimiento.
LISIS DE AMINOA CIDOS ANA

El ana lisis de aminoa cidos se reere a la metodolog a usada para determinar la composicio n o el contenido de aminoa cidos de prote nas, pe ptidos y otras preparaciones farmace uticas. Las prote nas y los pe ptidos son macromole culas formadas por aminoa cidos unidos covalentemente organizados como pol meros lineales. La secuencia de los aminoa cidos en una prote na o un pe ptido determina las propiedades de la mole cula. Las prote nas se consideran mole culas grandes que existen comu nmente como estructuras plegadas con una conformacio n espec ca, mientras que los pe ptidos son ma s pequen os y pueden estar formados por pocos aminoa cidos. El ana lisis de aminoa cidos se puede usar para cuanticar prote nas y pe ptidos, para determinar la identidad de prote nas o pe ptidos basa ndose en su composicio n de aminoa cidos, para respaldar el ana lisis estructural de prote nas y pe ptidos, para evaluar estrategias de fragmentacio n para el mapeo de pe ptidos y para detectar aminoa cidos at picos presentes en una prote na o un pe ptido. Antes del ana lisis de aminoa cidos, es necesario hidrolizar una prote na o pe ptido descomponie ndolo en sus aminoa cidos constituyentes. Despue s de la hidro lisis de la prote na o el pe ptido, el procedimiento de ana lisis de aminoa cidos puede ser igual al utilizado para aminoa cidos libres en otras preparaciones farmace uticas. Los aminoa cidos constituyentes de la muestra de prueba normalmente se derivatizan para su ana lisis.
Material Esta ndar de Referencia

Los esta ndares de aminoa cidos aptos para este tipo de ana lisis esta n disponibles comercialmente1 y consisten generalmente en una mezcla acuosa de aminoa cidos. Cuando se determina la composicio n de aminoa cidos, esta ndares de prote nas o pe ptidos se analizan junto con el material de prueba como un control para demostrar la
1
Aparatos
Los me todos usados para el ana lisis de aminoa cidos por lo general se basan en una separacio n cromatogra ca de los aminoa cidos presentes en la muestra de prueba. Las te cnicas actuales aprovechan
Los esta ndares adecuados se pueden obtener de NIST (Gaithersburg, MD), Beckman Instruments (Fullerton, CA), Sigma Chemical (St. Louis, MO), Pierce (Rockford, IL) o Hewlett-Packard.
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h1047i Art culos Obtenidos por Biotecnolog a / Informacio n General
integridad de todo el procedimiento. Para este propo sito, se ha usado seroalbu mina bovina altamente puricada como esta ndar de prote na.
Preparacio n de la Muestra
La obtencio n de resultados exactos del ana lisis de aminoa cidos exige muestras puricadas de prote nas y pe ptidos. Los componentes de una solucio n amortiguadora (por ejemplo, sales, urea, detergentes) pueden interferir con el ana lisis de aminoa cidos y se eliminan de la muestra antes del ana lisis. Los me todos que derivatizan los aminoa cidos despue s de su paso por la columna no se ven tan afectados generalmente por los componentes de la solucio n amortiguadora como se observa en los me todos de derivatizacio n anteriores a la columna. Es conveniente limitar las manipulaciones de las muestras con el n de reducir la posible contaminacio n de fondo, para mejorar la recuperacio n de analitos y para reducir el trabajo. Las te cnicas comunes empleadas para eliminar los componentes de las soluciones amortiguadoras del pH de las muestras de prote nas incluyen: (1) inyectar la muestra de prote na en un sistema HPLC en fase reversa, extrayendo la prote na con un disolvente vola til que contenga suciente componente orga nico y secando la muestra en una centr fuga de vac o; (2) dia lisis contra una solucio n amortiguadora del pH vola til o agua; (3) ultraltracio n centr fuga para el reemplazo de la solucio n amortiguadora del pH por una solucio n amortiguadora del pH vola til o agua; (4) precipitar la prote na de la solucio n amortiguadora del pH usando un disolvente orga nico (por ejemplo: acetona); y (5) ltracio n con gel.
Calibracio n de los Instrumentos

La calibracio n del instrumental para ana lisis de aminoa cidos por lo general involucra el ana lisis de esta ndares de aminoa cidos, que son una mezcla de aminoa cidos de varias concentraciones, para determinar el factor de respuesta y el intervalo de ana lisis de cada aminoa cido. Se conoce la concentracio n de cada aminoa cido en el esta ndar. En el procedimiento de calibracio n, el analista diluye el esta ndar de aminoa cidos para obtener distintos niveles de concentracio n de analito dentro del intervalo lineal esperado de la te cnica de ana lisis de aminoa cidos. Luego, se analizan repetidamente las diversas concentraciones de analito. Las a reas de los picos obtenidos para cada aminoa cido se gracan en funcio n de la concentracio n conocida para cada uno de los aminoa cidos en la dilucio n esta ndar. Estos resultados permiten al analista determinar el intervalo de concentraciones de aminoa cidos donde el a rea del pico de cada aminoa cido es una funcio n aproximadamente lineal de su concentracio n. Es importante que el analista prepare las muestras para el ana lisis de aminoa cidos de manera que este n dentro de los l mites anal ticos (por ejemplo, intervalo de trabajo lineal) de la te cnica empleada a n de obtener resultados exactos y repetibles. Se analizan de cuatro a seis concentraciones del esta ndar de aminoa cidos para determinar un factor de respuesta para cada aminoa cido. El factor de respuesta se calcula como el a rea del pico o la altura del pico promedio por nmol de aminoa cido presente en el esta ndar. Para calcular la concentracio n de cada aminoa cido presente en la muestra de prueba se prepara y se usa un registro de calibracio n con el factor de respuesta de cada aminoa cido. En este ca lculo se divide el a rea del pico de un aminoa cido dado por su correspondiente factor de respuesta, y se obtienen as los nmol del aminoa cido. Para los ana lisis de rutina, basta una calibracio n de un solo punto; sin embargo, el archivo de calibracio n se actualiza frecuentemente y se prueba por ana lisis de controles anal ticos para asegurar su integridad.
Esta ndares Internos

Se recomienda usar un esta ndar interno para controlar las pe rdidas y variaciones f sicas y qu micas durante el ana lisis de aminoa cidos. Antes de la hidro lisis, se puede agregar a la solucio n de prote na una cantidad de esta ndar interno conocida con exactitud. La recuperacio n del esta ndar interno indica la recuperacio n general de los aminoa cidos de la solucio n de prote na. Sin embargo, los aminoa cidos libres no se comportan igual que los aminoa cidos unidos a prote nas durante la hidro lisis ya que sus velocidades de liberacio n o destruccio n son variables. Por lo tanto, el uso de un esta ndar interno para corregir las pe rdidas durante la hidro lisis puede proporcionar resultados no conables. Hay que tener en cuenta este punto cuando se interpretan los resultados. Tambie n se pueden agregar esta ndares internos a la mezcla de aminoa cidos despue s de la hidro lisis para corregir por las diferencias en la aplicacio n de las muestras y los cambios en la estabilidad del reactivo y las velocidades de ujo. Idealmente, un esta ndar interno es un aminoa cido primario que no se encuentra naturalmente y que esta disponible comercialmente a bajo precio. Tambie n debe ser estable durante la hidro lisis, su factor de respuesta debe ser funcio n lineal de su concentracio n y debe eluir con un tiempo de retencio n u nico, sin superponerse con otros aminoa cidos. Los esta ndares de aminoa cidos comu nmente empleados incluyen la norleucina, la nitrotirosina y el a cido a-aminobut rico.
Repetibilidad
Los resultados uniformes y de alta calidad de los ana lisis de aminoa cidos de un laboratorio anal tico exigen prestar atencio n a la repetibilidad de la valoracio n. Durante el ana lisis de la separacio n cromatogra ca de los aminoa cidos o sus derivados, se observan numerosos picos en el cromatograma. El gran nu mero de picos exige un sistema de ana lisis de aminoa cidos que los pueda identicar repetidamente basa ndose en el tiempo de retencio n e integrar las a reas de los picos para la cuanticacio n. Una evaluacio n de repetibilidad t pica involucra la preparacio n de una solucio n de aminoa cidos esta ndar y el ana lisis de varias determinaciones repetidas (es decir, seis ana lisis o ma s) de la misma solucio n esta ndar. La desviacio n esta ndar relativa (RSD, por sus siglas en ingle s) se determina para el tiempo de retencio n y el a rea del pico integrada de cada aminoa cido. La evaluacio n de la repetibilidad se ampl a incluyendo mu ltiples valoraciones realizadas durante varios d as por distintos analistas. Las mu ltiples valoraciones incluyen la preparacio n de diluciones esta ndar a partir de materiales iniciales para determinar la variacio n debida a la manipulacio n de la muestra. A menudo, la composicio n de aminoa cidos de una prote na esta ndar (por ejemplo, seroalbu mina bovina) se analiza como parte de la evaluacio n de repetibilidad. La evaluacio n de la variacio n de determinaciones repetidas (es decir, la RSD) permite al laboratorio establecer l mites anal ticos para asegurar que sus ana lisis se encuentran bajo control. Es conveniente establecer los l mites de variacio n m nimos practicables para asegurar los mejores resultados. Para disminuir la variabilidad del ana lisis de aminoa cidos, conviene enfocarse en la preparacio n de la muestra, la elevada interferencia espectral de fondo debida a la calidad de los reactivos o las pra cticas del laboratorio, el desempen o y mantenimiento de los instrumentos, el ana lisis y la interpretacio n de los datos y el desempen o y los ha bitos del analista. Todos los para metros se investigan a fondo como parte del trabajo de validacio n.
Hidro lisis de Prote nas

La hidro lisis de muestras de prote nas y pe ptidos es necesaria para el ana lisis de aminoa cidos de estas mole culas. El material de vidrio usado para la hidro lisis debe estar muy limpio para evitar resultados erro neos. Los polvos para guantes y las huellas dactilares en los tubos de hidro lisis pueden causar contaminacio n. Para limpiar los tubos de vidrio para hidro lisis, hay que hervir los tubos durante 1 hora en a cido clorh drico 1 N o sumergirlos en a cido n trico concentrado o en una mezcla de a cido clorh drico concentrado y a cido n trico concentrado (1 : 1). Los tubos de hidro lisis limpios se enjuagan con agua de alta pureza, seguido por un enjuague con metanol de grado HPLC, se secan de un d a para el otro en una estufa y se almacenan cubiertos hasta su uso. Alternativamente, el material de vidrio limpio se puede someter a piro lisis a 5008 durante 4 horas para eliminar la contaminacio n de los tubos para hidro lisis. Tambie n se puede usar material de laboratorio desechable adecuado. La hidro lisis a cida es el me todo ma s comu n para hidrolizar una muestra de prote na antes del ana lisis de aminoa cidos. La te cnica de hidro lisis a cida puede aumentar la variabilidad del ana lisis debido a la destruccio n completa o parcial de varios aminoa cidos. El tripto fano se destruye; la serina y la treonina se destruyen
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parcialmente; la metionina puede oxidarse; y la ciste na t picamente se recupera como cistina (pero la recuperacio n de la cistina suele ser mala debido a la destruccio n o reduccio n parcial a ciste na). La aplicacio n de vac o adecuado (menos de 200 mm de mercurio o 26,7 Pa) o la introduccio n de un gas inerte (argo n) en la ca mara gaseosa superior del recipiente de reaccio n puede reducir la destruccio n oxidativa. En las uniones pept dicas que involucran isoleucina y valina, las uniones amida de Ile-Ile, Val-Val, Ile-Val y Val-Ile se escinden parcialmente; y la asparagina y la glutamina se desamidan, dando como resultado a cido aspa rtico y a cido gluta mico, respectivamente. La pe rdida de tripto fano, asparagina y glutamina durante una hidro lisis a cida limita la cuanticacio n a 17 aminoa cidos. Algunas de las te cnicas de hidro lisis descritas se usan para tratar estos problemas. Algunas de las te cnicas de hidro lisis descritas (es decir, los Me todos 411) pueden modicar otros aminoa cidos. Por lo tanto, hay que considerar las ventajas de usar una te cnica de hidro lisis en comparacio n con sus problemas; estas ventajas se analizan adecuadamente antes de emplear un me todo que no sea la hidro lisis a cida. A menudo se emplea un estudio en funcio n del tiempo (es decir, un ana lisis de aminoa cidos con tiempos de hidro lisis a cida de 24, 48 y 72 horas) para analizar la concentracio n inicial de aminoa cidos que se destruyen parcialmente o que se escinden lentamente. Al gracar la concentracio n observada de aminoa cidos la biles (es decir, serina y treonina) en funcio n del tiempo de hidro lisis, se puede extrapolar la l nea hasta su origen para determinar la concentracio n inicial de estos aminoa cidos. Los estudios de hidro lisis en funcio n del tiempo tambie n se usan con aminoa cidos que se escinden lentamente (por ejemplo, isoleucina y valina). Durante el transcurso del tiempo de hidro lisis, el analista observa una meseta en estos residuos. El nivel de esta meseta se considera la concentracio n de residuo. Si el tiempo de hidro lisis es demasiado largo, la concentracio n del residuo en la muestra comienza a disminuir, indicando una destruccio n por las condiciones de hidro lisis. Una alternativa aceptable al estudio en funcio n del tiempo es someter un esta ndar de calibracio n de un aminoa cido a las mismas condiciones de hidro lisis que la muestra de prueba. El aminoa cido libre puede no ser totalmente representativo de la velocidad de destruccio n de los aminoa cidos la biles dentro de un pe ptido o una prote na durante la hidro lisis. Esto es especialmente va lido para las uniones pept dicas que se escinden lentamente (por ejemplo, uniones Ile-Val). Sin embargo, esta te cnica permite al analista dar cuenta de cierta destruccio n de residuos. Se ha empleado la hidro lisis a cida por microondas y e sta es ra pida, pero exige equipo y precauciones especiales. Las condiciones o ptimas para la hidro lisis por microondas se deben investigar para cada muestra de prote na o pe ptido. La te cnica de hidro lisis por microondas t picamente toma so lo unos minutos, pero una desviacio n de 1 minuto puede proporcionar resultados inadecuados (por ejemplo, hidro lisis incompleta o destruccio n de aminoa cidos la biles). Se ha empleado la proteo lisis completa usando una mezcla de proteasas pero puede ser complicada, exige controles adecuados y, por lo general, se puede aplicar ma s a pe ptidos que a prote nas. [NOTADurante los ana lisis iniciales de una prote na desconocida, se realizan experimentos con diferentes tiempos de hidro lisis y condiciones de temperatura para determinar las condiciones o ptimas.]
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o en una atmo sfera inerte para evitar la oxidacio n. Se investigan tiempos mayores de hidro lisis (por ejemplo, 48 y 72 horas) si existe la preocupacio n de que la prote na no este totalmente hidrolizada. ste es uno de los procedimientos Hidro lisis en Fase de VaporE de hidro lisis a cida ma s comunes y se preere para el microana lisis cuando so lo se dispone de pequen as cantidades de muestra. La contaminacio n de la muestra por el reactivo a cido tambie n se minimiza usando la hidro lisis en fase de vapor. Colocar los viales que contengan las muestras secas en un recipiente con un cantidad adecuada de la Solucio n de Hidro lisis. La Solucio n de Hidro lisis no entra en contacto con la muestra de prueba. Aplicar una atmo sfera inerte o vac o (menos de 200 mm de mercurio o 26,7 Pa) a la ca mara gaseosa del recipiente y calentar aproximadamente a 1108 durante un tiempo de hidro lisis de 24 horas. El vapor a cido hidroliza la muestra seca. Minimizar toda condensacio n del a cido en los viales de la muestra. Despue s de la hidro lisis, secar la muestra al vac o para eliminar el a cido residual.
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La oxidacio n del tripto fano durante la hidro lisis disminuye si se usa a cido mercaptoetanosulfo nico (MESA) como a cido reductor. Solucio n de Hidro lisis: solucio n de MESA 2,5 M. Hidro lisis en Fase de VaporSecar aproximadamente de 1 a 100 mg de la prote na o pe ptido en ana lisis en un tubo de hidro lisis. Colocar el tubo de hidro lisis en un tubo ma s grande con aproximadamente 200 mL de la Solucio n de Hidro lisis. Sellar al vac o el tubo ma s grande (aproximadamente a 50 mm de mercurio o 6,7 Pa) para vaporizar la Solucio n de Hidro lisis. Calentar el tubo de hidro lisis entre 1708 y 1858 durante aproximadamente 12,5 minutos. Despue s de la hidro lisis, secar el tubo de hidro lisis al vac o durante 15 minutos para eliminar el a cido residual.
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La oxidacio n del tripto fano durante la hidro lisis se evita usando a cido tioglico lico (TGA) como a cido reductor. Solucio n de Hidro lisis: una solucio n que contenga a cido clorh drico 7 M, 10% de a cido triuoroace tico, 20% de a cido tioglico lico y 1% de fenol. Hidro lisis en Fase de VaporSecar aproximadamente de 10 mg a 50 mg de la prote na o pe ptido en ana lisis en un tubo de muestra. Colocar el tubo de muestra en un tubo ma s grande con aproximadamente 200 mL de la Solucio n de Hidro lisis. Sellar el tubo ma s grande al vac o (aproximadamente a 50 mm de mercurio o 6,7 Pa) para vaporizar el TGA. Calentar el tubo de muestra a 1668 durante aproximadamente 15 a 30 minutos. Despue s de la hidro lisis, secar el tubo de muestra al vac o durante 5 minutos para eliminar el a cido residual. La recuperacio n de tripto fano por medio de este me todo puede depender de la cantidad de muestra presente.
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La hidro lisis a cida usando a cido clorh drico que contenga fenol es el procedimiento ma s comu nmente usado para la hidro lisis de prote nas o pe ptidos antes del ana lisis de aminoa cidos. La adicio n de fenol a la reaccio n evita la halogenacio n de la tirosina. Solucio n de Hidro lisis: a cido clorh drico 6 N que contenga entre 0,1% y 1,0% de fenol. Procedimiento Hidro lisis en Fase L quidaColocar la muestra de prote na o pe ptido en un tubo para hidro lisis y secar. [NOTALa muestra se seca para que el agua de la muestra no diluya el a cido empleado para la hidro lisis.] Agregar 200 mL de la Solucio n de Hidro lisis por cada 500 mg de prote na liolizada. Congelar el tubo de la muestra en un ban o de hielo seco y acetona y sellar a la llama en vac o. Las muestras t picamente se hidrolizan a 1108 durante 24 horas al vac o
La oxidacio n de la ciste na-cistina y de la metionina se realiza con a cido perfo rmico antes de la hidro lisis de la prote na. Solucio n de Oxidacio nPreparar a cido perfo rmico en el momento de ana lisis mezclando a cido fo rmico y pero xido de hidro geno al 30% (9 : 1) e incubar a temperatura ambiente durante 1 hora. ProcedimientoDisolver la muestra de prote na o pe ptido en 20 mL de a cido fo rmico y calentar a 508 durante 5 minutos; agregar luego 100 mL de la Solucio n de Oxidacio n. En esta reaccio n, la ciste na se convierte en a cido cisteico y la metionina se convierte en metionina sulfona. Dejar que la oxidacio n continu e durante de 10 a 30 minutos. Eliminar el reactivo en exceso de la muestra en una centr fuga de vac o. Esta te cnica puede modicar los residuos de tirosina en presencia de haluros. Luego se puede realizar una hidro lisis a cida de la prote na oxidada usando el Me todo 1 o el Me todo 2.
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La oxidacio n de ciste na-cistina se logra durante la hidro lisis en fase l quida con azida de sodio. Solucio n de Hidro lisis: agregar azida de sodio a a cido clorh drico 6 N que contenga 0,2 % de fenol, para obtener una concentracio n nal de 0,2% (p/v). El fenol agregado evita la halogenacio n de la tirosina. Hidro lisis en Fase L quidaRealizar la hidro lisis de la prote na o pe ptido aproximadamente a 1108 durante 24 horas. Durante la hidro lisis, la ciste na-cistina presente en la muestra se convierte en a cido cisteico mediante la azida de sodio presente en la Solucio n de Hidro lisis. Esta te cnica permite una mejor recuperacio n de tirosina que el Me todo 4, pero no es cuantitativa para la metionina. La metionina se convierte en una mezcla de la metionina original y sus dos productos de oxidacio n, metionina sulfo xido y metionina sulfona.
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Solucio n ReductoraPreparar una mezcla de la Solucio n Madre 2 y la Solucio n Madre 1 (3 : 1) para obtener una solucio n amortiguada de clorhidrato de guanidina 6 M en clorhidrato de Tris 0,25 M. ProcedimientoDisolver aproximadamente 10 mg de la muestra de prueba en 50 mL de la Solucio n Reductora y agregar aproximadamente 2,5 mL de la Solucio n Madre 3. Almacenar bajo nitro geno o argo n durante 2 horas a temperatura ambiente en un lugar oscuro. Para lograr la reaccio n de piridiletilacio n, agregar aproximadamente 2 mL de 4-vinilpiridina a la solucio n de prote na, e incubar durante 2 horas adicionales a temperatura ambiente en un lugar oscuro. La prote na o pe ptido se desaliniza por recoleccio n de la fraccio n de prote na o pe ptido luego de una separacio n por HPLC en fase reversa. La muestra recolectada se puede secar en una centr fuga de vac o antes de la hidro lisis a cida.
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La oxidacio n de ciste na-cistina se logra con dimetil sulfo xido (DMSO). Solucio n de Hidro lisis: agregar DMSO a a cido clorh drico 6 N que contenga de 0,1% a 1,0% de fenol, para obtener una concentracio n nal de 2% (v/v). Hidro lisis en Fase de VaporRealizar la hidro lisis de la prote na o pe ptido aproximadamente a 1108 durante 24 horas. Durante la hidro lisis, la ciste na-cistina presente en la muestra se convierte en a cido cisteico por el DMSO presente en la Solucio n de Hidro lisis. Para reducir la variabilidad y compensar la destruccio n parcial, se recomienda evaluar la recuperacio n de a cido cisteico de las hidro lisis oxidativas de prote nas esta ndar que contengan de 1 a 8 moles de ciste na. Los factores de respuesta del hidrolizado de prote nas o pe ptidos por lo general son aproximadamente 30% menores que los de los esta ndares de a cido cisteico no hidrolizado. Como la histidina, la metionina, la tirosina y el tripto fano tambie n se modican, con esta te cnica no se obtiene un ana lisis completo de la composicio n.
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La reduccio n de ciste na-cistina y la alquilacio n se logran a trave s de una reaccio n de carboximetilacio n en fase l quida. Soluciones MadrePreparar segu n se indica en el Me todo 8. Solucio n de Carboximetilacio nPreparar una solucio n que contenga 100 mg de yodoacetamida por mL de alcohol. Solucio n AmortiguadoraUsar la Solucio n Reductora, preparada segu n se indica en el Me todo 8. ProcedimientoDisolver la muestra de prueba en 50 mL de la Solucio n Amortiguadora y agregar aproximadamente 2,5 mL de la Solucio n Madre 3. Almacenar bajo nitro geno o argo n durante 2 horas a temperatura ambiente en un lugar oscuro. Agregar la Solucio n de Carboximetilacio n en una relacio n de 1,5 veces el contenido teo rico total de tioles, e incubar durante 30 minutos adicionales a temperatura ambiente en un lugar oscuro. [NOTASi el contenido de tioles de la prote na se desconoce, agregar 5 mL de yodoacetamida 100 mM por cada 20 nmol de prote na presente.] La reaccio n se detiene agregando un exceso de 2-mercaptoetanol. La prote na o pe ptido se desaliniza por recoleccio n de la fraccio n de prote na o pe ptido luego de una separacio n por HPLC en fase reversa. La muestra recolectada se puede secar en una centr fuga de vac o antes de la hidro lisis a cida. La S-carboxiamidometilciste na formada se convierte en S-carboximetilciste na durante la hidro lisis a cida.
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La reduccio n y la alquilacio n de ciste na-cistina se logra a trave s de una reaccio n de piridiletilacio n en fase de vapor. Solucio n ReductoraTransferir 83,3 mL de piridina, 16,7 mL de 4-vinilpiridina, 16,7 mL de tributilfosna y 83,3 mL de agua a un recipiente adecuado y mezclar. ProcedimientoAgregar la prote na o pe ptido (entre 1 y 100 mg) a un tubo de hidro lisis y colocar en un tubo ma s grande. Transferir la Solucio n Reductora al tubo ma s grande, sellar al vac o (aproximadamente a 50 mm de mercurio o 6,7 Pa), e incubar aproximadamente a 1008 durante 5 minutos. Luego, retirar el tubo de hidro lisis interior y secarlo en un desecador de vac o durante 15 minutos para eliminar los reactivos residuales. Despue s, se puede realizar una hidro lisis a cida de la prote na o pe ptido piridiletilados usando los procedimientos descritos previamente. La reaccio n de piridiletilacio n se realiza simulta neamente con una muestra de un esta ndar de prote na que contenga de 1 a 8 moles de ciste na, para mejorar la exactitud de la recuperacio n de piridiletil-ciste na. Mayores tiempos de incubacio n en la reaccio n de piridiletilacio n pueden modicar el grupo aamino terminal y el grupo E-amino de la lisina en la prote na.
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La ciste na-cistina se hace reaccionar con el a cido ditiodiglico lico o el a cido ditiodipropio nico para producir un disulfuro mixto. [NOTALa eleccio n del a cido ditiodiglico lico o del a cido ditiodipropio nico depende de la resolucio n exigida por el me todo de ana lisis de aminoa cidos.] Solucio n Reductora: una solucio n que contenga 10 mg de a cido ditiodiglico lico (o a cido ditiodipropio nico) por mL de hidro xido de sodio 0,2 M. ProcedimientoTransferir aproximadamente 20 mg de la muestra de prueba a un tubo de hidro lisis y agregar 5 mL de la Solucio n Reductora. Agregar 10 mL de alcohol isoprop lico y luego eliminar todo el l quido de la muestra mediante centrifugacio n al vac o. Luego, hidrolizar la muestra usando el Me todo 1. La ventaja de este me todo es que no se derivatizan otros residuos aminoac dicos por reacciones secundarias y no es necesario desalinizar la muestra antes de la hidro lisis.
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La reduccio n de ciste na-cistina y la alquilacio n se logran a trave s de una reaccio n de piridiletilacio n en fase l quida. Soluciones MadrePreparar y ltrar tres soluciones: clorhidrato de Tris 1 M (pH 8,5) que contenga edetato diso dico 4 mM (Solucio n Madre 1), clorhidrato de guanidina 8 M (Solucio n Madre 2) y 2mercaptoetanol al 10% en agua (Solucio n Madre 3).
La asparagina y la glutamina se convierten en a cido aspa rtico y a cido gluta mico, respectivamente, durante la hidro lisis a cida. Los residuos de asparagina y a cido aspa rtico se suman y se representan con Asx, y los residuos de glutamina y a cido gluta mico se suman y se representan con Glx. Las prote nas o pe ptidos pueden hacerse reaccionar con bis(1,1-triuoroacetoxi)yodobenceno (BTI) para convertir los residuos de asparagina y glutamina en residuos de a cido diaminopropio nico y a cido diaminobut rico, respectivamente,
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en la hidro lisis a cida. Estas conversiones permiten al analista determinar el contenido de asparagina y glutamina de una prote na o pe ptido en presencia de residuos de a cido aspa rtico y a cido gluta mico. Soluciones ReductorasPreparar y ltrar tres soluciones: una solucio n de a cido triuoroace tico 10 mM (Solucio n 1), una solucio n de clorhidrato de guanidina 5 M y a cido triuoroace tico 10 mM (Solucio n 2) y una solucio n recie n preparada de dimetilformamida que contenga 36 mg de BTI por mL (Solucio n 3). ProcedimientoA un tubo de hidro lisis limpio, transferir aproximadamente 200 mg de la muestra de prueba y agregar 2 mL de la Solucio n 1 o la Solucio n 2 y 2 mL de la Solucio n 3. Sellar el tubo de hidro lisis al vac o. Calentar la muestra a 608 durante cuatro horas en un lugar oscuro. Luego, dializar la muestra con agua para eliminar el exceso de reactivos. Extraer la muestra dializada tres veces con volu menes iguales de acetato de n-butilo y luego liolizar. Despue s, se puede realizar la hidro lisis a cida de la prote na usando los procedimientos descritos previamente. Los residuos de a cido a,b-diaminopropio nico y a cido a-, g-diaminobut rico t picamente no se resuelven de los residuos de lisina en la cromatograf a de intercambio io nico basada en el ana lisis de aminoa cidos. Por lo tanto, cuando se usa el intercambio io nico para separar los aminoa cidos, el contenido de asparagina y glutamina es la diferencia cuantitativa entre el a cido aspa rtico y a cido gluta mico determinados por hidro lisis a cida sin derivatizar y el contenido que se obtiene por derivatizacio n con BTI. [NOTAEl contenido determinado para treonina, metionina, ciste na, tirosina e histidina puede cambiar por la derivatizacio n con BTI; se debe realizar una hidro lisis sin BTI si el analista esta interesado en el contenido de estos otros aminoa cidos en prote nas o pe ptidos.]
cada una. En cada uno de estos Me todos, la sen al analo gica se visualiza mediante un sistema de captacio n de datos y las a reas de los picos se integran con nes de cuanticacio n.
TODO 1DETECCIO N POSTCOLUMNA CON NINHIDRINA ME
Metodolog as de Ana lisis de Aminoa cidos

Existen muchas te cnicas de ana lisis de aminoa cidos y la eleccio n de una de estas te cnicas a menudo depende de la sensibilidad que requiera la valoracio n. En general, aproximadamente la mitad de las te cnicas de ana lisis de aminoa cidos empleadas se basan en la separacio n de los aminoa cidos libres mediante cromatograf a de intercambio io nico seguida por derivatizacio n postcolumna (por ejemplo, con ninhidrina u o-ftalaldeh do). Las te cnicas de deteccio n postcolumna se pueden utilizar con muestras que contienen pequen as cantidades de los componentes de las soluciones amortiguadoras, tales como sales y urea, y por lo general necesitan entre 5 y 10 mg de muestra de prote na por ana lisis. Las dema s te cnicas de aminoa cidos generalmente involucran la derivatizacio n precolumna de los aminoa cidos libres (por ejemplo, isotiocianato de fenilo; carbonato de 6-aminoquinolil-N-hidroxisuccinimidilo; cloruro de (dimetilamino)azobencensulfonilo; 9-uorenil-metilcloroformiato; y 7-uoro-4-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol) seguida de HPLC en fase reversa. Las te cnicas de derivatizacio n precolumna son muy sensibles y por lo general necesitan entre 0,5 y 1,0 mg de la muestra de prote na por ana lisis, aunque pueden ser inuenciadas por sales amortiguadoras presentes en las muestras. Las te cnicas de derivatizacio n precolumna tambie n pueden producir mu ltiples derivados de un aminoa cido dado, lo cual complica la interpretacio n de los resultados. Las te cnicas de derivatizacio n postcolumna generalmente esta n menos inuenciadas por variaciones en el desempen o de la valoracio n que las te cnicas de derivatizacio n precolumna. Se pueden usar los siguientes Me todos para el ana lisis cuantitativo de aminoa cidos. Los instrumentos y reactivos para estos procedimientos esta n disponibles comercialmente. Adema s, existen muchas modicaciones de estas metodolog as con diferentes preparaciones de reactivos, procedimientos de reaccio n, sistemas cromatogra cos, etc. Los para metros espec cos pueden variar segu n los equipos y procedimientos usados. Muchos laboratorios usan ma s de una te cnica de ana lisis de aminoa cidos para aprovechar la ventajas de
La cromatograf a de intercambio io nico con deteccio n postcolumna con ninhidrina es uno de los me todos ma s comu nmente usados para el ana lisis cuantitativo de aminoa cidos. Por lo general, se emplea un sistema de intercambio catio nico a base de Li para el ana lisis de muestras siolo gicas ma s complejas y un sistema de intercambio catio nico a base de Na, que es ma s ra pido, para mezclas de aminoa cidos ma s simples obtenidas de hidrolizados proteicos (que t picamente contienen 17 aminoa cidos). La separacio n de los aminoa cidos en una columna de intercambio io nico se logra a trave s de una combinacio n de cambios en el pH y en la fuerza catio nica. A menudo se emplea un gradiente de temperatura para mejorar la separacio n. Cuando el aminoa cido reacciona con la ninhidrina, el reactante adquiere un color pu rpura o amarillo caracter stico. Los aminoa cidos, a excepcio n de los iminoa cidos, dan un color pu rpura y muestran ma xima absorcio n a 570 nm. Los iminoa cidos, como por ejemplo la prolina, dan un color amarillo y muestran una absorcio n ma xima a 440 nm. La reaccio n postcolumna entre la ninhidrina y cada aminoa cido eluido de la columna se controla a 440 nm y 570 nm y el cromatograma obtenido se usa para determinar la composicio n de aminoa cidos. Se considera que el l mite de deteccio n es 10 pmol para la mayor a de los derivados de aminoa cidos, pero es 50 pmol para la prolina. Se obtiene una respuesta lineal entre 20 y 500 pmol con coecientes de correlacio n superiores a 0,999. Para obtener buenos datos de composicio n, es mejor contar con muestras de ma s de 1 mg antes de la hidro lisis para este ana lisis de aminoa cidos de prote nas o pe ptidos. Ma s adelante se muestra un me todo para la deteccio n postcolumna con ninhidrina. Existen muchos otros me todos, con instrumental y reactivos disponibles comercialmente. Preparacio n de la Fase Mo vil Solucio n ATransferir aproximadamente 1,7 g de citrato de sodio anhidro y 1,5 mL de a cido clorh drico a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con agua y mezclar. Ajustar, si fuera necesario, con a cido clorh drico hasta un pH de 3,0. Solucio n BTransferir aproximadamente 1,7 g de citrato de sodio anhidro y 0,7 mL de a cido clorh drico a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con agua y mezclar. Ajustar con a cido clorh drico, si fuera necesario, hasta un pH de 4,3. Solucio n CPreparar una solucio n que contenga 5% de cloruro de sodio, 1,9% de citrato de sodio anhidro y 0,1% de fenol en agua y ajustar hasta un pH de 6. Solucio n Regeneradora de la ColumnaPreparar una solucio n que contenga 0,8% de hidro xido de sodio en agua y ajustar hasta un pH de 13. Fase Mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A, Solucio n B y Solucio n C como se indica en el Sistema Cromatogra co. Reactivo PostcolumnaTransferir aproximadamente 18 g de ninhidrina y 0,7 g de hidrindantina a 900 mL de una solucio n que contenga 76,7% de dimetil sulfo xido, 0,7% de acetato de litio dihidrato y 0,1% de a cido ace tico y mezclar durante un m nimo de 3 horas bajo un gas inerte, como por ejemplo nitro geno. [NOTAEste reactivo es estable durante 30 d as si se mantiene a una temperatura entre 28 y 88 bajo un gas inerte.] Solucio n AmortiguadoraPreparar una solucio n que contenga 2% de citrato de sodio anhidro, 1% de a cido clorh drico, 0,5% de tiodiglicol y 0,1% de a cido benzoico en agua y ajustar hasta un pH de 2. Sistema Cromatogra coEquipar un cromato grafo de l quidos con un detector con ltros de interferencia apropiados a 440; 570 o 690 nm y una columna de 4,0 mm 6 120 mm rellena con copol mero sulfonado de estireno-divinilbenceno de 7,5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 14 mL por hora. Programar el sistema del siguiente modo. Inicialmente, equilibrar la columna con Solucio n A; a los 25 minutos, cambiar la composicio n de la Fase Mo vil a 100% de Solucio n B; y a los 37
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minutos, cambiar la composicio n al 100% de Solucio n C. A los 75 minutos de la corrida, eluye el u ltimo aminoa cido de la columna y se regenera la columna con la Solucio n Regeneradora de la Columna durante 1 minuto. Equilibrar luego la columna con Solucio n A durante 11 minutos antes de la siguiente inyeccio n. Programar la temperatura de la columna del siguiente modo. La temperatura inicial es 488; despue s de 11,5 minutos, aumentar la temperatura a 658 a una velocidad de 38 por minuto; aproximadamente a los 35 minutos, aumentar la temperatura a 778 a una velocidad de 38 por minuto; y nalmente aproximadamente a los 52 minutos, disminuir la temperatura a 488 a una velocidad de 38 por minuto. Procedimiento y Reaccio n PostcolumnaReconstituir el hidrolizado proteico o pept dico liolizado en la Solucio n Amortiguadora, inyectar una cantidad adecuada en el cromato grafo y proceder como se indica en Sistema Cromatogra co. Cuando los aminoa cidos eluyen de la columna, se mezclan con el Reactivo Postcolumna, que se suministra a una velocidad de ujo de 7 mL por hora, a trave s de una llave T. Despue s de mezclar, el euente de la columna y el Reactivo Postcolumna pasan a trave s de un reactor tubular a una temperatura de 1358, donde se forma un color pu rpura o amarillo caracter stico. Desde el reactor, el l quido pasa a trave s de un color metro con una cubeta de ujo de 12 mm. La luz que emerge de la cubeta se divide en tres haces que son analizados por el detector con ltros de interferencia a 440; 570 o 690 nm. La sen al de 690 nm se puede restar electro nicamente de las otras sen ales para obtener mejores relaciones sen al-ruido. Las sen ales de 440 nm (iminoa cidos) y de 570 nm (aminoa cidos) se pueden sumar para simplicar el manejo de datos.
TODO 2DERIVATIZACIO N FLUOROME TRICA POSTCOLUMNA ME CON OPA
Se usa la cromatograf a de intercambio io nico con deteccio n postcolumna uorome trica con o-ftalaldeh do (OPA). El procedimiento emplea una columna de intercambio io nico para la separacio n de aminoa cidos libres seguida de una oxidacio n postcolumna con hipoclorito de sodio y derivatizacio n usando OPA y N-acetil-Lciste na. El paso de oxidacio n con hipoclorito de sodio permite a las aminas secundarias, como por ejemplo la prolina, reaccionar con el reactivo OPA. El OPA reacciona con las aminas primarias en presencia de un tiol para formar productos de isoindol altamente uorescentes. Esta reaccio n se utiliza para la derivatizacio n postcolumna en el ana lisis de aminoa cidos por cromatograf a de intercambio io nico. La regla de separacio n es la misma que la del Me todo I. Los instrumentos y reactivos para esta forma de ana lisis de aminoa cidos esta n disponibles comercialmente. Existen muchas modicaciones de este me todo. Si bien el OPA no reacciona con aminas secundarias (iminoa cidos, como por ejemplo la prolina) para formar sustancias uorescentes, la oxidacio n con hipoclorito de sodio permite que las aminas secundarias reaccionen con OPA. El procedimiento emplea una columna de intercambio catio nico fuertemente a cida para la separacio n de aminoa cidos libres seguida de una oxidacio n postcolumna con hipoclorito de sodio y derivatizacio n postcolumna usando OPA y un compuesto tiol, como por ejemplo N-acetil-Lciste na y 2-mercaptoetanol. La derivatizacio n de aminoa cidos primarios no se altera perceptiblemente con el aporte continuo de hipoclorito de sodio. La separacio n de los aminoa cidos en una columna de intercambio io nico se logra a trave s de una combinacio n de cambios en el pH y en la fuerza catio nica. Despue s de la derivatizacio n postcolumna con OPA de los aminoa cidos eluidos, el reactante pasa a trave s de un detector uorome trico. La intensidad de la uorescencia de los aminoa cidos derivatizados con OPA se controla con una longitud de onda de excitacio n de 348 nm y una longitud de onda de emisio n de 450 nm. Se considera que el l mite de deteccio n es de unas pocas decenas de picomoles para la mayor a de los derivados de aminoa cidos. La respuesta es lineal entre unos pocos picomoles y unas pocas decenas de nanomoles. Para obtener buenos datos de composicio n en este ana lisis de aminoa cidos de prote nas o pe ptidos, es mejor contar con muestras de ma s de 500 ng antes de la hidro lisis.
A continuacio n se muestra un me todo para la deteccio n postcolumna uorome trica con OPA. Preparacio n de la Fase Mo vil Solucio n APreparar una solucio n de hidro xido de sodio, a cido c trico y alcohol en agua de grado HPLC con una concentracio n de sodio 0,2 N y que contenga 7% de alcohol (p/v), ajustada hasta un pH de 3,2. Solucio n BPreparar una solucio n de hidro xido de sodio y a cido c trico en agua de grado HPLC con una concentracio n de sodio 0,6 N, ajustada a un pH de 10,0. Solucio n C: hidro xido de sodio 0,2 N. Fase Mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A, Solucio n B y Solucio n C como se indica en Sistema Cromatogra co. Preparacio n de Reactivo Postcolumna Solucio n Amortiguadora AlcalinaPreparar una solucio n que contenga carbonato de sodio 384 mM, a cido bo rico 216 mM y sulfato de potasio 108 mM y ajustar hasta un pH de 10,0. Reactivo de HipocloritoAgregar 0,4 mL de una solucio n de hipoclorito de sodio (10% de cloro) a 1 L de la Solucio n Amortiguadora Alcalina. [NOTALa solucio n de hipoclorito es estable durante 2 semanas.] na y 1,6 g de Reactivo OPATransferir 2 g de N-acetil-L-ciste OPA a un matraz volume trico de 15 mL, disolver con alcohol, diluir a volumen con alcohol y mezclar. Transferir esta solucio n y 4 mL de una solucio n acuosa al 10% de e ter polietilenglicol (23) laur lico2 a un matraz volume trico de 1 litro, diluir con 980 mL de Solucio n Amortiguadora Alcalina y mezclar. Sistema Cromatogra coEquipar el cromato grafo de l quidos con un detector uorome trico ajustado a una longitud de onda de excitacio n de 348 nm y una longitud de onda de emisio n de 450 nm y con una columna de 4,0 mm 6 150 mm rellena con material L17 de 7,5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 0,3 mL por minuto y la temperatura de la columna se ajusta a 508. Programar el sistema del siguiente modo. Equilibrar la columna con Solucio n A; durante los siguientes 20 minutos, cambiar linealmente la composicio n de la Fase Mo vil a 85% de Solucio n A y 15% de Solucio n B; luego cambiar abruptamente a 40% de Solucio n A y 60% de Solucio n B; durante los siguientes 18 minutos, cambiar linealmente la composicio n a 100% de Solucio n B y mantenerla durante 7 minutos; luego cambiar abruptamente a 100% de Solucio n C y mantenerla durante 6 minutos; luego cambiar abruptamente a la Solucio n A, mantener esta composicio n durante los siguientes 8 minutos. Procedimiento y Reaccio n PostcolumnaInyectar en el cromato grafo aproximadamente 1,0 nmol de cada aminoa cido en ana lisis y proceder como se indica en Sistema Cromatogra co. Cuando el euente deja la columna, se mezcla con el Reactivo de Hipoclorito. La mezcla pasa a trave s del primer reactor postcolumna que es un tubo de acero inoxidable de 0,5 mm 6 2 m. Inmediatamente a continuacio n del primer reactor postcolumna se coloca un segundo reactor postcolumna de disen o similar que se usa para la reaccio n postcolumna con OPA. La velocidad de ujo tanto para el Reactivo de Hipoclorito como para el Reactivo OPA es 0,2 mL por minuto, dando como resultado una velocidad de ujo total (es decir, Reactivo de Hipoclorito, Reactivo OPA y el euente de la columna) de 0,7 mL por minuto que sale de los reactores posteriores al paso por la columna. Las reacciones postcolumna se realizan a 558. Esto produce un tiempo de permanencia de aproximadamente 33 segundos en el reactor postcolumna con OPA. Despue s de la derivatizacio n postcolumna, el euente pasa a trave s del detector uorome trico.
TODO 3DETERMINACIO N PRECOLUMNA ME
Se usa la derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con fenilisotiocianato (PITC) seguida de una separacio n por HPLC en fase reversa con deteccio n UV. El PITC reacciona con los aminoa cidos para formar derivados de feniltiocarbamilo (PTC) que se pueden detectar con alta sensibilidad a 254 nm. Por lo tanto, se usa la derivatizacio n precolumna de
2 Un grado adecuado esta disponible comercialmente como Palladium Catalyst, Type I (Paladio al 5% en Carbonato de Calcio), de Engelhard Industries, Inc., nu mero de fax (864) 885-1375.
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aminoa cidos con PITC seguida por separacio n por HPLC en fase reversa con deteccio n UV para analizar la composicio n de aminoa cidos. Despue s de eliminar el reactivo al vac o, los aminoa cidos derivatizados se pueden almacenar secos y congelados durante varias semanas sin degradacio n signicativa. Si la solucio n para inyeccio n se mantiene fr a, no hay pe rdida perceptible en la respuesta cromatogra ca despue s de tres d as. La separacio n de los aminoa cidos-PTC por HPLC en fase reversa con una columna ODS se logra a trave s de una combinacio n de cambios en las concentraciones de acetonitrilo y en la fuerza io nica de la solucio n amortiguadora. Los aminoa cidos-PTC eluidos de la columna se controlan a 254 nm. Se considera que el l mite de deteccio n es 1 pmol para la mayor a de los derivados aminoac dicos. Se obtiene una respuesta lineal entre 20 y 500 pmol con coecientes de correlacio n superiores a 0,999. Para obtener buenos datos de la composicio n, en este ana lisis de aminoa cidos de prote nas o pe ptidos es mejor contar con una muestra de ma s de 500 ng de prote na o pe ptido antes de la hidro lisis. Ma s adelante se describe un me todo de derivatizacio n precolumna con PITC. Preparacio n de la Fase Mo vil Solucio n A: acetato de amonio 0,05 M, ajustado con a cido fosfo rico a un pH de 6,8. Solucio n BPreparar acetato de amonio 0,1 M, ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 6,8 y luego preparar un mezcla de esta solucio n y acetonitrilo (1 : 1). Solucio n C: una mezcla de acetonitrilo y agua (70 : 30). Fase Mo vilUsar mezclas variables de la Solucio n A, Solucio n B y Solucio n C como se indica en Sistema Cromatogra co. Preparacio n del Reactivo de Derivatizacio n Solucio n Amortiguadora de Acoplamiento: una mezcla de acetonitrilo, piridina, trietilamina y agua (10 : 5 : 2 : 3). Disolvente de la Muestra: una mezcla de agua y acetonitrilo (7 : 2). Procedimiento de Derivatizacio n de la MuestraDisolver la muestra de prueba liolizada en 100 mL de Solucio n Amortiguadora de Acoplamiento y luego secar en una centr fuga de vac o para eliminar todo el clorhidrato si se realizo un paso de hidro lisis de prote na. Disolver la muestra en 100 mL de Solucio n Amortiguadora de Acoplamiento, agregar 5 mL de PITC e incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos. La muestra de prueba se seca nuevamente en una centr fuga de vac o y se disuelve en 250 mL de Disolvente de la Muestra. Sistema Cromatogra coEquipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 250 mm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto y la temperatura de la columna se mantiene a 528. Programar el sistema del siguiente modo. Equilibrar la columna con la Solucio n A; durante los siguientes 15 minutos, cambiar linealmente la composicio n de la Fase Mo vil a 85% de Solucio n A y 15% de Solucio n B; durante los siguientes 15 minutos, cambiar linealmente la composicio n a 50% de Solucio n A y 50% de Solucio n B; luego cambiar abruptamente a 100% de Solucio n C y mantenerla durante 10 minutos; luego cambiar abruptamente a 100% de Solucio n A y dejar que la columna se equilibre antes de la siguiente inyeccio n. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo aproximadamente 1,0 nmol de cada aminoa cido-PITC en ana lisis (10 mL de la muestra en el Disolvente de la Muestra) y proceder segu n se indica en Sistema Cromatogra co.
TODO 4DERIVATIZACIO N PRECOLUMNA CON AQC ME
Por lo tanto, se usa la derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con AQC seguida de la separacio n por HPLC en fase reversa para analizar la composicio n de aminoa cidos. La separacio n de los aminoa cidos-AQC en una columna ODS se logra a trave s de una combinacio n de cambios en las concentraciones de acetonitrilo y sal. La deteccio n de uorescencia selectiva de los derivados con una longitud de onda de excitacio n de 250 nm y una longitud de onda de emisio n de 395 nm permite la inyeccio n directa de la mezcla de reaccio n sin ninguna interferencia signicativa del u nico subproducto uorescente importante del reactivo, la 6aminoquinolina. El exceso de reactivo se hidroliza ra pidamente (t1/ 25 15 segundos) para producir 6-aminoquinolina-N-hidroxisuccinimida y dio xido de carbono y despue s de 1 minuto no se puede producir ninguna otra derivatizacio n. Las a reas de los picos para los aminoa cidos-AQC esencialmente no cambian durante al menos 1 semana a temperatura ambiente y los derivados tienen ma s que suciente estabilidad para permitir el ana lisis cromatogra co automatizado durante la noche. Se considera que el l mite de deteccio n esta entre aproximadamente 40 fmol y 320 fmol para cada aminoa cido, a excepcio n de la ciste na. El l mite de deteccio n para la ciste na es aproximadamente 800 fmol. Se obtiene una respuesta lineal entre 2,5 mM y 200 mM con coecientes de correlacio n superiores a 0,999. Se pueden obtener buenos datos de composicio n a partir del ana lisis de hidrolizados proteicos derivatizados que contengan tan solo 30 ng de prote na o pe ptido. Ma s adelante se muestra un me todo de derivatizacio n precolumna con AQC. Preparacio n de la Fase Mo vil Solucio n APreparar una solucio n de acetato de sodio 140 mM y trietilamina 17 mM y ajustar con a cido fosfo rico hasta un pH de 5,02. Solucio n B: una mezcla de acetonitrilo y agua (60 : 40). Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y Solucio n B segu n se indica en Sistema Cromatogra co. Procedimiento de Derivatizacio n de la MuestraDisolver aproximadamente 2 mg de la muestra de prueba en 20 mL de a cido clorh drico 15 mM y diluir con una solucio n amortiguadora de borato 0,2 M (pH 8,8) a 80 mL. Iniciar la derivatizacio n agregando 20 mL de AQC 10 mM en acetonitrilo y dejar que prosiga durante 10 minutos a temperatura ambiente. Sistema Cromatogra coEquipar el cromato grafo de l quidos con un detector uorome trico ajustado a una longitud de onda de excitacio n de 250 nm, una longitud de onda de emisio n de 395 nm y con una columna de 3,9 mm 6 150 mm rellena con material L1 de 4 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto y la temperatura de la columna se mantiene a 378. Programar el sistema del siguiente modo. Equilibrar la columna con la Solucio n A; durante los siguientes 0,5 minutos, cambiar linealmente la composicio n de la Fase Mo vil a 98% de Solucio n A y 2% de Solucio n B; luego durante los siguientes 14,5 minutos a 93% de Solucio n A y 7% de Solucio n B; durante los siguientes 4 minutos a 87% de Solucio n A y 13% de Solucio n B; durante los siguientes 14 minutos a 68% de Solucio n A y 32% de Solucio n B; luego cambiar abruptamente a 100% de Solucio n B para un lavado de 5 minutos; durante los siguientes 10 minutos, cambiar abruptamente a 100% de Solucio n A y dejar que la columna se equilibre antes de la siguiente inyeccio n. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo aproximadamente 0,05 nmol de cada aminoa cido-AQC en ana lisis y proceder como se indica en Sistema Cromatogra co.
TODO 5DERIVATIZACIO N PRECOLUMNA CON OPA ME
Se usa la derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con 6aminoquinolil-N-hidroxisuccinimidil carbamato (AQC) y despue s se separan por HPLC en fase reversa con deteccio n uorome trica. El AQC reacciona con los aminoa cidos para formar derivados de urea estables, uorescentes y no sime tricos (aminoa cidos AQC) que se pueden someter fa cilmente al ana lisis por HPLC en fase reversa.
Se usa la derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con OPA y luego se separan por HPLC en fase reversa con deteccio n uorome trica. Esta te cnica no detecta los aminoa cidos que existen como aminas secundarias (por ejemplo, prolina). El OPA junto con un reactivo tiol reacciona con grupos amino primarios para formar productos isoindol altamente uorescentes. Se puede usar 2-mercaptoetanol y a cido 3-mercaptopropio nico como tiol. El OPA por s mismo no muestra uorescencia y por lo tanto no produce picos que intereren. Adema s, su solubilidad y estabilidad
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en soluciones acuosas, junto con la ra pida cine tica de reaccio n permiten la derivatizacio n y ana lisis automatizados usando un muestreador automa tico para mezclar la muestra con el reactivo. Sin embargo, la falta de reactividad con aminoa cidos secundarios ha sido una desventaja importante. Este me todo no detecta los aminoa cidos que son aminas secundarias (por ejemplo, prolina). Para compensar esta desventaja, esta te cnica se puede combinar con la te cnica descrita en el Me todo 7 o en el Me todo 8. A la derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con OPA le sigue la separacio n por HPLC en fase reversa. Debido a la inestabilidad de los derivados aminoa cidos-OPA, la separacio n y el ana lisis por HPLC se realizan inmediatamente despue s de la derivatizacio n. El cromato grafo de l quidos esta equipado con un detector uorome trico para la deteccio n de aminoa cidos derivatizados. La intensidad de uorescencia de los aminoa cidos derivatizados con OPA se controla con una longitud de onda de excitacio n de 348 nm y una longitud de onda de emisio n de 450 nm. Se ha informado de l mites de deteccio n de so lo 50 fmol a trave s de uorescencia, aunque el l mite pra ctico de ana lisis se mantiene en 1 pmol. A continuacio n se muestra un me todo de derivatizacio n precolumna con OPA. Preparacio n de la Fase Mo vil Solucio n A: una mezcla de acetato de sodio 100 mM (pH 7,2), metanol y tetrahidrofurano (900 : 95 : 5). Solucio n B: metanol. Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y de Solucio n B segu n se indica en Sistema Cromatogra co. Reactivo de Derivatizacio nDisolver 50 mg de OPA en 1,25 mL de metanol (apto para secuenciacio n de prote na). Agregar 50 mL de 2-mercaptoetanol y 11,2 mL de borato de sodio 0,4 M (pH 9,5) y mezclar. [NOTAEl reactivo es estable durante 1 semana.] Procedimiento de Derivatizacio n de la MuestraTransferir aproximadamente 5 mL de la muestra de prueba a un recipiente adecuado, agregar 5 mL del Reactivo de Derivatizacio n y mezclar. Despue s de 1 minuto, agregar no menos de 20 mL de acetato de sodio 0,1 M (pH 7,0). Usar 20 mL de esta solucio n para el ana lisis. [NOTASe recomienda usar un esta ndar interno (por ejemplo, norleucina) para el ana lisis cuantitativo debido a variaciones potenciales en el volumen del reactivo en la derivatizacio n de la muestra. La derivatizacio n de la muestra se realiza de manera automatizada en l nea. Debido a la inestabilidad de los derivados aminoa cido-OPA, la separacio n y ana lisis por HPLC se realizan inmediatamente despue s de la derivatizacio n.] Sistema Cromatogra coEquipar el cromato grafo de l quidos con un detector uorome trico ajustado a una longitud de onda de excitacio n de 348 nm y una longitud de onda de emisio n de 450 nm y con una columna de 4,6 mm 6 75 mm rellena con material L3 de 3 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,7 mL por minuto y la temperatura de la columna se mantiene a 378. Programar el sistema del siguiente modo. Equilibrar la columna con 92% de Solucio n A y 8% de Solucio n B; durante los siguientes dos minutos, cambiar la composicio n de la Fase Mo vil a 83% de Solucio n A y 17% de Solucio n B y mantener durante 3 minutos ma s; despue s durante los siguientes 5 minutos cambiar a 54% de Solucio n A y 46% de Solucio n B y mantener durante 2 minutos ma s; despue s durante los siguientes 2 minutos cambiar a 34% de Solucio n A y 66% de Solucio n B y mantener durante 1 minuto; despue s durante los siguientes 0,3 minutos cambiar a 20% de Solucio n A y 80% de Solucio n B y mantener durante 2,6 minutos ma s; y nalmente durante 0,6 minutos cambiar a 92% de Solucio n A y 8% de Solucio n B y mantener durante 0,6 minutos ma s. ProcedimientoInyectar aproximadamente 0,02 nmol de cada derivado aminoa cido-OPA en ana lisis en el cromato grafo y proceder como se indica en Sistema Cromatogra co.
TODO 6DERIVATIZACIO N POSTCOLUMNA CON DABS-CL ME
Se usa derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con cloruro de (dimetilamino)azobencenosulfonilo (DABS-Cl) y luego se separan por HPLC en fase reversa con deteccio n en la regio n de luz visible.
El DABS-Cl es un reactivo cromofo rico empleado para marcar aminoa cidos. Los aminoa cidos marcados con DABS-Cl (aminoa cidos-DABS) son muy estables y muestran la ma xima absorcio n a 436 nm. Los aminoa cidos-DABS, los 19 derivados de aminoa cidos naturales, se pueden separar en una columna ODS de HPLC en fase reversa empleando sistemas de gradientes constituidos por una mezcla de acetonitrilo y una solucio n amortiguadora acuosa. Los aminoa cidos-DABS separados que eluyen de la columna se detectan a 436 nm en la regio n visible. Este me todo puede analizar los iminoa cidos, como por ejemplo la prolina, junto con los aminoa cidos, con igual sensibilidad. El me todo de derivatizacio n con DABS-Cl permite la cuanticacio n simulta nea de residuos de tripto fano mediante hidro lisis previa de la prote na o pe ptido con a cidos sulfo nicos, como por ejemplo a cido mercaptoetanosulfo nico, a cido p-toluensulfo nico o a cido metanosulfo nico, descritos en el Me todo 2 en Hidro lisis de Prote nas en Ana lisis de Aminoa cidos. Los otros residuos a cidos inestables, asparagina y glutamina, tambie n se pueden analizar mediante la conversio n previa en a cido diaminopropio nico y a cido diaminobut rico, respectivamente, tratando la prote na o pe ptido con BTI, descrito en el Me todo 11 en Hidro lisis de Prote nas en Ana lisis de Aminoa cidos. El aminoa cido de origen no proteico, norleucina, no se puede usar como un esta ndar interno en este me todo ya que eluye en una regio n cromatogra ca abundante en picos de aminoa cidos primarios. La nitrotirosina se puede usar como esta ndar interno ya que eluye en una regio n despejada. El l mite de deteccio n de aminoa cidos-DABS es aproximadamente 1 pmol. Se pueden analizar cuantitativamente de 2 a 5 pmol de cada aminoa cido-DABS con conabilidad y so lo se necesitan entre 10 ng y 30 ng del hidrolizado proteico tratado con DABS para cada ana lisis. Ma s adelante se muestra un me todo de derivatizacio n precolumna con DABS-Cl. Preparacio n de la Fase Mo vil Solucio n A: acetato de sodio 25 mM (pH 6,5) que contenga 4% de dimetilformamida. Solucio n B: acetonitrilo. Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y de Solucio n B segu n se indica en Sistema Cromatogra co. Preparacio n del Reactivo de Derivatizacio n Solucio n Amortiguadora de Muestra: bicarbonato de sodio 50 mM ajustado hasta un pH de 8,1. Reactivo de Derivatizacio nDisolver 1,3 mg de DABS-Cl en 1 mL de acetonitrilo. [NOTAEste reactivo se prepara poco antes del paso de derivatizacio n.] Solucio n Amortiguadora de Dilucio n de la MuestraPreparar una mezcla de fosfato de sodio 50 mM (pH 7,0) y alcohol (1 : 1). Procedimiento de Derivatizacio n de la MuestraDisolver la muestra de prueba en 20 mL de Solucio n Amortiguadora de Muestra, agregar 40 mL de Reactivo de Derivatizacio n y mezclar. Sellar el recipiente de la muestra con un tapo n de goma de silicona y calentar a 708 durante 10 minutos. Mientras se calienta la muestra, la mezcla se disuelve. Despue s de la derivatizacio n, diluir la muestra de prueba con una cantidad adecuada de Solucio n Amortiguadora de Dilucio n de la Muestra. Sistema Cromatogra coEquipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 436 nm y una columna de 4,6 mm 6 250 mm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto y la temperatura de la columna se mantiene a 408. Programar el sistema del siguiente modo. Equilibrar la columna con 85% de Solucio n A y 15% de Solucio n B; durante los siguientes 20 minutos, cambiar la composicio n de la Fase Mo vil a 60% de Solucio n A y 40% de Solucio n B; durante los siguientes 12 minutos, cambiar la composicio n a 30% de Solucio n A y 70% de Solucio n B y mantener durante 2 minutos ma s. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo aproximadamente 0,05 nmol de los aminoa cidos-DABS y proceder segu n se indica en Sistema Cromatogra co.
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TODO 7DERIVATIZACIO N PRECOLUMNA CON FMOC-CL ME
TODO 8DERIVATIZACIO N PRECOLUMNA CON NBD-F ME
Se usa derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con 9uorenilmetil cloroformiato (FMOC-Cl) y luego se separan por HPLC en fase reversa con deteccio n uorome trica. El FMOC-Cl reacciona con aminoa cidos primarios y secundarios para formar productos altamente uorescentes. La reaccio n del FMOC-Cl con aminoa cidos se realiza bajo condiciones moderadas, en solucio n acuosa y se completa en 30 segundos. Los derivados son estables y so lo el derivado de histidina muestra descomposicio n. Si bien el FMOC-Cl es uorescente por s mismo, el exceso de reactivo y los subproductos uorescentes se pueden eliminar sin pe rdida de aminoa cidos-FMOC. Los aminoa cidos FMOC se separan por HPLC en fase reversa usando una columna ODS. La separacio n se lleva a cabo mediante elucio n por gradiente que var a linealmente de una mezcla de solucio n amortiguadora de a cido ace tico, metanol y acetonitrilo (50 : 40 : 10) a una mezcla de acetonitrilo y solucio n amortiguadora de a cido ace tico (50 : 50). En estas condiciones, se separan 20 derivados de aminoa cidos en 20 minutos. Cada derivado que eluye de la columna se controla a trave s de un detector uorome trico ajustado a una longitud de onda de excitacio n de 260 nm y una longitud de onda de emisio n de 313 nm. El l mite de deteccio n se encuentra en el intervalo inferior de fmol. Para la mayor a de los aminoa cidos la respuesta es lineal entre 0,1 mM y 50 mM. A continuacio n se muestra un me todo de derivatizacio n precolumna con FMOC-Cl. Preparacio n de Fase Mo vil cido Ace Solucio n Amortiguadora de A ticoTransferir 3 mL de a cido ace tico glacial y 1 mL de trietilamina a un matraz volume trico de 1 litro y diluir a volumen con agua de grado HPLC. Ajustar con hidro xido de sodio hasta un pH de 4,20. cido Solucio n A: una mezcla de Solucio n Amortiguadora de A Ace tico, metanol y acetonitrilo (50 : 40 : 10). Solucio n B: una mezcla de acetonitrilo y Solucio n Amortiguacido Ace dora de A tico (50 : 50). Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y de Solucio n B segu n se indica en el Sistema Cromatogra co. Preparacio n del Reactivo de Derivatizacio n Solucio n Amortiguadora de BoratoPreparar una solucio n de a cido bo rico 1 M y ajustar con hidro xido de sodio hasta un pH de 6,2. Reactivo FMOC-ClDisolver 155 mg de 9-uorenilmetil cloroformiato en 40 mL de acetona y mezclar. Procedimiento de Derivatizacio n de la MuestraAgregar 0,1 mL de Solucio n Amortiguadora de Borato y 0,5 mL de Reactivo FMOC-Cl a 0,4 mL de la muestra de prueba. Despue s de aproximadamente 40 segundos, extraer la mezcla con 2 mL de pentano y luego extraer una vez ma s con otra porcio n de pentano. La solucio n acuosa con los derivados de aminoa cidos queda lista para la inyeccio n. Sistema Cromatogra coEquipar el cromato grafo de l quidos con un detector uorome trico ajustado a una longitud de onda de excitacio n de 260 nm y una longitud de onda de emisio n de 313 nm y con una columna de 4,6 mm 6 125 mm rellena con material L1 de 3 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente de 1,3 mL por minuto. Programar el sistema del siguiente modo. Equilibrar la columna con Solucio n A y mantener esta composicio n durante 3 minutos; durante los siguientes 9 minutos, cambiar a 100% de Solucio n B; durante los siguientes 0,5 minutos, aumentar la velocidad de ujo a 2 mL por minuto y mantenerla hasta que el u ltimo aminoa cido-FMOC eluya de la columna. El tiempo total de la corrida es de aproximadamente 20 minutos. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo no menos de 0,01 nmol de cada aminoa cido-FMOC en ana lisis y proceder como se indica en Sistema Cromatogra co. El derivado histidina-FMOC por lo general dara una respuesta menor que los dema s derivados.
Se usa la derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con 7-uoro4-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol (NBD-F) y despue s se separan por HPLC en fase reversa con deteccio n uorome trica. El 7-uoro-4-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol (NBD-F) reacciona con aminoa cidos primarios y secundarios para formar productos altamente uorescentes. Los aminoa cidos se derivatizan con NBDF calenta ndolos a 608 durante 5 minutos. Los derivados aminoa cidos-NBD se separan en una columna ODS de HPLC en fase reversa empleando un sistema de elucio n por gradiente constituido por una mezcla de acetonitrilo y una solucio n amortiguadora acuosa. En estas condiciones se separan 17 derivados de aminoa cidos en 35 minutos. Se puede usar el a cido Eaminocaproico como esta ndar interno ya que eluye en una regio n cromatogra ca despejada. Cada derivado que eluye de la columna se controla mediante un detector uorome trico ajustado a una longitud de onda de excitacio n de 480 nm y una longitud de onda de emisio n de 530 nm. La sensibilidad de este me todo es casi igual que la del me todo de derivatizacio n precolumna con OPA (Me todo 5), excluyendo la prolina, que no reacciona con el OPA. Esto puede ser una ventaja del NBD-F con respecto al OPA. El l mite de deteccio n para cada aminoa cido es aproximadamente 10 fmol. El ana lisis de perl se logro con aproximadamente 1,5 mg de hidrolizado proteico en la mezcla nal de reaccio n para HPLC. A continuacio n se muestra un me todo de derivatizacio n precolumna con NBD-F. Preparacio n de la Fase Mo vil Solucio n A: una solucio n de citrato de sodio 10 mM que contenga perclorato de sodio 75 mM, ajustada con a cido clorh drico hasta un pH de 6,2. Solucio n B: una mezcla de acetonitrilo y agua (50 : 50). Preparacio n del Reactivo de Derivatizacio n Solucio n Amortiguadora de Muestra: una solucio n de a cido bo rico 0,1 M ajustada con hidro xido de sodio a un pH de 9,2. Reactivo de Derivatizacio nDisolver 5 mg de NBD-F en 1,0 mL de alcohol y mezclar. Procedimiento de Derivatizacio n de la MuestraDisolver la muestra de prueba en 20 mL de Solucio n Amortiguadora de Muestra, agregar 10 mL de Reactivo de Derivatizacio n y mezclar. Calentar el recipiente de la muestra a 608 durante 5 minutos. Despue s de la derivatizacio n, diluir la muestra de prueba con 300 mL de la Solucio n A. Sistema Cromatogra coEquipar el cromato grafo de l quidos con un detector uorome trico ajustado a una longitud de onda de excitacio n de 480 nm y una longitud de onda de emisio n de 530 nm y una columna de 4,6 mm 6 150 mm rellena con s lice ODS con un taman o de part cula de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto y la temperatura de la columna se mantiene a 408. Programar el sistema del siguiente modo. Equilibrar la columna con 94% de Solucio n A y 6% de Solucio n B; durante los siguientes 16 minutos, cambiar linealmente la composicio n a 63% de Solucio n A y 37% de Solucio n B; durante los siguientes 5 minutos, cambiar linealmente la composicio n a 62% de Solucio n A y 38% de Solucio n B; durante los siguientes 9 minutos, cambiar linealmente la composicio n a 100% de Solucio n B y mantener durante otros 5 minutos; nalmente durante 2 minutos, cambiar linealmente la composicio n a 94% de Solucio n A y 6% de Solucio n B y luego dejar equilibrar la columna antes de la siguiente inyeccio n. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo aproximadamente 15 pmol de cada aminoa cido-NBD en ana lisis y proceder como se indica en Sistema Cromatogra co.
Ca lculo y Ana lisis de los Datos

Cuando se determina el contenido de aminoa cidos de un hidrolizado de prote na o pe ptido, se debe tener en cuenta que el paso de hidro lisis a cida destruye el tripto fano y la ciste na. La serina y la treonina se destruyen parcialmente con la hidro lisis a cida, mientras que la isoleucina y la valina podr an escindirse so lo parcialmente. La metionina puede oxidarse durante la hidro lisis
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a cida y algunos aminoa cidos (por ejemplo, glicina y serina) son contaminantes comunes. La aplicacio n de un vac o adecuado (menos de 200 mm de mercurio o 26,7 Pa) o la introduccio n de un gas inerte (argo n) en la ca mara gaseosa del recipiente de reaccio n durante la hidro lisis en fase de vapor puede reducir la destruccio n oxidativa. Por lo tanto, los resultados cuantitativos obtenidos para ciste na, tripto fano, treonina, isoleucina, valina, metionina, glicina y serina de un hidrolizado de prote nas o pe ptidos pueden variar y pueden requerir posterior investigacio n y consideracio n.
LCULOS CA
Porcentaje Molar de los Aminoa cidosEs el nu mero de residuos de cada aminoa cido por cada 100 residuos en una prote na. Este resultado puede ser u til para evaluar los datos de ana lisis de aminoa cidos cuando se desconoce el peso molecular de la prote na o pe ptido a investigar. Esta informacio n se puede usar para corroborar la identidad de una prote na y tiene otras aplicaciones. Identicar e integrar cuidadosamente los picos obtenidos como se indica para cada Procedimiento. Calcular el porcentaje molar de cada aminoa cido presente en la muestra de prueba, por la fo rmula: 100rU / r en donde rU es la respuesta correspondiente al pico, en nmol, del aminoa cido de prueba y r es la suma de respuestas correspondientes a los picos, en nmol, de todos los aminoa cidos presentes en la muestra de prueba. La comparacio n entre el porcentaje molar de aminoa cidos de prueba y los datos de prote nas conocidas puede ayudar a establecer o corroborar la identidad de la prote na de muestra. Muestras de Prote nas DesconocidasEsta te cnica de ana lisis de datos se puede usar para estimar la concentracio n proteica de una muestra de prote na desconocida usando los datos de ana lisis de aminoa cidos. Calcular la masa, en mg, de cada aminoa cido recuperado, por la fo rmula: mMW/1000 en donde m es la cantidad recuperada, en nmoles, del aminoa cido en ana lisis; y MW es el peso molecular promedio, en mg, para ese aminoa cido, corregido por el peso de la mole cula de agua que se elimino durante la formacio n de la unio n pept dica. La suma de las masas de los aminoa cidos recuperados permite estimar la masa total de la prote na analizada despue s de corregir adecuadamente por los aminoa cidos destruidos parcial o completamente. Si esta disponible el peso molecular de la prote na desconocida (es decir, por ana lisis SDS-PAGE o espectrometr a de masas), se puede predecir la composicio n de aminoa cidos de la prote na desconocida. Calcular el nu mero de residuos de cada aminoa cido por la fo rmula: m/(1000M/MWT) en donde m es la cantidad recuperada, en nmol, del aminoa cido en ana lisis; M es la masa total, en mg, de la prote na; y MWT es el peso molecular, en mg, de la prote na desconocida. Muestras de Prote nas ConocidasEsta te cnica de ana lisis de datos se puede usar para investigar la composicio n de aminoa cidos y la concentracio n proteica de una muestra de prote na de peso molecular y composicio n aminoac dica conocidos usando los datos de ana lisis de aminoa cidos. Cuando se conoce la composicio n de la prote na que se esta analizando, se puede aprovechar el hecho de que algunos aminoa cidos se recuperan bien, mientras que la recuperacio n de otros aminoa cidos puede verse comprometida debido a la destruccio n total o parcial (por ejemplo, tripto fano, ciste na, treonina, serina, metionina), la escisio n incompleta de uniones (es decir, para isoleucina y valina) y la contaminacio n por aminoa cidos libres (es decir, por glicina y serina). Los aminoa cidos que se recuperan mejor representan a la prote na y se eligen para cuanticarla. Los aminoa cidos que se recuperan bien son, t picamente, aspartato-asparagina, glutamato-glutamina, alanina, leucina, fenilananina, lisina y arginina. Esta lista se puede modicar segu n la experiencia con el sistema de ana lisis utilizado. Dividir la cantidad, en nmol, de cada uno de los aminoa cidos bien recuperados por el nu mero esperado de residuos de ese aminoa cido con el n de obtener el contenido proteico basado en cada
aminoa cido bien recuperado. Promediar los resultados de contenido proteico calculados. El contenido proteico determinado para cada uno de los aminoa cidos bien recuperados se debe distribuir uniformemente en torno a la media. Descartar los valores de contenido proteico para esos aminoa cidos que se alejan demasiado de la media. T picamente, una variacio n mayor de 5% con respecto a la media se considera inaceptable, pero esto es arbitrario. Recalcular la media del contenido proteico de los valores restantes para obtener el contenido proteico de la muestra. Dividir el contenido de cada aminoa cido por el contenido proteico medio calculado para determinar la composicio n de aminoa cidos de la muestra. Calcular el error relativo de composicio n, en porcentaje, por la fo rmula: 100m / mS en donde m es la cantidad determinada experimentalmente, en nmol por residuo aminoac dico, del aminoa cido en ana lisis; y mS es el valor conocido para los residuos de ese aminoa cido. El error relativo promedio de composicio n es el promedio de los valores absolutos de los errores relativos de composicio n de los aminoa cidos individuales, excluyendo t picamente el tripto fano y la ciste na de este ca lculo. El error relativo promedio de composicio n puede proporcionar informacio n importante acerca de la estabilidad de los ana lisis en funcio n del tiempo. La coincidencia en la composicio n aminoac dica entre la muestra de prote na y la composicio n conocida se puede usar para corroborar la identidad y pureza de la prote na en la muestra.
ELECTROFORESIS CAPILAR
La electroforesis capilar es un me todo f sico de ana lisis basado en la migracio n, dentro de un capilar, de analitos cargados disueltos en una solucio n de electrolito, bajo la inuencia de un campo ele ctrico de corriente continua. En esta seccio n se describen cuatro me todos de electroforesis capilar, Electroforesis Capilar en Solucio n Libre, Electroforesis Capilar en Gel, Isoelectroenfoque Capilar y Cromatograf a Electrocine tica Micelar.
Principio General
La velocidad de migracio n del analito en un campo ele ctrico de intensidad, E, esta determina por la movilidad electrofore tica del analito y la movilidad electroosmo tica de la solucio n amortiguadora dentro del capilar. La movilidad electrofore tica de un soluto (mep) depende de las caracter sticas del soluto (carga ele ctrica, taman o molecular y forma) y de las caracter sticas de la solucio n amortiguadora en donde ocurre la migracio n (tipo y fuerza io nica del electrolito, pH, viscosidad y aditivos). La velocidad electrofore tica (Vep) de un soluto, suponiendo una forma esfe rica, es la siguiente:
en donde q es la carga efectiva de la part cula, Z es la viscosidad de la solucio n amortiguadora, r es el taman o del io n soluto, V es el voltaje aplicado y L es el largo total del capilar. Cuando se aplica un campo ele ctrico a trave s del capilar lleno con solucio n amortiguadora, se genera un ujo de disolvente dentro del capilar que se denomina ujo electroosmo tico. Su velocidad depende de la movilidad electroosmo tica (meo) que a su vez depende de la
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densidad de la carga en la pared interna del capilar y de las caracter sticas de la solucio n amortiguadora. La velocidad electroosmo tica (Veo) es la siguiente:
fore tica de los analitos, por la movilidad electroosmo tica inducida por el capilar y aumentando la eciencia para la banda de cada analito del siguiente modo:
en donde es la constante diele ctrica de la solucio n amortiguadora, es el potencial zeta de la supercie del capilar y los otros te rminos son los denidos anteriormente. Las movilidades electrofore tica y electroosmo tica del analito pueden tener el mismo sentido o sentido opuesto, segu n la carga (positiva o negativa) del soluto, siendo la velocidad del soluto (v) la siguiente: V = Vep + Veo Se usa la suma o la diferencia entre las dos velocidades (Vep y Veo) dependiendo de si las movilidades tienen el mismo sentido o sentido opuesto. En condiciones de una Veo ra pida, con respecto a la Vep de los solutos, se pueden separar analitos cargados tanto negativa como positivamente en la misma corrida. El tiempo (t) que tarda el soluto en migrar la distancia (l) del extremo de inyeccio n del capilar al punto de deteccio n (largo efectivo del capilar) es el siguiente:
en donde mepa y mepb son las movilidades electrofore ticas de los dos compuestos a separar; mep es la movilidad electrofore tica promedio de los dos solutos calculada como: mep = (mepb mepa) y los dema s te rminos son los denidos anteriormente.
Aparato
Un aparato de electroforesis capilar se compone de una fuente de alimentacio n controlada de alto voltaje; dos recipientes de soluciones amortiguadoras que se mantienen en el mismo nivel y que contienen soluciones ano dicas y cato dicas especicadas; dos electrodos (ca todo y a nodo) sumergidos en los recipientes de las soluciones amortiguadoras y conectados a la fuente de alimentacio n; un capilar de separacio n, generalmente de s lice fundido, a veces con una ventana de visualizacio n o ptica alineada con el detector, dependiendo del detector, con los extremos del capilar ubicados en los recipientes de las soluciones amortiguadoras y el capilar lleno con una solucio n que se especica en la monograf a correspondiente; un sistema de inyeccio n adecuado; un detector capaz de controlar la cantidad de sustancia de intere s que pasa a trave s de un segmento del capilar de separacio n en un tiempo dado, generalmente basado en la espectrofotometr a de absorcio n (UV y visible), uorometr a, o deteccio n conductime trica, amperome trica o espectrome trica de masas, dependiendo de las aplicaciones espec cas, o incluso la deteccio n indirecta para detectar compuestos no uorescentes y que no absorben luz UV y un sistema termosta tico capaz de mantener la temperatura dentro del capilar. El me todo de inyeccio n de muestras y su automatizacio n son cr ticos para realizar ana lisis cuantitativos precisos. Los me todos de inyeccio n incluyen la gravedad, la presio n o vac o o la inyeccio n electrocine tica. La cantidad de cada componente de muestra introducida electrocine ticamente depende de su movilidad electrofore tica, introduciendo un posible sesgo en los resultados. Se espera que el capilar, los recipientes de las soluciones amortiguadoras, el me todo de preacondicionamiento, la solucio n de muestra y las condiciones de migracio n este n especicadas en la monograf a correspondiente. La solucio n electrol tica empleada se puede ltrar para eliminar part culas y desgasicar para evitar la formacio n de burbujas que pueden interferir con el sistema de deteccio n. Para lograr un tiempo de migracio n reproducible de los solutos, es necesario crear, para cada me todo anal tico, una rutina de enjuague riguroso despue s de cada inyeccio n.
en donde los otros te rminos son los denidos anteriormente. En general, los capilares de s lice fundida usados en electroforesis tienen cargas negativas en la pared interna, produciendo un ujo electroosmo tico hacia el ca todo. El ujo electroosmo tico tiene que mantenerse constante de corrida a corrida para obtener una buena reproducibilidad en la velocidad de migracio n de los solutos. Para algunas aplicaciones, puede ser necesario reducir o suprimir el ujo electroosmo tico modicando la pared interna del capilar o cambiando el pH de la solucio n amortiguadora. Cuando la muestra se introduce en el capilar, cada io n del analito de la muestra migra dentro del electrolito de fondo como una zona independiente de acuerdo con su movilidad electrofore tica. El extendido de cada banda de soluto (zona de dispersio n) es el resultado de un feno meno diferente. En condiciones ideales, el ensanchamiento de la zona del soluto se debe solamente a la difusio n molecular del soluto a lo largo del capilar (difusio n longitudinal). En este caso, la eciencia de la zona se expresa como el nu mero de platos teo ricos (N), del siguiente modo:
en donde D es la difusio n molecular del soluto en la solucio n amortiguadora y los otros te rminos son los denidos anteriormente. Desde un punto de vista pra ctico, otros feno menos como por ejemplo la disipacio n de calor, la adsorcio n de la muestra en la pared del capilar, la conductividad no coincidente entre la muestra y la solucio n amortiguadora, el largo del tapo n de inyeccio n, el taman o de celda del detector y los recipientes no nivelados de solucio n amortiguadora pueden contribuir signicativamente a la dispersio n de banda. La separacio n entre dos bandas (expresada por la resolucio n, RS) se puede lograr modicando la movilidad electro-
Electroforesis Capilar en Solucio n Libre

En la electroforesis capilar en solucio n libre, los analitos se separan en un capilar que contiene u nicamente una solucio n amortiguadora sin ningu n medio anticonvectivo. En esta te cnica, la separacio n ocurre debido a que los distintos componentes de la muestran migran como bandas discretas con velocidades diferentes. La velocidad de cada banda depende de la movilidad electrofore tica del soluto y del ujo electroosmo tico en el capilar. Se pueden usar capilares recubiertos, con ujo electroosmo tico reducido, para aumentar la capacidad de separacio n de las sustancias que se absorben en las supercies de s lice fundido. Este me todo de electroforesis capilar es apropiado para el ana lisis de mole culas pequen as (PM 5 2000) y grandes (2000 5 PM 5 100 000). Debido a la alta eciencia lograda, se pueden separar mole culas que presenten diferencias diminutas en su relacio n carga-masa. Este me todo tambie n permite la separacio n de compuestos quirales al agregar selectores quirales a la solucio n
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amortiguadora de separacio n. Para lograr una separacio n o ptima hay que tener en cuenta varios para metros instrumentales y de la solucio n electrol tica.
METROS INSTRUMENTALES PARA
VoltajeEl tiempo de separacio n es universalmente proporcional al voltaje aplicado. Sin embargo, un aumento en el voltaje empleado puede producir calor excesivo, aumentando los gradientes de temperatura y viscosidad en la solucio n amortiguadora dentro del capilar, lo cual ensancha la banda y disminuye la resolucio n. TemperaturaEl principal efecto de la temperatura se observa en la viscosidad y conductividad ele ctrica del amortiguador del pH, por lo tanto afecta la velocidad de migracio n. En algunos casos, un aumento en la temperatura del capilar puede alterar la conformacio n de algunas prote nas, modicando su tiempo de migracio n y eciencia de separacio n. CapilarEl largo y dia metro interno del capilar afectan el tiempo de ana lisis, la eciencia de las separaciones y la capacidad. El aumento del largo efectivo y del largo total permiten disminuir los campos ele ctricos, a un voltaje constante, lo cual aumenta el tiempo de migracio n. Para una solucio n amortiguadora y un campo ele ctrico dados, la disipacio n de calor (por lo tanto el ensanchamiento de banda de la muestra) depende del dia metro interno del capilar. Este u ltimo tambie n afecta el l mite de deteccio n, dependiendo del volumen de muestra inyectado en el capilar y del sistema de deteccio n usado. La adsorcio n de los componentes de la muestra en la pared del capilar limita la eciencia; por lo tanto, hay que considerar me todos para evitar estas interacciones cuando se desarrolla un me todo de separacio n. Esto es cr tico en muestras que contienen prote nas. Se han disen ado estrategias para evitar la adsorcio n de prote nas en la pared del capilar. Estas estrategias incluyen el uso de un pH extremo y la absorcio n de aditivos de amortiguadores de pH con carga positiva que so lo necesitan la modicacio n de la composicio n del amortiguador del pH. Otras estrategias incluyen el recubrimiento de la pared interna del capilar con un pol mero unido por enlace covalente a la s lice lo cual evita la interaccio n entre las prote nas y la supercie de la s lice negativamente cargada. Capilares con recubrimiento de pol meros hidro los neutros, catio nicos y anio nicos esta n disponibles comercialmente.
METROS DE LA SOLUCIO N ELECTROLI TICA PARA
Aditivos para Separaciones QuiralesPara separar iso meros o pticos, se agrega un selector quiral a la solucio n amortiguadora de separacio n. Los selectores quirales ma s comu nmente usados son las ciclodextrinas, aunque en algunos casos se pueden usar e teres corona, algunos polisaca ridos o incluso prote nas. Como el reconocimiento quiral depende de las distintas interacciones entre el selector quiral y cada uno de los enantio meros, la resolucio n lograda para los compuestos quirales depende en gran medida del tipo de selector quiral usado. Mientras se desarrolla una separacio n dada, puede ser u til analizar las ciclodextrinas que tengan distintos taman os de cavidad (a, b o -ciclodextrina) o ciclodextrinas modicadas con grupos neutros (metilo, etilo, hidroxialquilo, etc.) o ionizables (aminometilo, carboximetilo, sulfobutile ter, etc.). La resolucio n de separaciones quirales tambie n esta controlada por la concentracio n del selector quiral, la composicio n y el pH de la solucio n amortiguadora y la temperatura de separacio n. Los aditivos orga nicos, como por ejemplo el metanol o la urea, tambie n pueden afectar la resolucio n de la separacio n.
Electroforesis Capilar en Gel

La separacio n ocurre dentro de un capilar lleno con un pol mero que actu a como tamiz molecular. Los componentes ma s pequen os en la muestra se mueven ma s ra pidamente por el capilar que los componentes ma s grandes. Se puede usar este me todo para la separacio n de biopol meros-prote nas y fragmentos de ADN, segu n sus masas moleculares.
STICAS DE GELES QUI MICOS Y FI SICOS CARACTERI
Tipo de Solucio n Amortiguadora y ConcentracionesLas soluciones amortiguadoras apropiadas para la electroforesis capilar tienen una capacidad amortiguadora adecuada en el intervalo de pH de eleccio n y baja movilidad para minimizar la generacio n de corriente. Para minimizar la distorsio n del pico, es importante hacer coincidir la movilidad de los iones en la solucio n amortiguadora con la movilidad del soluto, siempre que sea posible. Es importante el tipo de disolvente de la muestra empleado para lograr el enfoque de la muestra en la columna, lo que aumenta la eciencia de separacio n y mejora la deteccio n. Adema s, el aumento en la concentracio n de las soluciones amortiguadoras hasta un pH dado disminuye el ujo electroosmo tico y la velocidad del soluto. pH de la Solucio n AmortiguadoraEl pH de la solucio n amortiguadora puede afectar la separacio n al modicar la carga del analito o de otros aditivos y al cambiar el ujo electroosmo tico. Para la separacio n de prote nas y pe ptidos, un cambio en el pH de la solucio n amortiguadora desde por encima del punto isoele ctrico hasta por debajo del punto isoele ctrico cambia la carga neta del soluto de negativo a positivo. Un aumento en el pH de la solucio n amortiguadora generalmente aumenta el ujo electroosmo tico. Disolventes Orga nicosLos modicadores orga nicos, como por ejemplo el metanol, el acetonitrilo y otros, se agregan a la solucio n amortiguadora acuosa para aumentar la solubilidad del soluto o de otros aditivos o para afectar la ionizacio n de los componentes de la muestra. Estos modicadores orga nicos agregados a la solucio n amortiguadora suelen disminuir el ujo electroosmo tico.
Geles Qu micosLos geles qu micos se preparan dentro del capilar por reaccio n de mono meros. Un ejemplo de dicho gel es una poliacrilamida entrecruzada. Este tipo de gel esta unido a la pared de s lice fundida y no se puede eliminar sin destruir el capilar. Para el ana lisis de prote nas, la solucio n amortiguadora de separacio n contiene dodecilsulfato de sodio y la muestra se desnaturaliza por calor en una mezcla de dodecilsulfato de sodio y 2-mercaptoetanol o ditiotreitol antes de la inyeccio n. La optimizacio n de la separacio n en un gel entrecruzado se obtiene modicando la solucio n amortiguadora de separacio n (ver Electroforesis Capilar en Solucio n Libre) y controlando la porosidad del gel cuando se prepara. Para un gel de poliacrilamida entrecruzada, la porosidad se puede modicar cambiando la concentracio n de acrilamida o la relacio n del agente de entrecruzamiento. Como regla, al disminuir la porosidad del gel ser reduce la movilidad de los solutos. Debido a la rigidez de este tipo de gel, so lo se puede usar la inyeccio n electrocine tica. Geles F sicosLos geles f sicos son pol meros hidro los (es decir, poliacrilamida lineal, derivados de celulosa, dextrano, etc.) que se pueden disolver en soluciones amortiguadoras acuosas de separacio n, dando lugar a un medio de separacio n que tambie n actu a como tamiz molecular. Estos medios de separacio n polime ricos son ma s fa ciles de preparar que los pol meros entrecruzados. Se pueden preparar en un vial y llenar por presio n un capilar de pared recubierta sin ujo electroosmo tico. Si se reemplaza el gel antes de cada inyeccio n generalmente mejora la reproducibilidad de la separacio n. La porosidad de los geles f sicos se puede aumentar usando pol meros de un peso molecular mayor (a una concentracio n de pol mero dada) o disminuyendo la concentracio n de pol mero (para un peso molecular de pol mero dado). Al disminuir la porosidad del gel se reduce la movilidad del soluto para la misma solucio n amortiguadora. Se pueden usar te cnicas de inyeccio n hidrodina mica y de electromigracio n ya que la disolucio n de estos pol meros en la solucio n amortiguadora produce soluciones poco viscosas.
Isoelectroenfoque Capilar
Las mole culas migran bajo la inuencia del campo ele ctrico, siempre y cuando este n cargadas, en un gradiente de pH generado por anfolitos que tienen una amplia gama de valores de pI (a cidos
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poli-aminocarbox licos) disueltos en la solucio n amortiguadora de separacio n. Los tres pasos ba sicos en el isoelectroenfoque capilar son la carga de la muestra, el enfoque y la movilizacio n. Carga Carga en un Solo PasoLa muestra se mezcla con anfolitos y se introduce en el capilar por presio n o vac o. Carga SecuencialSe introducen en el capilar una solucio n amortiguadora inicial, luego los anfolitos, luego la muestra mezclada con anfolitos, otra vez los anfolitos solos y nalmente la solucio n amortiguadora nal. El volumen de la muestra debe ser sucientemente pequen o como para no modicar el gradiente de pH. EnfoqueCuando se aplica voltaje, los anfolitos migran hacia el ca todo o el a nodo segu n su carga neta, creando un gradiente de pH desde el a nodo (menor pH) al ca todo (mayor pH). Los componentes a separar migran hasta que alcanzan el pH correspondiente a su punto isoele ctrico y la corriente cae a valores muy bajos. Movilizacio nLas bandas de los componentes separados migran ma s alla del detector mediante uno de los siguientes tres me todos. Me todo 1Durante el Enfoque, bajo la inuencia del ujo electroosmo tico cuando este ujo es sucientemente pequen o para permitir el enfoque de los componentes. Me todo 2Por aplicacio n de presio n positiva despue s del Enfoque. Me todo 3Despue s del Enfoque, agregando sales en el recipiente del ca todo o del a nodo (dependiendo del sentido elegido para la movilizacio n), a n de alterar el pH en el capilar cuando se aplica voltaje. Al cambiar el pH, las prote nas y anfolitos se movilizan hacia el recipiente que contiene las sales agregadas y pasan por el detector. La separacio n lograda se expresa como pI y depende del gradiente de pH (dpH), el nu mero de anfolitos que tienen valores de pI diferentes, el coeciente de difusio n (D), la intensidad del campo ele ctrico (E) y la variacio n de la movilidad electrofore tica del analito en funcio n del pH y es la siguiente:
Cromatograf a Electrocine tica Micelar (CECM)

La separacio n se efectu a en una solucio n electrol tica que contiene un agente tensoactivo, generalmente io nico, en una concentracio n por encima de la concentracio n micelar cr tica. Las mole culas de soluto se distribuyen entre la solucio n amortiguadora acuosa y la fase seudo-estacionaria compuesta por las micelas segu n el coeciente de particio n del soluto. La te cnica se puede considerar un h brido de electroforesis y cromatograf a. Es una te cnica electrofore tica que se puede usar para la separacio n de solutos neutros o cargados manteniendo la eciencia, la velocidad y la aptitud del instrumento de electroforesis capilar. Uno de los agentes tensoactivos ma s ampliamente usados es el dodecilsulfato de sodio, aunque tambie n se han usado otros agentes tensoactivos anio nicos y catio nicos, como por ejemplo sales de cetiltrimetilamonio. A un pH neutro y alcalino, se genera un ujo electroosmo tico fuerte que mueve los iones de la solucio n amortiguadora de separacio n hacia el ca todo. Si se usa dodecilsulfato de sodio como agente tensoactivo, la migracio n electrofore tica de la micela anio nica se produce en el sentido opuesto, hacia el a nodo. Como resultado, la velocidad general de migracio n de las micelas disminuye en comparacio n con el ujo en masa de la solucio n electrol tica. En el caso de solutos neutros, como el analito se puede repartir entre la micela y la solucio n amortiguadora acuosa y no tiene movilidad electrofore tica, la velocidad de migracio n del analito dependera u nicamente del coeciente de particio n entre la micela y la solucio n amortiguadora acuosa. En el electroforetograma, el pico correspondiente a cada soluto sin carga siempre se encuentra entre el del marcador del ujo electroosmo tico y el de la micela y el tiempo transcurrido entre estos dos picos se denomina ventana de separacio n. Para los solutos con carga ele ctrica, la velocidad de migracio n depende del coeciente de particio n del soluto entre la micela y la solucio n amortiguadora acuosa y de la movilidad electrofore tica del soluto en ausencia de micelas. El mecanismo de separacio n es esencialmente cromatogra co y la migracio n del soluto y la resolucio n se pueden expresar en funcio n del factor de capacidad del soluto (K), que es la relacio n entre el nu mero total de moles de soluto en la micela y los moles en la fase mo vil. Para un compuesto neutro, K es del siguiente modo:
en donde dpH/dx es el gradiente de pH; y dm/dpH es la variacio n de la movilidad de la solucio n en funcio n del pH en la regio n cercana al pI. Para metros de Optimizacio nLos principales para metros que se deben considerar en el desarrollo de las separaciones son el voltaje, el capilar y los solutos. VoltajeUso de campos altos desde 300 V/cm a 1000 V/cm durante el Enfoque. CapilarSegu n la estrategia de Movilizacio n seleccionada (ver ma s arriba), el ujo electroosmo tico se debe reducir o eliminar. Los capilares recubiertos tienden a reducir el ujo electroosmo tico. SolucionesEl recipiente con el amortiguador del pH correspondiente al a nodo esta lleno de una solucio n de pH ma s bajo que el pI del anfolito ma s a cido y el recipiente del ca todo esta lleno con una solucio n que tiene un pH ma s alto que el pI del anfolito ma s ba sico. Frecuentemente se usa a cido fosfo rico para el a nodo e hidro xido de sodio para el ca todo. La adicio n de un pol mero, como la metilcelulosa, a la solucio n del anfolito tiende a suprimir las fuerzas convectivas (si las hubiese) y el ujo electroosmo tico por aumento de la viscosidad. Hay disponibles comercialmente anfolitos en muchos intervalos de pH que se pueden mezclar para obtener un intervalo de pH ampliado. Los intervalos de pH ma s amplios se usan para estimar el punto isoele ctrico mientras que los ma s estrechos se emplean para mejorar la exactitud. La calibracio n se puede llevar a cabo relacionando el tiempo de migracio n con el punto isoele ctrico de una serie de marcadores esta ndar de prote nas. Durante el Enfoque, se puede evitar la precipitacio n de prote nas en su punto isoele ctrico, si fuera necesario, usando aditivos de amortiguadores de pH como por ejemplo glicerol, agentes tensoactivos, urea o amortiguadores de pH zwitterio nicos. Sin embargo, segu n las concentraciones, la urea puede desnaturalizar las prote nas.
en donde tr es el tiempo de migracio n del soluto; to es el tiempo de ana lisis del soluto no retenido obtenido al inyectar un marcador de ujo electroosmo tico que no entra a la micela (por ejemplo, metanol); tm es el tiempo de migracio n de la micela medido al inyectar un marcador de micela, como por ejemplo Suda n III, que migra continuamente asociado con la micela; K es el coeciente de particio n del soluto; VS es el volumen de la fase de las micelas; y VM es el volumen de la fase mo vil. La resolucio n entre dos compuestos que migran cerca (RS) es la siguiente:
en donde N es el nu mero de platos teo ricos para uno de los compuestos; a es la selectividad obtenida; Ka y Kb son los factores de capacidad para ambos componentes; y los otros te rminos son los denidos anteriormente. Ecuaciones similares, aunque no ide nticas, dan valores de K y RS para compuestos con carga ele ctrica. Para metros de Optimizacio nLos principales para metros a considerar en el desarrollo de separaciones por CECM son los para metros instrumentales y de la solucio n electrol tica.
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METROS INSTRUMENTALES PARA
VoltajeEl tiempo de separacio n es inversamente proporcional al voltaje aplicado. Un aumento en el voltaje podr a generar calor excesivo, aumentando los gradientes de temperatura y de viscosidad de la solucio n amortiguadora en la seccio n transversal del capilar. Este efecto puede ser signicativo con amortiguadores del pH de alta conductividad, como por ejemplo aquellos que contienen micelas. La disipacio n insuciente del calor ensancha la banda y disminuye la resolucio n. TemperaturaLas variaciones en la temperatura del capilar afectan el coeciente de particio n del soluto entre la solucio n amortiguadora y la micela, la concentracio n cr tica de micelas y la viscosidad de la solucio n amortiguadora. Estos para metros contribuyen al tiempo de migracio n de los solutos. CapilarEl largo y el dia metro interno contribuyen al tiempo de ana lisis y a la eciencia de las separaciones. El aumento del largo efectivo y del largo total puede disminuir los campos ele ctricos, trabajando a un voltaje constante, aumenta el tiempo de migracio n y mejora la eciencia de la separacio n. El dia metro interno controla la disipacio n de calor, con un amortiguador del pH dado y a un campo ele ctrico dado y ensancha la banda de la muestra.
METROS DE LA SOLUCIO N ELECTROLI TICA PARA
adsorcio n en las micelas, se ha usado para mejorar la selectividad de las separaciones en CECM. Estos aditivos pueden ser un segundo agente tensoactivo (io nico o no io nico) que da lugar a la formacio n de micelas mixtas, o cationes meta licos que se disuelven en la micela y forman complejos de coordinacio n con los solutos.
LISIS CUANTITATIVO ANA
Las a reas de los picos se dividen por el tiempo de migracio n correspondiente para obtener el a rea corregida a n de compensar el cambio en el tiempo de migracio n de corrida a corrida, reduciendo la variacio n de la respuesta. Tambie n compensa las distintas respuestas de los constituyentes de la muestra que tienen diferentes tiempos de migracio n. Cuando se usa un esta ndar interno, hay que vericar que no enmascare ninguno de los picos de la sustancia a examinar. Ca lculosA partir de los valores obtenidos, calcular el contenido del componente o componentes que se esta n determinando. Cuando se indique, se calcula el porcentaje de uno o ma s componentes de la muestra a examinar determinando las a reas del pico o picos como porcentaje de las a reas totales corregidas de todos los picos, excluyendo aquellos debidos a disolventes o reactivos agregados. Se recomienda usar un sistema de integracio n automa tico (sistema integrador o de adquisicio n y procesamiento de datos).
Tipo y Concentracio n del Agente TensoactivoEl tipo de agente tensoactivo, al igual que la fase estacionaria en cromatograf a, afecta la resolucio n ya que modica la selectividad de la separacio n. El logaritmo de K de un compuesto neutro aumenta linealmente con la concentracio n de detergente en la fase mo vil. La resolucio n en CECM alcanza un ma ximo cuando K se acerca al valor de
Aptitud del Sistema de Electroforesis Capilar

La eleccio n de los para metros de aptitud a usar depende del tipo de electroforesis capilar. Estos para metros son el factor de capacidad (K) usado u nicamente para la Electroforesis Electrocine tica Micelar, el nu mero de platos teo ricos (n), el factor de simetr a (AS) y la resolucio n (RS). Es de destacar que las expresiones teo ricas para n y RS se han descrito en las secciones anteriores, pero las ecuaciones ma s pra cticas que permiten la determinacio n de estos para metros de aptitud usando electroforetogramas se describen a continuacio n. El nu mero de platos teo ricos (n) se puede calcular a partir de la fo rmula: n = 5,54 (t / b0,5)2 en donde t es la distancia, en mm, a lo largo de la l nea base entre el punto de inyeccio n y la perpendicular trazada desde el ma ximo del pico en cuestio n; y b0,5 es el ancho del pico, en mm, a la mitad de su altura. La resolucio n (RS) se puede calcular a partir de la fo rmula: RS = 1,18(tb ta / b0,5b b0,5a) en donde tb y ta son las distancias, en mm, a lo largo de la l nea base, entre el punto de inyeccio n y la perpendicular trazada desde el ma ximo de los dos picos adyacentes (tb 4 ta); y b0,5b y b0,5a son los anchos de los picos, en mm, a la mitad de su altura. La resolucio n (RS) tambie n se puede calcular midiendo la altura del valle (c) entre dos picos parcialmente resueltos en una preparacio n esta ndar, la altura del pico ma s pequen o (d) y especicando que (c/d)5x, en donde x es el l mite indicado en la monograf a correspondiente. El factor de simetr a de un pico (AS) se puede calcular usando la fo rmula: AS = b0,05/2A en donde b0,05 es el ancho del pico a una vige sima parte de la altura del pico; y A es la distancia entre la perpendicular trazada desde el ma ximo del pico y el borde frontal del pico a una vige sima parte de la altura del pico. Otros para metros de aptitud del sistema incluyen pruebas para la repetibilidad del a rea (es decir, la desviacio n esta ndar de las a reas o del a rea/tiempo de migracio n) y pruebas para la repetibilidad del tiempo de migracio n (es decir, la desviacio n esta ndar del tiempo de migracio n). Para la repetibilidad del tiempo de migracio n, es necesario usar una prueba para medir la aptitud de los procedimientos de lavado del capilar. Para evitar tiempos de migracio n no repetibles, una pra ctica alternativa es usar un tiempo de migracio n relativo al esta ndar interno.
la modicacio n de la concentracio n del agente tensoactivo en la fase mo vil cambia la resolucio n. pH de la Solucio n AmortiguadoraEl pH no modica el coeciente de particio n de solutos no ionizados, pero puede modicar el ujo electroosmo tico en capilares sin recubrimiento. Una disminucio n en el pH de la solucio n amortiguadora disminuye el ujo electroosmo tico y por lo tanto aumenta la resolucio n de los solutos neutros, aumentando el tiempo de ana lisis. Disolventes Orga nicosSe pueden agregar modicadores orga nicos (metanol, propanol, acetonitrilo, etc.) a la solucio n electrol tica de separacio n para mejorar la separacio n de compuestos hidro fobos. La adicio n de estos modicadores generalmente disminuye el tiempo de migracio n y la selectividad de la separacio n. La adicio n de modicadores orga nicos afecta la formacio n de micelas, por lo tanto so lo se puede usar una concentracio n dada de un agente tensoactivo con un cierto porcentaje de un modicador orga nico antes de eliminar o alterar el equilibrio de micelacio n, con lo cual desaparecen las micelas y desaparece el mecanismo de particio n de la CECM. La eliminacio n de micelas en presencia de un alto contenido de disolvente orga nico no siempre signica que la separacio n ya no sera posible, dado que en ciertos casos, la interaccio n hidro foba entre el mono mero tensoactivo io nico y los solutos neutros forman complejos solvofobos que se pueden separar electrofore ticamente. Aditivos para Separaciones QuiralesSe incluye un selector quiral en el sistema micelar ya unido al agente tensoactivo por enlace covalente o agregado al electrolito de separacio n micelar. Las micelas que tienen un grupo con propiedades de discriminacio n quiral incluyen sales, a cidos N-dodecanoil-L-aminoa cidos, sales biliares, etc. La resolucio n quiral tambie n se puede lograr usando discriminadores quirales, como por ejemplo ciclodextrinas agregadas a las soluciones electrol ticas que contienen agentes tensoactivos aquirales micelizados. Otros AditivosLa selectividad se puede modicar agregando productos qu micos al amortiguador del pH. Tambie n se emplea la adicio n de varios tipos de ciclodextrinas al amortiguador del pH para reducir la interaccio n de solutos hidro fobos con la micela, aumentando la selectividad para este tipo de compuesto. La adicio n de sustancias modicadoras de las interacciones soluto-micela por
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Una prueba para vericar la relacio n sen al-ruido de una preparacio n esta ndar o para determinar el l mite de cuanticacio n es un para metro u til para medir la aptitud del sistema. El l mite de deteccio n y el l mite de cuanticacio n corresponden a una relacio n sen al-ruido mayor que 3 y 10, respectivamente. La relacio n sen alruido (S/N) se calcula del siguiente modo: S/N = 2H/hn en donde H es la altura del pico correspondiente en el electroforetograma obtenido con la solucio n de referencia especicada; y hn es el valor absoluto de la ma xima uctuacio n de ruido desde la l nea base en un electroforetograma obtenido despue s de inyectar un blanco y observado sobre una distancia igual a veinte veces el ancho a la mitad de la altura del pico en el electroforetograma obtenido con la solucio n de referencia y situado equitativamente alrededor del lugar donde se encontrar a este pico.
ISOELECTROENFOQUE
El isoelectroenfoque (IEF, por su sigla en ingle s) es un me todo de electroforesis que separa prote nas segu n sus puntos isoele ctricos. La separacio n se lleva a cabo en una capa gruesa de gel de poliacrilamida o agarosa que contiene una mezcla de electro litos anfote ricos (anfolitos). Cuando se aplica un campo ele ctrico, los anfolitos migran en el gel, creando un gradiente de pH. En algunos casos, se usan geles que contienen un gradiente de pH inmovilizado, preparado por incorporacio n de a cidos y bases de biles en regiones espec cas de la red de gel durante su preparacio n. Cuando las prote nas aplicadas alcanzan la zona del gel que tiene un pH igual a su punto isoele ctrico, su carga se neutraliza y la migracio n cesa. Los gradientes se pueden formar en diversos intervalos de pH, segu n la mezcla de anfolitos elegida.
prote na coloreada (p. ejemplo: hemoglobina) en distintas posiciones en la supercie del gel y aplicando el campo ele ctrico: el estado estacionario se alcanza cuando todas las aplicaciones dan un patro n de banda ide ntico. En algunos procedimientos, se determina que el enfoque esta completo segu n el tiempo transcurrido despue s de la aplicacio n de la muestra. La resolucio n entre las bandas de prote nas en un gel de IEF preparado con anfolitos transportadores puede ser muy buena. Se puede lograr una mejor resolucio n usando gradientes de pH inmovilizados donde las sustancias amortiguadoras, que son ana logas a los anfolitos transportadores, se copolimerizan dentro de la matriz de gel. Las prote nas que muestran pI que dieren tan so lo en 0,02 unidades de pH se pueden resolver usando un gel preparado con anfolitos transportadores, mientras que los gradientes de pH inmovilizados pueden resolver prote nas que dieran en aproximadamente 0,001 unidades de pH. El gel de IEF se puede usar como prueba de identidad cuando la migracio n en el gel se compara con una preparacio n esta ndar y prote nas de calibracio n de IEF; el gel de IEF se puede usar como prueba de l mite cuando la densidad de una banda en el IEF se compara subjetivamente con la densidad de las bandas que aparecen en una preparacio n esta ndar, o se puede usar como prueba semicuantitativa cuando la densidad se mide usando un densito metro o instrumental similar para determinar la concentracio n relativa de prote na en las bandas.
Aparato
Un aparato para isoelectroenfoque consiste en un generador de corriente continua controlable, de salida estabilizada; una ca mara pla stica r gida de isoelectroenfoque que contienen una placa enfriada de un material adecuado para sostener el gel; y una cubierta pla stica con electrodos de platino que se conectan al gel por medio de papel absorbente de largo, ancho y grosor adecuados, impregnado con soluciones de electro litos ano dicos y cato dicos.
Principios Generales
Cuando una prote na esta en la posicio n de su punto isoele ctrico, no tiene carga neta y el campo ele ctrico no la puede mover en una matriz de gel. Sin embargo, se puede mover de dicha posicio n por difusio n. El gradiente de pH obliga a la prote na a mantenerse en la posicio n de su punto isoele ctrico, concentra ndola, este efecto de concentracio n se denomina "enfoque". Al aumentar el voltaje aplicado o reducir la carga de la muestra, hay una mejor resolucio n de las bandas. El voltaje aplicado esta limitado por el calor generado, que necesita ser disipado. El uso de geles delgados y una placa de enfriamiento eciente que este controlada por un circulador termosta tico evita que el gel se queme y permite un enfoque n tido. La separacio n se estima mediante la diferencia de pI m nima que es necesaria para separar dos bandas vecinas, del siguiente modo:
Procedimiento
A menos que se indique lo contrario en una monograf a dada, se usara el procedimiento siguiente en geles de poliacrilamida en capa gruesa. Preparacio n de los Geles MontajeEsta compuesto de una placa de vidrio (A) sobre la cual se coloca la pel cula de polie ster (B) para facilitar la manipulacio n del gel, uno o ma s espaciadores (C), una segunda placa de vidrio (D) y pinzas para mantener unida la estructura (ver Figura 1).
en donde D es el coeciente de difusio n de la prote na; dpH/dx es el gradiente de pH; E es la intensidad del campo ele ctrico, en voltios por cent metro y dm/dpH es la variacio n de la movilidad del soluto en funcio n del pH en la regio n cercana al pI. Como no se pueden alterar D y dm/dpH para una prote na dada, la separacio n se puede mejorar usando un intervalo de pH ma s estrecho y aumentando la intensidad del campo ele ctrico. Desde un punto de vista operativo, se debe prestar especial atencio n a las caracter sticas de la muestra o a su preparacio n. La sal en una muestra puede ser un problema y en lo posible es mejor preparar la muestra en agua desionizada o anfolitos al 2% usando dia lisis o ltracio n con gel si fuera necesario. Se han usado potenciales de 2500 voltios y se consideran o ptimos en ciertas condiciones. Se pueden aplicar hasta 30 vatios de potencia constante y generalmente se produce una separacio n completa en 1,5 a 3,0 horas. El tiempo necesario para completar el enfoque en capas delgadas de gel de poliacrilamida se determina colocando una
Fig. 1 Molde
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Gel de Poliacrilamida al 7,5%Disolver 29,1 g de acrilamida y 0,9 g de metilenbisacrilamida en 100 mL de agua. Agregar la mezcla de anfolitos especicada en la monograf a individual a 2,5 volu menes de esta solucio n y llevar hasta 10 volu menes con agua. Mezclar cuidadosamente y desgasicar la solucio n. Preparacio n del MontajeColocar la pel cula de polie ster sobre la placa de vidrio inferior, aplicar el espaciador, colocar la segunda placa de vidrio y las pinzas. Antes de usar, colocar la mezcla en un agitador magne tico y agregar 0,25 volu menes de una solucio n de persulfato de amonio al 10% y 0,25 volu menes de tetrametilendiamina. Llenar inmediatamente con el gel el espacio entre las placas de vidrio del montaje. Solucio n Fijadora para Gel de Poliacrilamida de IsoelectroenfoqueMezclar 35 g de a cido sulfosalic lico y 100 g de a cido tricloroace tico en 1000 mL de agua. Solucio n de Tincio n Coomassie y Solucio n de Decoloracio n Usar las mismas soluciones indicadas en Electroforesis en Gel de Poliacrilamida. ProcedimientoDesarmar el montaje y usando la pel cula de polie ster, transferir el gel al soporte enfriado humedecido con unos pocos mililitros de un l quido adecuado, procurando evitar que se formen burbujas de aire. Preparar las soluciones de prueba y las soluciones de referencia segu n se especica en la monograf a individual. Colocar sobre el gel las tiras de papel para la aplicacio n de muestras, de aproximadamente 10 mm 6 5 mm, e impregnar cada una con las cantidades prescritas de las soluciones de prueba y de referencia. Si la concentracio n proteica de la solucio n es demasiado baja, se pueden superponer varias tiras (hasta cuatro). Aplicar tambie n la cantidad descrita de una solucio n de prote nas con puntos isoele ctricos conocidos como marcadores de pH para calibrar el gel. En algunos procedimientos, el gel tiene ranuras moldeadas previamente donde se aplica la solucio n de la muestra, en lugar de usar tiras de papel impregnadas. Cortar dos tiras de papel del taman o del gel e impregnarlas con las soluciones de los electro litos: a cida para el a nodo y alcalina para el ca todo. Las composiciones de las soluciones del a nodo y el ca todo se proporcionan en cada monograf a. Aplicar estos papeles absorbentes a cada lado del gel a varios mil metros del borde. Colocar la cubierta de modo que los electrodos este n en contacto con los papeles absorbentes (con respecto a los polos ano dico y cato dico). Proceder con el isoelectroenfoque aplicando los para metros descritos en la monograf a individual. Cortar la corriente cuando la migracio n de la mezcla de las prote nas esta ndar se haya estabilizado. Usando pinzas, retirar las tiras de aplicacio n de la muestra y los dos papeles absorbentes de los electrodos. Sumergir el gel en la Solucio n Fijadora para Gel de Poliacrilamida de Isoelectroenfoque. Incubar con agitacio n suave a temperatura ambiente durante 30 minutos. Escurrir la solucio n y agregar 200 mL de la Solucio n de Decoloracio n. Incubar con agitacio n durante 1 hora. Escurrir el gel y agregar la Solucio n de Tincio n Coomassie. Incubar durante 30 minutos. Desten ir el gel por difusio n pasiva con la Solucio n de Decoloracio n hasta que las bandas se vean bien contra un fondo transparente. Ubicar la posicio n e intensidad de las bandas en el electroferograma como se prescribe en cada monograf a. Procedimiento AlternativoCuando una monograf a hace referencia al me todo general para el isoelectroenfoque antes descrito, se pueden usar variaciones en la metodolog a o el procedimiento, sujetas a validacio n. Estas variaciones incluyen el uso de geles previamente moldeados disponibles comercialmente; el uso de gradientes de pH inmovilizados; el uso de varillas de gel; y el uso de cartuchos de distintas dimensiones, incluyendo geles ultra delgados (0,2 mm); las variaciones en el procedimiento de aplicacio n de la muestra, incluyendo distintos volu menes de muestra o el uso de ma scaras de aplicacio n de la muestra o tiras absorbentes que no sean de papel; el uso de distintas condiciones de corrida, incluyendo variaciones en el campo ele ctrico dependiendo de las dimensiones del gel y el equipo y el uso de tiempos de migracio n jos en lugar de la interpretacio n subjetiva de la estabilidad de la banda; la inclusio n de un paso previo al enfoque; el uso de instrumentacio n automatizada; y el uso de geles de agarosa.
Validacio n del Procedimiento

Cuando se emplean me todos alternativos al me todo general, es necesario validarlos. Se pueden usar los siguientes criterios para validar la separacio n: la formacio n de un gradiente de pH estable de las caracter sticas deseadas, evaluado usando marcadores de pH coloreados con puntos isoele ctricos conocidos; la comparacio n con el electroferograma suministrado con la sustancia qu mica de referencia para la preparacio n a examinar; y cualquier otro criterio de validacio n prescrito en la monograf a individual.
Variaciones Especicadas del Me todo General

Las variaciones del me todo general necesarias para el ana lisis de sustancias espec cas pueden estar especicadas en detalle en cada monograf a. Las variaciones pueden incluir el agregado de urea en el gel de corrida (una concentracio n 3 M a menudo es satisfactoria para mantener la prote na en solucio n pero se puede usar hasta 8 M). Algunas prote nas precipitan en su punto isoele ctrico. En este caso, se incluye la urea en la formulacio n del gel para mantener la prote na en solucio n. Si se usa urea, pueden usarse solamente soluciones recie n preparadas para evitar la carbamilacio n de la prote na. Otras variaciones incluyen el uso de otros me todos de tincio n y el uso de aditivos de geles tales como detergentes no io nicos (por ejemplo: octilgluco sido) o detergentes zwitterio nicos (por ejemplo: CHAPS o CHAPSO) para evitar la aglomeracio n o precipitacio n de las prote nas. NOTALas siguientes son medidas preventivas generales que se pueden usar para mejorar el me todo. Las muestras se pueden aplicar a cualquier zona del gel, pero en general, se deben aplicar en zonas donde se espera que se enfoquen. Para proteger las prote nas de ambientes de pH extremo, las muestras no se pueden aplicar cerca de ninguno de los electrodos. Durante el desarrollo del me todo, el analista puede intentar aplicar la prote na en tres posiciones del gel (por ejemplo: en el medio y en ambos extremos); el patro n de una prote na aplicada en los extremos opuestos del gel puede no ser ide ntico. Si un gel se enfoca por mucho tiempo, puede ocurrir un feno meno conocido como migracio n cato dica, donde el gradiente de pH disminuye con el tiempo. Aunque no se entiende bien, la electroendosmosis y la absorcio n de dio xido de carbono son factores que pueden favorecer la migracio n cato dica. La migracio n cato dica se observa cuando la prote na enfocada migra desde el extremo cato dico del gel. Se pueden usar gradientes de pH inmovilizados para resolver este problema. Es importante un enfriamiento eciente (aproximadamente 48) del lecho donde se encuentra el gel durante el enfoque. Las fuerzas de campo elevadas usadas durante el isoelectroenfoque pueden producir recalentamiento y afectar la calidad del gel enfocado.
PTIDOS MAPEO DE PE Propo sito y Alcance

El mapeo de pe ptidos es una prueba de identidad para prote nas, especialmente para aquellas obtenidas por tecnolog a de ADN-r. Implica el tratamiento qu mico o enzima tico de una prote na, con la formacio n de fragmentos pept dicos y seguido de la separacio n e identicacio n de los fragmentos en una manera reproducible. Es una prueba potente capaz de identicar cambios en aminoa cidos individuales como resultado de acontecimientos tales como errores en la lectura de las secuencias de ADN complementario (ADNc) o mutaciones puntuales. El mapeo de pe ptidos es un procedimiento comparativo ya que la informacio n obtenida, comparada con un esta ndar de referencia o material de referencia tratado de manera similar, conrma la estructura primaria de la prote na, es capaz de detectar si ha habido alguna alteracio n en la estructura y demuestra la uniformidad del proceso y la estabilidad gene tica. Cada prote na presenta caracter sticas exclusivas que se deben entender bien para que el enfoque cient co y anal tico permita el desarrollo validado de un mapa pept dico que suministre suciente especicidad. Esta seccio n proporciona asistencia detallada para la aplicacio n del mapeo de pe ptidos y su validacio n para caracterizar el producto proteico deseado, con el n de evaluar la estabilidad de la construccio n de expresio n de ce lulas usadas para productos de
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ADN recombinante; para evaluar la uniformidad del proceso global; y para evaluar la estabilidad del producto, adema s de asegurar la identidad del producto proteico, o de detectar la presencia de una variante de la prote na. El esquema presentado establece diferencias entre la validacio n del me todo en una etapa temprana del proceso reglamentario, a nivel de Nuevo Fa rmaco en Investigacio n (IND, por sus siglas en ingle s) y la validacio n completa para apoyar una Solicitud de Nuevo Fa rmaco (NDA, por sus siglas en ingle s), Solicitud de Licencia de Producto (PLA, por sus siglas en ingle s), o Solicitud de Autorizacio n para Comercializacio n (MAA, por sus siglas en ingle s). Los conceptos de validacio n descritos concuerdan con el cap tulo de informacio n general Validacio n de Me todos Farmacopeicos h1225i y con el documento de la Conferencia Internacional sobre Armonizacio n (ICH) sobre Validacio n de Me todos Anal ticos.
El Mapa Pept dico

El mapeo de pe ptidos no es un me todo general, pero implica el desarrollo de mapas espec cos para cada prote na u nica. Si bien la tecnolog a evoluciona ra pidamente, existen ciertos me todos que esta n generalmente aceptados. Las variaciones de estos me todos se indican, cuando corresponda, en las monograf as espec cas. Un mapa pept dico se puede considerar como la huella digital de una prote na y es el producto nal de varios procesos qu micos que permiten una amplia comprensio n de la prote na analizada. Se necesitan cuatro pasos principales para el desarrollo del procedimiento: aislamiento y puricacio n de la prote na, si la prote na es parte de una formulacio n; escisio n selectiva de los enlaces pept dicos; separacio n cromatogra ca de los pe ptidos; y ana lisis e identicacio n de los pe ptidos. Una muestra de prueba se digiere y valora en paralelo con un esta ndar de referencia o material de referencia. La escisio n completa es ma s factible con enzimas tales como endoproteasas (por ejemplo: tripsina) en lugar de reactivos de escisio n qu mica. Un mapa debe contener sucientes pe ptidos para ser signicativo. Por otro lado, si hay demasiados fragmentos, el mapa puede perder especicidad ya que de este modo es posible que muchas prote nas tengan los mismos perles.
N AISLAMIENTO Y PURIFICACIO
El aislamiento y la puricacio n son necesarios para el ana lisis de fa rmacos a granel o en formas farmace uticas que contienen excipientes y prote nas transportadoras que intereren y, cuando sea necesario, se especica en la monograf a. Se debe validar la recuperacio n cuantitativa de prote nas de la forma farmace utica.
N SELECTIVA DE UNIONES PEPTI DICAS ESCISIO
La seleccio n del enfoque usado para la ruptura de uniones pept dicas depende de la prote na que se esta analizando. Este proceso de seleccio n involucra la determinacio n del tipo de escisio n a emplearenzima tica o qu micay el tipo de agente de escisio n dentro de la categor a elegida. En la Tabla 1 se muestran varios agentes de escisio n y su especicidad. Esta no es una lista completa y se ampliara a medida que se identiquen otros agentes de escisio n. Tratamiento Previo de la MuestraSegu n el taman o o la conguracio n de la prote na, se pueden usar distintos enfoques en el tratamiento previo de las muestras. Para los anticuerpos monoclonales, es necesario separar las cadenas pesadas y livianas antes del mapeo. Si se usa tripsina como agente de escisio n para las prote nas que tengan una masa molecular mayor que 100 000 Da, se deben proteger los residuos lisina por citraconilacio n o maleilacio n; de lo contrario, se generan demasiados pe ptidos. Tratamiento Previo del Agente de Escisio nPodr a ser necesario el tratamiento previo de puricacio n de los agentes de escisio nespecialmente los agentes enzima ticos con el n de asegurar la reproducibilidad del mapa. Por ejemplo, la tripsina usada como agente de escisio n debe tratarse con tosil-L-fenilalanina clorometilcetona para inactivar la quimotripsina. Otros me todos,
tales como la puricacio n de la tripsina por HPLC o la inmovilizacio n de enzimas en un soporte de gel, han resultado ecaces cuando so lo hay disponible una pequen a cantidad de prote na. Tratamiento Previo de la Prote naBajo ciertas condiciones, podr a ser necesario concentrar la muestra o separar la prote na de sustancias y estabilizadores agregados a la formulacio n del producto, si e stos intereren con el procedimiento de mapeo. Los procedimientos f sicos usados para el tratamiento previo pueden incluir la ultraltracio n, la cromatograf a de columna y la liolizacio n. Otros tratamientos previos, tales como el agregado de agentes caotro picos (por ejemplo, urea), se pueden usar para desplegar la prote na antes del mapeo. Para permitir que la enzima tenga acceso total a los sitios de escisio n y que la prote na sufra algu n grado de desplegamiento, a menudo es necesario reducir y someter las uniones disulfuro a alquilacio n antes de la digestio n. La digestio n con tripsina puede introducir ambigu edades en el mapa tr ptico debido a reacciones secundarias durante la digestio n, tales como escisio n no espec ca, desamidacio n, isomerizacio n de disulfuros, oxidacio n de residuos de metionina, o formacio n de grupos pirogluta micos creados por desamidacio n de glutamina en el extremo N-terminal de un pe ptido. Adema s, se pueden producir picos por autohidro lisis de la tripsina. Sus intensidades dependen de la relacio n de la tripsina con respecto a la prote na. Para evitar la autohidro lisis, se pueden preparar soluciones de proteasas a un pH que no sea o ptimo (por ejemplo, pH 5 para la tripsina), lo cual signica que la enzima so lo se activa cuando se diluye con el amortiguador del pH de digestio n. ptimas de Digestio Establecimiento de las Condiciones O n Los factores que afectan la integridad y ecacia de la digestio n de las prote nas son aquellos que podr an afectar a cualquier reaccio n qu mica o enzima tica. pHEl pH de la mezcla de digestio n se determina emp ricamente para asegurar el desempen o o ptimo de un agente de escisio n dado. Por ejemplo, cuando se usa bromuro de ciano geno como agente de escisio n, es necesario un ambiente altamente a cido (por ejemplo: pH 2, a cido fo rmico); sin embargo, al usar tripsina como agente de escisio n, un ambiente levemente alcalino (pH 8) es o ptimo. Como regla general, el pH del entorno de la reaccio n no debe alterar la integridad qu mica de la prote na durante la digestio n y no debe cambiar durante el transcurso de la reaccio n de fragmentacio n. TemperaturaUna temperatura entre 258 y 378 es adecuada para la mayor a de las digestiones. La temperatura empleada esta prevista para minimizar las reacciones qu micas secundarias. El tipo de prote na en ana lisis dictara la temperatura del entorno de reaccio n ya que algunas prote nas son ma s susceptibles a la desnaturalizacio n a medida que aumenta la temperatura de la reaccio n. Por ejemplo, la digestio n de somatropina bovina recombinante se realiza a 48 ya que a temperaturas ma s altas precipita durante la digestio n. TiempoSi se dispone de suciente muestra, se considera un estudio en funcio n del tiempo a n de determinar el tiempo o ptimo para obtener un mapa reproducible y evitar una digestio n incompleta. El tiempo de digestio n var a de 2 a 30 horas. La reaccio n se detiene al agregar un a cido que no interera en el mapa tr ptico, o por congelacio n. Cantidad de Agente de Escisio nSi bien se usan cantidades excesivas de agente de escisio n para lograr tiempos de digestio n razonablemente ra pidos (es decir, 6 a 20 horas), la cantidad se minimiza para que no contribuya al patro n del mapa cromatogra co. Generalmente se usa una relacio n prote na-proteasa entre 20 : 1 y 200 : 1. Se recomienda agregar el agente de escisio n en dos o ma s etapas para optimizar la escisio n. Sin embargo, el volumen nal de la reaccio n se mantiene lo sucientemente pequen o para facilitar el siguiente paso en el mapeo de pe ptidosel paso de separacio n. Para elucidar los artefactos de digestio n que podr an interferir con los ana lisis siguientes, se realiza una determinacio n con un blanco, usando un control de digestio n con todos los reactivos, excepto la prote na en ana lisis.
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Tabla 1. Ejemplos de Agentes de Escisio n Tipo Enzima tico Agente Tripsina (EC 3.4.21.4) Quimotripsina (EC 3.4.21.1) Pepsina (EC 3.4.23.1) Lisil endopeptidasa (Endopeptidasa Lys-C) (EC 3.4.21.50) Glutamil endopeptidasa (de la cepa S. aureus V8) (EC 3.4.21.19) Peptidil-Asp metaploendopeptidasa (Endoproteinasa Asp-N) (EC 3.4.24.33) (Clostripain) (EC 3.4.22.8) Bromuro de ciano geno cido 2-nitro-5-tio-ciano-benzoico A cido O-yodosobenzoico A cido diluido A BNPS-Escatol
N CROMATOGRA FICA SEPARACIO
Especicidad Extremo C-terminal de Arg y Lys Extremo C-terminal de residuos hidro fobos (por ej., Leu, Met, Ala, aroma ticos) Digestio n no espec ca Extremo C-terminal de Lys Extremo C-terminal de Glu y Asp Extremo N-terminal de Asp Extremo C-terminal de Arg Extremo C-terminal de Met Extremo N-terminal de Cys Extremo C-terminal de Trp y Tyr Asp y Pro Trp Fase Mo vilSe usan fases amortiguadas que contienen fosfato para exibilizar la seleccio n de las condiciones de pH ya que los cambios en el pH en el intervalo de 3,0 a 5,0 mejoran la separacio n de los pe ptidos que contienen residuos a cidos (por ejemplo, a cido gluta mico y a cido aspa rtico). Tambie n se han usado fosfatos de sodio o potasio, acetato de amonio, a cido fosfo rico y un pH entre 2 y 7 (o superior para soportes de pol meros) con gradientes de acetonitrilo. Tambie n se usa a menudo a cido triuoroace tico que contiene acetonitrilo. Seleccio n del GradienteLos gradientes pueden ser lineales, no lineales o incluir funciones escalonadas. Se recomienda un gradiente gradual a n de separar la mezclas complejas. Los gradientes se optimizan para resolver claramente uno o dos picos que sera n los picos marcadores de la prueba. Seleccio n Isocra ticaLos sistemas isocra ticos de HPLC que usan una u nica fase mo vil se emplean por su conveniencia de uso y las respuestas mejoradas del detector. A menudo es dif cil de establecer la composicio n o ptima de una fase mo vil para obtener una resolucio n clara de cada pico. En sistemas isocra ticos de HPLC no deben usarse fases mo viles donde un cambio leve en la relacio n de sus componentes o en el pH tenga un efecto importante en los tiempos de retencio n de los picos del mapa pept dico. Otros Para metrosGeneralmente es necesario controlar la temperatura de la columna para lograr una buena reproducibilidad. Las velocidades de ujo para las fases mo viles var an de 0,1 a 2,0 mL por minuto y la deteccio n de pe ptidos se realiza con un detector UV entre 200 nm y 230 nm. Se han usado otros me todos de deteccio n (por ejemplo: derivatizacio n postcolumna), pero no son tan robustos ni tan versa tiles como la deteccio n UV. Aptitud del SistemaEl apartado Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i suministra un medio experimental para medir el desempen o global del me todo de prueba. El criterio de aceptacio n para la aptitud del sistema depende de la identicacio n de los para metros cr ticos de prueba que afectan la interpretacio n y aceptacio n de los datos. Estos para metros cr ticos tambie n son criterios que controlan la digestio n y el ana lisis de pe ptidos. Un indicador de que se logro el punto nal de digestio n deseado es la comparacio n con un esta ndar de referencia o un material de referencia, el cual se trata exactamente como el art culo en ana lisis. El uso de un Esta ndar de Referencia USP paralelamente con la prote na en ana lisis es cr tico en el desarrollo y establecimiento de los l mites de aptitud del sistema. Adema s, se debe incluir un cromatograma de muestra con el Esta ndar de Referencia USP o material de referencia a los efectos de la comparacio n. Otros indicadores pueden incluir la inspeccio n visual de la solubilidad de la prote na o el pe ptido, la ausencia de prote nas intactas, o la medicio n de respuestas de un pe ptido dependiente de la digestio n. Los para metros cr ticos de aptitud del sistema para el ana lisis de pe ptidos dependera de cada modo de separacio n y deteccio n de pe ptidos y de los requisitos de ana lisis de datos.
Qu mico
Se usan muchas te cnicas para separar pe ptidos para mapeos. La eleccio n de la te cnica depende de la prote na estudiada. Las te cnicas ecaces para la separacio n de pe ptidos se muestran en la Tabla 2.
Tabla 2. Te cnicas Usadas para la Separacio n de Pe ptidos Cromatograf a L quida de Alta Resolucio n en Fase Reversa (RP-HPLC) Cromatograf a de Intercambio Io nico (IEC) Cromatograf a de Interaccio n Hidro foba (HIC) Electroforesis en Gel de Poliacrilamida (PAGE), sin desnaturalizacio n Electroforesis en Gel de Poliacrilamida con Dodecilsulfato de Sodio (SDS-PAGE) Electroforesis Capilar (CE) Cromatograf a en Papel Electroforesis de Alto Voltaje en Papel (HVPE) En esta seccio n, se describe un me todo de HPLC en fase reversa (RP-HPLC) ampliamente usado en la separacio n cromatogra ca. La pureza de los disolventes y de las fases mo viles es un factor cr tico en la separacio n por HPLC. Se recomienda usar agua y disolventes de grado HPLC, disponibles comercialmente, para la RPHPLC. Los gases disueltos presentan un problema en los sistemas de gradientes donde la solubilidad del gas en un disolvente puede ser menor en una mezcla que en un disolvente solo. La desgasicacio n al vac o y la agitacio n por ultrasonido suelen ser u tiles para la desgasicacio n. Si hay part culas so lidas presentes en los disolventes, se introducen en el sistema HPLC y pueden dan ar los sellos de las va lvulas de las bombas u obstruir la parte superior de la columna cromatogra ca. Se recomienda ltrar antes y despue s de la bomba. Columna Cromatogra caLa seleccio n de una columna cromatogra ca se determina emp ricamente para cada prote na. Las o 300A con soporte de s columnas con taman o de poro de 100A lice pueden proporcionar una separacio n o ptima. Para pe ptidos ma s pequen os, los rellenos de columna como el octilsilano unido qu micamente a part culas de s lice totalmente porosas, de 3 a 10 mm de dia metro (L7) y el octadecilsilano unido qu micamente a micropart culas porosas de s lice o cera mica, de 3 a 10 mm de dia metro (L1) son ma s ecientes que el relleno de silano de butilo unido qu micamente a part culas totalmente porosas de s lice, de 5 a 10 mm de dia metro (L26). DisolventeEl disolvente ma s comu nmente usado es agua con acetonitrilo como modicador orga nico al cual se le agrega menos de 0,1% de a cido triuoroace tico. Si fuera necesario, agregar alcohol isoprop lico o alcohol n-prop lico para solubilizar los componentes de digestio n, siempre que el agregado no aumente excesivamente la viscosidad de los componentes.
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Cuando se usa el mapeo de pe ptidos como prueba de identicacio n, los requisitos de aptitud del sistema para los pe ptidos identicados incluyen la selectividad y la precisio n. En este caso, al igual que cuando se realiza la identicacio n de variantes de prote nas, la identicacio n de la estructura primaria de los fragmentos pept dicos en el mapa pept dico suministra una vericacio n de la estructura primaria conocida y la identicacio n de las variantes de las prote nas por comparacio n con el mapa pept dico del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia para la prote na especicada. El uso de un material de referencia o Esta ndar de Referencia USP digerido para una prote na dada en la determinacio n de la resolucio n pept dica es el me todo de eleccio n. Para el ana lisis de una variante de una prote na, se puede usar una mezcla caracterizada de una variante y un esta ndar de referencia, especialmente si la variante del pe ptido se encuentra en una regio n menos resuelta del mapa. El ndice de uniformidad del patro n puede ser simplemente el nu mero de pe ptidos principales detectados. La uniformidad del patro n de pe ptidos se puede denir mejor por resolucio n de los picos de los pe ptidos. Los para metros cromatogra cos tales como la resolucio n pico a pico, el ancho ma ximo de picos, factores de asimetr a de los picos y la eciencia de la columna se pueden usar para denir la resolucio n pept dica. Dependiendo de la prote na en ana lisis y el me todo de separacio n que se use, pueden ser necesarios requisitos de resolucio n de un solo pe ptido o de mu ltiples pe ptidos. El ana lisis repetido del digerido del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia para la prote na en ana lisis produce medidas de precisio n y recuperacio n cuantitativa. La recuperacio n de los pe ptidos identicados generalmente se puede determinar por el uso de esta ndares pept dicos internos o externos. La precisio n se expresa como la desviacio n esta ndar relativa (RSD). Es de esperar diferencias en la recuperacio n y precisio n de los pe ptidos identicados; por lo tanto, hay que establecer los l mites de aptitud del sistema tanto para la recuperacio n como para la precisio n de los pe ptidos identicados. Estos l mites son exclusivos para cada prote na y se especicara n en las monograf as individuales. La comparacio n visual de los tiempos de retencio n relativos, las respuestas de los picos, el nu mero de picos y el patro n de elucio n global se completa inicialmente. Luego se complementa y respalda con el ana lisis matema tico de los cocientes de respuesta de los picos y el perl cromatogra co de una mezcla 1 : 1 (v/v) de la muestra y el digerido del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia. Si todos los picos en el digerido de la muestra y en el digerido del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia tienen los mismos tiempos de retencio n relativos y cocientes de respuesta de los picos, se conrma la identidad de la muestra en ana lisis. Si los picos que inicialmente eluyeron con tiempos de retencio n relativos signicativamente diferentes luego se observan como picos u nicos en la mezcla 1 : 1, la diferencia inicial ser a una indicacio n de la variabilidad del sistema. Sin embargo, si se observan picos separados en la mezcla 1 : 1, esto indicar a la no equivalencia de los pe ptidos en cada pico. Si un pico en la mezcla 1 : 1 es signicativamente ma s ancho que el pico correspondiente en la muestra y el digerido del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia, podr a indicar la presencia de pe ptidos diferentes. Se ha propuesto y aplicado un software de reconocimiento de patrones para el ana lisis de los datos del mapeo de pe ptidos, pero los problemas relacionados con la validacio n del software impiden que pueda usarse en una prueba farmacopeica en el futuro cercano. Se han usado otros enfoques automatizados que emplean fo rmulas matema ticas, modelos y reconocimiento de patrones. Se han propuesto enfoques tales como, por ejemplo, la identicacio n automatizada de compuestos por espectroscopia IR y la aplicacio n de ana lisis espectral UV con arreglo de diodos para la identicacio n de pe ptidos. Estos me todos tienen limitaciones debido a resoluciones inadecuadas, elucio n conjunta de fragmentos o diferencias en las respuestas absolutas de los picos entre el Esta ndar de Referencia USP o material de referencia y los fragmentos de la muestra. La comparacio n nume rica de los tiempos de retencio n y a reas o alturas de los picos se puede realizar para un grupo seleccionado de picos relevantes correctamente identicados en los mapas pept dicos. Las a reas de los picos se pueden calcular usando un pico como referencia interna con relativamente poca variacio n, teniendo en cuenta que la integracio n del a rea del pico es sensible a la variacio n de la l nea base y posiblemente introduzca un error en el ana lisis. De modo alternativo, se puede calcular la altura porcentual del pico de
cada pe ptido con respecto a la suma de todas las alturas de los picos para la muestra de prueba. El porcentaje se compara luego con el del pico correspondiente del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia. La posibilidad de autohidro lisis de la tripsina se controla mediante la produccio n de un mapa pept dico blanco que es el mapa obtenido cuando la solucio n blanco se trata con tripsina. El requisito m nimo para la cuanticacio n de un mapeo de pe ptidos es un procedimiento de prueba aprobado que incluye la aptitud del sistema como control de prueba. En general, para un IND, basta con la calicacio n del mapeo de pe ptidos para una prote na. A medida que que avanza el proceso de aprobacio n reglamentario de la prote na, calicaciones adicionales de la prueba pueden incluir una validacio n parcial del procedimiento anal tico con el n de asegurar que el me todo funciona en la forma planeada en el desarrollo del mapa pept dico para la prote na especicada.
LISIS E IDENTIFICACIO N DE PE PTIDOS ANA
Esta seccio n es una gu a para el uso del mapeo de pe ptidos durante la investigacio n que respalda las solicitudes reglamentarias. El uso de un mapa pept dico como herramienta cualitativa no exige la caracterizacio n completa de los picos de pe ptidos individuales. Sin embargo, la validacio n del mapeo de pe ptidos en respaldo de las solicitudes reglamentarias exige la caracterizacio n rigurosa de cada pico en el mapa pept dico. Los me todos para caracterizar picos var an desde la secuenciacio n N-terminal de cada pico seguida por un ana lisis de aminoa cidos hasta el uso de espectroscop a de masas (MS, por sus siglas en ingle s). A los efectos de la caracterizacio n, cuando se usan la secuenciacio n N-terminal y el ana lisis de aminoa cidos, la separacio n anal tica se aumenta en escala. Ya que el aumento en escala puede afectar la resolucio n de los picos de pe ptidos, es necesario asegurar con datos emp ricos que no haya pe rdida de resolucio n debida al aumento en escala. Se recogen los eluatos correspondientes a picos de pe ptidos espec cos, se concentran al vac o y se cromatograf an nuevamente, segu n sea necesario. El ana lisis de aminoa cidos de los fragmentos puede estar limitado por el taman o del pe ptido. Si el N-terminal esta bloqueado, puede ser necesario desbloquearlo antes de la secuenciacio n. Tambie n se puede usar la secuenciacio n del C-terminal de las prote nas con carboxipeptidasa y MALDITOFMS para su caracterizacio n. El uso de MS para la caracterizacio n de fragmentos pept dicos se hace por infusio n directa de pe ptidos aislados o por LC-MS en l nea para el ana lisis estructural. En general, incluye el electrospray y la ionizacio n por desorcio n la ser asistida por matriz acoplada a un analizador de tiempo de vuelo (MALDITOF, por sus siglas en ingle s) as como tambie n el bombardeo ato mico ra pido (FAB, por sus siglas en ingle s). Tambie n se ha usado la MS en serie para secuenciar una prote na modicada y para determinar la modicacio n aminoac dica producida. La comparacio n de los espectros de masas de los digeridos antes y despue s de la reduccio n proporciona un me todo para asignar las uniones disulfuro a los diferentes pe ptidos que contienen sulfhidrilos. Si hay regiones de la estructura primaria que no se demuestran claramente en el mapa pept dico, podr a sea necesario realizar un mapa pept dico secundario. El objetivo de un me todo validado de caracterizacio n de una prote na a trave s del mapeo de pe ptidos es conciliar y explicar al menos el 95% de la composicio n teo rica de la estructura de la prote na.
El Uso del Mapeo de Pe ptidos para la Evaluacio n de Estabilidad Gene tica

Se puede usar un mapa pept dico validado para evaluar la integridad de la secuencia primaria prevista de un producto prote co (es decir, su estabilidad gene tica). Tambie n se puede usar para determinar la uniformidad lote a lote de productos biotecnolo gicos. Adema s, la expresio n de la prote na en el sistema de produccio n se evalu a mejor a trave s del mapeo de pe ptidos de la prote na expresada. Los mapas pept dicos de prote nas producidos en diversas etapas de la expresio n de la prote na, incluyendo un punto ma s alla del tiempo normal de expresio n de la prote na, comparados con
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los de un Esta ndar de Referencia USP o material de referencia, sirven para evaluar la estabilidad gene tica del sistema de expresio n en funcio n del tiempo. Pueden surgir variantes de las secuencias de las prote nas a partir de una variacio n gene tica en el ADN (mutacio n puntual) o como un error en la traduccio n. El mejor enfoque es un mapa pept dico validado para la deteccio n de variantes de prote nas. Sin embargo, se deben considerar las limitaciones inherentes del mapeo de pe ptidos. La deteccio n de una variante estructurada es posible u nicamente si el pe ptido variante correspondiente es fa cil de aislar y caracterizar. Para establecer la estabilidad gene tica es necesario usar una bater a de me todos bioqu micos, siempre que las variantes tengan propiedades distintas de las de la prote na normal.
Validacio n
TICOS FACTORES CRI
La validacio n del mapeo de pe ptidos exige el disen o de un protocolo que describa detalladamente el experimento a realizar y los criterios para la aceptacio n del mapa. Los criterios para la aceptacio n del mapeo incluyen l mites de deteccio n, especicidad, linealidad, rango, exactitud, precisio n y estabilidad de los reactivos. La reproducibilidad del mapa pept dico es un elemento cr tico en su utilizacio n como prueba de identidad y para conrmar la estabilidad gene tica. Se analizara n aquellos aspectos te cnicos del mapeo de pe ptidos que inuencian la reproducibilidad del mapa. El ajuste de los l mites, con respecto a la cuanticacio n (a rea o altura del pico) e identicacio n (tiempos de retencio n) para el grupo seleccionado de picos relevantes se basa en observaciones emp ricas. Estos l mites detectan diferencias signicativas entre la muestra y el Esta ndar de Referencia USP o material de referencia dentro de una serie de ana lisis. Otro problema cr tico es la recuperacio n de pe ptidos y su efecto sobre la determinacio n y reproducibilidad de las a reas de los picos y en el establecimiento de criterios de aceptacio n. Los criterios de recuperacio n tratan todos los aspectos de metodolog a de la prueba, desde la digestio n hasta las condiciones cromatogra cas. La determinacio n de la recuperacio n de pe ptidos incluye el ana lisis cuantitativo de aminoa cidos, el agregado de cantidades conocidas, el marcado radioactivo y la sumatoria UV. Una recuperacio n general de aproximadamente el 80% se considera satisfactoria. La recuperacio n de pe ptidos individuales es ma s problema tica y se maneja caso por caso. Los factores cr ticos de la validacio n de un mapa pept dico son los siguientes. Procedimientos de Prueba Documentados por EscritoEstos procedimientos incluyen una descripcio n detallada del me todo anal tico en donde se denen los reactivos, equipos, preparacio n de la muestra, me todo de ana lisis y ana lisis de los datos. Protocolo de Validacio nSe prepara un protocolo que incluye un procedimiento para la validacio n de la prueba. Criterio de Aceptacio nEl criterio puede ser m nimo en las primeras etapas, pero debe denirse mejor a medida que progresan los estudios de validacio n. Informe de los ResultadosEn los resultados del estudio de validacio n se documentan los para metros anal ticos indicados en el protocolo de validacio n. Revalidacio n del Procedimiento de la PruebaSi el me todo empleado exige alteraciones que podr an afectar los para metros anal ticos previamente evaluados en la validacio n, es necesario volver a validar el procedimiento de la prueba. Si hay cambios signicativos en el procesamiento del art culo, en los laboratorios que realizan el ana lisis, en la formulacio n de los productos a granel o terminados y en cualquier otro para metro importante, se exigira la revalidacio n de los me todos.
REQUISITOS
Precisio n Precisio n Intra PruebaEs una medida de la reproducibilidad del mapeo de pe ptidos. Los dos pasos cr ticos en el mapeo de pe ptidos son la fragmentacio n (es decir, digestio n) y la separacio n de
pe ptidos. La precisio n es aceptable cuando los tiempos de retencio n absolutos y las a reas de los picos relativos son constantes de corrida a corrida y la variacio n promedio en el tiempo de retencio n es pequen a en relacio n con la del pico de referencia interno seleccionado. La reproducibilidad del mapa se puede mejorar si se usa un horno de columna con control de temperatura, si se equilibra exhaustivamente el sistema antes de comenzar la prueba, si primero se realiza una determinacio n con un blanco (mezcla de digerido control sin prote na) para minimizar los efectos de la primera corrida y si se intercala perio dicamente un digerido del material de referencia o del Esta ndar de Referencia USP con las muestras de prueba para evaluar la variacio n sistema tica de la cromatograf a. Los criterios para validar el paso de fragmentacio n son similares a los descritos a continuacio n para la separacio n de pe ptidos, pero se cumplen para pruebas consecutivas de una serie de digeridos preparados por separado de la prote na en ana lisis. Los criterios para la validacio n del paso de separacio n de pe ptidos incluyen lo siguiente: 1. La desviacio n esta ndar promedio de los tiempos de retencio n absolutos de todos los picos principales para un conjunto de pruebas consecutivas del mismo digerido no excede un criterio de aceptacio n especicado. 2. La desviacio n esta ndar promedio del a rea de pico absoluta para todos los picos principales totalmente resueltos no excede un porcentaje especicado. Precisio n Inter PruebasEsta es una medida de la reproducibilidad del mapeo de pe ptidos cuando la prueba se realiza en distintos d as, por distintos analistas, en distintos laboratorios, con reactivos o enzimas de distintos proveedores o con distintos lotes del mismo proveedor, con instrumental diferente, en columnas de fabricacio n distinta o columnas de igual fabricacio n pero de lotes distintos y en columnas individuales de la misma fabricacio n y el mismo lote. Si bien ser a preferible, desde una perspectiva cient ca, validar el efecto de todas estas variables sobre la precisio n, un enfoque pra ctico es validar la prueba usando aquellas variables que sean ma s probables de encontrar en condiciones operativas. Se pueden incluir variables adicionales cuando sea necesario. El disen o experimental permite al analista realizar comparaciones usando tiempos de retencio n de picos y a reas de picos que se expresen con relacio n a un pico de referencia interno altamente reproducible dentro del mismo cromatograma. El a rea de pico relativa se expresa como el cociente entre el a rea del pico y el a rea del pico de referencia interna. El tiempo de retencio n relativo se puede expresar como la diferencia entre el tiempo de retencio n absoluto y el tiempo de retencio n del pico de referencia. El uso de valores relativos elimina la necesidad de realizar correcciones separadas por diferencias de volumen de un inyector a otro, por unidades de medicio n de las a reas de los picos, por dimensiones de la columna y por volu menes de espacio muerto de los instrumentos. Se espera que la variabilidad en los tiempos de retencio n y en las a reas de los picos para los experimentos de Precisio n Inter Pruebas sea ligeramente mayor que la variabilidad observada para la Precisio n Intra Prueba. RobustezLa composicio n de la Fase Mo vil, la calidad de la proteasa o la pureza de los reactivos qu micos, la variacio n y edad de una columna y la estabilidad del digerido son todos factores que podr an afectar el desempen o general de la prueba y su reproducibilidad. Se evalu an las tolerancias para cada para metro clave y se establecen los l mites de la l nea base en caso de que la prueba se use para la liberacio n rutinaria de lotes. Fase Mo vilLa composicio n de la Fase Mo vil se optimizara para obtener la ma xima resolucio n de pe ptidos en todo el perl de elucio n. Se preere un equilibrio entre la resolucio n o ptima y la reproducibilidad general. Un pH menor podr a mejorar la separacio n entre los picos pero podr a acortar la vida de la columna, dando como resultado una falta de reproducibilidad. Los mapas pept dicos a un pH por encima o por debajo del pH del procedimiento se comparan con el mapa pept dico obtenido al pH del procedimiento y se observa si hay diferencias signicativas; tambie n se revisan con respecto a los criterios de aceptacio n establecidos en el protocolo de validacio n. Calidad de la Proteasa o Pureza de los Reactivos Qu micosSe prepara y digiere una muestra del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia para la prote na en ana lisis con distintos lotes del agente de escisio n. En los cromatogramas para cada
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digerido se comparan las a reas de los picos, su forma y el nu mero de picos. Se puede aplicar el mismo procedimiento a otras sustancias qu micas o tratamientos previos usados durante la preparacio n de la muestra, como por ejemplo los reactivos reductores y de carboximetilacio n. Consideraciones de la ColumnaLa variabilidad entre una columna y otra, incluso dentro de un mismo lote, puede afectar el desempen o de la columna en el desarrollo de mapas pept dicos. El taman o de la columna tambie n puede producir diferencias signicativas. Se digiere un Esta ndar de Referencia USP o material de referencia de la prote na de prueba y el digerido se cromatograf a en distintos lotes de columna de un mismo fabricante. Luego se evalua el perl de elucio n general, los tiempos de retencio n, la resolucio n de selectividad y la recuperacio n de los mapas. Para evaluar la robustez de la columna durante toda su vida u til, se debe realizar una prueba de mapeo de pe ptidos en distintas columnas y variar signicativamente el nu mero de inyecciones (por ejemplo, de 10 inyecciones a 250 inyecciones). Los mapas resultantes se comparan buscando diferencias signicativas en el ensanchamiento de los picos, a rea de los picos y resolucio n general. A medida que la columna envejece, podr a observarse un aumento en la contrapresio n que podr a afectar los mapas pept dicos. Una precaucio n razonable en el uso de columnas de mapeo de pe ptidos es seleccionar columnas alternativas, en caso de que las columnas originales no este n disponibles o dejen de fabricarse. Realizar una prueba de mapeo de pe ptidos usando columnas equivalentes de distintos fabricantes y examinar los mapas. Las diferencias en la forma y el taman o de las part culas, el taman o y volumen de los poros, la carga de carbono y el recubrimiento terminal pueden dar lugar a diferencias signicativas en los tiempos de retencio n, la selectividad del perl de elucio n, la resolucio n y la recuperacio n. Podr a ser necesario hacer ligeras modicaciones en el perl del gradiente para lograr mapas equivalentes cuando se usen columnas de distintos fabricantes. [NOTADebe considerarse la equivalencia entre la instrumentacio n usada para la validacio n de la prueba y para la prueba de control de calidad de rutina. Podr a ser preferible usar el mismo sistema HPLC para todas las aplicaciones. De lo contrario, se determina la equivalencia del sistema, lo cual puede exigir algunos cambios en las condiciones de la prueba cromatogra ca.] Estabilidad del DigeridoSe evalua el tiempo de almacenamiento de un digerido y las condiciones de almacenamiento antes de la cromatograf a. Se almacenan varias al cuotas de un mismo digerido en distintas condiciones de almacenamiento y se cromatograf an. Estos mapas luego se evaluan para buscar diferencias signicativas. ReproducibilidadSe repite la determinacio n de varios de los para metros indicados anteriormente usando el mismo Esta ndar de Referencia USP o material de referencia y la misma muestra de la prueba en al menos dos laboratorios distintos y por dos analistas, equipados con sistemas HPLC similares. Luego se evalu an los mapas pept dicos generados para ver si existen diferencias signicativas.
Principio General de la Electroforesis

Bajo la inuencia de un campo ele ctrico, las part culas cargadas migran en la direccio n del electrodo que tiene polaridad opuesta. En la electroforesis en gel, los movimientos de las part culas se retrasan por interacciones con la matriz de gel que las rodea, la cual actu a como un tamiz molecular. Las interacciones opuestas de la fuerza ele ctrica y del tamiz molecular dan como resultado velocidades de migracio n diferenciales, de acuerdo a los taman os, formas y cargas de las part culas. Debido a sus diferentes propiedades sicoqu micas, las distintas macromole culas de una mezcla migran a distintas velocidades durante la electroforesis y as se separan, formando fracciones discretas. Las separaciones electrofore ticas pueden realizarse en sistemas sin fases de soporte (por ejemplo, separacio n por electroforesis capilar en solucio n libre) y en medios estabilizadores, tales como placas de capa delgada, pel culas o geles.
Caracter sticas de Geles de Poliacrilamida para Electroforesis de Prote nas

Las propiedades de tamizado de los geles de poliacrilamida se establecen mediante la red tridimensional de bras y poros formada cuando la bisacrilamida bifuncional se entrecruza en forma adyacente a las cadenas de poliacrilamida. La polimerizacio n se cataliza con un sistema generador de radicales libres compuesto de persulfato de amonio y N,N,N,N-tetrametiletilendiamina (TEMED). A medida que aumenta la concentracio n de acrilamida de un gel, disminuye el taman o efectivo de sus poros. El taman o efectivo del poro de un gel se dene operacionalmente por sus propiedades de tamizado, es decir, por la resistencia que imparte a la migracio n de macromole culas. Existen l mites con respecto a las concentraciones de acrilamida que se pueden usar. En concentraciones altas de acrilamida, los geles se rompen con mucha ma s facilidad y son dif ciles de manipular. A medida que disminuye el taman o del poro de un gel, disminuye la velocidad de migracio n de una prote na a trave s del gel. Al ajustar el taman o de poro de un gel, mediante la modicacio n de la concentracio n de acrilamida, se puede optimizar la resolucio n del me todo para un producto prote co dado. Por lo tanto, un gel se caracteriza f sicamente por su composicio n de acrilamida y bisacrilamida. Adema s de la composicio n del gel, el estado de la prote na es un factor importante para la movilidad electrofore tica. En el caso de las prote nas, la movilidad electrofore tica depende del valor pK de los grupos cargados y del taman o de la mole cula. Esta inuenciada por el tipo, la concentracio n y el pH del amortiguador, por la temperatura y la fuerza del campo y por la naturaleza del material de soporte.
Desnaturalizacio n con Dodecilsulfato de Sodio

La desnaturalizacio n de PAGE con dodecilsulfato de sodio (SDS) es el modo ma s comu n de electroforesis para evaluar la calidad farmace utica de productos proteicos. T picamente, la electroforesis anal tica de prote nas se realiza bajo condiciones que aseguran la disociacio n de las prote nas en sus subunidades polipept dicas individuales y que minimizan la aglomeracio n de estas subunidades. El detergente Dodecil Sulfato de Sodio fuertemente anio nico se usa combinado con calor para disociar las prote nas antes de que se coloquen en el gel. Los polipe ptidos desnaturalizados se unen al SDS, adquieren carga negativa y exhiben una relacio n carga-peso estable, sin importar el tipo de prote na. Como la cantidad de SDS unido casi siempre es proporcional al peso molecular del polipe ptido y es t picamente independiente de su secuencia, los complejos SDSpolipe ptido migran a trave s de los geles de poliacrilamida en forma razonablemente proporcional al taman o del polipe ptido. Las movilidades electrofore ticas de todos los complejos detergente-polipe ptido resultantes adoptan la misma relacio n funcional con los pesos moleculares de los polipe ptidos. La migracio n de los derivados SDS es hacia el a nodo de un modo predecible, observa ndose que los complejos de bajo peso molecular migran ma s ra pido que los complejos ma s grandes. Esto signica que el peso molecular de una prote na se puede estimar por su movilidad relativa en SDS-PAGE calibrada y que una banda u nica en un gel de este tipo es un indicador de pureza.
ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA

La electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) se usa para la caracterizacio n cualitativa de prote nas en preparaciones biolo gicas, para control de pureza y para determinaciones cuantitativas. Este procedimiento se limita al ana lisis de prote nas con un peso entre 14 000 y 100 000 Da. Es posible ampliar la extensio n de pesos de una electroforesis en gel con diversas te cnicas (por ejemplo, geles de gradiente o ciertos sistemas amortiguadores de pH), pero dichas te cnicas no se tratara n en este cap tulo. La electroforesis en gel anal tica es un me todo adecuado para identicar y evaluar la homogeneidad de las prote nas en los fa rmacos. Estos me todos se usan de forma rutinaria para estimar los pesos moleculares de subunidades prote cas y para determinar las composiciones de subunidades prote cas puricadas. Hay geles y reactivos listos para usar disponibles comercialmente, que pueden usarse en lugar de los que se describen en este cap tulo, siempre que proporcionen resultados equivalentes y que cumplan con los requisitos de validacio n.
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Sin embargo, las modicaciones de la cadena principal, tales como la N-glicosilacio n o la O-glicosilacio n, tienen un efecto signicativo sobre el peso molecular aparente de una prote na. Esto se debe a que el SDS no se une a los grupos carbohidrato de la misma manera que a los polipe ptidos. Por lo tanto, no se mantiene una relacio n estable carga-peso. El peso molecular aparente de prote nas con modicaciones postraduccionales no reeja con exactitud el peso de la cadena polipept dica.
CONDICIONES REDUCTORAS
prote nas, que se mueven entonces en un espacio de pH uniforme formado por TRIS y glicina. El tamizado molecular hace que los complejos SDS-polipe ptido se separen segu n sus pesos moleculares.
N DE GELES PREPARACIO
Las subunidades de polipe ptidos y su estructura tridimensional se mantienen en las prote nas mediante uniones disulfuro. Un objetivo del ana lisis SDS-PAGE en condiciones reductoras es romper esta estructura por reduccio n de las uniones disulfuro. La desnaturalizacio n y disociacio n completa de prote nas por tratamiento con 2mercaptoetanol o ditiotreitol (DTT) despliega el esqueleto polipept dico, forma ndose luego un complejo con SDS. En estas condiciones, el peso molecular de las subunidades de polipe ptidos se puede calcular por regresio n lineal, en presencia de esta ndares adecuados de peso molecular.
CONDICIONES NO REDUCTORAS
Para algunos ana lisis, no es conveniente la disociacio n completa de la prote na en subunidades pept dicas. En ausencia de tratamiento con agentes reductores, los enlaces disulfuro covalentes permanecen intactos, preservando la forma oligome rica de la prote na. Los complejos de SDS-prote na oligome rica migran ma s lentamente que sus subunidades SDS-polipe ptido. Adema s, las prote nas no reducidas no se pueden saturar por completo con SDS y, por lo tanto, no pueden unirse al detergente en una relacio n de peso constante. Esto hace que las determinaciones de peso molecular de estas mole culas sean menos sencillas que los ana lisis de polipe ptidos completamente desnaturalizados, porque es necesario que las prote nas esta ndar y las prote nas desconocidas tengan conguraciones similares para que las comparaciones sean va lidas. Sin embargo, la tincio n de una u nica banda en un gel de este tipo es un indicador de pureza.
STICAS DE UN SISTEMA AMORTIGUADOR DE PH CARACTERI DISCONTINUO
El me todo eletrofore tico ma s popular para la caracterizacio n de una mezcla compleja de prote nas usa un sistema amortiguador de pH discontinuo compuesto por dos geles contiguos pero diferenciados: un gel de resolucio n o separador (inferior) y un gel concentrador (superior). Los dos geles esta n conformados con diferentes porosidades, pH y fuerzas io nicas. Adema s, se usan distintos iones mo viles en el gel y en los amortiguadores de pH de los electrodos. La discontinuidad del amortiguador del pH concentra grandes volu menes de muestra en el gel concentrador, mejorando as la resolucio n. Cuando se aplica electricidad, se produce una ca da de voltaje a trave s de la solucio n de muestra que conduce a las prote nas hacia el gel concentrador. Los iones de glicinato del amortiguador de pH de los electrodos siguen a las prote nas hacia el gel concentrador. Se forma ra pidamente un frente mo vil con los iones de cloruro de alta movilidad adelante y los iones relativamente lentos de glicinato atra s. Se forma un gradiente de alto voltaje localizado entre los frentes de iones delanteros y traseros, haciendo que los complejos SDS-prote na se acumulen en una zona delgada (concentrado) y migren entre las fases de cloruro y glicinato. Dentro de un amplio l mite, sin importar la altura de la muestra aplicada, todos los SDSprote nas se condensan en una regio n muy estrecha e ingresan al gel separador como una zona delgada, bien denida, de alta densidad proteica. El gel concentrador, de grandes poros, no retrasa la migracio n de la mayor a de las prote nas y sirve principalmente como un medio anticonvectivo. En la interfase entre el gel concentrador y el gel separador, las prote nas sufren un marcado retardo, debido al taman o de poro restrictivo del gel separador. Una vez en el gel separador, las prote nas continu an siendo ralentizadas por el tamizado de la matriz. Los iones de glicinato sobrepasan a las
En una solucio n amortiguadora discontinua de gel de SDSpoliacrilamida, es importante verter el gel separador, dejarlo solidicar y verter luego el gel concentrador, porque los geles tienen diferente composicio n de acrilamida-bisacrilamida, solucio n amortiguadora y pH. Soluciones Madre de Gel Solucio n de Acrilamida-Bisacrilamida al 30%Preparar una solucio n que contenga 290 g de acrilamida y 10 g de metilenbisacrilamida por L de agua tibia y ltrar. [NOTALa acrilamida y la metilen-bisacrilamida se convierten, lentamente, durante el almacenamiento, en a cido acr lico y a cido bisacr lico respectivamente. Esta reaccio n de desamidacio n es catalizada por la luz y los a lcalis. El pH de la solucio n debe ser de 7,0 o inferior. Almacenar la solucio n en frascos oscuros, a temperatura ambiente. Preparar todos los meses soluciones nuevas.] Solucio n de Persulfato de AmonioPreparar una pequen a cantidad de solucio n, con una concentracio n de 100 g de persulfato de amonio por L y almacenar a 48. [NOTAEl persulfato de amonio proporciona los radicales libres que impulsan la polimerizacio n de la acrilamida y la bisacrilamida. El persulfato de amonio se descompone lentamente; por lo tanto, se deben preparar soluciones nuevas semanalmente.] TEMEDUsar un reactivo de grado electrofore tico. [NOTA El TEMED acelera la polimerizacio n de acrilamida y bisacrilamida, catalizando la formacio n de radicales libres a partir del persulfato de amonio. Como el TEMED so lo funciona cuando es una base libre, a un pH bajo la polimerizacio n se inhibe.] Solucio n de SDSUsar un reactivo de grado electrofore tico. Preparar una solucio n con una concentracio n de aproximadamente 100 g de SDS por L y almacenar a temperatura ambiente. Solucio n Amortiguadora 1,5 MTransferir aproximadamente 90,8 g de tris(hidroximetil)aminometano (TRIS) a un matraz de 500 mL, disolver en 400 mL de agua, ajustar con a cido clorh drico hasta un pH de 8,8, diluir a volumen con agua y mezclar. Solucio n amortiguadora 1 MTransferir aproximadamente 60,6 g de TRIS a un matraz de 500 mL, agregar 400 mL de agua, ajustar con a cido clorh drico hasta un pH de 6,8, diluir a volumen con agua y mezclar. Preparacio n de las PlacasLimpiar dos placas de vidrio (10 cm 6 8 cm), el peine de teo n, los dos espaciadores y la tuber a de goma de silicona (0,6 mm 6 35 cm) con detergente suave, enjuagar bien con agua y secar con un material absorbente. Lubricar los espaciadores y la tuber a con grasa no siliconada. Aplicar los espaciadores a lo largo de los dos lados cortos de la placa de vidrio, a 2 mm de los bordes y a 2 mm del lado largo correspondiente a la parte inferior del gel. Comenzar a colocar las tuber as sobre la placa de vidrio, utilizando un espaciador como gu a. Cuidadosamente doblar la tuber a por debajo del espaciador y seguir el lado largo de la placa de vidrio. Mientras se sostiene la tuber a con un dedo por el lado largo, doblar nuevamente la tuber a y colocarla sobre el segundo lado corto de la placa de vidrio, usando el espaciador como gu a. Colocar la segunda placa de vidrio perfectamente alineada y sostener el molde unido haciendo presio n con la mano. Aplicar dos pinzas en cada uno de los dos lados cortos del molde. Aplicar cuidadosamente cuatro pinzas sobre el lado largo del molde de gel, formando as la parte inferior del molde de gel. Vericar que la tuber a corra a lo largo del borde de las placas de vidrio y que no se haya salido al colocar las pinzas. El molde esta ahora listo para recibir el gel. Gel SeparadorEn un matraz Erlenmeyer, preparar el volumen adecuado de solucio n que contenga la concentracio n deseada de acrilamida, segu n se indica en la Tabla 3. Mezclar los componentes en el orden que se muestra. Antes de agregar la Solucio n de Persulfato de Amonio y el TEMED, verter la solucio n en una unidad de ltracio n desechable equipada con un ltro de nitrocelulosa con un taman o de poro de 0,45 mm y aplicar vac o. Desgasicar la
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solucio n por rotacio n moderada de la unidad de ltracio n y desconectar el vac o cuando ya no se formen ma s burbujas en la solucio n. Agregar cantidades adecuadas de Solucio n de Persulfato de Amonio y de TEMED, segu n las instrucciones de la Tabla 3, agitar por rotacio n moderada y verter inmediatamente en el espacio entre las dos placas de vidrio del molde. Dejar espacio suciente para el gel concentrador (el largo de los dientes del peine ma s 1 cm). Con una pipeta, cubrir cuidadosamente la solucio n con alcohol isobut lico saturado con agua. Dejar el gel en posicio n vertical, a temperatura ambiente, para su polimerizacio n. Una vez nalizada la polimerizacio n (aproximadamente 30 minutos despue s), verter la capa superior y lavar la supercie del gel varias veces con agua, para quitar la capa de alcohol isobut lico y toda la acrilamida no polimerizada. Drenar tanto l quido como sea posible de la parte superior del gel y luego quitar el agua remanente usando el borde de una toalla de papel. Tabla 3. Preparacio n Componentes de la Solucio n 5 mL
Gel ConcentradorEn un matraz Erlenmeyer, preparar el volumen adecuado de solucio n con la concentracio n deseada de acrilamida, segu n se indica en la Tabla 4. Mezclar los componentes en el orden que se muestra. Antes de agregar la Solucio n de Persulfato de Amonio y el TEMED, verter la solucio n en una unidad de ltracio n desechable equipada con un ltro de nitrocelulosa con un taman o de poro de 0,45 mm y aplicar vac o. Desgasicar la solucio n por rotacio n moderada de la unidad de ltracio n y desconectar el vac o cuando ya no se formen ma s burbujas en la solucio n. Agregar cantidades adecuadas de Solucio n de Persulfato de Amonio y de TEMED, segu n se indica en la Tabla 4, agitar por rotacio n moderada y verter inmediatamente en el espacio entre las dos placas de vidrio del molde, directamente sobre la supercie del Gel Separador polimerizado. Introducir inmediatamente un peine de teo n limpio en la solucio n de gel concentrador, con cuidado para no atrapar burbujas de aire. Agregar ma s solucio n de gel concentrador de Gel Separador
Volu menes (mL) de Componentes por Volumen de Molde de Gel Indicado Debajo 10 mL 15 mL 20 mL 25 mL 30 mL 40 mL 50 mL 5,3 2,0 2,5 0,1 0,1 0,008 4,6 2,7 2,5 0,1 0,1 0,006 4,0 3,3 2,5 0,1 0,1 0,004 3,3 4,0 2,5 0,1 0,1 0,004 2,7 4,6 2,5 0,1 0,1 0,004 2,3 5,0 2,5 0,1 0,1 0,004 7,9 3,0 3,8 0,15 0,15 0,012 6,9 4,0 3,8 0,15 0,15 0,009 5,9 5,0 3,8 0,15 0,15 0,006 4,9 6,0 3,8 0,15 0,15 0,006 3,9 7,0 3,6 0,15 0,15 0,006 3,4 7,5 3,8 0,15 0,15 0,006 10,6 4,0 5,0 0,2 0,2 0,016 9,3 5,3 5,0 0,2 0,2 0,012 7,9 6,7 5,0 0,2 0,2 0,008 6,6 8,0 5,0 0,2 0,2 0,008 5,3 9,3 5,0 0,2 0,2 0,008 4,6 10,0 5,0 0,2 0,2 0,008 13,2 5,0 6,3 0,25 0,25 0,02 11,5 6,7 6,3 0,25 0,25 0,015 9,9 8,3 6,3 0,25 0,25 0,01 8,2 10,0 6,3 0,25 0,25 0,01 6,6 11,6 6,3 0,25 0,25 0,01 5,7 12,5 6,3 0,25 0,25 0,01 15,9 6,0 7,5 0,3 0,3 0,024 13,9 8,0 7,5 0,3 0,3 0,018 11,9 10,0 7,5 0,3 0,3 0,012 9,9 12,0 7,5 0,3 0,3 0,012 8,0 13,9 7,5 0,3 0,3 0,012 6,9 15,0 7,5 0,3 0,3 0,012 21,2 8,0 10,0 0,4 0,4 0,032 18,5 10,7 10,0 0,4 0,4 0,024 15,9 13,3 10,0 0,4 0,4 0,016 13,2 16,0 10,0 0,4 0,4 0,016 10,6 18,6 10,0 0,4 0,4 0,016 9,2 20,0 10,0 0,4 0,4 0,016 26,5 10,0 12,5 0,5 0,5 0,04 23,2 13,3 12,5 0,5 0,5 0,03 19,8 16,7 12,5 0,5 0,5 0,02 16,5 20,0 12,5 0,5 0,5 0,02 13,8 23,2 12,5 0,5 0,5 0,02 11,5 25,0 12,5 0,5 0,5 0,02
Acrilamida al 6% Agua 2,6 Solucio n de Acrilamida-Bisacrilamida al 1,0 30% Solucio n Amortiguadora 1,5 M 1,3 Solucio n de SDS 0,05 Solucio n de Persulfato de Amonio 0,05 TEMED 0,004 Acrilamida al 8% Agua 2,3 Solucio n de Acrilamida-Bisacrilamida al 1,3 30% Solucio n Amortiguadora 1,5 M 1,3 Solucio n de SDS 0,05 Solucio n de Persulfato de Amonio 0,05 TEMED 0,003 Acrilamida al 10% Agua 1,9 Solucio n de Acrilamida-Bisacrilamida al 1,7 30% Solucio n Amortiguadora 1,5 M 1,3 Solucio n de SDS 0,05 Solucio n de Persulfato de Amonio 0,05 TEMED 0,002 Acrilamida al 12% Agua 1,6 Solucio n de Acrilamida-Bisacrilamida al 2,0 30% Solucio n Amortiguadora 1,5 M 1,3 Solucio n de SDS 0,05 Solucio n de Persulfato de Amonio 0,05 TEMED 0,002 Acrilamida al 14% Agua 1,4 Solucio n de Acrilamida-Bisacrilamida al 2,3 30% Solucio n Amortiguadora 1,5 M 1,2 Solucio n de SDS 0,05 Solucio n de Persulfato de Amonio 0,05 TEMED 0,002 Acrilamida al 15% Agua 1,1 Solucio n de Acrilamida-Bisacrilamida al 2,5 30% Solucio n Amortiguadora 1,5 M 1,3 Solucio n de SDS 0,05 Solucio n de Persulfato de Amonio 0,05 TEMED 0,002
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La tincio n de Coomassie es el me todo de tincio n de prote nas ma s comu n, con un nivel de deteccio n en el orden de 1 mg a 10 mg de prote na por banda. La tincio n con plata es el me todo ma s sensible para ten ir prote nas en geles ya que es posible detectar una banda que contenga entre 10 ng a 100 ng, pero el me todo es ma s dicultoso y N ELECTROFORE TICA SEPARACIO menos robusto. Todos los pasos en la tincio n de gel se realizan a temperatura ambiente con agitacio n suave (por ejemplo, sobre un Solucio n Amortiguadora de Muestra 1Disolver 1,89 g de agitador de plataforma oscilante, o equivalente). Hay que usar TRIS, 5,0 g de SDS, 50 mg azul de bromofenol y 25,0 mL de guantes cuando se tin en los geles, para evitar la tincio n de residuos glicerol en 100 mL de agua. Ajustar con a cido clorh drico hasta un dejados por las huellas digitales. pH de 6,8 y diluir con agua a 125 mL. Antes de usar, diluir con un Reactivos volumen igual de agua o muestra y mezclar. Solucio n de Tincio n CoomassiePreparar una solucio n de azul Solucio n Amortiguadora de Muestra 2 (para condiciones brillante Coomassie R-250, con una concentracio n de 1,25 g por L reductoras)Preparar segu n se indica en la Solucio n Amortiguadora en una mezcla de agua, metanol y a cido ace tico glacial (5 : 4 : 1). de Muestra 1 con la excepcio n de agregar 12,5 mL de 2Filtrar y almacenar a temperatura ambiente. mercaptoetanol antes de ajustar el pH. Alternativamente, preparar Solucio n de Decoloracio nPreparar una mezcla de agua, metanol segu n se indica para Solucio n Amortiguadora de Muestra 1 excepto ya cido ace tico glacial (5 : 4 : 1). que se debe comenzar con aproximadamente 1,93 g de TRIS y se debe agregar una cantidad adecuada de DTT para obtener una Solucio n Fijadora 1Preparar una mezcla de agua, metanol y concentracio n nal de DTT 100 mM. a cido tricloroace tico (5 : 4 : 1). Solucio n Amortiguadora de CorridaDisolver 151,4 g de Solucio n Fijadora 2Transferir 250 mL de metanol a un matraz TRIS, 721,0 g de a cido aminoace tico y 50,0 g de SDS en agua, volume trico de 500 mL, agregar 0,27 mL de formaldeh do, diluir diluir con agua a 5000 mL y mezclar hasta obtener una solucio n a volumen con agua y mezclar. madre. Inmediatamente antes de usar, diluir esta solucio n madre con Reactivo de Nitrato de PlataA una mezcla de 40 mL de agua a 10 veces su volumen, mezclar y ajustar a un pH entre 8,1 y hidro xido de sodio 1 M y 3 mL de hidro xido de amonio, agregar gota 8,8. a gota 8 mL de una solucio n de nitrato de plata de 200 g por L, con ProcedimientoEnjuagar inmediatamente los pocillos con agua agitacio n; diluir con agua a 200 mL y mezclar. o con la Solucio n Amortiguadora de Corrida para eliminar toda la Solucio n de DesarrolloTransferir 2,5 mL de solucio n de a cido acrilamida no polimerizada. (Si fuera necesario, enderezar los c trico (2 en 100) y 0,27 mL de formaldeh do a un matraz dientes del Gel Concentrador con una aguja hipode rmica roma volume trico de 500 mL, diluir con agua a volumen y mezclar. conectada a una jeringa.) Quitar las pinzas de uno de los lados Solucio n de Detencio nPreparar una solucio n de a cido ace tico al cortos, retirar cuidadosamente la tuber a y volver a colocar las 10% (v/v). pinzas. Proceder de manera similar con el otro lado corto. Quitar la Tincio n CoomassieSumergir el gel en un exceso de Solucio n tuber a de la parte inferior del gel. de Tincio n Coomassie e incubar durante al menos 1 hora. Retirar la Montar el gel preparado en el aparato de electroforesis. Agregar Solucio n de Tincio n Coomassie. Desten ir el gel con un exceso de las soluciones amortiguadoras de electroforesis a los recipientes Solucio n de Decoloracio n. Cambiar la Solucio n de Decoloracio n superior e inferior. Quitar cualquier burbuja que haya quedado varias veces, hasta que las bandas de prote na ten idas se distingan atrapada en el fondo del gel, entre las placas de vidrio. [NOTAS claramente sobre un fondo transparente. Cuanto ma s completamente Esto se realiza mejor con una aguja hipode rmica roma conectada se destin a el gel, menor sera la cantidad de prote na detectable. La a una jeringa. Nunca se debe correr previamente el gel antes de decoloracio n se puede acelerar incluyendo unos pocos gramos de cargar las muestras, porque esto destruir a la discontinuidad de los resina de intercambio anio nico o una esponja pequen a en la Solucio n sistemas amortiguadores de pH. Antes de cargar la muestra, enjuagar de Decoloracio n. [NOTALas soluciones alcohol a cido usadas en cuidadosamente la ranura con Solucio n Amortiguadora de Corrida.] este procedimiento no jan completamente las prote nas en el gel. Preparar las soluciones de prueba y esta ndar en la Solucio n Esto puede conducir a pe rdidas de algunas prote nas de bajo peso Amortiguadora de Muestra recomendada y tratar segu n se indica en molecular durante la tincio n y decoloracio n de geles delgados. La la monograf a individual. Aplicar el volumen adecuado de cada jacio n permanente se puede lograr por incubacio n del gel en solucio n a los pocillos de Gel Concentrador. Solucio n Fijadora 1 durante 1 hora antes de sumergirla en la Comenzar la electroforesis usando las condiciones recomendadas Solucio n de Tincio n Coomassie.] por el fabricante del equipo. Puede ser necesario variar el tiempo de corrida de la electroforesis y la corriente o el voltaje a n de lograr Tincio n con PlataSumergir el gel en un exceso de Solucio n una separacio n o ptima. Vericar que el frente de tincio n se mueva Fijadora 2, e incubar durante 1 hora. Retirar la Solucio n Fijadora 2, hacia el gel separador. Detener la electroforesis cuando la tincio n agregar Solucio n Fijadora 2 recie n preparada e incubar durante al haya llegado al fondo del gel. Retirar el montaje de gel del aparato y menos 1 hora, o durante la noche si fuera conveniente. Desechar la separar las placas de vidrio. Quitar los espaciadores, cortar y Solucio n Fijadora 2, lavar el gel en un exceso de agua durante desechar el Gel Concentrador y proceder de inmediato con la 1 hora. Empapar el gel durante 15 minutos en una solucio n de tincio n. glutaraldeh do al 1% (v/v). Lavar el gel dos veces, durante 15 minutos cada vez, con un exceso de agua. Empapar el gel en Reactivo de Nitrato de Plata recie n preparado durante 15 minutos, en la oscuridad. Lavar el gel tres veces, durante 5 minutos cada vez, con un exceso de agua. Sumergir el gel durante aproximadamente Tabla 4. Preparacio n de Gel Concentrador Volu menes (mL) de Componentes por Volumen de Molde de Gel Indicado Debajo Componentes de la Solucio n 1 mL Agua 0,68 Solucio n de Acrilamida-Bisacrilamida al 0,17 30% Solucio n Amortiguadora 1,0 M 0,13 Solucio n de SDS 0,01 Solucio n de Persulfato de Amonio 0,01 TEMED 0,001 2 mL 1,4 0,33 0,25 0,02 0,02 0,002 3 mL 2,1 0,5 0,38 0,03 0,03 0,003 4 mL 2,7 0,67 0,5 0,04 0,04 0,004 5 mL 3,4 0,83 0,63 0,05 0,05 0,005 6 mL 4,1 1,0 0,75 0,06 0,06 0,006 8 mL 5,5 1,3 1,0 0,08 0,08 0,008 10 mL 6,8 1,7 1,25 0,1 0,1 0,01
para llenar completamente los espacios del peine. Dejar el gel en posicio n vertical y dejar polimerizar a temperatura ambiente. Una vez completada la polimerizacio n (aproximadamente 30 minutos despue s), retirar cuidadosamente el peine de teo n y proceder segu n se indica a continuacio n.
NAS EN GELES DETECCION DE PROTEI
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1 minuto en la Solucio n de Desarrollo hasta obtener una tincio n satisfactoria. Detener el desarrollo mediante incubacio n en la Solucio n de Detencio n durante 15 minutos; enjuagar luego el gel con agua y proceder con el secado segu n se indica a continuacio n.
SECADO DE GELES
N DE PROTEI NAS TOTALES VALORACIO

Los siguientes procedimientos se proporcionan para ilustrar la determinacio n del contenido de prote nas totales en las preparaciones farmacopeicas. Otras te cnicas, tales como HPLC, tambie n son aceptables si se demuestra la recuperacio n total de prote nas. Muchos de los me todos de valoracio n de prote nas totales descritos a continuacio n se pueden realizar con equipos comerciales. [NOTA Siempre que se necesite agua, usar agua destilada.]
Para la tincio n de Coomassie, despue s del paso de decoloracio n, incubar el gel en una solucio n de glicerol (1 en 10) durante al menos 2 horas. Para la tincio n con plata, agregar al paso nal de enjuague una incubacio n de 5 minutos en una solucio n de glicerol (1 en 50). Sumergir dos la minas de celofa n poroso en agua, e incubar de 5 a 10 minutos. Colocar una de las la minas en un marco de secado. Levantar el gel cuidadosamente y colocarlo sobre la la mina de celofa n. Eliminar todas las burbujas de aire atrapadas y verter algunos mL de agua alrededor de los bordes del gel. Colocar la segunda la mina por encima y eliminar todas las burbujas de aire atrapadas. Completar el montaje del marco de secado. Colocar en una estufa de secado, dejar a temperatura ambiente hasta que este seco, o usar un secador de gel comercial.
N DEL PESO MOLECULAR DETERMINACIO
Me todo 1
La prote na en solucio n absorbe la luz UV a una longitud de onda de 280 nm, debido a la presencia de aminoa cidos aroma ticos, principalmente tirosina y tripto fano. Esta propiedad es el fundamento de este me todo. La determinacio n de prote nas a 280 nm es principalmente una funcio n del contenido de tirosina y tripto fano de la prote na. Si la solucio n amortiguadora usada para disolver la prote na tiene una absorbancia alta en relacio n a la del agua, hay una sustancia que interere en la solucio n amortiguadora. Esta interferencia se puede compensar cuando el espectrofoto metro se ajusta a cero con la solucio n amortiguadora. Si la interferencia da como resultado una gran absorbancia que desaf a el l mite de sensibilidad del espectrofoto metro, los resultados podr an ser erro neos. Adema s, en concentraciones bajas, la prote na puede ser absorbida en la cubeta, reduciendo as el contenido en solucio n. Esto puede evitarse preparando muestras ma s concentradas, o usando un detergente no io nico en la preparacio n. [NOTAMantener la Solucio n de Prueba, la Solucio n Esta ndar y la solucio n amortiguadora a la misma temperatura durante la prueba.] Solucio n de PruebaDisolver una cantidad adecuada de la prote na en ana lisis en la solucio n amortiguadora adecuada para obtener una solucio n con una concentracio n de 0,2 a 2 mg por mL. Solucio n Esta ndarA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, preparar una solucio n del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia para la prote na en ana lisis en la misma solucio n amortiguadora y a la misma concentracio n que la Solucio n de Prueba. ProcedimientoDeterminar concomitantemente las absorbancias de la Solucio n Esta ndar y de la Solucio n de Prueba en celdas de cuarzo a una longitud de onda de 280 nm, con un espectrofoto metro adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i), usando la solucio n amortiguadora como blanco. Para obtener resultados exactos, la respuesta debe ser lineal para el intervalo de concentraciones de prote na a ser valoradas. Dispersio n de LuzLa exactitud de la determinacio n espectrosco pica UV de la prote na puede disminuir si la muestra dispersa la luz. Si las prote nas en la solucio n existen como part culas de taman o comparable con la longitud de onda de la luz de medicio n (250 a 300 nm), la dispersio n del haz de luz produce un aumento aparente en la absorbancia de la muestra. Para calcular la absorbancia a 280 nm causada por la dispersio n de luz, hay que determinar las absorbancias de la Solucio n de Prueba a longitudes de onda de 320; 325; 330; 335; 340; 345 y 350 nm. Usando el me todo de regresio n lineal, trazar la gra ca del logaritmo de la absorbancia observada en funcio n del logaritmo de la longitud de onda y determinar la curva esta ndar que mejor se ajuste a los puntos gracados. A partir de la gra ca as obtenida, extrapolar el valor de absorbancia causada por la dispersio n de luz a 280 nm. Restar la absorbancia por dispersio n de luz de la absorbancia total a 280 nm para obtener el valor de absorbancia de la prote na en la solucio n. Para reducir el efecto de la dispersio n de luz, en especial si la solucio n esta muy turbia, se puede pasar la solucio n por un ltro con un taman o de poro de 0,2 mm o se puede claricar por centrifugacio n. Ca lculosCalcular la concentracio n, CU, de la prote na en la muestra de la prueba, por la fo rmula: CS(AU / AS) en donde CS es la concentracio n de la Solucio n Esta ndar; y AU y AS son las absorbancias corregidas de la Solucio n de Prueba y la Solucio n Esta ndar, respectivamente (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i).
Los pesos moleculares de las prote nas se determinan por comparacio n de sus movilidades con las de varias prote nas marcadoras de peso molecular conocido. Para la calibracio n de geles, hay mezclas disponibles de prote nas con pesos moleculares conocidos con precisio n, combinadas para una tincio n uniforme. Esta n disponibles en diversos intervalos de pesos moleculares. Las soluciones madre concentradas de prote nas de peso molecular conocido se diluyen en un amortiguador del pH de muestra y se cargan en el mismo gel que la muestra de prote na a analizar. Inmediatamente despue s de correr el gel, se marca la posicio n del colorante de rastreo de azul de bromofenol para identicar el borde frontal de iones electrofore ticos. Esto se puede realizar cortando muescas en los bordes del gel, o insertando una aguja empapada en tinta china en el gel, en el frente de tincio n. Despue s de la tincio n, medir las distancias de migracio n de cada banda de prote na (marcadoras y desconocidas) desde la parte superior del Gel Separador. Dividir la distancia de migracio n de cada prote na por la distancia recorrida por el colorante de rastreo. Las distancias de migracio n normalizadas as obtenidas se denominan movilidades relativas de las prote nas (con respecto al frente de tincio n) y se denominan convencionalmente RF. Construir un gra co (semilogar tmico) del logaritmo de los pesos moleculares (MR) de los esta ndares de prote nas en funcio n de los valores RF. [NOTALas gra cas son levemente sigmoideas.] A partir de la gra ca as obtenida, estimar los pesos moleculares desconocidos, por ana lisis de regresio n lineal o interpolacio n, siempre que las muestras desconocidas caigan en la parte lineal de la gra ca. Si las prote nas del marcador de peso molecular no esta n distribuidas a lo largo del 80% de la extensio n del gel y en el intervalo de separacio n requerido (es decir, el intervalo que cubre el producto y su d mero o los productos y sus impurezas relacionadas) y la separacio n obtenida para las bandas de prote na relevantes no muestra una relacio n lineal entre el logaritmo del peso molecular y el RF, entonces la prueba no es va lida.
N DE IMPUREZAS CUANTIFICACIO
Cuando se especica el l mite de impurezas en la monograf a individual, se prepara una solucio n de referencia correspondiente a ese nivel de impureza, diluyendo la solucio n de prueba. Por ejemplo, cuando el l mite es 5,0%, la solucio n de referencia es una dilucio n 1 en 20 de la solucio n de prueba. Ninguna impureza cualquier banda que no sea la banda principal en el electroforetograma obtenido a partir de la solucio n de prueba es ma s intensa que la banda principal obtenida con la solucio n de referencia. Bajo condiciones validadas y cuando se usa el procedimiento de tincio n de Coomassie, las impurezas se pueden cuanticar por normalizacio n con respecto a la banda principal usando un densito metro de integracio n. En este caso, las respuestas deben ser validadas para linealidad.
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Me todo 2
Este me todo, comu nmente conocido como la valoracio n de Lowry, se basa en la reduccio n mediante prote nas del cromo geno de la mezcla de a cido fosfomol bdico y a cido tu ngstico en el reactivo Folin-Ciocalteu para fenoles, que produce una absorbancia ma xima a 750 nm. El reactivo Folin-Ciocalteu para fenoles reacciona principalmente con residuos tirosina en la prote na, lo cual puede conducir a una variacio n en la respuesta cuando se valoran diferentes prote nas. Como el me todo es sensible a sustancias de interferencia, se puede usar un procedimiento para precipitar la prote na de la muestra. Cuando sea necesaria la separacio n de las sustancias de interferencia de la prote na en la muestra de la prueba, proceder segu n se indica a continuacio n para Sustancias de Interferencia antes de la preparacio n de la Solucio n de Prueba. El efecto de las sustancias de interferencia se puede minimizar por dilucio n, siempre que la concentracio n de la prote na en ana lisis continu e siendo suciente para una medicio n exacta. Soluciones Esta ndarA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, disolver el Esta ndar de Referencia USP o el material de referencia para la prote na en ana lisis, en la solucio n amortiguadora usada para preparar la Solucio n de Prueba. Diluir porciones de esta solucio n con la misma solucio n amortiguadora para obtener no menos de cinco Soluciones Esta ndar con concentraciones entre 5 y 100 mg de prote na por mL, y con concentraciones uniformemente espaciadas. Solucio n de PruebaDisolver una cantidad adecuada de la prote na en ana lisis, en la solucio n amortiguadora adecuada para obtener una solucio n con una concentracio n comprendida dentro del intervalo de concentraciones de las Soluciones Esta ndar. Una solucio n amortiguadora adecuada producira un pH entre 10,0 y 10,5. BlancoUsar la solucio n amortiguadora utilizada para la Solucio n de Prueba y las Soluciones Esta ndar. Reactivos y Soluciones Reactivo de Sulfato de CobreDisolver 100 mg de sulfato cu prico y 200 mg de tartrato de sodio en agua, diluir con agua a 50 mL y mezclar. Disolver 10 g de carbonato de sodio en agua a un volumen nal de 50 mL y mezclar. Verter lentamente la solucio n de carbonato de sodio en la solucio n de sulfato de cobre, mezclando. Preparar esta solucio n a diario. Solucio n de SDSDisolver 5 g de dodecilsulfato de sodio en agua y diluir con agua a 100 mL. Solucio n de Hidro xido de SodioDisolver 3,2 g de hidro xido de sodio en agua, diluir con agua a 100 mL y mezclar. Reactivo de Cobre AlcalinoPreparar una mezcla de Reactivo de Sulfato de Cobre, Solucio n de SDS y Solucio n de Hidro xido de Sodio (1 : 2 : 1). Este reactivo se puede almacenar a temperatura ambiente hasta 2 semanas. Reactivo Folin-Ciocalteu para Fenoles DiluidoMezclar 10 mL de Folin-Ciocalteu para Fenoles SR con 50 mL de agua. Almacenar en un frasco a mbar, a temperatura ambiente. ProcedimientoAgregar a 1 mL de la Solucio n Esta ndar, a 1 mL de la Solucio n de Prueba y a 1 mL de Blanco, 1 mL de Reactivo de Cobre Alcalino y mezclar. Dejar en reposo a temperatura ambiente durante 10 minutos. Agregar 0,5 mL del Reactivo Folin-Ciocalteu para Fenoles Diluido a cada solucio n, mezclar inmediatamente cada tubo y dejar reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos. Determinar las absorbancias de las soluciones obtenidas de las Soluciones Esta ndar y la Solucio n de Prueba a la longitud de onda de absorbancia ma xima a 750 nm, con un espectrofoto metro adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i), usando la solucio n del Blanco para ajustar el instrumento a cero. Ca lculos[NOTALa relacio n de absorbancia no es funcio n lineal de concentracio n proteica; sin embargo, si el intervalo de concentracio n de la curva esta ndar es lo sucientemente pequen o, se aproxima a la linealidad.] Usando el me todo de regresio n lineal, gracar las absorbancias de las soluciones obtenidas de las Soluciones Esta ndar en funcio n de las concentraciones de prote na y determinar la curva esta ndar que mejor se ajuste a los puntos gracados. A partir de la curva esta ndar as obtenida y de la absorbancia de la Solucio n de Prueba, determinar la concentracio n proteica de la Solucio n de Prueba.
SUSTANCIAS DE INTERFERENCIA
En el siguiente procedimiento, se agrega desoxicolato-a cido tricloroace tico a una muestra, para eliminar las sustancias de interferencia por precipitacio n de prote nas antes de hacer la prueba. Esta te cnica tambie n puede usarse para concentrar prote nas de una solucio n diluida. Reactivo de Desoxicolato de SodioPreparar una solucio n de desoxicolato de sodio en agua, con una concentracio n de 150 mg en 100 mL. cido Tricloroace Reactivo de A ticoPreparar una solucio n de a cido tricloroace tico en agua, con una concentracio n de 72 g en 100 mL. ProcedimientoAgregar 0,1 mL de Reactivo de Desoxicolato de Sodio a 1 mL de una solucio n de la prote na en ana lisis. Mezclar en un mezclador por vo rtice y dejar reposar a temperatura ambiente cido durante 10 minutos. Agregar 0,1 mL de Reactivo de A Tricloroace tico y mezclar en un mezclador por vo rtice. Centrifugar a 3000 6 g durante 30 minutos, decantar el l quido y eliminar todo l quido residual con una pipeta. Volver a disolver el pellet de prote na en 1 mL de Reactivo de Cobre Alcalino. Proceder segu n se indica para la Solucio n de Prueba. NOTAEl desarrollo del color alcanza un ma ximo en 20 a 30 minutos durante la incubacio n a temperatura ambiente, y despue s hay una pe rdida gradual de color. La mayor a de las sustancias de interferencia reducen la intensidad del color; sin embargo, algunos detergentes causan un leve aumento del color. Una concentracio n alta de sal puede provocar la formacio n de un precipitado. Como las distintas especies de prote na pueden dar respuestas de color de distinta intensidad, la prote na esta ndar y la prote na de prueba deben ser la misma.
Me todo 3
Este me todo, comu nmente denominado ensayo de Bradford, se basa en el cambio de absorcio n de 470 nm a 595 nm que se observa cuando el colorante azul brillante G se une a la prote na. El colorante azul brillante G se une de inmediato a los residuos arginilo y lisilo en la prote na, que puede variar la respuesta de la valoracio n para diferentes prote nas. Soluciones Esta ndarA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, disolver el Esta ndar de Referencia USP o el material de referencia para la prote na en ana lisis en la solucio n amortiguadora usada para preparar la Solucio n de Prueba. Diluir porciones de esta solucio n con la misma solucio n amortiguadora para obtener no menos de cinco Soluciones Esta ndar que tengan concentraciones entre 100 mg y 1 mg de prote na por mL, con concentraciones uniformemente espaciadas. Solucio n de PruebaDisolver una cantidad adecuada de la prote na en ana lisis en la solucio n amortiguadora adecuada para obtener una solucio n con una concentracio n comprendida dentro del intervalo de concentraciones de las Soluciones Esta ndar. BlancoUsar la solucio n amortiguadora utilizada para preparar la Solucio n de Prueba y las Soluciones Esta ndar. Reactivo de CoomassieDisolver 100 mg de azul brillante G3 en 50 mL de alcohol. [NOTANo todos los colorantes tienen el mismo contenido de azul brillante G y distintos productos pueden dar resultados diferentes.] Agregar 100 mL de a cido fosfo rico, diluir con agua a 1 L y mezclar. Pasar la solucio n a trave s de papel de ltro (Whatman N8 1 o equivalente) y almacenar el reactivo ltrado en un frasco a mbar a temperatura ambiente. [NOTAEl colorante precipita lentamente durante el almacenamiento del reactivo. Filtrar el reactivo antes de usarlo.] ProcedimientoAgregar 5 mL del Reactivo Coomassie a 100 mL de cada una de las siguientes soluciones: Solucio n Esta ndar, Solucio n de Prueba y Blanco, y mezclar por inversio n. Evitar la formacio n de espuma ya que altera la reproducibilidad. Determinar las absorbancias de las soluciones de las Soluciones Esta ndar y la Solucio n de Prueba a 595 nm, con un espectrofoto metro adecuado
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La pureza del colorante es importante en la preparacio n del reactivo. Se pretende proponer un pie de pa gina referente al reactivo, para indicar que Serva Blue G (Crescent Chemical Company, Hauppage, NY) es un grado aceptable.
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(ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i), usando el Blanco para ajustar el instrumento a cero. [NOTANo emplear celdas de cuarzo (s lice) en el espectrofoto metro: el colorante se une a este material. Como las distintas especies de prote na pueden dar respuestas de color de distinta intensidad, la prote na esta ndar y la prote na de prueba deben ser la misma.] Hay relativamente pocas sustancias de interferencia, pero se deben evitar los detergentes y los anfolitos en la muestra de prueba. Las muestras muy alcalinas pueden interferir con el reactivo a cido. Ca lculos[NOTALa absorbancia no es funcio n lineal de la concentracio n proteica; sin embargo, si el intervalo de concentracio n de la curva esta ndar es lo sucientemente pequen o, se aproxima a la linealidad.] Usando el me todo de regresio n lineal, gracar las absorbancias de las soluciones obtenidas de las Soluciones Esta ndar en funcio n de las concentraciones de prote na y determinar la curva esta ndar que mejor se ajuste a los puntos gracados. A partir de la curva esta ndar as obtenida y de la absorbancia de la Solucio n de Prueba, determinar la concentracio n proteica de la Solucio n de Prueba.
linealidad.] Usando el me todo de regresio n lineal, gracar las absorbancias de las soluciones obtenidas de las Soluciones Esta ndar en funcio n de las concentraciones de prote na y determinar la curva esta ndar que mejor se ajuste a los puntos gracados. A partir de la curva esta ndar as obtenida y de la absorbancia de la Solucio n de Prueba, determinar la concentracio n proteica de la Solucio n de Prueba.
Me todo 5
Este me todo, comu nmente denominado valoracio n de Biuret, se basa en la interaccio n del io n cu prico (Cu2+) con la prote na en una solucio n alcalina y el desarrollo de absorbancia a 545 nm. Soluciones Esta ndarA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, preparar una solucio n de Albu mina Humana, para la cual se haya determinado previamente el contenido proteico por ana lisis de nitro geno (usando un factor de conversio n nitro geno-prote na de 6,25) o del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia para la prote na en ana lisis en solucio n de cloruro de sodio (9 en 1000). Diluir porciones de esta solucio n con solucio n de cloruro de sodio (9 en 1000) para obtener no menos de tres Soluciones Esta ndar con concentraciones entre 0,5 y 10 mg por mL, con concentraciones uniformemente espaciadas. [NOTAPueden observarse respuestas bajas si la muestra en ana lisis tiene un nivel de prolina signicativamente diferente al de la Albu mina Humana. En dichos casos se puede emplear una prote na esta ndar diferente.] Solucio n de PruebaPreparar una solucio n de la prote na de prueba en solucio n de cloruro de sodio (9 en 1000), con una concentracio n comprendida dentro del intervalo de las concentraciones de las Soluciones Esta ndar. BlancoUsar solucio n de cloruro de sodio (9 en 1000). Reactivo de BiuretDisolver aproximadamente 3,46 g de sulfato cu prico en 10 mL de agua caliente y dejar enfriar (Solucio n 1). Disolver aproximadamente 34,6 g de citrato de sodio dihidrato y 20,0 g de carbonato de sodio en 80 mL de agua caliente y dejar enfriar (Solucio n 2). Mezclar la Solucio n 1 y la Solucio n 2 y diluir con agua a 200 mL. Este Reactivo de Biuret es estable a temperatura ambiente durante 6 meses. No usar el reactivo si aparece turbidez o contiene algu n precipitado. ProcedimientoA un volumen de una solucio n de la Solucio n de prueba, agregar un volumen igual de solucio n de hidro xido de sodio (6 en 100) y mezclar. Agregar inmediatamente un volumen de Reactivo de Biuret equivalente a un volumen de 0,4 de la Solucio n de Prueba y mezclar. Dejar en reposo a temperatura ambiente entre 158 y 258, durante no menos de 15 minutos. Dentro de los 90 minutos siguientes a la adicio n del Reactivo de Biuret, determinar las absorbancias de las Soluciones Esta ndar y de la solucio n obtenida de la Solucio n de Prueba a la longitud de onda de absorbancia ma xima a 545 nm, con un espectrofoto metro adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i), usando el Blanco para ajustar el instrumento a cero. [NOTAToda solucio n que desarrolle turbidez, o un precipitado, no es aceptable para el ca lculo de la concentracio n proteica.] Ca lculosUsando el me todo de regresio n lineal de cuadrados m nimos, gracar las absorbancias de las Soluciones Esta ndar en funcio n de las concentraciones de prote na, determinando la curva esta ndar que mejor se ajuste a los puntos gracados y calcular el coeciente de correlacio n para la l nea. [NOTADentro del intervalo dado de los esta ndares, la relacio n entre la absorbancia y la concentracio n proteica es aproximadamente lineal.] Un sistema adecuado es aquel que produce una l nea con un coeciente de correlacio n de no menos de 0,99. A partir de la curva esta ndar y de la absorbancia de la Solucio n de Prueba, determinar la concentracio n proteica de la muestra, haciendo las correcciones necesarias. Sustancias de InterferenciaA n de minimizar el efecto de las sustancias de interferencia, se puede precipitar la prote na en la muestra de prueba inicial, como se indica a continuacio n. Agregar 0,1 volumen de a cido tricloroace tico al 50 por ciento a 1 volumen de una solucio n de la muestra de prueba, retirar la capa sobrenadante y disolver el precipitado en un volumen pequen o de hidro xido de sodio 0,5 N. Usar la solucio n as obtenida para preparar la Solucio n de Prueba.
Me todo 4
Este me todo, comu nmente denominado valoracio n con a cido bicincon nico o BCA, se basa en la reduccio n del io n cu prico (Cu2+) a io n cuproso (Cu1+) por prote nas. El reactivo de a cido bicincon nico se usa para detectar el io n cuproso. El me todo tiene pocas sustancias de interferencia. Cuando hay sustancias de interferencia presentes, se puede minimizar su efecto mediante dilucio n, siempre que la concentracio n de la prote na en ana lisis sea suciente para una medicio n exacta. Soluciones Esta ndarA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, disolver el Esta ndar de Referencia USP o el material de referencia para la prote na en ana lisis, en la solucio n amortiguadora usada para preparar la Solucio n de Prueba. Diluir porciones de esta solucio n con la misma solucio n amortiguadora para obtener no menos de cinco Soluciones Esta ndar con concentraciones entre 10 mg y 1200 mg de prote na por mL, con concentraciones uniformemente espaciadas. Solucio n de PruebaDisolver una cantidad adecuada de la prote na en ana lisis en la solucio n amortiguadora adecuada para obtener una solucio n con una concentracio n comprendida dentro del intervalo de concentraciones de las Soluciones Esta ndar. BlancoUsar la solucio n amortiguadora utilizada para preparar la Solucio n de Prueba y las Soluciones Esta ndar. Reactivos Reactivo BCADisolver aproximadamente 10 g de a cido bicincon nico, 20 g de carbonato de sodio monohidrato, 1,6 g de tartrato de sodio, 4 g de hidro xido de sodio y 9,5 g de bicarbonato de sodio en agua. Ajustar, si es necesario, hasta un pH de 11,25 con hidro xido de sodio o con bicarbonato de sodio. Diluir con agua a 1 L y mezclar. Reactivo de Sulfato de CobreDisolver aproximadamente 2 g de sulfato cu prico en agua a un volumen nal de 50 mL. Reactivo Cobre-BCAMezclar 1 mL de Reactivo de Sulfato de Cobre y 50 mL de Reactivo BCA. ProcedimientoA sendos tubos con 0,1 mL de la Solucio n Esta ndar, 0,1 mL de la Solucio n de Prueba y 0,1 mL del Blanco, agregar 2 mL de Reactivo de Cobre-BCA y mezclar. Incubar las soluciones a 378 durante 30 minutos, anotar el tiempo y dejar que lleguen a temperatura ambiente. Dentro de los 60 minutos siguientes a la incubacio n, determinar las absorbancias de las soluciones de las Soluciones Esta ndar y la Solucio n de Prueba en celdas de cuarzo a 562 nm, con un espectrofoto metro adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i), usando la solucio n Blanco para ajustar el instrumento a cero. Despue s de enfriar las soluciones a temperatura ambiente, la intensidad del color continu a aumentando gradualmente. Si hay presentes sustancias que causen interferencias en la prueba, proceder segu n se indica en Sustancias de Interferencia en el Me todo 2. Como las distintas especies de prote na pueden dar respuestas de color de distinta intensidad, la prote na esta ndar y la prote na de prueba deben ser la misma. Ca lculos[NOTALa absorbancia no es funcio n lineal de la concentracio n proteica; sin embargo, si el intervalo de concentracio n de la curva esta ndar es lo sucientemente pequen o, se aproxima a la
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ComentariosEsta prueba muestra una diferencia m nima entre muestras de IgG y de albu mina equivalentes. La adicio n de hidro xido de sodio y del Reactivo de Biuret como reactivo combinado, la mezcla insuciente despue s de la adicio n del hidro xido de sodio o un tiempo prolongado entre la adicio n de la solucio n de hidro xido de sodio y la adicio n del Reactivo de Biuret produce para las muestras de IgG una respuesta ma s alta que para las muestras de albu mina. El me todo de a cido tricloroace tico usado para minimizar los efectos de sustancias de interferencia tambie n se puede usar para determinar el contenido proteico en muestras de prueba con concentraciones por debajo de 500 mg por mL.
determinar la curva esta ndar que mejor se ajuste a los puntos gracados. A partir de la curva esta ndar as obtenida y de la intensidad de uorescencia de la Solucio n de Prueba, determinar la concentracio n proteica de la muestra.
Me todo 7
Este me todo se basa en el ana lisis de nitro geno como un medio de determinacio n de prote na. La interferencia causada por la presencia de otras sustancias nitrogenadas en la muestra pueden afectar la determinacio n de prote na por este me todo. Las te cnicas de ana lisis de nitro geno destruyen la prote na en ana lisis, pero no se limitan a las prote nas en un medio acuoso. Procedimiento 1Determinar el contenido de nitro geno de la prote na en ana lisis segu n se indica en Determinacio n de Nitro geno h461i. Hay instrumental disponible comercialmente para la valoracio n de nitro geno por el me todo de Kjeldahl. Procedimiento 2Hay instrumental disponible comercialmente para ana lisis de nitro geno. La mayor a de los instrumentos para ana lisis de nitro geno emplean piro lisis (es decir, la combustio n de la muestra en ox geno a temperaturas cercanas a los 10008), producie ndose o xido n trico (NO) y o xidos de nitro geno similares (NOx) a partir del nitro geno presente en la prote na de prueba. Algunos instrumentos convierten los o xidos n tricos en gas nitro geno, que se cuantica con un detector de conductividad te rmica. Otros instrumentos mezclan el o xido n trico (NO) con ozono (O3) forma ndose dio xido de nitro geno excitado (NO2), que emite luz cuando se desintegra y se puede cuanticar con un detector de quimioluminiscencia. Se usa un material de referencia de prote na o un esta ndar de referencia que sea relativamente puro y similar en composicio n a las prote nas de la prueba para optimizar los para metros de inyeccio n y piro lisis y para evaluar la uniformidad en el ana lisis. Ca lculosLa concentracio n proteica se calcula dividiendo el contenido de nitro geno de la muestra por el contenido conocido de nitro geno de la prote na. El contenido conocido de nitro geno de la prote na se puede determinar a partir de la composicio n qu mica de la prote na, o por comparacio n con el contenido de nitro geno del Esta ndar de Referencia USP o del material de referencia.&1S (USP30)
Me todo 6
Este me todo uorome trico se basa en la derivatizacio n de la prote na con o-ftalaldeh do (OPA), que reacciona con las aminas primarias de la prote na (es decir, el aminoa cido NH2-terminal y el grupo E-amino de los residuos lisina). La sensibilidad de la prueba puede aumentarse hidrolizando la prote na antes de realizar la prueba. Mediante hidro lisis los grupos a-amino de los aminoa cidos constituyentes de la prote na quedan disponibles para reaccionar con el reactivo o-ftalaldeh do. El me todo requiere cantidades muy pequen as de la prote na. Las aminas primarias, tales como el tris(hidroximetil)aminometano y las soluciones amortiguadoras de aminoa cidos, reaccionan con el o-ftalaldeh do y deben evitarse o eliminarse. El amon aco en concentraciones altas reacciona tambie n con el o-ftalaldeh do. La uorescencia obtenida cuando la amina reacciona con el oftalaldeh do puede ser inestable. El uso de procedimientos automatizados para estandarizar este procedimiento puede mejorar la exactitud y la precisio n de la prueba. Soluciones Esta ndarA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, disolver el Esta ndar de Referencia USP o el material de referencia para la prote na en ana lisis, en la solucio n amortiguadora usada para preparar la Solucio n de Prueba. Diluir porciones de esta solucio n con la misma solucio n amortiguadora para obtener no menos de cinco Soluciones Esta ndar con concentraciones entre 10 y 200 mg de prote na por mL, con concentraciones uniformemente espaciadas. Solucio n de PruebaDisolver una cantidad adecuada de la prote na en ana lisis en la solucio n amortiguadora adecuada para obtener una solucio n con una concentracio n comprendida dentro del intervalo de concentraciones de las Soluciones Esta ndar. BlancoUsar la solucio n amortiguadora utilizada para preparar la Solucio n de Prueba y las Soluciones Esta ndar. Reactivos Solucio n Amortiguadora de BoratoDisolver aproximadamente 61,83 g de a cido bo rico en agua y ajustar con hidro xido de potasio, hasta un pH de 10,4. Diluir con agua a 1 L y mezclar. Reactivo OPA MadreDisolver aproximadamente 120 mg de oftalaldeh do en 1,5 mL de metanol, agregar 100 mL de Solucio n Amortiguadora de Borato y mezclar. Agregar 0,6 mL de e ter polietilenglicol (23) laur lico y mezclar. Esta solucio n es estable a temperatura ambiente durante al menos 3 semanas. Reactivo OPAA 5 mL de Reactivo OPA Madre, agregar 15 mL de 2-mercaptoetanol. Preparar al menos 30 minutos antes de usar. Este reactivo es estable durante un d a. ProcedimientoAjustar cada una de las Soluciones Esta ndar y la Solucio n de Prueba a un pH entre 8 y 10,5. Mezclar 10 mL de la Solucio n de Prueba y cada una de las Soluciones Esta ndar con 100 mL de Reactivo OPA y dejar reposar a temperatura ambiente durante 15 minutos. Agregar 3 mL de hidro xido de sodio 0,5 N y mezclar. Usando un uoro metro adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i), determinar las intensidades de uorescencia de las soluciones obtenidas de las Soluciones Esta ndar y de la Solucio n de Prueba a una longitud de onda de excitacio n de 340 nm y a una longitud de onda de emisio n entre 440 y 455 nm. [NOTALa uorescencia de una muestra individual se lee so lo una vez, porque la irradiacio n disminuye la intensidad de la uorescencia.] Ca lculosLa uorescencia es funcio n lineal de la concentracio n proteica. Usando el me todo de regresio n lineal, gracar las intensidades de uorescencia de las soluciones obtenidas de las Soluciones Esta ndar en funcio n de las concentraciones de prote na y
&
CULOS OBTENIDOS h1052i ARTI A POR BIOTECNOLOGI LISIS DE AMINOA CIDOS ANA
Este cap tulo proporciona gu as y procedimientos utilizados para la caracterizacio n de art culos obtenidos por biotecnolog a mediante ana lisis de aminoa cidos. Se lo ha armonizado con los cap tulos correspondientes en la Farmacopea Japonesa (JP) y la Farmacopea Europea (EP). Tambie n se muestran otras pruebas de caracterizacio n armonizadas en Art culos Obtenidos por Biotecnolog aElectroforesis Capilar h1053i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog a Isoelectroenfoque h1054i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog a Mapeo de Pe ptidos h1055i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog aElectroforesis en Gel de Poliacrilamida (PAGE) h1056i y Art culos Obtenidos por Biotecnolog aValoracio n de Prote nas Totales h1057i.
N INTRODUCCIO
El ana lisis de aminoa cidos se reere a la metodolog a usada para determinar la composicio n o el contenido de aminoa cidos de prote nas, pe ptidos y otras preparaciones farmace uticas. Las prote nas y los pe ptidos son macromole culas formadas por aminoa cidos unidos covalentemente organizados como pol meros
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lineales. La secuencia de los aminoa cidos en una prote na o un pe ptido determina las propiedades de la mole cula. Las prote nas se consideran mole culas grandes que existen comu nmente como estructuras plegadas con una conformacio n espec ca, mientras que los pe ptidos son ma s pequen os y pueden estar formados por pocos aminoa cidos. El ana lisis de aminoa cidos se puede usar para cuanticar prote nas y pe ptidos, para determinar la identidad de prote nas o pe ptidos basa ndose en su composicio n de aminoa cidos, para respaldar el ana lisis estructural de prote nas y pe ptidos, para evaluar estrategias de fragmentacio n para el mapeo de pe ptidos y para detectar aminoa cidos at picos presentes en una prote na o un pe ptido. Antes del ana lisis de aminoa cidos, es necesario hidrolizar una prote na o pe ptido descomponie ndolo en sus aminoa cidos constituyentes. Despue s de la hidro lisis de la prote na o el pe ptido, el procedimiento de ana lisis de aminoa cidos puede ser igual al utilizado para aminoa cidos libres en otras preparaciones farmace uticas. Los aminoa cidos constituyentes de la muestra de prueba normalmente se derivatizan para su ana lisis.
NDAR DE REFERENCIA MATERIAL ESTA

Los esta ndares de aminoa cidos aptos para este tipo de ana lisis esta n disponibles comercialmente* y consisten generalmente en una mezcla acuosa de aminoa cidos. Cuando se determina la composicio n de aminoa cidos, los esta ndares de prote nas o pe ptidos se analizan junto con el material de prueba como un control para demostrar la integridad de todo el procedimiento. Para este propo sito, se ha usado seroalbu mina bovina altamente puricada como esta ndar de prote na.
N DE LOS INSTRUMENTOS CALIBRACIO

La calibracio n del instrumental para ana lisis de aminoa cidos por lo general involucra el ana lisis de esta ndares de aminoa cidos, que son una mezcla de aminoa cidos de varias concentraciones, para determinar el factor de respuesta y el intervalo de ana lisis de cada aminoa cido. Se conoce la concentracio n de cada aminoa cido en el esta ndar. En el procedimiento de calibracio n, el analista diluye el esta ndar de aminoa cidos para obtener distintos niveles de concentracio n de analito dentro del intervalo lineal esperado de la te cnica de ana lisis de aminoa cidos. Luego, se analizan repetidamente las diversas concentraciones de analito. Las a reas de los picos obtenidos para cada aminoa cido se gracan en funcio n de la concentracio n conocida para cada uno de los aminoa cidos en la dilucio n esta ndar. Estos resultados permiten al analista determinar el intervalo de concentraciones de aminoa cidos donde el a rea del pico de cada aminoa cido es una funcio n aproximadamente lineal de su concentracio n. Es importante que el analista prepare las muestras para el ana lisis de aminoa cidos de manera que este n dentro de los l mites anal ticos (por ejemplo, intervalo de trabajo lineal) de la te cnica empleada a n de obtener resultados exactos y repetibles. Se analizan de cuatro a seis concentraciones del esta ndar de aminoa cidos para determinar un factor de respuesta para cada aminoa cido. El factor de respuesta se calcula como el a rea del pico o la altura del pico promedio por nmol de aminoa cido presente en el esta ndar. Para calcular la concentracio n de cada aminoa cido presente en la muestra de prueba se prepara y se usa un registro de calibracio n con el factor de respuesta de cada aminoa cido. En este ca lculo se divide el a rea del pico de un aminoa cido dado por su correspondiente factor de respuesta, y se obtienen as los nmol del aminoa cido. Para los ana lisis de rutina, basta una calibracio n de un solo punto; sin embargo, el archivo de calibracio n se actualiza frecuentemente y se prueba por ana lisis de controles anal ticos para asegurar su integridad.
APARATOS
Los me todos usados para el ana lisis de aminoa cidos por lo general se basan en una separacio n cromatogra ca de los aminoa cidos presentes en la muestra de prueba. Las te cnicas actuales aprovechan la instrumentacio n cromatogra ca automatizada disen ada para las metodolog as anal ticas. Un instrumento de ana lisis de aminoa cidos t pico es un cromato grafo de l quidos de baja presio n o de alta presio n, capaz de generar gradientes de fase mo vil que separan los aminoa cidos en una columna cromatogra ca. El instrumento debe tener la capacidad de derivatizar los aminoa cidos despue s de pasar por la columna, a menos que la muestra se analice con derivatizacio n anterior a la columna. El detector generalmente es de luz UV-visible o de uorescencia, segu n el me todo de derivatizacio n usado. Se usa un dispositivo de registro (por ejemplo, un integrador) para transformar la sen al analo gica del detector y para la cuanticacio n. Es preferible que los instrumentos utilizados para el ana lisis de aminoa cidos se destinen espec camente a esos nes.
PRECAUCIONES GENERALES
La contaminacio n de fondo es siempre una preocupacio n en el ana lisis de aminoa cidos. Se requieren reactivos de alta pureza (por ejemplo, el a cido clorh drico de baja pureza puede contribuir a la contaminacio n con glicina). Los reactivos anal ticos se cambian rutinariamente cada pocas semanas y se usan solamente disolventes para cromatograf a de l quidos de alta presio n (grado HPLC). La posible contaminacio n microbiana y los materiales extran os presentes en los disolventes se reducen por ltracio n antes de usarlos, cubriendo los recipientes y colocando el instrumental para ana lisis de aminoa cidos alejado de la luz solar directa. Las pra cticas de laboratorio pueden determinar la calidad del ana lisis de aminoa cidos. Colocar los instrumentos en una zona de poco tra nsito del laboratorio. Mantener limpio el laboratorio. Hay que limpiar y calibrar las pipetas segu n un plan de mantenimiento. Mantener las puntas de las pipetas en una caja cubierta; los analistas no deben manipular las puntas de las pipetas con las manos. Los analistas pueden usar guantes de la tex sin polvo o similares. Limitar la cantidad de veces que se abre y se cierra un vial de muestra ya que el polvo puede hacer que aparezcan niveles elevados de glicina, serina y alanina. Se necesitan instrumentos bien mantenidos para que los resultados de los ana lisis de aminoa cidos sean aceptables. Si el instrumento se usa de modo rutinario, se debe revisar diariamente para detectar pe rdidas, vericar la estabilidad del detector y la la mpara y la capacidad de la columna para mantener la resolucio n de los aminoa cidos individuales. Limpiar o reemplazar, de acuerdo a un plan de rutina, todos los ltros de los instrumentos y dema s art culos de mantenimiento.
REPETIBILIDAD
Los resultados uniformes y de alta calidad de los ana lisis de aminoa cidos de un laboratorio anal tico exigen prestar atencio n a la repetibilidad de la valoracio n. Durante el ana lisis de la separacio n cromatogra ca de los aminoa cidos o sus derivados, se pueden observar numerosos picos en el cromatograma que corresponden a los aminoa cidos. El gran nu mero de picos exige un sistema de ana lisis de aminoa cidos que los pueda identicar repetidamente basa ndose en el tiempo de retencio n e integrar las a reas de los picos para la cuanticacio n. Una evaluacio n de repetibilidad t pica involucra la preparacio n de una solucio n de aminoa cidos esta ndar y el ana lisis de varias determinaciones repetidas (es decir, seis ana lisis o ma s) de la misma solucio n esta ndar. Se determina la desviacio n esta ndar relativa (RSD, por sus siglas en ingle s) para el tiempo de retencio n y el a rea del pico integrada de cada aminoa cido. La evaluacio n de la repetibilidad se ampl a incluyendo mu ltiples valoraciones realizadas durante varios d as por distintos analistas. Las mu ltiples valoraciones incluyen la preparacio n de diluciones esta ndar a partir de materiales iniciales para determinar la variacio n debida a la manipulacio n de la muestra. A menudo, la composicio n de aminoa cidos de una prote na esta ndar (por ejemplo, seroalbu mina bovina) se analiza como parte de la evaluacio n de repetibilidad. La evaluacio n de la variacio n de determinaciones repetidas (es decir, la RSD) permite al laboratorio establecer l mites anal ticos para
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Los esta ndares adecuados se pueden obtener de NIST (Gaithersburg, MD), Beckman Instruments (Fullerton, CA), Sigma Chemical (St. Louis, MO), Pierce (Rockford, IL) o Agilent (Palo Alto, CA).
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asegurar que sus ana lisis se encuentran bajo control. Es conveniente establecer los l mites de variacio n m nimos practicables para asegurar los mejores resultados. Para disminuir la variabilidad del ana lisis de aminoa cidos, conviene enfocarse en la preparacio n de la muestra, la elevada interferencia espectral de fondo debido a la calidad de los reactivos y/o a las pra cticas del laboratorio, el funcionamiento y mantenimiento de los instrumentos, el ana lisis y la interpretacio n de los datos y el desempen o y los ha bitos del analista. Todos los para metros se investigan a fondo como parte del trabajo de validacio n.
N DE LA MUESTRA PREPARACIO
La obtencio n de resultados exactos del ana lisis de aminoa cidos exige muestras puricadas de prote nas y pe ptidos. Los componentes de las soluciones amortiguadoras (por ejemplo, sales, urea, detergentes) pueden interferir con el ana lisis de aminoa cidos y se eliminan de la muestra antes del ana lisis. Los me todos que utilizan derivatizacio n de aminoa cidos postcolumna generalmente no se ven tan afectados por los componentes de la solucio n amortiguadora como se observa en los me todos de derivatizacio n precolumna. Es conveniente limitar el nu mero de las manipulaciones de las muestras con el n de reducir la posible contaminacio n de fondo, para mejorar la recuperacio n de analitos y para reducir el trabajo. Las te cnicas comunes empleadas para eliminar los componentes de las soluciones amortiguadoras del pH de las muestras de prote nas incluyen: (1) inyectar la muestra de prote na en un sistema HPLC en fase reversa, extrayendo la prote na con un disolvente vola til que contenga suciente componente orga nico y secando la muestra en una centr fuga de vac o; (2) dia lisis contra una solucio n amortiguadora del pH vola til o agua; (3) ultraltracio n centr fuga para el reemplazo de la solucio n amortiguadora del pH por una solucio n amortiguadora del pH vola til o agua; (4) precipitar la prote na de la solucio n amortiguadora del pH usando un disolvente orga nico (por ejemplo: acetona); y (5) ltracio n en gel.
NDARES INTERNOS ESTA

Se recomienda usar un esta ndar interno para controlar las pe rdidas y variaciones f sicas y qu micas durante el ana lisis de aminoa cidos. Antes de la hidro lisis, se puede agregar a la solucio n de prote na una cantidad de esta ndar interno conocida con exactitud. La recuperacio n del esta ndar interno indica la recuperacio n general de los aminoa cidos de la solucio n de prote na. Sin embargo, los aminoa cidos libres no se comportan igual que los aminoa cidos unidos a prote nas durante la hidro lisis ya que sus velocidades de liberacio n o destruccio n son variables. Por lo tanto, el uso de un esta ndar interno para corregir las pe rdidas durante la hidro lisis puede proporcionar resultados no conables. Hay que tener en cuenta este punto cuando se interpretan los resultados. Tambie n se pueden agregar esta ndares internos a la mezcla de aminoa cidos despue s de la hidro lisis para corregir por las diferencias en la aplicacio n de las muestras y los cambios en la estabilidad del reactivo y las velocidades de ujo. Idealmente, un esta ndar interno es un aminoa cido primario que no se encuentra naturalmente y que esta disponible comercialmente a bajo precio. Tambie n debe ser estable durante la hidro lisis, su factor de respuesta debe ser funcio n lineal de su concentracio n y debe eluir con un tiempo de retencio n u nico, sin superponerse con otros aminoa cidos. Los esta ndares de aminoa cidos comu nmente empleados incluyen la norleucina, la nitrotirosina y el a cido a-aminobut rico.
enjuagan con agua de alta pureza, seguido por un enjuague con metanol de grado HPLC, se secan de un d a para el otro en una estufa y se almacenan cubiertos hasta su uso. Alternativamente, el material de vidrio limpio se puede someter a piro lisis a 5008 durante 4 horas para eliminar la contaminacio n de los tubos para hidro lisis. Tambie n se puede usar material de laboratorio desechable adecuado. La hidro lisis a cida es el me todo ma s comu n para hidrolizar una muestra de prote na antes del ana lisis de aminoa cidos. La te cnica de hidro lisis a cida puede aumentar la variabilidad del ana lisis debido a la destruccio n completa o parcial de varios aminoa cidos. El tripto fano se destruye; la serina y la treonina se destruyen parcialmente; la metionina puede oxidarse; y la ciste na t picamente se recupera como cistina (pero la recuperacio n de la cistina suele ser mala debido a la destruccio n o reduccio n parcial a ciste na). La aplicacio n de vac o adecuado (menos de 200 mm de mercurio o 26,7 Pa) o la introduccio n de un gas inerte (argo n) en la ca mara gaseosa superior del recipiente de reaccio n puede reducir la destruccio n oxidativa. En las uniones pept dicas que involucran isoleucina y valina, las uniones amida de Ile-Ile, Val-Val, Ile-Val y Val-Ile se escinden parcialmente; y la asparagina y la glutamina se desamidan, dando como resultado a cido aspa rtico y a cido gluta mico, respectivamente. La pe rdida de tripto fano, asparagina y glutamina durante una hidro lisis a cida limita la cuanticacio n a 17 aminoa cidos. Algunas de las te cnicas de hidro lisis descritas se usan para tratar estos problemas. Algunas de las te cnicas de hidro lisis descritas (es decir, los Me todos 411) pueden modicar otros aminoa cidos. Por lo tanto, hay que considerar las ventajas de usar una te cnica de hidro lisis en comparacio n con sus problemas; estas ventajas se analizan adecuadamente antes de emplear un me todo que no sea la hidro lisis a cida. A menudo se emplea un estudio en funcio n del tiempo (es decir, un ana lisis de aminoa cidos con tiempos de hidro lisis a cida de 24, 48 y 72 horas) para analizar la concentracio n inicial de aminoa cidos que se destruyen parcialmente o que se escinden lentamente. Al gracar la concentracio n observada de aminoa cidos la biles (es decir, serina y treonina) en funcio n del tiempo de hidro lisis, se puede extrapolar la l nea hasta su origen para determinar la concentracio n inicial de estos aminoa cidos. Los estudios de hidro lisis en funcio n del tiempo tambie n se usan con aminoa cidos que se escinden lentamente (por ejemplo, isoleucina y valina). Durante el transcurso del tiempo de hidro lisis, el analista observa una meseta en estos residuos. El nivel de esta meseta se considera la concentracio n de residuo. Si el tiempo de hidro lisis es demasiado largo, la concentracio n del residuo en la muestra comienza a disminuir, indicando una destruccio n por las condiciones de hidro lisis. Una alternativa aceptable al estudio en funcio n del tiempo es someter un esta ndar de calibracio n de un aminoa cido a las mismas condiciones de hidro lisis que la muestra de prueba. El aminoa cido libre puede no ser totalmente representativo de la velocidad de destruccio n de los aminoa cidos la biles dentro de un pe ptido o una prote na durante la hidro lisis. Esto es especialmente va lido para las uniones pept dicas que se escinden lentamente (por ejemplo, uniones Ile-Val). Sin embargo, esta te cnica permite al analista dar cuenta de cierta destruccio n de residuos. Se ha empleado la hidro lisis a cida por microondas y e sta es ra pida, pero exige equipo y precauciones especiales. Las condiciones o ptimas para la hidro lisis por microondas se deben investigar para cada muestra de prote na o pe ptido. La te cnica de hidro lisis por microondas t picamente toma so lo unos minutos, pero una desviacio n de 1 minuto puede proporcionar resultados inadecuados (por ejemplo, hidro lisis incompleta o destruccio n de aminoa cidos la biles). Se ha empleado la proteo lisis completa usando una mezcla de proteasas pero puede ser complicada, exige controles adecuados y, por lo general, se puede aplicar ma s a pe ptidos que a prote nas. [NOTADurante los ana lisis iniciales de
LISIS DE PROTEI NAS HIDRO

La hidro lisis de muestras de prote nas y pe ptidos es necesaria para el ana lisis de aminoa cidos de estas mole culas. El material de vidrio usado para la hidro lisis debe estar muy limpio para evitar resultados erro neos. Los polvos para guantes y las huellas dactilares en los tubos de hidro lisis pueden causar contaminacio n. Para limpiar los tubos de vidrio para hidro lisis, hay que hervir los tubos durante 1 hora en a cido clorh drico 1 N o sumergirlos en a cido n trico concentrado o en una mezcla de a cido clorh drico concentrado y a cido n trico concentrado (1 : 1). Los tubos de hidro lisis limpios se
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una prote na desconocida, se realizan experimentos con diferentes tiempos de hidro lisis y condiciones de temperatura para determinar las condiciones o ptimas.]
Me todo 4
La oxidacio n de la ciste na-cistina y de la metionina se realiza con a cido perfo rmico antes de la hidro lisis de la prote na. Solucio n de Oxidacio nPreparar a cido perfo rmico en el momento de ana lisis mezclando a cido fo rmico y pero xido de hidro geno al 30% (9 : 1) e incubar a temperatura ambiente durante 1 hora. ProcedimientoDisolver la muestra de prote na o pe ptido en 20 mL de a cido fo rmico y calentar a 508 durante 5 minutos; agregar luego 100 mL de la Solucio n de Oxidacio n. En esta reaccio n, la ciste na se convierte en a cido cisteico y la metionina se convierte en metionina sulfona. Dejar que la oxidacio n continu e durante de 10 a 30 minutos. Eliminar el reactivo en exceso de la muestra en una centr fuga de vac o. Esta te cnica puede modicar los residuos de tirosina en presencia de haluros. Luego se puede realizar una hidro lisis a cida de la prote na oxidada usando el Me todo 1 o el Me todo 2.
Me todo 1
La hidro lisis a cida usando a cido clorh drico que contenga fenol es el procedimiento ma s comu nmente usado para la hidro lisis de prote nas o pe ptidos antes del ana lisis de aminoa cidos. La adicio n de fenol a la reaccio n evita la halogenacio n de la tirosina. Solucio n de Hidro lisis: a cido clorh drico 6 N que contenga entre 0,1% y 1,0% de fenol. Procedimiento Hidro lisis en Fase L quidaColocar la muestra de prote na o pe ptido en un tubo para hidro lisis y secar. [NOTALa muestra se seca para que el agua de la muestra no diluya el a cido empleado para la hidro lisis.] Agregar 200 mL de la Solucio n de Hidro lisis por cada 500 mg de prote na liolizada. Congelar el tubo de la muestra en un ban o de hielo seco y acetona y sellar a la llama en vac o. Las muestras t picamente se hidrolizan a 1108 durante 24 horas al vac o o en una atmo sfera inerte para evitar la oxidacio n. Se investigan tiempos mayores de hidro lisis (por ejemplo, 48 y 72 horas) si existe la preocupacio n de que la prote na no este totalmente hidrolizada. ste es uno de los procedimientos Hidro lisis en Fase de VaporE de hidro lisis a cida ma s comunes y se preere para el microana lisis cuando so lo se dispone de pequen as cantidades de muestra. La contaminacio n de la muestra por el reactivo a cido tambie n se minimiza usando la hidro lisis en fase de vapor. Colocar los viales que contengan las muestras secas en un recipiente con un cantidad adecuada de la Solucio n de Hidro lisis. La Solucio n de Hidro lisis no entra en contacto con la muestra de prueba. Aplicar una atmo sfera inerte o vac o (menos de 200 mm de mercurio o 26,7 Pa) a la ca mara gaseosa del recipiente y calentar aproximadamente a 1108 durante un tiempo de hidro lisis de 24 horas. El vapor a cido hidroliza la muestra seca. Minimizar toda condensacio n del a cido en los viales de la muestra. Despue s de la hidro lisis, secar la muestra al vac o para eliminar el a cido residual.
Me todo 5
La oxidacio n de ciste na-cistina se logra durante la hidro lisis en fase l quida con azida de sodio. Solucio n de Hidro lisis: agregar azida de sodio a a cido clorh drico 6 N que contenga 0,2 % de fenol, para obtener una concentracio n nal de 0,2% (p/v). El fenol agregado evita la halogenacio n de la tirosina. Hidro lisis en Fase L quidaRealizar la hidro lisis de la prote na o pe ptido aproximadamente a 1108 durante 24 horas. Durante la hidro lisis, la ciste na-cistina presente en la muestra se convierte en a cido cisteico mediante la azida de sodio presente en la Solucio n de Hidro lisis. Esta te cnica permite una mejor recuperacio n de tirosina que el Me todo 4, pero no es cuantitativa para la metionina. La metionina se convierte en una mezcla de la metionina original y sus dos productos de oxidacio n, metionina sulfo xido y metionina sulfona.
Me todo 2
La oxidacio n del tripto fano durante la hidro lisis disminuye si se usa a cido mercaptoetanosulfo nico (MESA) como a cido reductor. Solucio n de Hidro lisis: solucio n de MESA 2,5 M. Hidro lisis en Fase de VaporSecar aproximadamente de 1 a 100 mg de la prote na o pe ptido en ana lisis en un tubo de hidro lisis. Colocar el tubo de hidro lisis en un tubo ma s grande con aproximadamente 200 mL de la Solucio n de Hidro lisis. Sellar al vac o el tubo ma s grande (aproximadamente a 50 mm de mercurio o 6,7 Pa) para vaporizar la Solucio n de Hidro lisis. Calentar el tubo de hidro lisis entre 1708 y 1858 durante aproximadamente 12,5 minutos. Despue s de la hidro lisis, secar el tubo de hidro lisis al vac o durante 15 minutos para eliminar el a cido residual.
Me todo 6
La oxidacio n de ciste na-cistina se logra con dimetil sulfo xido (DMSO). Solucio n de Hidro lisis: agregar DMSO a a cido clorh drico 6 N que contenga de 0,1% a 1,0% de fenol, para obtener una concentracio n nal de 2% (v/v). Hidro lisis en Fase de VaporRealizar la hidro lisis de la prote na o pe ptido aproximadamente a 1108 durante 24 horas. Durante la hidro lisis, la ciste na-cistina presente en la muestra se convierte en a cido cisteico por el DMSO presente en la Solucio n de Hidro lisis. Para reducir la variabilidad y compensar la destruccio n parcial, se recomienda evaluar la recuperacio n de a cido cisteico de las hidro lisis oxidativas de prote nas esta ndar que contengan de 1 a 8 moles de ciste na. Los factores de respuesta del hidrolizado de prote nas o pe ptidos por lo general son aproximadamente 30% menores que los de los esta ndares de a cido cisteico no hidrolizado. Como la histidina, la metionina, la tirosina y el tripto fano tambie n se modican, con esta te cnica no se obtiene un ana lisis completo de la composicio n.
Me todo 3
La oxidacio n del tripto fano durante la hidro lisis se evita usando a cido tioglico lico (TGA) como a cido reductor. Solucio n de Hidro lisis: una solucio n que contenga a cido clorh drico 7 M, 10% de a cido triuoroace tico, 20% de a cido tioglico lico y 1% de fenol. Hidro lisis en Fase de VaporSecar aproximadamente de 10 mg a 50 mg de la prote na o pe ptido en ana lisis en un tubo de muestra. Colocar el tubo de muestra en un tubo ma s grande con aproximadamente 200 mL de la Solucio n de Hidro lisis. Sellar el tubo ma s grande al vac o (aproximadamente a 50 mm de mercurio o 6,7 Pa) para vaporizar el TGA. Calentar el tubo de muestra a 1668 durante aproximadamente 15 a 30 minutos. Despue s de la hidro lisis, secar el tubo de muestra al vac o durante 5 minutos para eliminar el a cido residual. La recuperacio n de tripto fano por medio de este me todo puede depender de la cantidad de muestra presente.
Me todo 7
La reduccio n y la alquilacio n de ciste na-cistina se logra a trave s de una reaccio n de piridiletilacio n en fase de vapor. Solucio n ReductoraTransferir 83,3 mL de piridina, 16,7 mL de 4-vinilpiridina, 16,7 mL de tributilfosna y 83,3 mL de agua a un recipiente adecuado y mezclar. ProcedimientoAgregar la prote na o pe ptido (entre 1 y 100 mg) a un tubo de hidro lisis y colocar en un tubo ma s grande. Transferir la Solucio n Reductora al tubo ma s grande, sellar al vac o (aproximadamente a 50 mm de mercurio o 6,7 Pa), e incubar aproximadamente a 1008 durante 5 minutos. Luego, retirar el tubo de hidro lisis interior y secarlo en un desecador de vac o durante 15 minutos para eliminar
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los reactivos residuales. Despue s, se puede realizar una hidro lisis a cida de la prote na o pe ptido piridiletilados usando los procedimientos descritos previamente. La reaccio n de piridiletilacio n se realiza simulta neamente con una muestra de un esta ndar de prote na que contenga de 1 a 8 moles de ciste na, para mejorar la exactitud de la recuperacio n de piridiletil-ciste na. Mayores tiempos de incubacio n en la reaccio n de piridiletilacio n pueden modicar el grupo aamino terminal y el grupo E-amino de la lisina en la prote na.
ProcedimientoTransferir aproximadamente 20 mg de la muestra de prueba a un tubo de hidro lisis y agregar 5 mL de la Solucio n Reductora. Agregar 10 mL de alcohol isoprop lico y luego eliminar todo el l quido de la muestra mediante centrifugacio n al vac o. Luego, hidrolizar la muestra usando el Me todo 1. La ventaja de este me todo es que no se derivatizan otros residuos aminoac dicos por reacciones secundarias y no es necesario desalinizar la muestra antes de la hidro lisis.
Me todo 8
La reduccio n de ciste na-cistina y la alquilacio n se logran a trave s de una reaccio n de piridiletilacio n en fase l quida. Soluciones MadrePreparar y ltrar tres soluciones: clorhidrato de Tris 1 M (pH 8,5) que contenga edetato diso dico 4 mM (Solucio n Madre 1), clorhidrato de guanidina 8 M (Solucio n Madre 2) y 2mercaptoetanol al 10% en agua (Solucio n Madre 3). Solucio n ReductoraPreparar una mezcla de la Solucio n Madre 2 y la Solucio n Madre 1 (3 : 1) para obtener una solucio n amortiguada de clorhidrato de guanidina 6 M en clorhidrato de Tris 0,25 M. ProcedimientoDisolver aproximadamente 10 mg de la muestra de prueba en 50 mL de la Solucio n Reductora y agregar aproximadamente 2,5 mL de la Solucio n Madre 3. Almacenar bajo nitro geno o argo n durante 2 horas a temperatura ambiente en un lugar oscuro. Para lograr la reaccio n de piridiletilacio n, agregar aproximadamente 2 mL de 4-vinilpiridina a la solucio n de prote na, e incubar durante 2 horas adicionales a temperatura ambiente en un lugar oscuro. La prote na o pe ptido se desaliniza por recoleccio n de la fraccio n de prote na o pe ptido luego de una separacio n por HPLC en fase reversa. La muestra recolectada se puede secar en una centr fuga de vac o antes de la hidro lisis a cida.
Me todo 11
La asparagina y la glutamina se convierten en a cido aspa rtico y a cido gluta mico, respectivamente, durante la hidro lisis a cida. Los residuos de asparagina y a cido aspa rtico se suman y se representan con Asx, y los residuos de glutamina y a cido gluta mico se suman y se representan con Glx. Las prote nas o pe ptidos pueden hacerse reaccionar con bis(1,1-triuoroacetoxi)yodobenceno (BTI) para convertir los residuos de asparagina y glutamina en residuos de a cido diaminopropio nico y a cido diaminobut rico, respectivamente, en la hidro lisis a cida. Estas conversiones permiten al analista determinar el contenido de asparagina y glutamina de una prote na o pe ptido en presencia de residuos de a cido aspa rtico y a cido gluta mico. Soluciones ReductorasPreparar y ltrar tres soluciones: una solucio n de a cido triuoroace tico 10 mM (Solucio n 1), una solucio n de clorhidrato de guanidina 5 M y a cido triuoroace tico 10 mM (Solucio n 2) y una solucio n recie n preparada de dimetilformamida que contenga 36 mg de BTI por mL (Solucio n 3). ProcedimientoA un tubo de hidro lisis limpio, transferir aproximadamente 200 mg de la muestra de prueba y agregar 2 mL de la Solucio n 1 o la Solucio n 2 y 2 mL de la Solucio n 3. Sellar el tubo de hidro lisis al vac o. Calentar la muestra a 608 durante cuatro horas en un lugar oscuro. Luego, dializar la muestra con agua para eliminar el exceso de reactivos. Extraer la muestra dializada tres veces con volu menes iguales de acetato de n-butilo y luego liolizar. Despue s, se puede realizar la hidro lisis a cida de la prote na usando los procedimientos descritos previamente. Los residuos de a cido a,b-diaminopropio nico y a cido a-, g-diaminobut rico t picamente no se resuelven de los residuos de lisina en la cromatograf a de intercambio io nico basada en el ana lisis de aminoa cidos. Por lo tanto, cuando se usa el intercambio io nico para separar los aminoa cidos, el contenido de asparagina y glutamina es la diferencia cuantitativa entre el a cido aspa rtico y a cido gluta mico determinados por hidro lisis a cida sin derivatizar y el contenido que se obtiene por derivatizacio n con BTI. [NOTAEl contenido determinado para treonina, metionina, ciste na, tirosina e histidina puede cambiar por la derivatizacio n con BTI; se debe realizar una hidro lisis sin BTI si el analista esta interesado en el contenido de estos otros aminoa cidos en prote nas o pe ptidos.]
Me todo 9
La reduccio n de ciste na-cistina y la alquilacio n se logran a trave s de una reaccio n de carboximetilacio n en fase l quida. Soluciones MadrePreparar segu n se indica en el Me todo 8. Solucio n de Carboximetilacio nPreparar una solucio n que contenga 100 mg de yodoacetamida por mL de alcohol. Solucio n AmortiguadoraUsar la Solucio n Reductora, preparada segu n se indica en el Me todo 8. ProcedimientoDisolver la muestra de prueba en 50 mL de la Solucio n Amortiguadora y agregar aproximadamente 2,5 mL de la Solucio n Madre 3. Almacenar bajo nitro geno o argo n durante 2 horas a temperatura ambiente en un lugar oscuro. Agregar la Solucio n de Carboximetilacio n en una relacio n de 1,5 veces el contenido teo rico total de tioles, e incubar durante 30 minutos adicionales a temperatura ambiente en un lugar oscuro. [NOTASi el contenido de tioles de la prote na se desconoce, agregar 5 mL de yodoacetamida 100 mM por cada 20 nmol de prote na presente.] La reaccio n se detiene agregando un exceso de 2-mercaptoetanol. La prote na o pe ptido se desaliniza por recoleccio n de la fraccio n de prote na o pe ptido luego de una separacio n por HPLC en fase reversa. La muestra recolectada se puede secar en una centr fuga de vac o antes de la hidro lisis a cida. La S-carboxiamidometilciste na formada se convierte en S-carboximetilciste na durante la hidro lisis a cida.
AS DE ANA LISIS DE METODOLOGI CIDOS AMINOA

Existen muchas te cnicas de ana lisis de aminoa cidos y la eleccio n de una de estas te cnicas a menudo depende de la sensibilidad que requiera la valoracio n. En general, aproximadamente la mitad de las te cnicas de ana lisis de aminoa cidos empleadas se basan en la separacio n de los aminoa cidos libres mediante cromatograf a de intercambio io nico seguida por derivatizacio n postcolumna (por ejemplo, con ninhidrina u o-ftalaldeh do). Las te cnicas de deteccio n postcolumna se pueden utilizar con muestras que contienen pequen as cantidades de los componentes de las soluciones amortiguadoras, tales como sales y urea, y por lo general necesitan entre 5 y 10 mg de muestra de prote na por ana lisis. Las dema s te cnicas de aminoa cidos generalmente involucran la derivatizacio n precolumna de los aminoa cidos libres (por ejemplo, isotiocianato de fenilo; carbonato de 6-aminoquinolil-N-hidroxisuccinimidilo; cloruro de (dimetilamino)azobencensulfonilo; 9-uorenil-metilcloroformiato; y 7-uoro-4-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol) seguida de HPLC en fase reversa. Las te cnicas de derivatizacio n precolumna son muy sensibles y por lo general necesitan entre 0,5 y 1,0 mg de la muestra de prote na por ana lisis, aunque pueden ser inuenciadas por sales amortiguadoras presentes en las muestras. Las te cnicas de deriva-
Me todo 10
La ciste na-cistina se hace reaccionar con el a cido ditiodiglico lico o el a cido ditiodipropio nico para producir un disulfuro mixto. [NOTALa eleccio n del a cido ditiodiglico lico o del a cido ditiodipropio nico depende de la resolucio n requerida por el me todo de ana lisis de aminoa cidos.] Solucio n Reductora: una solucio n que contenga 10 mg de a cido ditiodiglico lico (o a cido ditiodipropio nico) por mL de hidro xido de sodio 0,2 M.
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tizacio n precolumna tambie n pueden producir mu ltiples derivados de un aminoa cido dado, lo cual complica la interpretacio n de los resultados. Las te cnicas de derivatizacio n postcolumna generalmente esta n menos inuenciadas por variaciones en el desempen o de la valoracio n que las te cnicas de derivatizacio n precolumna. Se pueden usar los siguientes Me todos para el ana lisis cuantitativo de aminoa cidos. Los instrumentos y reactivos para estos procedimientos esta n disponibles comercialmente. Adema s, existen muchas modicaciones de estas metodolog as con diferentes preparaciones de reactivos, procedimientos de reaccio n y sistemas cromatogra cos. Los para metros espec cos pueden variar segu n los equipos y procedimientos usados. Muchos laboratorios usan ma s de una te cnica de ana lisis de aminoa cidos para aprovechar la ventajas de cada una. En cada uno de estos Me todos, la sen al analo gica se visualiza mediante un sistema de captacio n de datos y las a reas de los picos se integran con nes de cuanticacio n.
Me todo 1Deteccio n Postcolumna con Ninhidrina

La cromatograf a de intercambio io nico con deteccio n postcolumna con ninhidrina es uno de los me todos ma s comu nmente usados para el ana lisis cuantitativo de aminoa cidos. Por lo general, se emplea un sistema de intercambio catio nico a base de Li para el ana lisis de muestras siolo gicas ma s complejas y un sistema de intercambio catio nico a base de Na, que es ma s ra pido, para mezclas de aminoa cidos ma s simples obtenidas de hidrolizados proteicos (que t picamente contienen 17 aminoa cidos). La separacio n de los aminoa cidos en una columna de intercambio io nico se logra a trave s de una combinacio n de cambios en el pH y en la fuerza catio nica. A menudo se emplea un gradiente de temperatura para mejorar la separacio n. Cuando el aminoa cido reacciona con la ninhidrina, el reactante adquiere un color pu rpura o amarillo caracter stico. Los aminoa cidos, a excepcio n de los iminoa cidos, dan un color pu rpura y muestran ma xima absorcio n a 570 nm. Los iminoa cidos, como por ejemplo la prolina, dan un color amarillo y muestran una absorcio n ma xima a 440 nm. La reaccio n postcolumna entre la ninhidrina y cada aminoa cido eluido de la columna se controla a 440 nm y 570 nm y el cromatograma obtenido se usa para determinar la composicio n de aminoa cidos. Se considera que el l mite de deteccio n es 10 pmol para la mayor a de los derivados de aminoa cidos, pero es 50 pmol para la prolina. Se obtiene una respuesta lineal entre 20 y 500 pmol con coecientes de correlacio n superiores a 0,999. Para obtener buenos datos de composicio n, es mejor contar con muestras de ma s de 1 mg antes de la hidro lisis para este ana lisis de aminoa cidos de prote nas o pe ptidos. Ma s adelante se muestra un me todo para la deteccio n postcolumna con ninhidrina. Existen muchos otros me todos, con instrumental y reactivos disponibles comercialmente. Preparacio n de la Fase Mo vil Solucio n ATransferir aproximadamente 1,7 g de citrato de sodio anhidro y 1,5 mL de a cido clorh drico a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con agua y mezclar. Ajustar, si fuera necesario, con a cido clorh drico hasta un pH de 3,0. Solucio n BTransferir aproximadamente 1,7 g de citrato de sodio anhidro y 0,7 mL de a cido clorh drico a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con agua y mezclar. Ajustar con a cido clorh drico, si fuera necesario, hasta un pH de 4,3. Solucio n CPreparar una solucio n que contenga 5% de cloruro de sodio, 1,9% de citrato de sodio anhidro y 0,1% de fenol en agua y ajustar hasta un pH de 6. Solucio n Regeneradora de la ColumnaPreparar una solucio n que contenga 0,8% de hidro xido de sodio en agua y ajustar hasta un pH de 13. Fase Mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A, Solucio n B y Solucio n C como se indica en el Sistema Cromatogra co. Reactivo PostcolumnaTransferir aproximadamente 18 g de ninhidrina y 0,7 g de hidrindantina a 900 mL de una solucio n que contenga 76,7% de dimetil sulfo xido, 0,7% de acetato de litio dihidrato y 0,1% de a cido ace tico y mezclar durante un m nimo de
3 horas bajo un gas inerte, como por ejemplo nitro geno. [NOTAEste reactivo es estable durante 30 d as si se mantiene a una temperatura entre 28 y 88 bajo un gas inerte.] Solucio n AmortiguadoraPreparar una solucio n que contenga 2% de citrato de sodio anhidro, 1% de a cido clorh drico, 0,5% de tiodiglicol y 0,1% de a cido benzoico en agua y ajustar hasta un pH de 2. Sistema Cromatogra coEquipar un cromato grafo de l quidos con un detector con ltros de interferencia apropiados a 440; 570 o 690 nm y una columna de 4,0 mm 6 120 mm rellena con copol mero sulfonado de estireno-divinilbenceno de 7,5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 14 mL por hora. Programar el sistema del siguiente modo. Inicialmente, equilibrar la columna con Solucio n A; a los 25 minutos, cambiar la composicio n de la Fase Mo vil a 100% de Solucio n B; y a los 37 minutos, cambiar la composicio n al 100% de Solucio n C. A los 75 minutos de la corrida, eluye el u ltimo aminoa cido de la columna y se regenera la columna con la Solucio n Regeneradora de la Columna durante 1 minuto. Equilibrar luego la columna con Solucio n A durante 11 minutos antes de la siguiente inyeccio n. Programar la temperatura de la columna del siguiente modo. La temperatura inicial es 488; despue s de 11,5 minutos, aumentar la temperatura a 658 a una velocidad de 38 por minuto; aproximadamente a los 35 minutos, aumentar la temperatura a 778 a una velocidad de 38 por minuto; y nalmente aproximadamente a los 52 minutos, disminuir la temperatura a 488 a una velocidad de 38 por minuto. Procedimiento y Reaccio n PostcolumnaReconstituir el hidrolizado proteico o pept dico liolizado en la Solucio n Amortiguadora, inyectar una cantidad adecuada en el cromato grafo y proceder como se indica en Sistema Cromatogra co. Cuando los aminoa cidos eluyen de la columna, se mezclan con el Reactivo Postcolumna, que se suministra a una velocidad de ujo de 7 mL por hora, a trave s de una llave T. Despue s de mezclar, el euente de la columna y el Reactivo Postcolumna pasan a trave s de un reactor tubular a una temperatura de 1358, donde se forma un color pu rpura o amarillo caracter stico. Desde el reactor, el l quido pasa a trave s de un color metro con una cubeta de ujo de 12 mm. La luz que emerge de la cubeta se divide en tres haces que son analizados por el detector con ltros de interferencia a 440; 570 o 690 nm. La sen al de 690 nm se puede restar electro nicamente de las otras sen ales para obtener mejores relaciones sen al-ruido. Las sen ales de 440 nm (iminoa cidos) y de 570 nm (aminoa cidos) se pueden sumar para simplicar el manejo de datos.
Me todo 2Derivatizacio n Fluorome trica Postcolumna con OPA

Se usa la cromatograf a de intercambio io nico con deteccio n postcolumna uorome trica con o-ftalaldeh do (OPA). El procedimiento emplea una columna de intercambio io nico para la separacio n de aminoa cidos libres seguida de una oxidacio n postcolumna con hipoclorito de sodio y derivatizacio n usando OPA y N-acetil-Lciste na. El paso de oxidacio n con hipoclorito de sodio permite a las aminas secundarias, como por ejemplo la prolina, reaccionar con el reactivo OPA. El OPA reacciona con las aminas primarias en presencia de un tiol para formar productos de isoindol altamente uorescentes. Esta reaccio n se utiliza para la derivatizacio n postcolumna en el ana lisis de aminoa cidos por cromatograf a de intercambio io nico. La regla de separacio n es la misma que la del Me todo I. Los instrumentos y reactivos para esta forma de ana lisis de aminoa cidos esta n disponibles comercialmente. Existen muchas modicaciones de este me todo. Si bien el OPA no reacciona con aminas secundarias (iminoa cidos, como por ejemplo la prolina) para formar sustancias uorescentes, la oxidacio n con hipoclorito de sodio permite que las aminas secundarias reaccionen con OPA. El procedimiento emplea una columna de intercambio catio nico fuertemente a cida para la separacio n de aminoa cidos libres seguida de una oxidacio n postcolumna con hipoclorito de sodio y derivatizacio n postcolumna usando OPA y un compuesto tiol, como por ejemplo N-acetil-Lciste na y 2-mercaptoetanol. La derivatizacio n de aminoa cidos primarios no se altera perceptiblemente con el aporte continuo de hipoclorito de sodio.
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La separacio n de los aminoa cidos en una columna de intercambio io nico se logra a trave s de una combinacio n de cambios en el pH y en la fuerza catio nica. Despue s de la derivatizacio n postcolumna con OPA de los aminoa cidos eluidos, el reactante pasa a trave s de un detector uorome trico. La intensidad de la uorescencia de los aminoa cidos derivatizados con OPA se controla con una longitud de onda de excitacio n de 348 nm y una longitud de onda de emisio n de 450 nm. Se considera que el l mite de deteccio n es de unas pocas decenas de pmol para la mayor a de los derivados de aminoa cidos. La respuesta es lineal entre unos pocos pmol y unas pocas decenas de nmol. Para obtener buenos datos de composicio n en este ana lisis de aminoa cidos de prote nas o pe ptidos, es mejor contar con muestras de ma s de 500 ng antes de la hidro lisis. A continuacio n se muestra un me todo para la deteccio n postcolumna uorome trica con OPA. Preparacio n de la Fase Mo vil Solucio n APreparar una solucio n de hidro xido de sodio, a cido c trico y alcohol en agua de grado HPLC con una concentracio n de sodio 0,2 N y que contenga 7% de alcohol (p/v), ajustada hasta un pH de 3,2. Solucio n BPreparar una solucio n de hidro xido de sodio y a cido c trico en agua de grado HPLC con una concentracio n de sodio 0,6 N, ajustada a un pH de 10,0. Solucio n C: hidro xido de sodio 0,2 N. Fase Mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A, Solucio n B y Solucio n C como se indica en Sistema Cromatogra co. Preparacio n de Reactivo Postcolumna Solucio n Amortiguadora AlcalinaPreparar una solucio n que contenga carbonato de sodio 384 mM, a cido bo rico 216 mM y sulfato de potasio 108 mM y ajustar hasta un pH de 10,0. Reactivo de HipocloritoAgregar 0,4 mL de una solucio n de hipoclorito de sodio (10% de cloro) a 1 L de la Solucio n Amortiguadora Alcalina. [NOTALa solucio n de hipoclorito es estable durante 2 semanas.] Reactivo OPATransferir 2 g de N-acetil-L-ciste na y 1,6 g de OPA a un matraz volume trico de 15 mL, disolver con alcohol, diluir a volumen con alcohol y mezclar. Transferir esta solucio n y 4 mL de una solucio n acuosa al 10% de e ter polioxietile n (23) laur lico a un matraz volume trico de 1 L, diluir con 980 mL de Solucio n Amortiguadora Alcalina y mezclar. Sistema Cromatogra coEquipar el cromato grafo de l quidos con un detector uorome trico ajustado a una longitud de onda de excitacio n de 348 nm y una longitud de onda de emisio n de 450 nm y con una columna de 4,0 mm 6 150 mm rellena con material L17 de 7,5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 0,3 mL por minuto y la temperatura de la columna se ajusta a 508. Programar el sistema del siguiente modo. Equilibrar la columna con Solucio n A; durante los siguientes 20 minutos, cambiar linealmente la composicio n de la Fase Mo vil a 85% de Solucio n A y 15% de Solucio n B; luego cambiar abruptamente a 40% de Solucio n A y 60% de Solucio n B; durante los siguientes 18 minutos, cambiar linealmente la composicio n a 100% de Solucio n B y mantenerla durante 7 minutos; luego cambiar abruptamente a 100% de Solucio n C y mantenerla durante 6 minutos; luego cambiar abruptamente a la Solucio n A, mantener esta composicio n durante los siguientes 8 minutos. Procedimiento y Reaccio n PostcolumnaInyectar en el cromato grafo aproximadamente 1,0 nmol de cada aminoa cido en ana lisis y proceder como se indica en Sistema Cromatogra co. Cuando el euente deja la columna, se mezcla con el Reactivo de Hipoclorito. La mezcla pasa a trave s del primer reactor postcolumna que es un tubo de acero inoxidable de 0,5 mm 6 2 m. Inmediatamente a continuacio n del primer reactor postcolumna se coloca un segundo reactor postcolumna de disen o similar que se usa para la reaccio n postcolumna con OPA. La velocidad de ujo tanto para el Reactivo de Hipoclorito como para el Reactivo OPA es 0,2 mL por minuto, dando como resultado una velocidad de ujo total (es decir, Reactivo de Hipoclorito, Reactivo OPA y el euente de la columna) de 0,7 mL por minuto que sale de los reactores posteriores al paso por la columna. Las reacciones postcolumna se realizan a 558. Esto produce un tiempo de permanencia de aproximadamente 33 segundos en el reactor postcolumna con OPA. Despue s de la derivatizacio n postcolumna, el euente pasa a trave s del detector uorome trico.
Me todo 3Determinacio n Precolumna

Se usa la derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con fenilisotiocianato (PITC) seguida de una separacio n por HPLC en fase reversa con deteccio n UV. El PITC reacciona con los aminoa cidos para formar derivados de feniltiocarbamilo (PTC) que se pueden detectar con alta sensibilidad a 254 nm. Por lo tanto, se usa la derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con PITC seguida por separacio n por HPLC en fase reversa con deteccio n UV para analizar la composicio n de aminoa cidos. Despue s de eliminar el reactivo al vac o, los aminoa cidos derivatizados se pueden almacenar secos y congelados durante varias semanas sin degradacio n signicativa. Si la solucio n para inyeccio n se mantiene fr a, no hay pe rdida perceptible en la respuesta cromatogra ca despue s de tres d as. La separacio n de los aminoa cidos-PTC por HPLC en fase reversa con una columna ODS se logra a trave s de una combinacio n de cambios en las concentraciones de acetonitrilo y en la fuerza io nica de la solucio n amortiguadora. Los aminoa cidos-PTC eluidos de la columna se controlan a 254 nm. Se considera que el l mite de deteccio n es 1 pmol para la mayor a de los derivados aminoac dicos. Se obtiene una respuesta lineal entre 20 y 500 pmol con coecientes de correlacio n superiores a 0,999. Para obtener buenos datos de la composicio n, en este ana lisis de aminoa cidos de prote nas o pe ptidos es mejor contar con una muestra de ma s de 500 ng de prote na o pe ptido antes de la hidro lisis. Ma s adelante se describe un me todo de derivatizacio n precolumna con PITC. Preparacio n de la Fase Mo vil Solucio n A: acetato de amonio 0,05 M, ajustado con a cido fosfo rico a un pH de 6,8. Solucio n BPreparar acetato de amonio 0,1 M, ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 6,8 y luego preparar un mezcla de esta solucio n y acetonitrilo (1 : 1). Solucio n C: una mezcla de acetonitrilo y agua (70 : 30). Fase Mo vilUsar mezclas variables de la Solucio n A, Solucio n B y Solucio n C como se indica en Sistema Cromatogra co. Preparacio n del Reactivo de Derivatizacio n Solucio n Amortiguadora de Acoplamiento: una mezcla de acetonitrilo, piridina, trietilamina y agua (10 : 5 : 2 : 3). Disolvente de la Muestra: una mezcla de agua y acetonitrilo (7 : 2). Procedimiento de Derivatizacio n de la MuestraDisolver la muestra de prueba liolizada en 100 mL de Solucio n Amortiguadora de Acoplamiento y luego secar en una centr fuga de vac o para eliminar todo el clorhidrato si se realizo un paso de hidro lisis de prote na. Disolver la muestra en 100 mL de Solucio n Amortiguadora de Acoplamiento, agregar 5 mL de PITC e incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos. La muestra de prueba se seca nuevamente en una centr fuga de vac o y se disuelve en 250 mL de Disolvente de la Muestra. Sistema Cromatogra coEquipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 250 mm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto y la temperatura de la columna se mantiene a 528. Programar el sistema del siguiente modo. Equilibrar la columna con la Solucio n A; durante los siguientes 15 minutos, cambiar linealmente la composicio n de la Fase Mo vil a 85% de Solucio n A y 15% de Solucio n B; durante los siguientes 15 minutos, cambiar linealmente la composicio n a 50% de Solucio n A y 50% de Solucio n B; luego cambiar abruptamente a 100% de Solucio n C y mantenerla durante 10 minutos; luego cambiar abruptamente a 100% de Solucio n A y dejar que la columna se equilibre antes de la siguiente inyeccio n. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo aproximadamente 1,0 nmol de cada aminoa cido-PITC en ana lisis (10 mL de la muestra en el Disolvente de la Muestra) y proceder segu n se indica en Sistema Cromatogra co.
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Me todo 4Derivatizacio n Precolumna con AQC

Se usa la derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con 6aminoquinolil-N-hidroxisuccinimidil carbamato (AQC) y despue s se separan por HPLC en fase reversa con deteccio n uorome trica. El AQC reacciona con los aminoa cidos para formar derivados de urea estables, uorescentes y no sime tricos (aminoa cidos AQC) que se pueden someter fa cilmente al ana lisis por HPLC en fase reversa. Por lo tanto, se usa la derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con AQC seguida de la separacio n por HPLC en fase reversa para analizar la composicio n de aminoa cidos. La separacio n de los aminoa cidos-AQC en una columna ODS se logra a trave s de una combinacio n de cambios en las concentraciones de acetonitrilo y sal. La deteccio n de uorescencia selectiva de los derivados con una longitud de onda de excitacio n de 250 nm y una longitud de onda de emisio n de 395 nm permite la inyeccio n directa de la mezcla de reaccio n sin ninguna interferencia signicativa del u nico subproducto uorescente importante del reactivo, la 6aminoquinolina. El exceso de reactivo se hidroliza ra pidamente (t1/25 15 segundos) para producir 6-aminoquinolina-N-hidroxisuccinimida y dio xido de carbono y despue s de 1 minuto no se puede producir ninguna otra derivatizacio n. Las a reas de los picos para los aminoa cidos-AQC esencialmente no cambian durante al menos 1 semana a temperatura ambiente y los derivados tienen ma s que suciente estabilidad para permitir el ana lisis cromatogra co automatizado durante la noche. Se considera que el l mite de deteccio n esta entre aproximadamente 40 fmol y 320 fmol para cada aminoa cido, a excepcio n de la Cys. El l mite de deteccio n para la Cys es aproximadamente 800 fmol. Se obtiene una respuesta lineal entre 2,5 mM y 200 mM con coecientes de correlacio n superiores a 0,999. Se pueden obtener buenos datos de composicio n a partir del ana lisis de hidrolizados proteicos derivatizados que contengan tan solo 30 ng de prote na o pe ptido. Ma s adelante se muestra un me todo de derivatizacio n precolumna con AQC. Preparacio n de la Fase Mo vil Solucio n APreparar una solucio n de acetato de sodio 140 mM y trietilamina 17 mM y ajustar con a cido fosfo rico hasta un pH de 5,02. Solucio n B: una mezcla de acetonitrilo y agua (60 : 40). Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y Solucio n B segu n se indica en Sistema Cromatogra co. Procedimiento de Derivatizacio n de la MuestraDisolver aproximadamente 2 mg de la muestra de prueba en 20 mL de a cido clorh drico 15 mM y diluir con una solucio n amortiguadora de borato 0,2 M (pH 8,8) a 80 mL. Iniciar la derivatizacio n agregando 20 mL de AQC 10 mM en acetonitrilo y dejar que prosiga durante 10 minutos a temperatura ambiente. Sistema Cromatogra coEquipar el cromato grafo de l quidos con un detector uorome trico ajustado a una longitud de onda de excitacio n de 250 nm, una longitud de onda de emisio n de 395 nm y con una columna de 3,9 mm 6 150 mm rellena con material L1 de 4 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto y la temperatura de la columna se mantiene a 378. Programar el sistema del siguiente modo. Equilibrar la columna con la Solucio n A; durante los siguientes 0,5 minutos, cambiar linealmente la composicio n de la Fase Mo vil a 98% de Solucio n A y 2% de Solucio n B; luego durante los siguientes 14,5 minutos a 93% de Solucio n A y 7% de Solucio n B; durante los siguientes 4 minutos a 87% de Solucio n A y 13% de Solucio n B; durante los siguientes 14 minutos a 68% de Solucio n A y 32% de Solucio n B; luego cambiar abruptamente a 100% de Solucio n B para un lavado de 5 minutos; durante los siguientes 10 minutos, cambiar abruptamente a 100% de Solucio n A y dejar que la columna se equilibre antes de la siguiente inyeccio n. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo aproximadamente 0,05 nmol de cada aminoa cido-AQC en ana lisis y proceder como se indica en Sistema Cromatogra co.
Me todo 5Derivatizacio n Precolumna con OPA

Se usa la derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con OPA y luego se separan por HPLC en fase reversa con deteccio n uorome trica. Esta te cnica no detecta los aminoa cidos que existen como aminas secundarias (por ejemplo, prolina). El OPA junto con un reactivo tiol reacciona con grupos amino primarios para formar productos isoindo licos altamente uorescentes. Se puede usar 2-mercaptoetanol y a cido 3-mercaptopropio nico como tiol. El OPA por s mismo no muestra uorescencia y por lo tanto no produce picos que intereren. Adema s, su solubilidad y estabilidad en soluciones acuosas, junto con la ra pida cine tica de reaccio n permiten la derivatizacio n y ana lisis automatizados usando un muestreador automa tico para mezclar la muestra con el reactivo. Sin embargo, la falta de reactividad con aminoa cidos secundarios ha sido una desventaja importante. Este me todo no detecta los aminoa cidos que son aminas secundarias (por ejemplo, prolina). Para compensar esta desventaja, esta te cnica se puede combinar con la te cnica descrita en el Me todo 7 o en el Me todo 8. A la derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con OPA le sigue la separacio n por HPLC en fase reversa. Debido a la inestabilidad de los derivados aminoa cidos-OPA, la separacio n y el ana lisis por HPLC se realizan inmediatamente despue s de la derivatizacio n. El cromato grafo de l quidos esta equipado con un detector uorome trico para la deteccio n de aminoa cidos derivatizados. La intensidad de uorescencia de los aminoa cidos derivatizados con OPA se controla con una longitud de onda de excitacio n de 348 nm y una longitud de onda de emisio n de 450 nm. Se ha informado de l mites de deteccio n de so lo 50 fmol a trave s de uorescencia, aunque el l mite pra ctico de ana lisis se mantiene en 1 pmol. A continuacio n se muestra un me todo de derivatizacio n precolumna con OPA. Preparacio n de la Fase Mo vil Solucio n A: una mezcla de acetato de sodio 100 mM (pH 7,2), metanol y tetrahidrofurano (900 : 95 : 5). Solucio n B: metanol. Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y de Solucio n B segu n se indica en Sistema Cromatogra co. Reactivo de Derivatizacio nDisolver 50 mg de OPA en 1,25 mL de metanol (apto para secuenciacio n de prote na). Agregar 50 mL de 2-mercaptoetanol y 11,2 mL de borato de sodio 0,4 M (pH 9,5) y mezclar. [NOTAEl reactivo es estable durante 1 semana.] Procedimiento de Derivatizacio n de la MuestraTransferir aproximadamente 5 mL de la muestra de prueba a un recipiente adecuado, agregar 5 mL del Reactivo de Derivatizacio n y mezclar. Despue s de 1 minuto, agregar no menos de 20 mL de acetato de sodio 0,1 M (pH 7,0). Usar 20 mL de esta solucio n para el ana lisis. [NOTASe recomienda usar un esta ndar interno (por ejemplo, norleucina) para el ana lisis cuantitativo debido a variaciones potenciales en el volumen del reactivo en la derivatizacio n de la muestra. La derivatizacio n de la muestra se realiza de manera automatizada en l nea. Debido a la inestabilidad de los derivados aminoa cido-OPA, la separacio n y ana lisis por HPLC se realizan inmediatamente despue s de la derivatizacio n.] Sistema Cromatogra coEquipar el cromato grafo de l quidos con un detector uorome trico ajustado a una longitud de onda de excitacio n de 348 nm y una longitud de onda de emisio n de 450 nm y con una columna de 4,6 mm 6 75 mm rellena con material L3 de 3 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,7 mL por minuto y la temperatura de la columna se mantiene a 378. Programar el sistema del siguiente modo. Equilibrar la columna con 92% de Solucio n A y 8% de Solucio n B; durante los siguientes dos minutos, cambiar la composicio n de la Fase Mo vil a 83% de Solucio n A y 17% de Solucio n B y mantener durante 3 minutos ma s; despue s durante los siguientes 5 minutos cambiar a 54% de Solucio n A y 46% de Solucio n B y mantener durante 2 minutos ma s; despue s durante los siguientes 2 minutos cambiar a 34% de Solucio n A y 66% de Solucio n B y mantener durante 1 minuto; despue s durante los siguientes 0,3 minutos cambiar a 20% de Solucio n A y 80% de Solucio n B y mantener durante 2,6 minutos ma s; y nalmente durante 0,6 minutos cambiar a 92% de Solucio n A y 8% de Solucio n B y mantener durante 0,6 minutos ma s.
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ProcedimientoInyectar aproximadamente 0,02 nmol de cada derivado aminoa cido-OPA en ana lisis en el cromato grafo y proceder como se indica en Sistema Cromatogra co.
Me todo 6Derivatizacio n Postcolumna con DABSCl

Se usa derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con cloruro de (dimetilamino)azobencenosulfonilo (DABS-Cl) y luego se separan por HPLC en fase reversa con deteccio n en la regio n de luz visible. El DABS-Cl es un reactivo cromofo rico empleado para marcar aminoa cidos. Los aminoa cidos marcados con DABS-Cl (aminoa cidos-DABS) son muy estables y muestran la ma xima absorcio n a 436 nm. Los aminoa cidos-DABS, los 19 derivados de aminoa cidos naturales, se pueden separar en una columna ODS de HPLC en fase reversa empleando sistemas de gradientes constituidos por una mezcla de acetonitrilo y una solucio n amortiguadora acuosa. Los aminoa cidos-DABS separados que eluyen de la columna se detectan a 436 nm en la regio n visible. Este me todo puede analizar los iminoa cidos, como por ejemplo la prolina, junto con los aminoa cidos, con igual sensibilidad. El me todo de derivatizacio n con DABS-Cl permite la cuanticacio n simulta nea de residuos de tripto fano mediante hidro lisis previa de la prote na o pe ptido con a cidos sulfo nicos, como por ejemplo a cido mercaptoetanosulfo nico, a cido p-toluensulfo nico o a cido metanosulfo nico, descritos en el Me todo 2 en Hidro lisis de Prote nas en Ana lisis de Aminoa cidos. Los otros residuos a cidos inestables, asparagina y glutamina, tambie n se pueden analizar mediante la conversio n previa en a cido diaminopropio nico y a cido diaminobut rico, respectivamente, tratando la prote na o pe ptido con BTI, descrito en el Me todo 11 en Hidro lisis de Prote nas en Ana lisis de Aminoa cidos. El aminoa cido no proteinoge nico, norleucina, no se puede usar como un esta ndar interno en este me todo ya que eluye en una regio n cromatogra ca abundante en picos de aminoa cidos primarios. La nitrotirosina se puede usar como esta ndar interno ya que eluye en una regio n despejada. El l mite de deteccio n de aminoa cidos-DABS es aproximadamente 1 pmol. Se pueden analizar cuantitativamente de 2 a 5 pmol de cada aminoa cido-DABS con conabilidad y so lo se necesitan entre 10 ng y 30 ng del hidrolizado proteico tratado con DABS para cada ana lisis. Ma s adelante se muestra un me todo de derivatizacio n precolumna con DABS-Cl. Preparacio n de la Fase Mo vil Solucio n A: acetato de sodio 25 mM (pH 6,5) que contenga 4% de dimetilformamida. Solucio n B: acetonitrilo. Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y de Solucio n B segu n se indica en Sistema Cromatogra co. Preparacio n del Reactivo de Derivatizacio n Solucio n Amortiguadora de Muestra: bicarbonato de sodio 50 mM ajustado hasta un pH de 8,1. Reactivo de Derivatizacio nDisolver 1,3 mg de DABS-Cl en 1 mL de acetonitrilo. [NOTAEste reactivo se prepara poco antes del paso de derivatizacio n.] Solucio n Amortiguadora de Dilucio n de la MuestraPreparar una mezcla de fosfato de sodio 50 mM (pH 7,0) y alcohol (1 : 1). Procedimiento de Derivatizacio n de la MuestraDisolver la muestra de prueba en 20 mL de Solucio n Amortiguadora de Muestra, agregar 40 mL de Reactivo de Derivatizacio n y mezclar. Sellar el recipiente de la muestra con un tapo n de goma de silicona y calentar a 708 durante 10 minutos. Mientras se calienta la muestra, la mezcla se disuelve completamente. Despue s de la derivatizacio n, diluir la muestra de prueba con una cantidad adecuada de Solucio n Amortiguadora de Dilucio n de la Muestra. Sistema Cromatogra coEquipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 436 nm y una columna de 4,6 mm 6 250 mm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto y la temperatura de la columna se mantiene a 408. Programar el sistema del siguiente modo. Equilibrar la
columna con 85% de Solucio n A y 15% de Solucio n B; durante los siguientes 20 minutos, cambiar la composicio n de la Fase Mo vil a 60% de Solucio n A y 40% de Solucio n B; durante los siguientes 12 minutos, cambiar la composicio n a 30% de Solucio n A y 70% de Solucio n B y mantener durante 2 minutos ma s. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo aproximadamente 0,05 nmol de los aminoa cidos-DABS y proceder segu n se indica en Sistema Cromatogra co.
Me todo 7Derivatizacio n Precolumna con FMOCCl

Se usa derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con cloroformiato de 9-uorenilmetilo (FMOC-Cl) y luego se separan por HPLC en fase reversa con deteccio n uorome trica. El FMOC-Cl reacciona con aminoa cidos primarios y secundarios para formar productos altamente uorescentes. La reaccio n del FMOC-Cl con aminoa cidos se realiza bajo condiciones suaves, en solucio n acuosa y se completa en 30 segundos. Los derivados son estables y so lo se degrada el derivado de histidina. Si bien el FMOCCl es uorescente por s mismo, el exceso de reactivo y los subproductos uorescentes se pueden eliminar sin pe rdida de aminoa cidos-FMOC. Los aminoa cidos FMOC se separan por HPLC en fase reversa usando una columna ODS. La separacio n se lleva a cabo mediante elucio n por gradiente que var a linealmente de una mezcla de solucio n amortiguadora de a cido ace tico, metanol y acetonitrilo (50 : 40 : 10) a una mezcla de acetonitrilo y solucio n amortiguadora de a cido ace tico (50 : 50). En estas condiciones, se separan 20 derivados de aminoa cidos en 20 minutos. Cada derivado que eluye de la columna se controla a trave s de un detector uorome trico ajustado a una longitud de onda de excitacio n de 260 nm y una longitud de onda de emisio n de 313 nm. El l mite de deteccio n se encuentra en el intervalo inferior de fmol. Para la mayor a de los aminoa cidos la respuesta es lineal entre 0,1 mM y 50 mM. A continuacio n se muestra un me todo de derivatizacio n precolumna con FMOC-Cl. Preparacio n de Fase Mo vil cido Ace Solucio n Amortiguadora de A ticoTransferir 3 mL de a cido ace tico glacial y 1 mL de trietilamina a un matraz volume trico de 1 L y diluir a volumen con agua de grado HPLC. Ajustar con hidro xido de sodio hasta un pH de 4,20. cido Solucio n A: una mezcla de Solucio n Amortiguadora de A Ace tico, metanol y acetonitrilo (50 : 40 : 10). Solucio n B: una mezcla de acetonitrilo y Solucio n Amortiguacido Ace dora de A tico (50 : 50). Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y de Solucio n B segu n se indica en el Sistema Cromatogra co. Preparacio n del Reactivo de Derivatizacio n Solucio n Amortiguadora de BoratoPreparar una solucio n de a cido bo rico 1 M y ajustar con hidro xido de sodio hasta un pH de 6,2. Reactivo FMOC-ClDisolver 155 mg de cloroformiato de 9uorenilmetilo en 40 mL de acetona y mezclar. Procedimiento de Derivatizacio n de la MuestraAgregar 0,1 mL de Solucio n Amortiguadora de Borato y 0,5 mL de Reactivo FMOC-Cl a 0,4 mL de la muestra de prueba. Despue s de aproximadamente 40 segundos, extraer la mezcla con 2 mL de pentano y luego extraer una vez ma s con una nueva porcio n de pentano. La solucio n acuosa con los derivados de aminoa cidos queda lista para la inyeccio n. Sistema Cromatogra coEquipar el cromato grafo de l quidos con un detector uorome trico ajustado a una longitud de onda de excitacio n de 260 nm y una longitud de onda de emisio n de 313 nm y con una columna de 4,6 mm 6 125 mm rellena con material L1 de 3 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente de 1,3 mL por minuto. Programar el sistema del siguiente modo. Equilibrar la columna con Solucio n A y mantener esta composicio n durante 3 minutos; durante los siguientes 9 minutos, cambiar a 100% de Solucio n B; durante los siguientes 0,5 minutos, aumentar la
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velocidad de ujo a 2 mL por minuto y mantenerla hasta que el u ltimo aminoa cido-FMOC eluya de la columna. El tiempo total de la corrida es de aproximadamente 20 minutos. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo no menos de 0,01 nmol de cada aminoa cido-FMOC en ana lisis y proceder como se indica en Sistema Cromatogra co. El derivado histidina-FMOC por lo general dara una respuesta menor que los dema s derivados.
LCULO Y ANA LISIS DE LOS DATOS CA

Cuando se determina el contenido de aminoa cidos de un hidrolizado de prote na o pe ptido, se debe tener en cuenta que el paso de hidro lisis a cida destruye el tripto fano y la ciste na. La serina y la treonina se destruyen parcialmente con la hidro lisis a cida, mientras que la isoleucina y la valina podr an escindirse so lo parcialmente. La metionina puede oxidarse durante la hidro lisis a cida y algunos aminoa cidos (por ejemplo, glicina y serina) son contaminantes comunes. La aplicacio n de un vac o adecuado (menos de 200 mm de mercurio o 26,7 Pa) o la introduccio n de un gas inerte (argo n) en la ca mara gaseosa del recipiente de reaccio n durante la hidro lisis en fase de vapor puede reducir la destruccio n oxidativa. Por lo tanto, los resultados cuantitativos obtenidos para ciste na, tripto fano, treonina, isoleucina, valina, metionina, glicina y serina de un hidrolizado de prote nas o pe ptidos pueden variar y pueden requerir posterior investigacio n y consideracio n.
Me todo 8Derivatizacio n Precolumna con NBD-F

Se usa la derivatizacio n precolumna de aminoa cidos con 7-uoro4-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol (NBD-F) y despue s se separan por HPLC en fase reversa con deteccio n uorome trica. El 7-uoro-4-nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol (NBD-F) reacciona con aminoa cidos primarios y secundarios para formar productos altamente uorescentes. Los aminoa cidos se derivatizan con NBDF calenta ndolos a 608 durante 5 minutos. Los derivados aminoa cidos-NBD se separan en una columna ODS de HPLC en fase reversa empleando un sistema de elucio n por gradiente constituido por una mezcla de acetonitrilo y una solucio n amortiguadora acuosa. En estas condiciones se separan 17 derivados de aminoa cidos en 35 minutos. Se puede usar el a cido Eaminocaproico como esta ndar interno ya que eluye en una regio n cromatogra ca despejada. Cada derivado que eluye de la columna se controla mediante un detector uorome trico ajustado a una longitud de onda de excitacio n de 480 nm y una longitud de onda de emisio n de 530 nm. La sensibilidad de este me todo es casi igual que la del me todo de derivatizacio n precolumna con OPA (Me todo 5), excluyendo la prolina, que no reacciona con el OPA. Esto puede ser una ventaja del NBD-F con respecto al OPA. El l mite de deteccio n para cada aminoa cido es aproximadamente 10 fmol. El perl anal tico se logra con aproximadamente 1,5 mg de hidrolizado proteico en la mezcla nal de reaccio n de marcacio n precolumna para HPLC. A continuacio n se detalla un me todo de derivatizacio n precolumna con NBD-F. Preparacio n de la Fase Mo vil Solucio n A: una solucio n de citrato de sodio 10 mM y perclorato de sodio 75 mM, ajustada con a cido clorh drico hasta un pH de 6,2. Solucio n B: una mezcla de acetonitrilo y agua (50 : 50). Preparacio n del Reactivo de Derivatizacio n Solucio n Amortiguadora de Muestra: una solucio n de a cido bo rico 0,1 M ajustada con hidro xido de sodio a un pH de 9,2. Reactivo de Derivatizacio nDisolver 5 mg de NBD-F en 1,0 mL de alcohol y mezclar. Procedimiento de Derivatizacio n de la MuestraDisolver la muestra de prueba en 20 mL de Solucio n Amortiguadora de Muestra, agregar 10 mL de Reactivo de Derivatizacio n y mezclar. Calentar el recipiente de la muestra a 608 durante 5 minutos. Despue s de la derivatizacio n, diluir la muestra de prueba con 300 mL de la Solucio n A. Sistema Cromatogra coEquipar el cromato grafo de l quidos con un detector uorome trico ajustado a una longitud de onda de excitacio n de 480 nm y una longitud de onda de emisio n de 530 nm y una columna de 4,6 mm 6 150 mm rellena con s lice ODS con un taman o de part cula de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto y la temperatura de la columna se mantiene a 408. Programar el sistema del siguiente modo. Equilibrar la columna con 94% de Solucio n A y 6% de Solucio n B; durante los siguientes 16 minutos, cambiar linealmente la composicio n a 63% de Solucio n A y 37% de Solucio n B; durante los siguientes 5 minutos, cambiar linealmente la composicio n a 62% de Solucio n A y 38% de Solucio n B; durante los siguientes 9 minutos, cambiar linealmente la composicio n a 100% de Solucio n B y mantener durante otros 5 minutos; nalmente durante 2 minutos, cambiar linealmente la composicio n a 94% de Solucio n A y 6% de Solucio n B y luego dejar equilibrar la columna antes de la siguiente inyeccio n. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo aproximadamente 15 pmol de cada aminoa cido-NBD en ana lisis y proceder como se indica en Sistema Cromatogra co.
Ca lculos
Porcentaje Molar de los Aminoa cidosEs el nu mero de residuos de cada aminoa cido por cada 100 residuos en una prote na. Este resultado puede ser u til para evaluar los datos de ana lisis de aminoa cidos cuando se desconoce el peso molecular de la prote na o pe ptido a investigar. Esta informacio n se puede usar para corroborar la identidad de una prote na y tiene otras aplicaciones. Identicar e integrar cuidadosamente los picos obtenidos como se indica para cada Procedimiento. Calcular el porcentaje molar de cada aminoa cido presente en la muestra de prueba, por la fo rmula: 100rU / r en donde rU es la respuesta correspondiente al pico, en nmol, del aminoa cido en ana lisis y r es la suma de respuestas correspondientes a los picos, en nmol, de todos los aminoa cidos presentes en la muestra de prueba. La comparacio n entre el porcentaje molar de aminoa cidos en ana lisis y los datos de prote nas conocidas puede ayudar a establecer o corroborar la identidad de la prote na de muestra. Muestras de Prote nas DesconocidasEsta te cnica de ana lisis de datos se puede usar para estimar la concentracio n proteica de una muestra de prote na desconocida usando los datos de ana lisis de aminoa cidos. Calcular la masa, en mg, de cada aminoa cido recuperado, por la fo rmula: mMW/1000 en donde m es la cantidad recuperada, en nmoles, del aminoa cido en ana lisis; y MW es el peso molecular promedio, en mg, para ese aminoa cido, corregido por el peso de la mole cula de agua que se elimino durante la formacio n de la unio n pept dica. La suma de las masas de los aminoa cidos recuperados permite estimar la masa total de la prote na analizada despue s de corregir adecuadamente por los aminoa cidos destruidos parcial o completamente. Si se dispone del peso molecular de la prote na desconocida (es decir, por ana lisis SDS-PAGE o espectrometr a de masas), se puede predecir la composicio n de aminoa cidos de la prote na desconocida. Calcular el nu mero de residuos de cada aminoa cido por la fo rmula: m/(1000M/MWT) en donde m es la cantidad recuperada, en nmol, del aminoa cido en ana lisis; M es la masa total, en mg, de la prote na; y MWT es el peso molecular de la prote na desconocida. Muestras de Prote nas ConocidasEsta te cnica de ana lisis de datos se puede usar para investigar la composicio n de aminoa cidos y la concentracio n proteica de una muestra de prote na de peso molecular y composicio n aminoac dica conocidos usando los datos de ana lisis de aminoa cidos. Cuando se conoce la composicio n de la prote na que se esta analizando, se puede aprovechar el hecho de que algunos aminoa cidos se recuperan bien, mientras que la recuperacio n de otros aminoa cidos puede verse comprometida debido a la destruccio n total o parcial (por ejemplo, tripto fano, ciste na, treonina, serina, metionina), la escisio n incompleta de uniones (es decir, para isoleucina y valina) y la contaminacio n por aminoa cidos libres (es decir, por glicina y serina).
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Los aminoa cidos que se recuperan mejor representan a la prote na y se eligen para cuanticarla. Los aminoa cidos que se recuperan bien son, t picamente, aspartato-asparagina, glutamato-glutamina, alanina, leucina, fenilananina, lisina y arginina. Esta lista se puede modicar segu n la experiencia con el sistema de ana lisis utilizado. Dividir la cantidad, en nmol, de cada uno de los aminoa cidos bien recuperados por el nu mero esperado de residuos de ese aminoa cido con el n de obtener el contenido proteico basado en cada aminoa cido bien recuperado. Promediar los resultados de contenido proteico calculados. El contenido proteico determinado para cada uno de los aminoa cidos bien recuperados se debe distribuir uniformemente en torno a la media. Descartar los valores de contenido proteico para esos aminoa cidos que se alejan demasiado de la media. T picamente, una variacio n mayor de 5% con respecto a la media se considera inaceptable, pero esto es arbitrario. Recalcular la media del contenido proteico de los valores restantes para obtener el contenido proteico de la muestra. Dividir el contenido de cada aminoa cido por el contenido proteico medio calculado para determinar la composicio n de aminoa cidos de la muestra. Calcular el error relativo de composicio n, en porcentaje, por la fo rmula: 100m / mS en donde m es la cantidad determinada experimentalmente, en nmol por residuo aminoac dico, del aminoa cido en ana lisis; y mS es el valor conocido para los residuos de ese aminoa cido. El error relativo composicional promedio es el promedio de los valores absolutos de los errores relativos composicionales de los aminoa cidos individuales, excluyendo t picamente el tripto fano y la ciste na de este ca lculo. El error relativo composicional promedio puede proporcionar informacio n importante acerca de la estabilidad de los ana lisis en funcio n del tiempo. La coincidencia en la composicio n aminoac dica entre la muestra de prote na y la composicio n conocida se puede usar para corroborar la identidad y pureza de la prote na en la muestra.&1S (USP30)
PRINCIPIO GENERAL
La velocidad de migracio n del analito en un campo ele ctrico de intensidad (E) esta determinada por la movilidad electrofore tica del analito y la movilidad electroosmo tica de la solucio n amortiguadora dentro del capilar. La movilidad electrofore tica de un soluto (mep) depende de las caracter sticas del soluto (carga ele ctrica, taman o molecular y forma) y de las caracter sticas de la solucio n amortiguadora en donde ocurre la migracio n (tipo y fuerza io nica del electrolito, pH, viscosidad y aditivos). La velocidad electrofore tica (Vep) de un soluto, suponiendo una forma esfe rica, es la siguiente:
en donde q es la carga efectiva de la part cula, Z es la viscosidad de la solucio n amortiguadora, r es el taman o del io n soluto, V es el voltaje aplicado y L es el largo total del capilar. Cuando se aplica un campo ele ctrico a trave s del capilar lleno con solucio n amortiguadora, se genera un ujo de disolvente dentro del capilar que se denomina ujo electroosmo tico. Su velocidad depende de la movilidad electroosmo tica (meo) que a su vez depende de la densidad de la carga en la pared interna del capilar y de las caracter sticas de la solucio n amortiguadora. La velocidad electroosmo tica (Veo) es la siguiente:
en donde es la constante diele ctrica de la solucio n amortiguadora, es el potencial zeta de la supercie del capilar y los otros te rminos son los denidos anteriormente. Las movilidades electrofore tica y electroosmo tica del analito pueden tener el mismo sentido o sentido opuesto, segu n la carga (positiva o negativa) del soluto, siendo la velocidad del soluto (v) la siguiente: V = Vep + Veo Se usa la suma o la diferencia entre las dos velocidades (Vep y Veo) dependiendo de si las movilidades tienen el mismo sentido o sentido opuesto. En condiciones de una Veo ra pida, con respecto a la Vep de los solutos, se pueden separar analitos cargados tanto negativa como positivamente en la misma corrida. El tiempo (t) que tarda el soluto en migrar la distancia (l) del extremo de inyeccio n del capilar al punto de deteccio n (largo efectivo del capilar) es el siguiente:
&
CULOS OBTENIDOS h1053i ARTI A POR BIOTECNOLOGI ELECTROFORESIS CAPILAR
Este cap tulo proporciona gu as y procedimientos utilizados para la caracterizacio n de art culos obtenidos por biotecnolog a mediante electroforesis capilar. Se lo ha armonizado con los cap tulos correspondientes en la Farmacopea Japonesa (JP) y la Farmacopea Europea (EP). Tambie n se muestran otras pruebas de caracterizacio n armonizadas en Art culos Obtenidos por Biotecnolog aAna lisis de Aminoa cidos h1052i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog a Isoelectroenfoqueh1054i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog a Mapeo de Pe ptidos h1055i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog aElectroforesis en Gel de Poliacrilamida h1056i y Art culos Obtenidos por Biotecnolog aValoracio n de Prote nas Totales h1057i.
N INTRODUCCIO
La electroforesis capilar es un me todo f sico de ana lisis basado en la migracio n, dentro de un capilar, de analitos cargados disueltos en una solucio n de electrolito, bajo la inuencia de un campo ele ctrico de corriente continua. En esta seccio n se describen cuatro me todos de electroforesis capilar: Electroforesis Capilar en Solucio n Libre, Electroforesis Capilar en Gel, Isoelectroenfoque Capilar y Cromatograf a Electrocine tica Micelar.
en donde los otros te rminos son los denidos anteriormente. En general, los capilares de s lice fundida usados en electroforesis tienen cargas negativas en la pared interna, produciendo un ujo electroosmo tico hacia el ca todo. El ujo electroosmo tico tiene que mantenerse constante de corrida a corrida para obtener una buena reproducibilidad en la velocidad de migracio n de los solutos. Para algunas aplicaciones, puede ser necesario reducir o suprimir el ujo electroosmo tico modicando la pared interna del capilar o cambiando el pH de la solucio n amortiguadora. Cuando la muestra se introduce en el capilar, cada io n del analito de la muestra migra dentro del electrolito de fondo como una zona independiente de acuerdo con su movilidad electrofore tica. El extendido de cada banda de soluto (zona de dispersio n) es el resultado de un feno meno diferente. En condiciones ideales, el ensanchamiento de la zona del soluto se debe solamente a la difusio n
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molecular del soluto a lo largo del capilar (difusio n longitudinal). En este caso, la eciencia de la zona se expresa como el nu mero de platos teo ricos (N), del siguiente modo:
N ELECTROFORESIS CAPILAR EN SOLUCIO LIBRE

En la electroforesis capilar en solucio n libre, los analitos se separan en un capilar que contiene u nicamente una solucio n amortiguadora sin ningu n medio anticonvectivo. En esta te cnica, la separacio n ocurre debido a que los distintos componentes de la muestran migran como bandas discretas con velocidades diferentes. La velocidad de cada banda depende de la movilidad electrofore tica del soluto y del ujo electroosmo tico en el capilar. Se pueden usar capilares recubiertos, con ujo electroosmo tico reducido, para aumentar la capacidad de separacio n de las sustancias que se absorben en las supercies de s lice-fundido. Este me todo de electroforesis capilar es apropiado para el ana lisis de mole culas pequen as (PM 5 2000) y grandes (2000 5 PM 5 100 000). Debido a la alta eciencia lograda, se pueden separar mole culas que presenten diferencias diminutas en su relacio n carga-masa. Este me todo tambie n permite la separacio n de compuestos quirales al agregar selectores quirales a la solucio n amortiguadora de separacio n. Para lograr una separacio n o ptima hay que tener en cuenta varios para metros instrumentales y de la solucio n electrol tica.
en donde D es la difusio n molecular del soluto en la solucio n amortiguadora y los otros te rminos son los denidos anteriormente. Desde un punto de vista pra ctico, otros feno menos, como por ejemplo la disipacio n de calor, la adsorcio n de la muestra en la pared del capilar, la conductividad no coincidente entre la muestra y la solucio n amortiguadora, la longitud de la zona de inyeccio n, el taman o de celda del detector y los recipientes no nivelados de solucio n amortiguadora, pueden contribuir signicativamente a la dispersio n de banda. La separacio n entre dos bandas (expresada por la resolucio n, RS) se puede lograr modicando la movilidad electrofore tica de los analitos, por la movilidad electroosmo tica inducida por el capilar y aumentando la eciencia para la banda de cada analito del siguiente modo:
Para metros Instrumentales

VoltajeEl tiempo de separacio n es universalmente proporcional al voltaje aplicado. Sin embargo, un aumento en el voltaje empleado puede producir calor excesivo, aumentando los gradientes de temperatura y viscosidad en la solucio n amortiguadora dentro del capilar, lo cual ensancha la banda y disminuye la resolucio n. TemperaturaEl principal efecto de la temperatura se observa en la viscosidad y conductividad ele ctrica del amortiguador del pH, por lo tanto afecta la velocidad de migracio n. En algunos casos, un aumento en la temperatura del capilar puede alterar la conformacio n de algunas prote nas, modicando su tiempo de migracio n y eciencia de separacio n. CapilarEl largo y dia metro interno del capilar afectan el tiempo de ana lisis, la eciencia de las separaciones y la capacidad. El aumento del largo efectivo y del largo total permiten disminuir los campos ele ctricos, a un voltaje constante, lo cual aumenta el tiempo de migracio n. Para una solucio n amortiguadora y un campo ele ctrico dados, la disipacio n de calor (por lo tanto, el ensanchamiento de banda de la muestra) depende del dia metro interno del capilar. Este u ltimo tambie n afecta el l mite de deteccio n, dependiendo del volumen de muestra inyectado en el capilar y del sistema de deteccio n usado. La adsorcio n de los componentes de la muestra en la pared del capilar limita la eciencia; por lo tanto, hay que considerar me todos para evitar estas interacciones cuando se desarrolla un me todo de separacio n. Esto es cr tico en muestras que contienen prote nas. Se han disen ado estrategias para evitar la adsorcio n de prote nas en la pared del capilar. Estas estrategias incluyen el uso de un pH extremo y la absorcio n de amortiguadores de pH con carga positiva que so lo necesitan la modicacio n de la composicio n del amortiguador del pH. Otras estrategias incluyen el recubrimiento de la pared interna del capilar con un pol mero unido covalentemente a la s lice lo cual evita la interaccio n entre las prote nas y la supercie de la s lice negativamente cargada. Capilares con recubrimiento de pol meros hidro los neutros, catio nicos y anio nicos esta n disponibles comercialmente.
en donde mepa y mepb son las movilidades electrofore ticas de los dos compuestos a separar; mep es la movilidad electrofore tica promedio de los dos solutos calculada como: mep = (mepb mepa) y los dema s te rminos son los denidos anteriormente.
APARATO
Un aparato de electroforesis capilar se compone de una fuente de alimentacio n de alto voltaje controlable; dos recipientes para las soluciones amortiguadoras que se mantienen en el mismo nivel y que contienen las soluciones ano dica y cato dica especicadas; dos electrodos (ca todo y a nodo) sumergidos en los recipientes de las soluciones amortiguadoras y conectados a la fuente de alimentacio n; un capilar de separacio n, generalmente de s lice fundida, a veces con una ventana de visualizacio n o ptica alineada con el detector, dependiendo del detector, con los extremos del capilar ubicados en los recipientes de las soluciones amortiguadoras y el capilar lleno con una solucio n que se especica en la monograf a correspondiente; un sistema de inyeccio n adecuado; un detector capaz de controlar la cantidad de sustancia de intere s que pasa a trave s de un segmento del capilar de separacio n en un tiempo dado, generalmente basado en la espectrofotometr a de absorcio n (UV y visible), uorometr a, o deteccio n conductime trica, amperome trica o espectrome trica de masas, dependiendo de las aplicaciones espec cas, o incluso la deteccio n indirecta para detectar compuestos no uorescentes y que no absorben luz UV y un sistema termosta tico capaz de mantener la temperatura dentro del capilar. El me todo de inyeccio n de muestras y su automatizacio n son cr ticos para realizar ana lisis cuantitativos precisos. Los me todos de inyeccio n incluyen la gravedad, la presio n o vac o o la inyeccio n electrocine tica. La cantidad de cada componente de muestra introducida electrocine ticamente depende de su movilidad electrofore tica, introduciendo un posible sesgo en los resultados. Se espera que el capilar, los recipientes de las soluciones amortiguadoras, el me todo de preacondicionamiento, la solucio n de muestra y las condiciones de migracio n este n especicadas en la monograf a correspondiente. La solucio n electrol tica empleada se puede ltrar para eliminar part culas y desgasicar para evitar la formacio n de burbujas que pueden interferir con el sistema de deteccio n. Para lograr un tiempo de migracio n reproducible de los solutos, es necesario crear, para cada me todo anal tico, una rutina de enjuague riguroso despue s de cada inyeccio n.
Para metros de la Solucio n Electrol tica

Tipo de Solucio n Amortiguadora y ConcentracionesLas soluciones amortiguadoras apropiadas para la electroforesis capilar tienen una capacidad amortiguadora adecuada en el intervalo de pH de eleccio n y baja movilidad para minimizar la generacio n de corriente. Para minimizar la distorsio n del pico, es importante hacer coincidir la movilidad de los iones en la solucio n amortiguadora con la movilidad del soluto siempre que sea posible. Es importante el tipo de disolvente de la muestra empleado para lograr el enfoque de la muestra en la columna, lo que aumenta la eciencia de separacio n
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y mejora la deteccio n. Adema s, el aumento en la concentracio n de las soluciones amortiguadoras hasta un pH dado disminuye el ujo electroosmo tico y la velocidad del soluto. pH de la Solucio n AmortiguadoraEl pH de la solucio n amortiguadora puede afectar la separacio n al modicar la carga del analito o de otros aditivos y al cambiar el ujo electroosmo tico. Para la separacio n de prote nas y pe ptidos, un cambio en el pH de la solucio n amortiguadora desde un valor superior al punto isoele ctrico a un valor inferior al punto isoele ctrico cambia la carga neta del soluto de negativa a positiva. Un aumento en el pH de la solucio n amortiguadora generalmente aumenta el ujo electroosmo tico. Disolventes Orga nicosLos modicadores orga nicos, como por ejemplo el metanol, el acetonitrilo y otros, se agregan a la solucio n amortiguadora acuosa para aumentar la solubilidad del soluto o de otros aditivos o para afectar la ionizacio n de los componentes de la muestra. Estos modicadores orga nicos agregados a la solucio n amortiguadora suelen disminuir el ujo electroosmo tico. Aditivos para Separaciones QuiralesPara separar iso meros o pticos, se agrega un selector quiral a la solucio n amortiguadora de separacio n. Los selectores quirales ma s comu nmente usados son las ciclodextrinas, aunque en algunos casos se pueden usar e teres corona, algunos polisaca ridos o incluso prote nas. Como el reconocimiento quiral depende de las distintas interacciones entre el selector quiral y cada uno de los enantio meros, la resolucio n lograda para los compuestos quirales depende en gran medida del tipo de selector quiral usado. Mientras se desarrolla una separacio n dada, puede ser u til analizar las ciclodextrinas que tengan distintos taman os de cavidad (a, b o g-ciclodextrina) o ciclodextrinas modicadas con grupos neutros (metilo, etilo, hidroxialquilo, etc.) o ionizables (aminometilo, carboximetilo, sulfobutile ter, etc.). La resolucio n de compuestos quirales tambie n esta controlada por la concentracio n del selector quiral, la composicio n y el pH de la solucio n amortiguadora y la temperatura de separacio n. Los aditivos orga nicos, como por ejemplo el metanol o la urea, tambie n pueden afectar la resolucio n de la separacio n.
pol meros de un peso molecular mayor (a una concentracio n de pol mero dada) o disminuyendo la concentracio n de pol mero (para un peso molecular de pol mero dado). Al disminuir la porosidad del gel se reduce la movilidad del soluto para la misma solucio n amortiguadora. Se pueden usar te cnicas de inyeccio n hidrodina mica y de electromigracio n ya que la disolucio n de estos pol meros en la solucio n amortiguadora produce soluciones poco viscosas.
ISOELECTROENFOQUE CAPILAR
Las mole culas migran bajo la inuencia del campo ele ctrico, siempre y cuando este n cargadas, en un gradiente de pH generado por anfolitos que tienen una amplia gama de valores de pI (a cidos poli-aminocarbox licos) disueltos en la solucio n amortiguadora de separacio n. Los tres pasos ba sicos en el isoelectroenfoque capilar son la carga de la muestra, el enfoque y la movilizacio n. Carga Carga en un Solo PasoLa muestra se mezcla con anfolitos y se introduce en el capilar por presio n o vac o. Carga SecuencialSe introducen en el capilar una solucio n amortiguadora inicial, luego los anfolitos, luego la muestra mezclada con anfolitos, otra vez los anfolitos solos y nalmente la solucio n amortiguadora nal. El volumen de la muestra debe ser sucientemente pequen o como para no modicar el gradiente de pH. EnfoqueCuando se aplica voltaje, los anfolitos migran hacia el ca todo o el a nodo segu n su carga neta, creando un gradiente de pH desde el a nodo (menor pH) al ca todo (mayor pH). Los componentes a separar migran hasta que alcanzan el pH correspondiente a su punto isoele ctrico y la corriente cae a valores muy bajos. Movilizacio nLas bandas de los componentes separados migran ma s alla del detector mediante uno de los siguientes tres me todos. Me todo 1Durante el Enfoque, bajo la inuencia del ujo electroosmo tico cuando este ujo es sucientemente pequen o para permitir el enfoque de los componentes. Me todo 2Por aplicacio n de presio n positiva despue s del Enfoque. Me todo 3Despue s del Enfoque, agregando sales en el recipiente del ca todo o del a nodo, dependiendo del sentido elegido para la movilizacio n, a n de alterar el pH en el capilar cuando se aplica voltaje. Al cambiar el pH, las prote nas y anfolitos se movilizan hacia el recipiente que contiene las sales agregadas y pasan por el detector. La separacio n lograda se expresa como pI y depende del gradiente de pH (dpH), el nu mero de anfolitos que tienen valores de pI diferentes, el coeciente de difusio n (D), la intensidad del campo ele ctrico (E) y la variacio n de la movilidad electrofore tica del analito en funcio n del pH y es la siguiente:
ELECTROFORESIS CAPILAR EN GEL

La separacio n ocurre dentro de un capilar lleno con un pol mero que actu a como tamiz molecular. Los componentes ma s pequen os en la muestra se mueven ma s ra pidamente por el capilar que los componentes ma s grandes. Se puede usar este me todo para la separacio n de biopol meros-prote nas y fragmentos de ADN, segu n sus masas moleculares.
Caracter sticas de Geles Qu micos y F sicos

Geles Qu micosLos geles qu micos se preparan dentro del capilar por reaccio n de mono meros. Un ejemplo de dicho gel es una poliacrilamida entrecruzada. Este tipo de gel esta unido a la pared de s lice fundida y no se puede eliminar sin destruir el capilar. Para el ana lisis de prote nas, la solucio n amortiguadora de separacio n contiene dodecilsulfato de sodio, y la muestra se desnaturaliza por calor en una mezcla de dodecilsulfato de sodio y 2-mercaptoetanol o ditiotreitol antes de la inyeccio n. La optimizacio n de la separacio n en un gel entrecruzado se obtiene modicando la solucio n amortiguadora de separacio n (ver Electroforesis Capilar en Solucio n Libre) y controlando la porosidad del gel cuando se prepara. Para un gel de poliacrilamida entrecruzada, la porosidad se puede modicar cambiando la concentracio n de acrilamida o la relacio n del agente de entrecruzamiento. Como regla, al disminuir la porosidad del gel se reduce la movilidad de los solutos. Debido a la rigidez de este tipo de gel, so lo se puede usar la inyeccio n electrocine tica. Geles F sicosLos geles f sicos son pol meros hidro los (es decir, poliacrilamida lineal, derivados de celulosa, dextrano, etc.) que se pueden disolver en soluciones amortiguadoras acuosas de separacio n, dando lugar a un medio de separacio n que tambie n actu a como tamiz molecular. Estos medios de separacio n polime ricos son ma s fa ciles de preparar que los pol meros entrecruzados. Se pueden preparar en un vial y llenar por presio n un capilar de pared recubierta sin ujo electroosmo tico. Si se reemplaza el gel antes de cada inyeccio n generalmente mejora la reproducibilidad de la separacio n. La porosidad de los geles f sicos se puede aumentar usando
en donde dpH/dx es el gradiente de pH; y dm/dpH es la variacio n de la movilidad de la solucio n en funcio n del pH en la regio n cercana al pI. Para metros de Optimizacio nLos principales para metros que se deben considerar en el desarrollo de las separaciones son el voltaje, el capilar y los solutos. Voltaje: Emplear campos altos desde 300 V/cm a 1000 V/cm durante el Enfoque. CapilarSegu n la estrategia de Movilizacio n seleccionada (ver ma s arriba), el ujo electroosmo tico se debe reducir o eliminar. Los capilares recubiertos tienden a reducir el ujo electroosmo tico. SolucionesEl recipiente con el amortiguador del pH correspondiente al a nodo se llena con una solucio n de pH ma s bajo que el pI del anfolito ma s a cido y el recipiente del ca todo se llena con una solucio n que tiene un pH ma s alto que el pI del anfolito ma s ba sico. Frecuentemente se usa a cido fosfo rico para el a nodo e hidro xido de sodio para el ca todo.
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La adicio n de un pol mero, como la metilcelulosa, a la solucio n del anfolito tiende a suprimir las fuerzas convectivas (si las hubiese) y el ujo electroosmo tico por aumento de la viscosidad. Hay disponibles comercialmente anfolitos en muchos intervalos de pH que se pueden mezclar para obtener un intervalo de pH ampliado. Los intervalos de pH ma s amplios se usan para estimar el punto isoele ctrico mientras que los ma s estrechos se emplean para mejorar la exactitud. La calibracio n se puede llevar a cabo relacionando el tiempo de migracio n con el punto isoele ctrico de una serie de marcadores esta ndar de prote nas. Durante el Enfoque, se puede evitar la precipitacio n de prote nas en su punto isoele ctrico, si fuera necesario, usando aditivos de amortiguadores de pH como por ejemplo glicerol, agentes tensoactivos, urea o amortiguadores de pH zwitterio nicos. Sin embargo, segu n las concentraciones, la urea puede desnaturalizar las prote nas.
La resolucio n entre dos compuestos que migran cerca (RS ) es la siguiente:
A ELECTROCINE TICA CROMATOGRAFI MICELAR (CECM)

La separacio n se efectu a en una solucio n electrol tica que contiene un agente tensoactivo, generalmente io nico, en una concentracio n por encima de la concentracio n micelar cr tica. Las mole culas de soluto se distribuyen entre la solucio n amortiguadora acuosa y la fase seudo-estacionaria compuesta por las micelas segu n el coeciente de particio n del soluto. La te cnica se puede considerar un h brido de electroforesis y cromatograf a. Es una te cnica electrofore tica que se puede usar para la separacio n de solutos neutros o cargados manteniendo la eciencia, la velocidad y la aptitud del instrumento de electroforesis capilar. Uno de los agentes tensoactivos ma s ampliamente usados es el dodecilsulfato de sodio, aunque tambie n se han usado otros agentes tensoactivos anio nicos y catio nicos, como por ejemplo sales de cetiltrimetilamonio. A pH neutro y alcalino, se genera un ujo electroosmo tico fuerte que mueve los iones de la solucio n amortiguadora de separacio n hacia el ca todo. Si se usa dodecilsulfato de sodio como agente tensoactivo, la migracio n electrofore tica de la micela anio nica se produce en el sentido opuesto, hacia el a nodo. Como resultado, la velocidad general de migracio n de las micelas disminuye en comparacio n con el ujo en masa de la solucio n electrol tica. En el caso de solutos neutros, como el analito se puede repartir entre la micela y la solucio n amortiguadora acuosa y no tiene movilidad electrofore tica, la velocidad de migracio n del analito dependera u nicamente del coeciente de particio n entre la micela y la solucio n amortiguadora acuosa. En el electroforetograma, el pico correspondiente a cada soluto sin carga siempre se encuentra entre el del marcador del ujo electroosmo tico y el de la micela; y el tiempo transcurrido entre estos dos picos se denomina ventana de separacio n. Para los solutos con carga ele ctrica, la velocidad de migracio n depende del coeciente de particio n del soluto entre la micela y la solucio n amortiguadora acuosa y de la movilidad electrofore tica del soluto en ausencia de micelas. El mecanismo de separacio n es esencialmente cromatogra co y la migracio n del soluto y la resolucio n se pueden expresar en funcio n del factor de capacidad del soluto (K), que es la relacio n entre el nu mero total de moles de soluto en la micela y los moles en la fase mo vil. Para un compuesto neutro, K es del siguiente modo:
en donde N es el nu mero de platos teo ricos para uno de los compuestos; a es la selectividad obtenida; ka y kb son los factores de retencio n para ambos componentes, respectivamente (kb4ka); y los otros te rminos son los denidos anteriormente. Ecuaciones similares, aunque no ide nticas, dan valores de k y RS para compuestos con carga ele ctrica.
Para metros de Optimizacio n

Los principales para metros a considerar en el desarrollo de separaciones por CECM son los para metros instrumentales y de la solucio n electrol tica. Para metros Instrumentales VoltajeEl tiempo de separacio n es inversamente proporcional al voltaje aplicado. Un aumento en el voltaje podr a generar calor excesivo, aumentando los gradientes de temperatura y de viscosidad de la solucio n amortiguadora en la seccio n transversal del capilar. Este efecto puede ser signicativo con amortiguadores del pH de alta conductividad, como por ejemplo aquellos que contienen micelas. La disipacio n insuciente del calor ensancha la banda y disminuye la resolucio n. TemperaturaLas variaciones en la temperatura del capilar afectan el coeciente de particio n del soluto entre la solucio n amortiguadora y la micela, la concentracio n cr tica de micelas y la viscosidad de la solucio n amortiguadora. Estos para metros contribuyen al tiempo de migracio n de los solutos. CapilarEl largo y el dia metro interno contribuyen al tiempo de ana lisis y a la eciencia de las separaciones. El aumento del largo efectivo y del largo total puede disminuir los campos ele ctricos, trabajando a un voltaje constante, aumenta el tiempo de migracio n y mejora la eciencia de la separacio n. El dia metro interno controla la disipacio n de calor, con un amortiguador del pH dado y a un campo ele ctrico dado y ensancha la banda de la muestra. Para metros de la Solucio n Electrol tica Tipo de Agente Tensoactivo y Concentracio nEl tipo de agente tensoactivo, al igual que la fase estacionaria en cromatograf a, afecta la resolucio n ya que modica la selectividad de la separacio n. El logaritmo de K de un compuesto neutro aumenta linealmente con la concentracio n de detergente en la fase mo vil. Cuando K se acerca al valor de
en donde tr es el tiempo de migracio n del soluto; to es el tiempo de ana lisis del soluto no retenido obtenido al inyectar un marcador de ujo electroosmo tico que no entra a la micela (por ejemplo, metanol); tm es el tiempo de migracio n de la micela medido al inyectar un marcador de micela, como por ejemplo Suda n III, que migra continuamente asociado con la micela; K es el coeciente de particio n del soluto; VS es el volumen de la fase de las micelas; y VM es el volumen de la fase mo vil.
la resolucio n de la CECM alcanza su ma ximo. La modicacio n de la concentracio n del agente tensoactivo en la fase mo vil cambia la resolucio n. pH de la Solucio n AmortiguadoraEl pH no modica el coeciente de particio n de solutos no ionizados, pero puede modicar el ujo electroosmo tico en capilares sin recubrimiento. Una disminucio n en el pH de la solucio n amortiguadora disminuye el ujo electroosmo tico y por lo tanto aumenta la resolucio n de los solutos neutros, aumentando el tiempo de ana lisis. Disolventes Orga nicosSe pueden agregar modicadores orga nicos (metanol, propanol, acetonitrilo, etc.) a la solucio n electrol tica de separacio n para mejorar la separacio n de compuestos hidro fobos. La adicio n de estos modicadores generalmente disminuye el tiempo de migracio n y la selectividad de la separacio n. La adicio n de modicadores orga nicos afecta la formacio n de micelas, por lo tanto so lo se puede usar una concentracio n dada de un agente tensoactivo con un cierto porcentaje de un modicador
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orga nico antes de eliminar o alterar el equilibrio de micelacio n, con lo cual desaparecen las micelas y desaparece el mecanismo de particio n de la CECM. La eliminacio n de micelas en presencia de un alto contenido de disolvente orga nico no siempre signica que la separacio n ya no sera posible, dado que en ciertos casos, la interaccio n hidro foba entre el mono mero tensoactivo io nico y los solutos neutros forman complejos solvo fobos que se pueden separar electrofore ticamente. Aditivos para Separaciones QuiralesSe incluye un selector quiral en el sistema micelar ya unido al agente tensoactivo por enlace covalente o agregado al electrolito de separacio n micelar. Las micelas que tienen un grupo con propiedades de discriminacio n quiral incluyen sales, a cidos N-dodecanoil-L-aminoa cidos, sales biliares, etc. La resolucio n quiral tambie n se puede lograr usando discriminadores quirales, como por ejemplo ciclodextrinas, agregados a las soluciones electrol ticas que contienen agentes tensoactivos aquirales micelizados. Otros AditivosLa selectividad se puede modicar agregando productos qu micos al amortiguador del pH. Tambie n se emplea la adicio n de varios tipos de ciclodextrinas al amortiguador del pH para reducir la interaccio n de solutos hidro fobos con la micela, aumentando la selectividad para este tipo de compuesto. La adicio n de sustancias modicadoras de las interacciones soluto-micela por adsorcio n en las micelas se ha usado para mejorar la selectividad de las separaciones en CECM. Estos aditivos pueden ser un segundo agente tensoactivo (io nico o no io nico) que da lugar a la formacio n de micelas mixtas, o cationes meta licos que se disuelven en la micela y forman complejos de coordinacio n con los solutos.
ma ximo de los dos picos adyacentes (tb 4 ta); y b0,5b y b0,5a son los anchos de los picos, en mm, a la mitad de su altura. La resolucio n (RS) tambie n se puede calcular midiendo la altura del valle (c) entre dos picos parcialmente resueltos en una preparacio n esta ndar, la altura del pico ma s pequen o (d) y especicando que (c/d)5x, en donde x es el l mite indicado en la monograf a correspondiente. El factor de simetr a de un pico (AS) se puede calcular usando la fo rmula: AS = b0,05/2A en donde b0,05 es el ancho del pico a una vige sima parte de la altura del pico; y A es la distancia entre la perpendicular trazada desde el ma ximo del pico y el borde frontal del pico a una vige sima parte de la altura del pico. Otros para metros de aptitud del sistema incluyen pruebas para la repetibilidad del a rea (es decir, la desviacio n esta ndar de las a reas o del a rea/tiempo de migracio n) y pruebas para la repetibilidad del tiempo de migracio n (es decir, la desviacio n esta ndar del tiempo de migracio n). Para la repetibilidad del tiempo de migracio n, es necesario usar una prueba para medir la aptitud de los procedimientos de lavado del capilar. Para evitar tiempos de migracio n no repetibles, una pra ctica alternativa es usar un tiempo de migracio n relativo al esta ndar interno. Una prueba para vericar la relacio n sen al-ruido de una preparacio n esta ndar o para determinar el l mite de cuanticacio n es un para metro u til para medir la aptitud del sistema. El l mite de deteccio n y el l mite de cuanticacio n corresponden a una relacio n sen al-ruido mayor que 3 y 10, respectivamente. La relacio n sen alruido (S/N) se calcula del siguiente modo: S/N = 2H/hn en donde H es la altura del pico correspondiente en el electroforetograma obtenido con la solucio n de referencia especicada; y hn es el valor absoluto de la ma xima uctuacio n de ruido desde la l nea base en un electroforetograma obtenido despue s de inyectar un blanco y observado sobre una distancia igual a veinte veces el ancho a la mitad de la altura del pico en el electroforetograma obtenido con la solucio n de referencia y situado equitativamente alrededor del lugar donde se encontrar a este pico.&1S (USP30)
Ana lisis Cuantitativo

Las a reas de los picos se dividen por el tiempo de migracio n correspondiente para obtener el a rea corregida a n de compensar el cambio en el tiempo de migracio n de corrida a corrida, reduciendo la variacio n de la respuesta. Dividiendo las a reas de los picos entre el tiempo de migracio n tambie n compensa las distintas respuestas de los constituyentes de la muestra que tienen diferentes tiempos de migracio n. Cuando se usa un esta ndar interno, hay que vericar que no enmascare ninguno de los picos de la sustancia a examinar. Ca lculosA partir de los valores obtenidos, calcular el contenido del componente o componentes que se esta n determinando. Cuando se indique, se calcula el porcentaje de uno o ma s componentes de la muestra a examinar determinando las a reas del pico o picos como porcentaje de las a reas totales corregidas de todos los picos, excluyendo aquellos debidos a disolventes o reactivos agregados. Se recomienda usar un sistema de integracio n automa tico (sistema integrador o de adquisicio n y procesamiento de datos).
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APTITUD DEL SISTEMA DE ELECTROFORESIS CAPILAR

La eleccio n de los para metros de aptitud a usar depende del tipo de electroforesis capilar. Estos para metros son el factor de capacidad (K) usado u nicamente para la Electroforesis Electrocine tica Micelar, el nu mero de platos teo ricos (n), el factor de simetr a (AS) y la resolucio n (RS). Es de destacar que las expresiones teo ricas para n y RS se han descrito en las secciones anteriores, pero las ecuaciones ma s pra cticas que permiten la determinacio n de estos para metros de aptitud usando electroforetogramas se describen a continuacio n. El nu mero de platos teo ricos (n) se puede calcular a partir de la fo rmula: n = 5,54 (t / b0,5)2 en donde t es la distancia, en mm, a lo largo de la l nea base entre el punto de inyeccio n y la perpendicular trazada desde el ma ximo del pico en cuestio n; y b0,5 es el ancho del pico, en mm, a la mitad de su altura. La resolucio n (RS) se puede calcular a partir de la fo rmula: RS = 1,18(tb ta / b0,5b b0,5a) en donde tb y ta son las distancias, en mm, a lo largo de la l nea base, entre el punto de inyeccio n y la perpendicular trazada desde el
CULOS OBTENIDOS h1054i ARTI A POR BIOTECNOLOGI ISOELECTROENFOQUE
Este cap tulo proporciona gu as y procedimientos utilizados para la caracterizacio n de art culos obtenidos por biotecnolog a mediante isoelectroenfoque. Se lo ha armonizado con los cap tulos correspondientes en la Farmacopea Japonesa (JP) y la Farmacopea Europea (EP). Tambie n se muestran otras pruebas de caracterizacio n armonizadas en Art culos Obtenidos por Biotecnolog aAna lisis de Aminoa cidos h1052i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog a Electroforesis Capilarh1053i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog aMapeo de Pe ptidos h1055i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog aElectroforesis en Gel de Poliacrilamida h1056i y Art culos Obtenidos por Biotecnolog aValoracio n de Prote nas Totales h1057i.
N INTRODUCCIO
El isoelectroenfoque (IEF, por su sigla en ingle s) es un me todo de electroforesis que separa prote nas segu n sus puntos isoele ctricos. La separacio n se lleva a cabo en una capa gruesa de gel de poliacrilamida o agarosa que contiene una mezcla de electro litos
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anfote ricos (anfolitos). Cuando se aplica un campo ele ctrico, los anfolitos migran en el gel, creando un gradiente de pH. En algunos casos, se usan geles que contienen un gradiente de pH inmovilizado, preparado por incorporacio n de a cidos y bases de biles en regiones espec cas de la red de gel durante su preparacio n. Cuando las prote nas aplicadas alcanzan la zona del gel que tiene un pH igual a su punto isoele ctrico, su carga se neutraliza y la migracio n cesa. Los gradientes se pueden formar en diversos intervalos de pH, segu n la mezcla de anfolitos elegida.
APARATO
Un aparato para isoelectroenfoque consiste en un generador de corriente continua controlable, de salida estabilizada; una ca mara pla stica r gida de isoelectroenfoque que contienen una placa enfriada de un material adecuado para sostener el gel; y una cubierta pla stica con electrodos de platino que se conectan al gel por medio de papel absorbente de largo, ancho y grosor adecuados, impregnado con soluciones de electro litos ano dicos y cato dicos.
PRINCIPIOS GENERALES
Cuando una prote na esta en la posicio n de su punto isoele ctrico, no tiene carga neta y el campo ele ctrico no la puede mover en una matriz de gel. Sin embargo, se puede mover de dicha posicio n por difusio n. El gradiente de pH obliga a la prote na a mantenerse en la posicio n de su punto isoele ctrico, concentra ndola, este efecto de concentracio n se denomina "enfoque". Al aumentar el voltaje aplicado o reducir la carga de la muestra, hay una mejor resolucio n de las bandas. El voltaje aplicado esta limitado por el calor generado, que necesita ser disipado. El uso de geles delgados y una placa de enfriamiento eciente que este controlada por un circulador termosta tico evita que el gel se queme y permite un enfoque n tido. La separacio n se estima mediante la diferencia de pI m nima que es necesaria para separar dos bandas vecinas, del siguiente modo:
PROCEDIMIENTO
A menos que se indique lo contrario en una monograf a dada, se usara el procedimiento siguiente en geles de poliacrilamida en capa gruesa.
Preparacio n de los Geles

MontajeEsta compuesto de una placa de vidrio (A) sobre la cual se coloca la pel cula de polie ster (B) para facilitar la manipulacio n del gel, uno o ma s espaciadores (C), una segunda placa de vidrio (D) y pinzas para mantener unida la estructura (ver Figura 1).
en donde D es el coeciente de difusio n de la prote na; dpH/dx es el gradiente de pH; E es la intensidad del campo ele ctrico, en voltios por cent metro y dm/dpH es la variacio n de la movilidad del soluto en funcio n del pH en la regio n cercana al pI. Como no se pueden alterar D y dm/dpH para una prote na dada, la separacio n se puede mejorar usando un intervalo de pH ma s estrecho y aumentando la intensidad del campo ele ctrico. Desde un punto de vista operativo, se debe prestar especial atencio n a las caracter sticas de la muestra o a su preparacio n. La sal en una muestra puede ser un problema, y en lo posible es mejor preparar la muestra en agua desionizada o anfolitos al 2% usando dia lisis o ltracio n con gel si fuera necesario. Se han usado potenciales de 2500 voltios y se consideran o ptimos en ciertas condiciones. Se pueden aplicar hasta 30 vatios de potencia constante y generalmente se produce una separacio n completa en 1,5 a 3,0 horas. El tiempo necesario para completar el enfoque en capas delgadas de gel de poliacrilamida se determina colocando una prote na coloreada (p. ejemplo: hemoglobina) en distintas posiciones en la supercie del gel y aplicando el campo ele ctrico: el estado estacionario se alcanza cuando todas las aplicaciones dan un patro n de banda ide ntico. En algunos procedimientos, se determina que el enfoque esta completo segu n el tiempo transcurrido despue s de la aplicacio n de la muestra. La resolucio n entre las bandas de prote nas en un gel de IEF preparado con anfolitos transportadores puede ser muy buena. Se puede lograr una mejor resolucio n usando gradientes de pH inmovilizados donde las sustancias amortiguadoras, que son ana logas a los anfolitos transportadores, se copolimerizan dentro de la matriz de gel. Las prote nas que muestran valores pI que dieren tan so lo en 0,02 unidades de pH se pueden resolver usando un gel preparado con anfolitos transportadores, mientras que los gradientes de pH inmovilizados pueden resolver prote nas que dieran en aproximadamente 0,001 unidades de pH. El gel de IEF se puede usar como prueba de identidad cuando la migracio n en el gel se compara con una preparacio n esta ndar y prote nas de calibracio n de IEF; el gel de IEF se puede usar como prueba de l mite cuando la densidad de una banda en IEF se compara subjetivamente con la densidad de las bandas que aparecen en una preparacio n esta ndar, o se puede usar como prueba semi-cuantitativa cuando la densidad se mide usando un densito metro o instrumental similar para determinar la concentracio n relativa de prote na en las bandas.
Fig. 1 Molde Gel de Poliacrilamida al 7,5%Disolver 29,1 g de acrilamida y 0,9 g de metilenbisacrilamida en 100 mL de agua. Agregar la mezcla de anfolitos especicada en la monograf a individual a 2,5 volu menes de esta solucio n y diluir hasta 10 volu menes con agua. Mezclar cuidadosamente y desgasicar la solucio n. Preparacio n del MontajeColocar la pel cula de polie ster sobre la placa de vidrio inferior, aplicar el espaciador, colocar la segunda placa de vidrio y las pinzas. Antes de usar, colocar la mezcla en un agitador magne tico y agregar 0,25 volu menes de una solucio n de persulfato de amonio al 10% y 0,25 volu menes de tetrametilendiamina. Llenar inmediatamente con el gel el espacio entre las placas de vidrio del montaje. Solucio n Fijadora para Gel de Poliacrilamida de IsoelectroenfoqueMezclar 35 g de a cido sulfosalic lico y 100 g de a cido tricloroace tico en 1000 mL de agua. Solucio n de Tincio n Coomassie y Solucio n de Decoloracio n Usar las mismas soluciones indicadas en el cap tulo de informacio n general Art culos Obtenidos por Biotecnolog aElectroforesis en Gel de Poliacrilamida h1056i. ProcedimientoDesarmar el montaje y usando la pel cula de polie ster, transferir el gel al soporte enfriado humedecido con unos pocos mL de un l quido adecuado, procurando evitar que se formen
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burbujas de aire. Preparar las soluciones de prueba y las soluciones de referencia segu n se especica en la monograf a individual. Colocar sobre el gel las tiras de papel para la aplicacio n de muestras, de aproximadamente 10 mm 6 5 mm, e impregnar cada una con las cantidades prescritas de las soluciones de prueba y de referencia. Si la concentracio n proteica de la solucio n es demasiado baja, se pueden superponer varias tiras (hasta cuatro). Aplicar tambie n la cantidad descrita de una solucio n de prote nas con puntos isoele ctricos conocidos como marcadores de pH para calibrar el gel. En algunos procedimientos, el gel tiene ranuras moldeadas previamente donde se aplica la solucio n de la muestra, en lugar de usar tiras de papel impregnadas. Cortar dos tiras de papel de la longitud del gel e impregnarlas con las soluciones de los electro litos: a cida para el a nodo y alcalina para el ca todo. Las composiciones de las soluciones del a nodo y el ca todo se proporcionan en cada monograf a. Aplicar estos papeles absorbentes a cada lado del gel a varios mm del borde. Colocar la cubierta de modo que los electrodos este n en contacto con los papeles absorbentes (con respecto a los polos ano dico y cato dico). Proceder con el isoelectroenfoque aplicando los para metros descritos en la monograf a individual. Cortar la corriente cuando la migracio n de la mezcla de las prote nas esta ndar se haya estabilizado. Usando pinzas, retirar las tiras de aplicacio n de la muestra y los dos papeles absorbentes de los electrodos. Sumergir el gel en la Solucio n Fijadora para Gel de Poliacrilamida de Isoelectroenfoque. Incubar con agitacio n suave a temperatura ambiente durante 30 minutos. Escurrir la solucio n y agregar 200 mL de la Solucio n de Decoloracio n. Incubar con agitacio n durante 1 hora. Escurrir el gel y agregar la Solucio n de Tincio n Coomassie. Incubar durante 30 minutos. Decolorar el gel por difusio n pasiva con la Solucio n de Decoloracio n hasta que las bandas se vean bien contra un fondo transparente. Ubicar la posicio n e intensidad de las bandas en el electroferograma, como se prescribe en cada monograf a. Procedimiento AlternativoCuando una monograf a hace referencia al me todo general para el isoelectroenfoque antes descrito, se pueden usar variaciones en la metodolog a o el procedimiento, sujetas a validacio n. Estas variaciones incluyen el uso de geles previamente moldeados disponibles comercialmente; el uso de gradientes de pH inmovilizados; el uso de varillas de gel; y el uso de geles en placas de distintas dimensiones, incluyendo geles ultra delgados (0,2 mm); las variaciones en el procedimiento de aplicacio n de la muestra, incluyendo distintos volu menes de muestra o el uso de ma scaras de aplicacio n de la muestra o mechas absorbentes que no sean de papel; el uso de distintas condiciones de corrida, incluyendo variaciones en el campo ele ctrico dependiendo de las dimensiones del gel y el equipo y el uso de tiempos de migracio n jos en lugar de la interpretacio n subjetiva de la estabilidad de la banda; la inclusio n de una etapa de pre-enfoque; el uso de instrumentacio n automatizada; y el uso de geles de agarosa.
variaciones incluyen el uso de otros me todos de tincio n y el uso de aditivos de geles tales como detergentes no io nicos (por ejemplo: octilgluco sido) o detergentes zwitterio nicos (por ejemplo: CHAPS o CHAPSO) para evitar la aglomeracio n o precipitacio n de las prote nas. NOTALas siguientes son medidas preventivas generales que se pueden usar para mejorar el me todo. Las muestras se pueden aplicar a cualquier zona del gel, pero en general, se deben aplicar en zonas donde se espera que se enfoquen. Para proteger las prote nas de medios de pH extremo, las muestras no se deben aplicar cerca de ninguno de los electrodos. Durante el desarrollo del me todo, el analista puede intentar aplicar la prote na en tres posiciones del gel (por ejemplo: en el medio y en ambos extremos); el patro n de una prote na aplicada en los extremos opuestos del gel puede no ser ide ntico. Si un gel se enfoca por mucho tiempo, puede ocurrir un feno meno conocido como deriva cato dica, donde el gradiente de pH disminuye con el tiempo. Aunque no se entiende bien, la electroendosmosis y la absorcio n de dio xido de carbono son factores que pueden favorecer la deriva cato dica. La deriva cato dica se observa cuando la prote na enfocada migra hacia el extremo cato dico del gel. Se pueden usar gradientes de pH inmovilizados para resolver este problema. Es importante un enfriamiento eciente (aproximadamente 48) del lecho donde se encuentra el gel durante el enfoque. Las intensidades de campo elevadas usadas durante el isoelectroenfoque pueden producir recalentamiento y afectar la calidad del gel enfocado.&1S (USP30)
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CULOS OBTENIDOS h1055i ARTI AMAPEO POR BIOTECNOLOGI PTIDOS DE PE
Validacio n del Procedimiento

Cuando se emplean me todos alternativos al me todo general, es necesario validarlos. Se pueden usar los siguientes criterios para validar la separacio n: la formacio n de un gradiente de pH estable de las caracter sticas deseadas, evaluado usando marcadores de pH coloreados con puntos isoele ctricos conocidos; la comparacio n con el electroferograma suministrado con la sustancia qu mica de referencia para la preparacio n a examinar; y cualquier otro criterio de validacio n prescrito en la monograf a individual.
Este cap tulo proporciona gu as y procedimientos utilizados para la caracterizacio n de art culos obtenidos por biotecnolog a mediante mapeo de pe ptidos. Se lo ha armonizado con los cap tulos correspondientes en la Farmacopea Japonesa (JP) y la Farmacopea Europea (EP). Tambie n se muestran otras pruebas de caracterizacio n armonizadas en Art culos Obtenidos por Biotecnolog aAna lisis de Aminoa cidos h1052i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog a Electroforesis Capilarh1053i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog aIsoelectroenfoque h1054i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog aElectroforesis en Gel de Poliacrilamida h1056i y Art culos Obtenidos por Biotecnolog aValoracio n de Prote nas Totales h1057i.
N INTRODUCCIO
El mapeo de pe ptidos es una prueba de identidad para prote nas, especialmente para aquellas obtenidas por tecnolog a de ADN-r. Implica el tratamiento qu mico o enzima tico de una prote na, con la formacio n de fragmentos pept dicos y seguido de la separacio n e identicacio n de los fragmentos en una manera reproducible. Es una prueba de gran alcance capaz de identicar cambios en aminoa cidos individuales como resultado de acontecimientos tales como errores en la lectura de las secuencias de ADN complementario (ADNc) o mutaciones puntuales. El mapeo de pe ptidos es un procedimiento comparativo ya que la informacio n obtenida, comparada con un esta ndar de referencia o material de referencia tratado de manera similar, conrma la estructura primaria de la prote na, es capaz de detectar si ha habido alguna alteracio n en la estructura y demuestra la uniformidad del proceso y la estabilidad gene tica. Cada prote na presenta caracter sticas exclusivas que se
TODO VARIACIONES ESPECIFICADAS DEL ME GENERAL

Las variaciones del me todo general necesarias para el ana lisis de sustancias espec cas pueden estar especicadas en detalle en cada monograf a. Las variaciones pueden incluir el agregado de urea en el gel de corrida (una concentracio n 3 M a menudo es satisfactoria para mantener la prote na en solucio n pero se puede usar hasta 8 M). Algunas prote nas precipitan en su punto isoele ctrico. En este caso, se incluye la urea en la formulacio n del gel para mantener la prote na en solucio n. Si se usa urea, pueden usarse solamente soluciones recie n preparadas para evitar la carbamilacio n de la prote na. Otras
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deben entender bien para que el enfoque cient co y anal tico permita el desarrollo validado de un mapa pept dico que suministre suciente especicidad. Esta seccio n proporciona una ayuda detallada para la aplicacio n del mapeo de pe ptidos y su validacio n para caracterizar el producto proteico deseado, con el n de evaluar la estabilidad de la construccio n de expresio n de las ce lulas usadas para productos de ADN recombinante; para evaluar la uniformidad del proceso global; y para evaluar la estabilidad del producto, adema s de asegurar la identidad del producto proteico o de detectar la presencia de una variante de la prote na. El esquema presentado establece diferencias entre la calicacio n del me todo en una etapa temprana del proceso reglamentario, al nivel de Nuevo Fa rmaco en Investigacio n (IND, por sus siglas en ingle s) y la validacio n completa para apoyar una Solicitud de Nuevo Fa rmaco (NDA, por sus siglas en ingle s), Solicitud de Licencia de Producto (PLA, por sus siglas en ingle s), o Solicitud de Autorizacio n para Comercializacio n (MAA, por sus siglas en ingle s). Los conceptos de validacio n descritos concuerdan con el cap tulo de informacio n general Validacio n de Procedimientos Farmacopeicos h1225i y con el documento de la Conferencia Internacional sobre Armonizacio n (ICH) sobre Validacio n de Me todos Anal ticos.
DICO EL MAPA PEPTI

El mapeo de pe ptidos no es un me todo general, pero implica el desarrollo de mapas espec cos para cada prote na u nica. Si bien la tecnolog a evoluciona ra pidamente, existen ciertos me todos que esta n generalmente aceptados. Las variaciones de estos me todos se indican, cuando corresponda, en las monograf as espec cas. Un mapa pept dico se puede considerar como la huella digital de una prote na y es el producto nal de varios procesos qu micos que permiten una amplia comprensio n de la prote na analizada. Se necesitan cuatro pasos principales para el desarrollo del procedimiento: aislamiento y puricacio n de la prote na, si la prote na es parte de una formulacio n; escisio n selectiva de los enlaces pept dicos; separacio n cromatogra ca de los pe ptidos; y ana lisis e identicacio n de los pe ptidos. Una muestra de prueba se digiere y valora en paralelo con un esta ndar de referencia o material de referencia. La escisio n completa es ma s factible con enzimas tales como endoproteasas (por ejemplo: tripsina) en lugar de reactivos de escisio n qu mica. Un mapa debe contener sucientes pe ptidos para ser signicativo. Por otro lado, si hay demasiados fragmentos, el mapa puede perder su especicidad ya que de este modo es posible que muchas prote nas tengan los mismos perles.
Aislalmiento y Puricacio n
El aislamiento y la puricacio n son necesarios para el ana lisis de fa rmacos a granel o en formas farmace uticas que contienen excipientes y prote nas transportadoras que intereren y, cuando es necesario, se especica en la monograf a. Se debe validar la recuperacio n cuantitativa de prote nas de la forma farmace utica.
Escisio n Selectiva de Uniones Pept dicas

La seleccio n del enfoque usado para la escisio n de uniones pept dicas depende de la prote na que se esta analizando. Este proceso de seleccio n involucra la determinacio n del tipo de escisio n a emplearenzima tica o qu micay el tipo de agente de escisio n dentro de la categor a elegida. En la Tabla 1 se muestran varios agentes de escisio n y su especicidad. Esta no es una lista completa y se ampliara a medida que se identiquen otros agentes de escisio n. Tratamiento Previo de la MuestraSegu n el taman o o la conguracio n de la prote na, se pueden usar distintos enfoques en el tratamiento previo de las muestras. Para los anticuerpos monoclonales, es necesario separar las cadenas pesadas y livianas antes del mapeo. Si se usa tripsina como agente de escisio n para las prote nas que tengan una masa molecular mayor que 100 000 Da, se deben proteger los residuos lisina por citraconilacio n o maleilacio n; de lo contrario, se generan demasiados pe ptidos.
Tratamiento Previo del Agente de Escisio nPodr a ser necesario el tratamiento previo de puricacio n de los agentes de escisio n, especialmente los agentes enzima ticos, con el n de asegurar la reproducibilidad del mapa. Por ejemplo, la tripsina usada como agente de escisio n debe tratarse con tosil-L-fenilalanina clorometilcetona para inactivar la quimotripsina. Otros me todos, tales como la puricacio n de la tripsina por HPLC o la inmovilizacio n de enzimas en un soporte de gel, han resultado ecaces cuando so lo hay disponible una pequen a cantidad de prote na. Tratamiento Previo de la Prote naBajo ciertas condiciones, podr a ser necesario concentrar la muestra o separar la prote na de sustancias y estabilizadores usados en la formulacio n del producto, si e stos intereren con el procedimiento de mapeo. Los procedimientos f sicos usados para el tratamiento previo pueden incluir la ultraltracio n, la cromatograf a en columna y la liolizacio n. Otros tratamientos previos tales como el agregado de agentes caotro picos (por ejemplo, urea) se pueden usar para desplegar la prote na antes del mapeo. Para permitir que la enzima tenga acceso total a los sitios de escisio n y que la prote na sufra algu n grado de desplegamiento, a menudo es necesario reducir y alquilar las uniones disulfuro antes de la digestio n. La digestio n con tripsina puede introducir ambigu edades en el mapa tr ptico debido a reacciones secundarias durante la digestio n, tales como escisio n no espec ca, desamidacio n, isomerizacio n de disulfuros, oxidacio n de residuos de metionina, o formacio n de grupos pirogluta micos creados por desamidacio n de glutamina en el extremo N-terminal de un pe ptido. Adema s, se pueden producir picos por autohidro lisis de la tripsina. Sus intensidades dependen de la relacio n de la tripsina con respecto a la prote na. Para evitar la autohidro lisis, se pueden preparar soluciones de proteasas a un pH que no sea o ptimo (por ejemplo, pH 5 para la tripsina), lo cual signica que la enzima so lo se activa cuando se diluye con la solucio n amortiguadora de digestio n. ptimas de Digestio Establecimiento de las Condiciones O n Los factores que afectan la integridad y ecacia de la digestio n de las prote nas son aquellos que podr an afectar a cualquier reaccio n qu mica o enzima tica. pHEl pH de la mezcla de digestio n se determina emp ricamente para asegurar el desempen o o ptimo de un agente de escisio n dado. Por ejemplo, cuando se usa bromuro de ciano geno como agente de escisio n, es necesario un ambiente altamente a cido (por ejemplo: pH 2, a cido fo rmico); sin embargo, al usar tripsina como agente de escisio n, un ambiente levemente alcalino (pH 8) es o ptimo. Como regla general, el pH del entorno de la reaccio n no debe alterar la integridad qu mica de la prote na durante la digestio n y no debe cambiar durante el transcurso de la reaccio n de fragmentacio n. TemperaturaUna temperatura entre 258 y 378 es adecuada para la mayor a de las digestiones. La temperatura empleada esta prevista para minimizar las reacciones qu micas secundarias. El tipo de prote na en ana lisis determinara la temperatura del medio de reaccio n ya que algunas prote nas son ma s susceptibles a la desnaturalizacio n a medida que aumenta la temperatura de la reaccio n. Por ejemplo, la digestio n de somatropina bovina recombinante se realiza a 48 ya que a temperaturas ma s altas precipita durante la digestio n. TiempoSi se dispone de suciente muestra, se puede realizar un estudio en funcio n del tiempo a n de determinar el tiempo o ptimo para obtener un mapa reproducible y evitar una digestio n incompleta. El tiempo de digestio n var a de 2 a 30 horas. La reaccio n se detiene al agregar un a cido que no interera en el mapa tr ptico, o por congelacio n. Cantidad de Agente de Escisio nSi bien se usan cantidades de agente de escisio n en exceso para lograr tiempos de digestio n razonablemente ra pidos (es decir, 6 a 20 horas), la cantidad se minimiza para evitar su contribucio n al perl cromatogra co. Generalmente se usa una relacio n prote na-proteasa entre 20 : 1 y 200 : 1. Se recomienda agregar el agente de escisio n en dos o ma s etapas para optimizar la escisio n. Sin embargo, el volumen nal de la reaccio n se mantiene lo sucientemente pequen o para facilitar el siguiente paso en el mapeo de pe ptidosel paso de separacio n. Para determinar los artefactos de digestio n que podr an interferir con los ana lisis siguientes, se realiza una determinacio n con un blanco usando un control de digestio n con todos los reactivos excepto la prote na en ana lisis.
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Tabla 1. Ejemplos de Agentes de Escisio n Tipo Enzima tico Agente Tripsina, EC 3.4.21.4 Quimotripsina, EC 3.4.21.1 Pepsina A (Pepsina), EC 3.4.23.1 Lisil endopeptidasa (endopeptidasa Lys-C), EC 3.4.21.50 Glutamil endopeptidasa (endoproteinasa Glu-C; V8 proteasa); (de la cepa S. aureus V8), EC 3.4.21.19 Peptidil-Asp metaloendopeptidasa (endoproteinasa Asp-N), EC 3.4.24.33 Clostripain (endopeptidasa Arg-C), EC 3.4.22.8 Bromuro de ciano geno cido 2-nitro-5-tiocianobenzoico A cido O-yodosobenzoico A cido diluido A BNPS-Escatol Especicidad Extremo C-terminal de Arg y Lys Extremo C-terminal de residuos hidro fobos (por ej., Leu, Met, Ala, aroma ticos) Digestio n no espec ca Extremo C-terminal de Lys Extremo C-terminal de Glu y Asp Extremo N-terminal de Asp Extremo C-terminal de Arg Extremo C-terminal de Met Extremo N-terminal de Cys Extremo C-terminal de Trp y Tyr Asp y Pro Trp
Qu mico
Separacio n Cromatogra ca
Se usan muchas te cnicas para separar pe ptidos para mapeos. La eleccio n de la te cnica depende de la prote na estudiada. Las te cnicas ecaces para la separacio n de pe ptidos se muestran en la Tabla 2.
Tabla 2. Te cnicas Usadas para la Separacio n de Pe ptidos Cromatograf a L quida de Alta Resolucio n en Fase Reversa (RP-HPLC) Cromatograf a de Intercambio Io nico (IEC) Cromatograf a de Interaccio n Hidro foba (HIC) Electroforesis en Gel de Poliacrilamida (PAGE), sin desnaturalizacio n Electroforesis en Gel de Poliacrilamida con Dodecilsulfato de Sodio (SDS-PAGE) Electroforesis Capilar (CE) Cromatograf a en Papel Electroforesis de Alto Voltaje en Papel (HVPE) En esta seccio n, se describe un me todo de HPLC en fase reversa (RP-HPLC) ampliamente usado en la separacio n cromatogra ca. La pureza de los disolventes y de las fases mo viles es un factor cr tico en la separacio n por HPLC. Se recomienda usar agua y disolventes de grado HPLC, disponibles comercialmente, para la RPHPLC. Los gases disueltos presentan un problema en los sistemas de gradientes donde la solubilidad del gas en un disolvente puede ser menor en una mezcla que en un disolvente solo. La desgasicacio n al vac o y la agitacio n por ultrasonido suelen ser u tiles para la desgasicacio n. Las part culas so lidas presentes en los disolventes se introducen en el sistema HPLC; pueden dan ar los sellos de las va lvulas de las bombas u obstruir la parte superior de la columna cromatogra ca. Se recomienda ltrar antes y despue s de la bomba. Columna Cromatogra caLa seleccio n de una columna cromatogra ca se determina emp ricamente para cada prote na. Las o 300 A y soporte de s columnas con taman o de poro de 100 A lice pueden proporcionar una separacio n o ptima. Para pe ptidos ma s pequen os, los rellenos de columna como el octilsilano unido qu micamente a part culas de s lice totalmente porosas, de 3 a 10 mm de dia metro (L7) y el octadecilsilano unido qu micamente a micropart culas porosas de s lice o cera mica, de 3 a 10 mm de dia metro (L1) son ma s ecientes que el relleno de silano de butilo unido qu micamente a part culas de s lice totalmente porosas, de 5 a 10 mm de dia metro (L26). DisolventeEl disolvente ma s comu nmente usado es agua con acetonitrilo como modicador orga nico al cual se le agrega menos de 0,1% de a cido triuoroace tico. Si fuera necesario, agregar alcohol isoprop lico o alcohol n-prop lico para solubilizar los componentes de digestio n, siempre que el agregado no aumente excesivamente la viscosidad de los componentes.
Fase Mo vilSe usan fases amortiguadas que contienen fosfato para exibilizar la seleccio n de las condiciones de pH ya que los cambios en el pH en el intervalo de 3,0 a 5,0 mejoran la separacio n de los pe ptidos que contienen residuos a cidos (por ejemplo, a cido gluta mico y a cido aspa rtico). Tambie n se han usado fosfatos de sodio o potasio, acetato de amonio y a cido fosfo rico, con un pH entre 2 y 7 (o superior para soportes a base de pol meros), con gradientes de acetonitrilo. Tambie n se usa a menudo a cido triuoroace tico que contiene acetonitrilo. Seleccio n del GradienteLos gradientes pueden ser lineales, no lineales o incluir funciones escalonadas. Se recomienda un gradiente gradual a n de separar mezclas complejas. Los gradientes se optimizan para resolver claramente uno o dos picos que sera n los picos marcadores de la prueba. Seleccio n Isocra ticaLos sistemas isocra ticos de HPLC que usan una u nica fase mo vil se emplean por su conveniencia de uso y las respuestas mejoradas del detector. A menudo es dif cil de establecer la composicio n o ptima de una fase mo vil para obtener una resolucio n clara de cada pico. En sistemas isocra ticos de HPLC no deben usarse fases mo viles donde un cambio leve en la relacio n de sus componentes o en el pH tenga un efecto importante en los tiempos de retencio n de los picos del mapa pept dico. Otros Para metrosGeneralmente es necesario controlar la temperatura de la columna para lograr una buena reproducibilidad. Las velocidades de ujo para las fases mo viles var an de 0,1 a 2,0 mL por minuto y la deteccio n de pe ptidos se realiza con un detector UV entre 200 nm y 230 nm. Se han usado otros me todos de deteccio n (por ejemplo: derivatizacio n postcolumna), pero no son tan robustos ni tan versa tiles como la deteccio n UV. Aptitud del SistemaEl apartado Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i suministra un medio experimental para medir el desempen o global del me todo de prueba. El criterio de aceptacio n para la aptitud del sistema depende de la identicacio n de los para metros cr ticos de prueba que afectan la interpretacio n y aceptacio n de los datos. Estos para metros cr ticos tambie n son criterios que controlan la digestio n y el ana lisis de pe ptidos. Un indicador de que se alcanzo el punto nal de digestio n deseado es la comparacio n con un esta ndar de referencia o un material de referencia, el cual se trata exactamente como el art culo en ana lisis. El uso de un Esta ndar de Referencia USP paralelamente con la prote na en ana lisis es cr tico en el desarrollo y establecimiento de los l mites de aptitud del sistema. Adema s, se debe incluir el cromatograma de una muestra con el Esta ndar de Referencia USP o material de referencia a los efectos de la comparacio n. Otros indicadores pueden incluir la inspeccio n visual de la solubilidad de la prote na o el pe ptido, la ausencia de prote na intacta, o la medicio n de respuestas de un pe ptido dependiente de la digestio n. Los para metros cr ticos de aptitud del sistema para el ana lisis de pe ptidos dependera de cada modo de separacio n y deteccio n de pe ptidos y de los requisitos de ana lisis de datos.
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Cuando se usa el mapeo de pe ptidos como prueba de identicacio n, los requisitos de aptitud del sistema para los pe ptidos identicados incluyen la selectividad y la precisio n. En este caso, al igual que cuando se realiza la identicacio n de variantes de prote nas, la identicacio n de la estructura primaria de los fragmentos pept dicos en el mapa pept dico suministra una vericacio n de la estructura primaria conocida y la identicacio n de las variantes de las prote nas por comparacio n con el mapa pept dico del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia para la prote na especicada. El me todo de eleccio n para la determinacio n de la resolucio n de peptidos, es el uso de un Esta ndar de Referencia USP o material de referencia digerido para una prote na dada. Para el ana lisis de una variante de una prote na, se puede usar una mezcla caracterizada de una variante y un esta ndar de referencia, especialmente si la variante del pe ptido se encuentra en una regio n menos resuelta del mapa. El ndice de uniformidad del patro n puede ser simplemente el nu mero de pe ptidos principales detectados. La uniformidad del patro n de pe ptidos se puede denir mejor por la resolucio n de los picos de los pe ptidos. Los para metros cromatogra cos tales como la resolucio n pico a pico, el ancho ma ximo de picos, factores de asimetr a de los picos y la eciencia de la columna se pueden usar para denir la resolucio n pept dica. Dependiendo de la prote na en ana lisis y el me todo de separacio n que se use, pueden ser necesarios requisitos de resolucio n de un solo pe ptido o de mu ltiples pe ptidos. El ana lisis repetido del digerido del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia para la prote na en ana lisis produce medidas de precisio n y recuperacio n cuantitativa. La recuperacio n de los pe ptidos identicados generalmente se puede determinar por el uso de esta ndares pept dicos internos o externos. La precisio n se expresa como la desviacio n esta ndar relativa (RSD). Es de esperar diferencias en la recuperacio n y precisio n de los pe ptidos identicados; por lo tanto, hay que establecer los l mites de aptitud del sistema tanto para la recuperacio n como para la precisio n de los pe ptidos identicados. Estos l mites son exclusivos para cada prote na y se especicara n en las monograf as individuales. La comparacio n visual de los tiempos de retencio n relativos, las respuestas de los picos, el nu mero de picos y el patro n de elucio n global se completa inicialmente. Luego se complementa y respalda con el ana lisis matema tico de los cocientes de respuesta de los picos y el perl cromatogra co de una mezcla 1 : 1 (v/v) de la muestra y el digerido del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia. Si todos los picos en el digerido de la muestra y en el digerido del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia tienen los mismos tiempos de retencio n relativos y cocientes de respuesta de los picos, se conrma la identidad de la muestra en ana lisis. Si los picos que inicialmente eluyeron con tiempos de retencio n relativos signicativamente diferentes luego se observan como picos u nicos en la mezcla 1 : 1, la diferencia inicial ser a una indicacio n de la variabilidad del sistema. Sin embargo, si se observan picos separados en la mezcla 1 : 1, esto indicar a la no equivalencia de los pe ptidos en cada pico. Si un pico en la mezcla 1 : 1 es signicativamente ma s ancho que el pico correspondiente en la muestra y el digerido del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia, podr a indicar la presencia de pe ptidos diferentes. Se ha propuesto y aplicado un software de reconocimiento de patrones para el ana lisis de los datos del mapeo de pe ptidos, pero los problemas relacionados con la validacio n del software impiden que pueda usarse en una prueba farmacopeica en el futuro cercano. Se han usado otros enfoques automatizados que emplean fo rmulas matema ticas, modelos y reconocimiento de patrones. Se han propuesto enfoques tales como, por ejemplo, la identicacio n automatizada de compuestos por espectroscopia IR y la aplicacio n de ana lisis espectral UV con arreglo de diodos para la identicacio n de pe ptidos. Estos me todos tienen limitaciones debido a resoluciones inadecuadas, elucio n conjunta de fragmentos o diferencias absolutas en las respuestas de los picos entre el Esta ndar de Referencia USP o material de referencia y los fragmentos de la muestra. La comparacio n nume rica de los tiempos de retencio n y a reas o alturas de los picos se puede realizar para un grupo seleccionado de picos relevantes correctamente identicados en los mapas pept dicos. Las a reas de los picos se pueden calcular usando un pico como referencia interna con relativamente poca variacio n, teniendo en cuenta que la integracio n del a rea del pico es sensible a la variacio n de la l nea base y posiblemente introduzca un error en el ana lisis. De modo alternativo, se puede calcular la altura porcentual del pico de
cada pe ptido con respecto a la suma de todas las alturas de los picos para la muestra de prueba. El porcentaje se compara luego con el del pico correspondiente del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia. La posibilidad de autohidro lisis de la tripsina se controla mediante la produccio n de un mapa pept dico blanco que es el mapa obtenido cuando la solucio n blanco se trata con tripsina. El requisito m nimo para la calicacio n de un mapeo de pe ptidos es un procedimiento de prueba aprobado que incluya la aptitud del sistema como control de prueba. En general, para un IND, basta con la calicacio n del mapeo de pe ptidos para una prote na. A medida que que avanza el proceso de aprobacio n reglamentario de la prote na, calicaciones adicionales de la prueba pueden incluir una validacio n parcial del procedimiento anal tico con el n de asegurar que el me todo funciona en la forma planeada en el desarrollo del mapa pept dico para la prote na especicada.
Ana lisis e Identicacio n de Pe ptidos

Esta seccio n es una gu a para el uso del mapeo de pe ptidos durante la investigacio n que respalda las solicitudes reglamentarias. El uso de un mapa pept dico como herramienta cualitativa no exige la caracterizacio n completa de los picos de pe ptidos individuales. Sin embargo, la validacio n del mapeo de pe ptidos en respaldo de las solicitudes reglamentarias exige la caracterizacio n rigurosa de cada pico en el mapa pept dico. Los me todos para caracterizar picos var an desde la secuenciacio n N-terminal de cada pico seguida por un ana lisis de aminoa cidos hasta el uso de espectrometr a de masas (MS, por sus siglas en ingle s). A los efectos de la caracterizacio n, cuando se usan la secuenciacio n N-terminal y el ana lisis de aminoa cidos, la separacio n anal tica se realiza a mayor escala. Ya que el aumento en escala puede afectar la resolucio n de los picos de pe ptidos, es necesario asegurar con datos emp ricos que no haya pe rdida de resolucio n debida al aumento en escala. Se recogen los eluatos correspondientes a picos de pe ptidos espec cos, se concentran al vac o y se cromatograf an nuevamente, segu n sea necesario. El ana lisis de aminoa cidos de los fragmentos puede estar limitado por el taman o del pe ptido. Si el Nterminal esta bloqueado, puede ser necesario desbloquearlo antes de la secuenciacio n. Tambie n se puede usar la secuenciacio n del Cterminal de las prote nas o una combinacio n de digestio n por carboxipeptidasa y espectrometr a de masas por tiempo de vuelo con ionizacio n por desorcio n la ser asistida por matrices (MALDI-TOF MS, por sus siglas en ingle s) para su caracterizacio n. El uso de MS para la caracterizacio n de fragmentos pept dicos se hace por infusio n directa de pe ptidos aislados o por el uso en l nea de cromatograf a l quida y espectrometr a de masas (LC-MS, por sus siglas en ingle s) para el ana lisis estructural. En general, incluye el electrospray y analizadores MALDI-TOF as como tambie n el bombardeo ato mico ra pido (FAB, por sus siglas en ingle s). Tambie n se ha usado la MS en serie para secuenciar una prote na modicada y para determinar la modicacio n aminoac dica producida. La comparacio n de los espectros de masas de los digeridos antes y despue s de la reduccio n proporciona un me todo para asignar las uniones disulfuro a los diferentes pe ptidos que contienen sulfhidrilos. Si hay regiones de la estructura primaria que no se demuestran claramente en el mapa pept dico, podr a sea necesario realizar un mapa pept dico secundario. El objetivo de un me todo validado de caracterizacio n de una prote na a trave s del mapeo de pe ptidos es conciliar y explicar al menos el 95% de la composicio n teo rica de la estructura de la prote na.
PTIDOS PARA LA EL USO DEL MAPEO DE PE N DE ESTABILIDAD GENE TICA EVALUACIO

Se puede usar un mapa pept dico validado para evaluar la integridad de la secuencia primaria prevista de un producto prote co (es decir, su estabilidad gene tica). Tambie n se puede usar para determinar la uniformidad lote a lote del proceso de productos biotecnolo gicos. Adema s, el desempen o de la expresio n de la prote na en el sistema de produccio n se evalu a mejor a trave s del mapeo de pe ptidos de la prote na expresada. Los mapas pept dicos de prote nas producidos en diversas etapas de la expresio n de la prote na, incluyendo un punto ma s alla del tiempo normal de
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expresio n de la prote na, comparados con los de un Esta ndar de Referencia USP o material de referencia, sirven para evaluar la estabilidad gene tica del sistema de expresio n en funcio n del tiempo. Pueden surgir variantes de las secuencias de las prote nas a partir de una variacio n gene tica en el ADN (mutacio n puntual) o como un error en la traduccio n. El mejor enfoque es un mapa pept dico validado para la deteccio n de variantes de prote nas. Sin embargo, se deben considerar las limitaciones inherentes del mapeo de pe ptidos. La deteccio n de una variante estructurada es posible u nicamente si la variante pept dica correspondiente es fa cil de aislar y caracterizar. Para establecer estabilidad gene tica es necesario usar una bater a de me todos bioqu micos, siempre que las variantes tengan propiedades distintas de las de la prote na normal.
N VALIDACIO Factores Cr ticos

La validacio n del mapeo de pe ptidos exige el disen o de un protocolo que describa detalladamente el experimento a realizar y los criterios para la aceptacio n del mapa. Los criterios para la aceptacio n del mapeo incluyen l mites de deteccio n, especicidad, linealidad, rango, exactitud, precisio n y estabilidad de los reactivos. La reproducibilidad del mapa pept dico es un elemento cr tico en su utilizacio n como prueba de identidad y para conrmar la estabilidad gene tica. Se analizara n aquellos aspectos te cnicos del mapeo de pe ptidos que inuencian la reproducibilidad del mapa. El ajuste de los l mites, con respecto a la cuanticacio n (a rea o altura del pico) e identicacio n (tiempos de retencio n) para el grupo seleccionado de picos relevantes se basa en observaciones emp ricas. Estos l mites detectan diferencias signicativas entre la muestra y el Esta ndar de Referencia USP o material de referencia dentro de una serie de ana lisis. Otro problema cr tico es la recuperacio n de pe ptidos y su efecto sobre la determinacio n y reproducibilidad de las a reas de los picos y en el establecimiento de criterios de aceptacio n. Los criterios de recuperacio n tratan todos los aspectos de metodolog a de la prueba, desde la digestio n hasta las condiciones cromatogra cas. La determinacio n de la recuperacio n de pe ptidos incluye el ana lisis cuantitativo de aminoa cidos, el agregado de cantidades conocidas, el marcado radioactivo y la sumatoria UV. Una recuperacio n general de aproximadamente el 80% se considera satisfactoria. La recuperacio n de pe ptidos individuales es ma s problema tica y se maneja caso por caso. Los factores cr ticos de la validacio n de un mapa pept dico son los siguientes. Procedimientos de Prueba Documentados por EscritoEstos procedimientos incluyen una descripcio n detallada del me todo anal tico en donde se denen los reactivos, equipos, preparacio n de la muestra, me todo de ana lisis y ana lisis de los datos. Protocolo de Validacio nSe prepara un protocolo que incluye un procedimiento para la validacio n de la prueba. Criterio de Aceptacio nEl criterio puede ser m nimo en las primeras etapas, pero debe denirse mejor a medida que progresan los estudios de validacio n. Informe de los ResultadosEn los resultados del estudio de validacio n se documentan los para metros anal ticos indicados en el protocolo de validacio n. Revalidacio n del Procedimiento de la PruebaSi el me todo empleado requiere alteraciones que podr an afectar los para metros anal ticos previamente evaluados en la validacio n, es necesario volver a validar el procedimiento de la prueba. Si hay cambios signicativos en el procesamiento del art culo, en los laboratorios que realizan el ana lisis, en la formulacio n de los productos a granel o terminados y en cualquier otro para metro importante, se requerira la revalidacio n de los me todos.
Requisitos
Precisio n Precisio n Intra PruebaEs una medida de la reproducibilidad del mapeo de pe ptidos. Los dos pasos cr ticos en el mapeo de pe ptidos son la fragmentacio n (es decir, digestio n) y la separacio n de
pe ptidos. La precisio n es aceptable cuando los tiempos de retencio n absolutos y las a reas de los picos relativos son constantes de corrida a corrida y la variacio n promedio en el tiempo de retencio n es pequen a en relacio n con la del pico de referencia interno seleccionado. La reproducibilidad del mapa se puede mejorar si se usa un horno con columna con control de temperatura, si se equilibra exhaustivamente el sistema antes de comenzar la prueba, si primero se realiza una determinacio n con un blanco (mezcla de digerido control sin prote na) para minimizar los efectos de la primera corrida y si se intercala perio dicamente un digerido del material de referencia o del Esta ndar de Referencia USP con las muestras de prueba para evaluar la variacio n sistema tica de la cromatograf a. Los criterios para validar el paso de fragmentacio n son similares a los descritos a continuacio n para la separacio n de pe ptidos, pero se cumplen para pruebas consecutivas de una serie de digeridos preparados por separado de la prote na en ana lisis. Los criterios para la validacio n del paso de separacio n de pe ptidos incluyen lo siguiente: 1. La desviacio n esta ndar promedio de los tiempos de retencio n absolutos de todos los picos principales para un conjunto de pruebas consecutivas del mismo digerido no excede un criterio de aceptacio n especicado. 2. La desviacio n esta ndar promedio del a rea de pico absoluta para todos los picos principales totalmente resueltos no excede un porcentaje especicado. Precisio n Inter PruebasEsta es una medida de la reproducibilidad del mapeo de pe ptidos cuando la prueba se realiza en distintos d as, por distintos analistas, en distintos laboratorios, con reactivos o enzimas de distintos proveedores o con distintos lotes del mismo proveedor, con instrumental diferente, en columnas de fabricacio n distinta o columnas de igual fabricacio n pero de lotes distintos y en columnas individuales de la misma fabricacio n y el mismo lote. Si bien ser a preferible, desde una perspectiva cient ca, validar el efecto de todas estas variables sobre la precisio n, un enfoque pra ctico es validar la prueba usando aquellas variables que sean ma s probables de encontrar en condiciones operativas. Se pueden incluir variables adicionales cuando sea necesario. El disen o experimental permite al analista realizar comparaciones usando tiempos de retencio n de picos y a reas de picos que se expresan con relacio n a un pico de referencia interno altamente reproducible dentro del mismo cromatograma. El a rea de pico relativa se expresa como el cociente entre el a rea del pico y el a rea del pico de referencia interna. El tiempo de retencio n relativo se puede expresar como la diferencia entre el tiempo de retencio n absoluto y el tiempo de retencio n del pico de referencia. El uso de valores relativos elimina la necesidad de realizar correcciones separadas por diferencias de volumen de un inyector a otro, por unidades de medicio n de las a reas de los picos, por dimensiones de la columna y por volu menes de espacio muerto de los instrumentos. Se espera que la variabilidad en los tiempos de retencio n y en las a reas de los picos para los experimentos de Precisio n Inter Pruebas sea ligeramente mayor que la variabilidad observada para la Precisio n Intra Prueba. RobustezLa composicio n de la Fase Mo vil, la calidad de la proteasa o la pureza de los reactivos qu micos, la variacio n y edad de la columna y la estabilidad del digerido son todos factores que podr an afectar el desempen o general de la prueba y su reproducibilidad. Se evalu an las tolerancias para cada para metro clave y se establecen los l mites de la l nea de base en caso de que la prueba se use para la liberacio n rutinaria de lotes. Fase Mo vilLa composicio n de la Fase Mo vil se optimizara para obtener la ma xima resolucio n de pe ptidos en todo el perl de elucio n. Se preere un equilibrio entre la resolucio n o ptima y la reproducibilidad general. Un pH menor podr a mejorar la separacio n entre los picos pero podr a acortar la vida de la columna, dando como resultado una falta de reproducibilidad. Los mapas pept dicos a un pH por encima o por debajo del pH del procedimiento se comparan con el mapa pept dico obtenido al pH del procedimiento y se observa si hay diferencias signicativas; tambie n se revisan con respecto a los criterios de aceptacio n establecidos en el protocolo de validacio n. Calidad de la Proteasa o Pureza de los Reactivos Qu micosSe prepara y digiere una muestra del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia para la prote na en ana lisis con distintos lotes del agente de escisio n. En los cromatogramas para cada
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digerido se comparan las a reas de los picos, su forma y el nu mero de picos. Se puede aplicar el mismo procedimiento a otras sustancias qu micas o tratamientos previos usados durante la preparacio n de la muestra, como por ejemplo los reactivos reductores y de carboximetilacio n. Consideraciones de la ColumnaLa variabilidad entre una columna y otra, incluso dentro de un mismo lote, puede afectar el desempen o de la columna en el desarrollo de mapas pept dicos. El taman o de la columna tambie n puede producir diferencias signicativas. Se digiere un Esta ndar de Referencia USP o material de referencia de la prote na de prueba y el digerido se cromatograf a en distintos lotes de columna de un mismo fabricante. Luego se evalua el perl de elucio n general, los tiempos de retencio n, la resolucio n de selectividad y la recuperacio n de los mapas. Para evaluar la robustez de la columna durante toda su vida u til, se debe realizar una prueba de mapeo de pe ptidos en distintas columnas y variar signicativamente el nu mero de inyecciones (por ejemplo, de 10 inyecciones a 250 inyecciones). Los mapas resultantes se comparan buscando diferencias signicativas en el ensanchamiento de los picos, a rea de los picos y resolucio n general. A medida que la columna envejece, podr a observarse un aumento en la contrapresio n que podr a afectar los mapas pept dicos. Una precaucio n razonable en el uso de columnas de mapeo de pe ptidos es seleccionar columnas alternativas, en caso de que las columnas originales no este n disponibles o dejen de fabricarse. Realizar una prueba de mapeo de pe ptidos usando columnas equivalentes de distintos fabricantes y examinar los mapas. Las diferencias en la forma y el taman o de las part culas, el taman o y volumen de los poros, la carga de carbono y el recubrimiento terminal pueden dar lugar a diferencias signicativas en los tiempos de retencio n, la selectividad del perl de elucio n, la resolucio n y la recuperacio n. Podr a ser necesario hacer ligeras modicaciones en el perl del gradiente para lograr mapas equivalentes cuando se usen columnas de distintos fabricantes. [NOTADebe considerarse la equivalencia entre la instrumentacio n usada para la validacio n de la prueba y para la prueba de control de calidad de rutina. Podr a ser preferible usar el mismo sistema HPLC para todas las aplicaciones. De lo contrario, se determina la equivalencia de los sistemas, lo cual puede exigir algunos cambios en las condiciones de la prueba cromatogra ca.] Estabilidad del DigeridoSe evalua el tiempo de almacenamiento de un digerido y las condiciones de almacenamiento antes de la cromatograf a. Se almacenan varias al cuotas de un mismo digerido en distintas condiciones de almacenamiento y se cromatograf an. Estos mapas luego se evaluan para buscar diferencias signicativas. ReproducibilidadSe repite la determinacio n de varios de los para metros indicados anteriormente usando el mismo Esta ndar de Referencia USP o material de referencia y la misma muestra de la prueba en al menos dos laboratorios distintos y por dos analistas, equipados con sistemas HPLC similares. Luego se evalu an los mapas pept dicos generados para ver si existen diferencias signicativas.&1S (USP30)
Biotecnolog aElectroforesis Capilar h1053i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog aIsoelectroenfoque h1054i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog aMapeo de Pe ptidos h1055i y Art culos Obtenidos por Biotecnolog aValoracio n de Prote nas Totales h1057i.
N INTRODUCCIO
La electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE) se usa para la caracterizacio n cualitativa de prote nas en preparaciones biolo gicas, para control de pureza y para determinaciones cuantitativas. Este procedimiento se limita al ana lisis de prote nas con un peso entre 14 000 y 100 000 Da. Es posible ampliar la extensio n de pesos de una electroforesis en gel con diversas te cnicas (por ejemplo, geles de gradiente o ciertos sistemas amortiguadores de pH), pero dichas te cnicas no se tratan en este cap tulo. La electroforesis en gel anal tica es un me todo adecuado para identicar y evaluar la homogeneidad de las prote nas en los fa rmacos. Estos me todos se usan de forma rutinaria para estimar los pesos moleculares de subunidades prote cas y para determinar las composiciones de subunidades prote cas puricadas. Hay geles y reactivos listos para usar disponibles comercialmente, que pueden usarse en lugar de los que se describen en este cap tulo, siempre que proporcionen resultados equivalentes y que cumplan con los requisitos de validacio n.
PRINCIPIO GENERAL DE LA ELECTROFORESIS

Bajo la inuencia de un campo ele ctrico, las part culas cargadas migran en la direccio n del electrodo que tiene polaridad opuesta. En la electroforesis en gel, los movimientos de las part culas se retrasan por interacciones con la matriz de gel que las rodea, la cual actu a como un tamiz molecular. Las interacciones opuestas de la fuerza ele ctrica y del tamiz molecular dan como resultado velocidades de migracio n diferenciales, de acuerdo a los taman os, formas y cargas de las part culas. Debido a sus diferentes propiedades sicoqu micas, las distintas macromole culas de una mezcla migran a distintas velocidades durante la electroforesis y as se separan, en fracciones discretas. Las separaciones electrofore ticas pueden realizarse en sistemas sin fases de soporte (por ejemplo, separacio n por electroforesis capilar en solucio n libre) y en medios estabilizadores, tales como placas de capa delgada, pel culas o geles.
STICAS DE LOS GELES DE CARACTERI POLIACRILAMIDA PARA ELECTROFORESIS NAS DE PROTEI

Las propiedades de tamizado de los geles de poliacrilamida se establecen mediante la red tridimensional de bras y poros formada cuando la bisacrilamida bifuncional se entrecruza en forma adyacente a las cadenas de poliacrilamida. La polimerizacio n se cataliza con un sistema generador de radicales libres compuesto de persulfato de amonio y N,N,N,N-tetrametiletilendiamina (TEMED). A medida que aumenta la concentracio n de acrilamida de un gel, disminuye el taman o efectivo de sus poros. El taman o efectivo del poro de un gel se dene operacionalmente por sus propiedades de tamizado, es decir, por la resistencia que imparte a la migracio n de macromole culas. Existen l mites con respecto a las concentraciones de acrilamida que se pueden usar. En concentraciones altas de acrilamida, los geles se rompen con mucha ma s facilidad y son dif ciles de manipular. A medida que disminuye el taman o del poro de un gel, disminuye la velocidad de migracio n de una prote na a trave s del gel. Al ajustar el taman o de poro de un gel, mediante la modicacio n de la concentracio n de acrilamida, se puede optimizar la resolucio n del me todo para un producto prote co dado. Por lo tanto, un gel se caracteriza f sicamente por su composicio n de acrilamida y bisacrilamida. Adema s de la composicio n del gel, el estado de la prote na es un factor importante de la movilidad electrofore tica. En el caso de las prote nas, la movilidad electrofore tica depende del valor pK de los grupos cargados y del taman o de la mole cula. Esta inuenciada por
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CULOS OBTENIDOS h1056i ARTI A POR BIOTECNOLOGI ELECTROFORESIS EN GEL DE POLIACRILAMIDA
Este cap tulo proporciona gu as y procedimientos utilizados para la caracterizacio n de art culos obtenidos por biotecnolog a mediante electroforesis en gel de poliacrilamida. Se lo ha armonizado con los cap tulos correspondientes en la Farmacopea Japonesa (JP) y la Farmacopea Europea (EP). Tambie n se muestran otras pruebas de caracterizacio n armonizadas en Art culos Obtenidos por Biotecnolog aAna lisis de Aminoa cidos h1052i, Art culos Obtenidos por
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el tipo, la concentracio n y el pH de la solucio n amortiguadora; por la temperatura y la intensidad del campo; y por la naturaleza del material de soporte.
Caracter sticas de un Sistema Amortiguador de pH Discontinuo

El me todo eletrofore tico ma s popular para la caracterizacio n de una mezcla compleja de prote nas usa un sistema amortiguador de pH discontinuo compuesto por dos geles contiguos pero diferenciados: un gel de resolucio n o separador (inferior) y un gel concentrador (superior). Los dos geles esta n conformados con diferentes porosidades, pH y fuerzas io nicas. Adema s, se usan distintos iones mo viles en el gel y en los amortiguadores de pH de los electrodos. La discontinuidad del amortiguador del pH concentra grandes volu menes de muestra en el gel concentrador, mejorando as la resolucio n. Cuando se aplica electricidad, se produce una ca da de voltaje a trave s de la solucio n de muestra que conduce a las prote nas hacia el gel concentrador. Los iones de glicinato del amortiguador de pH de los electrodos siguen a las prote nas hacia el gel concentrador. Se forma ra pidamente un frente mo vil con los iones de cloruro de alta movilidad adelante y los iones relativamente lentos de glicinato atra s. Se forma un gradiente de alto voltaje localizado entre los frentes de iones delanteros y traseros, haciendo que los complejos SDSprote na se acumulen en una zona delgada (concentrado) y migren entre las fases de cloruro y glicinato. Dentro de un amplio l mite, sin importar la altura de la muestra aplicada, todos los complejos SDS-prote na se condensan en una regio n muy estrecha e ingresan al gel separador como una zona delgada, bien denida, de alta densidad proteica. El gel concentrador, de grandes poros, no retrasa la migracio n de la mayor a de las prote nas y sirve principalmente como un medio anticonvectivo. En la interfase entre el gel concentrador y el gel separador, las prote nas sufren un marcado retardo, debido al taman o de poro restrictivo del gel separador. Una vez en el gel separador, las prote nas continu an siendo ralentizadas por el tamizado de la matriz. Los iones de glicinato sobrepasan a las prote nas, que se mueven entonces en un espacio de pH uniforme formado por tris(hidroximetil)aminometano (Tris) y glicina. El tamizado molecular hace que los complejos SDS polipe ptido se separen segu n sus pesos moleculares.
Desnaturalizacio n con Dodecilsulfato de Sodio

La desnaturalizacio n de PAGE con dodecilsulfato de sodio (SDS) es el modo ma s comu n de electroforesis para evaluar la calidad farmace utica de productos proteicos. T picamente, la electroforesis anal tica de prote nas se realiza bajo condiciones que aseguran la disociacio n de las prote nas en sus subunidades polipept dicas individuales y que minimizan la aglomeracio n de estas subunidades. El detergente Dodecil Sulfato de Sodio fuertemente anio nico se usa combinado con calor para disociar las prote nas antes de que se coloquen en el gel. Los polipe ptidos desnaturalizados se unen al SDS, adquieren carga negativa y exhiben una relacio n carga-peso estable, sin importar el tipo de prote na. Como la cantidad de SDS unido casi siempre es proporcional al peso molecular del polipe ptido y es t picamente independiente de su secuencia, los complejos SDS polipe ptido migran a trave s de los geles de poliacrilamida en forma razonablemente proporcional al taman o del polipe ptido. Las movilidades electrofore ticas de todos los complejos detergentepolipe ptido resultantes adoptan la misma relacio n funcional con los pesos moleculares de los polipe ptidos. La migracio n de los derivados SDS se efectu a de modo previsible hacia el a nodo, observa ndose que los complejos de bajo peso molecular migran ma s ra pido que los complejos ma s grandes. Esto signica que el peso molecular de una prote na se puede estimar por su movilidad relativa en SDS PAGE calibrada y que una banda u nica en un gel de este tipo es un criterio de pureza. Sin embargo, las modicaciones de la cadena principal, tales como la N-glicosilacio n o la O-glicosilacio n, tienen un efecto signicativo sobre el peso molecular aparente de una prote na. Esto se debe a que el SDS no se une a los grupos glucos dicos de la misma manera que a los grupos polipept dicos. Por lo tanto, no se mantiene una relacio n estable carga-peso. El peso molecular aparente de prote nas con modicaciones postraduccionales no reeja con exactitud el peso de la cadena polipept dica.
Peparacio n de Geles Condiciones Reductoras

Las subunidades de polipe ptidos y su estructura tridimensional se mantienen en las prote nas mediante uniones disulfuro. Uno de los objetivos del ana lisis SDS PAGE en condiciones reductoras es romper esta estructura por reduccio n de las uniones disulfuro. La desnaturalizacio n y disociacio n completa de prote nas por tratamiento con 2-mercaptoetanol o ditiotreitol (DTT) despliega el esqueleto polipept dico, forma ndose luego un complejo con SDS. En estas condiciones, el peso molecular de las subunidades de polipe ptidos se puede calcular por regresio n lineal, en presencia de esta ndares adecuados de peso molecular. En una solucio n amortiguadora discontinua de gel de SDS poliacrilamida, es importante verter el gel separador, dejarlo solidicar y verter luego el gel concentrador, porque los geles tienen diferente composicio n de acrilamidabisacrilamida, solucio n amortiguadora y pH. Soluciones Madre de Gel Solucio n de AcrilamidaBisacrilamida al 30%Preparar una solucio n que contenga 290 g de acrilamida y 10 g de metilenbisacrilamida por L de agua tibia y ltrar. [NOTALa acrilamida y la metilen-bisacrilamida se convierten, lentamente, durante el almacenamiento, en a cido acr lico y a cido bisacr lico respectivamente. Esta reaccio n de desamidacio n es catalizada por la luz y los a lcalis. El pH de la solucio n debe ser de 7,0 o inferior. Almacenar la solucio n en frascos oscuros, a temperatura ambiente. Preparar todos los meses soluciones nuevas.] Solucio n de Persulfato de AmonioPreparar una pequen a cantidad de solucio n, con una concentracio n de 100 g de persulfato de amonio por L y almacenar a 48. [NOTAEl persulfato de amonio proporciona los radicales libres que impulsan la polimerizacio n de la acrilamida y la bisacrilamida. El persulfato de amonio se descompone lentamente; por lo tanto, se deben preparar soluciones nuevas semanalmente.] TEMEDUsar un reactivo de grado electrofore tico. [NOTA El TEMED acelera la polimerizacio n de acrilamida y bisacrilamida, catalizando la formacio n de radicales libres a partir del persulfato de amonio. Como el TEMED so lo funciona cuando es una base libre, a un pH bajo la polimerizacio n se inhibe.] Solucio n de SDSUsar un reactivo de grado electrofore tico. Preparar una solucio n con una concentracio n de aproximadamente 100 g de SDS por L y almacenar a temperatura ambiente.
Condiciones No Reductoras
Para algunos ana lisis, no es conveniente la disociacio n completa de la prote na en subunidades pept dicas. En ausencia de tratamiento con agentes reductores, los enlaces disulfuro covalentes permanecen intactos, preservando la forma oligome rica de la prote na. Los complejos de SDSprote na oligome rica migran ma s lentamente que sus subunidades SDSpolipe ptido. Adema s, las prote nas no reducidas no se pueden saturar por completo con SDS y, por lo tanto, no pueden unirse al detergente en una relacio n de peso constante. Esto hace que las determinaciones de peso molecular de estas mole culas sean menos sencillas que los ana lisis de polipe ptidos completamente desnaturalizados, porque es necesario que las prote nas esta ndar y las prote nas desconocidas tengan conguraciones similares para que las comparaciones sean va lidas. Sin embargo, la tincio n de una u nica banda en un gel de este tipo es un criterio de pureza.
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Solucio n Amortiguadora 1,5 MTransferir aproximadamente 90,8 g de Tris a un matraz de 500 mL, disolver en 400 mL de agua, ajustar con a cido clorh drico hasta un pH de 8,8, diluir a volumen con agua y mezclar. Solucio n Amortiguadora 1 MTransferir aproximadamente 60,6 g de Tris a un matraz de 500 mL, agregar 400 mL de agua, ajustar con a cido clorh drico hasta un pH de 6,8, diluir a volumen con agua y mezclar. Preparacio n de las PlacasLimpiar dos placas de vidrio (10 cm 6 8 cm), el peine de teo n, los dos espaciadores y la tuber a de goma de silicona (0,6 mm 6 35 cm) con detergente suave, enjuagar bien con agua y secar con un material absorbente. Lubricar los espaciadores y la tuber a con grasa no siliconada. Colocar los espaciadores a lo largo de los dos lados cortos de la placa de vidrio, a 2 mm de los bordes y a 2 mm del lado largo correspondiente a la parte inferior del gel. Comenzar a colocar las tuber as sobre la placa de vidrio, utilizando un espaciador como gu a. Cuidadosamente doblar la tuber a por debajo del espaciador y seguir el lado largo de la placa de vidrio. Mientras se sostiene la tuber a con un dedo por el lado largo, doblar nuevamente la tuber a y colocarla sobre el segundo lado corto de la placa de vidrio, usando el espaciador como gu a. Colocar la segunda placa de vidrio perfectamente alineada con la primera y mantener unido el molde para gel haciendo presio n con la mano. Colocar dos pinzas en cada uno de los dos lados cortos del molde. Colocar cuidadosamente cuatro pinzas sobre el lado largo del molde, formando as la parte inferior del molde. Vericar que la tuber a corra a lo largo del borde de las placas de vidrio y que no se haya salido al colocar las pinzas. El molde esta ahora listo para el vertido del gel. Gel SeparadorEn un matraz Erlenmeyer, preparar el volumen adecuado de solucio n que contenga la concentracio n deseada de acrilamida, segu n se indica en la Tabla 1. Mezclar los componentes en el orden que se muestra. Antes de agregar la Solucio n de Persulfato de Amonio y el TEMED, verter la solucio n en una unidad de ltracio n desechable equipada con un ltro de nitrocelulosa con un taman o de poro de 0,45 mm y aplicar vac o. Desgasicar la solucio n por rotacio n suave de la unidad de ltracio n y desconectar el vac o cuando ya no se formen ma s burbujas en la solucio n. Agregar cantidades adecuadas de Solucio n de Persulfato de Amonio y de TEMED, segu n las instrucciones de la Tabla 1, agitar por rotacio n suave y verter inmediatamente en el espacio entre las dos placas de vidrio del molde. Dejar espacio suciente para el gel concentrador (el largo de los dientes del peine ma s 1 cm). Con una pipeta, cubrir cuidadosamente la solucio n con alcohol isobut lico saturado con agua. Dejar el gel en posicio n vertical, a temperatura ambiente, para su polimerizacio n. Una vez nalizada la polimerizacio n (aproximadamente 30 minutos despue s), retirar la capa superior y lavar la supercie del gel varias veces con agua, para quitar la capa de alcohol isobut lico y toda la acrilamida no polimerizada. Drenar tanto l quido como sea posible de la parte superior del gel y luego quitar el agua remanente usando el borde de una toalla de papel. Gel ConcentradorEn un matraz Erlenmeyer, preparar el volumen adecuado de solucio n con la concentracio n deseada de acrilamida, segu n se indica en la Tabla 2. Mezclar los componentes en el orden que se muestra. Antes de agregar la Solucio n de Persulfato de Amonio y el TEMED, verter la solucio n en una unidad de ltracio n desechable equipada con un ltro de nitrocelulosa con un taman o de poro de 0,45 mm y aplicar vac o. Desgasicar la solucio n por rotacio n suave de la unidad de ltracio n y desconectar el vac o cuando ya no se formen ma s burbujas en la solucio n. Agregar cantidades adecuadas de Solucio n de Persulfato de Amonio y de TEMED, segu n se indica en la Tabla 2, agitar por rotacio n suave y verter inmediatamente en el espacio entre las dos placas de vidrio del molde, directamente sobre la supercie del Gel Separador polimerizado. Introducir inmediatamente un peine de teo n limpio en la solucio n de gel concentrador, con cuidado para no atrapar burbujas de aire. Agregar ma s solucio n de gel concentrador para llenar completamente los espacios del peine. Colocar el gel en posicio n vertical y dejar polimerizar a temperatura ambiente. Una vez completada la polimerizacio n (aproximadamente 30 minutos despue s), retirar cuidadosamente el peine de teo n y proceder segu n se indica a continuacio n.
Separacio n Electrofore tica

Solucio n Amortiguadora de Muestra 1Disolver 1,89 g de Tris, 5,0 g de SDS, 50 mg de azul de bromofenol y 25,0 mL de glicerol en 100 mL de agua. Ajustar con a cido clorh drico hasta un pH de 6,8 y diluir con agua a 125 mL. Antes de usar, diluir con un volumen igual de agua o muestra y mezclar. Solucio n Amortiguadora de Muestra 2 (para condiciones reductoras)Preparar segu n se indica en la Solucio n Amortiguadora de Muestra 1 con la excepcio n de agregar 12,5 mL de 2mercaptoetanol antes de ajustar el pH. Alternativamente, preparar segu n se indica para Solucio n Amortiguadora de Muestra 1 excepto que se debe comenzar con aproximadamente 1,93 g de Tris y se debe agregar una cantidad adecuada de DTT para obtener una concentracio n nal de DTT 100 mM. Solucio n Amortiguadora de CorridaDisolver 151,4 g de Tris, 721,0 g de a cido aminoace tico (glicina) y 50,0 g de SDS en agua; diluir con agua a 5000 mL; y mezclar hasta obtener una solucio n madre. Inmediatamente antes de usar, diluir esta solucio n madre con agua a 10 veces su volumen, mezclar y ajustar a un pH entre 8,1 y 8,8. ProcedimientoEnjuagar inmediatamente los pocillos con agua o con la Solucio n Amortiguadora de Corrida para eliminar toda la acrilamida no polimerizada. (Si fuera necesario, enderezar los dientes del Gel Concentrador con una aguja hipode rmica roma conectada a una jeringa.) Quitar las pinzas de uno de los lados cortos, retirar cuidadosamente la tuber a y volver a colocar las pinzas. Proceder de manera similar con el otro lado corto. Quitar la tuber a de la parte inferior del gel. Montar el gel preparado en el aparato de electroforesis. Agregar las soluciones amortiguadoras de electroforesis a los recipientes superior e inferior. Quitar cualquier burbuja que haya quedado atrapada en el fondo del gel, entre las placas de vidrio. [NOTASe realiza la eliminacio n mejor con una aguja hipode rmica roma conectada a una jeringa. Nunca se debe correr previamente el gel antes de cargar las muestras, porque eso destruir a la discontinuidad de los sistemas amortiguadores de pH. Antes de cargar la muestra, enjuagar cuidadosamente la ranura con Solucio n Amortiguadora de Corrida.] Preparar las soluciones de prueba y esta ndar en la Solucio n Amortiguadora de Muestra recomendada y tratar segu n se indica en la monograf a individual. Aplicar el volumen adecuado de cada solucio n a los pocillos de Gel Concentrador. Comenzar la electroforesis con condiciones recomendadas por el fabricante del equipo. Puede ser necesario variar el tiempo de corrida de la electroforesis y la corriente o el voltaje a n de lograr una separacio n o ptima. Vericar que el frente de tincio n se mueva hacia el Gel Separador. Detener la electroforesis cuando la tincio n haya llegado al fondo del gel. Retirar el montaje de gel del aparato y separar las placas de vidrio. Quitar los espaciadores, cortar y desechar el Gel Concentrador y proceder de inmediato con la tincio n.
Deteccio n de Prote nas en Geles

La tincio n de Coomassie es el me todo de tincio n de prote nas ma s comu n, con un nivel de deteccio n en el orden de 1 mg a 10 mg de prote na por banda. La tincio n con plata es el me todo ma s sensible para ten ir prote nas en geles ya que es posible detectar una banda que contenga entre 10 ng y 100 ng; pero el me todo es ma s dicultoso y menos robusto. Todos los pasos en la tincio n de gel se realizan a temperatura ambiente con agitacio n suave (por ejemplo, sobre un agitador de plataforma oscilante o equivalente). Hay que usar guantes cuando se tin en los geles, para evitar la tincio n de residuos dejados por las huellas digitales. Reactivos Solucio n de Tincio n de CoomassiePreparar una solucio n de azul brillante Coomassie R-250, con una concentracio n de 1,25 g por L en una mezcla de agua, metanol y a cido ace tico glacial (5 : 4 : 1). Filtrar y almacenar a temperatura ambiente. Solucio n de Decoloracio nPreparar una mezcla de agua, metanol ya cido ace tico glacial (5 : 4 : 1).
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Tabla 1. Preparacio n de Gel Separador Componentes de la Solucio n 5 mL Volumen (mL) de Componentes por Volumen de Molde de Gel Indicado Debajo 10 mL 15 mL 20 mL 25 mL 30 mL 40 mL 50 mL 5,3 2,0 2,5 0,1 0,1 0,008 4,6 2,7 2,5 0,1 0,1 0,006 4,0 3,3 2,5 0,1 0,1 0,004 3,3 4,0 2,5 0,1 0,1 0,004 2,7 4,6 2,5 0,1 0,1 0,004 2,3 5,0 2,5 0,1 0,1 0,004 7,9 3,0 3,8 0,15 0,15 0,012 6,9 4,0 3,8 0,15 0,15 0,009 5,9 5,0 3,8 0,15 0,15 0,006 4,9 6,0 3,8 0,15 0,15 0,006 3,9 7,0 3,6 0,15 0,15 0,006 3,4 7,5 3,8 0,15 0,15 0,006 10,6 4,0 5,0 0,2 0,2 0,016 9,3 5,3 5,0 0,2 0,2 0,012 7,9 6,7 5,0 0,2 0,2 0,008 6,6 8,0 5,0 0,2 0,2 0,008 5,3 9,3 5,0 0,2 0,2 0,008 4,6 10,0 5,0 0,2 0,2 0,008 13,2 5,0 6,3 0,25 0,25 0,02 11,5 6,7 6,3 0,25 0,25 0,015 9,9 8,3 6,3 0,25 0,25 0,01 8,2 10,0 6,3 0,25 0,25 0,01 6,6 11,6 6,3 0,25 0,25 0,01 5,7 12,5 6,3 0,25 0,25 0,01 15,9 6,0 7,5 0,3 0,3 0,024 13,9 8,0 7,5 0,3 0,3 0,018 11,9 10,0 7,5 0,3 0,3 0,012 9,9 12,0 7,5 0,3 0,3 0,012 8,0 13,9 7,5 0,3 0,3 0,012 6,9 15,0 7,5 0,3 0,3 0,012 21,2 8,0 10,0 0,4 0,4 0,032 18,5 10,7 10,0 0,4 0,4 0,024 15,9 13,3 10,0 0,4 0,4 0,016 13,2 16,0 10,0 0,4 0,4 0,016 10,6 18,6 10,0 0,4 0,4 0,016 9,2 20,0 10,0 0,4 0,4 0,016 26,5 10,0 12,5 0,5 0,5 0,04 23,2 13,3 12,5 0,5 0,5 0,03 19,8 16,7 12,5 0,5 0,5 0,02 16,5 20,0 12,5 0,5 0,5 0,02 13,8 23,2 12,5 0,5 0,5 0,02 11,5 25,0 12,5 0,5 0,5 0,02
Acrilamida al 6% Agua 2,6 Solucio n de AcrilamidaBisacrilamida al 1,0 30% Solucio n Amortiguadora 1,5 M 1,3 Solucio n de SDS 0,05 Solucio n de Persulfato de Amonio 0,05 TEMED 0,004 Acrilamida al 8% Agua 2,3 Solucio n de AcrilamidaBisacrilamida al 1,3 30% Solucio n Amortiguadora 1,5 M 1,3 Solucio n de SDS 0,05 Solucio n de Persulfato de Amonio 0,05 TEMED 0,003 Acrilamida al 10% Agua 1,9 Solucio n de AcrilamidaBisacrilamida al 1,7 30% Solucio n Amortiguadora 1,5 M 1,3 Solucio n de SDS 0,05 Solucio n de Persulfato de Amonio 0,05 TEMED 0,002 Acrilamida al 12% Agua 1,6 Solucio n de AcrilamidaBisacrilamida al 2,0 30% Solucio n Amortiguadora 1,5 M 1,3 Solucio n de SDS 0,05 Solucio n de Persulfato de Amonio 0,05 TEMED 0,002 Acrilamida al 14% Agua 1,4 Solucio n de AcrilamidaBisacrilamida al 2,3 30% Solucio n Amortiguadora 1,5 M 1,2 Solucio n de SDS 0,05 Solucio n de Persulfato de Amonio 0,05 TEMED 0,002 Acrilamida al 15% Agua 1,1 Solucio n de AcrilamidaBisacrilamida al 2,5 30% Solucio n Amortiguadora 1,5 M 1,3 Solucio n de SDS 0,05 Solucio n de Persulfato de Amonio 0,05 TEMED 0,002
Tabla 2. Preparacio n de Gel Concentrador Volumen (mL) de Componentes por Volumen de Molde de Gel Indicado Debajo Componentes de la Solucio n 1 mL Agua 0,68 Solucio n de AcrilamidaBisacrilamida al 0,17 30% Solucio n Amortiguadora 1,0 M 0,13 Solucio n de SDS 0,01 Solucio n de Persulfato de Amonio 0,01 TEMED 0,001 2 mL 1,4 0,33 0,25 0,02 0,02 0,002 3 mL 2,1 0,5 0,38 0,03 0,03 0,003 4 mL 2,7 0,67 0,5 0,04 0,04 0,004 5 mL 3,4 0,83 0,63 0,05 0,05 0,005 6 mL 4,1 1,0 0,75 0,06 0,06 0,006 8 mL 5,5 1,3 1,0 0,08 0,08 0,008 10 mL 6,8 1,7 1,25 0,1 0,1 0,01
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Solucio n Fijadora 1Preparar una mezcla de agua, metanol y a cido tricloroace tico (5 : 4 : 1). Solucio n Fijadora 2Transferir 250 mL de metanol a un matraz volume trico de 500 mL, agregar 0,27 mL de formaldeh do, diluir a volumen con agua y mezclar. Reactivo de Nitrato de PlataA una mezcla de 40 mL de hidro xido de sodio 1 M y 3 mL de hidro xido de amonio, agregar gota a gota y con agitacio n, 8 mL de una solucio n de nitrato de plata de 200 g por L; diluir con agua a 200 mL y mezclar. Solucio n de DesarrolloTransferir 2,5 mL de solucio n de a cido c trico (2 en 100) y 0,27 mL de formaldeh do a un matraz volume trico de 500 mL, diluir con agua a volumen y mezclar. Solucio n de Detencio nPreparar una solucio n de a cido ace tico al 10% (v/v). Tincio n de CoomassieSumergir el gel en un exceso de Solucio n de Tincio n de Coomassie e incubar durante al menos 1 hora. Retirar la Solucio n de Tincio n de Coomassie. Decolorar el gel con un exceso de Solucio n de Decoloracio n. Cambiar la Solucio n de Decoloracio n varias veces, hasta que las bandas de prote na ten idas se distingan claramente sobre un fondo transparente. Cuanto ma s completamente se decolore el gel, menor sera la cantidad de prote na detectable. La decoloracio n se puede acelerar incluyendo unos pocos gramos de resina de intercambio anio nico o una esponja pequen a en la Solucio n de Decoloracio n. [NOTALas soluciones alcohola cido usadas en este procedimiento no jan completamente las prote nas en el gel. Esto puede conducir a pe rdidas de algunas prote nas de bajo peso molecular durante la tincio n y decoloracio n de geles delgados. La jacio n permanente se puede lograr por incubacio n del gel en Solucio n Fijadora 1 durante 1 hora antes de sumergirla en la Solucio n de Tincio n de Coomassie.] Tincio n con PlataSumergir el gel en un exceso de Solucio n Fijadora 2, e incubar durante 1 hora. Retirar la Solucio n Fijadora 2, agregar Solucio n Fijadora 2 recie n preparada e incubar durante al menos 1 hora, o durante la noche si fuera conveniente. Desechar la Solucio n Fijadora 2, lavar el gel en un exceso de agua durante 1 hora. Embeber el gel durante 15 minutos en una solucio n de glutaraldeh do al 1% (v/v). Lavar el gel dos veces, durante 15 minutos cada vez, con un exceso de agua. Embeber el gel en Reactivo de Nitrato de Plata recie n preparado durante 15 minutos en la oscuridad. Lavar el gel tres veces, durante 5 minutos cada vez, con un exceso de agua. Sumergir el gel durante aproximadamente 1 minuto en la Solucio n de Desarrollo hasta obtener una tincio n satisfactoria. Detener el desarrollo mediante incubacio n en la Solucio n de Detencio n durante 15 minutos; enjuagar luego el gel con agua y proceder con el secado segu n se indica a continuacio n.
soluciones madre concentradas de prote nas de peso molecular conocido se diluyen en un amortiguador del pH de muestra y se cargan en el mismo gel que la muestra de prote na a analizar. Inmediatamente despue s de correr el gel, se marca la posicio n del colorante de rastreo de azul de bromofenol para identicar el borde frontal de iones electrofore ticos. Esto se puede realizar cortando muescas en los bordes del gel, o insertando una aguja empapada en tinta China en el gel, en el frente de tincio n. Despue s de la tincio n, medir las distancias de migracio n de cada banda de prote na (marcadoras y desconocidas) desde la parte superior del Gel Separador. Dividir la distancia de migracio n de cada prote na por la distancia recorrida por el colorante de rastreo. Las distancias de migracio n normalizadas as obtenidas se denominan movilidades relativas de las prote nas (con respecto al frente de tincio n) y se denominan convencionalmente RF. Construir un gra co (semilogar tmico) del logaritmo de los pesos moleculares (MR) de los esta ndares de prote nas en funcio n de los valores RF. [NOTALas gra cas son levemente sigmoideas.] A partir de la gra ca as obtenida, estimar los pesos moleculares desconocidos, por ana lisis de regresio n lineal o interpolacio n, siempre que las muestras desconocidas caigan en la parte lineal de la gra ca. Si las prote nas del marcador de peso molecular no esta n distribuidas a lo largo del 80% de la extensio n del gel y en el intervalo de separacio n requerido (es decir, el intervalo que cubre el producto y su d mero o los productos y sus impurezas relacionadas) y la separacio n obtenida para las bandas de prote na relevantes no muestra una relacio n lineal entre el logaritmo del peso molecular y el RF, entonces la prueba no es va lida.
Cuanticacio n de Impurezas
Cuando se especica el l mite de impurezas en la monograf a individual, se prepara una solucio n de referencia correspondiente a ese nivel de impureza, diluyendo la solucio n de prueba. Por ejemplo, cuando el l mite es 5,0%, la solucio n de referencia es una dilucio n 1 en 20 de la solucio n de prueba. Ninguna impureza cualquier banda que no sea la banda principalen el electroforetograma obtenido a partir de la solucio n de prueba es ma s intensa que la banda principal obtenida con la solucio n de referencia. Bajo condiciones validadas y cuando se usa el procedimiento de tincio n de Coomassie, las impurezas se pueden cuanticar por normalizacio n con respecto a la banda principal, usando un densito metro de integracio n. En este caso, las respuestas deben ser validadas para linealidad.&1S (USP30)
Secado de Geles
Para la tincio n de Coomassie, despue s del paso de decoloracio n, incubar el gel en una solucio n de glicerol (1 en 10) durante al menos 2 horas. Para la tincio n con plata, agregar al paso nal de enjuague una incubacio n de 5 minutos en una solucio n de glicerol (1 en 50). Sumergir dos la minas de celofa n poroso en agua, e incubar de 5 a 10 minutos. Colocar una de las la minas en un marco de secado. Levantar el gel cuidadosamente y colocarlo sobre la la mina de celofa n. Eliminar todas las burbujas de aire atrapadas y verter algunos mL de agua alrededor de los bordes del gel. Colocar la segunda la mina por encima y eliminar todas las burbujas de aire atrapadas. Completar el montaje del marco de secado. Colocar en una estufa de secado, dejar a temperatura ambiente hasta que este seco, o usar un secador de gel comercial. Agregar lo siguiente:
&
CULOS OBTENIDOS h1057i ARTI A POR BIOTECNOLOGI N DE PROTEI NAS VALORACIO TOTALES
Determinacio n del Peso Molecular

Los pesos moleculares de las prote nas se determinan por comparacio n de sus movilidades con las de varias prote nas marcadoras de peso molecular conocido. Para la calibracio n de geles, hay mezclas disponibles de prote nas con pesos moleculares conocidos con precisio n, combinadas para una tincio n uniforme. Esta n disponibles en diversos intervalos de pesos moleculares. Las
Este cap tulo proporciona gu as y procedimientos utilizados para la caracterizacio n de art culos obtenidos por biotecnolog a. Se lo ha armonizado con los cap tulos correspondientes en la Farmacopea Japonesa (JP) y la Farmacopea Europea (EP). Tambie n se muestran otras pruebas de caracterizacio n armonizadas en Art culos Obtenidos por Biotecnolog aAna lisis de Aminoa cidos h1052i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog aElectroforesis Capilar h1053i, Art culos Obtenidos por Biotecnolog aIsoelectroenfoque h1054i, Art culos obtenidos por Biotecnolog aMapeo de Pe ptidos h1055i y Art culos Obtenidos por Biotecnolog aElectroforesis en Gel de Poliacrilamida h1056i.
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h1057i Art culos Obtenidos por Biotecnolog a / Informacio n General N INTRODUCCIO
Me todo 2
Este me todo, comu nmente conocido como la valoracio n de Lowry, se basa en la propiedad que tienen las prote nas de reducir la mezcla cromoge nica de los a cidos fosfomol bdico y tu ngstico en el reactivo Folin-Ciocalteu para fenoles, que produce una absorbancia ma xima a 750 nm. El reactivo Folin-Ciocalteu para fenoles reacciona principalmente con residuos tirosina en la prote na, lo cual puede conducir a una variacio n en la respuesta cuando se valoran diferentes prote nas. Como el me todo es sensible a sustancias de interferencia, se puede usar un procedimiento para precipitar la prote na de la muestra. Cuando sea necesaria la separacio n de las sustancias de interferencia de la prote na en la muestra de la prueba, proceder segu n se indica a continuacio n para Sustancias de Interferencia antes de la preparacio n de la Solucio n de Prueba. El efecto de las sustancias de interferencia se puede minimizar por dilucio n, siempre que la concentracio n de la prote na en ana lisis continu e siendo suciente para una medicio n exacta. Soluciones Esta ndarA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, disolver el Esta ndar de Referencia USP o el material de referencia para la prote na en ana lisis, en la solucio n amortiguadora usada para preparar la Solucio n de Prueba. Diluir porciones de esta solucio n con la misma solucio n amortiguadora para obtener no menos de cinco Soluciones Esta ndar con concentraciones uniformemente espaciadas entre 5 y 100 mg de prote na por mL. Solucio n de PruebaDisolver una cantidad adecuada de la prote na en ana lisis, en la solucio n amortiguadora apropiada para obtener una solucio n con una concentracio n comprendida dentro del intervalo de concentraciones de las Soluciones Esta ndar. Una solucio n amortiguadora apropiada producira un pH entre 10,0 y 10,5. BlancoUsar la solucio n amortiguadora utilizada para la Solucio n de Prueba y las Soluciones Esta ndar. Reactivos y Soluciones Reactivo de Sulfato de CobreDisolver 100 mg de sulfato cu prico y 200 mg de tartrato de sodio en agua, diluir con agua a 50 mL y mezclar. Disolver 10 g de carbonato de sodio en agua a un volumen nal de 50 mL y mezclar. Verter lentamente la solucio n de carbonato de sodio en la solucio n de sulfato de cobre, mezclando. Preparar esta solucio n a diario. Solucio n de SDSDisolver 5 g de dodecilsulfato de sodio en agua y diluir con agua a 100 mL. Solucio n de Hidro xido de SodioDisolver 3,2 g de hidro xido de sodio en agua, diluir con agua a 100 mL y mezclar. Reactivo de Cobre AlcalinoPreparar una mezcla de Reactivo de Sulfato de Cobre, Solucio n de SDS y Solucio n de Hidro xido de Sodio (1 : 2 : 1). Este reactivo se puede almacenar a temperatura ambiente hasta 2 semanas. Reactivo Folin-Ciocalteu para Fenoles DiluidoMezclar 10 mL de Folin-Ciocalteu para Fenoles SR con 50 mL de agua. Almacenar en un frasco a mbar, a temperatura ambiente. ProcedimientoAgregar 1 mL de Reactivo de Cobre Alcalino a 1 mL cada Solucio n Esta ndar, a 1 mL de la Solucio n de Prueba y a 1 mL del Blanco y mezclar. Dejar en reposo a temperatura ambiente durante 10 minutos. Agregar 0,5 mL del Reactivo FolinCiocalteu para Fenoles Diluido a cada solucio n, mezclar inmediatamente cada tubo y dejar reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos. Determinar las absorbancias de las soluciones obtenidas de las Soluciones Esta ndar y la Solucio n de Prueba a la longitud de onda de absorbancia ma xima a 750 nm con un espectrofoto metro adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i), usando la solucio n del Blanco para ajustar el instrumento a cero. Ca lculos[NOTALa absorbancia no es funcio n lineal de concentracio n proteica; sin embargo, si el intervalo de concentracio n de la curva esta ndar es lo sucientemente pequen o, se aproxima a la linealidad.] Usando el me todo de regresio n lineal, gracar las absorbancias de las soluciones obtenidas de las Soluciones Esta ndar en funcio n de las concentraciones de prote na y determinar la curva esta ndar que mejor se ajuste a los puntos gracados. A partir de la curva esta ndar as obtenida y de la absorbancia de la Solucio n de Prueba, determinar la concentracio n proteica de la Solucio n de Prueba.
Los siguientes procedimientos se proporcionan para ilustrar la determinacio n del contenido de prote nas totales en las preparaciones farmacopeicas. Otras te cnicas, tales como HPLC, tambie n son aceptables si se demuestra la recuperacio n total de prote nas. Muchos de los me todos de valoracio n de prote nas totales descritos a continuacio n se pueden realizar satisfactoriamente con equipos comerciales. [NOTASiempre que se necesite agua, usar agua destilada.]
Me todo 1
La prote na en solucio n absorbe la luz UV a una longitud de onda de 280 nm debido a la presencia de aminoa cidos aroma ticos, principalmente tirosina y tripto fano. Esta propiedad es el fundamento del Me todo 1. La determinacio n de prote nas a 280 nm es principalmente una funcio n del contenido de tirosina y tripto fano de la prote na. Si la solucio n amortiguadora usada para disolver la prote na tiene una absorbancia elevada en relacio n a la del agua, hay una sustancia interferente que se puede compensar cuando el espectrofoto metro se ajusta a cero con la solucio n amortiguadora. Si la interferencia da como resultado una absorbancia muy alta, los resultados podr an afectarse. Adema s, en concentraciones bajas, la prote na puede ser adsorbida en la cubeta, reduciendo as el contenido en solucio n. Esto puede evitarse preparando muestras ma s concentradas, o usando un detergente no io nico en la preparacio n. [NOTAMantener la Solucio n de Prueba, la Solucio n Esta ndar y la solucio n amortiguadora a la misma temperatura durante la prueba.] Solucio n de PruebaDisolver una cantidad adecuada de la prote na en ana lisis en la solucio n amortiguadora apropiada para obtener una solucio n con una concentracio n de 0,2 a 2 mg por mL. Solucio n Esta ndarA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, preparar una solucio n del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia para la prote na en ana lisis en la misma solucio n amortiguadora y a la misma concentracio n que la Solucio n de Prueba. ProcedimientoDeterminar concomitantemente las absorbancias de la Solucio n Esta ndar y de la Solucio n de Prueba en celdas de cuarzo a una longitud de onda de 280 nm con un espectrofoto metro adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i), usando la solucio n amortiguadora como blanco. Para obtener resultados exactos, la respuesta debe ser lineal para el intervalo de concentraciones de prote na a ser valoradas. Dispersio n de LuzLa exactitud de la determinacio n espectrosco pica UV de la prote na puede disminuir si la muestra dispersa la luz. Si las prote nas en la solucio n existen como part culas de taman o comparable con la longitud de onda de la luz de medicio n (250 a 300 nm), la dispersio n del haz de luz produce un aumento aparente en la absorbancia de la muestra. Para calcular la absorbancia a 280 nm causada por la dispersio n de luz, hay que determinar las absorbancias de la Solucio n de Prueba a longitudes de onda de 320; 325; 330; 335; 340; 345 y 350 nm. Usando el me todo de regresio n lineal, trazar la gra ca del logaritmo de la absorbancia observada en funcio n del logaritmo de la longitud de onda y determinar la curva esta ndar que mejor se ajuste a los puntos gracados. A partir de la gra ca as obtenida, extrapolar el valor de absorbancia causada por la dispersio n de luz a 280 nm. Restar la absorbancia por dispersio n de luz debido a la absorbancia total a 280 nm para obtener el valor de absorbancia de la prote na en la solucio n. Para reducir el efecto de la dispersio n de luz, en especial si la solucio n esta muy turbia, se puede pasar la solucio n por un ltro con un taman o de poro de 0,2 mm o se puede claricar por centrifugacio n. Ca lculosCalcular la concentracio n, CU, de la prote na en la muestra de la prueba, por la fo rmula: CS(AU / AS) en donde CS es la concentracio n de la Solucio n Esta ndar; y AU y AS son las absorbancias corregidas de la Solucio n de Prueba y la Solucio n Esta ndar, respectivamente (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i).
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SUSTANCIAS DE INTERFERENCIA
En el siguiente procedimiento, se agrega desoxicolato-a cido tricloroace tico a una muestra, para eliminar las sustancias de interferencia por precipitacio n de las prote nas antes de hacer la prueba. Esta te cnica tambie n puede usarse para concentrar prote nas de una solucio n diluida. Reactivo de Desoxicolato de SodioPreparar una solucio n de desoxicolato de sodio en agua, con una concentracio n de 150 mg en 100 mL. cido Tricloroace Reactivo de A ticoPreparar una solucio n de a cido tricloroace tico en agua, con una concentracio n de 72 g en 100 mL. ProcedimientoAgregar 0,1 mL de Reactivo de Desoxicolato de Sodio a 1 mL de una solucio n de la prote na en ana lisis. Mezclar en un mezclador por vo rtice y dejar reposar a temperatura ambiente cido durante 10 minutos. Agregar 0,1 mL de Reactivo de A Tricloroace tico y mezclar en un mezclador por vo rtice. Centrifugar a 3000 6 g durante 30 minutos, decantar el l quido y eliminar todo l quido residual con una pipeta. Volver a disolver el pellet de prote na en 1 mL de Reactivo de Cobre Alcalino. Proceder segu n se indica para la Solucio n de Prueba. NOTAEl desarrollo del color alcanza un ma ximo entre los 20 y 30 minutos del comienzo de la incubacio n a temperatura ambiente, y despue s hay una pe rdida gradual de color. La mayor a de las sustancias de interferencia reducen la intensidad del color; sin embargo, algunos detergentes causan un leve aumento del color. Una concentracio n alta de sal puede provocar la formacio n de un precipitado. Como las distintas especies de prote na pueden dar respuestas de color de distinta intensidad, la prote na esta ndar y la prote na de prueba deben ser la misma.
cuarzo (s lice) en el espectrofoto metro dado que el colorante se une a este material. Como las distintas especies de prote na pueden dar respuestas de color de diferente intensidad, la prote na esta ndar y la prote na de prueba deben ser la misma.] Hay relativamente pocas sustancias de interferencia, pero se deben evitar los detergentes y los anfolitos en la muestra de prueba. Las muestras muy alcalinas pueden interferir con el reactivo a cido. Ca lculos[NOTALa absorbancia no es funcio n lineal de la concentracio n proteica; sin embargo, si el intervalo de concentracio n de la curva esta ndar es lo sucientemente pequen o, se aproxima a la linealidad.] Usando el me todo de regresio n lineal, gracar las absorbancias de las soluciones obtenidas de las Soluciones Esta ndar en funcio n de las concentraciones de prote na y determinar la curva esta ndar que mejor se ajuste a los puntos gracados. A partir de la curva esta ndar as obtenida y de la absorbancia de la Solucio n de Prueba, determinar la concentracio n proteica de la Solucio n de Prueba.
Me todo 4
Este me todo, comu nmente denominado valoracio n con a cido bicincon nico o BCA, se basa en la propiedad que tienen las prote nas de reducir el io n cu prico (Cu2+) a io n cuproso (Cu1+). El reactivo de a cido bicincon nico se usa para detectar el io n cuproso. El me todo tiene pocas sustancias de interferencia. Cuando hay sustancias de interferencia presentes, se puede minimizar su efecto mediante dilucio n, siempre que la concentracio n de la prote na en ana lisis sea suciente para una medicio n exacta. Soluciones Esta ndarA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, disolver el Esta ndar de Referencia USP o el material de referencia para la prote na en ana lisis, en la solucio n amortiguadora usada para preparar la Solucio n de Prueba. Diluir porciones de esta solucio n con la misma solucio n amortiguadora para obtener no menos de cinco Soluciones Esta ndar con concentraciones uniformemente espaciadas entre 10 mg y 1200 mg de prote na por mL. Solucio n de PruebaDisolver una cantidad adecuada de la prote na en ana lisis en la solucio n amortiguadora apropiada para obtener una solucio n con una concentracio n comprendida dentro del intervalo de concentraciones de las Soluciones Esta ndar. BlancoUsar la solucio n amortiguadora utilizada para preparar la Solucio n de Prueba y las Soluciones Esta ndar. Reactivos Reactivo BCADisolver aproximadamente 10 g de a cido bicincon nico, 20 g de carbonato de sodio monohidrato, 1,6 g de tartrato de sodio, 4 g de hidro xido de sodio y 9,5 g de bicarbonato de sodio en agua. Ajustar, si es necesario, hasta un pH de 11,25 con hidro xido de sodio o con bicarbonato de sodio. Diluir con agua a 1 L y mezclar. Reactivo de Sulfato de CobreDisolver aproximadamente 2 g de sulfato cu prico en agua a un volumen nal de 50 mL. Reactivo CobreBCAMezclar 1 mL de Reactivo de Sulfato de Cobre y 50 mL de Reactivo BCA. ProcedimientoAgregar 2 mL de Reactivo de CobreBCA a 0,1 mL de cada Solucio n Esta ndar, 0,1 mL de la Solucio n de Prueba y 0,1 mL del Blanco, y mezclar. Incubar las soluciones a 378 durante 30 minutos, anotar el tiempo y dejar que lleguen a temperatura ambiente. Dentro de los 60 minutos siguientes a la incubacio n, determinar las absorbancias de las soluciones de las Soluciones Esta ndar y la Solucio n de Prueba en celdas de cuarzo a 562 nm, con un espectrofoto metro adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i), usando la solucio n Blanco para ajustar el instrumento a cero. Despue s de enfriar las soluciones a temperatura ambiente, la intensidad del color continu a aumentando gradualmente. Si hay sustancias presentes que causen interferencias en la prueba, proceder segu n se indica en Sustancias de Interferencia en el Me todo 2. Como las distintas especies de prote na pueden dar respuestas de color de distinta intensidad, la prote na esta ndar y la prote na de prueba deben ser la misma. Ca lculos[NOTALa absorbancia no es funcio n lineal de la concentracio n proteica; sin embargo, si el intervalo de concentracio n de la curva esta ndar es lo sucientemente pequen o, se aproxima a la linealidad.] Usando el me todo de regresio n lineal, gracar las absorbancias de las soluciones obtenidas de las Soluciones Esta ndar
Me todo 3
Este me todo, comu nmente denominado ensayo de Bradford, se basa en el cambio de absorcio n de 470 nm a 595 nm que se observa cuando el colorante azul brillante G se une a la prote na. El colorante azul brillante G presenta ma s anidad por los residuos arginilo y lisilo en la prote na lo que conduce a la variacio n en la respuesta de la valoracio n para diferentes prote nas. Soluciones Esta ndarA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, disolver el Esta ndar de Referencia USP o el material de referencia para la prote na en ana lisis en la solucio n amortiguadora usada para preparar la Solucio n de Prueba. Diluir porciones de esta solucio n con la misma solucio n amortiguadora para obtener no menos de cinco Soluciones Esta ndar que tengan concentraciones uniformemente espaciadas entre 100 mg y 1 mg de prote na por mL. Solucio n de PruebaDisolver una cantidad adecuada de la prote na en ana lisis en la solucio n amortiguadora apropiada para obtener una solucio n con una concentracio n comprendida dentro del intervalo de concentraciones de las Soluciones Esta ndar. BlancoUsar la solucio n amortiguadora utilizada para preparar la Solucio n de Prueba y las Soluciones Esta ndar. Reactivo de CoomassieDisolver 100 mg de azul brillante G* en 50 mL de alcohol. [NOTANo todos los colorantes tienen el mismo contenido de azul brillante G y distintos productos pueden dar resultados diferentes.] Agregar 100 mL de a cido fosfo rico, diluir con agua a 1 L y mezclar. Pasar la solucio n a trave s de papel de ltro (Whatman N8 1 o equivalente) y almacenar el reactivo ltrado en un frasco a mbar a temperatura ambiente. [NOTAEl colorante precipita lentamente durante el almacenamiento del reactivo. Filtrar el reactivo antes de usarlo.] ProcedimientoAgregar 5 mL del Reactivo Coomassie a 100 mL de cada Solucio n Esta ndar, a 100 mL de la Solucio n de Prueba y a 100 mL del Blanco y mezclar por inversio n. Evitar la formacio n de espuma ya que altera la reproducibilidad. Determinar las absorbancias de las soluciones de las Soluciones Esta ndar y la Solucio n de Prueba a 595 nm con un espectrofoto metro adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i), usando el Blanco para ajustar el instrumento a cero. [NOTANo emplear celdas de
* La pureza del colorante es importante en la preparacio n del reactivo. Serva Blue G (Crescent Chemical Company, Hauppage, NY) es un grado aceptable.
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en funcio n de las concentraciones de prote na y determinar la curva esta ndar que mejor se ajuste a los puntos gracados. A partir de la curva esta ndar as obtenida y de la absorbancia de la Solucio n de Prueba, determinar la concentracio n proteica de la Solucio n de Prueba.
Me todo 5
Este me todo, comu nmente denominado valoracio n de Biuret, se basa en la interaccio n del io n cu prico (Cu2+) con la prote na en una solucio n alcalina y el desarrollo de absorbancia a 545 nm. Soluciones Esta ndarA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, preparar una solucio n de Albu mina Humana, para la cual se haya determinado previamente el contenido proteico por ana lisis de nitro geno (usando el factor de conversio n nitro geno-prote na de 6,25) o del Esta ndar de Referencia USP o material de referencia para la prote na en ana lisis en solucio n de cloruro de sodio (9 en 1000). Diluir porciones de esta solucio n con solucio n de cloruro de sodio (9 en 1000) para obtener no menos de tres Soluciones Esta ndar con concentraciones uniformemente espaciadas entre 0,5 y 10 mg por mL. [NOTAPueden observarse respuestas bajas si la muestra en ana lisis tiene un nivel de prolina signicativamente diferente al de la Albu mina Humana. En dichos casos se puede emplear una prote na esta ndar diferente.] Solucio n de PruebaPreparar una solucio n de la prote na de prueba en solucio n de cloruro de sodio (9 en 1000), con una concentracio n comprendida dentro del intervalo de las concentraciones de las Soluciones Esta ndar. BlancoUsar solucio n de cloruro de sodio (9 en 1000). Reactivo de BiuretDisolver aproximadamente 3,46 g de sulfato cu prico en 10 mL de agua caliente y dejar enfriar (Solucio n 1). Disolver aproximadamente 34,6 g de citrato de sodio dihidrato y 20,0 g de carbonato de sodio en 80 mL de agua caliente y dejar enfriar (Solucio n 2). Mezclar la Solucio n 1 y la Solucio n 2 y diluir con agua a 200 mL. Este Reactivo de Biuret es estable a temperatura ambiente durante 6 meses. No usar el reactivo si aparece turbidez o contiene algu n precipitado. ProcedimientoA un volumen de una solucio n de la Solucio n de prueba, agregar un volumen igual de solucio n de hidro xido de sodio (6 en 100) y mezclar. Agregar inmediatamente un volumen de Reactivo de Biuret equivalente a 0,4 volu menes de la Solucio n de Prueba y mezclar. Dejar en reposo a una temperatura ambiente entre 158 y 258, durante no menos de 15 minutos. Dentro de los 90 minutos siguientes a la adicio n del Reactivo de Biuret, determinar las absorbancias de las Soluciones Esta ndar y de la solucio n obtenida de la Solucio n de Prueba a la longitud de onda de absorbancia ma xima a 545 nm con un espectrofoto metro adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i), usando el Blanco para ajustar el instrumento a cero. [NOTAToda solucio n que desarrolle turbidez, o un precipitado, no es aceptable para el ca lculo de la concentracio n proteica.] Ca lculosUsando el me todo de regresio n lineal de cuadrados m nimos, gracar las absorbancias de las Soluciones Esta ndar en funcio n de las concentraciones de prote na, determinando la curva esta ndar que mejor se ajuste a los puntos gracados y calcular el coeciente de correlacio n para la misma. [NOTADentro del intervalo dado de los esta ndares, la relacio n entre la absorbancia y la concentracio n proteica es aproximadamente lineal.] Un sistema adecuado es aquel que produce una l nea con un coeciente de correlacio n de no menos de 0,99. A partir de la curva esta ndar y de la absorbancia de la Solucio n de Prueba, determinar la concentracio n proteica de la muestra, haciendo las correcciones necesarias. Sustancias de InterferenciaA n de minimizar el efecto de las sustancias de interferencia, se puede precipitar la prote na en la muestra de prueba inicial, como se indica a continuacio n. Agregar 0,1 volu menes de a cido tricloroace tico al 50% a 1 volumen de una solucio n de la muestra de prueba, retirar la capa sobrenadante y disolver el precipitado en un volumen pequen o de hidro xido de sodio 0,5 N. Usar la solucio n as obtenida para preparar la Solucio n de Prueba. ComentariosEsta prueba muestra una diferencia m nima entre muestras de IgG y de albu mina equivalentes. La adicio n de hidro xido de sodio y del Reactivo de Biuret como reactivo
combinado, la mezcla insuciente despue s de la adicio n del hidro xido de sodio o un tiempo prolongado entre la adicio n de la solucio n de hidro xido de sodio y la adicio n del Reactivo de Biuret produce para las muestras de IgG una respuesta ma s alta que para las muestras de albu mina. El me todo de a cido tricloroace tico usado para minimizar los efectos de sustancias de interferencia tambie n se puede usar para determinar el contenido proteico en muestras de prueba con concentraciones por debajo de 500 mg por mL.
Me todo 6
Este me todo uorome trico se basa en la derivatizacio n de la prote na con o-ftalaldeh do (OPA), que reacciona con las aminas primarias de la prote na (es decir, el aminoa cido NH2-terminal y el grupo E-amino de los residuos lisina). La sensibilidad de la prueba puede aumentarse hidrolizando la prote na antes de realizar la prueba. Mediante hidro lisis los grupos a-amino de los aminoa cidos constituyentes de la prote na quedan disponibles para reaccionar con el reactivo o-ftalaldeh do. El me todo requiere cantidades muy pequen as de la prote na. Las aminas primarias, tales como el tris(hidroximetil)aminometano y las soluciones amortiguadoras de aminoa cidos, reaccionan con el o-ftalaldeh do y deben evitarse o eliminarse. El amon aco en concentraciones altas reacciona tambie n con el o-ftalaldeh do. La uorescencia obtenida cuando la amina reacciona con el oftalaldeh do puede ser inestable. El uso de procedimientos automatizados para estandarizar este procedimiento puede mejorar la exactitud y la precisio n de la prueba. Soluciones Esta ndarA menos que se especique algo diferente en la monograf a individual, disolver el Esta ndar de Referencia USP o el material de referencia para la prote na en ana lisis, en la solucio n amortiguadora usada para preparar la Solucio n de Prueba. Diluir porciones de esta solucio n con la misma solucio n amortiguadora para obtener no menos de cinco Soluciones Esta ndar con concentraciones uniformemente espaciadas entre 10 y 200 mg de prote na por mL. Solucio n de PruebaDisolver una cantidad adecuada de la prote na en ana lisis en la solucio n amortiguadora adecuada para obtener una solucio n con una concentracio n comprendida dentro del intervalo de concentraciones de las Soluciones Esta ndar. BlancoUsar la solucio n amortiguadora utilizada para preparar la Solucio n de Prueba y las Soluciones Esta ndar. Reactivos Solucio n Amortiguadora de BoratoDisolver aproximadamente 61,83 g de a cido bo rico en agua y ajustar con hidro xido de potasio, hasta un pH de 10,4. Diluir con agua a 1 L y mezclar. Reactivo OPA MadreDisolver aproximadamente 120 mg de oftalaldeh do en 1,5 mL de metanol, agregar 100 mL de Solucio n Amortiguadora de Borato y mezclar. Agregar 0,6 mL de e ter polioxietile n (23) laur lico y mezclar. Esta solucio n es estable a temperatura ambiente durante al menos 3 semanas. Reactivo OPAA 5 mL de Reactivo OPA Madre, agregar 15 mL de 2-mercaptoetanol. Preparar al menos 30 minutos antes de usar. Este reactivo es estable durante un d a. ProcedimientoAjustar cada una de las Soluciones Esta ndar y la Solucio n de Prueba a un pH entre 8 y 10,5. Mezclar 10 mL de la Solucio n de Prueba y 10 mL de cada una de las Soluciones Esta ndar con 100 mL de Reactivo OPA y dejar reposar a temperatura ambiente durante 15 minutos. Agregar 3 mL de hidro xido de sodio 0,5 N y mezclar. Usando un uoro metro adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i), determinar las intensidades de uorescencia de las soluciones obtenidas de las Soluciones Esta ndar y de la Solucio n de Prueba a una longitud de onda de excitacio n de 340 nm y a una longitud de onda de emisio n entre 440 y 455 nm. [NOTALa uorescencia de una muestra individual se lee so lo una vez, porque la irradiacio n disminuye la intensidad de la uorescencia.] Ca lculosLa uorescencia es funcio n lineal de la concentracio n proteica. Usando el me todo de regresio n lineal, gracar las intensidades de uorescencia de las soluciones obtenidas de las Soluciones Esta ndar en funcio n de las concentraciones de prote na y determinar la curva esta ndar que mejor se ajuste a los puntos
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gracados. A partir de la curva esta ndar as obtenida y de la intensidad de uorescencia de la Solucio n de Prueba, determinar la concentracio n proteica de la muestra.
te cnicas de deteccio n. Dado que la CI utiliza una fase mo vil predominantemente io nica, suele requerirse un supresor antes de la deteccio n conductime trica, aunque la deteccio n conductime trica no suprimida se ha utilizado con e xito en el ana lisis farmace utico.
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Este me todo se basa en el ana lisis de nitro geno como un medio de determinacio n de prote na. La interferencia causada por la presencia de otras sustancias nitrogenadas en la muestra pueden afectar la determinacio n de prote na por este me todo. Las te cnicas de ana lisis de nitro geno destruyen la prote na en ana lisis, pero no se limitan a la determinacio n de prote nas en un medio acuoso. Procedimiento 1Determinar el contenido de nitro geno de la prote na en ana lisis segu n se indica en Determinacio n de Nitro geno h461i. Hay instrumental disponible comercialmente para la valoracio n de nitro geno por el me todo de Kjeldahl. Procedimiento 2Hay instrumental disponible comercialmente para ana lisis de nitro geno. La mayor a de los instrumentos para ana lisis de nitro geno emplean piro lisis (es decir, la combustio n de la muestra en ox geno a temperaturas cercanas a los 10008), producie ndose o xido n trico (NO) y o xidos de nitro geno similares (NOx) a partir del nitro geno presente en la prote na de prueba. Algunos instrumentos convierten los o xidos n tricos en gas nitro geno, que se cuantica con un detector de conductividad te rmica. Otros instrumentos mezclan el o xido n trico (NO) con ozono (O3) forma ndose dio xido de nitro geno excitado (NO2), que emite luz cuando se desintegra y se puede cuanticar con un detector de quimioluminiscencia. Se usa un material de referencia de prote na o un esta ndar de referencia que sea relativamente puro y similar en composicio n a las prote nas de la prueba para optimizar los para metros de inyeccio n y piro lisis y para evaluar la uniformidad en el ana lisis. Ca lculosLa concentracio n proteica se calcula dividiendo el contenido de nitro geno de la muestra por el contenido conocido de nitro geno de la prote na. El contenido conocido de nitro geno de la prote na se puede determinar a partir de la composicio n qu mica de la prote na, o por comparacio n con el contenido de nitro geno del Esta ndar de Referencia USP o del material de referencia.&1S (USP30)
Fases Estacionarias y Fases Mo viles

Con el desarrollo y perfeccionamiento de la CI como te cnica instrumental, ha aumentado el nu mero de materiales de intercambio io nico desarrollados para esta te cnica gracias a la comprensio n de los procesos que tienen lugar en la supercie de la fase estacionaria. A diferencia del relleno de la columna de s lice predominante en la HPLC cla sica, en la CI se utilizan principalmente pol meros orga nicos como materiales de soporte. Este tipo de materiales presenta una mayor estabilidad ante valores de pH extremos y, en muchos casos, son compatibles con los disolventes orga nicos. Normalmente, la separacio n de los aniones requiere el uso de intercambiadores de aniones a base de pol meros y bases diluidas como fases mo viles. Sin embargo, para la separacio n de los cationes, la estabilidad en toda la gama de pH que es t pica de los pol meros orga nicos no es necesaria, ya que los a cidos diluidos sirven como fases mo viles. En consecuencia, para la separacio n de cationes suelen utilizarse intercambiadores de cationes a base de s lice que presentan una eciencia cromatogra ca considerablemente superior. Segu n la te cnica de separacio n empleada (intercambio io nico, exclusio n io nica o pares io nicos), se utilizan diferentes tipos de fases estacionarias. En el caso del intercambio io nico, se utiliza como fase estacionaria un intercambiador de aniones o de cationes. Por lo general, se utiliza un intercambiador de cationes fuerte para la separacio n de a cidos orga nicos mediante exclusio n io nica y una fase estacionaria en reversa cuando se utiliza la te cnica de separacio n por pares io nicos. La capacidad de intercambio io nico de una resina se dene como el nu mero de sitios de intercambio io nico por peso equivalente al relleno de la columna y suele expresarse en mEq por g de resina. En el caso del intercambio io nico, los tiempos de retencio n de los iones de analito aumentan cuando aumenta la capacidad de intercambio io nico de la resina. Este efecto puede compensarse en parte utilizando fases mo viles de mayor concentracio n io nica. En el proceso de fabricacio n de los intercambiadores io nicos a base de pol meros se utilizan copol meros de estireno/divinilbenceno, polimetacrilato y resinas polivin licas como materiales de sustrato. Los pol meros orga nicos actu an directamente en su supercie, a excepcio n de los intercambiadores io nicos a base de la tex, en los que la part cula de la tex totalmente porosa actu a como material de intercambio io nico. Los sustratos peliculares que actu an en la supercie presentan una eciencia cromatogra ca mucho mayor en comparacio n con las resinas de actuacio n integral. En el intercambio io nico, para lograr la separacio n se utiliza una fase mo vil compuesta por especies io nicas monovalentes o divalentes, solas o mezcladas en una proporcio n o ptima. En los me todos de exclusio n io nica, particularmente para los a cidos orga nicos, la fase mo vil consta de a cidos minerales para mantener los a cidos orga nicos en sus formas no disociadas. Con frecuencia, la naturaleza del analito determina la fase mo vil y el me todo de deteccio n utilizados. A continuacio n, en la seccio n sobre detectores, se describen las fases mo viles t picamente utilizadas en la CI.
A IO NICA h1065i CROMATOGRAFI
APARATOS
Los instrumentos utilizados en la CI se asemejan en gran medida a los utilizados en la HPLC convencional. Los componentes t picos incluyen un muestreador automa tico, una bomba de alta presio n, una va lvula de inyeccio n con un bucle de muestra de taman o adecuado (normalmente de 10 a 250 mL), una guarda columna, una columna anal tica, un supresor opcional u otras formas de sistema de reaccio n posterior al paso por columna, un detector de ujo continuo y un sistema de datos cuya complejidad puede variar desde un integrador a un sistema de datos computarizado (Figura 1). Dado que, por lo general, las fases mo viles consisten en soluciones diluidas de a cidos, a lcalis o sales, los componentes que esta n en contacto con la fase mo vil y la muestra suelen realizarse a partir de materiales inertes, como por ejemplo polieteretercetona (PEEK, por sus siglas en ingle s). Tambie n pueden utilizarse los sistemas HPLC convencionales siempre que sus componentes sean compatibles con la fase mo vil y las soluciones de muestras inyectadas. &Se debe usar un sistema exento de metales para el ana lisis de trazas de metales.&1S (USP30) Despue s de una preparacio n adecuada, la muestra se introduce a trave s de la va lvula de inyeccio n. Seguido de la supresio n qu mica opcional u otra reaccio n posterior al paso por columna en el euente de la columna, se detectan las especies de analitos empleando conductividad, amperometr a, UV/VIS u otras
Detectores
La deteccio n por conductividad es, sin duda, el me todo de deteccio n ma s utilizado en CI. A pesar de que las tareas de desarrollo original de la CI inclu an el uso de resinas de intercambio io nico de baja capacidad con el n de lograr una separacio n cromatogra ca y una deteccio n conductime trica de iones que fueran ecientes, en una fase mo vil qu micamente suprimida, los avances en tecnolog as de columna y el desarrollo del instrumental permiten, en la actualidad, el uso de intercambio io nico de alta capacidad. En la CI suprimida, la conductancia de fondo de la fase mo vil io nica se reduce considerablemente a medida que uye a trave s del dispositivo de supresio n. Por ejemplo, el NaOH diluido, aproximadamente de 10 a 50 mM, usado como fase mo vil en CI de aniones se convierte a H2O (escasa conductividad) cuando el euente de la columna que contiene NaOH uye a trave s de un dispositivo supresor presente en forma a cida. Las especies io nicas del analito en
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h1065i Cromatograf a Io nica / Informacio n General
Figura 1. Ilustracio n esquema tica de los componentes de un sistema de CI t pico; DC = detector de conductividad y DAP = detector amperome trico por pulsos el euente de la columna se convierten de su forma salina a base de sodio o de otro metal a formas a cidas altamente conductoras (debido a la mayor conductancia equivalente de los iones de hidro geno en comparacio n con otros cationes). Se producen reacciones ana logas en el supresor de forma de hidro xido en la CI de cationes, en la que la fase mo vil a cida se convierte en agua y los cationes del analito se convierten en formas de hidro xido altamente conductoras (debido a la mayor conductancia equivalente de los iones de hidro xido en comparacio n con otros aniones). La reduccio n en la conductancia de fondo y el aumento en la sen al debido a las especies io nicas dan como resultado una relacio n sen al-ruido mejorada para la deteccio n conductime trica de iones en CI suprimida. Esto produce una reduccio n en el ruido de fondo y un aumento en la sensibilidad y en la capacidad de reproduccio n del ana lisis. Los dispositivos de supresio n qu mica comu nmente utilizados se encuentran en una de tres categor as generales. En la primera, las reacciones se producen a trave s de una membrana de intercambio io nico y los iones regeneradores son proporcionados por un producto qu mico o bien como productos de la electro lisis del agua. En la segunda, las reacciones de supresio n se producen en un lecho de material de resina de alta capacidad de intercambio, relleno, y la regeneracio n se obtiene mediante un producto qu mico o por la electro lisis del agua. En la tercera, aunque no son muy utilizados, las reacciones de supresio n tienen lugar cuando el ujo de eluyente se mezcla con el ujo de material de resina de alta capacidad. En el caso de ana lisis farmace uticos, la deteccio n conductime trica suprimida puede utilizarse para detectar trazas de iones en aguas de alta pureza. Las fases mo viles ma s utilizadas para la separacio n de aniones mediante CI suprimida incluyen iones de hidro xido o una mezcla de iones de bicarbonato y carbonato. Las fases mo viles normalmente utilizadas para la separacio n de cationes constan, por lo general, de a cidos minerales o de a cido metanosulfo nico. Los ana lisis por cromatograf a io nica tambie n pueden realizarse sin supresio n qu mica, en cuyo caso el euente de la columna anal tica uye directamente a un detector de conductividad. Los eluyentes normalmente utilizados en CI no suprimida son a cido fta lico y a cido p-hidroxibenzoico para la determinacio n de aniones y a cido metanosulfo nico para la determinacio n de cationes. Los valores de conductancia equivalentes del cloruro, del sulfato y de otros aniones comunes son considerablemente mayores que los del anio n del eluyente y, en consecuencia, se detecta un pico positivo cuando los aniones pasan por el detector. Los valores de conductancia equivalentes del sodio, del potasio, del calcio, del magnesio y de otros cationes comunes son considerablemente menores que los del catio n (H+) del eluyente. En este caso, se detecta un pico negativo cuando los cationes pasan por el detector. La CI no suprimida es ma s fa cil de realizar y es una te cnica u til para determinar los iones de a cidos de biles como cianuro y sulfuro, que son no conductores despue s de la supresio n qu mica pero presentan un ruido inicial ma s elevado. Los ana lisis farmace uticos pueden realizarse en el modo no suprimido debido a que los l mites de cuanticacio n en mg por L suelen encontrarse en los niveles porcentuales superiores a bajos. Si bien por lo general deben implementarse metodolog as con supresio n qu mica en los sistemas de instrumentos disen ados espec camente para este propo sito, la CI puede realizarse sin el supresor en una HPLC ya existente. Esto es posible debido a que los eluyentes normalmente utilizados en la CI incluyen bases o a cidos diluidos que sean compatibles con los instrumentos de HPLC ya existentes. Al considerar este me todo, se recomienda a los analistas que consulten al fabricante del instrumento para vericar su aplicabilidad en el ana lisis por CI.
OTROS DETECTORES
Otras te cnicas de deteccio n comu nmente utilizadas en CI incluyen amperometr a por pulsos, deteccio n UV directa o derivacio n posterior al paso por columna seguida por deteccio n UV/VIS. Te cnica de Deteccio n Amperome trica Por Pulsos (DAP)Esta te cnica es una variante especializada de la te cnica amperome trica convencional. Este tipo de detector suele utilizarse para la deteccio n de especies electroactivas, por ejemplo, compuestos orga nicos como por ejemplo carbohidratos, alcoholes de azu car, aminoa cidos y especies de azufre orga nico. En esta te cnica, los analitos se detectan mediante un proceso de desorcio n oxidativa en la supercie de un electrodo ubicado en el ujo de euente de la columna. Despue s del proceso de deteccio n, se aplica una serie de potenciales durante per odos jos para limpiar la supercie del electrodo. A diferencia de la amperometr a convencional en la que la supercie del electrodo se ensucia, en esta variante se aplica una secuencia de potenciales de trabajo diferentes de ra pida reiteracio n, denominada forma de onda, que ayuda a eliminar los productos de las reacciones redox de la supercie del electrodo. Deteccio n UV Directa &e Indirecta&1S (USP30)La Deteccio n UV Directa se utiliza para iones inorga nicos y orga nicos que poseen stos incluyen a un cromo foro UV. E cidos orga nicos, bromuro, yoduro, nitrato, nitrito, tiosulfato y complejos cianometa licos. En forma ana loga a la deteccio n conductime trica inversa de cationes, la deteccio n UV tambie n puede realizarse en forma indirecta. Este me todo se conoce como cromatograf a fotome trica indirecta (CFI). Deteccio n Fotome tricaLa deteccio n fotome trica consiste en la & quelacio n&1S (USP30) de &iones meta licos en el&1S (USP30) euente de la columna con un reactivo colorante antes de su deteccio n a una longitud de onda visible. Un ejemplo cla sico es la separacio n de iones meta licos en la que el euente de la columna se & quela&1S (USP30) con 4-(2-piridilazo)-resorcinol seguido por su deteccio n en un margen de 510 nm a 530 nm.
Informacio n General / h1080i Excipientes Farmace uticos a Granel
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REQUISITOS ADICIONALES PARA ALGUNOS CULOS ARTI

h1070i AMBULANCIAS Y CULOS PARA SERVICIOS VEHI DICOS DE EMERGENCIA ME ALMACENAMIENTO DE PREPARACIONES
&
El almacenamiento y manipulacio n de productos farmace uticos en ambulancias y veh culos de emergencia debe realizarse de tal manera que se conserven los atributos de los art culos ociales. En el momento de formular, evaluar, implementar y reevaluar perio dicamente un plan ecaz se deben considerar varias pra cticas. Dichas pra cticas se enumeran en este cap tulo. Se deben implementar dispositivos de monitoreo para registrar las temperaturas semanales y permitir el ca lculo de la temperatura cine tica media (MKT, por sus siglas en ingle s) a n de cumplir con el almacenamiento a temperatura ambiente controlada en los veh culos utilizados en forma continuada. Tambie n se debe realizar la medicio n durante un per odo t pico de desaf `o de 24 horas y utilizar la temperatura obtenida para el ca lculo de la MKT y de la temperatura de almacenamiento de la muestra.
Se debe proteger a todos los art culos del calor excesivo (408). Si el art culo requiere almacenamiento en un lugar fr o o seco o a temperatura ambiente controlada se debera tomar medidas adecuadas para mantenerlo dentro de los l mites denidos (ver Conservacio n, Envasado, Almacenamiento y Etiquetado en Advertencias y Requisitos Generales). Los art culos con los requisitos de almacenamiento ma s rigurosos determinan el almacenamiento de cargas mixtas.
N DE ALMACENAMIENTO Y MANIPULACIO PREPARACIONES SENSIBLES

No se debe almacenar las preparaciones sensibles al medio ambiente en veh culos de atencio n de emergencias a menos que el gabinete a bordo en el que se almacenen los medicamentos sea de clima controlado o que se je un indicador de tiempo y temperatura a cada envase. Si este tipo de preparaciones se debe guardar en el veh culo de servicios me dicos de emergencia, debera rotarse el suministro de medicamentos con el inventario de reserva de acuerdo con un plan basado en el clima local, pero que no exceda de 3 d as.
USO DE INDICADORES DE TIEMPO Y TEMPERATURA

Fijar indicadores de tiempo y temperatura a cada preparacio n termola bil en la que el tiempo fuera del gabinete a bordo puede exceder un total de 4 d as. Los gabinetes a bordo deben ser aislados y, mientras tengan medicamentos en su interior, se debera n usar los dispositivos de calefaccio n y refrigeracio n de acuerdo con el clima local y segu n se especique para las preparaciones.&1S (USP30)
MONITOREO DEL GABINETE DE UTICO; ALMACENAMIENTO FARMACE N DE VEHI CULOS ESTACIONADOS UBICACIO
Se debe monitorear las ambulancias y otros veh culos de asistencia me dica de emergencia que transportan habitualmente art culos farmacopeicos para vericar que los perles de temperatura y los maletines refrigerados o gabinetes de almacenamiento farmace utico a bordo se encuentren dentro de los l mites establecidos. Se deben colocar dispositivos de monitoreo adecuados en el gabinete farmace utico de cada veh culo para registrar las temperaturas ma ximas y m nimas, por lo menos, de cada d a ca lido de verano y cada d a fr o de invierno. Para evitar temperaturas extremas, el personal de las ambulancias debe contemplar el estacionamiento de los veh culos en la sombra o en garages con aire acondicionado en el verano o en garages calefaccionados en el invierno.
h1080i EXCIPIENTES UTICOS A GRANEL FARMACE LISIS CERTIFICADO DE ANA

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N DE INVENTARIO ROTACIO
Se debe implementar un programa de rotacio n regular de inventario para art culos de baja rotacio n. Se entiende como rotacio n a la transferencia de los art culos rotulados adecuadamente como art culos de inventario a una instalacio n de clima controlado adecuada o gabinete de almacenamiento tal como en la ce lula sanitaria de la ambulancia. El almacenamiento de cada art culo fuera del veh culo esta sujeto al requisito de almacenamiento en el etiquetado aprobado o en la monograf a USP pertinente.
ANTECEDENTES
Este cap tulo de informacio n general deriva de la Certicate of Analysis Guide for Bulk Pharmaceutical Excipients (Gu a para el Certicado de Ana lisis de Excipientes Farmace uticos a Granel), preparada por el Consejo Internacional sobre Excipientes Farmace uticos de las Ame ricas (IPEC-Ame ricas, por sus siglas en ingle s), documento internacional gu a para la preparacio n y el uso apropiado de un Certicado de Ana lisis (COA, por sus siglas en ingle s) para estos excipientes, en adelante denominados excipientes. El cap tulo dene los elementos sugeridos de un Certicado de Ana lisis, proporciona un modelo para organizar de manera lo gica los datos requeridos y opcionales y ayuda a establecer una comprensio n uniforme de las funciones y responsabilidades de los fabricantes, distribuidores y usuarios de excipientes. Los principios y la informacio n de este cap tulo se pueden aplicar a la fabricacio n de todos los excipientes farmace uticos a granel destinados a ser utilizados en medicamentos para uso humano, medicamentos para uso veterinario y productos biolo gicos. Como documento gu a internacional, no es posible especicar todos los requisitos legales nacionales ni abarcar en detalle las caracter sticas particulares de todos los excipientes. Cuando se considere el uso de este cap tulo, cada fabricante, distribuidor o usuario debe tener en cuenta co mo podr a aplicarse a los productos y procesos de ese
ALMACENAMIENTO Y MONITOREO DE LA TIL CAJA PORTA

Las bolsas o cajas porta tiles en las que se guardan fa rmacos deben ser aisladas y, cuando no se utilizan, se deben guardar en un gabinete de almacenamiento farmace utico o en instalaciones a temperatura ambiente controlada. Cuando se indique, se debe considerar el almacenamiento so lo en bolsas o cajas porta tiles, ma s que en gabinetes a bordo, para facilitar la rotacio n de inventario. Se recomienda el uso de indicadores de tiempo y temperatura para monitorear el dan o acumulativo al contenido de todos los compartimientos.
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h1080i Excipientes Farmace uticos a Granel / Informacio n General
fabricante espec co. La diversidad de excipientes implica que algunos de los principios de este cap tulo podr an no ser aplicables a determinados productos y procesos. El cap tulo esta dividido en varias partes. La primera proporciona los antecedentes necesarios para el disen o y los elementos sugeridos de un COA. Se suministra un modelo con el n de mostrar el formato y la localizacio n de la informacio n en el COA. A continuacio n se ofrece una discusio n detallada para garantizar la comprensio n del propo sito y signicado de la informacio n espec ca contenida en el COA. Ver en el Ape ndice 1, una lista de te rminos usados en este cap tulo de informacio n y sus deniciones.
Uso de Instalaciones ContratadasEn la fabricacio n, prueba y distribucio n de excipientes se usan con frecuencia instalaciones contratadas. En esos casos, el proveedor del excipiente tiene la obligacio n de garantizar que las instalaciones funcionen bajo normas de calidad apropiadas (es decir, cGMP, GLP, etc.).
O Y ELEMENTOS SUGERIDOS DE UN DISEN LISIS CERTIFICADO DE ANA

A continuacio n se enumeran los elementos sugeridos de un COA y se incluyen en la seccio n Modelo de Certicado de Ana lisis de este cap tulo. Los proveedores de excipientes pueden organizar a su discrecio n los elementos sugeridos presentados en el modelo de COA; sin embargo, las partes de este modelo fueron disen adas para presentar la informacio n sugerida y opcional en una forma lo gica. Ver ma s adelante en este cap tulo, una descripcio n detallada de cada elemento y ejemplos de declaraciones. El origen e identidad del excipiente se establecen por lo general en una seccio n llamada Encabezado. El fabricante y el lugar de fabricacio n deben identicarse si son diferentes del proveedor y de la ubicacio n del proveedor, lo que permite al usuario asegurarse de que el excipiente proviene de una fuente calicada. Aunque el nombre de fabricante debe ser informado al usuario, es aceptable el uso de co digos para fabricantes y lugares de fabricacio n en el COA, con el n de proteger la condencialidad. Se debe establecer inequ vocamente la identidad del excipiente, indicando los nombre farmacopeico y comercial, el grado del material y las denominaciones farmacopeicas aplicables. Un nu mero de lote o partida u otro medio para identicar exclusivamente la cantidad de material cubierto por el COA y la informacio n relacionada espec camente al mismo se incluyen, por lo general, en la seccio n denominada Cuerpo. El nu mero de lote u otra identicacio n exclusiva del material, su fecha de fabricacio n y el co digo o nu mero del producto deben declararse y poder rastrearse a un lote especicado. De ser procedente, en esta seccio n se incluye por lo general la fecha de caducidad, la fecha recomendada de reevaluacio n o cualquier otra declaracio n relevante relacionada con la estabilidad del excipiente. Cualquier informacio n requerida por el cliente tambie n se deber a incluir aqu . Los resultados reales de las pruebas que sean pertinentes a la cantidad del material cubierto en el COA se incluyen en la seccio n Ana lisis. El nombre de la prueba, el resultado, los criterios de aceptacio n o especicaciones y una referencia al me todo de prueba utilizado se deben incluir para cada caracter stica enumerada. Se recomienda informar los datos y observaciones reales en lugar de las declaraciones inespec cas pasa o cumple. Se debe anotar en el COA si los resultados informados derivan de un programa de ana lisis perio dico de lotes (skip-lot) o de ana lisis de frecuencia reducida, un promedio o un resultado de pruebas durante el proceso. La seccio n Declaraciones de Cumplimiento y Certicacio n se usa para enumerar los diversos tipos de declaraciones que pueden requerirse, dependiendo del excipiente y las necesidades espec cas del usuario. Dichas declaraciones por lo general se negocian entre el proveedor y el usuario, basa ndose en los requisitos de aplicacio n espec cos. En esta seccio n se incluye, por lo general, cualquier declaracio n del proveedor que se reera al cumplimiento de otros requisitos farmacopeicos o reglamentarios adicionales. Muchos excipientes tienen aplicaciones diferentes de las farmace uticas, como por ejemplo en alimentos, cosme ticos o productos industriales. Cualquier producto que declara cumplir con reglamentaciones espec cas debe cumplir con las especicaciones y requisitos de esa reglamentacio n y fabricarse bajo las GMP correspondientes. En el COA debe aparecer la identidad del individuo que aprueba el contenido del COA, as como el nu mero de pa gina y total de pa ginas del COA. Esta informacio n se incluye por lo general en la seccio n de Pie de pa gina.
A GENERAL GUI
Los reglamentos internacionales que rigen los medicamentos exigen que sus componentes se fabriquen, procesen, envasen y conserven de conformidad con las buenas pra cticas de fabricacio n (GMP, por sus siglas en ingle s). Para una explicacio n detallada de las GMP que aplican a la fabricacio n de excipientes, ver Buenas Pra cticas de Fabricacio n para Excipientes Farmace uticos a Granel h1078i. Un excipiente es con frecuencia una sustancia natural, una mezcla o un pol mero, cuyas propiedades qu micas y f sicas son dif ciles de cuanticar y que se usa a menudo con una amplia gama de ingredientes farmace uticos activos y en una gran variedad de formas farmace uticas terminadas. Hasta el momento, no se contaba con documentos gu a que se enfocaran espec camente en el contenido o formato de los COA para excipientes y que trataran la diversidad tanto de los excipientes como de su uso. Preparacio n y Uso Apropiado de un Certicado de Ana lisis El proveedor del material debe preparar y emitir el Certicado de Ana lisis para excipientes, de acuerdo con las pautas generales que se discuten a continuacio n. La responsabilidad primordial de preparar el COA recae en el fabricante del excipiente. Es de suma importancia que el usuario del excipiente reciba un COA completo y exacto para lotes o partidas espec cos destinados a ser usados en la industria farmace utica. El distribuidor de excipientes debe tener en cuenta ciertas consideraciones adicionales para la preparacio n y emisio n de un COA. El usuario de un excipiente farmace utico a granel debe recibir siempre un COA para el material que se usara en la fabricacio n de un medicamento. Como m nimo, el usuario debera efectuar pruebas de identicacio n adecuadas en cada lote de excipiente recibido antes de liberarlo para su uso en el medicamento. Siempre que sea posible se deben usar pruebas de identidad espec cas. Segu n los requisitos reglamentarios, se debe evaluar la conformidad de los excipientes con todas las especicaciones correspondientes. Sin embargo, es posible que no se requiera el ana lisis de todos los para metros de especicacio n para la liberacio n de un lote, si en el COA del proveedor se han proporcionado las garant as de cumplimiento adecuadas. Antes de usar un excipiente en un producto farmace utico basa ndose en datos del COA, el usuario debe conocer los sistemas de control del proveedor y su cumplimiento con las GMP, a trave s de auditor as apropiadas o de la calicacio n del proveedor. No obstante, es responsabilidad del usuario del excipiente la vericacio n de cualquiera de los datos anal ticos contenidos en el COA, si el conocimiento de dicha informacio n se considera esencial para el uso de ese excipiente. Dichas pruebas pueden salirse del alcance de los me todos farmacopeicos descritos en el NF, o de los usados para desarrollar la informacio n en el COA. Para usar los resultados de las pruebas de un COA, el usuario debe tambie n determinar la conabilidad de los resultados de las pruebas del COA del proveedor, efectuando perio dicamente todas las pruebas requeridas y comparando los resultados obtenidos con los suministrados por el proveedor. Ocasionalmente, puede que no sea posible efectuar todas las pruebas requeridas debido a que los equipos especiales necesarios, etc, no se encuentran disponibles para el usuario. Puede ser aceptable efectuar menos pruebas que las indicadas, siempre y cuando la conabilidad del proveedor se establezca adecuadamente con otras te cnicas de calicacio n apropiadas. Es importante comprender que estos resultados pueden no siempre correlacionarse espec camente, en especial cuando un excipiente se produce como un lote continuo. Sin embargo, los resultados de las pruebas del usuario deben demostrar el cumplimento con los requisitos de las especicaciones.
LISIS MODELO DE CERTIFICADO DE ANA

A continuacio n se presenta un modelo del contenido y formato de un COA.
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Encabezado
Titulado Certicado de Ana lisis Nombre de la Compan a, Direccio n, Tele fono e Identidad del Fabricante y Lugar de Fabricacio n Nombre (farmacopeico/comercial) del Excipiente Grado del Excipiente Denominacio n Farmacopeica
Cuerpo
Nu mero de Lote/Partida Fecha de Fabricacio n Co digo o Nu mero del Producto Fecha de Caducidad (segu n corresponda) Fecha Recomendada de Reevaluacio n (segu n corresponda) Declaracio n de Estabilidad (segu n corresponda) Informacio n Requerida por el Cliente
Ana lisis
Nombre de la Prueba Resultados de la Prueba Criterios de Aceptacio n (es decir, especicaciones) Referencia al Me todo de Prueba Referencia al Ana lisis Perio dico de Lotes (segu n corresponda) Referencia al Promedio o a los Resultados de Prueba durante el Proceso (segu n corresponda) Fecha de Reana lisis (segu n corresponda) Resumen de Pruebas no Farmacopeicas (si las hubiera)
para garantizar que el art culo, cuando se almacena de acuerdo con las condiciones recomendadas, cumple con las normas farmacopeicas hasta su fecha de caducidad o fecha recomendada de reevaluacio n. Todo art culo farmacopeico debe estar constituido de forma tal que cuando se examine de acuerdo con estos procedimientos de prueba y valoracio n, cumpla con todos los requisitos en la monograf a que lo dene, as como con las provisiones en Advertencias y Requisitos Generales y en los cap tulos generales, segu n corresponda. Sin embargo, no debe inferirse que la aplicacio n de todos los procedimientos anal ticos de la monograf a a muestras de cada una de las partidas de produccio n es un prerrequisito necesario para asegurar el cumplimiento con las normas farmacopeicas antes de liberar las partidas para su distribucio n. Los datos obtenidos a partir de los estudios de validacio n de procesos de fabricacio n y de controles durante el proceso pueden conferir mayores garant as sobre una partida, en lo que se reere al cumplimiento de los requisitos de una monograf a en particular, que la informacio n anal tica obtenida del examen de unidades terminadas de esa partida. Basa ndose en tales garant as, el proveedor puede omitir los procedimientos anal ticos de la monograf a al juzgar el cumplimiento de la partida con las normas farmacopeicas.
LISIS FECHAS EN UN CERTIFICADO DE ANA

Parte del objectivo general de estandarizar los COA para excipientes incluye una provisio n para el informe uniforme de fechas apropiadas, signicativas y bien denidas. A continuacio n se indican las fechas espec cas que se esperan encontrar en el COA, junto con las deniciones de las mismas, con el n de proporcionar a los proveedores y usuarios de excipientes una comprensio n mutua de su signicado. El uso de la terminolog a recomendada sera u til para reducir la cantidad de preguntas recibidas sobre la informacio n relativa a las fechas de los excipientes. No es aconsejable el uso de una terminolog a diferente de la que se discute a continuacio n, porque los te rminos pueden estar mal denidos y tener signicados diferentes para el proveedor y el usuario de excipientes. Ejemplos de aquellos te rminos que no se deben usar incluyen vida u til, fecha l mite de uso, fecha de garant a y per odo de caducidad. Al informar fechas en un COA para excipientes, es importante usar un formato claro y sin ambigu edades con el n de evitar posibles tergiversaciones. Para ello, se recomienda usar una designacio n alfa para el mes (puede ser abreviado), en vez de una representacio n nume rica. Se recomienda tambie n incluir los 4 d gitos en el an o (por ej., Ene. 1, 2005 o 18 ene. 2005). Fecha de Fabricacio nLa fecha de fabricacio n se debe incluir en el COA para cada lote de excipiente y debe ser asignada por los proveedores basa ndose en sus pol ticas y procedimientos establecidos. Se sabe que los excipientes pueden fabricarse usando una gran variedad de procesos (por ej., continuo o por partida) que pueden requerir un per odo de varios d as o ma s para completarse. Adema s, algunos excipientes pueden ser mezclas o combinaciones de otros excipientes y la produccio n puede incluir pasos de reprocesamiento. Debido a esta diversidad, el proveedor debe denir claramente la fecha de fabricacio n y aplicarla en forma uniforme al excipiente y al proceso espec cos. Al informar la fecha de fabricacio n, el proveedor del excipiente debe indicar la fecha de terminacio n del proceso nal de fabricacio n (segu n lo denido por el proveedor). Cabe destacar que el reenvasado por s solo no se considera un paso del procesamiento utilizado para determinar la fecha de fabricacio n. Con el n de permitir la rastreabilidad de un lote espec co de un excipiente, pueden requerirse otras fechas adema s de la de fabricacio n, que reejen pasos adicionales como el reenvasado. F e c h a d e C a du c i d a d y F e c h a R e c o m e n da da de Reevaluacio nLa estabilidad de los excipientes puede ser un factor importante en la estabilidad de las formas farmace uticas terminadas que los contienen. Muchos excipientes son muy estables y pueden no requerir pruebas exhaustivas para demostrar la conformidad continua con las especicaciones pertinentes. Otros excipientes pueden sufrir cambios qu micos, f sicos y microbiolo gicos con el tiempo, que hacen que el producto se aleje de las especicaciones establecidas.
Declaraciones de Cumplimiento y Certicacio n

Cumplimiento con las GMP Referencias Reglamentarias Adicionales Potencial para Cumplir Normas Farmacopeicas Adicionales Listado de Contenido y Grado de los Ingredientes (si fuera una mezcla) Otras Declaraciones Espec cas de Cumplimiento [por ej., impurezas orga nicas vola tiles, disolventes residuales, encefalopat a espongiforme transmisible (TSE, por sus siglas en ingle s), etc.]
Pie de Pa gina
Identidad de la Persona Autorizada para la Aprobacio n Fecha de Aprobacio n Nu mero de Pa gina (es decir, 1 de __)
N FARMACOPEICA DENOMINACIO
Para que un proveedor pueda declarar el grado farmacopeico de un excipiente en el COA, se deben cumplir dos requisitos. El primer requisito es que el excipiente sea fabricado de acuerdo con los principios reconocidos de GMP (ver Advertencias y Requisitos Generales). La adecuada conformidad con las GMP se debe demostrar tambie n para los pasos subsiguientes en la distribucio n del excipiente. El segundo requisito es que el excipiente cumpla con todas las especicaciones contenidas en la monograf a ocial correspondiente, a menos que su diferencia se declare en la etiqueta, segu n se dene en Advertencias y Requisitos Generales. Cuando un excipiente se declara como de grado farmacopeico, se entiende que el material ha cumplido con los requisitos anteriores y el usuario podr a conrmarlo a trave s de una auditor a apropiada del proveedor. Las normas farmacopeicas denen lo que se considera un art culo aceptable y establecen tambie n los procedimientos de prueba para demostrar conformidad con los requisitos. Estas normas son aplicables en cualquier momento de la vida del art culo, desde su produccio n hasta su consumo. Las especicaciones de liberacio n del proveedor y el cumplimiento de las GMP se desarrollan y siguen
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Las fechas apropiadas de caducidad y/o fechas recomendada de reevaluacio n para los excipientes se deben establecer a partir de los resultados de un programa documentado de pruebas de estabilidad o a partir de datos histo ricos. El programa de pruebas debe incluir las condiciones denidas y controladas de almacenamiento (por ej., temperatura y humedad), la consideracio n de los diferentes tipos de envases que se pueden usar para la comercializacio n, y los me todos de prueba espec cos y signicativos para evaluar las caracter sticas de estabilidad del excipiente. Las pruebas de estabilidad deben determinar si puede ocurrir degradacio n, pe rdida o ganancia de humedad, cambios de viscosidad u otros cambios posibles que hagan al excipiente inaceptable para el uso (por ej., materiales inestables o higrosco picos). Ver en Buenas Pra cticas de Fabricacio n para Excipientes Farmace uticos a Granel h1078i, informacio n adicional sobre la estabilidad del excipiente. La fecha de caducidad de un excipiente se dene como la fecha despue s de la cual el proveedor recomienda no usar el material. Antes de la fecha de caducidad asignada, se espera que el excipiente se mantenga dentro de las especicaciones establecidas, si se almacena de acuerdo con las condiciones recomendadas por el proveedor. La fecha recomendada de reevaluacio n para un excipiente es la fecha sugerida por el proveedor despue s de la cual el material debe ser reevaluado para garantizar el cumplimiento continuo con las especicaciones. La reevaluacio n del excipiente puede incluir la inspeccio n f sica y pruebas qu micas, f sicas y microbiolo gicas apropiadas. Antes de la fecha de reevaluacio n, se espera que el excipiente se mantenga dentro de las especicaciones establecidas, siempre y cuando se haya almacenado de acuerdo con las condiciones recomendadas por el proveedor. Sin embargo, pasada la fecha recomendada de reevaluacio n, el excipiente no debe usarse sin la evaluacio n adecuada a los intervalos apropiados para determinar si el material sigue siendo aceptable para el uso. La fecha recomendada de reevaluacio n diere de la fecha de caducidad en que el excipiente puede reevaluarse para extender el tiempo en que puede usarse, si lo respaldan los resultados de la evaluacio n y los datos de estabilidad apropiados. Al informar la fecha de caducidad y la fecha recomendada de reevaluacio n, el proveedor del excipiente proporciona al usuario informacio n importante, relacionada con la estabilidad del material. Como se discutio previamente, la asignacio n de una fecha de caducidad y de una fecha recomendada de reevaluacio n debe basarse en la evaluacio n apropiada de los cambios potenciales que pueden ocurrir en las propiedades del material. Es aceptable informar tanto la fecha de caducidad como la fecha recomendada de reevaluacio n en el COA de excipientes, si corresponde, pero no siempre se requieren ambas fechas. La fecha de caducidad y la fecha recomendada de reevaluacio n no deben ser informadas por un proveedor sin sucientes datos de estabilidad o de historia del producto para respaldar las fechas asignadas. En caso de excipientes muy estables (ma s de 2 an os), se debe informar la fecha de caducidad espec ca y/o la fecha recomendada de reevaluacio n en el COA del material o se puede incluir una declaracio n general de estabilidad (por ej., estabilidad mayor de 2 an os). Si los datos disponibles indican que un excipiente tiene estabilidad limitada (2 an os o menos) bajo las condiciones de almacenamiento anticipadas, se debe informar la fecha de caducidad espec ca y/o la fecha recomendada de reevaluacio n en el COA del material. Si los datos de estudios formales de estabilidad de un excipiente no esta n disponibles, se debe incluir en el COA una declaracio n apropiada para indicar lo que se conoce acerca de la estabilidad del material y si se esta n llevando a cabo los estudios de estabilidad. Fecha de Reana lisisSi el proveedor de un excipiente efectu a un reana lisis y los resultados se usan para extender el tiempo de uso del material, la fecha de reana lisis se debe informar tambie n en el COA. Las pruebas espec cas que se utilizaron en el reana lisis se deben identicar claramente e informar los resultados obtenidos despue s del reana lisis. Tambie n se debe informar en el COA una nueva fecha recomendada de reevaluacio n despue s del reana lisis. Fechas AdicionalesEn un COA pueden aparecer otras fechas, si as lo desea el proveedor del excipiente o lo solicita el usuario. Algunos ejemplos incluyen la fecha de liberacio n, la fecha de env o, la fecha de ana lisis y la fecha en que se imprimio o aprobo el COA. Cualquier fecha adicional que aparezca en un COA para excipientes debe incluir una indicacio n clara de lo que representa o signica.
LISIS FRECUENCIA DEL ANA

Para los excipientes listados en los compendios USPNF, el proveedor ja las especicaciones del producto de manera que incluyan todos los para metros enumerados en la monograf a. No se requiere realizar el ana lisis de todos los para metros de especicacio n en cada lote (ver Advertencias y Requisitos Generales). Sin embargo, se debe contar con sucientes datos de ana lisis y validacio n de procesos para garantizar que el lote cumpla con todas las especicaciones antes de su liberacio n. Esta es una pra ctica establecida que se ha usado exitosamente en la industria por muchos an os. El ana lisis perio dico de todos los para metros se debe llevar a cabo para revalidar el sistema de control. Los proveedores deben determinar la frecuencia de estos ana lisis perio dicos basa ndose en su comprensio n del sistema de control de fabricacio n. Como m nimo, los para metros se deben vericar una vez al an o. En el caso de excipientes que no este n incluidos en los compendios USPNF, el proveedor debe jar las especicaciones para garantizar que la calidad del material se mantiene de manera continua y reeja el proceso de fabricacio n del excipiente y las propiedades inherentes. Los me todos anal ticos usados para evaluar las caracter sticas de excipientes no farmacopeicos pueden ser los mismos de aquellos contenidos en la farmacopea o pueden ser exclusivos del proveedor o del material. Se debe demostrar que los me todos proporcionan resultados exactos, reproducibles y uniformes para la caracter stica en ana lisis. Puede ser apropiado que en el caso de los excipientes no farmacopeicos algunas de las pruebas se efectu en con menor frecuencia. El usuario del excipiente debe evaluar las especicaciones y me todos del proveedor para asegurarse de que sean apropiados y aceptables para el control de calidad necesario en el proceso de fabricacio n de su producto farmace utico. El usuario debe determinar cua les de las especicaciones y me todos del proveedor se requieren para la liberacio n del excipiente para el uso en su proceso. En caso de que el usuario necesite pruebas adicionales o me todos alternativos, el proveedor y el usuario del excipiente deben acordar los me todos y especicaciones apropriados as como tambie n la responsabilidad para efectuar el ana lisis.
Ana lisis de Frecuencia Reducida

Cuando se lleva a cabo el ana lisis de frecuencia reducida de algunos para metros (por ejemplo, cada de cimo lote), se debe indicar claramente en el COA. Se debe indicar toda prueba espec ca sometida al ana lisis de frecuencia reducida. El ana lisis de frecuencia reducida se debe usar so lo para excipientes fabricados usando un proceso estable. Debe de haber una base te cnica rme y documentacio n suciente que respalde el ana lisis de cualquier para metro con una frecuencia reducida. Esto incluir a normalmente los siguientes puntos: Validacio n apropiada del proceso de fabricacio n Control del procesogracacio n de atributos (segu n corresponda) Controles de GMP Como parte de la justicacio n para los ana lisis de frecuencia reducida, es importante que existan garant as establecidas que demuestren que el proceso del fabricante cumple con los requisitos de GMP apropiados para el excipiente. Debido a su importancia, algunas pruebas se deben realizar siempre en cada lote, mientras que otras pueden ser candidatas a un ana lisis de frecuencia reducida. Los ana lisis de atributos producen datos cualitativos que proporcionan resultados del tipo cumplen/no cumplen o resultados expresados como menor de o mayor de un valor espec co. El resultado simplemente establece el cumplimiento con un para metro de especicacio n. No existen datos que indiquen cua n bien cumple el material, como ser an los obtenidos de resultados de pruebas de variables o cuantitativas. Los ana lisis de frecuencia reducida de un atributo precisan que el fabricante demuestre que el para metro cualitativo esta bajo control estad stico. Esto hace necesaria la tabulacio n de los resultados de la prueba para lotes producidos en forma consecutiva. Ana lisis Perio dico de Lotes (Skip-Lot Testing)El ana lisis perio dico de lotes se puede aplicar a un excipiente fabricado por un proceso continuo o por partida. Para demostrar el control apropiado
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del proceso se pueden usar varios planes de muestreo estad stico aceptados comu nmente. A continuacio n se presentan ejemplos de cada uno. EJEMPLO 1: Para un nivel promedio de calidad de salida (AOQL, por sus siglas en ingle s) de 1% y una frecuencia de ana lisis de 1 en 10, el proveedor debe encontrar 100 lotes consecutivos en conformidad. Para un AOQL de 2% y una frecuencia de ana lisis de 1 en 10, el proveedor analizar a 50 lotes consecutivos. Para un AOQL de 1% y una frecuencia de ana lisis de 1 en 5, el proveedor analizar a 70 lotes consecutivos. Existen nomograf as para determinar los requisitos de la prueba. EJEMPLO 2: Cuando el excipiente se fabrica por un proceso continuo, no se produce un lote diferenciado. De nuevo, el plan de muestreo esta basado en el riesgo de la aprobacio n de un lote que no cumpl a con los requisitos. Al analizar 140 lotes consecutivos antes de pasar a una frecuencia de ana lisis de 1 en 10, el plan establece un riesgo bajo de aprobar un lote que no cumpla con los requisitos. Una vez que se cumpla con el requisito, el proveedor puede monitorear la conformidad con el para metro de la especicacio n analizando 1 en 10 lotes. Si algu n lote no pasara el ana lisis, el proveedor debe volver a analizar el 100% hasta que los resultados cumplan una vez ma s con las especicaciones descritas anteriormente. Dado que las propiedades f sicas y qu micas de los excipientes var an enormemente, el proveedor del excipiente debe determinar que pruebas se deben efectuar rutinariamente y cua les pueden ser apropiados para un ana lisis de frecuencia reducida. Esta determinacio n debe estar justicada y documentada fundamenta ndose en la idoneidad del sistema de control del proveedor. Se debe conservar la documentacio n donde se detallen las suposiciones y los datos que respaldan el plan de ana lisis perio dico de lotes. Pruebas Tipo A y Tipo BSo lo ciertos tipos de pruebas son apropiadas para el ana lisis de frecuencia reducida. Las pruebas Tipo A se denen como las pruebas que no pueden ser controladas fa cilmente a trave s de te cnicas de control esta ndar de proceso o que pueden cambiar con el tiempo. Estas pruebas deben realizarse normalmente en cada lote. Las pruebas Tipo B se denen como aquellas pruebas que normalmente se pueden controlar usando te cnicas de control esta ndar de proceso y que no se espera que cambien con el tiempo. Estas pruebas pueden ser adecuadas para un ana lisis de frecuencia reducida. A continuacio n se presentan ejemplos de ambos tipos de pruebas.
PICAMENTE SE DEBEN TIPO A: EJEMPLOS DE PRUEBAS QUE TI EFECTUAR EN CADA LOTE
frecuencia reducida. Esta documentacio n debe incluir tambie n los procedimientos para manejar el impacto de los cambios signicativos sobre el programa de ana lisis de frecuencia reducida. Ver en Gu a de Cambios Signicativos para Excipientes Farmace uticos a Granel h1195i, informacio n adicional sobre cambios en los excipientes. La cantidad m nima de lotes que se deben analizar completamente para todos los para metros de especicacio n despue s de un cambio depende del proceso y de la importancia del cambio y se debe basar en consideraciones estad sticas rmes. Adicionalmente, la documentacio n debe contener procedimientos para reevaluar el programa de ana lisis de frecuencia reducida cuando ocurra una falla en los ana lisis. Las decisiones relacionadas con la continuacio n de los ana lisis de frecuencia reducida se deben justicar basa ndose en las razones de la falla y la capacidad del proveedor para proporcionar garant as de que el programa de ana lisis de frecuencia reducida u otros para metros durante el proceso identicara n estos tipos de fallas en el futuro. Justicaciones para el Ana lisis de Frecuencia ReducidaLos siguientes son ejemplos de situaciones en las que se puede demostrar una base te cnica rme y en las que los ana lisis de frecuencia reducida podr an, por lo tanto, estar justicados. [NOTAPueden haber otros ejemplos de este tipo.] Una impureza, subproducto o materia prima sin reaccionar podr a no estar presente en el producto debido a que las materias primas o las reacciones qu micas usadas podr an no contener o producir dichas sustancias por encima de los l mites especicados. El ndice de capacidad del proceso (Cp) sobre el para metro relevante es alto y esta basado en un proceso estable. Los ana lisis estad sticos de los datos de frecuencia reducida deben mostrar que la propiedad permanece estable y dentro de las especicaciones. Un proceso se considera estable cuando el producto del mismo, independientemente de la naturaleza del procesamiento (por partida o continuo), puede demostrar por los medios apropiados un nivel de variabilidad que cumple uniformemente con todos los aspectos de la especicacio n declarada (tanto de la farmacopea como del cliente) y por lo tanto es aceptable para su uso previsto. En el caso de procesos continuos, tambie n es importante demostrar que el material se ha producido bajo condiciones en las cuales el proceso ha alcanzado un estado estacionario, es decir, en el cual hay m nima intervencio n del operario y en donde los para metros durante el proceso se han estabilizado (ver en el Ape ndice 2 una denicio n ma s amplia de este concepto y de la forma de determinar los niveles de control). Para el caso de un proceso continuo, los ana lisis durante el proceso muestran que la propiedad determinada a una frecuencia reducida es estable y esta dentro de las especicaciones. La repeticio n de la prueba en cada lote ser a redundante. Un ana lisis que se lleva a cabo en cada lote ha mostrado estar fuertemente correlacionado con un ana lisis que se realiza a una frecuencia reducida. La correlacio n demuestra que si el lote esta dentro de especicaciones en el primer ana lisis, estara tambie n dentro de especicaciones en el segundo ana lisis.

Identicacio nRequerida por GMP para los usuarios (candidata para ana lisis de frecuencia reducida por los proveedores) Valoracio nPara metro de calidad cr tico (si se especica) ViscosidadPor lo general indica el grado Pe rdida por secado (o determinacio n de humedad)Indicacio n de estabilidad y controles del proceso apropiados. ColorIndicacio n de estabilidad y controles del proceso apropiados. pHIndicacio n de estabilidad y controles del proceso apropiados.
AN SER ADECUADAS PARA TIPO B: EJEMPLOS DE PRUEBAS QUE PODRI LISIS DE FRECUENCIA REDUCIDA ANA
Impurezas de fabricacio nBasa ndose en los materiales de partida y procesos (por ej., cloro, sulfato, nitrato, glioxal) Metales pesados Plomo Arse nico Residuo de incineracio n Disolventes residuales Esta no pretende ser una lista exhaustiva de pruebas. Simplemente proporciona algunas instrucciones sobre la forma en que un proveedor puede evaluar la importancia de cada prueba con respecto al control general del proceso. Es posible que las pruebas listadas como posibles candidatas para ana lisis de frecuencia reducida (Tipo B) requieran efectuarse en forma rutinaria (Tipo A), dependiendo de las materias primas y de los procesos. Se puede determinar tambie n que algunas pruebas Tipo A pueden convertirse en Tipo B. En una instalacio n dedicada, es posible que no sea necesario que el proveedor realice pruebas de identicacio n. Documentacio nEl proveedor de un excipiente debe desarrollar y mantener la documentacio n que esboce los sistemas de control de procesos y los datos de validacio n para justicar el uso de ana lisis de
NICAS USO DE FIRMAS ELECTRO

Debido a la creciente dependencia de las computadoras y a la necesidad de ajustarse a sistemas de registros sin papel, se sugiere la alternativa electro nica para los registros y rmas manuscritos. Los proveedores de excipientes han agregado sistemas de informacio n computarizada para aumentar la productividad. El principal inconveniente en la transferencia de un COA sin una rma manuscrita es la validacio n de los datos. Existen varias condiciones que se deben cumplir antes de considerar aceptable la adicio n de una rma o nombre electro nicos en un COA. El acceso a los sistemas computarizados debe estar limitado a las personas autorizadas: el acceso se obtiene solo despue s de introducir un nombre de usuario y una contrasen a. El sistema debe exigir cambios frecuentes de cada contrasen a individual. Debe completarse una conrmacio n de la integridad y exactitud de la informacio n almacenada en el sistema.
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La operacio n del sistema debe controlarse rutinariamente para garantizar que se transera la informacio n correcta de la base de datos al registro impreso. Los datos introducidos en una base de datos de la cual se extrae informacio n para un COA deben ir acompan ados por registros de auditor a sellados con fecha y hora. Cuando estos criterios se cumplen, se acepta la emisio n de los COA con rmas electro nicas o el nombre de la persona responsable en el documento, en lugar de una rma manuscrita. [NOTALos sistemas computarizados esta n reglamentados actualmente por el 21 CFR 11 de la FDA. Los usuarios deben consultar el enfoque de la FDA para el cumplimiento en esta a rea.]
NDICE 1 APE DEFINICIONES

Cambio SignicativoCualquier cambio que altera una propiedad f sica o qu mica de un excipiente, con respecto a la norma, o que es probable que altere el desempen o del excipiente en la forma farmace utica. Certicado de Ana lisis (COA)Un documento que reere espec camente a los resultados del ana lisis de una muestra representativa extra da de la partida de material que va a ser entregado. Criterios de Aceptacio nLas especicaciones y los l mites de aceptacio n o rechazocomo por ejemplo un nivel de calidad aceptable o un nivel de calidad no aceptable, con un plan de muestreo asociadonecesarios para tomar la decisio n de aceptar o rechazar un lote o partida de materia prima, producto intermedio, material de empaque o excipiente. DistribuidorUna parte, diferente del fabricante, que vende el excipiente. EmpaqueEl envase y sus componentes que contienen el excipiente para almacenamiento y transporte al cliente. Especicacio nLos para metros de calidad que sirven como base para la evaluacio n de la calidad y a los que se deben ajustar los excipientes, componentes o productos intermedios. ExcipienteCualquier sustancia, distinta del ingrediente farmace utico activo o del producto farmace utico, que ha sido evaluada de manera apropiada respecto a su seguridad y que se incluye en un sistema de liberacio n de fa rmacos para ayudar al procesamiento del mismo durante su fabricacio n; para proteger, mantener o mejorar la estabilidad, biodisponibilidad o aceptacio n por parte del paciente; para ayudar a la identicacio n del producto o mejorar cualquier otro atributo general de seguridad y ecacia del sistema de liberacio n de fa rmacos durante el almacenamiento o el uso. FabricanteLa parte que efectu a el paso de procesamiento nal. Fecha de CaducidadLa fecha despue s de la cual el proveedor recomienda no usar el material. Fecha de Fabricacio nLa fecha que indica la terminacio n del proceso nal de fabricacio n (segu n lo denido por el proveedor para un excipiente y proceso en particular). Fecha de Reana lisisLa fecha en la cual el proveedor de un excipiente efectu a el reana lisis para extender el tiempo en que se puede usar el material. Fecha Recomendada de Reevaluacio nLa fecha sugerida por el proveedor en la que el material se debe reevaluar para garantizar el cumplimiento continuo con las especicaciones. Diere de la Fecha de Caducidad en que el excipiente puede ser reevaluado para extender el tiempo en el que puede usarse, si lo respaldan los resultados de la evaluacio n y los datos de estabilidad apropiados. ImpurezaCualquier componente de un excipiente que no es la entidad qu mica deseada pero esta presente como consecuencia de las materias primas usadas o del proceso de fabricacio n. ndice de Capacidad del Proceso (Cp)Una medida estad I stica que se puede usar para evaluar si el proceso es adecuado para cumplir con las especicaciones. Puede decirse que existe un estado de control estad stico si la variacio n aleatoria en los resultados de prueba para un para metro del proceso es tal que la capacidad calculada del proceso es mayor de 1,33 (ver denicio n ma s detallada en el Ape ndice 2). Instalacio n ContratadaUna instalacio n interna o externa que proporciona servicios al fabricante o distribuidor de un excipiente. Pueden incluir, entre otras, las siguientes: instalaciones de fabricacio n, laboratorios, instalaciones de reempaque (incluido etiquetado) y almacenes. LoteVer Partida. LugarEl sitio donde se fabrica el excipiente. Este puede estar dentro de las instalaciones pero en un a rea operativa diferente, o en una instalacio n remota, incluyendo un fabricante por contrato. Nu mero de LoteVer Nu mero de Partida.
N DEL DISTRIBUIDOR INFORMACIO

La presentacio n de un COA emitido por un distribuidor enfrenta algunos retos. Dado que los COA son documentos importantes que calican a los excipientes y el estado de su calidad, la fuente de esa informacio n se vuelve muy importante para los usuarios nales. Dado que los distribuidores desempen an diferentes papeles al prestar los servicios para los cuales fueron contratados, es necesario garantizar que los procedimientos y me todos sean apropiados para las funciones desempen adas. Los distribuidores pueden desempen ar un gran nu mero de funciones relacionadas con el movimiento de excipientes y los servicios asociados con su produccio n. Algunos sirven simplemente como instalaciones de tra nsito donde no se le hace nada al excipiente, exceptuando su almacenamiento y manipulacio n. Otros sirven como extensiones del proceso del fabricante al tomar cantidades a granel y reempacarlas para el fabricante. Sin embargo, otros adquieren excipientes y los reenvasan para la venta y distribucio n con una etiqueta diferente. Estos escenarios deben comprenderse y documentarse apropiadamente con programas que protejan la integridad y seguridad de los excipientes a medida que pasan por el proceso de distribucio n. Fabricante Original y Lugar de Fabricacio nLa identidad del fabricante original y del lugar de fabricacio n debe incluirse en el COA de los excipientes. Esta informacio n es importante porque permite la rastreabilidad de lotes espec cos del excipiente y asegura a los usuarios que esta n obteniendo de manera uniforme un material del mismo fabricante y lugar de fabricacio n. La informacio n sobre la identidad y ubicacio n del fabricante no representa un inconveniente cuando el fabricante original es tambie n el proveedor directo del excipiente para los clientes del a mbito farmace utico. Sin embargo, cabe reconocer que esta informacio n puede considerarse condencial por un distribuidor de excipientes. Con el n de resolver este problema adecuadamente, los distribuidores de excipientes deben listar la informacio n espec ca, identicando el fabricante original y su ubicacio n o proporcionar la informacio n bajo un co digo apropiado que se asigna con el propo sito de identicar inequ vocamente el fabricante original y el lugar de fabricacio n. Para proteger la condencialidad de esta informacio n, no se debe revelar el signicado del co digo a los distribuidores intermediarios. Datos del Certicado de Ana lisisCuando un distribuidor se usa principalmente como un punto de tra nsito sin producirse cambios al excipiente o el empaque, el COA del fabricante que acompan a al excipiente puede distribuirse en el formato original. Si los datos se extraen, traducen o reescriben en otro papel con membrete, se debe implantar un sistema de vericacio n de la informacio n reescrita y se debe demostrar su justicacio n cuando se lo solicite. Como alternativa, se debe indicar la fuente de los datos en el documento. En el caso de un distribuidor que toma cantidades de un excipiente a granel de un fabricante y las introduce en un proceso (por ej., sistema de transporte y almacenamiento), se debe efectuar el ana lisis del excipiente empacado para demostrar que tiene la misma calidad del lote (partida) introducido. Los datos anal ticos apropiados deben incluirse en el COA para vericar la calidad. El distribuidor debe usar una metodolog a y equipo equivalente para la evaluacio n anal tica. Se pueden usar algunos datos del COA del fabricante original, con la justicacio n apropiada. En todos los casos, se espera que el distribuidor tenga el nivel apropiado de GMP establecidas.
Informacio n General / h1184i Pruebas de Sensibilizacio n
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Nu mero de Partida (o Nu mero de Lote)Una combinacio n u nica y caracter stica de nu meros y/o letras a partir de la cual se puede determinar toda la historia de la fabricacio n, procesamiento, empaque, codicacio n y distribucio n de una partida. Partida (o Lote)Una cantidad denida de excipiente procesado de forma tal que se pueda esperar que sea homogeneo. En un proceso continuo, una partida corresponde a una porcio n denida de la produccio n, basa ndose en el tiempo o cantidad (por ej., volumen del recipiente, produccio n de un d a, etc.). Paso del ProcesoUna instruccio n al personal de fabricacio n del excipiente en la cual se ordena que se efectu e una operacio n. ProcesoConjunto de instrucciones operativas que describen co mo se debe sintetizar el excipiente, aislarlo, puricarlo, etc. Proceso ContinuoUn proceso de fabricacio n que produce continuamente el excipiente a partir del suministro constante de materias primas. Proceso EstableUn proceso cuyo producto nal, independientemente de la naturaleza del procesamiento (por partida o continuo), puede demostrar por los medios apropiados un nivel de variabilidad que cumple uniformemente con todos los aspectos de la especicacio n declarada (tanto de la farmacopea como del cliente) y por lo tanto es aceptable para el uso previsto. Proceso por PartidaUn proceso de fabricacio n que produce el excipiente a partir de un suministro discreto de materias primas que esta presente antes de completarse la reaccio n. Programa de Ana lisis Perio dico de Lotes (Skip-Lot Testing Program)Ana lisis perio dicos o intermitentes efectuados para un para metro de prueba en particular, justicados por datos histo ricos que demuestran un estado de control estad stico del proceso. Programa de Pruebas/Ana lisis de Frecuencia ReducidaVer Ana lisis Perio dico de Lotes Programa de Pruebas Perio dicasVer Programa de Ana lisis Perio dico de Lotes. Propiedad F sicaUn para metro de calidad que se puede medir u nicamente con un equipo meca nico. Propiedad Qu micaUn para metro de calidad que se mide por me todos de ana lisis qu micos o sicoqu micos. ProveedorUn fabricante o distribuidor que suministra directamente el excipiente al usuario. ReenvasadoTransferencia de un excipiente de un envase a otro. ReprocesamientoReintroduccio n en el proceso de material previamente procesado que no se ajusto a las normas o especicaciones y repeticio n de etapas que ya son parte del proceso normal de fabricacio n. UsuarioLa parte que usa un excipiente en la fabricacio n de un producto farmace utico o de otro excipiente.
capacidad requieren el ca lculo de s, la desviacio n esta ndar de la poblacio n, mientras que los ndices de desempen o requieren el ca lculo de s, la desviacio n esta ndar de la muestra. Por lo tanto, puede decirse que existe un estado de control estad stico para los excipientes farmace uticos si la variacio n aleatoria en los resultados de prueba para un para metro del proceso es tal que el ndice de capacidad del proceso calculado o el ndice de desempen o calculado es mayor de 1,33.&1S (USP30)
h1118i DISPOSITIVOS DE MONITOREOTIEMPO, TEMPERATURA Y HUMEDAD
NICOS DE REGISTRADORES ELECTRO HISTORIAL DE TIEMPOTEMPERATURA

Estos dispositivos, que pueden servir como una alternativa a los ITT qu micos, utilizan una de las tecnolog as electro nicas de medicio n de la temperatura antes descritas y crean un registro del historial de temperatura experimentado por un dispositivo. Algunos son dispositivos electro nicos simples que registran y guardan los valores de temperatura representativos del historial de temperatura acumulado durante un cierto per odo. Estos dispositivos pueden denominarse ITT electro nicos. Tienen la ventaja de poder calcular la Temperatura Cine tica Media (TCM) a partir de las mediciones registradas y adema s, se pueden calibrar. Registradores de DatosExiste un dispositivo ma s complejo que permite registrar la temperatura a intervalos de tiempo muy cortos y transferir el registro del historial de temperatura a un sistema perife rico, como por ejemplo una computadora personal. Estos dispositivos pueden denominarse registradores de datos de temperatura electro nicos. Los registradores de datos tambie n pueden registrar la humedad usando los sensores que se describen a continuacio n. &Pueden dejarse jos en forma permanente dentro del ambiente de almacenamiento o ser porta tiles y transportarse junto con el producto. Aquellos equipados con dispositivos de transmisio n (transmisio n por radio o cableado) pueden utilizarse para monitorear la temperatura y la humedad de un producto en tra nsito, con la capacidad de descargar los datos registrados cuando el registrador de datos ha llegado a su destino.&1S (USP30)
NDICE 2 APE ESTADO DE CONTROL STICO: PARA METROS DE ESTADI CAPACIDAD DEL PROCESO PARA DETERMINAR LOS NIVELES DE CONTROL
Un proceso se considera en estado de control estad stico si las variaciones entre los resultados observados de las muestras del proceso se pueden atribuir a un sistema constante de causas aleatorias. El ndice de capacidad del proceso (Cp) o el ndice de capacidad ajustado para el promedio del proceso (Cpk) o el ndice de desempen o (Pp) o el ndice de desempen o ajustado por el promedio del proceso (Ppk) se pueden usar para evaluar si el proceso es adecuado para cumplir con las especicaciones. Los valores de estos para metros que excedan 1,33 muestran que el proceso es adecuado para cumplir con las especicaciones. Los valores entre 1,00 y 1,33 indican que el proceso, aunque es adecuado para cumplir con las especicaciones, requerira control riguroso. Los valores por debajo de 1,00 indican que el proceso no es adecuado para cumplir con las especicaciones y que el proceso y/o las especicaciones debera n cambiarse. Pp/Ppk sera siempre menor o igual a Cp/Cpk, respectivamente. La diferencia esencial entre los ndices de capacidad y desempen o radica en los datos usados. Los ndices de
&
h1184i PRUEBAS DE N SENSIBILIZACIO

N INTRODUCCIO
Este cap tulo trata de la sensibilizacio n e hipersensibilizacio n en el contexto de los dispositivos me dicos e implantes y describe me todos para analizar dichos art culos en lo que respecta a su capacidad de causar sensibilizacio n. Existen cuatro tipos de reacciones de hipersensibilizacio n segu n el sistema de clasicacio n de Gell y Coombs. Las reacciones de Tipo I incluyen la jacio n de IgE a mastocitos que posteriormente liberan sustancias farmacolo gicamente activas, como por ejemplo la histamina. Las reacciones de Tipo II son el resultado de uniones de IgG y/o IgM a las ce lulas diana, seguidas de jacio n de
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h1184i Pruebas de Sensibilizacio n / Informacio n General
complemento y lisis celular. Las reacciones de Tipo III son causadas por la presencia de complejos ant geno-anticuerpo que ocasionan lesiones f sicas, como por ejemplo, dan o renal debido al bloqueo glomerular. Las reacciones de Tipo IV son mediadas por ce lulas (involucran la accio n de las ce lulas T y su interaccio n con los ant genos de linfocitos humanos). Las reacciones de Tipo IV se llaman tambie n reacciones de hipersensibilidad retardada. La Tabla 1, a continuacio n, resume los tipos de reacciones, los mediadores de las reacciones y ejemplos de enfermedades representativas. Tabla 1. Los Cuatro Tipos de Reacciones de Hipersensibilizacio n*, Mediadores y Ejemplos de Enfermedades Clase de Reaccio n Tipo I Mediadores Las mole culas de IgE unidas a los mastocitos interactu an con el ant geno para liberar sustancias farmacolo gicamente activas. La IgM y/o las mole culas de IgM interactu an con ce lulas diana, jan el complemento y producen lisis celular Complejos ant geno-anticuerpo, complemento Ejemplos de Enfermedades Fiebre del heno, asma bronquial y otras reacciones ato picas
Tabla 2. Art culos para los Cuales se Deben Considerar las Pruebas de Sensibilizacio n Basa ndose en la Categor a del Art culo y la Duracio n de la Exposicio n (Continuacio n) Punto de Contacto con el Cuerpo Comunicacio n con tejido, hueso o dentina Sangre circulante Dispositivos para Tejido o hueso implantes Sangre
a b c
Categor a del Dispositivo
Duracio n del Contacto A, B, C A, B, C A, B, C A, B, C
A: limitada (menos de 24 horas) B: prolongada (desde 24 horas hasta 30 d as) C: permanente (ma s de 30 d as)
En este cap tulo se revisan nueve me todos de prueba. La Tabla 3 enumera los me todos y las especies con las cuales se efectu an. Tabla 3. Metodolog as que se Pueden Usar en las Pruebas de Sensibilizacio n y Especies Requeridas para la Prueba Prueba Maximizacio n de Magnusson y Kligman Prueba Esta ndar de Buehler Epicuta nea abierta Adyuvante Completo de Freund Optimizacio n Adyuvante Fraccionado Ensayo del No dulo Linfa tico Local Inamacio n de la Oreja del Rato n Aumento de Vitamina A Especie Usada en la Prueba Cobayo Cobayo Cobayo Cobayo Cobayo Cobayo Rato n Rato n Rato n
Tipo II
Tipo III
Tipo IV
*
Diversas alergias medicamentosas, eritroblastosis fetal, anemia hemol tica, trombocitopenia Reaccio n de Arthus, enfermedad del suero, glomerulonefritis ale rgica Linfocitos T, ant geno, Dermatitis por contacto monocitos, macro fagos
Segu n el esquema de clasicacio n de Gell y Coombs
Se sigue un proceso de varios pasos, descrito en el cap tulo Biocompatibilidad de los Materiales Usados en Envases de Medicamentos, Dispositivos Me dicos e Implantes h1031i, con el n de determinar que pruebas toxicolo gicas necesitan realizarse, si fuera necesario, sobre un art culo determinado. En algunos casos, los art culos previamente comercializados aportan evidencia suciente para satisfacer los requisitos toxicolo gicos (Ver Figura 1 en el cap tulo h1031i). Los factores importantes tratados en la Figura 1 (cap tulo h1031i) incluyen el tipo y grado de contacto con el cuerpo, la composicio n qu mica, el proceso de fabricacio n, el proceso de esterilizacio n y, como se menciono anteriormente, la similitud con art culos previamente comercializados. Si fueran necesarias ma s pruebas toxicolo gicas, es importante observar la clasicacio n de los dispositivos me dicos proporcionada en la Tabla 2 del cap tulo de informacio n general h1031i, porque el grado y alcance de las pruebas toxicolo gicas que se requieran dependera n en gran medida de la naturaleza y duracio n del contacto del art culo con el cuerpo. La clasicacio n que surge de la Tabla 2 en el cap tulo h1031i, junto con la duracio n de la exposicio n al art culo, se usan en las Tablas 3 a 5 del cap tulo h1031i para determinar cua les pruebas toxicolo gicas se deben efectuar. La Tabla 2, a continuacio n, presenta informacio n extra da de las Tablas 3 a 5 del cap tulo h1031i e indica aquellas circunstancias en las cuales se deben considerar las pruebas de sensibilizacio n. Tabla 2. Art culos para los Cuales se Deben Considerar las Pruebas de Sensibilizacio n Basa ndose en la Categor a del Art culo y la Duracio n de la Exposicio n Categor a del DisPunto de Contacto con el positivo Cuerpo Dispositivos de Piel supercie Membrana mucosa Supercies comprometidas o expuestas Dispositivos de comunicacio n externa V a sangu nea, indirecta Duracio n del Contacto Aa, Bb, Cc A, B, C A, B, C
Dada la preponderancia de la Prueba de Maximizacio n de Magnusson y Kligman en Cobayo (GPMT, por sus siglas en ingle s) o de la Prueba de Buehler (BT, por sus siglas en ingle s), dichas pruebas se revisara n en detalle en este cap tulo. Como alternativa a los procedimientos usados con ma s frecuencia, se ofrece un breve resumen de las pruebas restantes. Todas las pruebas se deben validar perio dicamente en el laboratorio que las realiza, usando controles positivos, como por ejemplo aldeh do hexil cina mico, mercaptobenzotiazol o benzoca na (controles positivos recomendados por la Organizacio n para la Cooperacio n y el Desarrollo Econo mico [OECD, por sus siglas en ingle s]).
N DE MAGNUSSON PRUEBA DE MAXIMIZACIO Y KLIGMAN EN COBAYO (GPMT) Animales

Se pueden usar machos y hembras de cobayos albinos. Todos los animales deben estar en perfecto estado de salud y pesar entre 300 g y 500 g al comienzo del experimento. Las hembras no deben estar pren adas, ni haber parido previamente. Antes de las pruebas, es importante aclimatar los animales a las condiciones del laboratorio por lo menos durante 5 d as. Todos los animales deben ser manipulados segu n las pautas estipuladas para el tratamiento humanitario de los animales, contenidas en los requisitos reglamentarios apropiados. Se deben usar al menos 10 animales de prueba y 5 de control. Para conseguir suciente potencia anal tica (es decir, para detectar los sensibilizantes de biles), puede ser necesario usar 20 animales de prueba y 10 de control. Pueden requerirse animales adicionales para establecer las dosis apropiadas que se deben administrar (ver Determinacio n de la Concentracio n del Art culo de Prueba).
A, B, C
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Alojamiento y Alimentacio n
El cuarto de los animales debe mantenerse a 20 + 38, con una humedad relativa de 30% a 70% y 12 horas de luz y oscuridad. Los animales se pueden alojar individualmente o en grupo. Se pueden usar dietas esta ndar de laboratorio (las recomendadas para cobayo garantizan una cantidad adecuada de a cido asco rbico). Se debe proporcionar agua potable a voluntad.
Procedimiento de Prueba
N CON INYECCIO N INTRADE RMICA FASE DE INDUCCIO
Preparacio n de los Animales antes de la Prueba

Los animales deben ser distribuidos en forma aleatoria mediante un me todo validado de aleatorizacio n. Por ejemplo, el me todo puede utilizar tablas de nu meros aleatorios o nu meros aleatorios generados por computadora. Los sitios donde se planea aplicar el art culo de prueba en el animal (regio n intraescapular), deben ser depilados sin que se produzcan abrasiones en la piel. Esto se puede lograr cortando o afeitando el pelo o con depiladores qu micos. El depilador qu mico no debe producir irritacio n por s mismo. Se deben registrar las observaciones generales de los animales antes de la prueba, incluidos cualquier indicio de alteracio n de la salud (no usar dichos animales en la prueba), y el peso corporal.
Esta fase requiere administrar por v a intrade rmica tres pares de inyecciones, con la inyeccio n de prueba y la de control de cada par en lados opuestos intraescapularmente. Cada inyeccio n debe contener 0,1 mL; los pares de inyecciones 1 y 2 se deben administrar ma s cerca de la cabeza y el par 3 ligeramente alejado hacia la cola. Los pares esta n nominalmente dentro de un a rea de 8 cm2. Los pares de inyecciones constan de: Par de inyeccio n Una mezcla 1 : 1 (v/v) de Adyuvante Com1: pleto de Freund (FCA, por sus siglas en ingle s), una emulsio n de aceite en agua que contiene micobacterias y el disolvente o veh culo apropiado (ver Pruebas de Reactividad Biolo gica, In Vivo h88i). Los animales de control reciben una mezcla de FCA y solucio n salina siolo gica (1 : 1). Par de inyeccio n La Preparacio n del Art culo de Prueba en la 2: concentracio n especicada en Determinacio n de la Concentracio n del Art culo de Prueba, con el disolvente o veh culo apropiado. Los animales de control reciben so lo el disolvente o veh culo. Par de inyeccio n La Preparacio n del Art culo de Prueba en la 3: concentracio n especicada en Determinacio n de la Concentracio n del Art culo de Prueba en una mezcla 1 : 1 (v/v) con FCA. Los animales de control reciben una inyeccio n de una mezcla 1 : 1 (v/v) de FCA y disolvente o veh culo.
Preparacio n del Art culo de Prueba1

Este ensayo requiere que el art culo de prueba se pueda inyectar por v a intrade rmica. Cuando el art culo de prueba no es apto para la administracio n directa, se deben preparar extractos de acuerdo con el procedimiento proporcionado en el cap tulo general Pruebas de Reactividad Biolo gica, In Vivo h88i.
Determinacio n de la Concentracio n del Art culo de Prueba

El propo sito de este estudio preliminar es determinar las concentraciones de la Preparacio n del Art culo de Prueba que se van a usar durante la fase inicial de induccio n y la segunda fase de desaf o de un estudio GPMT. Para la determinacio n de la concentracio n se pueden usar dos o tres animales. Se deben inyectar diversas concentraciones del art culo de prueba, o extractos del art culo, por v a intrade rmica (0,1 mL por sitio), con el disolvente que se va a emplear en el Procedimiento de Prueba. La concentracio n que ocasione so lo irritacio n leve a moderada (sin generar destruccio n cuta nea extensa o evidencia de toxicidad siste mica maniesta para los animales) se debe utilizar en la Fase de Induccio n con Inyeccio n Intrade rmica del Procedimiento de Prueba. Aplicar a dos o ma s animales una gama de concentraciones del art culo de prueba o de extractos del art culo de prueba, por medio de vendajes oclusivos y parches. Retirar los vendajes y parches despue s de 24 horas y examinar los sitios en busca de eritema. Elegir la concentracio n que ocasione so lo un leve eritema para la Fase de Induccio n con Aplicacio n To pica del Procedimiento de Prueba. Utilizar la concentracio n ma s alta del art culo de prueba o del extracto que no ocasione eritema en la Fase de Desaf o del Procedimiento de Prueba. Si no se alcanza el umbral de irritacio n, seleccionar entonces la concentracio n ma s alta posible para la Fase de Induccio n con Aplicacio n To pica y la Fase de Desaf o del Procedimiento de Prueba.
N CON APLICACIO N TO PICA FASE DE INDUCCIO
Siete d as (+1 d a) despue s de la terminacio n de la Fase de Induccio n con Inyeccio n Intrade rmica, administrar la muestra de prueba por aplicacio n to pica en la regio n intraescapular de cada animal. Tanto para los animales de prueba como para los de control, si la Preparacio n del Art culo de Prueba no causa irritacio n cuta nea, aplicar lauril sulfato de sodio al 10% en vaselina aproximadamente 24 horas antes de comenzar la Fase de Induccio n con Aplicacio n To pica, para inducir una irritacio n local. En cada sitio de inyeccio n, a los animales de prueba se les deben aplicar trozos de 2 6 4 cm de papel de ltro o gasa absorbente, completamente embebidos con la Preparacio n del Art culo de Prueba (preparada no ma s de 24 horas antes del uso), con la concentracio n seleccionada en Determinacio n de la Concentracio n del Art culo de Prueba. El papel de ltro o la gasa absorbente deben asegurarse a los animales con vendajes oclusivos. Los animales de control reciben el mismo tratamiento, excepto que se debe usar el disolvente o veh culo correspondiente en lugar del art culo de prueba. Retirar los vendajes y parches aproximadamente 48 horas despue s de la aplicacio n.
O FASE DE DESAFI
Esta fase debe ocurrir 14 + 1 d as despue s de la Fase de Induccio n con Aplicacio n To pica. Se debe retirar el pelo de los sitios de aplicacio n de la prueba. Los parches de papel de ltro o las ca maras se empapan con Preparacio n del Art culo de Prueba recie n preparada, en la concentracio n especicada en Determinacio n de la Concentracio n del Art culo de Prueba. Esto se hace para todos los animales de prueba y de control. Los parches o ca maras se aseguran con un vendaje oclusivo y se retiran despue s de 24 + 2 horas.
Si desea ma s informacio n sobre la preparacio n de la muestra, rem tase a la Norma ANSI/AAMI/ISO/CEN 10993121996: Biological Evaluation of Medical DevicesPart: Sample Preparation and Reference Materials (Evaluacio n Biolo gica de Dispositivos Me dicosParte 12: Preparacio n de la Muestra y Materiales de Referencia)
1
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Observaciones
Aproximadamente 24, 48 y 72 horas despue s de retirar los parches de desaf o se deben examinar los sitios de aplicacio n en busca de signos de reacciones. Son de particular importancia los casos en donde la reaccio n en los animales de prueba excede la de los animales de control. Se deben registrar todos los signos de reactividad, poniendo especial atencio n a los signos de eritema y edema. Una reaccio n edematosa verdadera palidece cuando se ejerce una presio n suave. Cuanto ma s largo sea el periodo de palidecimiento, mayor la gravedad del edema.
Los resultados deben ser presentados para ana lisis estad stico (por ejemplo, tabla de contingencia de chi cuadrado) para establecer si las diferencias en los puntajes entre los animales tratados y los de control son signicativas. Se debe comparar estad sticamente la respuesta del grupo de prueba en funcio n del grupo de control. (Para esta comparacio n se puede usar la prueba U de Mann-Whitney).
Reprovocacio n
El grado de cualquier respuesta en el grupo de control negativo, bajo condiciones experimentales, muestra el potencial de irritacio n de la Preparacio n del Art culo de Prueba. En este caso, los animales de prueba y de control se deben someter a un nuevo desaf o 1 semana ma s tarde, en el lado no tratado del animal, con una concentracio n reducida de la Preparacio n del Art culo de Prueba. Un cobayo sensibilizado reaccionara de alguna manera a ambos desaf os. Una reaccio n leve que ocurra en un u nico tiempo de muestreo, en una sola de las provocaciones, debe arrojar serias dudas 2 sobre si el cobayo esta realmente sensibilizado.
Interpretacio n
Existen varias formas de evaluar y calicar los resultados de la GMPT. Las Tablas 4, 5 y 6 enumeran los detalles de tres de los sistemas de clasicacio n. Las calicaciones de 1 o ma s en los animales de prueba, con calicaciones de menos de 1 en los animales de control, indican sensibilizacio n. Si los animales de control presentan reactividad grado 1 y si los animales de prueba presentan reactividad por encima de la reactividad ma s alta observada en los animales de control, tambie n se sospecha de sensibilizacio n debida al art culo de prueba. Los porcentajes de la Tabla 4 se deben revisar si hay so lo 10 animales de prueba (es decir, las categor as ser an 0, 510%, de 10% a 30%, de 31% a 60%, de 61% a 80% y de 81% a 100%). Si hay 20 animales de prueba, los mu ltiplos de 5% son adecuados. Tabla 4. Clasicacio n Basada en el Porcentaje de Animales de Prueba Sensibles % de Resultados Positivos en el Grupo de Prueba 0 58 828 2964 6580 81100
NDAR (SBT) PRUEBAS DE BUEHLER ESTA Animales

Ver Animales en la Prueba de Maximizacio n de Magnusson y Kligman en Cobayos (GPMT).
Alojamiento y Alimentacio n
Ver Alojamiento y Alimentacio n en la Prueba de Maximizacio n de Magnusson y Kligman en Cobayos (GPMT).
1 2 3 4 5
Calicacio n Asignada No sensibilizante De bil Leve Moderado Fuerte Extremo
Preparacio n de los Animales antes de la Prueba

Ver Preparacio n de los Animales antes de la Prueba en la Prueba de Maximizacio n de Magnusson y Kligman en Cobayos (GPMT). Se debe cortar el pelaje de uno de los ancos del cobayo.
Preparacio n del Art culo de Prueba

Tabla 5. Clasicacio n Basada en la Formacio n de Eritema y Edema Eritema y Escara Ausencia de eritema Eritema leve o equ voco Eritema bien denido Eritema moderado Eritema severo a ligera formacio n de escara Edema Ausencia de edema Edema leve o equ voco Edema bien denido Edema moderado Edema severo Grado 0 51 2 3 4 0 51 2 3 4 Ver Preparacio n del Art culo de Prueba en la Prueba de Maximizacio n de Magnusson y Kligman en Cobayos (GPMT).
Determinacio n de la Concentracio n del Art culo de Prueba

El propo sito de este estudio preliminar es determinar las concentraciones de la Preparacio n del Art culo de Prueba que se van a usar durante la fase inicial de induccio n y la segunda fase de desaf o de un estudio SBT. Para la determinacio n de la concentracio n se pueden usar dos o tres animales. Se deben aplicar diversas concentraciones del art culo de prueba o extractos del mismo, usando parches (por ejemplo, cuatro almohadillas absorbentes de 4 cm2) o ca maras. Los parches se deben mantener en su sitio con cinta adhesiva (si fuera necesario) y vendajes oclusivos. Los parches se deben retirar despue s de aproximadamente 6 horas, limpiando del sitio de prueba cualquier residuo del producto qu mico de prueba. Las observaciones se hacen en ese momento y a las 24 y 48 horas. La concentracio n que so lo causa irritacio n leve a moderada (eritema leve, sin evidencia de toxicidad maniesta para los animales) y que puede aplicarse repetidamente en el mismo sitio se debe usar en la Fase de Induccio n del Procedimiento de Prueba.
Tabla 6. Clasicacio n Basada en la Formacio n de Eritema Solamente Formacio n de eritema Ausencia de eritema Eritema discreto o irregular Eritema moderado y conuente Eritema intenso y tumefaccio n Grado 0 1 2 3
Basketter D.A. Guinea pig predictive tests for contact hypersensitivity. En Immunotoxicology and Immunopharmacology, 2nd ed; Dean, J.H, Luster, M.I., Munson, A.E., Kimber, I., Eds; Raven Press, Ltd: Nueva York, 1994; pp. 693702.
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Utilizar la concentracio n ma s alta del art culo de prueba o del extracto que no ocasione eritema en la Fase de Desaf o del Procedimiento de Prueba.
OTROS PROCEDIMIENTOS PARA LA PRUEBA N DE SENSIBILIZACIO

La Prueba de Maximizacio n de Magnusson y Kligman en Cobayos y las Pruebas de Buehler Esta ndar son las pruebas de sensibilizacio n efectuadas con ma s frecuencia. Sin embargo, existen otros me todos que pueden ser u tiles para evaluar la capacidad de sensibilizacio n. Algunos me todos sirven tanto para art culos de prueba so lidos como para extractos, mientras que otros so lo para extractos. Cuando se requiera el uso de cobayos en las siguientes pruebas, los animales y sus alojamientos deben cumplir con los requisitos especicados en Animales, en la Prueba de Maximizacio n de Magnusson y Kligman en Cobayos. Se debe retirar el pelaje del cobayo en los sitios de prueba, como se indica en Preparacio n de los Animales antes de la Prueba, en la Prueba de Maximizacio n de Magnusson y Kligman en Cobayos.
Procedimiento de Prueba
N FASE DE INDUCCIO
Aplicar 0,4 mL de la Preparacio n del Art culo de Prueba en un disolvente o veh culo apropiado, en la dosis identicada en Determinacio n de la Concentracio n del Art culo de Prueba. Usar parches similares a los usados en Determinacio n de la Concentracio n del Art culo de Prueba. Los parches se deben aplicar en un anco (con el pelo cortado), mantenie ndolos en su sitio oclusivamente durante 6 horas. Se puede necesitar restringir el movimiento de los animales para garantizar la oclusio n. Los parches y cualquier residuo visible se deben retirar despue s de 6 horas. A los animales de control tambie n se les aplican parches, pero e stos contienen so lo el disolvente o veh culo apropiado. Este proceso se debe repetir tres veces a la semana tanto para los animales de prueba como para los de control, en el mismo sitio, durante tres semanas consecutivas (en la Prueba de Buehler modicada se usan intervalos semanales).
O FASE DE DESAFI
Prueba de Draize
Fue la primera prueba predictiva aceptada por los organismos reglamentarios y todav a se usa. La prueba utiliza cobayos y el art culo de la prueba se administra a trave s de inyecciones intrade rmicas.
N DEL ARTI CULO DE PRUEBA PREPARACIO
Esta fase debe realizarse 14 d as despue s de la u ltima aplicacio n de la Fase de Induccio n. Cortar el pelo del anco no analizado previamente de cada animal 24 horas antes de la aplicacio n de desaf o. Al igual que en la Fase de Induccio n, aplicar parches que contengan el art culo de prueba (a la concentracio n especicada en Determinacio n de la Concentracio n del Art culo de Prueba) o so lo disolvente o veh culo en las zonas no analizadas de los animales de prueba y de control. Con el n de obtener bordes bien denidos en los sitios de aplicacio n, se preeren las ca maras comerciales con reborde. Asegurar los parches con vendajes oclusivos y mantenerlos en su sitio durante 6 horas. Retirar todos los parches despue s de 6 horas.
Esta prueba requiere que el art culo de prueba este en forma de una solucio n que se pueda aplicar directamente a la piel del animal. Por lo tanto, podr a ser necesario hacer extractos del material. Ver en Pruebas de Reactividad Biolo gica, In Vivo h88i la informacio n sobre el procedimiento de preparacio n.
N FASE DE INDUCCIO
Observaciones
A las 22 + 2 horas despue s de retirar los parches, se debe cortar o depilar el pelaje de los animales en el sitio de aplicacio n. Despue s de aproximadamente 2 horas, clasicar los sitios (se pueden emplear las Tablas 4, 5 o 6). Se deben registrar todos los signos de reactividad, poniendo especial atencio n a los signos de eritema y edema. Repetir la clasicacio n una vez ma s, despue s de que hayan transcurrido de 24 a 48 horas. Se puede comparar estad sticamente la respuesta del grupo de prueba en funcio n del grupo de control. (Para esta comparacio n se puede usar la prueba U de Mann-Whitney).
Afeitar un anco de cada uno de los 20 cobayos, luego inyectar 0,05 mL de una solucio n del art culo de prueba al 0,1% en el anco anterior. Al d a siguiente, y luego d a por medio, hasta el d a 20, inyectar 0,1 mL del art culo de prueba en un nuevo sitio del mismo anco.
O FASE DE DESAFI
Esta fase comienza 2 semanas despue s de la inyeccio n nal de la Fase de Induccio n. Afeitar el anco no tratado y luego inyectar 0,05 mL del art culo de prueba a cada uno de los 20 cobayos. Veinte animales no tratados previamente sirven como controles y tambie n reciben inyecciones del art culo de prueba.
OBSERVACIONES
Interpretacio n
Los resultados deben ser presentados para ana lisis estad stico (por ej., tabla de contingencia de chi cuadrado) para establecer si las diferencias en los puntajes entre los animales tratados y los de control son signicativas. Ver Interpretacio n en la Prueba de Maximizacio n de Magnusson y Kligman en Cobayos (GPMT).
Los sitios de prueba de todos los animales de control y de prueba se evalu an en busca de eritema 24 y 48 horas despue s de las inyecciones de desaf o. El grado de reaccio n en los animales de prueba se compara con el de los animales de control. Una respuesta ma s extensa y/o ma s intensa de los animales de prueba en funcio n de los animales de control es indicativa de sensibilizacio n.
Reprovocacio n
Ver Reprovocacio n en la Prueba de Maximizacio n de Magnusson y Kligman en Cobayos (GPMT).
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Prueba Epicuta nea Abierta

Esta prueba utiliza cobayos. El objetivo es determinar la dosis requerida para inducir sensibilizacio n simulando el uso en humanos a trave s de la aplicacio n to pica del art culo de prueba.
N DEL MATERIAL DE PRUEBA PREPARACIO
PRUEBAS PRELIMINARES
Determinar la concentracio n m nima irritante y la concentracio n ma xima no irritante de la misma forma que en Pruebas Preliminares en la Prueba Epicuta nea Abierta.
N FASE DE INDUCCIO
Esta prueba requiere que el art culo de prueba este en forma de una solucio n que se pueda aplicar directamente a la piel del animal. Por lo tanto, es necesario hacer extractos del material. Ver en Pruebas de Reactividad Biolo gica, In Vivo h88i la informacio n sobre el procedimiento de preparacio n.
El sitio de prueba consta de seis zonas de 2 cm2 sobre los hombros de los cobayos. Se deben usar dos grupos, cada uno con 10 a 20 cobayos. A los animales del grupo de prueba se les inyecta por v a intrade rmica 0,1 mL de una solucio n del extracto del art culo de prueba al 5% en FCA/agua. Los animales de control reciben inyecciones de FCA/agua, sin el art culo de prueba. Estas inyecciones se repiten cada 4 d as hasta haber administrado un total de tres inyecciones.
O FASE DE DESAFI
Una serie de concentraciones del art culo de prueba se aplica aa reas de piel de 2 cm2 en el anco anterior de 6 a 8 cobayos (0,025 mL por aplicacio n). Los sitios de prueba se deben examinar en busca de eritema 24 horas despue s de la administracio n del art culo de prueba. Se determinan la concentracio n ma s alta que no cause irritacio n (concentracio n ma xima no irritante) y la concentracio n ma s baja que cause eritema en aproximadamente 25% de los animales (concentracio n m nima irritante).
N FASE DE INDUCCIO
Esta fase debe comenzar 2 semanas despue s de la u ltima inyeccio n de la Fase de Induccio n. Las aplicaciones to picas de 0,025 mL del art culo de prueba a las concentraciones m nima irritante y ma xima no irritante, adema s de dos concentraciones ma s bajas, se administran en zonas de 2 cm2 del anco afeitado. Los sitios de prueba deben permanecer descubiertos.
OBSERVACIONES
El art culo de prueba (o veh culo de control) se aplica a zonas de 8 cm2 de la piel del anco de 6 a 8 cobayos, diariamente durante 3 semanas o 5 veces a la semana durante 4 semanas. La cantidad por aplicacio n es de 0,01 mL. De nuevo se emplea una serie de concentraciones crecientes, que abarcan una progresio n sucesiva a partir de la concentracio n m nima irritante. El art culo de prueba se debe aplicar en los mismos sitios en cada ocasio n, a menos que se desarrolle irritacio n, en cuyo caso se debe usar un nuevo sitio en el mismo anco. Los animales de control reciben el mismo tratamiento, excepto que se usa el veh culo en lugar del art culo de prueba.
O FASE DE DESAFI
Examinar los sitios de prueba en busca de eritema 24, 48 y 72 horas despue s de las aplicaciones to picas. Se debe determinar la concentracio n m nima no irritante en los animales de control. Aquellos animales de prueba que presenten eritema a concentraciones ma s bajas que la concentracio n m nima no irritante en los animales de control se deben considerar sensibilizados.
Prueba de Optimizacio n
Esta prueba tiene algunas similitudes con la Prueba de Draize. Sin embargo, a diferencia de la Prueba de Draize, e sta usa tratamientos tanto intrade rmicos como to picos e incluye adyuvante para algunas de las inyecciones de induccio n.
Cada animal se somete a desaf o en el anco no tratado, 24 a 72 horas despue s del u ltimo tratamiento de la Fase de Induccio n, con 0,025 mL aplicados en zonas de 2 cm2. Se usa una serie de concentraciones crecientes, desde la concentracio n m nima irritante hasta la concentracio n ma xima no irritante y tambie n se usan 5 concentraciones ma s bajas.
OBSERVACIONES
Al igual que en otros procedimientos de prueba que incluyen inyecciones intrade rmicas, el art culo de prueba debe estar en una forma apta para inyeccio n. Ver en Pruebas de Reactividad Biolo gica, In Vivo h88i la informacio n sobre el procedimiento de extraccio n.
N FASE DE INDUCCIO
Los sitios de prueba se evalu an 24, 48 y 72 horas despue s del tratamiento. Se determina la concentracio n ma xima que no causa irritacio n en el grupo de control. Los animales de los grupos de prueba que desarrollen respuestas inamatorias a concentraciones ma s bajas que la concentracio n ma xima no irritante en los controles se consideran sensibilizados.
Prueba del Adyuvante Completo de Freund

Esta prueba esta basada en el uso de inyecciones intrade rmicas del art culo de prueba en una mezcla de adyuvante completo de Freund y agua destilada (50 : 50).
Se usan 20 cobayos de prueba y 20 de control. A cada animal se le deben administrar un total de 10 inyecciones intrade rmicas. Los animales de prueba reciben 0,1 mL de una mezcla del art culo de prueba al 0,1% y solucio n salina al 0,9% (50 : 50) el d a 1, en una inyeccio n aplicada en el anco afeitado y otra en una porcio n de piel dorsal afeitada. Dos y 4 d as ma s tarde, se administra otra inyeccio n intrade rmica del art culo de prueba en solucio n salina en 8 nuevos sitios del dorso. Cada d a por medio durante las semanas 2 y 3, inyectar el art culo de prueba por v a intrade rmica en 10 sitios sobre los hombros, en una mezcla 50 : 50 de solucio n salina y FCA. Administrar la misma secuencia de inyecciones a los 20 animales de control, excepto que no se incluye el art culo de prueba en las inyecciones de solucio n salina o las de solucio n salina/FCA.
Dado que esta prueba usa inyecciones intrade rmicas, se necesita preparar extractos del material de prueba para emplear este procedimiento. Ver en Pruebas de Reactividad Biolo gica, In Vivo h88i la informacio n sobre el procedimiento de extraccio n.

O FASE DE DESAFI

N FASE DE INDUCCIO
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Treinta y cinco d as despue s de la primera inyeccio n, los animales son sometidos a una administracio n to pica de 0,1 mL de la solucio n al 0,1% del art culo de prueba en solucio n salina (animales de prueba). Los animales de control reciben so lo inyecciones de solucio n salina. Cuarenta y cinco d as despue s de la primera inyeccio n, se administra una segunda aplicacio n to pica. Aplicar to picamente una concentracio n no irritante del art culo de prueba (0,05 mL) a una zona de 1 cm2 de piel sin tratar. Este sitio se debe cubrir con un trozo de papel de ltro de 2 cm2, despue s de lo cual se debe aplicar un vendaje oclusivo. El parche se debe retirar despue s de 24 horas.
OBSERVACIONES
Veinticuatro horas despue s de cada inyeccio n durante la semana 1, se debe medir el espesor de un pliegue cuta neo sobre los sitios de inyeccio n de cada animal, empleando un calibre (mm) y registrar los dos dia metros transversales ma s grandes de cada reaccio n eritematosa (mm). Los volu menes de reaccio n se calculan multiplicando el espesor del pliegue por el producto de los dos dia metros transversales (expresados como mL). Para cada animal se debe calcular la media del volumen de reaccio n (+1 SD) durante la semana 1. Se calculan los volu menes de la reaccio n de desaf o de cada animal despue s de las inyecciones en el d a 35. Si un animal desarrolla un volumen de reaccio n de desaf o mayor que la media de su volumen de reaccio n + 1 SD, se debe considerar sensibilizado. Despue s de la prueba de desaf o con parches, evaluar los sitios de prueba en busca de eritema y edema. Las evaluaciones se deben hacer con la Tabla 5. La cantidad de animales positivos se debe comparar estad sticamente con los animales de control seudopositivos. Esto se hace tanto para los resultados de la inyeccio n intrade rmica como para los de la prueba con parches. Se puede utilizar la Prueba Exacta de Fisher. Despue s de los ana lisis estad sticos por separado, los resultados de las inyecciones intrade rmicas y de las pruebas con parche se pueden combinar y evaluar empleando la Tabla 7, con el n de clasicar un art culo de prueba como un sensibilizante fuerte, moderado o de bil o como no sensibilizante.
Tanto para el grupo de prueba como para el de control se usan de 10 a 20 cobayos. Se debe afeitar una zona de la piel de la espalda, justo detra s de los hombros hasta que la piel quede brillante. Luego, las zonas afeitadas se deben tratar con hielo seco de 5 a 10 segundos. Sobre el a rea tratada se debe colocar un vendaje hecho con gasa poco densa con adhesivo ela stico y con una apertura de 2 cm x 2 cm, el cual se asegura luego con cinta adhesiva. El art culo de prueba (0,2 mL de materiales viscosos, 0,1 mL de l quidos, o material so lido) se coloca dentro de la apertura del vendaje, sobre la piel tratada. Encima del art culo de prueba se deben colocar dos capas de papel de ltro #2 que se recubren con cinta oclusiva. A continuacio n, el papel de ltro y el material oclusivo que lo recubre se deben asegurar con cinta adhesiva al vendaje circundante. Despue s de 2 d as, levantar el papel de ltro de los sitios de prueba y volver a aplicar el art culo de prueba en el mismo sitio. Asegurar de nuevo el papel de ltro y el recubrimiento. Despue s de 2 d as ma s, levantar el papel de ltro y administrar dos inyecciones de 0,075 mL de FCA en los bordes del sitio de prueba. Luego se aplica nuevamente el material de prueba y se reasegura el papel de ltro con el recubrimiento. El art culo de prueba se debe volver a aplicar una vez ma s el d a 7, volvie ndose a sellar el papel de ltro y el recubrimiento. El d a 9, retirar el papel de ltro y todo el material de vendaje asociado.
O FASE DE DESAFI
El d a 22 despue s del tratamiento de induccio n, se debe aplicar 0,5 mL de material de prueba (o el art culo so lido) a una zona rasurada de 2 cm x 2 cm en el centro de la espalda. Los sitios de prueba se sta se deben cubrir con papel de ltro y recubrir con cinta adhesiva. E sostiene en su sitio con un vendaje ela stico asegurado con cinta adhesiva. Los animales de control reciben el mismo tratamiento en la fase de desaf o. La preparacio n se debe retirar despue s de 24 horas.
OBSERVACIONES
Veinticuatro, 48 y 72 horas despue s de retirar la preparacio n de la fase de desaf o, evaluar los sitios de prueba en busca de eritema y edema. Se puede emplear el esquema de clasicacio n de la Tabla 5.
Tabla 7. Esquema de Clasicacio n para Art culos de Prueba basado en la Prueba de Optimizacio n Intrade rmica % de Animales positivos S*, 4 75 S, 5075 S, 3050 N.S., 030
*
Prueba de Inamacio n de la Oreja del Rato n

Existe una cantidad de ventajas potenciales al usar ratones en lugar de cobayos para los me todos de sensibilizacio n. Las pruebas cla sicas en cobayos tienden a ser ma s costosas y tardan ma s tiempo. Ma s au n, al depender de puntajes relativamente subjetivos basados en edema y eritema, la robustez y tolerancia metodolo gicas podr an ser cuestionables. Esta prueba usa ratones y emplea tanto exposiciones to picas como inyecciones.
ANIMALES
Prueba con Parche % de Animales positivos y/o S, 4 50 y/o S, 3050 N.S.*, 030 N.S., 0
Clasicacio n Sensibilizante fuerte Sensibilizante moderado Sensibilizante de bil No sensibilizante
S = signicativo; N.S. = no signicativo
Prueba del Adyuvante Fraccionado

Esta prueba utiliza tanto FCA como lesio n cuta nea. El art culo de prueba se aplica to picamente.
Se deben usar ratones hembra CF-1, Balb/c o swiss, de 6 a 8 semanas de edad. Pueden alojarse en grupo en jaulas con cama de contacto directo (direct bedding cages). La aclimatacio n debe durar por lo menos de 5 a 7 d as. Deben disponer de comida (un alimento apropiado para ratones) y agua a voluntad. En el estudio no se deben usar animales con orejas dan adas. En este momento, se debe medir y registrar el espesor de ambas orejas de cada animal.
Dado que esta prueba emplea aplicaciones to picas del art culo de prueba, e ste puede estar en forma so lida o l quida. Si fuera necesario hacer extractos, ver los procedimientos de extraccio n en el cap tulo Pruebas de Reactividad Biolo gica, In Vivo h88i.
Al igual que en otros procedimientos que incluyen inyecciones intrade rmicas, el art culo de prueba debe estar en una forma apta para inyeccio n. Ver en Pruebas de Reactividad Biolo gica, In Vivo h88i la informacio n sobre el procedimiento de extraccio n.
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Para este procedimiento se deben determinar la concentracio n m nima irritante y la ma xima no irritante del art culo de prueba. Esto se hace con cuatro grupos de dos ratones, examinando los efectos de por lo menos cuatro concentraciones del art culo de prueba.
N FASE DE INDUCCIO
Se debe usar una concentracio n no to xica del art culo de prueba. De no estar establecida, puede ser necesario realizar una prueba preliminar para toxicidad maniesta, con el n de determinar una dosis apropiada.
N FASE DE INDUCCIO
Afeitar los abdo menes de los animales y luego depilarlos con una cinta adhesiva quiru rgica hasta que el a rea de prueba quede brillante. Una u nica inyeccio n de 0,05 mL de FCA se divide y administra por v a intrade rmica en dos sitios de inyeccio n dentro del a rea afeitada y depilada, pero a lo largo de los bordes. Despue s de las inyecciones de adyuvante, aplicar 100 mL del art culo de prueba (usar la concentracio n m nima irritante) o veh culo (controles) en el centro de los sitios de prueba afeitados. Despue s de que los sitios de prueba se sequen, regresar los ratones a las jaulas. La depilacio n con cinta y la aplicacio n del art culo de prueba (pero no del FCA) se repiten todos los d as durante los siguientes 3 d as.
O FASE DE DESAFI
Esta fase debe ocurrir 7 d as despue s de la aplicacio n to pica nal de la fase de induccio n. El art culo de prueba (a la concentracio n ma s alta no irritante) se debe aplicar to picamente (20 mL) en una oreja, mientras que la oreja opuesta recibe 10 mL de veh culo solo. Esto se realiza para todos los animales de prueba y de control.
OBSERVACIONES
Aplicar 25 mL de la concentracio n apropiada del art culo de prueba, o el veh culo (controles), a la supercie dorsal de cada oreja, durante 3 d as consecutivos. Cinco d as despue s del primer tratamiento, inyectar a los animales, a trave s de la vena de la cola, 2,5 mL de solucio n salina amortiguada con fosfato que contenga 20 mCi de 3H-metil timidina. Cinco horas despue s de la inyeccio n isoto pica, practicarles eutanasia a los animales. Retirar los no dulos linfa ticos auriculares drenantes de todos los animales de los grupos de prueba y de control. Combinar los no dulos linfa ticos de todos los animales dentro de un grupo dado, de manera que se obtenga una sola suspensio n de ce lulas de cada grupo. La suspensio n de ce lulas se puede obtener pasando los no dulos linfa ticos a trave s de un tamiz de acero inoxidable de malla 200, con ayuda del e mbolo de una jeringa. Centrifugar luego las ce lulas a 190 x g durante 10 minutos, resuspender en 3 mL de a cido tricloroace tico (ATA) al 5% y mantenerlas durante la noche a 48. El precipitado resultante se debe recuperar por centrifugado y el pellet se debe resuspender en 1 mL de ATA al 5%. Colocar la suspensio n en viales de centelleo con 10 mL de l quido de centelleo y contar las desintegraciones por minuto (dpm) con un contador beta.
OBSERVACIONES
Se debe registrar el espesor de ambas orejas de cada animal 24 y 48 horas despue s del desaf o. Las mediciones se deben hacer con un calibre (de preferencia un calibre de resorte). Un animal sensibilizado es aquel cuya oreja tratada con el art culo de prueba presenta un espesor por lo menos 20% mayor que la oreja opuesta. Para que la prueba sea va lida, el espesor de las orejas de los animales de control tratadas con el art culo de prueba no debe ser ma s de 10% superior al de las orejas opuestas. Si las orejas de los animales de control no cumplen con los requisitos, la prueba se debe repetir, usando concentraciones ma s bajas.
Comparar las dpm de cada grupo de prueba con respecto al grupo de control. Si el cociente iguala o excede de 3 para cualquier grupo de prueba, puede considerarse que la concentracio n del art culo de prueba usada en ese grupo es sensibilizante.
Prueba de Aumento de Vitamina A

Esta prueba es similar a la Prueba de Inamacio n de la Oreja del Rato n en que los art culos de prueba se aplican to picamente en el abdomen, con una aplicacio n de desaf o en las orejas, seguida por mediciones del espesor de las orejas. Una diferencia importante es el uso de ratones cuyo alimento se suplementa con acetato de vitamina A. El propo sito de la suplementacio n es aumentar la reactividad del sistema inmunitario, incrementando por lo tanto la posible reaccio n de sensibilizacio n.
ANIMALES
Prueba del No dulo Linfa tico Local

Esta prueba se basa en la observacio n de que la exposicio n de los ratones a los sensibilizantes puede ocasionar hiperplasia de ce lulas T en los no dulos linfa ticos auriculares de los ratones. El me todo combina fases in vivo e in vitro y requiere el uso de radioiso topos. Un aspecto poco usual de esta prueba es que no se requiere una fase de desaf o.
ANIMALES
Se deben usar cuatro grupos de un m nimo de cuatro ratones, CBA/ca machos o hembras (so lo un sexo en cada prueba), entre 8 y 12 semanas de edad.
Se deben mantener ratones Balb/c machos, de 3 a 4 semanas de edad con dieta suplementada con acetato de vitamina A. La dieta se puede preparar mezclando cada kg de alimento con 0,477 g de acetato de vitamina A gelatinizado. La mezcla de comida se debe usar dentro de las 3 semanas de preparada. Los ratones a usar en los estudios de sensibilizacio n deben alimentarse con la dieta suplementada durante por lo menos 4 semanas. Por lo tanto, los ratones deben tener de 7 a 10 semanas de edad al momento del estudio de sensibilizacio n. En este momento se debe medir y registrar el espesor de ambas orejas de cada animal.
Aunque en teor a se podr a aplicar un art culo de prueba so lido a la supercie dorsal de la oreja de un rato n, en la pra ctica se debe usar un extracto de dicho art culo. Ver en Pruebas de Reactividad Biolo gica, In Vivo h88i la informacio n sobre el procedimiento de extraccio n.
Aunque, en teor a, se podr a aplicar un art culo de prueba so lido a la supercie dorsal de la oreja de un rato n, en la pra ctica se debe usar un extracto de dicho art culo. Ver en Pruebas de Reactividad Biolo gica, In Vivo h88i la informacio n sobre el procedimiento de extraccio n.
Informacio n General / h1208i Pruebas de Esterilidad
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Determinar la concentracio n ma xima no irritante y la m nima irritante en sendos grupos de animales. Esto puede hacerse segu n se describe en Pruebas Preliminares en la Prueba de Inamacio n de la Oreja del Rato n.
N FASE DE INDUCCIO
Afeitar el pelaje del abdomen y del to rax de 10 ratones de cada grupo. Luego aplicar 100 mL del art culo de prueba (a la concentracio n m nima irritante), en los sitios de prueba, los d as 0, 2, 4, 7 y 11. Los animales de control reciben 100 mL de veh culo solo en las mismas fechas.
O FASE DE DESAFI
Esta fase debe ocurrir 4 d as despue s de la aplicacio n nal de la Fase de Induccio n. Aplicar a cada oreja de todos los animales de los grupos de prueba y control, 25 mL del art culo de prueba (a la concentracio n ma xima no irritante).
OBSERVACIONES
Se debe registrar el espesor de ambas orejas de cada animal 24 y 48 horas despue s del desaf o. Las mediciones se deben hacer con un calibre (de preferencia un calibre de resorte). Calcular el porcentaje de aumento en el espesor de cada oreja, restando la medida previa al tratamiento de la medida posterior al tratamiento, dividiendo el resultado por la medida antes del tratamiento y multiplicando por 100. Se debe comparar estad sticamente la respuesta del grupo de prueba en funcio n del grupo de control. (Para esta comparacio n se puede usar la prueba U de Mann-Whitney). Tambie n se deben calcular los resultados de cada animal. Si el aumento en el espesor de la oreja de un animal del grupo de prueba es como m nimo 50% mayor que el aumento ma s elevado de un animal de control, este resultado es indicativo de sensibilizacio n. Como evaluacio n general, si los resultados del estudio proporcionan un resultado signicativo de la prueba estad stica con un p50,01 para las comparaciones del grupo de prueba con el grupo control, o si cuando al menos dos animales de prueba tienen aumentos del espesor de la oreja que excedan el 50% de los cambios ma ximos en espesor en el grupo de control y la comparacio n de grupo presento un p 5 0,05, esto indica sensibilizacio n al art culo de prueba.&1S (USP30)
sistemas que no tienen una abertura directa al ambiente externo, son los que generalmente se usan para las pruebas de esterilidad, aunque pueden usarse aisladores abiertos que permitan la salida de materiales a trave s de una abertura denida impidiendo la entrada de contaminacio n mediante sobrepresio n de aire. Los aisladores cerrados usan so lo interfases descontaminadas o un puerto de transferencia ra pida para la transferencia de materiales. Los aisladores se construyen con pla sticos exibles (como por ejemplo cloruro de polivinilo), pla sticos r gidos, vidrio o acero inoxidable.&1S (USP30) Los sistemas aisladores protegen el art culo de prueba y los suministros para evitar su contaminacio n durante la manipulacio n, eliminando esencialmente el contacto directo entre el analista y los art culos de prueba. Todas las transferencias de material al interior & y exterior&1S (USP30) del aislador se realizan de manera ase ptica mientras se mantiene una separacio n completa del ambiente. Las manipulaciones ase pticas en el interior del aislador se realizan mediante semi-trajes (half-suits), que son componentes exibles de la pared del aislador y que permiten a los operadores una amplia gama de movimientos dentro del aislador, o mediante guantes y mangas. No es necesario que los operadores usen ropa especial para cuartos limpios cuando llevan a cabo las pruebas de esterilidad dentro de los aisladores; la ropa normal de laboratorio es adecuada, & aunque con frecuencia se usan guantes este riles debajo de los guantes del aislador como medida de precaucio n adicional contra la contaminacio n que entra al recinto del aislador y por razones de higiene.&1S (USP30) El interior del aislador se trata con sustancias qu micas esporicidas que eliminan toda la biocarga viable &sobre las supercies expuestas.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
N DEL AISLADOR O Y CONSTRUCCIO DISEN Sistemas de Ventilacio n

Los aisladores utilizados para pruebas de esterilidad esta n equipados con ltros de retencio n microbiana (se requieren ltros HEPA &o superiores).&1S (USP30) En reposo, el aislador cumple con los requisitos de calidad del aire para &un a rea de Clase 5 ISO segu n se dene en ISO 14644-1 hasta 14644-3*&1S (USP30) (ver Evaluacio n Microbiolo gica de Cuartos Limpios y Otros Ambientes Controlados h1116i). No obstante, el aislador no necesita cumplir con las &condiciones de la Clase 5 durante una operacio n que puede generar part culas, y no existen requisitos relativos a la velocidad del aire o al coeciente de intercambio de aire. El aislador debe estar lo sucientemente sellado durante la descontaminacio n de manera que la diseminacio n de vapores o gases esporicidas en el ambiente que lo rodea se mantenga a niveles adecuadamente bajos.&1S (USP30) Cuando existen aberturas directas hacia el ambiente exterior, las condiciones de sobrepresio n constante del aire mantienen las condiciones de esterilidad dentro del aislador. &En general, ambos tipos de aisladores, abiertos y cerrados, se mantienen a presio n positiva relativa al ambiente que los rodea, y la sobrepresio n ma s comu n es de 20 Pa o ma s. El usuario nunca debe exceder la presio n ma xima recomendada por el fabricante.&1S (USP30) El ujo de aire dentro de los aisladores utilizados para las pruebas de esterilidad es unidireccional o turbulento.
h1208i PRUEBAS DE N DE ESTERILIDADVALIDACIO SISTEMAS AISLADORES
Cambio en la redaccio n: Este cap tulo suministra gu as para la validacio n de sistemas aisladores utilizados en las pruebas de esterilidad de art culos farmacopeicos. [NOTAEn el contexto de este cap tulo, el te rmino & descontaminado&1S (USP30) se reere a un elemento o supercie que se ha sometido a un proceso de eliminacio n de la biocarga viable.] Los aisladoresdispositivos que crean entornos controlados en los que se realizan las pruebas de esterilidad farmacopeicase han utilizado desde mediados de la de cada de los an os ochenta. A los aisladores &&1S (USP30) se les suministra aire a trave s de un ltro & & HEPA o superior,&1S (USP30) y pueden descontaminarse&1S (USP30) de manera reproducible. &Los aisladores cerrados, los cuales son
Puertas y Puertos de Transferencia

& Los aisladores pueden conectarse a un descontaminador de paso o a un aislador de transferencia para posibilitar la recepcio n directa de medios este riles, l quidos de dilucio n este riles y suministros este riles desde el descontaminador al sistema aislador. Los puertos para transferencia ra pida (PTR) permiten conectar dos aisladores entre s , por ej. la estacio n de trabajo y el asilador de transferencia, para que los suministros se puedan trasladar de manera ase ptica de un aislador a otro. Las conexiones ase pticas entre dos
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Normas Internacionales de la International Organization for Standardization (ISO, por sus siglas en ingle s) 14644-1, 14644-2, 14644-3 y 14644-7
4000
h1208i Pruebas de Esterilidad / Informacio n General
aisladores o entre un aislador y un envase equipado con un PTR pueden realizarse en ambientes no clasicados utilizando PTR.&1S (USP30) Las supercies no este riles de los PTR se conectan mediante bridas o aros de jacio n. Un montaje de juntas comprimidas proporciona un sellado herme tico, evitando as la entrada de microorganismos. Cuando las dos bridas de un PTR se unen para formar un paso herme tico, queda expuesta una banda estrecha de la junta obturadora que podr a albergar contaminacio n microbiana. Esta junta expuesta & se debe desinfectar de forma rutinaria&1S (USP30) inmediatamente despue s de hacer la conexio n y antes de que los materiales se transeran a trave s de los PTR. Se debe utilizar una buena te cnica ase ptica al transferir los materiales y se debe evitar tocar la junta obturadora con los materiales que se esta n transriendo o con los guantes. El mantenimiento preventivo y la lubricacio n de los montajes de juntas se realiza conforme a las recomendaciones del fabricante de los PTR. Las juntas de los PTR se cambian con la frecuencia recomendada y se monitorean perio dicamente para detectar cualquier tipo de dan o, ya que las juntas cortadas o gastadas no pueden proporcionar un sellado realmente herme tico.
Seleccio n de una Ubicacio n para el Aislador

Los aisladores para las pruebas de esterilidad no tienen que estar instalados necesariamente en un cuarto limpio clasicado, pero es importante situar el aislador en un a rea de acceso limitado para el personal no esencial. La ubicacio n apropiada permite que alrededor del aislador haya un espacio adecuado para mover los aisladores de transferencia, para la organizacio n de los materiales y para llevar a cabo el mantenimiento general. No es necesario realizar un monitoreo ambiental del cuarto que rodea al aislador. El control de la temperatura y la humedad del cuarto es importante para la seguridad y comodidad del operador y es crucial para el uso ecaz de ciertas tecnolog as de &&1S (USP30) descontaminacio n. & Se preeren condiciones de temperatura uniformes en &1S (USP30) el cuarto cuando se empleen me todos de & descontaminacio n&1S (USP30) sensibles a la temperatura. &Se debe tener cuidado de situar el aislador de manera que se eviten puntos fr os que podr an resultar en condensacio n excesiva cuando se usan vapores que condensan para la descontaminacio n.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
N DEL SISTEMA AISLADOR VALIDACIO

El sistema aislador debe ser validado antes de su uso en pruebas de esterilidad que forman parte del procedimiento de liberacio n de lotes. Para vericar que el sistema aislador y todo el equipo asociado son adecuados para las pruebas de esterilidad, se efectuara n estudios de validacio n en tres etapas: calicacio n de la instalacio n (CI), calicacio n operativa (CO) y calicacio n de funcionamiento (CF). Los siguientes apartados contienen puntos que deben considerarse para validar sistemas aisladores para pruebas de esterilidad. La asignacio n de funciones de prueba a una etapa determinada del programa de validacio n (es decir, CI, CO y CF) no es crucial, siempre y cuando se demuestre y se documente el funcionamiento correcto del aislador antes de su uso en los Ensayos farmacopeicos.
el sistema aislador; si se hacen revisiones a las especicaciones de disen o, e stas tambie n se incluyen. Los manuales del equipo y sus copias se catalogan y se archivan en un lugar de fa cil acceso para su consulta y revisio n. Se verica que los planos se ajusten a las especicaciones de disen o. Todos los planos y los diagramas de proceso e instrumentacio n se catalogan y se archivan en lugares donde sea fa cil consultarlos. Se revisara toda la documentacio n para vericar que reeja con exactitud los atributos claves del sistema instalado. Esto sirve como referencia general para determinar si el sistema aislador cumple con las especicaciones de disen o y los requisitos de instalacio n. Los problemas potenciales de los equipos o de control de proceso, que podr an ocasionar fallas en el sistema durante el funcionamiento, se identican y documentan durante el ana lisis en la modalidad de fallas y el ana lisis de riesgos. El sistema se modica, si fuera necesario, para minimizar el riesgo de fallas, y se establecen me todos para los puntos de control cr ticos. Los resultados de la CI se resumen en un Informe de Calicacio n de la Instalacio n. Se recomienda la siguiente documentacio n. EquiposSe realiza una lista de equipos con sus respectivas especicaciones de disen o. El informe de CI verica que el equipo que cumple con las especicaciones de disen o apropiadas se recibio y se instalo de acuerdo con los requisitos del fabricante. Materiales de Construccio nSe comprueba que los materiales de construccio n de los componentes cr ticos del sistema se ajustan a las especicaciones de disen o. Se verica la compatibilidad del me todo de &descontaminacio n&1S (USP30) previsto con los materiales de construccio n. InstrumentosSe realiza un listado de los instrumentos del sistema, incluido su estado de calibracio n. Especicaciones de los ServiciosSe comprueba que todos los servicios necesarios para el funcionamiento del sistemasegu n se denen en los manuales de uso y en los diagramas de proceso e instrumentacio nesta n disponibles y cumplen con las especicaciones del disen o. Se inspeccionan todas las conexiones entre los sistemas de servicios y el sistema aislador, y se verica que estas conexiones se ajustan a las especicaciones. Certicacio n de FiltrosSe prueban y certican los ltros HEPA y cualquier otro ltro de retencio n microbiana; se incluyen copias de los resultados de las pruebas y de los certicados en el informe de CI. Se revisan las solicitudes de compra y se verica que el sistema de ltrado de aire cumple con las especicaciones. Programas informa ticosSe realizara un listado de todos los programas informa ticos asociados con el sistema aislador; se indicara el nombre, las dimensiones y el nu mero de revisio n del archivo. Se verica el correcto etiquetado de los discos maestros de la computadora y se almacenan de manera segura.
Calicacio n Operativa (CO)

En la etapa de CO se verica que el sistema aislador funciona de acuerdo con las especicaciones operativas. Comprobacio n del Desempen o OperativoEsta prueba verica que todas las funciones de alerta y alarma cumplen con sus respectivas especicaciones funcionales. Se verica la capacidad del sistema para cumplir con todos los puntos establecidos y los para metros ajustables. Comprobacio n de la Integridad del AisladorLa integridad del aislador se mantiene durante todas las condiciones normales de funcionamiento. Se realiza una prueba de fugas para vericar que se cumplen las especicaciones funcionales del fabricante y para garantizar la seguridad antes de cargar el aislador con una sustancia qu mica &esporicida descontaminante.&1S (USP30) Para proporcionar proteccio n contra la contaminacio n accidental, los aisladores funcionan con una presio n & & 1 S ( U S P 3 0 ) positiva & adecuada&1S (USP30) durante el funcionamiento normal. &Los estudios de validacio n deben demostrar que el valor establecido de presio n de aire&1S (USP30) puede mantenerse y controlarse durante el funcionamiento del sistema. Vericacio n del Ciclo de &Descontaminacio n&1S (USP30)&Se verica el ciclo de descontaminacio n que es la funcio n del equipo de descontaminacio n conjuntamente con el (los) aislador(es).&1S (USP30)
Calicacio n de la Instalacio n (CI)

La etapa de CI incluye una descripcio n detallada de las caracter sticas f sicas del sistema, como por ejemplo las dimensiones, la conguracio n interna y los materiales de construccio n. La disposicio n de la unidad se diagrama indicando claramente, y con sus dimensiones, las interfases y los sistemas de transferencia. Se verica que los servicios generales, como por ejemplo el suministro de aire, de vac o, el sistema de extraccio n externo y el control de temperatura y humedad, se ajusten a las especicaciones del disen o. Asimismo, se describen con detalle los dema s equipos utilizados con
Informacio n General / h1208i Pruebas de Esterilidad
4001
Se pueden utilizar distintos me todos de & descontaminacio n&1S (USP30) para eliminar la biocarga de los sistemas aisladores y los suministros. Entre las sustancias qu micas que se han utilizado para tratar los aisladores esta n el a cido perace tico, el dio xido de cloro, el ozono y el pero xido de hidro geno; cada uno tiene distintos requisitos relativos a las condiciones de exposicio n y al control del proceso. Es crucial que se cumplan los requisitos operativos del fabricante para el me todo de &descontaminacio n&1S (USP30) seleccionado y que e stos se describan en las especicaciones de funcionamiento. &&1S (USP30) La temperatura dentro del aislador tambie n es importante, especialmente para la &descontaminacio n,&1S (USP30) con vapor de pero xido de hidro geno, en donde es crucial mantener la concentracio n &en relacio n con&1S (USP30) punto de condensacio n. Con algunas sustancias qu micas esterilizantes como el dio xido de cloro y el ozono, se requiere la adicio n de humedad al aislador antes de la &descontaminacio n.&1S (USP30) Cuando sea necesaria una humedad relativa elevada, la capacidad para controlarla debe ser vericada durante la CO. Tambie n es importante vericar la concentracio n y distribucio n de la sustancia qu mica &descontaminante.&1S (USP30) Cuando se aplique & en forma de vapor o de gas, la distribucio n puede evaluarse empleando indicadores qu micos, me todos espectrosco picos o detectores electro nicos.&1S (USP30) Los me todos de &descontaminacio n&1S (USP30) de gas y de vapor & pueden&1S (USP30) requerir ventiladores en el aislador para distribuir la sustancia qu mica de manera uniforme. La ubicacio n y la orientacio n de estos ventiladores se ajustan para asegurar la distribucio n o ptima del aire. &Si el aislador utiliza un sistema de recirculacio n de ujo de aire unidireccional, puede que no se requieran los ventiladores de distribucio n; sin embargo, esto se debe evaluar caso por caso.&1S (USP30) Dado que las estanter as, los equipos, los montajes de guantes-mangas y los semi-trajes (halfsuits) afectan los patrones de distribucio n, los controles de distribucio n se realizan con el aislador completamente cargado con equipos y suministros, y se dene y documenta la instalacio n de estas unidades. Muchas instalaciones utilizan aisladores de transferencia ma s pequen os como unidades porta tiles de &descontaminacio n&1S (USP30) de supercies. En estos aisladores de transferencia, los art culos de prueba y los suministros se tratan qu micamente para eliminar la biocarga antes de su transferencia a trave s de un PTR al interior del aislador de prueba. Se dene su conguracio n de carga y se revisan y verican los planos de conguracio n durante la CO. [NOTALas sustancias qu micas &descontaminantes&1S (USP30) utilizadas en los aisladores actu an sobre la supercie de los materiales; por lo tanto, toda supercie que quede tapada no sera tratada y podr a contener biocarga viable. &Se deben tomar medidas de precaucio n especiales para tratar con esporicida las supercies que se sabe esta n tapadas y pudieran destaparse durante las pruebas de esterilidad.&1S (USP30)] & Los agentes descontaminantes&1S (USP30) tienen que retirarse del aislador despue s del tiempo de exposicio n, lo que se logra gracias a una corriente de aire nuevo, suministrada ya sea a trave s del equipo de &descontaminacio n&1S (USP30) o mediante &el uso del sistema de ventilacio n del aislador.&1S (USP30) La ventilacio n se logra en un circuito abierto, en el cual el gas se ventea a trave s de un oricio de ventilacio n hacia la atmo sfera, o en un circuito cerrado, en donde la sustancia qu mica es retirada y destruida por el equipo de &descontaminacio n.&1S (USP30) Se comprueba el sistema de ventilacio n; si se utiliza una conguracio n de circuito abierto, se comprueba el ujo y la seguridad del sistema de venteo. Desarrollo del Ciclo de &Descontaminacio n&1S (USP30)Cuando se termina la CO, tiene lugar el desarrollo del ciclo de &descontaminacio n&1S (USP30) para establecer los para metros necesarios para el control del proceso durante los ciclos de & descontaminacio n&1S (USP30) de rutina. Cualquiera de los me todos generalmente utilizados en la industria para la validacio n de los procesos de & descontaminacio n&1S (USP30)incluidos los me todos basados en la biocarga, &ciclos fraccionados&1S (USP30) y de sobremuerteson & adecuados. El proceso de descontaminacio n&1S (USP30) se confronta con indicadores biolo gicos (IB, por sus siglas en ingle s). Se &debe conocer&1S (USP30) la poblacio n de esporas y la resistencia de los IB a las condiciones de &descontaminacio n&1S (USP30) aplicadas. Siempre que sea posible, &se realiza una estimacio n del valor D para cada sistema IB o, como alternativa, se obtiene una curva de
supervivencia para el sistema IB&1S (USP30) (ver Indicadores Biolo gicosPruebas de Resistencia h55i); es aceptable que el proveedor de los IB proporcione el valor D. &&1S (USP30)
Calicaciones de Funcionamiento (CF)

En la etapa de CF se verica que el sistema funciona de acuerdo con las especicaciones requeridas por su operador. Al concluir la etapa de CF, se verica la ecacia del ciclo de &descontaminacio n&1S (USP30) y, si correspondiera, la suciencia del venteo de la sustancia qu mica &descontaminante.&1S (USP30) Todos los datos de CF se resumen, revisan y archivan adecuadamente. Vericacio n de LimpiezaEn general, la limpieza no es crucial para realizar las pruebas de esterilidad. Sin embargo, los residuos de producto son motivo de preocupacio n cuando se prueban varios productos distintos, particularmente por los agentes antimicrobianos agresivos, ya que estos materiales podr an interferir en la capacidad de las pruebas subsiguientes para detectar niveles bajos de contaminacio n en el producto. La preocupacio n acerca de la contaminacio n con el producto aumenta cuando se trata de un polvo que es inherentemente antimicrobiano, ya que los polvos se diseminan ma s fa cilmente. Limpiar hasta un nivel en donde no exista contaminacio n visible, resulta es suciente para los sistemas aisladores para pruebas de esterilidad, y es un requisito adecuado de especicacio n para el operador. Documentar el me todo, la frecuencia, el equipo y los materiales de limpieza utilizados para limpiar el aislador. Validacio n de la &Descontaminacio n&1S (USP30)Se tratan las supercies interiores del aislador, los equipos dentro del aislador y los materiales introducidos en el aislador para eliminar toda la biocarga. &&1S (USP30) Los me todos de &descontaminacio n&1S (USP30) utilizados para tratar aisladores, art culos de prueba y suministros para pruebas de esterilidad pueden alcanzar de forma reproducible & una reduccio n mayor de tres&1S (USP30) unidades logar tmicas en la biocarga de un indicador biolo gico &&1S (USP30) de alta resistencia (IB; ver Indicadores Biolo gicos para Esterilizacio n h1035i), segu n se verica por los me todos de fraccio n negativa o de ana lisis de muerte total. Los estudios de ana lisis de muerte total son adecuados para IB con una poblacio n de &103&1S (USP30) esporas por unidad, mientras que los estudios de fraccio n negativa son apropiados para IB con una poblacio n de 105 o superior. Se utiliza un nu mero suciente de IB para probar la reproducibilidad estad stica y la distribucio n adecuada del agente &descontaminante.&1S (USP30) Se presta particular atencio n a las a reas que pueden causar problemas con relacio n a la concentracio n del agente. Se & puede requerir&1S (USP30) un nu mero mayor de IB en los aisladores que se cargan con gran cantidad de equipos y materiales. &&1S (USP30) La capacidad del proceso para lograr de manera reproducible una muerte microbiana de &mayor de tres&1S (USP30) unidades logar tmicas se conrma en tres estudios de validacio n consecutivos. El operador establecera una periodicidad para la &redescontaminacio n&1S (USP30) del aislador. La periodicidad puede indicar plazos cortos (pocos d as) o largos (varias semanas), dependiendo de la dicultad del mantenimiento de la esterilidad (ver Mantenimiento de la Asepsia en el Entorno del Aislador). Cambio en la redaccio n:
N DE LA INTEGRIDAD DEL VERIFICACIO ENVASE

Algunos materiales son susceptibles a los agentes &descontaminantes,&1S (USP30) lo que puede dar como resultado la inhibicio n del crecimiento microbiano. Son motivo de preocupacio n la penetracio n de los agentes &descontaminantes&1S (USP30) dentro de los envases de los productos, los accesorios tales como los conjuntos de ltros y tuber as o cualquier material que pudiera entrar en contacto con los productos, los medios o los l quidos de dilucio n utilizados en la prueba de esterilidad. El operador es responsable de vericar que los envases, medios y suministros no resulten afectados por el proceso de &descontaminacio n.&1S (USP30) Los tubos con tapa de rosca, los
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h1208i Pruebas de Esterilidad / Informacio n General
frascos o los viales con tapones de goma y sellados con precintos han demostrado ser muy resistentes a la penetracio n de los agentes & descontaminantes&1S (USP30) habituales. Envolver los materiales en papel de aluminio o colocarlos en un envase sellado evitara el contacto con el agente &descontaminante;&1S (USP30) sin embargo, estos procedimientos tambie n pueden ocasionar que algunas supercies no se &descontaminen. En algunos casos, puede que sea necesario el uso de ciclos de descontaminacio n de duracio n ma s corta y concentraciones reducidas para minimizar la penetracio n de agentes descontaminantes dentro del envase o recipiente. Pueden ser aceptables ciclos que proveen valores de muerte menores de tres unidades logar tmicas de BI resistentes siempre que el ana lisis microbiolo gico del ambiente demuestre que el (los) aislador(es) se encuentra(n) exento(s) de biocarga recuperable.&1S (USP30) En muchos casos, el operador elegira tratar las supercies de los envases del producto en ana lisis con el agente &descontaminante&1S (USP30) para minimizar la probabilidad de que entre biocarga en el aislador. El operador es responsable de demostrar, a trave s de estudios de validacio n, que la exposicio n de los envases de producto al agente &descontaminante&1S (USP30) no inuye negativamente en la capacidad de la prueba de esterilidad para detectar niveles bajos de contaminacio n dentro de estos art culos de prueba. Se recomienda examinar la capacidad del envase para resistir la contaminacio n utilizando procedimientos de prueba tanto qu micos como microbiolo gicos. Las pruebas de validacio n de bacteriostasis y fungistasis se deben efectuar utilizando art culos de prueba reales que hayan sido sometidos a todas las etapas del proceso de &descontaminacio n&1S (USP30) (ver Pruebas de Esterilidad h71i). Esto se aplica tanto a los envases de dispositivos me dicos como a los envases y sistemas de cierre de productos farmace uticos. En los estudios de validacio n se debe determinar si los medios de prueba de esterilidad y los medios de control ambiental cumplen con los requisitos de la Prueba de Promocio n de Crecimiento de Organismos Aerobios, Anaerobios y Hongos en Pruebas de Esterilidad h71i. Cambio en la redaccio n:
(half-suits) son otra fuente &posible&1S (USP30) de contaminacio n microbiana. Los guantes son motivo especial de preocupacio n, ya que se utilizan para manejar tanto los materiales para pruebas de esterilidad como los art culos de prueba. &En la seleccio n de guantes y mangas debe considerarse la resistencia a la puncio n y a la abrasio n. Los materiales Hypalon son resistentes a los esporicidas qu micos empleados en la descontaminacio n de aisladores y tambie n a las punciones, y se encuentran disponibles en distintos espesores para proveer un grado de sensacio n tactil adecuado a trave s de los guantes, a la vez que mantienen su integridad.&1S (USP30) Las ltraciones muy pequen as en los guantes son dif ciles de detectar hasta que el guante se estira durante el uso. Existen varios detectores de ltraciones de guantes comercialmente disponibles; el operador se asegura de que los detectores analicen el guante bajo condiciones tan similares como sea posible a las condiciones de uso reales. Las pruebas microbiolo gicas se utilizan para complementar o sustituir a las pruebas f sicas. [NOTALas placas de toque dactilar esta ndar puede que no sean lo sucientemente sensibles para detectar niveles bajos de contaminacio n. La inmersio n de los guantes en agua de peptona al 0,1% seguida de la ltracio n del diluyente y el sembrando en placa con medio de cultivo puede detectar pe rdidas de integridad en los guantes que de otra manera pasar an inadvertidas.] La realizacio n de un monitoreo continuo de part culas no viables dentro del recinto del aislador es ideal, ya que puede detectar ra pidamente fallas en el ltro. Una segunda opcio n es realizar un monitoreo perio dico utilizando un equipo de conteo de part culas porta til. El muestreo de part culas se debe realizar de manera que no plantee ningu n riesgo para el mantenimiento de la asepsia dentro del aislador. Cambio en la redaccio n:
N DE LOS RESULTADOS DE INTERPRETACIO LAS PRUEBAS DE ESTERILIDAD

Es muy improbable que se obtenga un falso positivo en una prueba de esterilidad en un aislador validado y que funciona adecuadamente si se elimina la biocarga del interior del aislador con un alto grado de garant a, si &los guantes, mangas y semi-trajes (half-suits) esta n exentos de ltraciones, y si los PTR funcionan correctamente.&1S (USP30) No obstante, los aisladores son dispositivos meca nicos y sigue siendo necesaria la utilizacio n de buenas te cnicas de asepsia. La decisio n de invalidar un falso positivo se tomara solamente despue s de cumplir totalmente con los requisitos que se establecen en Observacio n e Interpretacio n de Resultados en Pruebas de Esterilidad h71i. Cambio en la redaccio n:
MANTENIMIENTO DE LA ASEPSIA EN EL ENTORNO DEL AISLADOR

Se debe validar la capacidad del sistema aislador para mantener un entorno ase ptico durante un per odo operativo denido. Adema s, se debe implementar un programa de monitoreo microbiolo gico para detectar el mal funcionamiento del sistema aislador o la presencia de contaminacio n accidental dentro del aislador. El monitoreo microbiolo gico normalmente implica el uso de un programa de muestreo rutinario, que puede incluir, por ejemplo, un muestreo despue s de la & descontaminacio n&1S (USP30) el primer d a de funcionamiento y un muestreo el u ltimo d a del per odo proyectado para el mantenimiento de la asepsia. Se &puede realizar un muestreo perio dico durante todo el per odo de uso&1S (USP30) para demostrar el mantenimiento de la asepsia dentro del aislador. Se puede realizar un monitoreo de las supercies dentro del aislador utilizando placas de contacto para supercies planas o bien hisopos para supercies irregulares. Sin embargo, puesto que los residuos de los medios podr an suponer un riesgo para la asepsia del aislador, es mejor efectuar estas pruebas al nal del periodo de prueba. Si se efectu a de manera concurrente con las pruebas, se debe poner mucha atencio n para asegurar que se eliminan todos los residuos de las supercies del aislador, &y que e stas se limpian y desinfectan cuidadosamente.&1S (USP30) Se podra n utilizar muestras activas de aire y placas de sedimentacio n, pero puede que no sean lo sucientemente sensibles para detectar los niveles tan bajos de contaminacio n presentes dentro del recinto del aislador. & Una ruta posible&1S (USP30) para que la contaminacio n penetre en el aislador es durante la introduccio n de suministros y muestras en el recinto. Es de vital importancia validar que todos los materiales introducidos en el recinto del aislador este n exentos de contaminacio n microbiana, as como lo es la inspeccio n perio dica de las juntas de obturacio n para detectar imperfecciones que podr an permitir la entrada de microorganismos. Los conjuntos de guantes y semi-trajes
N Y SEGURIDAD CAPACITACIO
Al igual que en el caso de las pruebas de esterilidad realizadas en cuartos limpios convencionales, los operadores deben estar capacitados para realizar los procedimientos espec cos del aislador. &El uso adecuado de te cnicas ase pticas es crucial para la realizacio n de pruebas de esterilidad en aisladores, as como lo es en cuartos limpios. Por lo tanto, se requiere que todos los te cnicos que realizan las pruebas de esterilidad este n capacitados en cuanto a las te cnicas ase pticas adecuadas.&1S (USP30) Todas las sesiones de capacitacio n y la evaluacio n del desempen o del operador se documentan en el historial de capacitacio n del individuo. Es necesario que todo el personal este capacitado en los procedimientos de seguridad necesarios para el funcionamiento y mantenimiento del sistema de aislamiento. Se debe evaluar la seguridad del personal en el uso de un agente & descontaminante.&1S (USP30) Las Hojas de Datos de Seguridad del Material (Material Safety Data Sheets), o documentos equivalentes, deben estar disponibles en el a rea inmediata al lugar donde se
Pruebas F sicas / h1217i Fuerza de Ruptura de las Tabletas
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esta utilizando el agente &descontaminante.&1S (USP30) Se deben seguir todas las precauciones de almacenamiento y seguridad. Antes de que la unidad entre en servicio, se debe efectuar y documentar una inspeccio n del aislador y todo el equipo asociado para vericar que este n operativamente listos con respecto a su seguridad.
DETERMINACIONES DE LA FUERZA DE RUPTURA DE LAS TABLETAS

Los dispositivos de medicio n usados anteriormente eran, en general, manuales. Por ejemplo, el medidor de dureza Monsanto (o Stokes) comprim a las tabletas entre dos mordazas por medio de un tornillo y calibre de resorte. En el medidor de dureza Pzer, la tableta se montaba verticalmente y se apretaba en un dispositivo que se asemejaba a un par de pinzas. En el duro metro Strong Cobb, la carga de ruptura se aplicaba por medio de una pequen a bomba hidra ulica, que primero se hac a funcionar manualmente pero luego fue motorizada. Los problemas asociados con estos dispositivos estaban relacionados con la variabilidad de la velocidad de carga entre operarios y las dicultades en el montaje y en la calibracio n apropiados. Los medidores modernos emplean accionadores meca nicos, celdas de carga extensiome tricas para mediciones de fuerza y procesamiento de sen ales electro nicas, siendo, por consiguiente, preferidos. Sin embargo, al usarlos para la determinacio n anal tica de la fuerza de ruptura se deben tener en cuenta ciertos aspectos importantes que se discuten a continuacio n.
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h1217i FUERZA DE RUPTURA DE LAS TABLETAS

N INTRODUCCIO
Como sistemas de administracio n de agentes farmace uticos, las tabletas se encuentran en una gran variedad de presentaciones, tales como tabletas de desintegracio n ra pida, de desintegracio n lenta, erosionables, masticables y de disolucio n bucal. Cada una de estas presentaciones exige ciertas condiciones para la unio n, estructura e integridad de la matriz comprimida. Las tabletas deben ser capaces de resistir los rigores de la manipulacio n y transporte en la planta de fabricacio n, en el sistema de distribucio n del medicamento y, ya en el mercado, en manos de los usuarios nales (pacientes/consumidores). Los procesos de fabricacio n como el recubrimiento, el envasado y la impresio n pueden implicar un estre s considerable que las tabletas deben estar en condiciones de soportar. Por esas razones, la resistencia meca nica de las tabletas reviste una importancia considerable y es un factor que se mide en forma rutinaria. La resistencia de la tableta sirve a la vez como criterio para conducir el desarrollo del producto y como una especicacio n de control de calidad. Una prueba empleada con frecuencia para medir la capacidad de las tabletas para resistir fuerzas meca nicas consiste en ponerlas a rotar en un cilindro rotatorio con el n de determinar su resistencia a las desportilladuras y a la abrasio n de su supercie. El porcentaje de pe rdida de peso despue s de la rotacio n se conoce como friabilidad de las tabletas. Los me todos estandarizados y el equipo para probar la friabilidad se describen en el cap tulo general Friabilidad de Tabletas h1216i. Otra medida de la integridad meca nica de las tabletas es su fuerza de ruptura, que es la fuerza requerida para que se fracturen (ej., se rompan) en un plano espec co. Por lo general las tabletas se colocan entre dos platinas, una de las cuales se mueve para aplicar suciente fuerza a la tableta hasta ocasionar su fractura. En caso de tabletas convencionales redondas (de corte transversal circular), la carga ocurre a trave s del dia metro (lo que se llama en ocasiones carga diametral) y la fractura ocurre en ese plano. En la literatura farmace utica, la fuerza de ruptura de las tabletas se conoce comu nmente como dureza; sin embargo, el uso de este te rmino se presta a confusiones. En la ciencia de materiales, el te rmino dureza se reere a la resistencia de una supercie a la penetracio n o la hendidura con un indentador pequen o. El te rmino resistencia a la rotura se usa tambie n con frecuencia para describir la resistencia de las tabletas a la aplicacio n de una carga de compresio n. Aunque este te rmino describe la verdadera naturaleza de la prueba con ma s exactitud que el te rmino dureza, pareciera implicar que las tabletas se trituran durante la prueba, lo cual a menudo no es el caso. Ma s au n, el te rmino resistencia en esta aplicacio n podr a cuestionarse, porque en f sica se usa con frecuencia para describir una tensio n (ej., resistencia a la traccio n). Por lo tanto, se preere el te rmino fuerza de ruptura, que se usara en la presente discusio n.
Platinas
Las platinas deben ser paralelas. Sus caras deben estar pulidas y recticadas con precisio n en forma perpendicular a la direccio n del movimiento. La perpendicularidad se debe mantener durante el movimiento de la platina y el mecanismo debe estar libre de cualquier desplazamiento por exio n o torsio n a medida que se aplica la carga. Las supercies de contacto deben ser ma s grandes que el a rea de contacto con la tableta.
Velocidad y Uniformidad de la Carga

Tanto la velocidad de movimiento de la platina como la velocidad a la cual se aplica la fuerza de compresio n (es decir, la velocidad de carga) deben ser constantes. Cuando se mantiene una velocidad de carga constante se evita la ra pida acumulacio n de cargas de compresio n, lo cual podr a llevar al cizallamiento o la trituracio n incontrolada y a una mayor variabilidad en la fuerza de ruptura medida. Sin embargo, las mediciones de velocidad de carga constante pueden ser demasiado lentas para el monitoreo de la produccio n de tabletas en tiempo real. La velocidad a la cual se aplica la carga de compresio n puede afectar signicativamente los resultados, dado que en la fractura de la tableta pueden estar involucrados procesos que dependen del tiempo (1). La forma en que la matriz de una tableta responde a las diferencias en la velocidad de carga depende del mecanismo de la fractura. A bajas velocidades de deformacio n, algunos materiales se fracturan en forma du ctil, pero con velocidades de deformacio n ma s altas hay mayor probabilidad de que la fractura sea fra gil. La transicio n de fractura du ctil a fra gil se acompan a por un aumento en la fuerza de ruptura. Los dispositivos que simplemente trituran las tabletas pueden producir datos reproducibles que son engan osos porque carecen de sensibilidad. Se debe realizar la prueba uniformemente con un equipo que se ha calibrado de forma rutinaria. Cambiar entre equipos de prueba de disen os distintos o entre fabricantes diferentes requerira una comparacio n de los datos para asegurarse que las dos unidades someten la forma farmace utica a una fuerza semejante y de manera similar. Los equipos disponibles actualmente proporcionan una velocidad de carga constante de 20 newtons (N) o menos por segundo, o un movimiento constante de la platina de 3,5 mm o menos por segundo. La ruptura controlada y uniforme es un atributo importante del procedimiento de prueba. Con el n de garantizar la comparabilidad de los resultados, las pruebas se deben realizar bajo condiciones ide nticas de velocidad de carga o movimiento de la platina. Dado que cada sistema de aplicacio n de carga tiene ciertas ventajas, ambos se usan en la pra ctica. Puesto que la situacio n particular de la prueba y el tipo de matriz de la tableta que se esta evaluando imponen limitaciones diferentes, tampoco se cuenta con bases para declarar la preferencia absoluta por uno de los sistemas. Este cap tulo general propone tomar en consideracio n ambos enfoques.
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h1217i Fuerza de Ruptura de las Tabletas / Pruebas F sicas
Los distintos me todos pueden llevar a resultados nume ricamente diferentes para una muestra de tabletas dada, lo cual requiere que se especique la velocidad de aplicacio n de carga o el desplazamiento, junto con la fuerza de ruptura determinada.
Fuerza de Ruptura - Dependencia de la Geometr a y Masa de la Tableta

Las mediciones de la fuerza de ruptura no tienen en cuenta las dimensiones ni la forma de la tableta. Las tabletas ma s gruesas del mismo material, comprimidas en condiciones ide nticas a las de tabletas ma s delgadas, con la misma forma de punzoner a y la misma fuerza, requerira n fuerzas de ruptura mayores. La orientacio n y la fractura de la tableta deben guardar relacio n con las observadas durante el desarrollo de la forma farmace utica. En comparaciones directas (es decir, sin normalizacio n de datos), las mediciones de la fuerza de ruptura se deben efectuar en tabletas que tengan las mismas dimensiones y geometr a, y una orientacio n uniforme en el equipo de prueba.
calibracio n esta tica emplea contrapesos rastreables; se deben vericar al menos tres puntos diferentes con el n de determinar la linealidad. La calibracio n dina mica utiliza una celda rastreable de carga de referencia que se comprime entre las platinas. La calibracio n funcional de un aparato para determinar la fuerza de ruptura debe conrmar tambie n que la velocidad y la constancia de la velocidad para la aplicacio n de carga o el desplazamiento este n dentro de las tolerancias prescritas en todo el intervalo de movimiento de la platina.
Taman o de la Muestra
Con el n de conseguir la suciente precisio n estad stica para la determinacio n de la fuerza de ruptura promedio, se deben analizar como m nimo muestras de 6 tabletas. La fuerza de ruptura promedio por s sola puede ser adecuada para cumplir el propo sito de controlar la calidad del proceso o del producto. En casos en los que la fuerza de ruptura pueda ser particularmente cr tica, se debe disponer de los valores individuales y promedio de fuerza de ruptura.
Orientacio n de la Tableta
En la compresio n diametral de tabletas redondas sin ningu n tipo de ranuras, la orientacio n de la tableta es inequ voca. Esto implica que la tableta se coloca entre las platinas de forma tal que la compresio n se produce a trave s del dia metro. Sin embargo, es posible que las tabletas con una forma singular o compleja no tengan una orientacio n obvia para la determinacio n de la fuerza de ruptura. Con el n de garantizar la comparabilidad de los resultados, lo mejor es convenir una orientacio n esta ndar, preferiblemente una que los operarios puedan reproducir fa cilmente, dado que la fuerza de ruptura puede depender de la orientacio n de la tableta en el equipo de medicio n. En general, las tabletas se someten a prueba en forma diametral o paralela al eje ma s largo. Las tabletas ranuradas tienen dos posibles orientaciones. Cuando se orientan con las ranuras perpendiculares a las caras de la platina, aumenta la probabilidad de que la fractura por tensio n ocurra a lo largo de la ranura. Esto proporciona informacio n sobre la resistencia de la matriz en el punto ma s de bil de la estructura. Se obtiene ma s informacio n general sobre la resistencia de la matriz cuando las tabletas ranuradas se orientan con las ranuras paralelas a las caras de la platina. Las tabletas en forma de ca psula o las tabletas ranuradas pueden romperse mejor en una prueba de exio n en tres puntos (2). Un accesorio, que se instala sobre las platinas o las sustituye, soporta la tableta por sus extremos y permite aplicar la carga de ruptura sobre la cara opuesta, en el punto medio de la tableta que no esta apoyado. Esos accesorios generalmente se consiguen en el mismo sitio que suministra los medidores de dureza.
N RESISTENCIA A LA TENSIO
La medicio n de las resistencias a la tensio n proporciona una medida ma s importante de la resistencia meca nica del material compactado y tiene en cuenta la geometr a de la tableta. Si las tabletas se fracturan por tensio n, se puede usar la fuerza de ruptura para calcular la resistencia a la tensio n. Desafortunadamente, esto resulta pra ctico solo para las formas simples. Si las tabletas redondas de caras planas (cilindros rectos de bases circulares) se fracturan por tensio n, como lo indica una separacio n completa de las mitades bajo compresio n diametral, se puede usar la fuerza de ruptura para calcular la resistencia a la tensio n por medio de la siguiente ecuacio n (4), que se aplica so lo a tabletas cil ndricas:
Unidades, Resolucio n y Calibracio n

Por lo general, los medidores de fuerza de ruptura modernos se calibran en kilopondios o newtons. La relacio n entre estas unidades de fuerza (3) es 1 kilopondio (kp) = 1 kilogramo fuerza (kgf) = 9,80 N. Se deben expresar los resultados de prueba en unidades esta ndares de fuerza para facilitar la comunicacio n. Algunos medidores de fuerza de ruptura ofrecen tambie n una escala en unidades Strong Cobb (USC), una herencia de los d as en que los medidores de dureza Strong Cobb eran de uso comu n. Se debe tener cuidado con la conversio n entre USC y N o kp puesto que la USC proviene de un dispositivo hidra ulico y es una medida de presio n. Por lo general, los medidores de fuerza de ruptura contempora neos utilizan disen os electro nicos modernos con lectores digitales. Algunas unidades tienen tambie n una impresora integrada o pueden conectarse a una impresora. Las fuerzas de ruptura se deben poder leer con una aproximacio n de 1 N. Los medidores de fuerza de ruptura deben calibrarse perio dicamente. El sensor de fuerza, as como la meca nica del aparato deben tenerse en cuenta. En el caso del sensor de fuerza, el intervalo completo de medicio n (o, como m nimo, el intervalo usado para medir la muestra de prueba) debe calibrarse con una precisio n de 1 N, utilizando el me todo esta tico o el dina mico. Por lo general, la
en donde sX es la resistencia a la tensio n, F es la fuerza de ruptura, D es el dia metro de la tableta y H es el espesor de la tableta. Dado que so lo se consideran las tabletas que se fracturan por tensio n, los datos se basan en las tabletas que se fracturan en forma congruente. Por lo tanto, la reproducibilidad de los datos debe mejorarse cuando se comparan con las pruebas de resistencia a la ruptura convencionales. Ma s au n, los datos deben normalizarse con respecto a las dimensiones de la tableta, puesto que tanto el dia metro como el espesor se incluyen en la ecuacio n. La derivacio n de esta ecuacio n se puede encontrar en los textos de referencia (5, 6); se basa en la teor a ela stica y en las siguientes suposiciones: 1. La tableta es un cuerpo isotro pico 2. Obedece a la ley de Hooke 3. El mo dulo de elasticidad en compresio n y en tensio n es el mismo 4. Existe un punto de carga ideal La derivacio n se ha extendido a las tabletas de caras convexas (7, 8):
en donde sX es la resistencia a la tensio n, F es la fuerza de ruptura, D es el dia metro de la tableta, H es el espesor de la tableta y W es el espesor central del cilindro (altura de la pared de la tableta) . La velocidad de carga lenta y constante de los medidores modernos de fuerza de ruptura motorizados favorece la fractura por tensio n. Sin embargo, el punto de carga ideal puede no ocurrir, debido a la trituracio n y a la induccio n de cizallamiento en la interfase con la supercie de las platinas. La adicio n de una almohadilla a las platinas ayuda a evitar las cizalladuras en los puntos de contacto y promueve una verdadera fractura por tensio n.
Informacio n General / h1222i Productos Farmace uticos
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Desde ese punto de vista, se recomienda enfa ticamente la sta almohadilla cuando se requieren mediciones muy precisas. E debe ser relativamente delgada para que cualquier desviacio n con respecto al punto previsto de aplicacio n de fuerza puntual real no sea grande. La almohadilla debe tambie n colapsar fa cilmente de manera que su deformacio n no se vuelva parte de la fuerza medida por el aparato de prueba. En situaciones de rutina que incluyan mediciones de un gran nu mero de muestras, la adicio n de almohadilla podr a contribuir a inexactitudes en la medicio n puesto que el polvo de las muestras examinadas anteriormente podr a quedarse incrustado en la matriz colapsable y, por lo tanto, alterar sus propiedades. A menos que se contemple el reemplazo frecuente de la almohadilla, puede considerarse aceptable prescindir del uso de la misma para mantener la constancia de las condiciones de la prueba. Otra opcio n para determinar la resistencia a la tensio n de las tabletas consiste en la exio n o torsio n de las tabletas. Bajo las condiciones de carga ideales, una carga de ruptura aplicada al punto medio sin apoyo de una de las caras ocasionara la generacio n de tensio n pura en la cara opuesta. Si las tabletas son cilindros rectos circulares y se someten a exio n en tres puntos, la resistencia a la tensio n se puede calcular con la siguiente ecuacio n (9):
h1222i PRODUCTOS UTICOS CON FARMACE N TERMINAL ESTERILIZACIO N PARAME TRICA LIBERACIO
N INTRODUCCIO
La liberacio n parame trica se dene como la liberacio n de partidas o lotes de productos este riles con esterilizacio n terminal, basada en el cumplimiento de los para metros de esterilizacio n cr ticos y denidos, y sin tener que realizar las pruebas que guran en Pruebas de Esterilidad h71i. La liberacio n parame trica es posible cuando la forma de esterilizacio n se comprende bien, los para metros f sicos del procesamiento esta n bien denidos y son predecibles y mensurables, y cuando la letalidad del ciclo ha sido validada microbiolo gicamente mediante el uso de indicadores biolo gicos apropiados o, en el caso de radiacio n ionizante, mediante el uso de pruebas dosime tricas y microbiolo gicas adecuadas. El empleo de la liberacio n parame trica para procesos de esterilizacio n requiere previa aprobacio n de la FDA. Al momento de evaluar solicitudes de registro que incluyan el uso de liberacio n parame trica del producto, debe esperarse que las agencias reglamentarias insistan en una justicacio n cient ca bien fundada para el proceso de esterilizacio n y en datos de validacio n bien documentados. Las agencias necesitara n asegurarse de que cualquier muestra comercial de un producto sea este ril y, &si fuera analizada despue s de su liberacio n,&1S (USP30) cumplir a con los requisitos para esterilidad que se encuentran en el cap tulo general Pruebas de Esterilidad h71i. Es importante considerar las limitaciones de las Pruebas de Esterilidad h71i en la evaluacio n de productos con esterilizacio n terminal. Las pruebas de esterilidad descritas en el cap tulo general h71i tienen una sensibilidad limitada y son estad sticamente poco apropiadas para la evaluacio n de productos con esterilizacio n terminal dada la probabilidad excesivamente baja de encontrar unidades contaminadas. Por lo tanto, una vez que un proceso de esterilizacio n esta completamente validado y funciona con uniformidad, una combinacio n de datos f sicos de esterilizacio n tales como los de dosimetr a o letalidad acumulada en combinacio n con otros me todos, como &monitores de carga (por ej.,&1S (USP30) & indicadores biolo gicos, indicadores termoqu micos&1S (USP30) o integradores sicoqu micos&),&1S (USP30) puede proporcionar informacio n ma s exacta que las pruebas de esterilidad con respecto a la liberacio n al mercado de productos con esterilizacio n terminal. Hay cuatro formas de esterilizacio n que teo rica y pra cticamente podr an cumplir con los requisitos para la liberacio n parame trica: las esterilizaciones por calor hu medo, por calor seco, por o xido de etileno y por radiacio n ionizante. En este cap tulo de informacio n se discuten primeramente las cuestiones generales relacionadas con la liberacio n parame trica, sin importar la forma de esterilizacio n, y luego se analizan algunas formas espec cas de esterilizacio n. El cap tulo no trata la liberacio n parame trica de dispositivos me dicos con esterilizacio n terminal. Los productos con esterilizacio n terminal representan la categor a de menor riesgo de productos farmace uticos este riles. A diferencia de los productos fabricados ase pticamente en un ambiente microbiolo gicamente controlado, los productos con esterilizacio n terminal se &someten a un proceso de esterilizacio n que imparte un nivel m nimo y mensurable de garant a de esterilidad (o SAL, por sus siglas en ingle s). Dado que el procesamiento ase ptico depende de la exclusio n de la contaminacio n microbiolo gica y no esta basado en la letalidad que se le conere al producto en su envase sellado, no es posible calcular el SAL. Es importante destacar que en el caso del procesamiento ase ptico, el SAL so lo puede estimarse a partir de los ndices de contaminacio n en el llenado de medios de cultivo (media ll) u otra forma de evaluacio n de riesgo. En el caso de la esterilizacio n terminal, es posible calcular un SAL m nimo
en donde L es la distancia entre los apoyos y los otros te rminos son iguales a los denidos anteriormente. Las suposiciones son las mismas usadas para calcular la resistencia a la tensio n con compresio n diametral. Sin embargo, las resistencias a la tensio n determinadas por exio n y compresio n diametral pueden no concordar debido a la probabilidad de carga no ideal y a la induccio n de cizallamiento durante la prueba.
A BIBLIOGRAFI
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.
Davies, P.N.; Newton, J.M. In Pharmaceutical Powder Compaction Technology; Alderbom, G., Nystrom, C., Eds.; Marcel Dekker: Nueva York, 1995; Cap tulo 7. Gold, G.; Duvall, R.N.; Palermo, B.T. New instrumentation for determining exure breaking strength of capsule-shaped tablets. J. Pharm. Sci. 1980, 69(4), 384386. Diem, K., Ed. Documenta Geigy, Scientic Tables, 6th ed.; Geigy Pharmaceuticals: Ardsley, Nueva York, 1969; 214. Fell, J.T.; Newton, J.M. Determination of tablet strength by the diametral-compression test. J. Pharm. Sci. 1970, 59(5), 688 691. Tomoshenko, S. Theory of Elasticity; McGraw-Hill: Nueva York, 1934; 8285, 104109. Frocht, M.M. Photoelasticity; John Wiley & Sons: Nueva York, 1948; 2, 3239, 118129. Stanley, P.; Newton, J.M. The tensile fracture stress of capsuleshaped tablets. J. Pharm. Pharmacol. 1980, 32(12), 852854. Pitt, K.G.; Newton, J.M.; Stanley, P. Tensile fracture of doublyconvex cylindrical discs under diametral loading. J. Mater. Sci. 1988, 23, 27232728. Pitt, K.G.; Newton, J.M.; Richardson, R.; Stanley, P. The material tensile strength of convex-faced aspirin tablets. J. Pharm. Pharmacol. 1989, 41, 289292.&1S (USP30)
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h1222i Productos Farmace uticos / Informacio n General
o Probabilidad de No-esterilidad o Falta de Esterilidad (PNS, por sus siglas en ingle s) con bastante exactitud. Por lo tanto, el te rmino SAL tiene diferentes signicados contextuales cuando se lo emplea para describir procesos ase pticos ma s que procesos terminales, y es importante que los cient cos e ingenieros que trabajan en el campo de fabricacio n y control de productos este riles comprendan claramente esta diferencia. Las siglas PNS y SAL con frecuencia se usan como sino nimos.&1S (USP30) Los productos con esterilizacio n terminal deben tener una probabilidad de no-esterilidad (PNS) de no ma s de una en un millo n de unidades producidas. Esto se indica frecuentemente como una PNS &o un SAL&1S (USP30) de 106, o una probabilidad de supervivencia de la biocarga del producto al proceso de esterilizacio n en una unidad cualquiera del producto menor de uno en un millo n. Se puede probar que un producto con esterilizacio n terminal cumple con la PNS de 106 mediante diferentes enfoques de desarrollo del ciclo de esterilizacio n. La aplicacio n apropiada de estos me todos requiere de un conocimiento cient co exhaustivo del me todo de esterilizacio n seleccionado para su uso con un producto determinado. & Las estrategias empleadas para validar&1S (USP30) el desarrollo de procesos de esterilizacio n terminal se encuentran dentro de tres categor as: 1. Proceso basado en la biocarga. 2. Proceso combinado de indicador biolo gico/biocarga. 3. Proceso de sobremuerte (overkill). El proceso basado en la biocarga &&1S (USP30) requiere de un amplio conocimiento de la biocarga del producto. Debe observarse que muchos de los procedimientos de determinacio n de la dosis de radiacio n implican el establecimiento del proceso sobre la base del recuento de la biocarga y de la resistencia a la radiacio n. Este me todo exige que el proceso de esterilizacio n produzca al menos una PNS de 106 para la biocarga. Esto signica que si el nivel de biocarga activa del producto es de 10 microorganismos o una unidad logar tmica, deber an inactivarse al menos siete unidades logar tmicas de biocarga para asegurar una PNS de 106. El me todo basado en la biocarga requiere que el usuario desarrolle puntos cr ticos de control apropiados dentro del proceso para determinar el t tulo de la biocarga. Los productos que facilitan la supervivencia de la biocarga requieren ambientes de fabricacio n ma s controlados y controles ma s precisos durante el proceso. Este proceso es ma s apropiado para el desarrollo de ciclos en productos limpios o ultra limpios que contienen &constantemente un nivel bajo de unidades formadoras de colonias (ufc) por unidad de producto&1S (USP30) con una baja frecuencia de microorganismos formadores de esporas. Asimismo, este proceso puede ser necesario para permitir la esterilizacio n terminal de un producto que pudiera perder cualidades o atributos clave como resultado de un proceso de esterilizacio n ma s riguroso. & logo puede encontrar que los procedi&1S (USP30) El microbio mientos formales de ana lisis de riesgo, como por ejemplo los de Ana lisis de Riesgo y Puntos Cr ticos de Control (HACCP, por sus siglas en ingle s), son u tiles para establecer las condiciones adecuadas de control de fabricacio n y los para metros de control durante el proceso. El proceso combinado de indicador biolo gico/biocarga se emplea generalmente cuando el fabricante desea un proceso de esterilizacio n que demuestre la inactivacio n de gran nu mero de microorganismos indicadores biolo gicos que se saben resistentes al proceso. Aunque el fabricante pueda tener preferencia por el proceso de sobremuerte (overkill), la posible pe rdida de algunos atributos del producto en este tipo de proceso puede ocasionar la necesidad de emplear el proceso combinado indicador biolo gico/biocarga. Este u ltimo requiere del conocimiento de la biocarga dentro y sobre el producto, y de una base de datos referente a la resistencia de la biocarga a la esterilizacio n. La resistencia relativa del indicador biolo gico seleccionado con respecto a la resistencia de la biocarga se debe establecer dentro o sobre el producto. Frecuentemente se emplean indicadores biolo gicos &con&1S (USP30) aproximadamente 106 esporas & con valor D121 4 1 minuto&1S (USP30) en el desarrollo de dicho proceso. Generalmente se realizan ciclos de exposicio n fraccionada para determinar la resistencia relativa a la esterilizacio n (o valor D) entre el producto inoculado con el o los microorganismos indicadores biolo gicos y la biocarga encontrada frecuentemente. Este proceso es utilizado con frecuencia para el desarrollo de los
ciclos de esterilizacio n por los fabricantes de productos parenterales con esterilizacio n terminal, y para la esterilizacio n por o xido de etileno de dispositivos me dicos. El proceso de sobremuerte es frecuentemente utilizado cuando el art culo a esterilizar es completamente inerte al agente esterilizante y a las condiciones del ciclo de esterilizacio n, y no existe riesgo de pe rdida de los atributos o de la calidad del producto. Cuando se emplea este proceso, se deben tener conocimientos sobre la biocarga & para asegurar que los materiales no esta n adulterados antes de la esterilizacio n. Estos datos pueden ser&1S (USP30) los datos de recuento de la biocarga del producto y tambie n sobre la prevalencia de formadores de esporas. No se necesita que la base de datos para este proceso sea tan extensa como las requeridas para el proceso de biocarga o para el proceso de indicador biolo gico/biocarga. Para establecer &la ecacia&1S (USP30) del proceso de esterilizacio n, se utilizan generalmente indicadores biolo gicos resistentes al proceso 6 & que contienen aproximadamente 10 esporas. Sin embargo, se puede escoger una poblacio n de esporas de N0 para conrmar un proceso de letalidad adecuado. La sobremuerte por lo general se dene como un proceso que dar a un m nimo de F01 de 12 minutos (ver Para metros Cr ticos de Operacio n ma s adelante) y se demuestra biolo gicamente basa ndose en la reduccio n logar tmica de esporas de indicadores biolo gicos calibrados.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
GENERALIDADES Validacio n del Proceso de Esterilizacio n

La liberacio n parame trica exige primeramente que el proceso de esterilizacio n elegido sea disen ado y validado para alcanzar una PNS de 106. &&1S (USP30) La validacio n de la mayor a de los procesos de esterilizacio n incluye la validacio n de los para metros f sicos del proceso y de su ecacia microbiolo gica mediante el uso de indicadores biolo gicos. &Sin embargo,&1S (USP30) el uso de indicadores biolo gicos para establecer o validar perio dicamente procesos de esterilizacio n por radiacio n gamma &es poco comu n.&1S (USP30) Los organismos ampliamente reconocidos como indicadores biolo gicos se emplean en la validacio n de procesos de calor hu medo, porque permiten la comparacio n de los datos de letalidad medidos f sicamente con la letalidad biolo gica. Debe existir una correlacio n razonable entre los datos de letalidad medidos f sicamente (F0) y la letalidad biolo gica del proceso determinada mediante la evaluacio n del producto con indicadores biolo gicos. & La ecacia predecible de la esterilizacio n terminal basada en la biocarga esta fundamentada en el nu mero y la resistencia de los microorganismos dentro o sobre el producto. Por esta razo n, uno de los componentes de la liberacio n parame trica es un programa activo para el control microbiolo gico que permita el seguimiento del recuento y la resistencia a la esterilizacio n de la biocarga del producto.&1S (USP30) El control de la biocarga y su recuento son mucho menos signicativos cuando se emplea el disen o de proceso de sobremuerte. En muchos casos, los procesos de sobremuerte no requieren de una evaluacio n extensiva y continua de la biocarga. Tambie n requieren de un menor control del ambiente de fabricacio n durante el proceso.
Programa de Control Microbiolo gico de Esterilizacio n

El propo sito de este programa de control es asegurar que el estado microbiolo gico del producto, antes de ser esterilizado terminalmente, no se desv e signicativamente del nivel de control microbiolo gico establecido durante la validacio n del proceso de esterilizacio n. El programa de control microbiolo gico incluye el seguimiento de la biocarga dentro y sobre el producto, y el
1 F0 se dene como el &tiempo calculado (en minutos)&1S (USP30) de la letalidad &del proceso&1S (USP30) equivalente &al tiempo&1S (USP30) a 121,18, & asumiendo&1S (USP30) un valor Z de 10,08 en el producto que se va a esterilizar.
Informacio n General / h1222i Productos Farmace uticos
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seguimiento del estado microbiolo gico de los envases, cierres o materiales de empaque que se necesiten. Tambie n incluye un programa de evaluacio n del estado microbiolo gico del ambiente donde se procesa el producto. El programa de control es particularmente importante en los casos en donde la esterilizacio n terminal no esta basada en la sobremuerte, sino en los enfoques de desarrollo de ciclos basados en la biocarga o en la combinacio n de indicador biolo gico/biocarga. En muchos casos, no se requerira el control de la biocarga y el seguimiento del ambiente de fabricacio n para disen os del proceso de sobremuerte, en donde la F0 del proceso sea por lo menos de 12 minutos. En otros casos sera necesario algu n seguimiento limitado, aunque se use el disen o de proceso de sobremuerte. En general, el seguimiento de la biocarga en los procesos de sobremuerte se &limita a aquellos productos que sustentan el crecimiento microbiano.&1S (USP30) Reviste especial preocupacio n en este caso la posibilidad latente de contaminacio n del producto con toxinas microbianas o de degradacio n por microorganismos. La frecuencia del seguimiento dependera de las variaciones en la biocarga proveniente de fuentes potenciales. Deben considerarse el nu mero de microorganismos, su identicacio n, as como su resistencia a la forma de esterilizacio n espec ca cuando se establece la liberacio n parame trica del producto con esterilizacio n terminal. La resistencia de diferentes especies a formas de esterilizacio n espec cas puede afectar la ecacia de la esterilizacio n y la determinacio n de las condiciones del proceso de esterilizacio n cuando se usa un me todo de biocarga o un proceso combinado de biocarga/indicador biolo gico en el desarrollo del ciclo. En el desarrollo del proceso usando el enfoque de biocarga, pueden usarse organismos indicadores ma s resistentes que los t picos de la biocarga, aunque no se requieren diferencias extremas en la resistencia. La informacio n sobre el desempen o de indicadores biolo gicos puede encontrarse en el cap tulo general Indicadores Biolo gicosPruebas de Resistencia h55i.
El programa de liberacio n parame trica no se implementa ni practica en forma intermitente. Una vez implementado dicho programa, la liberacio n del producto esterilizado se hace de acuerdo con los requisitos del programa aprobado reglamentariamente. La liberacio n del producto por otros medios no es aceptable si no se alcanzan los para metros cr ticos de funcionamiento predenidos. Cambio en la redaccio n:
N FORMAS DE ESTERILIZACIO Esterilizacio n por Calor Hu medo

La esterilizacio n por calor hu medo de productos farmace uticos abarca varios tipos de ambientes y medios de esterilizacio n. Los procesos de vapor saturado, de roc o de agua caliente y de inmersio n en agua caliente son considerados ambientes de esterilizacio n por calor hu medo. Pueden emplearse diferentes procesos para esterilizar productos por calor hu medo, e stos pueden utilizar esterilizadores de lote o esterilizadores continuos.
METROS CRI TICOS DE FUNCIONAMIENTO PARA
Sistema de Control de Cambios

Los cambios introducidos en el equipo del proceso de esterilizacio n pueden ocasionar una desviacio n signicativa del proceso de liberacio n parame trica inicialmente validado. Por lo tanto, es esencial que se establezca un sistema de control de cambios. Un sistema de control de cambios es un sistema formal con procedimientos operativos esta ndares apropiados, que incluye la aprobacio n de cambios en el equipo del proceso de esterilizacio n. Este sistema permitir a la evaluacio n de todos los cambios relacionados con los para metros cr ticos de la liberacio n parame trica. El sistema de control de cambios tambie n incluye una revisio n & te cnica y gerencial, y criterios para la aceptacio n y revisio n de cambios.&1S (USP30) Si un cambio pudiera afectar signicativamente cualquier para metro cr tico, cada para metro tendr a que ser revalidado para asegurar la esterilidad del producto farmace utico 6 con una PNS m nima de 10 . Una noticacio n apropiada a la agencia reglamentaria tambie n deber a formar parte del proceso de revalidacio n.
En las especicaciones del proceso de esterilizacio n se dene y establece una lista de para metros clave del proceso con sus respectivos l mites operativos. Los para metros cr ticos de funcionamiento son aquellos absolutamente esenciales para asegurar la 6 esterilizacio n del producto a una PNS de 10 . Entre los ejemplos de para metros cr ticos de funcionamiento se pueden incluir, aunque no exclusivamente, los siguientes: &los l mites de tiempo de permanencia,&1S (USP30) los l mites m nimo y ma ximo para la temperatura de permanencia pico del proceso, la temperatura de permanencia pico promedio y los resultados de las pruebas de liberacio n de la partida o lote que satisfacen los requisitos de CFR, Parte 211 &(por ej., los resultados de laboratorio para un monitor de carga).&1S (USP30) El valor de F0 &puede usarse&1S (USP30) como un para metro cr tico & so lo cuando&1S (USP30) las relaciones entre temperatura y tiempo & esta n bien denidas.&1S (USP30) Otros para metros medidos pueden considerarse para metros secundarios (o no cr ticos); y entre ellos se encuentran el tiempo de permanencia ma ximo y m nimo para el pico de temperatura, la presio n de la ca mara y, si correspondiera, el nivel de agua de la ca mara, el tiempo en que el agua esterilizante permanece por encima de los l mites de temperatura denidos, y el diferencial de presio n de la bomba recirculante de agua.
xido de Etileno Esterilizacio n por O

La implementacio n de la liberacio n parame trica de productos farmace uticos esterilizados por o xido de etileno es ma s dicultosa que la liberacio n parame trica de productos esterilizados por procesos & de calor hu medo. Los para metros cr ticos para&1S (USP30) la esterilizacio n por o xido de etileno (ETO, por sus siglas en ingle s) se interrelacionan &y son ma s complicados que los de los procesos de calor hu medo.&1S (USP30)
METROS CRI TICOS DE FUNCIONAMIENTO PARA
& Los para metros cr ticos pueden incluir los siguientes: temperatura, cantidad de humedad relativa presente, concentracio n de o xido de etileno, tiempo total de exposicio n, densidad del producto y de la carga, y factores de permeabilidad del gas.&1S (USP30) La liberacio n parame trica de productos farmace uticos puede lograrse si se emplea un sistema automatizado de medicio n de los para metros cr ticos, y las cargas de esterilizacio n se denen con l mites estrechos y se validan de acuerdo a los tipos de producto, densidades, materiales de empaque y conguracio n global de la carga. Un ejemplo de la medicio n de factores cr ticos que puede ser considerado para la liberacio n parame trica ser a el uso de registradores de presio n de ETO calibrados para proporcionar un
Procedimientos de Liberacio n
Debe establecerse un programa de garant a de la calidad que describa en detalle los pasos para la liberacio n parame trica de las partidas o lotes de productos esterilizados y la documentacio n requerida. Aunque la garant a de esterilidad de los productos se basa primariamente en la medicio n de los para metros f sicos del proceso, se deben revisar, documentar y aprobar varios asuntos para la liberacio n parame trica de esos productos. &Entre estos asuntos se encuentran los siguientes: revisio n de los registros de partida; revisio n de los resultados del programa de control ambiental microbiolo gico en curso y de la biocarga previa a la esterilizacio n; y una revisio n de los registros de datos termogra cos, de los monitores de carga y de los resultados de los datos cr ticos y no cr ticos que puedan haber sido utilizados para demostrar el control del proceso. Tambie n es importante asegurar que el esterilizador se encuentra actualizado en cuanto a calibracio n, mantenimiento y revalidacio n.&1S (USP30)
4008
h1222i Productos Farmace uticos / Informacio n General
estimacio n de la concentracio n de ETO durante todo el proceso, o el uso de mediciones directas de la concentracio n de ETO por IR o cromatograf a de gases. Debido a las variaciones que pueden ocurrir en los para metros clave durante la esterilizacio n, la liberacio n parame trica no es ampliamente usada para productos esterilizados por ETO. Sin embargo, para asegurar una liberacio n parame trica, adema s de cen irse a los para metros &&1S (USP30) del proceso de esterilizacio n por & o xido de etileno, con frecuencia&1S (USP30) se emplean indicadores biolo gicos (y sus pruebas de esterilidad posterior al procesamiento de esterilizacio n) o integradores f sicoqu micos para la esterilizacio n por o xido de etileno &como monitores de carga (para metros cr ticos).&1S (USP30)
Esterilizacio n por Radiacio n

Se han usado dos procesos de esterilizacio n por radiacio n: la esterilizacio n por rayos gamma y la esterilizacio n por haz de electrones (es decir, radiacio n ionizante). Algunos productos farmace uticos, tanto a granel como en sus formas terminadas, han sido esterilizados por radiacio n. Al tratar los para metros cr ticos necesarios para la liberacio n parame trica en la esterilizacio n por radiacio n, la liberacio n parame trica se referiere a menudo como liberacio n dosime trica. La liberacio n dosime trica se establece por el uso de un dos metro qu mico que detecta la liberacio n de una dosis m nima espec ca de radiacio n, la cual ha demostrado que esteriliza el producto a una PNS m nima de 106. El dos metro en la esterilizacio n por radiacio n ionizante que se emplea para medir la recepcio n de una dosis m nima de radiacio n, se coloca en una zona preestablecida que absorbe dosis bajas en el transportador del producto irradiado. Esto requerira el mapeo del perl de la radiacio n ionizante absorbida a trave s de las diversas densidades procesadas en el transportador del producto. La dosis de radiacio n ma s baja que se especica para el proceso se correlaciona con los niveles predecibles de reduccio n de la biocarga, mediante cualquiera de los tres me todos documentados.2 Es posible considerar un me todo alternativo disponiendo del recuento extensivo de la biocarga del producto y de los datos de resistencia a la radiacio n. Los estudios de vericacio n de la dosis se realizara n con el n de asegurar que la peor de las biocargas, considerando su resistencia y recuento, pueda ser inactivada en la zona de recepcio n de la dosis
ma s baja en el sistema transportador, de forma que se logre al menos una &PNS de 106.&1S (USP30) Este me todo requerira desde luego un programa continuo de evaluacio n de la biocarga. El objetivo para el ciclo de radiacio n es una PNS m nima de 106 en cuanto a la biocarga del producto. &&1S (USP30) La liberacio n dosime trica de un producto esterilizado por radiacio n depende de recepcio n de una dosis m nima, por lo tanto, los para metros cr ticos de funcionamiento que gobiernan la recepcio n de esa dosis deben estar dentro de l mites especicados. Estos para metros cr ticos de funcionamiento pueden incluir: conguracio n de apilado dentro del transportador, densidad del producto a granel, velocidad de la cinta o del sistema transportador, distancia a la fuente de radiacio n, duracio n de la exposicio n del producto, y ajustes adecuados y denidos para compensar la desintegracio n de la fuente de radiacio n. La demostracio n de uniformidad en la dosis de radiacio n absorbida en las zonas de m nima y ma xima absorcio n de la radiacio n dentro de los transportadores totalmente cargados, considerada sobre la base de las variaciones entre lotes es una condicio n necesaria para la liberacio n dosime trica de productos farmace uticos esterilizados por radiacio n. Cambio en la redaccio n:
RESUMEN
El uso de la liberacio n parame trica como suceda nea de las pruebas de esterilidad de productos descritas en el cap tulo general Pruebas de Esterilidad h71i exige la aprobacio n previa de la FDA. La liberacio n parame trica es ventajosa para productos con esterilizacio n terminal. La gran extensio n de datos requeridos para establecer la liberacio n parame trica, &en comparacio n con los procedimientos del cap tulo general h71i los cuales son poco sensibles a niveles muy bajos de contaminacio n microbiolo gica,&1S (USP30) puede dar como resultado una evaluacio n ma s exacta y conable de la probabilidad de falta de esterilidad en lotes de producto. &&1S (USP30)
ANSI/AAMI/ISO 11137-1996, Esterilizacio n de Productos para el Cuidado de la SaludRequisitos para la Validacio n y el Control de Rutina Esterilizacio n por Radiacio n, 11 de Julio, 1994.
Reactivos / Especicaciones de Reactivos
4009
Reactivos, Indicadores y Soluciones

Cambio en la redaccio n: Acetato de Amilo (Acetato de Isoamilo), CH3CO2C5H11130,18 [2308-18-1]&1S (USP30)L quido transparente e incoloro. Poco soluble en agua. Miscible con alcohol, alcohol am lico, benceno y e ter. Peso espec co h841i: aproximadamente 0,87. Intervalo de ebullicio n (Prueba para reactivos, Me todo I): no menos de 90% entre 1378 y 1428. Solubilidad en alcohol diluidoUna porcio n de 1,0 mL se disuelve en 20 mL de alcohol diluido para formar una solucio n transparente. AcidezAgregar 5,0 mL a 40 mL de alcohol neutralizado y, si el color rosado desaparece, valorar volume tricamente con hidro xido de sodio 0,10 N: no se requiere ma s de 0,20 mL para restituir el color rosado (aproximadamente 0,02% como CH3COOH). AguaUna porcio n de 5 mL produce una solucio n transparente con 5 mL de disulfuro de carbono.
&
ESPECIFICACIONES DE REACTIVOS
Cambio en la redaccio n: Aceite de Cedro (para aclarar cortes de muestras para microscop a)&[8000-27-9]&1S (USP30)Se debe usar un aceite seleccionado y destilado de la madera del cedro rojo, Juniperus virginiana L. (Fam. Pinaceae), para este propo sito. Indice de refraccio n: aproximadamente 1,504 a 208. Para usarse con lentes de inmersio n homoge nea, se requiere un aceite especialmente preparado con un ndice de refraccio n de 1,5150 + 0,0002 a 208. Cambio en la redaccio n: Acetaldeh do &(Etanal; Aldeh do Ace tico),&1S (USP30) CH3CHO 44,05 &[75-07-0]&1S (USP30)L quido incoloro. Miscible con agua y con alcohol. Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Acetanilida (Fenilacetamida; Antifebrina), & 1 S ( U S P 3 0 ) C8H9NO135,16 &[103-84-4]&1S (USP30)Cristales blancos brillantes, generalmente en escamas o polvo cristalino blanco. Es estable al aire. Fa cilmente soluble en alcohol y en cloroformo; soluble en agua hirviendo, en e ter y en glicerina; poco soluble en agua. Intervalo de fusio n h741i: entre 1148 y 1168. Reaccio nLa solucio n saturada de este reactivo es neutra al tornasol. Pe rdida por secado h731iSecar sobre a cido sulfu rico durante 2 horas: no pierde ma s de 0,5% de su peso. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): no ma s de 0,05%.
&
Cambio en la redaccio n: Acetato de Amonio, NH4C2H3O277,08 Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n:
& &
[631-61-8]&1S
(USP30)
Acetato de Butilo Normal, CH 3 COO(CH 2 ) 3 CH 3 116,16 [123-86-4]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
Cambio en la redaccio n: Acetato de Cadmio, C4H6CdO4 2H2O266,53 &[543-90-8] cidos. &1S (USP30)Cristales incoloros, de transparentes a traslu Fa cilmente soluble en agua; soluble en alcohol. Materia insoluble (Prueba para reactivos): no ma s de 1 mg, a partir de 20 g (0,005%). Cloruros (Prueba para reactivos)Un g presenta no ma s de 0,01 mg de Cl (0,001%). Sulfatos (Prueba para reactivos, Me todo II)Disolver 10 g en 100 mL de agua, agregar 1 mL de a cido clorh drico y ltrar: el residuo no pesa ma s de 1,2 mg ma s que el residuo obtenido en una prueba completa con un blanco (0,005%). Sustancias no precipitadas por sulfuro de hidro genoDisolver 2 g en una mezcla de 135 mL de agua y 15 mL de a cido sulfu rico 1 N, calentar a ebullicio n y pasar una corriente ra pida de sulfuro de hidro geno a trave s de la solucio n mientras se enfr a. Filtrar y agregar 0,25 mL de a cido sulfu rico a 75 mL del ltrado transparente, luego evaporar hasta sequedad e incinerar suavemente: el residuo no pesa ma s de 1 mg (0,1%).
Cambio en la redaccio n: Acetato Cobaltoso (Acetato de Cobalto), Co(C2H3O2)2 4H2O 249,08 &[71-48-7]&1S (USP30)Cristales rojos en forma de aguja. Soluble en agua y en alcohol. Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Acetato Cu prico, Cu(C2H3O2)2 H2O199,65 (USP30)Usar grado reactivo ACS.
&
[142-71-2]
&1S
4010
Especicaciones de Reactivos / Reactivos
Cambio en la redaccio n: Acetato de Calcio, Ca(C2H3O2)2 H2O176,18 &[62-54-4] nulos cristalinos de color blanco. Soluble &1S (USP30)Polvo o gra en aproximadamente 3 partes de agua, poco soluble en alcohol. Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Acetato de Etilo, CH3COOC2H588,11 &[141-78-6]&1S Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Acetato de Gadolinio (Gd III) Hidrato, (CH 3CO2)3Gd xH2O 334,38 &[100587-93-7]&1S (USP30)Polvo blanco cristalino higrosco pico. Irritante. Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: Acetato de Isobutilo, C6H12O2116,16 &[110-19-0]&1S (USP30) L quido incoloro y transparente. Poco soluble en agua. Miscible con alcohol. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con fase G2. Mantener la temperatura del inyector a 1308; mantener la temperatura de la columna a 308 y programarla para que aumente 108 por minuto hasta 1808 y se mantenga as durante 10 minutos. Mantener la temperatura del detector a 3008. El a rea del pico principal no es menos de 99% del a rea total. Peso espec co h841i: entre 0,863 y 0,868. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,3900 y 1,3920 a 208. Cambio en la redaccio n: Acetato de Magnesio, Mg(C2H3O2)2 4H2O214,45 &[142-72-3] (USP30)Usar grado reactivo ACS.
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Acetilacetona (2,4-Pentanodiona;&Diacetilmetano),&1S (USP30) C5H8O2100,12 &[123-54-6]&1S (USP30)L quido inamable transparente, incoloro a ligeramente amarillo. Soluble en agua; miscible con alcohol, con cloroformo, con acetona, con e ter y con a cido ace tico glacial. Valoracio nNo menos de 98% de C5H8O2, empleando un cromato grafo de gases adecuado equipado con un detector de ionizacio n a la llama y helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna de acero inoxidable de 3 mm 6 1,83 m rellena con fase G al 10% sobre soporte S1A; mantener las temperaturas del inyector y del detector a 2508 y 3108, respectivamente; y programar la temperatura de la columna para que aumente 88 por minuto, de 508 a 2208. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,4505 y 1,4525, a 208. Cambio en la redaccio n: Acetofenona &(Feniletanona; Fenil Metil Cetona),&1S (USP30) CH3COC6H5120,15 &[98-86-2]&1S (USP30)L quido. Poco soluble en agua, fa cilmente soluble en alcohol y en e ter. Intervalo de fusio n h741i: entre 198 y 208. ndice de refraccio I n h831i: aproximadamente 1,534 a 208. Peso espec co h841i : aproximadamente 1,03. Cambio en la redaccio n: do), & 1S ( USP30 ) Acetona & (Propanona; Dimetilformaldeh CH3COCH358,08 &[67-64-1]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. [NOTAPara determinaciones espectrofotome tricas UV, usar Acetona Adecuada para Uso en Espectrofotometr a UV de grado reactivo ACS.] Cambio en la redaccio n: Acetonitrilo (Cianuro de Metilo; &Cianometano),&1S (USP30) CH3CN41,05 &[75-05-8]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n:
&1S
Cambio en la redaccio n: Acetato de Metilo, C3H6O274,08 &[74-20-9]&1S (USP30) L quido incoloro. Soluble en agua. Miscible con alcohol y con e ter. Peso espec co h841i: aproximadamente 0,933. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,3615 y 1,3625, a 208. Intervalo de ebullicio n (Prueba para reactivos)No menos de 95% destila entre 578 y 588. Cambio en la redaccio n: Acetato de Plomo, Pb(C2H3O2)2 3H2O379,33 &1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Acetato Mercu rico, Hg(C 2 H 3 O 2 ) 2 318,68 (USP30)Usar grado reactivo ACS.
& &
p-Acetotoluidida, C9H11NO149,19 &[103-89-9]&1S (USP30) Polvo blanco a blanquecino. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf ah621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 2308; mantener la temperatura del detector a 3008; y mantener la temperatura de la columna a 1308, y programarla para que se eleve 108 por minuto hasta 2808. El a rea del pico de C9H11NO no es menos de 98,5% del a rea total. Intervalo de fusio n h741i: entre 1458 y 1518. Cambio en la redaccio n: cido Ace A tico Glacial, CH3COOH60,05 &[64-19-7]&1S Usar grado reactivo ACS.
(USP30)
[301-04-2]
[ 1600-27-7 ]
&1S
4011
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n:

& cido Acr c i do 2-Pro pe noi co; A cido (A A lico Vinilfo rmico),&1S (USP30) C3H4O272,06 &[79-10-7]&1S (USP30) L quido incoloro. Miscible con agua, con alcohol y con e ter. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621 i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama y emplear helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 1508; mantener la temperatura del detector a 3008; y mantener la temperatura de la columna a 508 y programarla para que aumente 108 por minuto hasta 2008. El a rea del pico de C3H4O2 no es menos de 99% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,4198 y 1,4238 a 208.
cido Arsenazo III, C22H18As2N4O14S2776,38 &[1668-00-4] A n. Estable al aire. Almacenar a temperatura (USP30)Polvo marro ambiente en un lugar seco. Temperatura de fusio n h741i: ma s de 3208.
&1S
Cambio en la redaccio n: cido Benzoico, C6H5COOH122,12 &[65-85-0]&1S (USP30) A Usar grado reactivo ACS. cido Benzoico de calidad adecuada [NOTASe puede obtener A para usar como esta ndar primario del Instituto de Normas y Tecnolog a del gobierno de Estados Unidos (National Institute of Standards and Technology, NIST), Ofce of Standard Reference Materials, www.nist.gov, como muestra de esta ndar N8 350]. Cambio en la redaccio n: cido 3-Benzoilbenzoico, C14H10O3226,23 &[579-18-0] A &1S (USP30)Polvo de color blanco a blanquecino. Valoracio nPreparar una mezcla de a cido triuoroace tico al 1% en agua y a cido triuoroace tico al 1% en acetonitrilo (55 : 45) para la fase mo vil. Inyectar aproximadamente 20 mL en un cromato grafo de l quidos adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de 230 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. El a rea del pico de C14H10O3 no es menos de 98,5% del a rea total. Cambio en la redaccio n: cido Benzoilfo cido Fenilgliox A rmico (A lico), C6H5COCO2H 150,14 &[611-73-4]&1S (USP30)Polvo. Soluble en metanol. Intervalo de fusio n h741i: entre 628 y 678. Cambio en la redaccio n: cido 4,4-Bis(4-amino-1-naftilazo)-2,2-estilbenodisulfo A nico, C34H26N6O6S2678,74 &[5463-64-9]&1S (USP30)Usar un grado adecuado. [NOTASe puede obtener un grado adecuado de TCI America, www.tciamerica.com.] Cambio en la redaccio n: cido Bis(2-etilhexil)fosfo A rico [Fosfato de Bis-(2-etilhexilo)], [CH3(CH2)3CH(C2H5)CH2]2HPO4322,42 &[298-07-7]&1S (USP30) L quido viscoso de color amarillo claro. Insoluble en agua; ndice de fa cilmente soluble en cloroformo y en acetato de etilo. I refraccio n: aproximadamente 1,443. Peso espec co: aproximadamente 0,997. Valoracio nDisolver aproximadamente 250 mg, pesados con exactitud, en 50 mL de dimetilformamida, agregar 3 gotas de una solucio n 1 en 100 de azul de timol en dimetilformamida y valorar con meto xido de sodio 0,1 N SV hasta un punto nal azul. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de meto xido de sodio 0,1 N equivale a 32,24 mg de (C8H17)2HPO4. Se encuentra entre 95% y 105%. SolubilidadUn volumen se disuelve en 9 volu menes de cloroformo y produce una solucio n transparente. Un volumen se disuelve en 9 volu menes de acetato de etilo y produce una solucio n transparente. ColorUna solucio n 1 en 100 en cloroformo presenta una absortividad de no ma s de 0,03 a 420 nm.
& cido Ad cido 1,4A pico (A cido Hexanodioico; A Butanodicarbox lico),& 1S (USP30) C6H10O4 146,14 & [124-04-9] &1S (USP30)Polvo cristalino, de incoloro a blanco. Poco soluble en agua y en ciclohexano; soluble en alcohol, en metanol y en acetona; pra cticamente insoluble en benceno y bencina de petro leo. Valoracio nPesar aproximadamente 0,3 g con exactitud y disolver en 50 mL de alcohol. Agregar 25 mL de agua, mezclar y valorar con hidro xido de sodio 0,5 N SV a un pH de 9,5. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de hidro xido de sodio 0,5 N equivale a 36,54 mg de C6H10O4. No se encuentra menos de 98%. Intervalo de fusio n h741i: entre 1518 y 1558, pero el intervalo entre el comienzo y el nal de la fusio n no excede de 28.
&
cido 4-Amino-2-clorobenzoico, C6H3Cl(NH2)(COOH)171,58 A [2457-76-3]&1S (USP30)Cristales blancos o polvo cristalino blanco. Intervalo de fusio n h741i: entre 2088 y 2128.
Cambio en la redaccio n: cido 4-Amino-3-hidroxi-1-naftalensulfo A nico, C10H9NO4S 239,25 &[116-63-2]&1S (USP30)Polvo de color pu rpura claro. Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: cido Aminoace A tico (Glicina), NH2CH2COOH75,07 & [56-40-6]&1S (USP30)Polvo blanco cristalino. Muy soluble en agua; poco soluble en alcohol. Contenido de nitro geno (Prueba para reactivos)Determinar por medio del me todo Kjeldahl, con una muestra de prueba secada previamente a 1058 durante 2 horas: se encuentra entre 18,4% y 18,8% de N, que corresponde a no menos de 98,5% de C2H5NO2. Materia insoluble (Prueba para reactivos): no ma s de 1 mg, a partir de 10 g (0,01%). Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): no ma s de 0,05%. Cloruros (Prueba para reactivos)Un g presenta no ma s de 0,1 mg de Cl (0,01%). Sulfatos (Prueba para reactivos, Me todo I )Dos g no presentan ma s de 0,1 mg de SO4 (0,005%). Metales pesados (Prueba para reactivos): 0,001%, usando 5 mL de a cido clorh drico 1 N para acidicar la solucio n de la muestra de prueba. Hierro h241iUn g, disuelto en 47 mL de agua que contenga 3 mL de a cido clorh drico, no presenta ma s de 0,01 mg de Fe (0,001%).
4012
Cambio en la redaccio n: cido Bo A rico, H3BO361,83 grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: cido But A rico, C4H8O288,11 &[107-92-6]&1S (USP30)L quido transparente, de incoloro a amarillo tenue. Miscible con agua y con metanol. Valoracio nPesar con exactitud aproximadamente 500 mg, transferir a un recipiente adecuado, agregar 30 mL de agua y mezclar. Agregar 40 mL de agua y mezclar. Agregar fenolftale na SR y valorar con hidro xido de sodio 0,1 N SV. Cada mL de hidro xido de sodio 0,1 N equivale a 8,81 mg de C4H8O2: no se encuentra menos de 99,0% de C4H8O2. ndice de refraccio I n h831i: aproximadamente 1,398 a 208. Cambio en la redaccio n: cido dl-10-Canforsulfo A nico, C10H16O4S232,30 [35963-20-3]&1S (USP30)Polvo o cristales de color blanco a blanquecino. Es o pticamente inactivo. Intervalo de fusio n h741i: se descompone aproximadamente a 1998.
& &
Cambio en la redaccio n: [10043-35-3]&1S

(USP30)Usar
cido Clorh A drico, HCl36,46 grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n:
&
[7647-01-0]&1S
(USP30)Usar
cido Clorh A drico Diluido (10 por ciento) [7647-01-0]&1S (USP30)Preparar mezclando 226 mL de a cido clorh drico con suciente agua para obtener 1000 mL.
&
Cambio en la redaccio n: cido 4-Clorobenzoico, ClC6H4COOH156,57 &[74-11-3] A lido cristalino blanco. &1S (USP30)So Valoracio nDisolver aproximadamente 700 mg, pesados con exactitud, en una mezcla de 100 mL de alcohol caliente y 50 mL de agua. Valorar con hidro xido de sodio 0,5 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de hidro xido de sodio 0,5 N equivale a 78,28 mg de ClC6H4COOH. No se encuentra menos de 98%. SolubilidadUn g disuelto en 25 mL de hidro xido de sodio 0,5 N produce una solucio n completa y transparente. Cambio en la redaccio n:
Cambio en la redaccio n: cido Ca cido Decanoico), C 1 0 H 2 0 O 2 172,26 A prico (A & [334-48-5]&1S (USP30)Fundido solidicado o fragmentos de color blanco. Soluble en alcohol, en cloroformo y en e ter; pra cticamente insoluble en agua. Valoracio nInyectar una muestra apropiada disuelta en acetona en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama y una columna capilar de 0,53 mm 6 30 m recubierta con una capa de fase G25. El gas transportador es helio, que uye a una velocidad de 9 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Equilibrar la temperatura de la columna inicialmente a 1508, despue s aumentar la temperatura a una velocidad de 108 por minuto hasta 2508. Mantener la temperatura del inyector a 2408 y la del detector a 2658. El a rea del pico de a cido ca prico no es menos de 98,5% del a rea total. Intervalo de fusio n h741i: entre 308 y 338. Cambio en la redaccio n: cido Cianoace A tico, C3H3NO285,06 [372-09-8]&1S (USP30) So lido cristalino blanco a amarillo claro. Muy soluble en agua. Valoracio nDisolver aproximadamente 300 mg, pesados con exactitud, en 25 mL de agua y 25 mL de alcohol. Valorar con hidro xido de sodio 0,1 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de hidro xido de sodio 0,1 N equivale a 85,06 mg de C3H3NO2. No se encuentra menos de 99%.
&
cido m-Clorobenzoico (A cido 3-Clorobenzoico), C7H5ClO2 A 156,57 &[535-80-8]&1S (USP30)Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: cido Cloroge A nico, C16H18O9354,31 &[327-97-9]&1S (USP30) Polvo de color blanco a blanquecino. Usar un grado adecuado. Valoracio nCuando se analiza mediante cromatograf a en capa delgada (ver Cromatograf a h621i) empleando placas recubiertas con mezcla de gel de s lice para cromatograf a y una fase mo vil constituida por una mezcla de alcohol but lico, agua y a cido ace tico (60 : 25 : 15) y se examina bajo luz UV de longitud de onda corta, se observa una sola mancha, con trazas de impurezas. Cambio en la redaccio n: cido 2-Cloronicot A nico, C6H4ClNO2157,55 &[2942-59-8] (USP30)Polvo blanquecino. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 2808; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 1808 y programarla para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2808. El a rea del pico de C6H4ClNO2 no es menos de 98% del a rea total.
&1S
Cambio en la redaccio n: cido C A trico Anhidro&[77-92-9]&1S C trico Anhidro (monograf a USP).

(USP30 )Usar
cido A
Cambio en la redaccio n: cido Cloroplat A nico, H2PtCl6 6H2O517,90 &[18497-13-7] nico Hexahidrato de grado (USP30)Usar Acido Cloroplat reactivo ACS.
& 1S
4013
Cambio en la redaccio n: cido 5-Clorosalic A lico, C 7 H 5 ClO 3 172,57 & [ 321-14-2 ] Polvo de color blanco a blanquecino. &1S (USP30) Valoracio nCuando se analiza mediante cromatograf a en capa delgada (ver Cromatograf a h621i) usando placas recubiertas con una mezcla de gel de s lice para cromatograf a y una fase mo vil constituida por una mezcla de ciclohexano, cloroformo y a cido ace tico (14 : 4 : 2) y se examina visualmente y bajo luz UV de longitud de onda larga o roc o de yodo, se observa una sola mancha. Intervalo de fusio n h741i: entre 1728 y 1788. Cambio en la redaccio n: cido Cromotro cido 4,5-dihidroxi-2,7A pico (A naftalenodisulfo nico), C10 H 8 O 8 S 2 2H 2 O 356,33 & [ 148-25-4 ] &1S (USP30)Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: cido 2,6-Diclorofenilace A tico, C8H6Cl2O2205,04 &[6575-24-2] Polvo blanco. &1S (USP30) Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de fase G2 de 1 mm de espesor; mantener la temperatura del inyector a 2508; mantener la temperatura del detector a 3008; y mantener la temperatura de la columna a 1508 y programarla para que se eleve 108 por minuto hasta 2808. El a rea del pico de C8H6Cl2O2 no es menos de 97% del a rea total. Cambio en la redaccio n: cido 2,5-Dihidroxibenzoico, C7H6O4154,12 &[303-07-1] A cilmente soluble en alcohol; (USP30)Polvo blanquecino. Fa produce una solucio n transparente de color amarillo muy pa lido. Valoracio nDisolver aproximadamente 75 mg, pesados con exactitud, en 30 mL de metanol. Agregar lentamente 40 mL de agua. Valorar con hidro xido de sodio 0,1 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de hidro xido de sodio 0,1 N equivale a 15,41 mg de C7H6O4. No se encuentra menos de 99%. Intervalo de fusio n h741i: aproximadamente 2078, con descomposicio n.
&1S
Cambio en la redaccio n: cido Fo A rmico, HCOOH46,03 &[64-18-6]&1S (USP30)Usar cido Fo A rmico al 88 por ciento, de grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: cido Fo A rmico al 96 por ciento HCOOH46,03 &[64-18-6] cido Fo Usar A rmico al 96 por ciento, de grado reactivo &1S (USP30) ACS. Cambio en la redaccio n: cido Glico A lico, C2H4O376,05 &[79-14-1]&1S (USP30)Polvo o terrones cristalinos blancos. Valoracio nInyectar un volumen apropiado (silanizado) en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2. Mantener la temperatura del inyector a 2508, la temperatura del detector a 3008, y la temperatura de la columna a 1008, programada para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2508. El a rea del pico de C2H4O3 no es menos de 98,5% del a rea total. Cambio en la redaccio n: cido D-Gluco nico al 50 por ciento en Agua, C6H12O7196,16 A [526-95-4]&1S (USP30)L quido amarillo pa lido. Valoracio nDiluir aproximadamente 200 mg de la solucio n, pesados con exactitud, en 30 mL de agua. Valorar con hidro xido de sodio 0,1 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de hidro xido de sodio 0,1 N equivale a 19,62 mg de C6H12O7. No se encuentra menos de 49,0%. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,4160 y 1,4180 a 208. Rotacio n espec ca h781i: entre +9,98 y +11,98, determinada sobre la solucio n tal cual a 208.
&
Cambio en la redaccio n: cido p-Hidroxibenzoico, C7H6O3138,12 &[99-96-7]&1S (USP30) A Cristales blancos. Valoracio nTransferir aproximadamente 700 mg, pesados con exactitud, a un recipiente adecuado y disolver en 50 mL de acetona. Agregar 100 mL de agua, mezclar y valorar con hidro xido de sodio 0,5 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de hidro xido de sodio 0,5 N equivale a 69,06 mg de C7H6O3: no se encuentra menos de 97%. Intervalo de fusio n h741i: en un intervalo de 28 que incluye 2168. Cambio en la redaccio n: cido 4-Hidroxiisofta A lico, C 8 H 6 O 4 182,13 & [ 636-46-4 ] Agujas ramicadas incoloras. Fa cilmente soluble en &1S (USP30) alcohol y en e ter. Intervalo de fusio n h741i: entre 3088 y 3108, con descomposicio n entre 3148 y 3158.
Cambio en la redaccio n: cido Etanosulfo A nico, C 2 H 5 SO 3 H 110,13 & [ 594-45-6 ] L quido entre incoloro y amarillo claro. Soluble en agua. &1S (USP30) Valoracio nPesar con exactitud aproximadamente 300 mg, disolver en 30 mL de agua, agregar fenolftale na SR y valorar con hidro xido de sodio 0,1 N SV. Cada mL de hidro xido de sodio 0,1 N equivale a 11,013 mg de C2H5SO3H: se encuentra entre 94,0% y 106,0%. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,432 y 1,436 a 208. Cambio en la redaccio n: cido Fluorh A drico, HF20,01&[7664-39-3]&1S grado reactivo ACS.
(USP30)Usar
4014
Cambio en la redaccio n: cido Hipofosforoso al 50 por ciento (A cido Hipofosforoso), A quido incoloro a ligeraHPH2O266,00 &[6303-21-5]&1S (USP30)L mente amarillo. Miscible con agua y con alcohol. Valoracio nPesar con exactitud aproximadamente 4 mL, diluir con 25 mL de agua, agregar rojo de metilo SR y valorar con hidro xido de sodio 1 N SV: cada mL de hidro xido de sodio 1 N equivale a 66,00 mg de HPH2O2. No se encuentra menos de 48%. ClorurosAgregar 0,2 mL a una mezcla de 10 mL de nitrato de plata SR y 5 mL de a cido n trico, y calentar hasta que dejen de producirse humos marrones: cualquier residuo insoluble blanco remanente es inapreciable. FosfatosDiluir 1 mL con agua hasta 50 mL, alcalinizar con amon aco SR, ltrar si se forma un precipitado y agregar 5 mL de mezcla de magnesia SR al ltrado: no se forma ma s que un precipitado leve dentro de los 5 minutos siguientes. Sulfatos (Prueba para reactivos, Me todo I)Diluir 1 mL con agua hasta 50 mL: 20 mL de la solucio n no presentan ma s de 0,2 mg de SO4. Cambio en la redaccio n: cido Isonicot A nico, C6H5NO2123,11 Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: cido Litoco A lico, C24H40O3376,57 &[434-13-9]&1S (USP30) Polvo blanco. Valoracio nCuando se analiza por cromatograf a en capa delgada, usando placas recubiertas con mezcla de gel de s lice para cromatograf a y una fase mo vil constituida por una mezcla de tolueno, 1,4-dioxano y a cido ace tico (15,2 : 4,2 : 0,6), rociando con una mezcla de a cido sulfu rico y metanol (1 : 1), calentando a 1108 durante 20 minutos y se examina visualmente y bajo una luz UV de longitud de onda larga, presenta una u nica mancha. Intervalo de fusio n h741i : entre 1848 y 1868. Cambio en la redaccio n: cido Maleico, C4H4O4116,07 [110-16-7]&1S (USP30)Polvo A cristalino blanco. Soluble en 1,5 partes de agua, en 2 partes de alcohol y en 12 partes de e ter. Valoracio nDisolver aproximadamente 2 g, pesados con exactitud, en 100 mL de agua y valorar con hidro xido de sodio 1 N SV, usando fenolftale na SR como indicador. Cada mL de hidro xido de sodio 1 N equivale a 58,04 mg de C4H4O4: no se encuentra menos de 99% de C4H4O4, calculado con respecto a la sustancia seca. Pe rdida por secadoSecar al vac o sobre pento xido de fo sforo durante 2 horas: no pierde ma s de 1,5% de su peso. Residuo de incineracio n h281i: no ma s de 0,1%.
& &
Cambio en la redaccio n: cido Metanosulfo A nico, CH4O3S96,11 &[75-75-2]&1S Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: cido 5,5 -Metilendisalic cido 3,3 -Metilen-bis [ 6A lico ( A hidroxibenzoico]), C15H12O6288,25 &[122-25-8]&1S (USP30)Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: cido 5-Metoxi-2-metil-3-indolace A tico, C12H13NO3219,24 & [2882-15-7]&1S (USP30)Polvo blanquecino. Valoracio nTransferir aproximadamente 110 mg, pesados con exactitud, a un vaso de precipitados de 100 mL. Agregar 30 mL de metanol y disolver mezclando. Agregar 40 mL de agua y mezclar. Valorar con hidro xido de sodio 0,1 N SV determinando el punto nal potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de hidro xido de sodio 0,1 N equivale a 21,92 mg de C12H13NO3. No se encuentra menos de 98%. Intervalo de fusio n h741i: entre 1618 y 1688, pero el intervalo entre el comienzo y el nal de la fusio n no excede de 38. Cambio en la redaccio n:
&
(USP30)
[52-22-1]&1S
(USP30)
cido Mol cido Mol A bdico (A bdico al 85 por ciento ) [7782-91-4]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
Cambio en la redaccio n: cido Monocloroace cido Cloroace cido A tico (A tico, A Cloroetanoico), CH2ClCOOH94,50 &[79-11-8]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: cido 2-Naftalenosulfo A nico, C 1 0 H 8 O 3 S H 2 O 226,25 [120-18-3]&1S (USP30)Cristales de color blanquecino a gris claro. Soluble en agua. Valoracio nDisolver aproximadamente 1 g, pesado con exactitud, en 100 mL de agua, agregar fenolftale na SR y valorar con hidro xido de sodio 0,1 N SV. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de hidro xido de sodio 0,1 N equivale a 22,63 mg de C10H8O3S H2O. No se encuentra menos de 98,0%. Intervalo de fusio n h741i : entre 1228 y 1268, pero el intervalo entre el comienzo y el nal de la fusio n no excede de 28.
&
Cambio en la redaccio n: cido Metacr A lico&[79-41-4]&1S cuado. Cambio en la redaccio n: cido Metafosfo cido de Sodio V A rico (Metafosfato A treo), HPO379,98 &[37267-86-0]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
(USP30)Usar
Cambio en la redaccio n: un grado ade cido N A trico, HNO363,01 grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: cido N A trico Diluido (HNO 3 al 10 por ciento) [7697-37-2]&1S (USP30)Diluir 105 mL de a cido n trico con agua a 1000 mL.
& &
[7697-37-2]&1S
(USP30)Usar
4015
Cambio en la redaccio n: cido N cido N A trico Fumante (A trico al 90 por ciento), HNO3 cido N 63,01 &[7697-37-2]&1S (USP30)Usar A trico al 90 por ciento de grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: cido Nitrilotriace A tico, N(CH2COOH)3191,14 (USP30)Usar grado reactivo ACS.
&
Cambio en la redaccio n: Alcohol terc-Am lico, C5H12O88,15 &[75-85-4]&1S (USP30) L quido transparente, incoloro, inamable y vola til. Peso espec co h841i: aproximadamente 0,81. Intervalo de ebullicio n (Prueba para reactivos): no menos de 95%, entre 1008 y 1038. Residuo de evaporacio nEvaporar 50 mL (40 g) en un ban o de vapor y secar a 1058 durante 1 hora: el residuo no pesa ma s de 1,6 mg (0,004%). cidos y e A steresDiluir 20 mL con 20 mL de alcohol, agregar 5,0 mL de hidro xido de sodio 0,1 N SV y calentar a reujo moderadamente durante 10 minutos. Enfriar, agregar 2 gotas de fenolftale na SR y valorar el exceso de hidro xido de sodio con a cido clorh drico 0,1 N SV: no se consume ma s de 0,75 mL del hidro xido de sodio 0,10 N, realizando correcciones por la cantidad consumida en un blanco (0,06% como acetato de amilo). Aldeh dosAgitar 5 mL con 5 mL de solucio n de hidro xido de potasio (30 en 100) en una probeta con tapo n de vidrio durante 5 minutos y dejar que las capas se separen: no aparece color en ninguna capa. Cambio en la redaccio n: Alcohol But lico (1-Butanol; Alcohol But lico Normal), CH3(CH2)2CH2OH74,12 &[71-36-3]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Alcohol But lico Secundario (2-Butanol), CH3CH2CH(OH)CH374,12 &[78-92-2]&1S (USP30)Usar Alcohol Isobut lico de grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Alcohol But lico Terciario, (CH3)3COH74,12 &[75-65-0] lico de grado reactivo ACS. (USP30)Usar Alcohol terc-But
[139-13-9]
&1S
Cambio en la redaccio n: cido Nonanoico, C9H18O2158,24 &[112-05-0]&1S (USP30) A L quido transparente de incoloro a amarillo pa lido. Miscible con agua y con metanol. Valoracio nPesar con exactitud aproximadamente 500 mg, transferir a un recipiente adecuado, agregar 30 mL de agua y mezclar. Agregar 40 mL de agua y mezclar. Agregar fenolftale na SR y valorar con hidro xido de sodio 0,1 N SV. Cada mL de hidro xido de sodio 0,1 N equivale a 15,82 mg de C9H18O2: no se encuentra menos de 96,0% de C9H18O2. ndice de refraccio I n h831i: aproximadamente 1,432 a 208. Cambio en la redaccio n: cido Quenodesoxico A lico, C24H40O4392,57 &[474-25-9] (USP30)Polvo blanco a blanquecino. Valoracio nSe observa una u nica mancha cuando se analiza mediante cromatograf a en capa delgada, con placas recubiertas con mezcla C18 para cromatograf a en fase reversa, una fase mo vil constituida por a cido ace tico 1 N en metanol y a cido ace tico 1 N (19 : 1) y rociadas con una mezcla de a cido sulfu rico y metanol (1 : 1), calentadas a 1108 durante 20 minutos, y examinadas visualmente y bajo luz UV de longitud de onda larga. Intervalo de fusio n h741i: entre 1658 y 1688. Cambio en la redaccio n: cido Yodh A drico, HI127,91 &[10034-85-2]&1S (USP30)Utilizar grado reactivo ACS (que contenga no menos de 47,0% de HI). [NOTAPara determinacio n de grupos metoxilo (ver Determinacio n de Grupos Metoxilo h431i), utilizar a cido yodh drico al 55% de grado reactivo ACS. Utilizar tambie n este grado para determinaciones de grupos alcoxilo en las valoraciones de las monograf as individuales.] Cambio en la redaccio n: cido Yo A dico, HIO3175,91 grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Acrilato de Etilo&[140-88-5]&1S cuado. Cambio en la redaccio n: Alcohol Am lico ( Alcohol Isoam lico ), C 5 H 11 OH 88,15 [598-75-4]&1S (USP30)Usar Alcohol Isopent lico de grado reactivo ACS.
& &
&1S
&1S
Cambio en la redaccio n: Alcohol 2-Hidroxibenc lico, C 7 H 8 O 2 124,14 & [ 90-01-7 ] (USP30)Escamas blanquecinas. Muy soluble en alcohol, en cloroformo y en e ter; soluble en 15 partes de agua y en benceno. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf ah621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 2508; mantener la temperatura del detector a 3008; y mantener la temperatura de la columna a 1508 y programarla para que se eleve 108 por minuto hasta 2808. El a rea del pico de C7H8O2 no es menos de 99% del a rea total. Intervalo de fusio n h741i: entre 838 y 858.
&1S
[7782-68-5]&1S
(USP30)Usar
(USP30)Usar
un grado ade-
Cambio en la redaccio n: Alcohol Isobut lico (2-Metil-1-propanol), (CH3)2CHCH2OH 74,12 &[78-83-1]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n:
&
Alcohol Isoprop lico ( 2-Propanol ), (CH 3 ) 2 CHOH 60,10 [67-63-0]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
4016
[NOTAPara valoraciones y pruebas de espectrofotometr a UV, usar Alcohol Isoprop lico grado reactivo ACS Adecuado para Uso en Espectrofotometr a UV]. Cambio en la redaccio n: Alcohol Isoprop lico Deshidratado&[67-63-0]&1S (USP30) Usar Alcohol Isoprop lico previamente secado por medio de agitacio n con un tamiz molecular adecuado capaz de adsorber agua, y ltrado. Cambio en la redaccio n: Aleacio n de Devarda (Metal de Devarda) [8049-11-4] (USP30)Polvo gris compuesto por 50 partes de cobre, 45 partes de aluminio y 5 partes de cinc.
&
Cambio en la redaccio n: 4-Amino-6-cloro-1,3-bencenodisulfonamida, C6H8ClN3O4S2 285,73 &[121-30-2]&1S (USP30)Polvo blanco. Insoluble en agua y en cloroformo; soluble en amon aco SR. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): no ma s de 2 mg, usando 2 g (0,1%). AbsorbanciaUna solucio n 1 en 200 000 en metanol presenta ma ximos de absorbancia aproximadamente a 223 nm, 265 nm y 312 nm. Su absortividad (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i) a 265 nm es aproximadamente 64,0. Cambio en la redaccio n: 2 - A m i n o - 5 - c l o ro b e nz o f e n o n a , C 1 3 H 1 0 C l N O 2 3 1 , 6 8 [719-59-5]&1S (USP30)Usar ER 2-Amino-5-clorobenzofenona USP.
&
&1S
Cambio en la redaccio n: Alumbre (Alumbre de Amonio, Sulfato de Aluminio y Amonio), AlNH4(SO4)2 12H2O453,33 &[7784-26-1]&1S (USP30)Cristales incoloros grandes o fragmentos cristalinos o polvo blanco. Soluble en 7 partes de agua y en aproximadamente 0,5 partes de agua en ebullicio n; insoluble en alcohol. Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: xido de Aluminio), [1344-28-1]&1S Alu mina Activada &(O Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: xido de Aluminio; Alu Alu mina Anhidra (O mina preparada especialmente para ana lisis cromatogra co) &[1344-28-1]&1S (USP30) Polvo blanco o pra cticamente blanco de malla 80 a 200. No se ablanda, hincha ni descompone en agua. No esta lavada con a cido. Almacenar en envases bien cerrados. Cambio en la redaccio n: Aluminio, AlPeso Ato mico 26,98154 &[7429-90-5]&1S (USP30) Usar grado reactivo ACS, que tambie n cumple con los requisitos de la siguiente prueba. Arse nicoColocar 750 mg en el frasco generador (ver Arse nico en Reactivos en Pruebas Generales para Reactivos), omitiendo el trozo de algodo n. Agregar 10 mL de agua y 10 mL de solucio n de hidro xido de sodio (3 en 10) y dejar que la reaccio n continu e durante 30 minutos: no se produce ma s que una mancha apenas perceptible en el papel de prueba de bromuro mercu rico. Cambio en la redaccio n: cido Aur Alumino n (Sal [tri] Amo nica del A n Tricarbox lico), C22H23N3O9473,43 &[569-58-4]&1S (USP30)Polvo v treo marro n amarillento. Fa cilmente soluble en agua. Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Amaranto, C20H11N2Na3O10S3604,48 &[915-67-3]&1S (USP30) Polvo no marro n intenso o marro n rojizo oscuro. Usar un grado adecuado.
(USP30)
Cambio en la redaccio n: 3-Amino-1-propanol, H 2 N(CH 2 ) 3 OH 75,11 & [ 156-87-6 ] quido. (USP30)L Intervalo de ebullicio n (Prueba para reactivos): entre 1848 y 1888. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,461 y 1,463 a 208.
&1S
Cambio en la redaccio n: 4-Aminoantipirina, C11H13N3O203,24 &[83-07-8]&1S (USP30) Polvo cristalino de color amarillo claro. Una porcio n de 500 mg se disuelve completamente en 30 mL de agua y produce una solucio n transparente. Intervalo de fusio n h741i: entre 1088 y 1108. Cambio en la redaccio n: 4-Aminobenzoato de Metilo, C8H9NO2151,16 &[619-45-4] &1S (USP30)Polvo blanquecino. Valoracio nDisolver aproximadamente 38 mg, pesados con exactitud, en 50 mL de a cido ace tico glacial. Valorar con a cido perclo rico 0,1 N SV determinando el punto nal potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de a cido perclo rico 0,1 N equivale a 15,12 mg de C8H9NO2. No se encuentra menos de 99,0%. Intervalo de fusio n h741i: entre 1088 y 1108. Cambio en la redaccio n: 1-(2-Aminoetil)piperazina, C 6 H 15 N 3 129,20 & [ 140-31-8 ] quido viscoso incoloro. (USP30)L Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con fase G2. Mantener la temperatura del inyector a 2808; mantener la temperatura de la columna a 1808 y programarla para que aumente 108 por minuto hasta 2808 y se mantenga as durante 10 minutos. Mantener la temperatura del detector a 3008. El a rea del pico principal no es menos de 97% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,4978 y 1,5010, a 208.
&1S
4017
Cambio en la redaccio n: m -Aminofenol & (3-Amino-1-Hidroxibenceno), & 1 S ( U S P 3 0 ) C6H7NO109,13 &[591-27-5]&1S (USP30)Escamas de color crema a amarillo pa lido. Moderadamente soluble en agua fr a; fa cilmente soluble en agua caliente, en alcohol y en e ter. Valoracio nDisolver aproximadamente 1,5 g, pesados con exactitud, en aproximadamente 400 mL de agua en un matraz volume trico de 500 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir 25,0 mL de esta solucio n a un matraz para yodo, agregar 50,0 mL de bromo 0,1 N SV, diluir con 50 mL de agua, agregar 5 mL de a cido clorh drico y tapar inmediatamente el matraz. Agitar durante 1 minuto, dejar en reposo durante 2 minutos y agregar 5 mL de yoduro de potasio SR a trave s del tapo n ligeramente abierto. Agitar bien, dejar en reposo durante 5 minutos, quitar el tapo n, enjuagar el tapo n y el cuello del matraz con 20 mL de agua y agregar el enjuague al matraz. Valorar el yodo liberado con tiosulfato de sodio 0,1 N SV, agregando 3 mL de almido n SR cerca del punto nal. A partir del volumen de tiosulfato de sodio 0,1 N SV usado, calcular el volumen, en mL, de bromo 0,1 N consumido por la muestra de prueba. Cada mL de bromo 0,1 N equivale a 1,819 mg de C6H7NO: no se encuentra menos de 99,5%. Intervalo de fusio n h741i: entre 1218 y 1238. Pe rdida por secado h731iSecar sobre cloruro de calcio durante 4 horas: la pe rdida en peso es inapreciable. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): inapreciable, usando 2 g. Cambio en la redaccio n: p-Aminofenol&(p-Hidroxianilina),&1S (USP30) C6H7NO109,13 [123-30-8]&1S (USP30)Polvo cristalino, no y amarillento. Poco soluble en agua y en alcohol. Intervalo de fusio n h741i: entre 1878 y 1898.
&
Cambio en la redaccio n: Anisol, CH3OC6H5108,14 &[100-66-3]&1S (USP30)L quido incoloro. Valoracio nInyectar una muestra apropiada (aproximadamente 0,5 mL) en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama; el gas transportador es nitro geno. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 30 m recubierta con fase G3; mantener la temperatura del inyector y del detector a 1408 y 3008, respectivamente; mantener la temperatura de la columna a 708 y programarla para que aumente 108 por minuto hasta 1708. El a rea del pico de anisol no es menos de 99% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: 1,5160 a 208. Cambio en la redaccio n: Antraceno, C14H10178,23 &[120-12-7]&1S (USP30)Cristales o plaquetas blancas a blanquecinas. Se oscurece al exponerlo a la luz solar. Insoluble en agua; moderadamente soluble en alcohol, en benceno y en cloroformo. Intervalo de fusio n h741i: entre 2158 y 2188. Cambio en la redaccio n: Antrona, C14H10O194,23 reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Aprobarbital, C10H14N2O3210,23 &[77-02-1]&1S (USP30)Polvo no blanco cristalino. Poco soluble en agua fr a; soluble en alcohol, cloroformo y e ter. Valoracio nDisolver aproximadamente 200 mg, previamente secados a 1058 durante 2 horas y pesados con exactitud, en 20 mL de dimetilformamida en un matraz Erlenmeyer de 100 mL. Agregar 4 gotas de solucio n azul de timol (1 en 200 en metanol) y valorar con meto xido de litio 0,1 N utilizando una bureta de 10 mL, un mezclador magne tico y cubriendo el matraz para proteger contra el dio xido de carbono ambiental. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de meto xido de litio 0,1 N equivale a 21,02 mg de C10H14N2O3. Se encuentra entre 98,5% y 101,0% de C10H14N2O3. Intervalo de fusio n h741i: entre 1408 y 1438. Cambio en la redaccio n: ster met Araquidato de Metilo & (E lico del a cido eicosanoico),&1S (USP30) C21H42O2326,56 &[1120-28-1]&1S (USP30) Escamas blanquecinas. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de conductividad te rmica y usar helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: usar una columna de vidrio de 2,0 mm 6 1,8 m rellena con fase G2 al 5% sobre soporte S1A; mantener la temperatura del inyector a 3008 y mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 2308 y programarla para que aumente 38 por minuto hasta 2808. El a rea del pico de C2H42O2 no es menos de 99% del a rea total. Intervalo de fusio n h741i: entre 468 y 518.
&
[90-44-8]&1S
(USP30)Usar
grado
Cambio en la redaccio n: N -Aminohexametilenimina ( N - Aminohomopiperidina , 1 Aminohomopiperidina), C6H14N2114,19 &[5906-35-4]&1S (USP30) L quido incoloro. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con fase G2. Mantener la temperatura del inyector a 1808; mantener la temperatura de la columna a 808 y programarla para que aumente 108 por minuto hasta 2308 y se mantenga a 2308 durante 5 minutos. Mantener la temperatura del detector a 3008. El a rea del pico principal no es menos de 95% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,4840 y 1,4860 a 208. Cambio en la redaccio n: xido Ace xido Acet Anh drido Ace tico &(O tico; O lico),&1S (USP30) (CH3CO)2O102,09 &[108-24-7]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Anilina, C6H5NH293,13 reactivo ACS.
&
[62-53-3]&1S
(USP30)Usar
grado
4018
Cambio en la redaccio n: cido L-2-Aminosuccina L-Asparagina (A mico), COOHCH(NH2)CH2CONH2 H2O150,13 &[70-47-3]&1S (USP30) Cristales incoloros. Un g se disuelve en 50 mL de agua; soluble en a cidos y en a lcalis; insoluble en alcohol y en e ter. Las soluciones neutras o alcalinas son levo giras; las soluciones a cidas son dextro giras. Rotacio n espec ca h781i: entre +318 y +338, determinado en una solucio n en a cido clorh drico diluido que contenga el equivalente a 5 g (con respecto a la sustancia anhidra, segu n se determina al secar a 1058 durante 5 horas) por cada 100 mL. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): no ma s de 0,1%. Cloruros (Prueba para reactivos)Un g presenta no ma s de 0,03 mg de Cl (0,003%). Sulfatos (Prueba para reactivos, Me todo I)Un g presenta no ma s de 0,05 mg de SO4 (0,005%). Metales pesados (Prueba para reactivos): 0,002%. Contenido de nitro geno, Me todo II h461i : se encuentra entre 18,4% y 18,8% de N. Cambio en la redaccio n:
&
Azul Brillante Coomassie R-250, [6104-58-1]&1S (USP30)Polvo marro n.
C45H44N3O7S2Na825,97
Absortividad molar h851iSu absortividad molar en metanol, a 252 nm, no es menor de 50 000. Prueba de aptitud N ESTA NDARDisolver en alcohol una cantidad PREPARACIO adecuada de ER Hidrocortisona USP, previamente secada a 1058 durante 3 horas y pesada con exactitud, y preparar por diluciones sucesivas una solucio n que contenga aproximadamente 10 mg por mL. PROCEDIMIENTOPipetear porciones de 10, 15 y 20 mL de la Preparacio n Esta ndar y transferir a matraces Erlenmeyer separados, de 50 mL, con tapones de vidrio. Agregar 10 mL y 5 mL de alcohol, respectivamente, a los matraces que contienen las porciones de 10 y 15 mL de la Preparacio n Esta ndar, y mezclar por rotacio n moderada. A cada uno de los matraces y a un cuarto matraz que contenga 20 mL de alcohol, agregar 2,0 mL de una solucio n preparada mediante la disolucio n de 50 mg de azul de tetrazolio en 10 mL de alcohol, mezclar, y luego agregar 2,0 mL de una solucio n preparada mediante la dilucio n de 1 mL de hidro xido de tetrametilamonio SR con alcohol hasta 10 mL. Mezclar, dejar los matraces en reposo en la oscuridad durante 90 minutos y determinar las absorbancias de las tres soluciones del esta ndar de esteroide a 525 nm, con un espectrofoto metro adecuado, usando la solucio n del cuarto matraz como blanco. Gracar las absorbancias sobre la abcisa y la cantidad de hidrocortisona sobre la ordenada de un papel de coordenadas aritme ticas y trazar la curva de mejor ajuste: la absorbancia de cada solucio n es proporcional a la concentracio n y la absorbancia de la solucio n que contiene 200 mg de hidrocortisona no es menor de 0,50. Cambio en la redaccio n:
Cambio en la redaccio n: Azul de Anilina (Azul de Anilina Biolo gico Certicado) [8004-91-9]&1S (USP30)Colorante soluble en agua constituido por una mezcla de trisulfonatos de trifenilpararosanilina y de difenilrosanilina.
&
Cambio en la redaccio n: cido 1-(a Azul de Hidroxinaftol (Sal Diso dica del A cido-2naftolazo-3,6-disulfo nico)-2-naftol-4-sulfo nico), C20H12N2O11S3Na2598,50 &[165660-27-5]&1S (USP30)Depositado sobre cristales de cloruro de sodio en una concentracio n de aproximadamente 1%. Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Azul de Metileno, C16H18ClN3S 3H2O373,90 &[61-73-4] &1S (USP30)Polvo cristalino o cristales color verde oscuro con un brillo similar al bronce. Un g se disuelve en aproximadamente 25 mL de agua y en aproximadamente 65 mL de alcohol. Soluble en cloroformo. Usar un grado adecuado con un contenido de colorante no menor de 85%. Cambio en la redaccio n: Azul de Tetrazolio (Dicloruro 3,3-(3,3-Dimetoxi[1,1-bifenil]4,4-diil)bis [2,5-difenil-2H-tetrazolio]), C40H32Cl2N8O2 727,64 & [1871-22-3]&1S (USP30)Cristales de color amarillo limo n. Poco soluble en agua; fa cilmente soluble en cloroformo y en metanol; insoluble en acetona y en e ter. Solubilidad en metanolDisolver 1 g en 100 mL de metanol: se disuelve completamente y la solucio n es transparente. ColorTransferir una porcio n de la solucio n en metanol obtenida en la prueba anterior a una celda de 1 cm y determinar su absorbancia a 525 nm, empleando agua como blanco: la absorbancia no es mayor de 0,20.
Behenato de Metilo, C23H46O2354,61 &[929-77-1]&1S (USP30) Polvo blanco. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de conductividad te rmica; utilizar helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna de vidrio de 2,0 mm 6 1,8 m rellena con fase G3 al 5% sobre soporte S1A; mantener la temperatura del inyector a 3008, mantener la temperatura del detector a 3008, la temperatura inicial del horno es 2208, la cual se mantiene durante 2 minutos, y luego programar para que se eleve 38 por minuto hasta alcanzar una temperatura nal de 2708, la cual se mantiene durante 10 minutos. El a rea del pico de C23H46O2 no es menos de 98% del a rea total. Intervalo de fusio n h741i: entre 548 y 568. Cambio en la redaccio n: Benceno, C6H678,11 tivo ACS.
&
[71-43-2]&1S
(USP30)Usar
grado reac-
Cambio en la redaccio n: Bencenosulfonamida, C 6 H 5 SO 2 NH 2 157,19 lido. &1S (USP30)Cristales blancos a beige pa Intervalo de fusio n h741i: entre 1508 y 1538. Cambio en la redaccio n: 2-Bencilaminopiridina, C 12 H 12 N 2 184,24 (USP30)Usar un grado adecuado.
& &
[ 98-10-2 ]
[ 6935-27-9 ]
&1S
Cambio en la redaccio n: 1-Bencilimidazol, C10H10N2158,20 Cristales blancos.

&
[4238-71-5]&1S
(USP30)
4019
Valoracio nTransferir aproximadamente 40 mg, pesados con exactitud, a un vaso de precipitados de 100 mL. Disolver en 50 mL de a cido ace tico glacial. Valorar con a cido perclo rico 0,1 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente con un electrodo combinado de calomel-platino. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de a cido perclo rico 0,1 N equivale a 15,82 mg de C10H10N2. No se encuentra menos de 99%. Cambio en la redaccio n: quido Benzaldeh do, C7H6O106,12 &[100-52-7]&1S (USP30)L incoloro, muy refractivo. Soluble en agua; miscible con alcohol, e ter, y aceites jos y vola tiles. Valoracio nPipetear aproximadamente 1 mL, transferir a un frasco para pesada con tapo n de vidrio tarado y pesar con exactitud. Aojar el tapo n y transferir el frasco para pesada y su contenido a un matraz Erlenmeyer de 250 mL que contenga 25 mL de una solucio n hidroalcoho lica de clorhidrato de hidroxilamina (preparada del siguiente modo: disolver 34,7 g de clorhidrato de hidroxilamina en 160 mL de agua, agregar alcohol hasta 1000 mL y neutralizar frente a azul de bromofenol agregando hidro xido de sodio SR). Empleando una probeta graduada para medir el volumen, enjuagar las paredes del matraz con 50 mL adicionales de esta solucio n reactivo. Dejar la solucio n en reposo durante 10 minutos, agregar 1 mL de azul de bromofenol SR y valorar el a cido clorh drico liberado con hidro xido de sodio 1 N SV. Realizar una determinacio n con un blanco utilizando las mismas cantidades de los mismos reactivos y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de hidro xido de sodio 1 N consumido equivale a 106,1 mg de C7H6O. No se encuentra menos de 98%. Peso espec co h841i: entre 1,041 y 1,046. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,5440 y 1,5465 a 208. cido cianh A dricoAgitar 0,5 mL con 5 mL de agua, agregar 0,5 mL de hidro xido de sodio SR y 0,1 mL de sulfato ferroso SR, y entibiar la mezcla moderadamente. Agregar un pequen o exceso de a cido clorh drico: no se observa un color azul verdoso ni un precipitado azul dentro de los 15 minutos. Cambio en la redaccio n: Benzanilida, C13H11NO197,23 &[93-98-1]&1S (USP30)Polvo blanquecino o gris claro a verde grisa ceo. Insoluble en agua; moderadamente soluble en alcohol; poco soluble en e ter. Intervalo de fusio n h741i: entre 1628 y 1658. Solubilidad en acetonaUna porcio n de 1,0 g se disuelve completamente en 50 mL de acetona y produce una solucio n transparente. Cambio en la redaccio n: Benzhidrol ( a -Fenilbencenometanol ), C 1 3 H 1 2 O 184,23 [91-01-0]&1S (USP30)Cristales blancos a amarillo pa lido. Muy poco soluble en agua; soluble en alcohol, en e ter y en cloroformo. Intervalo de fusio n h741i: entre 658 y 678, pero el intervalo entre el comienzo y el nal de la fusio n no excede de 28.
&
sobre soporte S1A. Usar helio como gas transportador, mantener la temperatura del inyector a 1808, la temperatura de la columna a 1908 y mantener el detector de ionizacio n a la llama a 2808. El tiempo de retencio n es de aproximadamente 15 minutos. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,4980 y 1,5000 a 208. Cambio en la redaccio n: Benzoato de Colesterilo, C 34 H 50 O 2 490,76 &1S (USP30)Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: Benzoato de Etilo, C9H10O2150,17 &[93-89-0]&1S (USP30) L quido incoloro y transparente. Tiene olor aroma tico. Pra cticamente insoluble en agua, miscible con alcohol, cloroformo y e ter. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i), usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna de acero inoxidable de 3 mm 6 2,4 m con fase G16 al 20% sobre un soporte S1A; las temperaturas del inyector, de la columna y del detector deben mantenerse a 1808, 1958 y 2508, respectivamente. El a rea del pico de benzoato de etilo no es menos de 98% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,5048 y 1,5058 a 208. Cambio en la redaccio n: Benzofenona, (C6H5)2CO182,22 &[119-61-9]&1S cristalino blanco. Intervalo de fusio n h741i: entre 478 y 498. Cambio en la redaccio n: p -Benzoquinona, & (Quinona), & 1S ( USP30 ) C 6 H 4 O 2 108,09 [106-51-4]&1S (USP30)Polvo amarillo oscuro con un matiz verde. Poco soluble en agua; soluble en alcohol, en e ter y en soluciones de a lcalis jos. Puede oscurecerse en reposo. El material oscurecido puede puricarse mediante sublimacio n al vac o. Intervalo de fusio n h741i : entre 1138 y 1158.
& &
[ 604-32-0 ]
(USP30)Polvo
Cambio en la redaccio n: Bibencilo (Dibencilo), C14H14182,26 &[103-29-7]&1S (USP30) Cristales incoloros. Fa cilmente soluble en cloroformo y en e ter; moderadamente soluble en alcohol; pra cticamente insoluble en agua. Intervalo de fusio n h741i: entre 538 y 558. Cambio en la redaccio n: cido de Bicarbonato de Aminoguanidina &(Carbonato A Aminoguanidina ),&1S (USP30) CH6N4 H2CO3136,11 &[2582-30-1] &1S (USP30)Polvo blanco. Valoracio nDisolver aproximadamente 34 mg, pesados con exactitud, en 50 mL de a cido ace tico glacial. Valorar con a cido perclo rico 0,1 N SV determinando el punto nal potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de a cido perclo rico 0,1 N equivale a 13,61 mg de CH6N4 H2CO3. No se encuentra menos de 98,5%. Punto de fusio n h741i: aproximadamente 1708, con descomposicio n.
Cambio en la redaccio n: Benzoato de Butilo, C11H14O2178,23 &[136-60-7]&1S (USP30) L quido espeso, oleoso, de incoloro a amarillo pa lido. Pra cticamente insoluble en agua; soluble en alcohol y en e ter. Valoracio nLa pureza, cuando se examina mediante cromatograf a de gasl quidos, no es menos de 98%. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas para valorarlo: una columna de acero inoxidable de 3 mm 6 1,8 m rellena con fase l quida G4
4020
Cambio en la redaccio n: Bifenilo, C12H10154,21 &[92-52-4]&1S (USP30)Polvo cristalino o cristales incoloros a blancos. Insoluble en agua; soluble en alcohol y en e ter. Su punto de ebullicio n es aproximadamente de 2548. Intervalo de fusio n h741i: entre 688 y 728. Cambio en la redaccio n: 2,2-Bipiridina (a,a-Dipiridilo), C10H8N2156,18 &[366-18-7] &1S (USP30)Polvo cristalino blanco o rosado. Soluble en agua y en alcohol. Funde aproximadamente a 698 y entra en ebullicio n aproximadamente a 2728. SensibilidadPreparar las siguientes soluciones: (A)Disolver 350 mg de sulfato de amonio ferroso en 50 mL de agua que contenga 1 mL de a cido sulfu rico y agregar 500 mg de sulfato de hidrazina, despue s agregar agua para obtener 500 mL. Para utilizarla, diluir esta solucio n con agua en la proporcio n de 1 en 100 mL. (B)Disolver 8,3 g de acetato de sodio y 12 mL de a cido ace tico glacial en agua para obtener un volumen de 100 mL. Agregar 1 mL de una solucio n de la muestra (1 en 1000) a una mezcla de 10 mL de agua, 1 mL de solucio n A y 1 mL de solucio n B: de inmediato aparece un color rosado. SolubilidadUna porcio n de 100 mg se disuelve completamente en 10 mL de agua. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): no ma s de 0,2%. Cambio en la redaccio n: Bis(trimetilsilil)acetamida ( N,O-Bis (trimetilsilil) acetamida; BSA), CH3CON[Si(CH3)3]2203,43 &[10416-59-8]&1S (USP30) L quido transparente incoloro. Se hidroliza ra pidamente cuando se expone al aire hu medo. Manipular bajo nitro geno y guardar en un lugar fresco. Valoracio n No menos de 90% de CH 3 CON[Si(CH 3 ) 3 ] 2 ; empleando un cromato grafo de gases adecuado equipado con un detector de conductividad te rmica. Las siguientes condiciones son adecuadas y proporcionan un tiempo de retencio n de aproximadamente 15 minutos. COLUMNA: de acero inoxidable de 3 mm 6 1,83 m con fase G1 al 5% sobre soporte S1A. TEMPERATURA DEL INYECTOR: 1608. TEMPERATURA DE LA COLUMNA: 908, programada para aumentar 48 por minuto hasta 1608. GAS TRANSPORTADOR: Helio. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,4150 y 1,4170 a 208. Cambio en la redaccio n: Bis(trimetilsilil)triuoroacetamida ( N,O-Bis(trimetilsilil) triuoroacetamida;BSTFA ), CF 3 CON[Si(CH 3 ) 3 ] 2 257,40 & [25561-30-2]&1S (USP30)L quido transparente incoloro. Se hidroliza ra pidamente cuando se expone al aire hu medo. Almacenar en un lugar fresco. Valoracio nNo menos de 98% de CF3CON[Si(CH3)3]2; emplear un cromato grafo de gases adecuado equipado con un detector de conductividad te rmica. Las siguientes condiciones son adecuadas y proporcionan un tiempo de retencio n de aproximadamente 15 minutos. COLUMNA: de acero inoxidable de 3 mm 6 1,83 m con fase G1 al 5% sobre soporte S1A. TEMPERATURA DEL INYECTOR: 1708. TEMPERATURA DE LA COLUMNA: 708, programada para aumentar 48 por minuto hasta 1408. GAS TRANSPORTADOR: Helio. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,3820 y 1,3860 a 208.
Cambio en la redaccio n: Bis(trimetilsilil)triuoroacetamida con Trimetilclorosilano [25561-30-2]&1S (USP30)Usar un grado adecuado. [NOTASe puede obtener un grado adecuado de Sigma-Aldrich, www.sigma-aldrich.com].
&
Cambio en la redaccio n: cido de Amonio),&1S (USP30) Bisulfato de Amonio &(Sulfato A NH4HSO4 115,11 & [7803-63-6]& 1S (USP30)Cristales blancos. Fa cilmente soluble en agua; pra cticamente insoluble en alcohol, en acetona y en piridina. Valoracio nDisolver aproximadamente 300 mg, pesados con exactitud, en 50 mL de una mezcla de agua y alcohol (25 : 25). Valorar con hidro xido de sodio 0,1 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de hidro xido de sodio 0,1 N equivale a 11,51 mg de NH4HSO4. No se encuentra menos de 98%. Cambio en la redaccio n: Bromo, BrPeso ato mico 79,904 &[7726-95-6]&1S grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: p-Bromoanilina, C6H6BrN172,02 &[106-40-1]&1S (USP30) Cristales blancos a blanquecinos. Insoluble en agua; soluble en alcohol y en e ter. Valoracio nTransferir aproximadamente 650 mg, pesados con exactitud, a un recipiente adecuado y disolver en 50 mL de a cido ace tico glacial SR. Agregar cristal violeta SR y valorar con a cido perclo rico 0,1 N SV. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de a cido perclo rico 0,1 N equivale a 17,20 mg de C6H6BrN. No se encuentra menos de 98%. Intervalo de fusio n h741i: entre 608 y 658, dentro de un intervalo de 28. Cambio en la redaccio n: N -Bromosuccinimida, C 4 H 4 BrNO 2 177,98 & [ 128-08-5 ] (USP30)Polvo o cristales de color blanco a blanquecino. Fa cilmente soluble en agua, acetona y a cido ace tico glacial. [Precaucio nSumamente irritante para los ojos, la piel y las membranas mucosas.] Valoracio nTransferir 200 mg, pesados con exactitud, a un matraz Erlenmeyer, agregar 25 mL de hidro xido de potasio alcoho lico 0,5 N, tapar con un vidrio de reloj, calentar hasta ebullicio n y mantener en ebullicio n durante 5 minutos. Enfriar, transferir la solucio n a un vaso de precipitados, enjuagar el matraz con agua hasta que el volumen total de solucio n ma s los enjuagues sea de aproximadamente 100 mL y agregar 10 mL de a cido ace tico glacial. Insertar electrodos adecuados, valorar con nitrato de plata 0,1 N SV y determinar el punto nal potenciome tricamente. Cada mL de nitrato de plata 0,1 N equivale a 17,80 mg de C4H4BrNO2. No se encuentra menos de 98%.
&1S
(USP30)Usar
Cambio en la redaccio n: Bromuro de Amonio, NH4Br97,94 &[12124-97-9]&1S Usar grado reactivo ACS.
(USP30)
4021
Cambio en la redaccio n: Bromuro de Ciano geno, BrCN105,92 &[506-68-3]&1S (USP30) Cristales incoloros. Vola til a temperatura ambiente. Sus vapores son altamente irritantes y muy to xicos. Funde aproximadamente a 528. Fa cilmente soluble en agua y en alcohol. Almacenar en envases impermeables en un lugar fr o. SolubilidadSendas porciones de 1 g se disuelven completamente en 10 mL de agua y en 10 mL de alcohol, respectivamente, y producen soluciones incoloras. Cambio en la redaccio n: Bromuro Mercu rico, HgBr2360,40 &[7789-47-1]&1S Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: 1,3-Butanodiol (1,3-Butilenglicol), C4H10O290,12 &[107-88-0] quido viscoso incoloro. Muy higrosco pico. Soluble en (USP30)L agua, en alcohol, en acetona y en metil etil cetona; pra cticamente insoluble en hidrocarburos alifa ticos, en benceno y en tolueno. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama y usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna de acero inoxidable de 3 mm 6 1,8 m con fase G16 al 20% sobre un soporte S1A; mantener la temperatura del inyector a 2658; mantener la temperatura de la columna a 1508 y programar para que aumente 88 por minuto hasta alcanzar 2108. El a rea del pico de butanodiol no es menos de 98% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,4390 y 1,4410, a 208.
&1S
Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 1008; mantener la temperatura del detector a 3008 y mantener la temperatura de la columna a temperatura ambiente y programarla para que aumente 108 por minuto hasta 1508. El a rea del pico de C5H12O no es menos de 99,8% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,367 y 1,371 a 208. Cambio en la redaccio n:
(USP30)
n -Butilamina, CH 3 CH 2 CH 2 CH 2 NH 2 73,14 & [ 109-73-9 ] quido inamable, incoloro a amarillo pa lido. Miscible (USP30)L con agua, con alcohol y con e ter. Almacenar en envases impermeables. Peso espec co: aproximadamente 0,740. Intervalo de destilacio n, Me todo Ih721iNo menos de 95% destila entre 768 y 788. Agua, Me todo I h921i: no ma s de 1,0%, determinado por el Me todo Volume trico. Cloruros (Prueba para reactivos)Un g (1,5 mL) no presenta ma s de 0,01 mg de Cl (0,001%). Impurezas a cidasA 50 mL agregar 5 gotas de una solucio n saturada de azo violeta en benceno y valorar ra pidamente con meto xido de sodio 0,1 N SV hasta un punto nal azul intenso tomando precauciones para impedir la absorcio n de dio xido de carbono atmosfe rico, por ejemplo, mediante el empleo de una atmo sfera de nitro geno: para la neutralizacio n no se requiere ma s de 1,0 mL de meto xido de sodio 0,1 N.
&1S
Cambio en la redaccio n: terc-Butilamina, C3H9CNH273,14 &[ 75-64-9 ]&1S (USP30) L quido. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama; el gas transportador es helio. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 2308; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 1308 y programar para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2808. El a rea del pico de C3H9CNH2 no es menos de 99,5% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,3770 y 1,3790 a 208. Cambio en la redaccio n: 4- terc -Butilfenol, C10 H14 O 150,22 & [ 98-54-4 ] & 1S ( USP30 ) Agujas o escamas cristalinas blancas. Pra cticamente insoluble en agua; soluble en alcohol y en e ter. Intervalo de fusio n h741i: entre 988 y 1018. Agregar lo siguiente:
& Butiraldeh do (Butanal), C4H8O72,11[123-72-8]Usar un grado adecuado, puricado por redestilacio n, con un contenido de no menos de 99,5%.&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: 2,3-Butanodiona ( Diacetilo ), CH 3 COCOCH 3 86,09 [431-03-8]&1S (USP30)L quido de color amarillo brillante a verde amarillento. Soluble en agua. Miscible con alcohol y con e ter. Alcanza el punto de ebullicio n aproximadamente a 888. Valoracio n N DE CLORHIDRATO DE HIDROXILAMINADisolver 20 g de SOLUCIO clorhidrato de hidroxilamina en 40 mL de agua y diluir con alcohol hasta 400 mL. Agregar mezclando 300 mL de hidro xido de potasio alcoho lico 0,5 N SV y ltrar. Desechar despue s de 2 d as. PROCEDIMIENTOTransferir aproximadamente 1 g, pesado con exactitud, a un matraz de 250 mL con tapo n de vidrio, agregar 75,0 mL de Solucio n de clorhidrato de hidroxilamina y tapar el matraz. Calentar la mezcla a reujo durante 1 hora, luego enfriar a temperatura ambiente. Agregar azul de bromofenol SR y valorar con a cido clorh drico 0,5 N SV hasta un punto nal amarillo verdoso. [NOTAAlternativamente, se puede valorar la solucio n potenciome tricamente a un pH de 3,4.] Realizar una prueba con un blanco utilizando las mismas cantidades de reactivos que las empleadas para la muestra de prueba y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de a cido clorh drico 0,5 N equivale a 43,05 mg de CH3COCOCH3. No se encuentra menos de 97% de CH3CO COCH3. Temperatura de solidicacio n h651i: entre 2,08 y 5,58. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,3935 y 1,3965, a 208. Peso espec co h841i: aproximadamente 0,98.
&
Cambio en la redaccio n: ter, C5H12O88,15 &[1634-04-4]&1S terc-Butil Metil E L quido incoloro.

(USP30)
Cambio en la redaccio n: Butirolactona, (Dihidro-2-(3H)-furanona, g-butirolactona) 86,1 &[96-48-0]&1S (USP30)L quido aceitoso, transparente, incoloro a pra cticamente incoloro. Es miscible con agua. Soluble en metanol y en e ter.
4022
Intervalo de ebullicio n h721i: entre 1938 y 2088. ndice de refraccio I n h831i: aproximadamente 1,435 a 208. Peso espec co h841i: entre 1,128 y 1,135. Cambio en la redaccio n: Caprato de Metilo, C11H22O2186,29 &[110-42-9]&1S (USP30) L quido incoloro. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 2508; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 1508 y programar para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2808. El a rea del pico de C11H22O2 no es menos de 98,5% del a rea total. Cambio en la redaccio n: Caprilato de Metilo, C9H18O2158,24 &[111-11-5]&1S (USP30) L quido incoloro. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 2308; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 1308 y programar para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2808. El a rea del pico de C9H18O2 no es menos de 98,5% del a rea total. Cambio en la redaccio n: Carbamato de Metilo, C2H5NO275,07 &[598-55-0]&1S Cristales blancos. Fa cilmente soluble en agua. Intervalo de fusio n h741i: entre 548 y 568. Cambio en la redaccio n: Carbazol, C12H9N167,21 &[86-74-8]&1S (USP30)Polvo de color blanquecino a tostado. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 2808; mantener la temperatura del detector a 3008 y mantener la temperatura de la columna a 2808. El a rea del pico de C12H9N no es menos de 95,5% del a rea total. Cambio en la redaccio n: Carbonato de Amonio &(Cuerno de Ciervo (Hartshorn Salt)) [506-87-6]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Carbonato de Calcio, CaCO3100,09 &[471-34-1]&1S (USP30) Utilizar grado reactivo ACS. [NOTAUn Carbonato de Calcio de calidad adecuada para su uso como esta ndar primario se encuentra disponible en el Instituto Nacional de Normas y Tecnolog a del gobierno de Estados Unidos
(USP30)
(National Institute of Standards and Technology - NIST), Ofce of Standard Reference Materials, www.nist.gov, como muestra de esta ndar N8 915]. Cambio en la redaccio n: Carbonato de Calcio, Esta ndar para Quelatometr a, CaCO3 100,09 &[471-34-1]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Case na & [9000-71-9] & 1S (USP30) Polvo granulado blanco o levemente amarillo. Insoluble en agua y en otros disolventes neutros; se disuelve fa cilmente en amon aco SR y en soluciones de hidro xidos alcalinos, y forma por lo general una solucio n turbia. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos)Incinerar 2 g: el residuo no pesa ma s de 20 mg (1,0%). Pe rdida por secado h731iSecar a 1058 hasta peso constante: no pierde ma s de 10,0% de su peso. AlcalinidadAgitar 1 g con 20 mL de agua durante 10 minutos y ltrar: el ltrado no es alcalino al papel de tornasol rojo. Sustancias solublesCuando el ltrado de la prueba de Alcalinidad se evapora y se seca a 1058, el residuo no pesa ma s de 1 mg (0,1%). GrasasDisolver 1 g en una mezcla de 10 mL de agua y 5 mL de amon aco alcoho lico SR y agitar con dos porciones de 20 mL de e ter de petro leo. Evaporar el e ter de petro leo a una temperatura baja y secar a 808. El peso del residuo no excede de 5 mg (0,5%). Contenido de nitro geno, Me todo I h461i: se encuentra entre 15,2% y 16,0% de N, con respecto a la sustancia anhidra. Cuando se requiera case na exenta de vitaminas, usar case na a la que se le hayan extra do las vitaminas liposolubles mediante extraccio n continua con alcohol caliente durante 48 horas, seguida por secado al aire para eliminar el disolvente. Cambio en la redaccio n: Catecol ( o-Dihidroxibenceno; & Pirocatecol), & 1S ( USP30 ) C6H4(OH)2110,11 &[120-80-9]&1S (USP30)Cristales blancos que presentan un cambio en su coloracio n al exponerse al aire y a la luz. Fa cilmente soluble en agua, en alcohol, en benceno, en e ter, en cloroformo y en piridina, formando soluciones transparentes. & Usar un grado adecuado con un contenido de no menos de 99%.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Cianoacetato de Etilo, CNCH2COOC2H5113,11 &[105-56-6] quido incoloro a amarillo pa lido. Poco soluble en (USP30)L agua. Miscible con alcohol y con e ter. A presio n atmosfe rica, entra en ebullicio n a una temperatura entre 2058 y 2098, con descomposicio n. A una presio n de 10 mm de mercurio, destila aproximadamente a 908. Peso espec co h841i: entre 1,057 y 1,062. AcidezDisolver 2 mL en 25 mL de alcohol neutralizado, agregar fenolftale na SR y valorar con hidro xido de sodio 0,10 N: no se requiere ma s de 1,5 mL para producir un color rosado.
&1S
Cambio en la redaccio n: Ciclohexano, C6H1284,16 reactivo ACS.

&
[110-82-7]&1S
(USP30)Usar
grado
4023
Cambio en la redaccio n: quido Ciclohexanol, C6H12O100,16 &[108-93-0]&1S (USP30)L transparente. Fa cilmente soluble en agua. Miscible con alcohol, con acetato de etilo y con hidrocarburos aroma ticos. Valoracio nCuando se examina mediante cromatograf a gasl quido, usando un cromato grafo de gases y condiciones adecuadas, presenta una pureza de no menos de 98%. Temperatura de fusio n: aproximadamente 238. Peso espec co: aproximadamente 0,962, a 208. Cambio en la redaccio n: Cinconidina, C19H22N2O294,39 &[485-71-2]&1S (USP30) Cristales o polvo cristalino o granulado de color blanco. Soluble en alcohol y en cloroformo; pra cticamente insoluble en agua. Valoracio nDisolver aproximadamente 125 mg, pesados con exactitud, en 50 mL de a cido ace tico glacial. Agregar algunas gotas de p-naftolbence na SR y valorar con a cido perclo rico 0,1 N SV. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de a cido perclo rico 0,1 N equivale a 14,72 mg de C19H22N2O. No se encuentra menos de 99,0%. Pe rdida por secado h731iSecar a 1058 hasta peso constante: no pierde ma s de 1,0% de su peso. Intervalo de fusio n h741i: entre 2008 y 2058. Rotacio n espec ca h781i: entre 1058 y 1158, calculada con respecto a la sustancia seca, determinada en una solucio n en alcohol que contenga 10 mg por mL. Cambio en la redaccio n: Cinconina, C19H22N2O294,39 &[118-10-5]&1S (USP30)Cristales o polvo cristalino o granulado de color blanco. Poco soluble en cloroformo, moderadamente soluble en alcohol y pra cticamente insoluble en agua. Valoracio nDisolver aproximadamente 125 mg, pesados con exactitud, en 50 mL de a cido ace tico glacial. Agregar algunas gotas de p-naftolbence na SR y valorar con a cido perclo rico 0,1 N SV. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de a cido perclo rico 0,1 N equivale a 14,72 mg de C19H22N2O. No se encuentra menos de 99,0%. Pe rdida por secado h731iSecar a 1058 hasta peso constante: no pierde ma s de 1,0% de su peso. Intervalo de fusio n h741i: entre 2558 y 2618. Rotacio n espec ca h781i: entre +2198 y +2298, calculada con respecto a la sustancia seca, determinada en una solucio n en alcohol que contenga 50 mg por 10 mL. Cambio en la redaccio n: HOOC(NH 2 )CHCH 2 SSCH 2 CH(NH 2 )COOH 240,30 [58-89-3]&1S (USP30)Polvo blanco cristalino. Muy poco soluble en agua; soluble en a cidos minerales diluidos y en soluciones de hidro xidos alcalinos; insoluble en alcohol y en otros disolventes orga nicos. Rotacio n espec ca h781i: entre 2158 y 2258, determinada en una solucio n 2 en 100 de la muestra de prueba, previamente secada sobre gel de s lice durante 4 horas, en a cido clorh drico diluido (1 en 10) a una temperatura de 208. Pe rdida por secado h731iSecar sobre gel de s lice durante 4 horas: no pierde ma s de 0,2% de su peso. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): no ma s de 0,1%.
L -Cistina,
&
&
Citrato Cu prico ([Citrato(4-)] de dicobre), Cu2C6H4O7315,18 [866-82-0]&1S (USP30)Usar un grado adecuado.
Cambio en la redaccio n: Citrato de Calcio, Ca3(C6H5O7)2 4H2O570,49 &[813-94-5] &1S (USP30)Polvo cristalino de color blanco. Poco soluble en agua; fa cilmente soluble en a cido clorh drico 3 N y en a cido n trico 2 N; insoluble en alcohol. A 15 mL de a cido sulfu rico 2 N caliente agregar en pequen as porciones, y mezclando, aproximadamente 500 mg de citrato de calcio. Calentar la mezcla a ebullicio n durante 5 minutos y ltrar mientras esta caliente: el ltrado enfriado responde a la prueba de identicacio n de Citrato h191i. Valoracio nPesar con exactitud aproximadamente 400 mg de la sal, previamente secada a 1508 hasta peso constante, y transferir a un vaso de precipitados de 250 mL. Disolver la muestra de prueba en 150 mL de agua con 2 mL de a cido clorh drico 3 N, agregar 15 mL de hidro xido de sodio 1 N y 250 mg de azul de hidroxinaftol, y valorar con edetato diso dico 0,05 M SV hasta que la solucio n cambie a color azul intenso. Cada mL de edetato diso dico 0,05 M equivale a 8,307 mg de Ca3(C6H5O7)2: se encuentra entre 97,5% y 101%. Carbonato y o xido de calcioTriturar 1 g de citrato de calcio con 5 mL de agua durante 1 minuto: la mezcla no torna azul el tornasol rojo. Luego agregar 5 mL de a cido clorh drico 3 N tibio: so lo se observan algunas burbujas aisladas. Materia insoluble en a cido clorh dricoDisolver 5 g calentando con una mezcla de 10 mL de a cido clorh drico y 50 mL de agua durante 30 minutos: no queda ma s de 2,5 mg de residuo insoluble (0,05%). Pe rdida por secado h731iSecar a 1508 hasta peso constante: pierde entre 12,2% y 13,3% de su peso. Arse nico h211iProceder con 0,50 g segu n se indica para compuestos orga nicos (6 ppm de As). Metales pesados, Me todo I h231i: 0,002%. Cambio en la redaccio n: cido Citrato Diba sico de Amonio &(Sal Diamo nica de A C trico),&1S (USP30) (NH4)2HC6H5O7226,18 &[3012-65-5]&1S (USP30) Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Cloramina T (p-Tolue nsulfoncloramida de Sodio), C 7 H 7 ClNNaO 2 S 3H 2 O 281,69 & [ 127-65-1 ] & 1S ( USP30 ) Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n:
&
Clorhidrato de Alprenolol, C 1 5 H 2 3 NO 2 HCl 285,8 [13707-88-5]&1S (USP30)Usar un grado adecuado.
Cambio en la redaccio n: Clorhidrato de Benzamidina Hidrato, &(Monoclorhidrato de Bencenocarboximidamida Hidrato), C7H8N2 HCl xH2O&1S (USP30) 156,6 &[206752-36-5]&1S (USP30)Polvo blanco a blanquecino. Usar un grado adecuado. [NOTASe puede obtener un grado adecuado de Sigma-Aldrich, www.sigma-aldrich.com.]
4024
Cambio en la redaccio n: Clorhidrato de Benzfetamina, C 1 7 H 2 1 N HCl 275,82 [5411-22-3]&1S (USP30)Polvo cristalino de color blanco a blanquecino. Fa cilmente soluble en agua, en alcohol y en cloroformo; poco soluble en e ter. Valoracio nDisolver aproximadamente 500 mg, pesados con exactitud, en una mezcla de 50 mL de a cido ace tico glacial y 10 mL de acetato mercu rico SR, agregar 1 gota de cristal violeta SR y valorar con a cido perclo rico 0,1 N SV hasta un punto nal verde azulado. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de a cido perclo rico 0,1 N equivale a 27,58 mg de C17H21N HCl. Se encuentra entre 98,0% y 101,0%, calculado con respecto a la sustancia seca. Intervalo de fusio n h741i: entre 1528 y 1588. Rotacio n espec ca h781i: entre +228 y +268, determinada en una solucio n que contenga 200 mg en 10 mL, secando previamente la muestra al vac o a 608 durante 3 horas. Pe rdida por secado h731iSecar al vac o a 608 durante 3 horas: no pierde ma s de 1% de su peso. Residuo de incineracio n h281i: no ma s de 0,2%.
&
Cambio en la redaccio n: Clorhidrato de 2-Etilaminopropiofenona, C6H5COCH(CH3)NHC2H5 HCl213,70 &[51553-17-4]&1S (USP30) Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: Clorhidrato de Fenilhidrazina, C6H5NHNH2 HCl144,60 Polvo o cristales blancos o amarillentos. Soluble en agua y en alcohol. Almacenar en envases impermeables. Proteger de la luz.&Usar un grado adecuado con un contenido de no menos de 99%.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Clorhidrato de Guanidina, CH5N3 HCl95,53 &[50-01-1] cilmente soluble en agua y (USP30)Polvo cristalino blanco. Fa en alcohol. Intervalo de fusio n h741i: entre 1788 y 1898. Contenido de cloruroDisolver aproximadamente 400 mg, pesados con exactitud, en 5 mL de agua. Agregar 5 mL de a cido ace tico glacial, 50 mL de metanol y 1 gota de eosina Y SR, y valorar con nitrato de plata 0,1 N SV. Cada mL de nitrato de plata 0,1 N equivale a 3,545 mg de Cl. No se encuentra menos de 36,1% ni ma s de 37,1%, calculado con respecto a la sustancia anhidra.
&1S
Cambio en la redaccio n: Clorhidrato de 3,3-Diaminobenzidina, (NH2)2C6H3C6H3(NH2)2 4HCl360,11 &[7411-49-6]&1S (USP30) Cristales aciculares blancos a color tostado amarillento (ocasionalmente pu rpura). Soluble en agua. Estable en disolventes orga nicos pero inestable en solucio n acuosa a temperatura ambiente. Almacenar las soluciones acuosas en el refrigerador. Materia insolubleDisolver 2 g en 100 mL de agua, sin calentar, y ltrar de inmediato: el residuo insoluble no excede de 1 mg (0,05%). Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): no ma s de 1 mg, a partir de 2 g (0,05%). Prueba de aptitud para la deteccio n de selenioDisolver en agua 1,633 g de a cido selenioso (H2SeO3) y diluir con agua hasta 1 L. Diluir 10 mL de esta solucio n con agua hasta 1 L para obtener una solucio n que contenga 0,010 mg de Se por mL. Colocar 1 mL de la solucio n resultante en un vaso de precipitados de 100 mL, agregar 2 mL de solucio n de a cido fo rmico (1 en 7) y diluir con agua hasta 50 mL. Agregar 2 mL de solucio n de clorhidrato de 3,3diaminobenzidina (1 en 200) y dejar en reposo de 30 a 50 minutos. Ajustar con hidro xido de amonio 6 N a un pH entre 6 y 7. Transferir a un separador de 125 mL, agregar 10,0 mL de tolueno y agitar vigorosamente durante 30 segundos: se produce un color amarillo evidente en la capa de tolueno. Un blanco que contiene clorhidrato de diaminobenzidina pero carece de esta ndar de selenio, tratado del mismo modo, no presenta ningu n color en la capa de tolueno. Cambio en la redaccio n: Clorhidrato de Dihidroquinidina, C20H27ClN2O2362,89 & [1476-98-8]&1S (USP30)La minas en forma de rombo. Fa cilmente soluble en metanol y en cloroformo. Valoracio n VILPreparar una mezcla de agua, acetonitrilo, dietilaFASE MO mina y a cido metanosulfo nico (860 : 100 : 20 : 20). PROCEDIMIENTOInyectar aproximadamente 20 mL en un cromato grafo de l quidos adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector a 235 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. El a rea del pico de C20H27ClN2O2 no es menos de 97,5% del a rea total.
Cambio en la redaccio n: Clorhidrato de Guanina, C 5 H 5 N 5 O HCl H 2 O 205,60 [635-39-2]&1S (USP30)Polvo blanco cristalino. Funde por encima de 2508, con descomposicio n. Poco soluble en agua y en alcohol; soluble en agua acidulada y en hidro xido de sodio SR. Sus soluciones no precipitan con yodo SR ni con yodomercuriato de potasio SR, pero forman un precipitado con trinitrofenol SR. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): inapreciable, usando 100 mg. Pe rdida por secado h731iSecar a 1058 hasta peso constante: no pierde ma s de 10,0% de su peso.
&
&
Clorhidrato de Hidroxilamina, NH 2 OH HCl 69,49 [5470-11-1]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
Cambio en la redaccio n: Clorhidrato de 1-Naftilamina, C 10 H 7 NH 2 HCl 179,65 [552-46-5]&1S (USP30)Polvo cristalino blanco que se torna azulado tras la exposicio n al aire y a la luz. Soluble en agua, en alcohol y en e ter. Una solucio n 1 en 100, acidicada levemente con a cido ace tico, da un color violeta con 5 gotas de cloruro fe rrico SR. Una solucio n 1 en 40 en a cido ace tico diluido es incolora y no ma s que levemente opalescente. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos)Incinerar 200 mg con unas gotas de a cido sulfu rico: el peso del residuo es inapreciable.
&
Cambio en la redaccio n: Cloro, Cl270,9 &[7782-50-5]&1S (USP30)Gas amarillo verdoso. Se puede obtener un grado de alta pureza de la mayor a de los proveedores de gases especiales.
4025
Cambio en la redaccio n: 2-Cloro-4-nitroanilina al 99%, C 6 H 5 ClN 2 O 2 172,57 & [121-87-9]&1S (USP30)Polvo blanco a blanquecino. Intervalo de fusio n h741i: entre 1078 y 1098. Cambio en la redaccio n: 1-Cloroadamantano, C10H15Cl170,68 &[935-56-8]&1S (USP30) So lido cristalino blanco. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de fase G2 de 1 mm de espesor; mantener la temperatura del inyector a 2508; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 1508 y programarla para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2808. El a rea del pico de C10H15Cl no es menos de 97,5% del a rea total. Cambio en la redaccio n: 3-Cloroanilina, C6 H6ClN 127,57 & [108-42-9] & 1S ( USP30 ) L quido incoloro a marro n claro. Soluble en a cido y en la mayor a de los disolventes orga nicos; pra cticamente insoluble en agua. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 2508; mantener la temperatura del detector a 3008; y mantener la temperatura de la columna a 1508 y programarla para que se eleve 108 por minuto hasta 2808. El a rea del pico de C6H6ClN no es menos de 99% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,592 y 1,596, a 208. Cambio en la redaccio n: quido Clorobenceno, C6H5Cl112,56 &[108-90-7]&1S (USP30)L transparente e incoloro. Insoluble en agua; soluble en alcohol, benceno, cloroformo y e ter. Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: 4-Clorobenzofenona, C13H9ClO216,66 &[134-85-0]&1S Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: Cloroformiato de 9-Fluorenilmetilo, C15H11ClO2258,70 & [28920-43-6]&1S (USP30)So lido incoloro transparente. Funde aproximadamente a 628. Cambio en la redaccio n: Cloroformo, CHCl3119,38 reactivo ACS.
&
Cambio en la redaccio n: 1-Cloronaftaleno (a-Cloronaftaleno), C10H7Cl162,62 & [90-13-1]&1S (USP30)L quido incoloro a amarillo claro. Valoracio nEmplear un cromato grafo de gases equipado con un detector de ionizacio n a la llama. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna de acero inoxidable de 3,2 mm 6 1,83 m rellena con fase G2 al 7% sobre soporte S1A; mantener la temperatura del inyector a 2508 y del detector a 3108; y programar la temperatura de la columna para que aumente a una velocidad de 108 por minuto de 508 a 2508. No se encuentra menos de 90% de C10H7Cl, del cual no ma s de 10% es 2-cloronaftaleno. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,6320 y 1,6340, a 208. Cambio en la redaccio n: Clorotrimetilsilano & (Cloruro de Trimetilsililo),&1S (USP30) C3H9ClSi108,64 &[75-77-4]&1S (USP30)L quido transparente, incoloro a amarillo claro. Produce humos cuando se expone al aire hu medo. Precaucio nReacciona vigorosamente con agua, alcoholes y otros dadores de hidro geno. Guardar en envases impermeables de vidrio. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,3850 y 1,3890, a 208. Cambio en la redaccio n: Cloruro Cu prico, CuCl2 2H2O170,48 &[7447-39-4]&1S (USP30) Cristales delicuescentes de color verde azulado. Fa cilmente soluble en agua; soluble en alcohol; poco soluble en e ter. Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Cloruro de Acetilcolina, &(Cloruro de Trimetiletanaminio; Acecolina), & 1S ( USP30 ) [CH 3 COOCH 2 CH 2 N(CH 3 ) 3 ]Cl 181,66 & [60-31-1]&1S (USP30)Polvo cristalino blanco. Muy delicuescente; muy soluble en agua; fa cilmente soluble en alcohol. Intervalo de fusio n h741iCuando se seca previamente a 1108 en un tubo capilar durante 1 hora, funde a una temperatura entre 1498 y 1528. Reaccio nUna solucio n (1 en 10) es neutra al tornasol. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): inapreciable, desde 200 mg. Solubilidad en alcohol 500 mg se disuelven completamente en 5 mL de alcohol y la solucio n resultante es incolora. Porcentaje de acetilo (CH3CO)Pesar con exactitud aproximadamente 400 mg, previamente secados a 1058 durante 3 horas, y disolver en 15 mL de agua en un matraz Erlenmeyer con tapo n de vidrio. Agregar 40,0 mL de hidro xido de sodio 0,1 N SV y calentar en un ban o de vapor durante 30 minutos. Insertar el tapo n, dejar que se enfr e, agregar fenolftale na SR y valorar el exceso de a lcali con a cido sulfu rico 0,1 N SV. Determinar la normalidad exacta del hidro xido de sodio 0,1 N valorando 40,0 mL despue s de haberlo tratado de la misma manera que en la prueba. Cada mL de hidro xido de sodio 0,1 N equivale a 4,305 mg de CH3CO. Se encuentra entre 23,2% y 24,2%. Porcentaje de cloro (Cl)Pesar con exactitud aproximadamente 400 mg, previamente secados a 1058 durante 3 horas, y disolver en 50 mL de agua en un matraz de 125 mL con tapo n de vidrio. Agregar agitando 30,0 mL de nitrato de plata 0,1 N SV, luego agregar 5 mL de a cido n trico y 5 mL de nitrobenceno, agitar, agregar 2 mL de sulfato fe rrico amo nico SR y valorar el exceso de nitrato de plata con tiocianato de amonio 0,1 N SV: cada mL de nitrato de plata 0,1 N equivale a 3,545 mg de Cl. Se encuentra entre 19,3% y 19,8% de Cl.
(USP30)
[67-66-3]&1S
(USP30)Usar
grado
4026
Cambio en la redaccio n: Cloruro de Acetilo, CH3COCl78,50 &[75-36-5]&1S (USP30) L quido transparente e incoloro. Se descompone en agua y en alcohol. Miscible con benceno y con cloroformo. Usar grado reactivo ACS. Peso espec co h841i: aproximadamente 1,1. Cambio en la redaccio n:
&
Cloruro de Amonio & (Salmiac), &1S ( USP30 ) NH4 Cl 53,49 [12125-02-9]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
Cambio en la redaccio n: Cloruro de Bario, BaCl 2 2H 2 O 244,26 (USP30)Usar grado reactivo ACS.
&
[ 10361-37-2 ]
&1S
G16 sobre soporte S1. El gas transportador es helio que uye a una velocidad de aproximadamente 40 mL por minuto. Mantener la temperatura del detector aproximadamente a 3108, la temperatura del inyector aproximadamente a 2308 y programar la temperatura de la columna para que aumente 108 por minuto de 358 a 1508. Utilizar un detector de ionizacio n a la llama. Intervalo de ebullicio n h721i: entre 768 y 808, dentro de un intervalo de 28. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,4015 y 1,4035, a 208. AcidezAgregar fenolftale na SR a 75 mL y valorar con hidro xido de potasio 0,1 N en metanol hasta obtener un color rosado pa lido que persista, agitando, durante 1,5 segundos: no se requiere ma s de 0,91 mL (aproximadamente 0,005% como HCl). Agua h921i: no ma s de 0,02%, determinado por el Me todo Volume trico. Residuo posterior a la evaporacio nEvaporar aproximadamente 60 mL (50 g), pesados con exactitud, en una ca psula de platino tarada en un ban o de vapor y secar a 1058 durante 1 hora: no se encuentra ma s de 0,005%. Cambio en la redaccio n: Cloruro de Calcio, CaCl2 2H2O147,01 &[10043-52-4] (USP30)Usar Cloruro de Calcio Dihidrato de grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n:
Cambio en la redaccio n: Cloruro de Bario Anhidro, BaCl2208,23 &[10361-37-2] &1S (USP30)Se puede preparar secando cloruro de bario en capas delgadas a 1258 hasta que la pe rdida de peso entre dos per odos de secado sucesivos, de 3 horas de duracio n, no exceda de 1%. Cambio en la redaccio n: Cloruro de Bencenosulfonilo, C6H5SO2Cl176,62 [98-09-9] quido aceitoso incoloro. Insoluble en agua fr a; (USP30)L soluble en alcohol y en e ter. Solidica a 08. Intervalo de fusio n h741i: entre 148 y 178. Intervalo de ebullicio n (Prueba para reactivos): entre 2518 y 2528.
& &1S
&1S
Cloruro de Calcio Anhidro (para secado), CaCl2110,98 [10043-52-4]&1S (USP30)Usar Cloruro de Calcio Desecante de grado reactivo ACS.
&
&
Cloruro de Cobalto (Cloruro Cobaltoso), CoCl2 6H2O237,93 [7646-79-9]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
Cambio en la redaccio n: Cloruro de Benciltrimetilamonio, C6H5CH2N(CH3)3Cl185,69 [56-93-9]&1S (USP30)Disponible como solucio n acuosa al 60%. Es transparente e incolora o no ma s que ligeramente amarilla. Valoracio nPipetear 2 mL, transferir a un matraz volume trico de 50 mL y agregar agua a volumen. Pipetear 20 mL de la solucio n y transferir a un matraz Erlenmeyer de 125 mL, agregar aproximadamente 30 mL de agua, luego agregar 0,25 mL de diclorouoresce na SR y valorar con nitrato de plata 0,1 N SV. Cada mL de nitrato de plata 0,1 N equivale a 18,57 mg de C6H5CH2N(CH3)3Cl. Se encuentra entre 59,5% y 60,5%.
&
Cambio en la redaccio n: Cloruro de Colina, HOCH2CH2N(CH3)3Cl139,62 &[67-48-1] &1S (USP30)Cristales o polvo cristalino blanco. Muy soluble en agua. Es higrosco pico. Almacenar en envases impermeables. Valoracio nTransferir aproximadamente 100 mg, previamente secados a 1058 durante 2 horas y pesados con exactitud, a un vaso de precipitados, agregar 20 mL de agua y 1 gota de solucio n de cloruro de aluminio (1 en 10) y mezclar. Agregar, lentamente, 20 mL de una solucio n de tetrafenilborato so dico (1 en 50) recie n preparada y ltrada, y dejar la mezcla en reposo durante 30 minutos, agitando ocasionalmente por rotacio n suave. Pasar a trave s de un ltro de vidrio sinterizado de porosidad media, y lavar el vaso de precipitados y el precipitado con cuatro porciones de 10 mL de agua. El peso del precipitado, determinado despue s de secar a 1058 durante 2 horas, y multiplicado por 0,3298, da el peso equivalente de C5H14ClNO. No se encuentra menos de 99,5%. Residuo de incineracio n h281i: no ma s de 0,1%. Cambio en la redaccio n: Cloruro de 3,5-Dinitrobenzoilo, C 7 H 3 ClN 2 O 5 230,56 [74367-78-5]&1S (USP30)Polvo cristalino, amarillo pa lido. Fa cilmente soluble en soluciones de hidro xido de sodio diluido; soluble en alcohol. [Precaucio nCorrosivo, sensible a la humedad, lacrimo geno y posible muta geno. Almacenar bajo nitro geno.]
&
Cambio en la redaccio n: Cloruro de Benzo lo, C6H5COCl140,57 Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Cloruro de n -Butilo ( 1-Clorobutano ), C 4 H 9 Cl 92,57 & [109-69-3]&1S (USP30)L quido transparente, incoloro y vola til. [Precaucio nExtremadamente inamable.] Pra cticamente insoluble en agua. Miscible con alcohol y con e ter. Valoracio nCuando se examina mediante cromatograf a gas l quido, presenta una pureza de no menos de 98%. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas para la valoracio n del art culo: una columna de acero inoxidable de 3 mm 6 1,8 m rellena con fase
&
[98-88-4]&1S
(USP30)
4027
Intervalo de fusio n h741i: entre 698 y 718. Solubilidad en hidro xido de sodioUna solucio n de 500 mg en 25 mL de hidro xido de sodio 1 N es transparente o no ma s que ligeramente turbia. Residuo de incineracio nIncinerar 1 g con 0,5 mL de a cido sulfu rico: el residuo no pesa ma s de 1 mg (0,1%). Cambio en la redaccio n: Cloruro de Lantano, LaCl 3 (67)H 2 O & [ 10025-84-0 ] disponible en grados de hidratacio n &1S (USP30)Este reactivo esta que oscilan entre 6 y 7 mole culas de agua. Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Cloruro de Litio, LiCl42,39 grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Cloruro de Magnesio, MgCl2 6H2O203,30 (USP30)Usar grado reactivo ACS.
& &
Ma ximo de absorcio nEl espectro de absorcio n UV de una solucio n 1 en 100 000 en alcohol presenta un ma ximo aproximadamente a 238 nm. Rotacio n espec ca h781i: aproximadamente +2098, determinada en una solucio n 1 en 100 en alcohol. Cambio en la redaccio n: Decanol (Alcohol n-Dec lico), C10H22O158,28 &[25339-17-7] L quido viscoso transparente. Peso espec co: aproxi&1S (USP30) madamente 0,83 a 208. Solidica aproximadamente a 6,58. Insoluble en agua; soluble en alcohol y en e ter. Valoracio nCuando se examina mediante cromatograf a de gasl quido, usando un cromato grafo y condiciones adecuadas, presenta una pureza de no menos de 99%. Cambio en la redaccio n: Dextrano de Alto Peso Molecular&[9004-54-0]&1S (USP30) Un esta ndar de peso molecular de dextrano con un peso molecular promedio en peso, MW, de 1 a 2 6 106 Da y un cociente entre el peso molecular promedio en peso y el peso molecular promedio en nu mero, MW / MN, de 1,0 a 1,8. ~ [NOTASe puede obtener un grado adecuado de American Polymer Standards Corporation, www.ampolymer.com.~USP30] Cambio en la redaccio n: Dextrina, (C6H10O5)n xH2O&[9004-53-9]&1S (USP30)Polvo amorfo blanco. Lentamente soluble en agua fr a, ma s fa cilmente soluble en agua caliente, insoluble en alcohol. Materia insolubleCalentar a ebullicio n 1 g con 30 mL de agua en un matraz pequen o: la solucio n es incolora y transparente, o no ma s que opalescente. Pe rdida por secado h731iSecar a 1058 hasta peso constante: no pierde ma s de 10,0% de su peso. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos)Incinerar 1 g con 0,5 mL de a cido sulfu rico: el residuo no pesa ma s de 5 mg (0,5%). Cloruros (Prueba para reactivos)Disolver 3 g en 75 mL de agua en ebullicio n, enfriar, diluir con agua a 75 mL y ltrar si fuera necesario. A 25 mL del ltrado, agregar 2 mL de a cido n trico y 1 mL de nitrato de plata SR y dejar en reposo durante 5 minutos: si se produce turbidez, e sta no excede la turbidez de un control que contenga 0,02 mg de Cl agregado (0,002%). Sulfatos (Prueba para reactivos, Me todo I)A una porcio n de 25 mL del ltrado de la prueba anterior agregar 0,5 mL de a cido clorh drico diluido y 2 mL de cloruro de bario SR y dejar en reposo durante 10 minutos: si se produce turbidez, e sta no excede la turbidez de un control que contenga 0,2 mg de SO4 agregado (0,02%). Sustancias solubles en alcoholCalentar hasta ebullicio n 1 g con 20 mL de alcohol durante 5 minutos bajo un condensador de reujo y ltrar mientras esta caliente. Evaporar 10 mL del ltrado en un ban o de vapor y secar a 1058. El residuo no pesa ma s de 5 mg (1%). Azu cares reductoresAgitar 2 g con 100 mL de agua durante 10 minutos y ltrar hasta que este transparente. A 50 mL del ltrado agregar 50 mL de tartrato cu prico alcalino SR y calentar hasta ebullicio n durante 3 minutos. Filtrar a trave s de un crisol de ltrado tarado, lavar con agua, luego con alcohol y nalmente con e ter, y secar a 1058 durante 2 horas: el precipitado de o xido cuproso no pesa ma s de 115 mg (lo que corresponde aproximadamente a 5% de azu cares reductores como dextrosa). Cambio en la redaccio n: Di(2-etilhexil)ftalato [Ftalato de bis(2-etilhexilo)], C24H38O4 390,56 &[117-81-7]&1S (USP30)Usar un grado adecuado.
[7447-41-8]&1S
(USP30)Usar
[7786-30-3]
&1S
&
Cloruro de Metileno ( Diclorometano ), CH 2 Cl 2 84,93 [75-09-2]&1S (USP30)Usar Diclorometano de grado reactivo ACS.
&
cido Clora Cloruro de Oro (A urico), HAuCl4 3H2O393,83 [16903-35-8]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
Cambio en la redaccio n: Cloruro Fe rrico, FeCl3 6H2O270,29 &[7705-08-0]&1S Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Cloruro Mercu rico, HgCl2271,50 Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Cobre, CuPeso ato mico 63,546 &[7440-50-8]&1S grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Colestano, C27H48372,67 grado adecuado. Cambio en la redaccio n: Cortisona, C21H28O5360,44 &[53-06-5]&1S (USP30)Polvo cristalino blanco. Pra cticamente insoluble en agua; moderadamente soluble en alcohol y en acetona. Funde aproximadamente a 2208, con descomposicio n.
& &
(USP30)
[7487-94-7]&1S
(USP30)
(USP30)Usar
[481-21-0]&1S
(USP30)Usar
un
4028
Cambio en la redaccio n: 2,3-Diaminonaftaleno, C10H10N2158,20 Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: 2,6-Dibromoquinona-clorimida ( 2 , 6-Dibromo-N-cloro-pbenzoquinona Imina; Reactivo DBQ ), O: C6 H2 Br2 : NCl 299,35 &[537-45-1]&1S (USP30)Polvo cristalino amarillo. Insoluble en agua; soluble en alcohol y en soluciones de hidro xidos alcalinos diluidas. Intervalo de fusio n h741i: entre 828 y 848. Solubilidad en alcoholUna solucio n de 100 mg en 10 mL de alcohol no es ma s que ligeramente turbia. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos)Incinerar 500 mg con 0,5 mL de a cido sulfu rico: el residuo no pesa ma s de 1 mg (0,2%). SensibilidadA 10 mL de una solucio n en agua que contenga 0,01 mg de fenol, agregar 0,3 mL de una solucio n amortiguadora de borato de sodio (preparada disolviendo 2,84 g de borato de sodio cristalizado en 90 mL de agua tibia, agregando 8,2 mL de hidro xido de sodio 1 N y diluyendo con agua a 100 mL) y 0,1 mL de una solucio n de 10 mg de la muestra de prueba en 20 mL de alcohol: se desarrolla un color azul distintivo dentro de los 10 minutos. Cambio en la redaccio n: Dibutilamina, C8H19N129,24 &[111-92-2]&1S (USP30)L quido incoloro. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 2008; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 1008 y programarla para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2008. El a rea del pico de C8H19N no es menos de 99% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,415 y 1,419, a 208. Cambio en la redaccio n: Diciclohexilamina, (C6H11)2NH181,32 [ 101-83-7]&1S (USP30) L quido transparente, fuertemente alcalino. Moderadamente soluble en agua. Miscible con disolventes orga nicos comunes. Densidad: 0,9104. Solidica a 0,18; funde aproximadamente a 208. Valoracio nPesar con exactitud aproximadamente 400 mg en un frasco para pesada pequen o, tarado, equipado con un cierre bien ajustado. Transferir el frasco tapado a un vaso de precipitados de 250 mL, agregar suciente a cido ace tico glacial SR para cubrir el frasco y abrir el frasco debajo de la supercie del a cido. Agregar cristal violeta SR y valorar con a cido perclo rico 0,1 N SV. Cada mL de a cido perclo rico 0,1 N equivale a 18,13 mg de (C6H11)2NH. No se encuentra menos de 98%. Peso espec co h841i: entre 0,911 y 0,917. Intervalo de ebullicio n (Prueba para reactivos): entre 2558 y 2578. Agua, Me todo Ih921i: no ma s de 0,5%.
& &
[771-97-1]&1S
(USP30)
Valoracio nTransferir aproximadamente 400 mg, pesados con exactitud, a un vaso de precipitados de 250 mL y disolver en aproximadamente 75 mL de agua. Valorar con hidro xido de sodio 0,1 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente. Cada mL de hidro xido de sodio 0,1 N equivale a 10,46 mg de C8H12N2 2HCl. No se encuentra menos de 98%. SolubilidadUna solucio n de 1 g en 10 mL de agua no produce ma s que una leve turbidez. Cambio en la redaccio n: Diclorhidrato de 4,4 -Dipiridilo, C 10 H 8 N 2 2HCl 229,11 [27926-72-3]&1S (USP30)Cristales blancos a blanquecinos. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 2308; mantener la temperatura del detector a 3008; y mantener la temperatura de la columna a 1608 y programarla para que se eleve 108 por minuto hasta 2608. El a rea del pico de C10H8N2 2HCl no es menos de 98,5% del a rea total.
&
Cambio en la redaccio n: Diclorhidrato de Hidrazina, (NH 2 ) 2 2HCl 104,97 [5341-61-7]&1S (USP30)Polvo blanco. Valoracio nDisolver aproximadamente 34 mg, pesados con exactitud, en 50 mL de agua. Agregar cuidadosamente 1 g de bicarbonato de sodio con agitacio n. [Precaucio nSe puede liberar dio xido de carbono ra pidamente.] Valorar con solucio n de yodo 0,1 N determinando el punto nal potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de solucio n de yodo 0,1 N equivale a 2,63 mg de (NH2)2 2HCl. No se encuentra menos de 98%.
&
Cambio en la redaccio n: Diclorhidrato de N-(1-Naftil)etilendiamina, C10H7NH(CH2)2NH2 2HCl259,17 &[1465-25-4]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: 2,4-Dicloro-1-naftol, C10H6OCl2213,06 &[2050-76-2]&1S (USP30) Polvo tostado claro. Intervalo de fusio n h741i: entre 1038 y 1078, pero el intervalo entre el comienzo y el nal de la fusio n no excede de 28. Cambio en la redaccio n: 2,5-Dicloroanilina, Cl2C6H3NH2162,02 &[95-82-9]&1S (USP30) Cristales blancos similares a agujas. Poco soluble en agua; soluble en alcohol y en e ter. Intervalo de fusio n, Clase I h741i: entre 498 y 508. Cambio en la redaccio n: 2,6-Dicloroanilina, C6H5Cl2N162,02 &[608-31-1]&1S Polvo blanquecino. Intervalo de fusio n h741i: entre 388 y 418.
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Diclorhidrato de N,N-Dimetil-p-fenilendiamina, (CH3)2NC6H4NH2 2HCl209,12 &[99-89-9]&1S (USP30)So lido higrosco pico, cristalino, no, casi blanco que puede tener un tinte rosado. Fa cilmente soluble en agua; soluble en alcohol.
4029
Cambio en la redaccio n: o-Diclorobenceno, C6H4Cl2147,00 &[95-50-1]&1S (USP30) L quido transparente, con un leve tinte marro n amarillento (aproximadamente APHA 20). Pra cticamente insoluble en agua. Miscible con alcohol y con e ter. Alcanza el punto de ebullicio n aproximadamente a 1808. Valoracio nCuando se examina mediante cromatograf a de gasl quido, en condiciones adecuadas y con aparatos adecuados, presenta una pureza de no menos de 98%. Densidad: entre 1,299 y 1,301. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,548 y 1,550 a 258. Residuo de evaporacio nEvaporar 80 mL en un ban o de vapor y secar a 1058 durante 1 hora: el residuo no pesa ma s de 50 mg (0,005%). AcidezAgregar fenolftale na SR a 25 mL de metanol y valorar con hidro xido de potasio alcoho lico 0,02 N SV hasta que persista un leve color rosado durante 15 segundos. Pipetear 25 mL de la muestra de prueba y transferir a la solucio n, mezclar, evitando la exposicio n a la atmo sfera y valorar con hidro xido de potasio alcoho lico 0,02 N SV: no se requieren ma s de 2,2 mL para restablecer el color rosado (aproximadamente 0,005%). Cambio en la redaccio n: 2,6-Diclorofenol-indofenol So dico (2 ,6-Dicloro-indofenol So dico ), O: C 6 H 2 Cl 2 : NC 6 H 4 ONa con aproximadamente 2H2O290,08 (anhidro) &[620-45-1]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Diclorouoresce na, C20H10Cl2O5401,20 &[76-54-0]&1S (USP30) [NOTAEsta especicacio n abarca tanto al iso mero 4,5 como al iso mero 2,7 de diclorouoresce na, cualquiera de los cuales es adecuado para preparar diclorouoresce na SR.] Polvo cristalino de color anaranjado tenue. Moderadamente soluble en agua; soluble en alcohol y en soluciones de hidro xidos alcalinos. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos)Incinerar 200 mg con 5 gotas de a cido sulfu rico: el residuo no pesa ma s de 1 mg (0,5%). SensibilidadDisolver 100 mg en 60 mL de alcohol, agregar 2,5 mL de hidro xido de sodio 0,1 N y diluir con agua hasta completar 100 mL. Agregar 1 mL de esta solucio n a una solucio n de yoduro de potasio que se prepara disolviendo 100 mg de yoduro de potasio, previamente secado a 1058 hasta peso constante y pesado con exactitud, en 50 mL de agua que contenga 1 mL de a cido ace tico glacial, y valorar con nitrato de plata 0,1 N SV hasta que el color del precipitado cambie de anaranjado amarillento claro a rosado. El volumen de nitrato de plata 0,1 N consumido no es ma s de 0,10 mL mayor que el volumen calculado, basa ndose este u ltimo en el contenido de KI de la muestra seca segu n se determina en Valoracio n en Yoduro de Potasio (monograf a de USP). Cambio en la redaccio n: Diclorouorometano, CHCl2F102,92 &[75-43-4]&1S (USP30) Gas incoloro. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de conductividad te rmica y emplear helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,53 mm 6 30 m recubierta con una capa de 5 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 2008; mantener la temperatura del detector a 2008; mantener la temperatura de la columna a 08 y programarla para que aumente 58 por minuto hasta 408, y despue s para que aumente 108 por minuto hasta 1808. El a rea del pico de CHCl2F no es menos de 98% del a rea total.
Cambio en la redaccio n: Dicloruro de Etileno (1 ,2-Dicloroetano), C2H4 Cl2 98,96 [107-06-2]&1S (USP30)Usar 1,2-Dicloroetano de grado reactivo ACS.
&
Cambio en la redaccio n: quido Dietilamina, (C2H5)2NH73,14 &[109-89-7]&1S (USP30)L incoloro, inamable, fuertemente alcalino. Miscible con agua y con alcohol. Forma un hidrato con agua. Puede ser irritante para la piel y las membranas mucosas. Almacenar en envases bien cerrados. Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: N,N-Dietilanilina, C6H5N(C2H5)2149,23 &[91-66-7]&1S (USP30) L quido a mbar a amarillo claro. Valoracio nInyectar una muestra apropiada (aproximadamente 0,2 mL) en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador, que uye a una velocidad de 40 mL por minuto. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna de acero inoxidable de 3 mm 6 1,8 m rellena con fase G16 al 20% sobre soporte S1A; mantener la temperatura del inyector a 2508; mantener la temperatura de la columna a 1408 y programarla para que aumente 68 por minuto hasta alcanzar los 2008. Mantener la temperatura del detector a 3108. El a rea del pico de N,N-dietilanilina con un tiempo de retencio n de aproximadamente 4,9 minutos no es menos de 99% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,5405 y 1,5425 a 208. Cambio en la redaccio n: Dietilenglicol, C4H10O3106,12 &[111-46-6]&1S (USP30)L quido viscoso, higrosco pico, de incoloro a amarillo tenue. Miscible con agua, con alcohol, con e ter y con acetona. Insoluble en benceno y en tetracloruro de carbono. Peso espec co h841i: entre 1,117 y 1,120 a 208. Intervalo de destilacio nh721i: entre 2408 y 2508. AcidezTransferir 54 mL (60 g) a un matraz Erlenmeyer de 250 mL, agregar fenolftale na SR y valorar con hidro xido de potasio alcoho lico 0,02 N SV hasta un color rosado estable durante por lo menos 15 segundos. No se consumen ma s de 2,5 mL (0,005% como CH3COOH). Aguah921i: no ma s de 0,2%. Residuo de incineracio n h281iTransferir 50 g a una ca psula de platino tarada, calentar la ca psula suavemente hasta que los vapores se enciendan y permitir que la muestra se queme por completo. Incinerar el residuo a 800 + 258, enfriar y pesar: el residuo no pesa ma s de 2,5 mg (0,005%). Cambio en la redaccio n: Dietilentriamina, C4H13N3103,17 &[111-40-0]&1S (USP30) L quido incoloro. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con G2. Mantener la temperatura del inyector a 2008; mantener la temperatura de la columna a 1008 y programarla para que aumente 108 por minuto hasta 2508 y se mantenga a esta temperatura durante 5 minutos. Mantener la temperatura del detector a 3008. El a rea del pico principal no es menos de 95% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,4815 y 1,4845 a 208.
4030
Valoracio n Cambio en la redaccio n: Difenilamina, (C6H5)2NH169,22 grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Difenilcarbazida, (C 6 H 5 NHNH) 2 CO 242,28 & [ 140-22-7 ] &1S (USP30)Usar 1,5-Difenilcarbohidrazida de grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Difenilcarbazona [Difenilcarbazona con s-Difenilcarbazida (1 : 1)], C6H5NHNHCON: NC6H5 C6H5NHNHCONHNHC6H5 482,54 &[538-62-5]&1S (USP30)Usar Difenilcarbazona con s-Difenilcarbazida (1 : 1) grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: 2,2-Difenilglicina, C14H13NO2227,26 &[3060-50-2]&1S (USP30) Polvo blanquecino. Funde aproximadamente a 2448, con descomposicio n. Valoracio nDisolver aproximadamente 115 mg, pesados con exactitud, en 30 mL de metanol. Agregar en forma lenta aproximadamente 20 mL de agua, calentando levemente si fuera necesario para completar la disolucio n. Valorar con hidro xido de sodio 0,1 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de hidro xido de sodio 0,1 N equivale a 22,73 mg de C14H13NO2. No se encuentra menos de 98,0%. Cambio en la redaccio n: Digitonina, C56H92O291229,31 &[11024-24-1]&1S (USP30) Polvo cristalino blanco. Casi insoluble en agua; soluble en alcohol tibio, en a cido ace tico glacial y en a cido ace tico al 75 por ciento; insoluble en cloroformo y en e ter. Funde aproximadamente a 2308, con descomposicio n. Rotacio n espec ca h781i: entre 478 y 498, determinada en una solucio n de a cido ace tico al 75 por ciento que contenga 100 mg por mL. Solubilidad en alcoholUna solucio n de 500 mg en 20 mL de alcohol tibio es incolora y completa. Pe rdida por secado h731iSecar a 1058 hasta peso constante: no pierde ma s de 6% de su peso. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): no ma s de 0,3%. Eliminar lo siguiente: 10-11-Dihidrocarbamazepina, C15H14N2O238,28Cristales blancos. Valoracio nCuando se analiza mediante cromatograf a en capa delgada, empleando placas recubiertas con mezcla de gel de s lice para cromatograf a, una fase mo vil constituida por tolueno y metanol (80 : 20), y se examina visualmente y bajo luz UV de longitud de onda larga, se observa una sola mancha.&1S (USP30)
& &
[122-39-4]&1S
(USP30)Usar
una mezcla de agua, acetonitrilo, dietilamina y a cido metanosulfo nico (860 : 100 : 20 : 20) y metanol (82 : 18). PROCEDIMIENTOInyectar aproximadamente 20 mL en un cromato grafo de l quidos adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector a 235 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. El a rea del pico de C20H26N2O2 no es menos de 97,5% del a rea total. Cambio en la redaccio n: Diisopropilamina, [(CH 3 ) 2 CH] 2 NH 101,19 & [ 108-18-9 ] quido incoloro. (USP30)L Valoracio nNo se encuentra menos de 98% de C6H15N, empleando un cromato grafo de gases adecuado equipado con un detector de ionizacio n a la llama. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: rellenar una columna de acero inoxidable de 3,2 mm 6 1,83 m con soporte de poliestireno entrecruzado; mantener la temperatura del inyector a 2508 y la del detector a 3108; programar la temperatura de la columna para que aumente 108 por minuto de 508 a 2208. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,3915 y 1,3935, a 208.
&1S
VILPreparar FASE MO
Cambio en la redaccio n: Diisopropiletilamina (N,N-Diisopropiletilamina), C8H19N 129,24 &[7087-68-5]&1S (USP30)L quido transparente e incoloro. Soluble en a cido ace tico glacial. Valoracio nPesar con exactitud 500 mg, disolver en 50 mL de a cido ace tico glacial, mezclar, agregar cristal violeta SR y valorar con a cido perclo rico 0,1 N SV. Cada mL de a cido perclo rico 0,1 N equivale a 12,92 mg de C8H19N. No se encuentra menos de 98%. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,4125 y 1,4145 a 208. Cambio en la redaccio n: Dimetil Sulfona (Metil Sulfona), (CH3)2SO294,13 (USP30)Cristales blancos. Intervalo de fusio n h741i: entre 1098 y 1118.
&
[67-71-0]
&1S
Cambio en la redaccio n: Dimetil Sulfo xido, Grado Espectrofotome trico&[67-68-5] xido de grado reactivo espectrofoto(USP30)Usar metil sulfo me trico ACS.
&1S
Cambio en la redaccio n: 5 ,5-Dim etil- 1,3-c iclo he xanodiona, C 8 H 1 2 O 2 14 0,18 [126-81-8]&1S (USP30)So lido cristalino blanco. Poco soluble en agua; soluble en alcohol, en metanol, en cloroformo y en a cido ace tico. Intervalo de fusio n h741i: entre 1488 y 1508.
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Cambio en la redaccio n: N , N -Dimetil-1-naftilamina, C 12 H 13 N 171,24 & [ 86-56-6 ] quido aroma tico de color amarillo pa lido a amarillo. &1S (USP30)L Soluble en alcohol y en e ter. Valoracio nTransferir aproximadamente 250 mg, pesados con exactitud, a un vaso de precipitados adecuado, agregar 100 mL de a cido ace tico glacial y mezclar para disolver. Cuando se haya disuelto por completo, valorar con a cido perclo rico 0,1 N SV
Cambio en la redaccio n: Dihidroquinina ( Hidroquinina ), C 2 0 H 2 6 N 2 O 2 326,43 [522-66-7]&1S (USP30)Fa cilmente soluble en acetona, en alcohol y en cloroformo; casi insoluble en agua.
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4031
determinando el punto nal potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de a cido perclo rico 0,1 N equivale a 17,12 mg de C12H13N. No se encuentra menos de 98%. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,62108 y 1,62308, a 208, empleando luz de sodio. Prueba de sulfanilamidaDisolver 20 mg de ER Sulfanilamida USP en 100 mL de agua para obtener la Solucio n de sulfanilamida. Pipetear 1,0 mL y 2,5 mL de la Solucio n de sulfanilamida y transferirlos a sendos vasos de precipitados de 150 mL. Diluir con agua hasta 90 mL. Para el blanco, colocar 90 mL de agua en un tercer vaso de precipitados. Agregar a cada vaso 8,0 mL de solucio n de a cido tricloroace tico (3 en 20) y 1,0 mL de solucio n de nitrito de sodio (1 en 1000). Mezclar las soluciones durante 5 minutos, luego agregar 10 mL de solucio n amortiguadora de acetato SR y 1,0 mL de una solucio n 1 en 1000 de N,N-dimetil-1-naftilamina en alcohol. El pH es de aproximadamente 5 a 6, usando papel indicador de pH. Mezclar otros 5 minutos y luego agregar 20 mL de a cido ace tico glacial. El pH es de aproximadamente 3 a 4, usando papel indicador de pH. En comparacio n con el blanco, el vaso de precipitados que contiene 1,0 mL de la Solucio n de sulfanilamida presenta un color rosado, mientras que el otro presenta un color de rosado intenso a rojo. Cambio en la redaccio n: N,N-Dimetilacetamida, C4H9NO87,12 &[127-19-5]&1S (USP30) L quido transparente e incoloro. Miscible con agua y con muchos disolventes orga nicos. Valoracio nCuando se examina mediante cromatograf a de gasl quido, empleando un aparato y condiciones adecuadas, muestra una pureza de no menos de 99%. Intervalo de destilacio n h721i: entre 164,58 y 167,58. Residuo de evaporacio nEvaporar 215 mL en un ban o de vapor y secar a 1058 durante 1 hora: el residuo no pesa ma s de 2 mg (0,001%). pH de una solucio n al 20%Pesar 20 g del art culo, colocar en un matraz volume trico de 100 mL y diluir a volumen con agua exenta de dio xido de carbono: la solucio n presenta un pH entre 4,0 y 7,0. Absorcio n en el ultravioletaDeterminar su absorbancia en el intervalo de 270 a 400 nm, usando una celda de 1 cm, un espectrofoto metro adecuado y agua para ajustar el instrumento: la absorbancia no excede 1,00 a 270 nm; 0,30 a 280 nm; 0,15 a 290 nm; 0,05 a 310 nm; 0,03 a 320 nm; y 0,01 de 360 a 400 nm. Agua, Me todo I h921i: no ma s de 0,05%. Cambio en la redaccio n: p-Dimetilaminoazobenceno (Amarillo de Metilo, Amarillo Mantequilla ), C 6 H 5 N: NC 6 H 4 N(CH 3 ) 2 225,29 & [ 60-11-7 ] &1S (USP30)Laminillas amarillas o polvo cristalino amarillo. SolubilidadInsoluble en agua; moderadamente soluble en cloroformo, en e ter o en a cidos grasos. Disolver 100 mg en 20 mL de alcohol: la solucio n es completa o pra cticamente completa y transparente. Intervalo de fusio n h741i: entre 1158 y 1178. Residuo de incineracio n h281i: no ma s de 0,1%. SensibilidadAgregar 0,05 mL de una solucio n en alcohol (1 en 200) y 2 g de cloruro de amonio a 25 mL de agua exenta de dio xido de carbono: el color amarillo limo n de la solucio n se torna anaranjado por la adicio n de 0,05 mL de a cido clorh drico 0,1 N y se restablece con la adicio n subsiguiente de 0,05 mL de hidro xido de sodio 0,1 N. Cambio en la redaccio n:
&
Cambio en la redaccio n: 2,6-Dimetilanilina, C8H11N121,18 &[87-62-7]&1S (USP30) L quido amarillo. ndice de refraccio I n h831i: aproximadamente 1,5609, a 208. Cambio en la redaccio n: N , N -Dimetilanilina, C 6 H 5 N(CH 3 ) 2 121,18 & [ 121-69-7 ] quido amarillo claro. L quido transparente, incoloro (USP30)L cuando esta recie n destilado, pero que adquiere un color rojizo a marro nrojizo. Peso espec co: aproximadamente 0,960. Punto de congelacio n aproximadamente 28. Insoluble en agua; soluble en alcohol, en cloroformo, en e ter y en a cidos minerales diluidos. Valoracio nInyectar una muestra apropiada (aproximadamente 0,2 mL) en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, empleando helio como gas transportador con una velocidad de ujo de aproximadamente 40 mL por minuto. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna de acero inoxidable de 3 mm 6 1,8 m con fase G16 al 20% sobre un soporte S1A; la temperatura del inyector se mantiene a 2508, la temperatura de la columna se mantiene a 508 y se programa para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2008. Mantener la temperatura del detector a 3108. El a rea del pico de N,N-dimetilanilina, con un tiempo de retencio n de aproximadamente 11,5 minutos, no es menos de 99% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,5571 y 1,5591 a 208. Intervalo de ebullicio n (Prueba para reactivos)Destilar 100 mL: la diferencia entre las temperaturas observadas, cuando se han destilado 1 mL y 95 mL, no es mayor de 2,58. Su temperatura de ebullicio n a una presio n de 760 mm de mercurio es de 194,28. HidrocarburosDisolver 5 mL en una mezcla de 10 mL de a cido clorh drico y 15 mL de agua: se produce una solucio n transparente y permanece transparente al enfriarse hasta aproximadamente 108. Anilina o monometilanilinaColocar 5 mL en un matraz con tapo n de vidrio, agregar 5 mL de una solucio n de anh drido ace tico en benceno (1 en 10), mezclar y dejar reposar durante 30 minutos. Agregar 30,0 mL de hidro xido de sodio 0,5 N SV, agitar la mezcla, agregar fenolftale na SR y valorar con a cido clorh drico 0,5 N SV. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. La muestra de prueba no consume ma s de 0,30 mL de hidro xido de sodio 0,5 N.
&1S
Cambio en la redaccio n: 3,4-Dimetilbenzofenona, C 15 H 14 O 210,27 & [ 2571-39-3 ] (USP30)Terrones blancos que funden aproximadamente a 458. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con fase G1: mantener la temperatura del detector y la del inyector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 1808 y programarla para que aumente a una velocidad de 108 por minuto hasta 2808 y se mantenga a esa temperatura durante 10 minutos. El a rea del pico principal no es menor de 99% del a rea total.
&1S
Cambio en la redaccio n: 2,6-Dimetilfenol, (CH3)2C6H3OH122,16 &[576-26-1]&1S (USP30) So lido cristalino de color blanco a amarillo pa lido. Valoracio nInyectar una solucio n 1 en 3 del art culo en xileno en un cromato grafo de gases adecuado equipado con un detector de ionizacio n a la llama, empleando helio como gas transportador que uye a una velocidad de aproximadamente 40 mL por minuto. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna de acero inoxidable de 3,2 mm 6 1,83 m rellena con fase G25 al 10%
p -Dimetilaminobenzaldeh do, (CH 3 ) 2 NC 6 H 4 CHO 149,19 [100-10-7]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
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sobre soporte S1A; mantener la temperatura del inyector aproximadamente a 2508 y la del detector a 3108; y programar la temperatura de la columna para que aumente 88 por minuto desde 1008 a 2008. Inyectar de manera similar una muestra de xileno. El a rea del pico de C8H10O no es menor del 98% del a rea total, corregida por xileno. Intervalo de fusio n h741i: entre 448 y 468. Cambio en la redaccio n: Dimetilformamida (N,N-Dimetilformamida), HCON(CH3)2 73,09 &[68-12-2]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Eliminar lo siguiente:
& N,N-Dimetilformamida Dietil Acetal147,22 [1188-33-6] Usar un grado adecuado. [NOTASe puede obtener un grado adecuado de Sigma-Aldrich, www.sigma-aldrich.com].&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: m-Dinitrobenceno, C6H4(NO2)2168,11 &[99-65-0]&1S (USP30) Polvo cristalino o cristales amarillo pa lido. Casi insoluble en agua fr a; poco soluble en agua caliente. Soluble en cloroformo y en benceno; moderadamente soluble en alcohol. Vola til en vapor. Intervalo de fusio n h741i: entre 898 y 928. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): no ma s de 0,5%. Cambio en la redaccio n: 2,4-Dinitroclorobenceno, C6H3(NO2)2Cl202,55 &[97-00-7] &1S (USP30)Cristales de color amarillo a amarillo amarronado. Insoluble en agua; soluble en alcohol caliente, en e ter y en benceno. Intervalo de fusio n h741i: entre 518 y 538. Residuo de incineracio nIncinerar 500 mg con 5 gotas de a cido sulfu rico: el residuo no pesa ma s de 1 mg (0,2%). Cambio en la redaccio n:
Cambio en la redaccio n: N , N -Dimetiloctilamina, C 1 0 H 2 3 N 157,30 quido incoloro. &1S (USP30)L ndice de refraccio I n h831i: 1,4243 a 208. Cambio en la redaccio n: 2,5-Dimetoxibenzaldeh do, C 9 H 10 O 3 166,17 & [ 93-02-7 ] (USP30)Cristales blanquecinos. Valoracio nInyectar una muestra apropriada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama y emplear nitro geno como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,3 mm 6 30 m recubierta con fase G1; mantener la temperatura del inyector a 2708; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 1508 y programarla para que aumente 108 por minuto hasta 2708. El a rea del pico principal no es menos de 97% del a rea total. Intervalo de fusio n h741i: entre 508 y 528. Cambio en la redaccio n: 1,2-Dimetoxietano, C4H10O290,12 &[110-71-4]&1S (USP30) L quido incoloro y transparente. Miscible con agua y con alcohol. Soluble en disolventes hidrocarbonados. En reposo, puede formar pero xidos. Intervalo de ebullicio n (Prueba para reactivos)No menos de 95% destila entre 838 y 868. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,379 y 1,381, a 208. AcidezAgregar azul de bromofenol SR a 20 mL y valorar con hidro xido de sodio 0,020 N: no se consumen ma s de 2,0 mL (aproximadamente 0,015% como CH3COOH). Agua, Me todo Ih921i: no ma s de 0,2%. Cambio en la redaccio n: (3,4-Dimetoxifenil)acetonitrilo ( Homoveratronitrilo ), C10H11NO2177,20 &[93-17-4]&1S (USP30)Fibras blanquecinas. Intervalo de fusio n h741i: entre 658 y 678.
&
[ 7378-99-6 ]
&1S
2,4-Dinitrofenilhidrazina, 2,4-C 6 H 3 (NO 2 ) 2 NHNH 2 198,14 [119-26-6]&1S (USP30)Cristales de color rojo anaranjado, que en el microscopio se observan individualmente como agujas en forma de listones de color amarillo limo n. Muy poco soluble en agua; poco soluble en alcohol; moderadamente soluble en a cidos inorga nicos diluidos. Intervalo de fusio n h741i: entre 1978 y 2008. Solubilidad en a cido sulfu ricoDisolver 500 mg en una mezcla de 25 mL de a cido sulfu rico y 25 mL de agua: la solucio n es transparente o no ma s que levemente turbia. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): inapreciable, usando 500 mg.
&
Cambio en la redaccio n: 2,4-Dinitrouorobenceno (1-Fluoro-2,4-dinitrobenceno), C6H3FN2O4186,10 &[70-34-8]&1S (USP30)So lido de color amarillo claro. Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n:
&
Dioxano (Dio xido de Dietileno; 1,4-Dioxano), C4H8O288,11 [123-91-1]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
Cambio en la redaccio n: xido de Manganeso (IV) Dio xido de Manganeso Activado (O Activado), MnO286,94 &[1313-13-9]&1S (USP30)Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: Disulfuro de Carbono, CS2 &[75-15-0]&1S reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: cido 2-Nitrobenzoico) (Disulfuro de 3-carboxi5,5-Ditio bis (A 4-nitrofenilo; Reactivo de Ellman ), C 14 H 8 N 2 O 8 S 2 396,35 & [69-78-3]&1S (USP30)Polvo amarillo; funde aproximadamente a 2428. Moderadamente soluble en alcohol.
(USP30)Usar
grado
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Cambio en la redaccio n: Ditiotreitol (Reactivo de Cleland, Treo-1,4-dimercapto-2,3butanodiol, DTT) HSCH2CH(OH)CH(OH)CH2SH154,25 & [3483-12-3]&1S (USP30)Agujas levemente higrosco picas obtenidas a partir de e ter. Fa cilmente soluble en agua, en alcohol, en acetona, en acetato de etilo y en e ter. Intervalo de fusio n h741i : entre 428 y 448. Cambio en la redaccio n: cido Fenilazotiofo Ditizona (Difeniltiocarbazona; A rmico 2Fenilhidrazida), C6H5N: NCSNHNHC6H5256,33 &[60-10-6] &1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Diyodouoresce na, C 2 0 H 1 0 I 2 O 5 584,10 & [ 31395-16-1 ] (USP30)Polvo de color rojo anaranjado. Poco soluble en agua; soluble en alcohol y en soluciones de hidro xidos alcalinos. Residuo de incineracio nIncinerar 200 mg con 5 gotas de a cido sulfu rico: el peso del residuo no excede de 1,0 mg (0,5%). SensibilidadPesar con exactitud aproximadamente 100 mg de yoduro de potasio, previamente secados a 1058 hasta peso constante, y disolverlo en 50 mL de agua. Agregar 1 mL diyodouoresce na SR preparada a partir de la muestra de prueba y 1 mL de a cido ace tico glacial, y valorar con nitrato de plata 0,1 N SV hasta que el color del precipitado cambie de rojo amarronado a rojo azulado. El volumen de nitrato de plata 0,1 N consumido no excede de 0,10 mL del volumen calculado, basado en el contenido de KI del yoduro de potasio seco determinado del siguiente modo. Disolver aproximadamente 500 mg de yoduro de potasio, pesados con exactitud, en aproximadamente 10 mL de agua y agregar 35 mL de a cido clorh drico y 5 mL de cloroformo. Valorar con yodato de potasio 0,05 M SV hasta que el color pu rpura del yodo desaparezca del cloroformo. Agregar gota a gota las u ltimas porciones de la solucio n de yodato, agitando de manera vigorosa y continua. Despue s de que el cloroformo se haya decolorado, dejar la mezcla en reposo durante 5 minutos. Si en el cloroformo aparece un color pu rpura, valorar otra vez con la solucio n de yodato. Cada mL de yodato de potasio 0,05 M equivale a 16,60 mg de KI. Agregar lo siguiente:
& Docusato So dicoUsar Docusato So dico (monograf a de la USP).&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: Eosina Y (Eosina Amarillenta Y) (Eosina Y Biolo gica Certicada, Tetrabromouoresce na So dica), C20H6Br4Na2O5 691,85 &[17372-87-1]&1S (USP30)Polvo o trozos de color rojo a rojo amarronado. Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Epiandrosterona, C19H30O2290,44 &[481-29-8]&1S (USP30) Polvo cristalino blanco. Valoracio nCuando se analiza por cromatograf a en capa delgada (ver Cromatograf a h621i), con placas recubiertas con mezcla de gel de s lice para cromatograf a y una fase mo vil constituida por una mezcla de tolueno y etanol (9 : 1), y se examina bajo luz UV de longitud de onda corta, se observa una sola mancha con trazas de impurezas. Intervalo de fusio n h741i: entre 1728 y 1778. Cambio en la redaccio n: Equilenina, C18H18O2266,33 &[517-09-9]&1S (USP30)Polvo cristalino o cristales incoloros o blancos. Insoluble en agua; soluble en cloroformo y en dioxano; moderadamente soluble en alcohol. Intervalo de fusio n, Clase II h741i: entre 2568 y 2608. Rotacio n espec ca h781i: entre +858 y +888, determinada en una solucio n en dioxano que contenga 75 mg de equilenina cada 10 mL. Absorcio n ma ximaUna solucio n en alcohol presenta ma ximos de absorcio n a 231, 282, 325 y 340 nm. Cambio en la redaccio n: Eriocromo Cianina R, C23H15Na3O9S536,40 &[3564-18-9] n rojizo oscuro. Fa cilmente soluble en (USP30)Polvo marro agua; insoluble en alcohol. Solubilidad200 mg en 100 mL de agua producen una solucio n que permanece transparente y exenta de materia no disuelta durante 30 minutos. Pe rdida por secado h731iSecar al vac o sobre gel de s lice hasta peso constante: no pierde ma s de 2% de su peso. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos)0,5 g, tratado con 1 mL de a cido sulfu rico y 2 mL de a cido n trico, produce entre 42,0% y 44,0% del peso seco (el producto teo rico es 42,9% de Na2SO4). SensibilidadAgregar 2 mL de una solucio n (1 en 1000) a 1 mL de solucio n de sulfato de aluminio (1 en 10 000), calentar a 37 + 38 durante 5 minutos, enfriar y agregar 1 mL de acetato de sodio SR. Se produce un color entre rojo fuerte y violeta rojizo en no ma s de 5 minutos.
&1S
&1S
&
1-Dodecanol (Alcohol Dodec lico), CH3(CH2)11OH186,33 [112-53-8]&1S (USP30)L quido transparente e incoloro. Cristaliza como laminillas a partir de una solucio n de alcohol diluido. Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n:
Cambio en la redaccio n: Erucato de Metilo, C23H44O2352,59 &[1120-34-9]&1S L quido incoloro. Cambio en la redaccio n: xido Nitroso & [ 10024-97-2 ] Esta ndar Certicado de O xido nitroso 99,9%. Se puede obtener de (USP30)Envase de o la mayor a de los proveedores de gases especiales.
&1S
(USP30)
lido crisn-Eicosano, C20H42282,55 &[112-95-8]&1S (USP30)So talino blanco. Intervalo de fusio n h741i: entre 378 y 398. Cambio en la redaccio n: Eicosanol&[629-96-9]&1S
(USP30)Usar
un grado adecuado.
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Cambio en la redaccio n: Estearato de Metilo, C19H38O2298,50 &[112-61-8]&1S (USP30) So lido cristalino blanquecino. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: usar una columna capilar recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 3008; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 2008 y programarla para que aumente 108 por minuto hasta 3008. El a rea del pico de C19H38O2 no es menos de 99% del a rea total. Intervalo de fusio n h741i: entre 408 y 428. Cambio en la redaccio n: s t e r Is o p ro p cido 4-Hidroxibenzoico, E li c o de l A HOC6H4COOCH(CH2)2180,18 &[4191-73-5]&1S (USP30)Usar un grado adecuado. [NOTASe puede obtener un grado adecuado de TCI America, www.tciamerica.com.] Intervalo de fusio n h741i: entre 848 y 878. Cambio en la redaccio n: ter But ter n-Dibut E lico (E lico), C8H18O130,23 &1S (USP30)Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: ter de Petro E leo (Bencina de Petro leo; Solvente Hexano, quido transparente y vola til. Ligro na)&[8032-32-4]&1S (USP30)L Pra cticamente insoluble en agua; soluble en alcohol absoluto. Miscible con e ter, con cloroformo, con benceno y con la mayor a de los aceites jos y vola tiles. Precaucio nEs sumamente inamable. Mantener alejado de las llamas y almacenar en envases impermeables en un lugar fresco. ter de Petro Usar E leo grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: ter Difen ter Fen E lico (E lico), (C6H5)2O170,21 &[101-84-8] quido incoloro. Insoluble en agua; soluble en a cido (USP30)L ace tico glacial y en la mayor a de los disolventes orga nicos. Alcanza la ebullicio n aproximadamente a 2598. Intervalo de fusio n h741i: entre 268 y 288.
&1S
Residuo de evaporacio n[NotaSi hubiera pero xido, no efectuar este procedimiento.] Evaporar 14 mL (10 g) en una ca psula tarada poco profunda y secar a 1058 durante 1 hora: el residuo no pesa ma s de 1 mg (0,01%). AcidezA 10 mL de agua contenidos en un matraz de 50 mL con tapo n de vidrio, agregar 2 gotas de azul de bromotimol SR y valorar con hidro xido de sodio 0,010 N hasta que persista un color azul despue s de agitar vigorosamente. Agregar 5 mL de eter diisoprop lico y valorar con hidro xido de sodio 0,010 N: no se requieren ma s de 0,30 mL para restaurar el color azul (0,005% como CH3COOH). NOTAPara las determinaciones espectrofotome tricas, utilizar e ter diisoprop lico que cumpla con el siguiente requisito adicional: AbsorbanciaLa absorbancia a 255 nm, en una celda de cuarzo de 10 mm, no excede de 0,2 utilizando agua como blanco. Cambio en la redaccio n: ter Et ter; E ter), (C2H5)2O74,12 E lico (Dietil E (USP30)Usar grado reactivo ACS.
&
[60-29-7]
&1S
Cambio en la redaccio n: ter Et ter Anhidro; E ter Absoluto), E lico Anhidro (Dietil E (C2H5)2O74,12 &[60-29-7]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n:
&
[142-96-1] Etilbenceno, C8H10106,17 &[100-41-4]&1S de 99,5%. Cambio en la redaccio n: 4-Etilbenzaldeh do, C2 H 5 C 6 H 4 CHO 134,18 & [ 4748-78-1 ] quido incoloro a amarillo pa lido. (USP30)L Valoracio nDisolver aproximadamente 600 mg, pesados con exactitud, en una mezcla de 100 mL de alcohol y 25 mL de clorhidrato de hidroxilamina 1 M en un vaso de precipitados. Cubrir el vaso de precipitados con un vidrio de reloj. Calentar moderadamente hasta que comience a formarse un condensado sobre el vidrio de reloj. Dejar que se enfr e durante aproximadamente 30 minutos. Valorar con hidro xido de sodio 0,5 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de hidro xido de sodio 0,5 N equivale a 67,09 mg de C2H5C6H4CHO. No se encuentra menos de 98%.
&1S
(USP30)No
menos
Cambio en la redaccio n: Etilenglicol, HOCH2CH2OH62,07 &[107-21-1]&1S (USP30) L quido transparente, incoloro, levemente viscoso e higrosco pico. Poco soluble en e ter; pra cticamente insoluble en benceno. Miscible con agua y con alcohol. Peso espec co h841i: aproximadamente 1,11. Intervalo de ebullicio n (Prueba para reactivos): entre 1948 y 2008. Residuo de incineracio nEvaporar 100 mL (110 g) en una ca psula de evaporacio n tarada sobre una llama hasta que los vapores continu en ardiendo despue s de quitar la llama. Dejar que los vapores ardan hasta que la muestra se consuma. Incinerar a 8008 + 258 durante 1 hora, enfriar y pesar: el residuo no pesa ma s de 5,5 mg (0,005%). AcidezAgregar 0,2 mL de rojo de fenol SR a 50 mL de agua y valorar con hidro xido de sodio 0,1 N hasta un punto nal rojo. Agregar 50 mL (55 g) de etilenglicol y valorar con hidro xido de sodio 0,1 N: no se requiere ma s de 1 mL para restituir el color rojo (0,01% como CH3COOH).
Cambio en la redaccio n: ter Diisoprop ter Isoprop E lico (E lico) [(CH3)2CH]2O102,17 [108-20-3]&1S (USP30)L quido mo vil e incoloro. Poco soluble en agua. Miscible con alcohol y con e ter. [Precaucio nEs sumamente inamable. No usar donde pueda encenderse. No evaporar hasta el punto pro ximo a sequedad, ya que tiende a formar pero xidos explosivos.] Peso espec co: entre 0,716 y 0,720. Intervalo de destilacio n, Me todo IIh721iNo menos de 95% destila entre 658 y 708. Pero xidosA 10 mL, contenidos en una probeta limpia con tapo n de vidrio previamente enjuagada con una porcio n del e ter en ana lisis, agregar 1 mL de solucio n de yoduro de potasio (1 en 10) recie n preparada. Agitar y dejar en reposo durante 1 minuto: no se observa color amarillo en ninguna de las dos capas (aproximadamente 0,001% como H2O2).
&
4035
Cloruros (Prueba para reactivos)Una porcio n de 4,5 mL (5 g) no presenta ma s de 0,025 mg de Cl (5 ppm). Agua, Me todo I h921i: no ma s de 0,20%. Cambio en la redaccio n: ter), C4H10O290,12 2-Etoxietanol (Etilenglicol Monoetil E [ 110-80-5 ] & 1 S ( U SP 30 ) L quido incoloro y transparente. & ter y acetona. &1S (USP30) Miscible con agua, alcohol, e Peso espec co h841i: aproximadamente 0,93. Intervalo de ebullicio n (Prueba para reactivos)No menos de 95% destila entre 1338 y 1358.
&
Preparacio n para Valoracio n de DigitoxinaPara asegurar la ausencia de amon aco, tratar la Formamida del siguiente modo. Agitar una cantidad adecuada de formamida con aproximadamente 10% de su peso de carbonato de potasio anhidro durante 15 minutos y ltrar. Destilar el ltrado, en un aparato que sea totalmente de vidrio, al vac o a una presio n de aproximadamente 25 mm de mercurio o menor. Desechar la primera porcio n del destilado que contiene agua y recoger la fraccio n que ebulle a aproximadamente 1158 a una presio n de 25 mm de mercurio o a 1018 a una presio n de 12 mm de mercurio. Almacenar en envases impermeables. Proteger de la luz. Cambio en la redaccio n: cido Diamo Fosfato Diba sico de Amonio (Fosfato A nico), (NH4)2HPO4132,06 &[7783-28-0]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Fosfato Monoba sico de Amonio (Fosfato Dia cido de Amonio), NH4H2PO4115,03 &[7722-76-1]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n:
Cambio en la redaccio n: Fluoreno, C13H10166,22 &[86-73-7]&1S (USP30)Polvo o cristales blancos a blanquecinos. Soluble en benceno, en disulfuro de carbono, en e ter y en alcohol caliente; fa cilmente soluble en a cido ace tico glacial. Prueba de solubilidadUn g se disuelve en 10 mL de acetona para producir una disolucio n completa y transparente. Intervalo de fusio n h741i: entre 1138 y 1178, dentro de un intervalo de 28. Cambio en la redaccio n: Fluorescamina, C17H10O4278,26 &[38183-12-9]&1S (USP30) Polvo blanco a blanquecino. Muy poco soluble en agua; fa cilmente soluble en cloruro de metileno; soluble en alcohol; poco soluble en cloroformo. Valoracio nDisolver aproximadamente 600 mg en 75 mL de dimetilformamida y valorar con meto xido de litio 0,1 N hasta un punto nal azul, usando azul de timol al 1% en dimetilformamida como indicador. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de meto xido de litio 0,1 N equivale a 27,83 mg de C17H10O4. No se encuentra menos de 99%. Pe rdida por secado h731iSecar a 1058 durante 4 horas: no pierde ma s de 0,5% de su peso. Cambio en la redaccio n: 4 -Fluoroacetofenona, FC6 H 4 COCH 3 138,14 & [ 403-42-9 ] quido incoloro. (USP30)L Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 2008; la temperatura del detector a 2508; y la temperatura de la columna a 1008 y programada para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2508. El a rea del pico de FC6H4COCH3 no es menos de 99% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: 1,510 a 208.
&1S
Ftalato de Bis(2-etilhexilo), C6H4-1,2[COOCH2(C2H5)CH(CH2)3CH3]2390,56 &[117-81-7]&1S (USP30) L quido incoloro a amarillo claro. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,4855 y 1,4875, a 208. Cambio en la redaccio n: Ftalato de Dibutilo, C16H22O4278,34 &[84-74-2]&1S (USP30) L quido transparente e incoloro. Valoracio nPesar con exactitud aproximadamente 2 g en un matraz adecuado, agregar 25,0 mL de hidro xido de sodio 1 N y 30 mL de alcohol isoprop lico, y mezclar. Digerir la mezcla a una temperatura aproximada a la de ebullicio n durante 30 minutos, despue s enfriar en un ban o de agua a temperatura ambiente. Agregar fenolftale na SR y valorar con a cido sulfu rico 1 N SV hasta que desaparezca el color rosado. Realizar una determinacio n completa con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de a cido sulfu rico 1 N consumido equivale a 139,2 mg de C16H22O4. No se encuentra menos de 98%. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,491 y 1,493, a 208. Contenido de a cidoPesar con exactitud aproximadamente 10 g y disolver en 100 mL de una mezcla de alcohol y e ter (1 : 1). Agregar fenolftale na SR y valorar de inmediato con hidro xido de potasio alcoho lico 0,05 N SV. Cada mL de hidro xido de potasio alcoho lico 0,05 N equivale a 4,15 mg de a cido fta lico: no se encuentra ma s de 0,02%. Cambio en la redaccio n: Ftalato de Diisodecilo [Ftalato de bis(isodecilo)], C28H46O4 446,66 &[26761-40-0]&1S (USP30)Usar un grado adecuado.
Cambio en la redaccio n: Fluoruro de Amonio, NH4F37,04 &[12125-01-8]&1S Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Formamida, HCONH 2 45,04 grado reactivo ACS.
&
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Ftalato de Dimetilo, C10H10O4194,19 &[131-11-3]&1S L quido viscoso e incoloro. Valoracio n
(USP30)
[ 75-12-7 ] & 1S
( USP30 ) Usar
4036
VILPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de nFASE MO heptano para cromatograf a y alcohol n-prop lico (grado HPLC) (97 : 3). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). N ESTA NDARDisolver una cantidad adecuada de ftalato SOLUCIO de dimetilo en Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,26 mg por mL. PROCEDIMIENTOInyectar aproximadamente 20 mL en un cromato grafo de l quidos adecuado (ver Cromatograf a h621i), equipado con un detector a 238 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L10. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. El a rea del pico de ftalato de dimetilo no es menos de 99% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,514 y 1,518, a 208.
AptitudDisolver 10 mg de ER Digitoxina USP, previamente secados, 10 mg de ER Digoxina USP, previamente secados, y 10 mg de gitoxina en sendas porciones de 5 mL de una mezcla de 2 partes de cloroformo y 1 parte de metanol, y diluir cada una con fase mo vil adicional hasta 10 mL. Luego proceder segu n se indica en Prueba de identicacio n en Digoxina. El cromatograma de la gitoxina muestra una mancha uorescente ubicada entre las manchas de digoxina y digitoxina. Cambio en la redaccio n: Glicerina (Glicerol)&[56-81-5]&1S grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Glucosa, C6H12O6180,2 &[50-99-7]&1S (USP30)Usar un grado adecuado. Polvo blanco cristalino. &&1S (USP30) Fa cilmente soluble en agua; moderadamente soluble en alcohol. Cambio en la redaccio n:
D-Glucuronolactona, C6H8O6176,12 Usar un grado adecuado.
&
(USP30)Usar
Glicerol de
Cambio en la redaccio n: Ftalato de Dipropilo, C14H18O4250,29 &[131-16-8]&1S (USP30) L quido viscoso incoloro. Valoracio n VILPreparar una mezcla de acetonitrilo y agua (52 : 48). FASE MO PROCEDIMIENTO Inyectar aproximadamente 20 mL en un cromato grafo de l quidos adecuado (ver Cromatograf ah621i), equipado con un detector a 230 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2,0 mL por minuto. El a rea del pico de C14H18O4 no es menos de 99% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,495 y 1,499 a 208. Cambio en la redaccio n: Fucsina Ba sica&[632-99-5]&1S (USP30)Una mezcla de clorhidratos de rosanilina y pararosanilina. Cristales o fragmentos cristalinos con un lustre de color de bronce verdoso brillante. Soluble en agua, en alcohol y en alcohol am lico. A 10 mL de una solucio n (1 en 500), agregar 10 mL de amon aco SR y 500 mg de polvo de cinc y agitar la mezcla: la solucio n se vuelve incolora. Colocar algunas gotas de la solucio n decolorada sobre papel de ltro y cerca, sobre el mismo papel, colocar algunas gotas de a cido clorh drico diluido: se produce un color rojo en la zona de contacto. Pe rdida por secado h731iSecar a 1058 hasta peso constante: no pierde ma s de 5,0% de su peso. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos)Incinerar 1 g con 0,5 mL de a cido sulfu rico: el residuo no pesa ma s de 3 mg (0,3%). Cambio en la redaccio n: Gel de S lice Octadecilsilanizada para Cromatograf aUsar un grado adecuado. [NOTASe puede obtener comercialmente un grado adecuado como Reversed Phase Uniplates de &Analtech, www.analtech. com.&1S (USP30).] Cambio en la redaccio n: Gitoxina, C41H64O14780,94 &[4562-36-1]&1S (USP30)Polvo cristalino blanco. Pra cticamente insoluble en agua, en cloroformo y en e ter; poco soluble en piridina y en alcohol diluido. Funde aproximadamente a 2508, con descomposicio n. Rotacio n espec ca h781i: entre +3,88 y +4,88, determinada en una solucio n de piridina que contenga 10 mg por mL, usando una luz de mercurio a 546,1 nm; entre +218 y +258, determinada en una solucio n de partes iguales de cloroformo y metanol que contenga 5 mg por mL, usando una luz de sodio.
[32449-92-6]&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Guayacol (o-Metoxifenol), C 7 H 8 O 2 124,14 & [ 95-05-1 ] quido refractivo, de incoloro a amarillento. Soluble (USP30)L en aproximadamente 65 partes de agua; soluble en solucio n de hidro xido de sodio; miscible con alcohol, con cloroformo, con e ter y con a cido ace tico glacial. Valoracio nCuando se examina mediante cromatograf a de gasl quido, presenta una pureza de no menos de 98%. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas para valorarlo: una columna de acero inoxidable de 3 mm 6 1,8 m rellena con fase l quida G16 sobre soporte S1A de malla 60 a 80. Usar helio como gas transportador; mantener la temperatura del inyector a 1808, la temperatura de la columna a 2008 y la temperatura del detector de ionizacio n a la llama a 2808. El tiempo de retencio n es de aproximadamente 8 minutos. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,5430 y 1,5450, a 208.
&1S
Cambio en la redaccio n: Hemate na, C16H12O6300,26 &[475-25-2]&1S (USP30)Preparada a partir de extracto de palo de Campeche o de hematoxilina mediante tratamiento con amon aco y exposicio n al aire. Cristales de color marro n rojizo con un brillo meta lico verde amarillento. Muy poco soluble en agua (aproximadamente 1 en 1700); poco soluble en alcohol y en e ter; insoluble en benceno y en cloroformo; fa cilmente soluble en solucio n de amon aco diluido, para formar una solucio n de color rojo pu rpura oscuro, y en una solucio n acuosa de hidro xido de sodio (1 en 50), para formar una solucio n roja brillante, observadas en cada caso a trave s de una capa de 1 cm de profundidad. Funde a una temperatura superior a 2008 y tiende a descomponerse a 2508. Cambio en la redaccio n: Hematoxilina ( Hidroxibrasilina ), C16 H 14 O6 3H 2 O 356,32 [517-28-2]&1S (USP30)Sustancia cristalina derivada del duramen de Haematoxylon campechianum L. (Fam. Leguminosae). Prismas incoloros a amarillos. Muy poco soluble en agua fr a y en e ter; ra pidamente soluble en agua caliente y en alcohol caliente. La exposicio n a la luz la torna roja y produce una solucio n amarilla. Se
&
4037
disuelve en amon aco SR y en soluciones de hidro xidos y carbonatos alcalinos. Disuelta en soluciones de las siguientes sales, presenta los colores indicados: un color rojo en solucio n de alumbre; un color rosado en solucio n de cloruro estannoso; un color gris verdoso en soluciones de sales cu pricas. Se torna gradualmente negra en solucio n de dicromato de potasio. Almacenar la hematoxilina y sus soluciones protegidas de la luz y del aire. Cambio en la redaccio n: Hemiclorhidrato de Carboximetoxilamina, 2(C2H5NO3) HCl218,59 &[2921-14-4]&1S (USP30)Polvo cristalino blanco. Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: Heptadecanoato de Metilo, C18H36O2284,48 &[1731-92-6] &1S (USP30)Escamas cristalinas blancas. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G8; mantener la temperatura del inyector a 2208; mantener la temperatura del detector a 2208; mantener la temperatura de la columna a 1808 y programar para que aumente 48 por minuto hasta alcanzar los 2208. El a rea del pico de C18H36O2 no es menos de 99% del a rea total. Intervalo de fusio n h741i: entre 318 y 328. Cambio en la redaccio n: n-Heptano para Cromatograf aL quido inamable, vola til, incoloro y transparente, constituido principalmente por C7H16. Pra cticamente insoluble en agua; soluble en alcohol absoluto. Miscible con e ter, con cloroformo, con benceno y con la mayor a de los aceites jos y vola tiles. [NOTAEl n-heptano puede requerir una puricacio n pasa ndolo a trave s de una columna de gel de s lice, usando una proporcio n de aproximadamente 25 g de gel por cada 100 mL de n-heptano, y realizando una destilacio n fraccionada posterior.] Intervalo de ebullicio n (Prueba para reactivos): entre 94,58 y 99,08. Pureza espectralMedir en una celda de 1 cm a 250 nm, con un espectrofoto metro adecuado, usando agua como blanco: la absorbancia no es mayor de 0,10. Residuo de evaporacio n&Evaporar 150 mL (100 g) en un ban o de vapor, y secar a 1058 durante 30 minutos: el residuo pesa no ma s de 1 mg (0,001%).&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Hexadecanoato de Hexadecilo (Palmitato de Hexadecilo; Palmitato de Cetilo), C32H64O2480,85 &[540-10-3]&1S (USP30) Usar un grado adecuado. [NOTASe encuentran disponibles comercialmente grados ade ster Palmit cido cuados como Palmitato de Hexadecilo y E lico de A Palm tico de Sigma-Aldrich, www.sigma-aldrich.com y Palmitato de Cetilo, Nu mero de cata logo C1203, de Spectrum Chemical Mfg. Corp., www.spectrumchemical.com]. Cambio en la redaccio n: Hexametildisilazano, C6H19NSi2161,39 L quido transparente e incoloro.
&
Valoracio nCuando se examina mediante cromatograf a de gasl quidos, presenta una pureza de no menos de 95%. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas para la valoracio n del art culo: Una columna de vidrio de 2 mm 6 1,8 m rellena con fase G3 sobre soporte S1. El gas transportador es helio, que uye a una velocidad de aproximadamente 40 mL por minuto; mantener la temperatura del detector aproximadamente a 3108, la del inyector aproximadamente a 1008 y programar la temperatura de la columna para comenzar a 358, mantenerse a esta temperatura durante 5 minutos y luego aumentar a una velocidad de 88 por minuto hasta 2008. Utilizar un detector de ionizacio n a la llama. Residuo posterior a la evaporacio nTransferir 200 g a una ca psula tarada y evaporar en un ban o de vapor hasta sequedad. Secar el residuo a 1058 durante 1 hora, enfriar y pesar: no se encuentra ma s de 0,0025% de residuo. Cambio en la redaccio n:
&
Hexametilenimina ( Homopiperidina ), C 6 H 1 2 NH 99,17 [111-49-9]&1S (USP30)L quido de incoloro a casi incoloro. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,4640 y 1,4660 a 208.
Cambio en la redaccio n: Hexanitrodifenilamina (Dipicrilamina), C12H5N7O12439,21 [131-73-7]&1S (USP30)Prismas o polvo de color amarillo oro. [Precaucio nExplosivo.] Por lo general contiene aproximadamente 15% de agua como precaucio n de seguridad. Insoluble en agua, en alcohol, en acetona y en e ter; soluble en a cido ace tico glacial y en sustancias alcalinas. Agua, Me todo I h921i: no ma s de 16%.
&
Cambio en la redaccio n: n-Hexano, C6H1486,18 &[110-54-3]&1S espectrofotometr a)Usar Hexanos. Cambio en la redaccio n: Hexanofenona, C 12 H 16 O 176,25 & [ 942-92-7 ] & 1S ( USP30 ) L quido amarillo. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G3; mantener la temperatura del inyector a 2808; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 1808 y programar para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2808. El a rea del pico de C12H16O no es menos de 98% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: 1,511 + 0,002 a 208. Cambio en la redaccio n: Hidrazina Hidrato al 85% en Agua, (NH2)2 H2O50,06 [7803-57-8]&1S (USP30)L quido incoloro. Valoracio nTransferir 600 mg, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL. Diluir a volumen con agua y mezclar. Pipetear 10 mL y transferirlos a un vaso de precipitados adecuado, agregar 1,0 g de bicarbonato de sodio y 50,0 mL de yodo 0,1 N SV. Valorar el exceso de yodo con tiosulfato de sodio 0,1 N SV, usando almido n SR como indicador. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de yodo ~ 0,1 N equivale a 1,252 mg~USP30 de (NH2)2 H2O. No se encuentra menos de 83%.
&
(USP30)
(para uso en
[999-97-3]&1S
(USP30)
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Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: Hidroquinona, C6H4(OH)2110,11 &[123-31-9]&1S (USP30) Cristales nos en forma de aguja, incoloros o blancos. Se oscurece al exponerla a la luz y al aire. Soluble en agua, en alcohol y en e ter. Valoracio nPesar con exactitud aproximadamente 250 mg y disolver en una mezcla de 100 mL de agua y 10 mL de a cido sulfu rico 0,1 N en un matraz Erlenmeyer de 250 mL. Agregar 3 gotas de una solucio n 1 en 100 de difenilamina en a cido sulfu rico y valorar con sulfato ce rico 0,1 N SV hasta que la solucio n adquiera un color violeta rojizo. Cada mL de sulfato ce rico 0,1 N equivale a 5,506 mg de C6H4(OH)2. No se encuentra menos de 99%. Intervalo de fusio n h741i: entre 1728 y 1748. Cambio en la redaccio n: 3-Hidroxiacetofenona, C8H8O2136,15 &[121-71-1]&1S (USP30) Escamas o terrones de polvo marro n claro. Funde aproximadamente a 968. Moderadamente soluble en cloroformo, produciendo una solucio n transparente de color amarillo claro. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con fase G1; mantener las temperaturas del inyector y del detector a 3008; la de la columna a 1808, programada para aumentar 108 por minuto hasta 2808 y mantenerse en dicha temperatura durante 10 minutos. El a rea del pico principal no es menos de 97% del a rea total. Cambio en la redaccio n: 4-Hidroxiacetofenona, HOC6H4COCH3136,15 &[99-93-4] (USP30)Polvo gris; funde aproximadamente a 1098. Hidro xido de Calcio&[1305-62-0]&1S tivo ACS. Cambio en la redaccio n: Hidro xido de Litio, LiOH H2O41,96 &[1310-65-2]&1S Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: 4-(4-Hidroxifenil)-2-butanona, C10H12O2164,20 &[5471-51-2] (USP30)Polvo blanco. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G43; mantener la temperatura del inyector a 2808; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 1808 y programar para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2808. El a rea del pico de C10H12O2 no es menos de 98,5% del a rea total. Intervalo de fusio n h741i: entre 818 y 878.
(USP30) (USP30)Usar
grado reac-
&1S
Cambio en la redaccio n: C8H9NO3167,16 &[22818-40-2] Laminillas brillantes. Moderadamente soluble en agua, &1S (USP30) en alcohol, en acetona, en e ter, en cloroformo, en acetato de etilo, en benceno y en a cido ace tico glacial; soluble en a lcalis y en a cidos minerales; fa cilmente soluble en a cido clorh drico tibio al 20% v/v. Intervalo de fusio n h741i: entre 2208 y 2478, con descomposicio n. Cambio en la redaccio n: 8-Hidroxiquinolina (Oxina), C9H7NO145,16 &[148-24-3] (USP30)Usar 8-Quinolinol de grado reactivo ACS.
D-a-4-Hidroxifenilglicina,
&1S
Cambio en la redaccio n: 1-Hidroxibenzotriazol Hidrato, C6H5N3O xH2O135,13 (anhidro) &[123333-53-9]&1S (USP30)Polvo cristalino blanco. Moderadamente soluble en alcohol; produce una solucio n transparente de color amarillo pa lido. Cambio en la redaccio n: Hidro xido de Amonio (Hidro xido de Amonio Concentrado) [1336-21-6]&1S (USP30)Usar Hidro xido de Amonio de grado reactivo ACS.
&
&1S
Cambio en la redaccio n: Imidazol, C3H4N268,08 &[288-32-4]&1S (USP30)Cristales blancos a amarillo claro. Fa cilmente soluble en agua. Usar grado reactivo ACS. Eliminar lo siguiente:
(USP30)
& Iminoestilbeno, C14H11N193,24Polvo anaranjado amarillento. Moderadamente soluble en acetato de etilo. Intervalo de fusio n h741i: entre 1978 y 2018.&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: Hidro xido de Amonio (Amonio Acuoso), [1336-21-6]&1S Usar grado reactivo ACS.
&
Cambio en la redaccio n: Hidro xido de Amonio al 25 por ciento&[1336-21-6]&1S Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: Hidro xido de Bario, Ba(OH)2 8H2O315,46 &1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
&
(USP30)
Cambio en la redaccio n: Indeno, C9H8116,16 &[95-13-6]&1S (USP30)L quido incoloro. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 10 m recubierta con una capa de 1 mm de metilsilicona; mantener la temperatura del inyector a 2008,
[12230-71-6]
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la del detector a 3008 y la de la columna a 1008, programada para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2508. El a rea del pico de indeno no es menos de 99% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,5749 y 1,5769 a 208. Cambio en la redaccio n: Inosina, C10H12N4O5268,23 &[58-63-9]&1S (USP30)Polvo cristalino blanco. Punto de fusio n h741i: aproximadamente 908. Cambio en la redaccio n: Inositol ( Hexahidroxiciclohexano ), C 6 H 6 (OH) 6 180,16 [87-89-8]&1S (USP30)Cristales nos blancos o polvo cristalino blanco; estable al aire. Sus soluciones son neutras al tornasol. pticamente inactivo. Un g se disuelve en 5,7 mL de agua. Poco O soluble en alcohol; insoluble en e ter y en cloroformo. Almacenar en envases bien cerrados. Intervalo de fusio n h741i: entre 2238 y 2268. Pe rdida por secado h731iSecar a 1058 durante 4 horas: no pierde ma s de 0,5% de su peso. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): no ma s de 0,1%.
&
Magnesio y sales alcalinasMezclar 1 g con 40 mL de agua, agregar cuidadosamente 5 mL de a cido clorh drico, calentar la solucio n, mantener en ebullicio n durante 1 minuto y agregar ra pidamente 40 mL de a cido oxa lico SR. Inmediatamente, agregar a la mezcla tibia 2 gotas de rojo de metilo SR, luego agregar amon aco SR gota a gota, desde una bureta, hasta que la mezcla se torne apenas alcalina. Enfriar hasta temperatura ambiente, transferir a una probeta graduada de 100 mL, diluir con agua hasta 100 mL, mezclar y dejar en reposo durante 4 horas o durante toda la noche. Filtrar y transferir a una ca psula de platino 50 mL del ltrado transparente, al que se le ha agregado 0,5 mL de a cido sulfu rico. Evaporar la mezcla en un ban o de vapor hasta un volumen pequen o. Calentar cuidadosamente hasta sequedad sobre una llama libre y continuar calentando hasta completar la descomposicio n y volatilizacio n de las sales de amonio. Finalmente, incinerar el residuo a 8008 + 258 durante 15 minutos: el residuo no pesa ma s de 5 mg (1%). cidos grasos vola A tilesMezclar aproximadamente 500 mg con 1 mL de a cido sulfu rico y entibiar: la mezcla no emana un olor aa cido graso vola til. Cambio en la redaccio n: Lactosa, C12H22O11 H2O342,30 grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n:
&
[64-42-3]&1S
(USP30)Usar
Cambio en la redaccio n: Isopropilamina (2-Aminopropano), C3H7NH259,11 [75-31-0] quido inamable, incoloro y transparente. Miscible (USP30)L con agua, con alcohol y con e ter. Valoracio nTransferir aproximadamente 0,2 g, pesados con exactitud, a un recipiente adecuado, agregar 50 mL de agua y mezclar. Valorar con a cido clorh drico 0,1 N SV, usando una mezcla de verde de bromocresol SR y rojo de metilo SR (5 : 1) como indicador. Cada mL de a cido clorh drico 0,1 N equivale a 59,11 mg de C3H9N. No se encuentra menos de 98%. Intervalo de ebullicio n (Prueba para reactivos)No menos de 95% destila entre 318 y 338. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,3743 y 1,3753, a 208.
&
&1S
Laurato de Metilo, C13H26O2214,34 &[110-82-0]&1S (USP30) L quido incoloro. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 2808; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 1808 y programar para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2808. El a rea del pico de C13H26O2 no es menos de 99,45% del a rea total. Cambio en la redaccio n: Lignocerato de Metilo, C 25 H 50 O 2 382,66 (USP30)Cristales blancos.
&
Cambio en la redaccio n: Lactato de Calcio, (CH3 CHOHCOO) 2Ca 5H2 O 308,29 [814-80-2]&1S (USP30)Polvo o gra nulos blancos. Es algo eorescente y se torna anhidro a 1208. Un g se disuelve en 20 mL de agua; pra cticamente insoluble en alcohol. Almacenar en envases impermeables. Valoracio nPesar con exactitud aproximadamente 500 mg, previamente secados a 1208 durante 4 horas, transferir a un recipiente adecuado y disolver en 150 mL de agua que contenga 2 mL de a cido clorh drico diluido. Agregar 15 mL de hidro xido de sodio SR y 300 mg de indicador azul de hidroxinaftol y valorar con edetato diso dico 0,05 M SV hasta que la solucio n se torne de color azul intenso. Cada mL de edetato diso dico 0,05 M equivale a 10,91 mg de C6H10CaO6. No se encuentra menos de 98%. Pe rdida por secado h731iSecar a 1208 durante 4 horas: pierde entre 25,0% y 30,0% de su peso. AcidezAgregar fenolftale na SR a 20 mL de una solucio n 1 en 20 y valorar con hidro xido de sodio 0,10 N: no se requiere ma s de 0,50 mL para producir un color rosado. Metales pesados (Prueba para reactivos)Disolver 1 g en 2,5 mL de a cido clorh drico diluido, diluir con agua hasta 40 mL y agregar 10 mL de sulfuro de hidro geno SR: cualquier color marro n que se produzca no es ma s oscuro que el de una solucio n control que contenga 0,02 mg de Pb agregado (0,002%).
&
[ 2442-49-1 ]
&1S
Cambio en la redaccio n: Linoleato de Metilo, C19H34O2294,47 &[112-63-0]&1S (USP30) L quido incoloro. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 3008; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 2008 y programar para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 3008. El a rea del pico de C19H34O2 no es menos de 99% del a rea total. Cambio en la redaccio n: Linolenato de Metilo, C19H32O2292,46 &[301-00-8]&1S (USP30) L quido incoloro. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: usar una columna
4040
capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase de cianopropilfenilo al 14% y dimetilpolisiloxano al 86%; mantener la temperatura del inyector a 2808; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 1808 y programarla para que aumente 108 por minuto hasta 2808. El a rea del pico de C19H32O3 no es menos de 99% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,469 y 1,473 a 208. Cambio en la redaccio n: cido 2,6-Diaminohexanoico), C6H14N2O2146,19 L-Lisina (A [56-87-1]&1S (USP30)Agujas cristalinas o placas hexagonales. Soluble en agua; muy poco soluble en alcohol; insoluble en e ter. Rotacio n espec ca h781i : entre +25,58 y +26,08. Solucio n de prueba: 20 mg por mL, en a cido clorh drico diluido (1 en 2). Contenido de nitro geno, Me todo I h461i: se encuentra entre 18,88% y 19,44% de N, correspondiente a no menos de 98,5% de C6H14N2O2, habiendo secado previamente la muestra de prueba a 1058 durante 2 horas.
&
& Metacrilato de Butilo, C8H14O2142,20 [97-88-1]Usar un grado adecuado.&1S (USP30)
& Metacrilato de 2-Dimetilaminoetilo, CH2CHCO2CH2CH2N(CH3)2143,18 [2439-35-2]Usar un grado adecuado.&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: Metacrilato de Metilo&[80-62-6]&1S adecuado. Cambio en la redaccio n: Metanol ( Alcohol Met lico ), CH 3 OH 32,04 (USP30)Usar grado reactivo ACS.
&
(USP30)Usar
un grado
Cambio en la redaccio n: Magnesio, Mg24,305 &[7439-95-4]&1S (USP30)Metal plateado en forma de cinta. Reacciona lentamente con agua a temperatura ambiente. Se disuelve fa cilmente en a cidos diluidos, liberando hidro geno. Valoracio nTransferir 1 g, pesado con exactitud, a un matraz volume trico de 250 mL, y disolver en una mezcla de 15 mL de a cido clorh drico y 85 mL de agua. Al terminar la disolucio n, diluir a volumen con agua y mezclar. Pipetear 25 mL de la dilucio n y transferir a un vaso de precipitados de 400 mL, diluir con agua a 250 mL, agregar 20 mL de amon aco-cloruro de amonio SR y algunos mg de triturado de negro de eriocromo T y valorar con edetato diso dico 0,1 M SV hasta un punto nal azul. Cada mL de edetato diso dico 0,1 M SV equivale a 2,430 mg de Mg. Se encuentra no menos de 99%. Cambio en la redaccio n: Maleato de Bis(2-etilhexilo), C20H36O4340,50 &[142-16-5] quido transparente, incoloro a amarillo pa lido. (USP30 )L Miscible con acetona y con alcohol. El peso espec co es aproximadamente 0,945. Valoracio nColocar aproximadamente 2,5 g, pesados con exactitud, en un matraz de 250 mL, agregar 50,0 mL de hidro xido de potasio alcoho lico 0,5 N SV y someter a reujo durante 45 minutos. Enfriar, agregar 0,5 mL de fenolftale na SR y valorar el exceso de a lcali con a cido clorh drico 0,5 N SV. Realizar una determinacio n con un blanco al mismo tiempo, empleando la misma cantidad de hidro xido de potasio alcoho lico 0,5 N (ver Valoraciones Residuales en Volumetr a h541i). La diferencia, en mL, entre los volu menes de a cido clorh drico 0,5 N consumidos en la valoracio n de la prueba y en la valoracio n del blanco, multiplicada por 85,1, representa la cantidad, en mg, de maleato de bis(2-etilhexilo) en la porcio n tomada. No se encuentra menos de 97%.
& 1S
[ 67-56-1 ]
&1S
Cambio en la redaccio n: Metil Cloroformo (Metilcloroformo; 1,1,1-Tricloroetano), CH3CCl3133,40 &[71-55-6]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Metil Etil Cetona, CH3COC2H572,11 Usar 2-butanona de grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Metil Sulfo xido &[67-68-5]&1S Cambio en la redaccio n: 4-Metil-2-pentanona (Metil Isobutil Cetona), (CH3)2CHCH2COCH3100,16 &[108-10-1]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: 2-Metil-2-propil-1,3-propanodiol, C7H16O2132,20 &[78-26-2] &1S (USP30)Cristales blancos; funden aproximadamente a 588. Cambio en la redaccio n: Metilamina al 40 por ciento en Agua, CH5N31,06 &[74-89-5] quido incoloro. &1S (USP30)L Valoracio nUsando una jeringa, transferir 0,5 mL de una muestra bien agitada a un punto bajo la supercie de 100 mL de agua. Determinar el peso de la muestra pesando la jeringa antes y despue s de la transferencia. Mezclar y valorar con a cido clorh drico 0,5 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente con un electrodo de pH de plata-cloruro de plata y un electrodo de referencia de calomel. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de a cido clorh drico 0,5 N equivale a 15,53 mg de CH5N: se encuentra entre 39,0% y 41,0%. ndice de refraccio I n h831i : entre 1,3680 y 1,3710 a 208.
(USP30)Ver
&
[1120-34-9]&1S
(USP30)
Dimetil Sulfo xido.
Cambio en la redaccio n: Mercurio, HgPeso ato mico 200,59 &[7439-97-6]&1S Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Metaborato de Litio, LiBO249,75 &[13453-69-5]&1S Usar grado reactivo ACS.
(USP30) (USP30)
4041
Cambio en la redaccio n: N-Metilpirrolidina (1-Metilpirrolidina), C4H8NCH385,15 [120-94-5]&Usar un grado adecuado.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: ter Monomet Metoxietanol (E lico de Etilenglicol; 2Metoxietanol), CH3OCH2CH2OH76,09 &[109-86-4]&1S (USP30) Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: ter Monomet 2-Metoxietanol (E lico de Etilenglicol; Metoxietanol), CH3OCH2CH2OH76,09 &[109-86-4]&1S (USP30) Ver Metoxietanol. Cambio en la redaccio n: Miristato de Isopropilo, C 17 H 34 O 2 270,45 & [ 110-27-0 ] a del NF). &1S (USP30)Usar Miristato de Isopropilo (monograf Para uso como disolvente en procedimientos de pruebas de esterilidad, el Miristato de Isopropilo cumple con la siguiente especicacio n adicional: pH del extracto acuosoTransferir 100 mL a un frasco de centr fuga de 250 mL, agregar 10 mL de agua bidestilada, tapar el frasco con una tapa adecuada y agitar vigorosamente durante 60 minutos. Centrifugar la mezcla a 1800 rpm durante 20 minutos, succionar la capa superior (miristato de isopropilo) y determinar el pH de la capa acuosa residual: el pH no es menor de 6,5. El Miristato de Isopropilo que no se ajusta a la prueba de pH del extracto acuoso puede adecuarse para el uso en procedimientos de pruebas de esterilidad del siguiente modo: Usando una columna de vidrio de 20 mm 6 20 cm, agregar alu mina activada y apisonar hasta una altura de 15 cm. Pasar 500 mL del miristato de isopropilo a trave s de la columna, usando una leve presio n positiva para mantener un ujo constante y usar el eluato recogido directamente en el procedimiento de la prueba de esterilidad. Cambio en la redaccio n: Miristato de Metilo, C15H30O2242,40 &[124-10-7]&1S (USP30) L quido incoloro. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 3008; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 2008 y programar para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 3008. El a rea del pico de C15H30O2 no es menos de 99% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,434 y 1,438 a 208. Cambio en la redaccio n:
&
Valoracio nColocar aproximadamente 100 mL de a cido ace tico en un vaso de precipitados de 150 mL. Disolver por separado 2 g de yoduro de potasio en un volumen m nimo de agua, agregar esta solucio n al a cido ace tico y mezclar. Transferir aproximadamente 200 mg de Monobromuro de Yodo, pesados con exactitud, al vaso de precipitados que contiene la mezcla de yoduro de potasio y a cido ace tico y mezclar para disolver. Valorar de inmediato con tiosulfato de sodio 0,1 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente (ver Volumetr a h541i). Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de tiosulfato de sodio 0,1 N equivale a 20,681 mg de IBr: No se encuentra menos de 97,5%. Cambio en la redaccio n: Monocloruro de Yodo, ICl162,36 Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Mono xido de Plomo (Litargirio), PbO223,20 &[1317-36-8] &1S (USP30)Polvo pesado de color amarillento o amarillo rojizo. Insoluble en agua y en alcohol; soluble en a cido ace tico, en a cido n trico diluido y en soluciones tibias de los hidro xidos alcalinos jos. Valoracio nPesar con exactitud aproximadamente 300 mg, recie n incinerados en una mua a 600 + 508 y disolver entibiando con 10 mL de agua y 1 mL de a cido ace tico glacial. Diluir con 75 mL de agua, calentar a ebullicio n, agregar 50,0 mL de dicromato de potasio 0,1 N SV y mantener a ebullicio n durante 2 o 3 minutos. Enfriar, transferir a un matraz volume trico de 200 mL con la ayuda de agua, diluir a volumen con agua, mezclar y dejar que sedimente. Retirar 100,0 mL del l quido transparente y transferirlo a un matraz con tapo n de vidrio. Agregar 10 mL de a cido sulfu rico diluido y 1 g de yoduro de potasio, insertar el tapo n, mezclar suavemente y dejar en reposo durante 10 minutos. A continuacio n valorar el yodo liberado, que representa el exceso de dicromato, con tiosulfato de sodio 0,1 N SV, agregando 3 mL de almido n SR cerca del punto nal: cada mL de dicromato de potasio 0,1 N equivale a 7,440 mg de PbO. No se encuentra menos de 98%. Sustancias insolubles en a cido ace ticoDisolver 2 g en 30 mL de a cido ace tico glacial diluido (1 en 2), mantener a ebullicio n moderada durante 5 minutos, ltrar, lavar el residuo con a cido ace tico diluido y secar a 1058 durante 2 horas: el residuo no pesa ma s de 10 mg (0,5%). Sustancias no precipitadas con sulfuro de hidro genoPrecipitar completamente el plomo del ltrado obtenido en la prueba de Sustancias insolubles en a cido ace tico haciendo pasar sulfuro de hidro geno por el mismo, ltrar y lavar el precipitado con 20 mL de agua. A una mitad de la mezcla del ltrado y los lavados agregar 5 gotas de a cido sulfu rico, evaporar a sequedad e incinerar a 800 + 258 durante 15 minutos: el residuo no pesa ma s de 5 mg (0,5%). Sustancias vola tilesPesar con exactitud aproximadamente 5 g y calentar intensamente en un crisol de porcelana cubierto: no pierde ma s de 2,0% de su peso. Cambio en la redaccio n:
& &
[7790-99-0]&1S
(USP30)
Morfolina ( Tetrahidro-1 , 4-oxazina ), C 4 H 9 NO 87,12 [110-91-8]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
Molibdato de Amonio, (NH 4 ) 6 Mo 7 O 2 4 4H 2 O 1235,86 [13106-76-8]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
Cambio en la redaccio n: Naftaleno, C10H8128,17 &[91-20-3]&1S (USP30)Placas prisma ticas monocl nicas, o polvo o escamas de color blanco. Una solucio n en e ter de petro leo presenta una uorescencia pu rpura bajo la luz de una la mpara de arco de mercurio. Insoluble en agua; muy soluble en e ter y en aceites jos y vola tiles; fa cilmente soluble en benceno, en disulfuro de carbono, en tetracloruro de carbono, en
Cambio en la redaccio n: Monobromuro de Yodo, IBr206,81 &[7789-35-5]&1S (USP30) Terrones cristalinos, agujas cristalinas o cristales de color negro, gris o pu rpura azulado.
4042
cloroformo, en aceite de oliva y en tolueno; soluble en alcohol y en metanol. Sublima a temperaturas superiores a la temperatura de fusio n. Intervalo de fusio n h741i : entre 808 y 818. Intervalo de ebullicio n (Prueba para reactivos): entre 2178 y 2198. Cambio en la redaccio n: 1,3-Naftalenodiol ( Naftoresorcinol ), C 10 H 6 (OH) 2 160,17 & [132-86-5]&1S (USP30)Polvo o cristales de color blanco grisa ceo a tostado. Fa cilmente soluble en metanol; moderadamente soluble en agua, en alcohol y en e ter. Intervalo de fusio n h741i: entre 1228 y 1278. Solubilidad en metanolDisolver 500 mg en 50 mL de metanol: la solucio n es transparente y completa. Cambio en la redaccio n: 2,7-Naftalenodiol (2,7-Dihidroxinaftaleno), C10H8O2160,17 [582-17-2]&1S (USP30)Polvo o so lido cristalino de color blanquecino a amarillo. Se disuelve en acetona. Intervalo de fusio n h741i: entre 1878 y 1918.
&
&
Naftoresorcinol ( 1 , 3-Dihidroresorcinol ), C 10 H 8 O 2 160,17 [132-86-5]&1S (USP30)Usar un grado adecuado.
Cambio en la redaccio n: b-Nicotinamida Adenina Dinucleo tido, C21H27N7O14P2663,4 [53-84-9]&1S (USP30)Polvo blanco muy higrosco pico. Fa cilmente soluble en agua. Valoracio nDisolver 17,9 g de fosfato diba sico de sodio anhidro en agua para obtener 500 mL (Solucio n A). Disolver 6,8 g de fosfato monoba sico de potasio en agua hasta obtener 500 mL (Solucio n B). A un volumen de Solucio n A, agregar Solucio n B hasta ajustar la mezcla a un pH de 7,0 (aproximadamente 2 : 1 en volumen de Soluciones A y B) para obtener una Solucio n amortiguadora de pH 7,0. Transferir aproximadamente 25 mg de b-nicotinamida adenina dinucleo tido, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 25 mL, disolver y diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir 0,2 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 10 mL, diluir a volumen con la Solucio n amortiguadora de pH 7,0 y mezclar. Usar esta solucio n como Preparacio n de valoracio n. Determinar las absorbancias de la Preparacio n de valoracio n y de la Solucio n amortiguadora de pH 7,0 en celdas de 1 cm a una longitud de onda de 260 nm, utilizando agua como referencia. Calcular la cantidad, en mg, de C21H27N7O14P2 en la porcio n de b-nicotinamida adenina dinucleo tido tomada, por la fo rmula:
&
Cambio en la redaccio n: ster 2-Naft cido 2-Naftil Cloroformiato (E lico del A Clorofo rmico), ClCOOC10H7206,62 &[7693-50-7]&1S (USP30) Usar un grado adecuado. [NOTASe puede obtener un grado adecuado de TCI America, www.tciamerica.com]. Cambio en la redaccio n: 1-Naftol (Alfanaftol), C10H7OH144,17 [90-15-3]&1S (USP30) Polvo cristalino o cristales incoloros o levemente rosa ceos.
&
(0,6634/17,6)(10/0,2)(25)(AA AB) en donde AA y AB son las absorbancias de la Preparacio n de valoracio n y de la Solucio n amortiguadora de pH 7,0, respectivamente. No se encuentra menos de 94,5%. Cambio en la redaccio n: Ninhidrina C9H4O3 H2O178,14 Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n:
&
[485-47-2]&1S
(USP30)
Cambio en la redaccio n: 2-Naftol (Betanaftol), C10H7OH144,17 [135-19-3]&1S (USP30) Polvo cristalino o laminillas de color blanco. Cambia de coloracio n con la exposicio n a la luz. Muy poco soluble en agua; soluble en alcohol, en e ter, en cloroformo y en soluciones de hidro xidos alcalinos. Intervalo de fusio n h741i: entre 1218 y 1238. Solubilidad en alcoholUn g se disuelve completamente en 10 mL de alcohol y se obtiene una solucio n incolora o pra cticamente incolora. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): no ma s de 0,05%. AcidezAgitar ocasionalmente 1 g con 50 mL de agua durante 15 minutos y ltrar: el ltrado es neutro al tornasol. 1-NaftolCalentar a ebullicio n 100 mg con 10 mL de agua hasta disolver, enfriar y ltrar. Agregar al ltrado 0,3 mL de hidro xido de sodio 1 N y 0,3 mL de yodo 0,1 N: no se produce un color violeta. Sustancias insolubles en amon aco (naftaleno, etc.)Agitar 500 mg con 30 mL de amon aco SR: el 2-naftol se disuelve completamente y la solucio n no es ma s oscura que amarillo pa lido.
&
N quel, Ni58,6934 adecuado.
&
[7440-02-0]&1S
(USP30)Usar
un grado
Cambio en la redaccio n: Nitrato de Amonio, NH4NO380,04 &[6484-52-2]&1S Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Nitrato de Bario, Ba(NO3)2261,34 &[10022-31-8]&1S Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Nitrato de Cadmio, Cd(NO3)2 4H2O308,48 &[10325-94-7] picos. Muy soluble en agua; (USP30)Cristales incoloros higrosco soluble en alcohol. Materia insoluble (Prueba para reactivos): no ma s de 1 mg, a partir de 20 g (0,005%). Cloruros (Cl) (Prueba para reactivos)Un g no presenta ma s de 0,01 mg de Cl (0,001%).
(USP30) (USP30)
&1S
Cambio en la redaccio n: p-Naftolbence na, C27H18O2374,43 &[6948-88-5]&1S Polvo marro n rojizo. Usar un grado adecuado.
(USP30)
4043
Sulfatos (Prueba para reactivos, Me todo II)Evaporar una mezcla de 12 g de muestra y 25 mL de a cido clorh drico en un ban o de vapor hasta sequedad. Agregar otros 15 mL de a cido clorh drico y nuevamente evaporar hasta sequedad. Disolver el residuo en 100 mL de agua, ltrar y agregar 1 mL de a cido clorh drico: el residuo no pesa ma s de 1,0 mg ma s que el residuo obtenido en la prueba con un blanco (0,003%). Cobre (Cu)Disolver 0,5 g en 10 mL de agua, agregar 10 mL de Solucio n de Citrato de Amonio (ver Plomo h251i) y ajustar la reaccio n a un pH de aproximadamente 9 agregando hidro xido de amonio 1 N (aproximadamente 30 mL). Agregar 1 mL de solucio n de dietilditiocarbamato de sodio (1 en 1000) y mezclar. Agregar 5 mL de alcohol am lico, agitar durante aproximadamente 1 minuto y permitir que las capas se separen: si se produce color amarillo en la capa de alcohol am lico, aquel no es ma s oscuro que el de un blanco al que se le ha agregado 0,01 mg de Cu (0,002%). Hierro(Fe)Disolver 1 g en 15 mL de agua, agregar 2 mL de a cido clorh drico y calentar hasta ebullicio n durante 2 minutos. Enfriar y agregar aproximadamente 30 mg de persulfato de amonio y 15 mL de una solucio n de tiocianato de potasio en alcohol but lico normal (preparado por disolucio n de 10 g de tiocianato de potasio en 10 mL de agua, entibiando la solucio n aproximadamente a 308, diluyendo con alcohol but lico normal hasta 100 mL y agitando hasta que se torne transparente). Agitar vigorosamente durante 30 segundos y permitir que las capas se separen: si se produce color rojo en la capa alcoho lica transparente, aquel no es ma s oscuro que el de un blanco al que se le ha agregado 0,01 mg de Fe (0,001%). Plomo (Pb)Disolver 1,0 g en 10 mL de agua, agregar 0,2 mL de a cido ace tico glacial y ltrar si fuera necesario. A una porcio n de 7 mL de agua, agregar 0,2 mL de a cido ace tico glacial y 3 mL de Solucio n de Plomo Esta ndar (ver Plomo h251i) y mezclar para obtener un blanco. Agregar luego a cada solucio n 1,0 mL de solucio n de cromato de potasio (1 en 10) y mezclar: despue s de 5 minutos, la solucio n de prueba no es ma s turbia que el blanco (0,003%). Sustancias no precipitadas por sulfuro de hidro genoDisolver 2 g en 145 mL de agua, agregar 5 mL de a cido sulfu rico (1 en 10), calentar hasta ebullicio n y pasar una corriente ra pida de sulfuro de hidro geno a trave s de la solucio n mientras se enfr a. Filtrar y, a 75 mL del ltrado transparente, agregar 0,25 mL de a cido sulfu rico, luego evaporar hasta sequedad e incinerar suavemente: el residuo no pesa ma s de 1 mg (0,1%). Cambio en la redaccio n: Nitrato de Calcio, Ca(NO3)2 4H2O236,15 (USP30)Usar grado reactivo ACS.
&
Cambio en la redaccio n: Nitrato de Plomo, Pb(NO3)2331,21 &[10099-74-8]&1S Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Nitrato Fe rrico, Fe(NO 3 ) 3 9H 2 O 404,00 (USP30)Usar grado reactivo ACS.
&
(USP30)
[ 10421-48-4 ]
&1S
Cambio en la redaccio n: Nitrato Mercu rico, Hg(NO3)2 xH2O342,62 &[10045-94-0] disponible (USP30)Usar grado reactivo ACS. Este reactivo esta como monohidrato o como dihidrato. Cambio en la redaccio n: 5-Nitro-1,10-fenantrolina, C12H7N3O2225,20 &[4199-88-6] (USP30)Polvo blanco. Soluble en agua. Intervalo de fusio n h741i: entre 1988 y 2008. Aptitud como indicador redoxDisolver 25 mg en un volumen m nimo de a cido sulfu rico diluido, agregar 10 mg de sulfato ferroso y diluir con agua a 100 mL: la solucio n es color rojo intenso y presenta un ma ximo de absorcio n a 510 nm. A 1,0 mL de la solucio n, agregar 1,0 mL de sulfato ce rico 0,01 M: desaparece el color rojo. Cambio en la redaccio n: 4-Nitroacetofenona (p-Nitroacetofenona), C8H7NO3165,15 [100-19-6]&1S (USP30)Cristales amarillos. Valoracio nInyectar una solucio n ete rea apropiada de la muestra (aproximadamente 0,5 mL) en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf ah621i) equipado con un detector de conductividad te rmica y usar helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: usar una columna de acero inoxidable de 4 mm 6 1,8 m con fase G1 al 10% sobre soporte S1A; mantener el inyector y el detector a 2008 y 3008, respectivamente; mantener la temperatura de la columna a 1708 y programarla para que aumente 38 por minuto hasta 2208. El a rea del pico de 4nitroacetofenona no es menos de 97% del a rea total. Intervalo de fusio n h741i: entre 788 y 808.
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[13780-06-8]
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Cambio en la redaccio n: Nitrato de Cobalto, Co(NO3)2 6H2O291,03 &1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Nitrato de Litio, LiNO368,95 &[7790-69-4]&1S (USP30)Cristales incoloros. Usar un grado adecuado que declare contener no menos de 97,0%. Cambio en la redaccio n: Nitrato de Magnesio, Mg(NO3)2 6H2O256,41 &[10377-60-3] (USP30)Usar grado reactivo ACS.
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Cambio en la redaccio n: [10141-05-6] o-Nitroanilina, NO2C6H4NH2138,12 &[88-74-4]&1S (USP30) Cristales de color amarillo anaranjado. Poco soluble en agua fr a; soluble en agua caliente; fa cilmente soluble en alcohol y en cloroformo. Forma sales solubles en agua con a cidos minerales. Intervalo de fusio n h741i: entre 718 y 728. Cambio en la redaccio n: p-Nitroanilina, NO2C6H4NH2138,12 &[100-01-6]&1S (USP30) Polvo cristalino amarillo brillante. Insoluble en agua; soluble en alcohol y en e ter. Intervalo de fusio n h741i : entre 1468 y 1488. SolubilidadSendas porciones de 1 g disueltas en 30 mL de alcohol y en 40 mL de e ter producen soluciones transparentes o pra cticamente transparentes. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): no ma s de 0,2%.
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4044
Cambio en la redaccio n: Nitrobenceno, C6H5NO2123,11 grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: 4-(p-Nitrobencil)piridina, C12H10N2O2214,22 &[1083-48-3] &1S (USP30)Cristales amarillos. Soluble en acetona. Materia insolubleDisolver 1 g en 10 mL de acetona: la solucio n es transparente y la disolucio n es completa. Intervalo de fusio n h741i: entre 718 y 748. Cambio en la redaccio n: Nitrometano, CH 3 NO2 61,04 grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: 1-Nitroso-2-naftol, C10H7NO2173,17 &[131-91-9]&1S (USP30) Polvo de color marro n a marro n amarillento. Insoluble en agua; soluble en alcohol, en benceno, en e ter, en tetracloruro de carbono y en a cido ace tico. Valoracio nTransferir aproximadamente 250 mg, previamente secados sobre gel de s lice hasta peso constante y pesados con exactitud, a un matraz con tapo n de vidrio y disolver en 10 mL de solucio n de hidro xido de sodio (1 en 10). Enfriar la solucio n en un ban o de hielo, agregar a cido sulfu rico diluido (1 en 6) hasta que se forme un precipitado ligero y permanente y la solucio n sea ligeramente a cida, luego agregar 3 g de yoduro de potasio, agitar para disolver, agregar 20 mL de a cido sulfu rico diluido (1 en 6), tapar inmediatamente el matraz y dejar que repose en la oscuridad durante 2 horas. Valorar el yodo liberado con tiosulfato de sodio 0,1 N SV, agregando 3 mL de almido n SR cerca del punto nal. Realizar una determinacio n completa con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de tiosulfato de sodio 0,1 N equivale a 8,66 mg de C10H7NO2: no se encuentra menos de 95,0%. Intervalo de fusio n h741i: entre 1098 y 1118. Residuo de incineracio n (Prueba para reactivos): no ma s de 0,2%. Cambio en la redaccio n: Nonadecano, C19H40268,52 &[629-92-5]&1S (USP30)So lido blanco. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf ah621i) equipado con un detector de conductividad te rmica y usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: usar una columna de acero inoxidable de 3 mm 6 1,8 m rellena con fase G2 al 5% sobre soporte S1AB; mantener la temperatura del inyector a 3308, mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura del horno inicialmente a 1908 y dejar que aumente gradualmente hasta 2508. El a rea del pico de nonadecano no es menos de 99% del a rea total. Intervalo de fusio n h741i: entre 31,58 y 33,58. Cambio en la redaccio n: Oleato de Metilo, C19H36O2296,49 L quido incoloro.
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[98-95-3]&1S
(USP30)Usar
Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: usar una columna capilar recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 3008; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 2308 y programarla para que aumente 108 por minuto hasta 2808. El a rea del pico de C19H36O2 no es menos de 99% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: 1,452 a 208. Cambio en la redaccio n: Oxalato de Amonio, (NH4)2C2O4 H2O142,11 (USP30)Usar grado reactivo ACS.
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[6009-70-7]
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[ 75-52-5 ] & 1S
( USP30 ) Usar
Cambio en la redaccio n: xido de Aluminio, Lavado con A cido (Alu O mina preparada especialmente para usar en ana lisis cromatogra cos ) & [1344-28-1]&1S (USP30)Polvo o gra nulos nos de color blanco o pra cticamente blanco. Muy higrosco pico. Almacenar en envases impermeables. pH de la Suspensio n espesaEl pH de una suspensio n espesa bien mezclada de 5 g en 150 mL de agua exenta de amon aco y exenta de dio xido de carbono, despue s de reposar 10 minutos, esta entre 3,5 y 4,5. Pe rdida por incineracio nPesar con exactitud aproximadamente 1 g e incinerar, preferiblemente en una mua, entre 8008 y 8258 hasta peso constante: no pierde ma s de 5,0% de su peso. S liceFundir 500 mg con 10 g de bisulfato de potasio durante 1 hora en un crisol de platino, enfriar y disolver en agua caliente: no queda ma s que una pequen a cantidad de residuo insoluble. Aptitud para adsorcio n cromatogra caDisolver 50 mg de onitroanilina en benceno para completar 50,0 mL. Diluir 10 mL de la solucio n resultante con benceno hasta 100,0 mL y mezclar (Solucio n A). Ra pidamente, pesar aproximadamente 2 (+0,005) g de muestra en un frasco para pesada con tapo n de vidrio y transferir ra pidamente a un tubo de ensayo seco con tapo n de vidrio. Agregar 20,0 mL de Solucio n A, tapar, agitar vigorosamente durante 3 minutos y dejar que sedimente. Pipetear 10 mL del sobrenadante transparente y transferir a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con benceno y mezclar (Solucio n B). Determinar las absorbancias de las Soluciones A y B a 395 nm con un espectrofoto metro adecuado, usando benceno como blanco. Calcular, en mg, la cantidad adsorbida por g de muestra de prueba, por la fo rmula: [2(1 AB / AA)] / W en donde AA y AB son las absorbancias de las Soluciones A y B, respectivamente, y W es el peso, en g, del o xido de aluminio. Se adsorbe no menos de 0,3 mg de o-nitroanilina por cada g de o xido de aluminio. Cambio en la redaccio n: xido de Deuterio, D2O20,032 &[7789-20-0]&1S (USP30)Usar O un grado adecuado con una pureza isoto pica m nima de 99,8 % ato mico de deuterio. Cambio en la redaccio n: xido de Magnesio, MgO40,30 O Usar grado reactivo ACS.
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[112-62-9]&1S
(USP30)
[1309-48-4]&1S
(USP30)
4045
Cambio en la redaccio n: xido de Mesitilo, C6H10O98,14 &[141-79-7]&1S (USP30) O L quido incoloro. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 1508; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 508 y programar para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2008. El a rea del pico de C6H10O no es menos de 98% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,443 y 1,447 a 208. Cambio en la redaccio n: xido Mercu O rico Amarillo, HgO216,59 (USP30)Usar grado reactivo ACS.
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[21908-53-2]
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Cambio en la redaccio n: Palmitato de Metilo, C17H34O2270,45 &[112-39-0]&1S (USP30) So lido blanco. Valoracio nInyectar un volumen apropiado en un cromato grafo de gases (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una capa de 1 mm de fase G2; mantener la temperatura del inyector a 3008; mantener la temperatura del detector a 3008; mantener la temperatura de la columna a 2008 y programar para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 3008. El a rea del pico de C17H34O2 no es menos de 96,5% del a rea total. Cambio en la redaccio n: Pentacloruro de Antimonio, SbCl5299,02 [7647-18-9] quido transparente, amarillo rojizo, aceitoso, higros&1S (USP30)L co pico y ca ustico. Emite vapores en el aire hu medo y se solidica por absorcio n de una mole cula de agua. Se descompone en agua, es soluble en a cido clorh drico diluido y en cloroformo. Alcanza la ebullicio n aproximadamente a 928 a una presio n de 30 mm de mercurio y tiene un peso espec co de aproximadamente 2,34 a 258. Precaucio nEl pentacloruro de antimonio causa quemaduras graves y su vapor es peligroso. Valoracio n (SbCl5 )Pesar con exactitud un matraz de 125 mL con tapo n de vidrio, introducir con rapidez aproximadamente 0,3 mL de la muestra de prueba y volver a pesar. Disolver con 20 mL de a cido clorh drico diluido (1 en 5) y agregar 10 mL de solucio n de yoduro de potasio (1 en 10) y 1 mL de disulfuro de carbono. Valorar el yodo liberado con tiosulfato de sodio 0,1 N SV. El color marro n desaparecera de la solucio n gradualmente y las u ltimas trazas del yodo libre se recogera n en el disulfuro de carbono, dando un color rosado. El punto nal se alcanza cuando desaparece este color rosado. Cada mL de tiosulfato de sodio 0,1 N equivale a 14,95 mg de SbCl5: no se encuentra menos de 99,0% de SbCl5. Sulfato (Prueba para reactivos, Me todo II)Disolver 4,3 mL (10 g) en el volumen m nimo de a cido clorh drico, diluir con agua hasta 150 mL, neutralizar con hidro xido de amonio y ltrar. Al ltrado, agregar 2 mL de a cido clorh drico: la solucio n, usando 10 mL de cloruro de bario SR, produce no ma s de 1,3 mg de residuo, corregido por una prueba completa con un blanco (0,005%). Arse nicoAgregar 10 mL de una solucio n preparada recientemente de 20 g de cloruro estannoso en 30 mL de a cido clorh drico, a 100 mg de muestra disuelta en 5 mL de a cido clorh drico. Mezclar, transferir a un tubo de comparacio n de color y dejar en reposo durante 30 minutos. Si se obtiene color con la solucio n de la muestra, aquel no debe ser ma s oscuro que el de un control que
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contenga 0,02 mg de arse nico (As), tratado en forma similar a la muestra de prueba, al observarlo hacia abajo contra una supercie blanca (0,02% de As). Sustancias no precipitadas por sulfuro de hidro geno (como SO4)Disolver 0,90 mL (2 g) en 5 mL de a cido clorh drico y diluir con 95 mL de agua. Precipitar el antimonio completamente con sulfuro de hidro geno, dejar que el precipitado sedimente y ltrar con cuidado de no transferir mucho del precipitado al papel de ltro. (Conservar el precipitado). Agregar 0,5 mL de a cido sulfu rico a 50 mL del ltrado, evaporar en un crisol de porcelana tarado hasta sequedad e incinerar a 800 + 258 durante 15 minutos. (Conservar el residuo). El peso del residuo incinerado no debe ser ma s de 0,0010 g mayor que el del peso obtenido en una prueba completa con un blanco (0,10%). Hierro h241iAl residuo de la prueba de Sustancias no precipitadas por sulfuro de hidro geno agregar 2 mL de a cido clorh drico y 5 gotas de a cido n trico y evaporar en ban o de vapor hasta sequedad. Recoger el residuo en 2 mL de a cido clorh drico y diluir con agua a 47 mL: la solucio n no presenta ma s de 0,01 mg de Fe (0,001%). Otros metales pesados (como Pb)Disolver el precipitado en el papel de ltro de la prueba de Sustancias no precipitadas por sulfuro de hidro geno con 75 mL de una solucio n que contenga 6 g de sulfuro de sodio y 4 g de hidro xido de sodio disueltos en agua y diluidos con agua a 100 mL. Recolectar el ltrado en el matraz original que contenga el resto del precipitado de sulfuro. Entibiar la solucio n para disolver los sulfuros solubles y dejar que sedimenten los sulfuros insolubles. Filtrar, lavar bien con sulfuro de hidro geno SR y disolver el precipitado que haya quedado en el papel de ltro con 10 mL de a cido clorh drico diluido caliente. Diluir el ltrado con agua a 50 mL. Neutralizar una porcio n de 25 mL de esta solucio n con hidro xido de sodio 1 N y agregar 1 mL de a cido ace tico 1 N y 10 mL de sulfuro de hidro geno SR. Si se obtiene color marro n, e ste no debe exceder el producido por 0,05 mg de io n plomo en un volumen igual de solucio n que contenga 1 mL de a cido ace tico 1 N y 10 mL de sulfuro de hidro geno SR (0,005%). Cambio en la redaccio n: Perclorato de Litio, LiClO4106,39 Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n:
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[7791-03-9]&1S
(USP30)
Perclorato de Magnesio Anhidro, Mg(ClO 4 ) 2 223,21 [10034-81-8]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
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Pero xido de Hidro geno al 30 por ciento, [7722-84-1]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
H2O234,01
Cambio en la redaccio n: Persulfato de Amonio &(Peroxidisulfato de Amonio),&1S (USP30) (NH4)2S2O8228,20 &[7727-54-0]&1S (USP30)Usar Peroxidisulfato de Amonio grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Polie ster de Succinato de Dietilenglicol, (OCH2CH2OCH2CH2 OOCCH2CH2COO)n&[26183-02-8]&1S (USP30)L quido viscoso y transparente. Soluble en cloroformo. Se estabiliza mediante modicacio n del polie ster de succinato de dietilenglicol, para hacerlo adecuado al uso en cromatograf a de gas-l quido a una temperatura de 2008. [NOTAUn grado adecuado se encuentra disponible en Alltech, www.alltechweb.com].
4046
Cambio en la redaccio n: Pu rpura de m -Cresol, C 21 H 18 O 5 S 382,43 (USP30)Usar un grado adecuado.

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Cambio en la redaccio n: [ 2303-01-7 ] Sal de Fast Blue BB, (C 17 H 18 ClN 3 O 3 ) 2 ZnCl 2 831,89 [15710-69-7]&1S (USP30)Polvo amarillo que funde aproximadamente a 1628, con descomposicio n. Moderadamente soluble en agua. CloruroTransferir aproximadamente 80 mg, pesados con exactitud, a un vaso de precipitados adecuado. Agregar 25 mL de acetona, 25 mL de agua y 500 mg de nitrato de sodio. Mezclar hasta completar la disolucio n. Valorar con nitrato de plata 0,01 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. No se encuentra menos de 15,0% de cloruro.
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&1S
Cambio en la redaccio n: Queroseno&[8008-20-6]&1S (USP30)Mezcla de hidrocarburos, principalmente de la serie del metano. L quido transparente e incoloro. &&1S (USP30) Peso espec co: aproximadamente 0,80. Destila entre 1808 y 3008. Cambio en la redaccio n: Reineckato de Amonio (Sal de Reinecke), NH4[Cr(NH3)2(SCN)4] H2O354,44 &[13573-16-5]&1S (USP30) Cristales de color rojo oscuro o polvo cristalino rojo. Moderadamente soluble en agua fr a; ma s soluble en agua caliente. Se descompone gradualmente en solucio n. SensibilidadDisolver 50 mg en 10 mL de agua. Agregar 0,2 mL de la solucio n a 1 mL de una solucio n de 10 mg de cloruro de colina en 20 mL de agua y agitar suavemente: se forma un precipitado caracter stico en 5 a 10 segundos. Cambio en la redaccio n: Rojo Congo, C32H22N6Na2O6S2696,67 &[573-58-0]&1S (USP30) Polvo rojo oscuro o marro n rojizo. Se descompone con la exposicio n a humos a cidos. Sus soluciones tienen un pH de aproximadamente 8 a 9,5. Un g se disuelve en aproximadamente 30 mL de agua. Es poco soluble en alcohol. Pe rdida por secado h731iSecar a 1058 durante 4 horas: no pierde ma s de 3,0% de su peso. Residuo de incineracio nPesar con exactitud aproximadamente 1 g, previamente secado a 1058 durante 4 horas, y colocarlo en un crisol o ca psula de porcelana. Incinerar cuidadosamente hasta que este bien carbonizado, enfriar, agregar 2 mL de a cido sulfu rico e incinerar cuidadosamente hasta que el residuo se torne blanco o casi blanco. Enfriar, agregar 0,5 mL de a cido sulfu rico y 1 mL de a cido n trico, evaporar e incinerar nuevamente hasta peso constante: el peso del sulfato de sodio as obtenido esta entre 20,0% y 24,0% del peso de la muestra seca tomada. SensibilidadA 50 mL de agua exenta de dio xido de carbono, agregar 0,1 mL de solucio n de rojo congo (1 en 1000). El color rojo de la solucio n se torna violeta al agregar 0,05 mL de a cido clorh drico 0,10 N y recupera el color rojo tras agregar 0,05 mL de hidro xido de sodio 0,10 N. Cambio en la redaccio n: Sal de Fast Blue B, C14H12N4O2 ZnCl4475,47 &[91-91-8] &1S (USP30)Polvo verde. Pe rdida por secado h731iSecar al vac o a 1108 durante 1 hora: no pierde ma s de 5,0% de su peso. AbsorbanciaDisolver 50 mg en 100 mL de agua. En un segundo recipiente disolver 100 mg de 2-naftol en 100 mL de 2-metoxietanol. Pipetear 5 mL de la solucio n de prueba y 10 mL de la solucio n de 2naftol, transferirlos a un matraz volume trico de 100 mL y diluir a volumen con acetona. Para el blanco, pipetear 5 mL de agua y 10 mL de la solucio n de 2-naftol, transferirlos a un segundo matraz volume trico de 100 mL y diluir a volumen con acetona. Determinar la absorbancia de la solucio n de prueba en una celda de 1 cm a la longitud de onda de ma xima absorbancia, aproximadamente a 545 nm, con un espectrofoto metro adecuado, usando el blanco para ajustar el instrumento: la absorbancia no es menor de 0,80.
Cambio en la redaccio n: cido Cromotro cido 4,5-Dihidroxi-2,7Sal Diso dica del A pico (A naftalenodisulfo nico, Sal Diso dica), C10H6O8Na2S2 2H2O400,29 & [129-96-4]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Sal Nitroso R (Disulfonato de 1-Nitroso-2-naftol-3,6-disodio), NOC10H4OH(SO3Na)2377,26 &[525-05-3]&1S (USP30)Polvo cristalino o cristales amarillos. Un g se disuelve en aproximadamente 40 mL de agua; insoluble en alcohol. SensibilidadDisolver 500 mg de acetato de sodio en una solucio n de 0,4 mg de cloruro cobaltoso (0,1 mg de cobalto) en 5 mL de agua. Agregar 1 mL de a cido ace tico diluido y, a continuacio n, 1 mL de una solucio n de sal nitroso R (1 en 500): de inmediato se produce un color rojo que persiste cuando la solucio n se calienta a ebullicio n con 1 mL de a cido clorh drico durante 1 minuto. Cambio en la redaccio n: Salicilato de Etilo, C9H10O3166,17 &[118-61-6]&1S (USP30) L quido incoloro. Valoracio nInyectar una muestra apropiada en un cromato grafo de gases adecuado (ver Cromatograf a h621i) equipado con un detector de ionizacio n a la llama, usando helio como gas transportador. Las siguientes condiciones se consideran adecuadas: una columna capilar de 0,25 mm 6 10 m recubierta con una capa de 1 mm de metilsilicona; mantener la temperatura del inyector a 2408, la del detector a 3008 y la de la columna a 1508, programada para que aumente 108 por minuto hasta alcanzar los 2508. El a rea del pico de salicilato de etilo no es menos de 99% del a rea total. ndice de refraccio I n h831i: entre 1,5216 y 1,5236 a 208. Cambio en la redaccio n: Sebacato de Bis(2-etilhexilo) ( Sebacato de Dioctilo ), C 8 H 17 OOC(CH 2 ) 8 COOC 8 H 17 426,67 & [ 122-62-3 ] & 1S ( USP30 ) L quido pa lido de color pajizo. Insoluble en agua. Su ndice de refraccio n es de aproximadamente 1,448. Adecuado para usarse en cromatograf a de gases. Peso espec co, 208/208 h841i: entre 0,913 y 0,917. Intervalo de ebullicio n: entre 2438 y 2488 a 5 mm de mercurio. [ NOTA Un grado adecuado de Sebacato de Dioctilo esta disponible en Sigma-Aldrich, www.sigma-aldrich.com.] Cambio en la redaccio n: S lice de Diatomeas Calcinado&[68855-54-9]&1S (USP30)Una forma de s lice (SiO2) que consiste en fru stulas fundidas y fragmentos de diatomeas. Polvo amorfo no, de color rosado claro o blanco. Insoluble en agua, en a cidos y en soluciones diluidas de hidro xidos alcalinos.
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Pe rdida por incineracio nPesar con exactitud aproximadamente 4 g e incinerar hasta peso constante: no pierde ma s de 10,0% de su peso. Impurezas orga nicasNo se oscurece visiblemente cuando se incinera. Pe rdida por secado h731iSecar a 1108 durante 2 horas: no pierde ma s de 2,0% de su peso. [NOTAChromosorb P y Chromosorb W, disponibles en Alltech, www.alltechweb.com, son grados adecuados]. Cambio en la redaccio n: Sulfamato de Amonio, NH4OSO2NH2114,13 (USP30)Usar grado reactivo ACS.
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Cambio en la redaccio n: Sulfato Cu prico Anhidro, CuSO 4 159,61 & [ 7758-98-7 ] ceo exento de un matiz (USP30)Polvo blanco o blanco grisa azul. Se torna azul con la adicio n de una pequen a cantidad de agua. Soluble en agua. Almacenar en envases impermeables. Cloruros (Prueba para reactivos)Un g presenta no ma s de 0,02 mg de Cl (0,002%). Sustancias no precipitadas por sulfuro de hidro genoDeterminar segu n se indica para Acetato Cu prico grado reactivo ACS: el residuo no pesa ma s de 6 mg (0,15%).
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[7773-06-0]
&
&1S
Cambio en la redaccio n: Sulfato Ce rico, Ce(SO4)2 con una cantidad variable de agua (anhidro) 332,24 &[13590-82-4]&1S (USP30)Tambie n puede contener sulfatos de otros elementos te rreos poco comunes asociados. Cristales o polvo cristalino de color amarillo a amarillo anaranjado. Pra cticamente insoluble en agua fr a, lentamente soluble en a cidos minerales diluidos fr os, pero ma s fa cilmente soluble cuando se calienta con estos disolventes. Valoracio nPesar con exactitud aproximadamente 800 mg, transferir a un matraz, agregar 25 mL de agua y 3 mL de a cido sulfu rico y entibiar hasta disolver. Enfriar y agregar 60 mL de una mezcla de 1 volumen de a cido fosfo rico y 20 volu menes de agua. Agregar 25 mL de solucio n de yoduro de potasio (1 en 10), tapar el matraz y dejar en reposo durante 15 minutos. Reemplazar el aire ubicado sobre la solucio n por dio xido de carbono y, mientras continu a el ujo de dio xido de carbono hacia el interior del matraz, valorar el yodo liberado con tiosulfato de sodio 0,1 N SV, agregando 3 mL de almido n SR cerca del punto nal. Cada mL de tiosulfato de sodio 0,1 N equivale a 33,22 mg de Ce(SO4)2. No se encuentra menos de 80,0%. Cloruros (Prueba para reactivos)Disolver 1 g en una mezcla de 5 mL de a cido n trico y 4 mL de agua. Filtrar, si fuera necesario, y diluir con agua a 20 mL. A 10 mL de la dilucio n, agregar 1 mL de nitrato de plata SR, dejar en reposo durante 10 minutos y ltrar hasta que se torne transparente. A los 10 mL restantes de solucio n de prueba, agregar 1 mL de nitrato de plata SR: si se produce turbidez, e sta no excede la de un control que se prepara agregando 0,05 mg de Cl al ltrado obtenido a partir de los primeros 10 mL de la solucio n de prueba (0,01%). Metales pesadosCalentar 500 mg con una mezcla de 10 mL de agua y 0,5 mL de a cido sulfu rico hasta que se complete la disolucio n. Enfriar, diluir con agua a 50 mL y hacer burbujear gas de sulfuro de hidro geno a trave s de la solucio n hasta que este saturada: el precipitado que se forma es blanco o no ma s oscuro que amarillo pa lido. HierroDisolver 100 mg en una mezcla de 5 mL de agua y 2 mL de a cido clorh drico, entibia ndola si fuera necesario, y enfriar. Transferir a una probeta con tapo n de vidrio, diluir con agua a 25 mL y agregar 5 mL de tiocianato de amonio SR y 25 mL de e ter. Agitar bien, aunque suavemente, y dejar que las capas se separen: si se produce color rosado en la capa de e ter, e ste no es ma s oscuro que el de un control, preparado de manera similar, que contenga 0,02 mg de Fe agregado (0,02%).
Sulfato de Aluminio y Potasio, AlK(SO4)2 12H2O474,39 [10042-67-1]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
Cambio en la redaccio n: Sulfato de Amonio, (NH4)2SO4132,14 &[7783-20-2]&1S Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n:
&
(USP30)
Sulfato de Brucina, (C23H26N2O4)2 H2SO4 7H2O1013,11 [5787-00-8]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
Cambio en la redaccio n: Sulfato de Calcio, CaSO 4 2H 2 O 172,17 &1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Sulfato de Litio, Li2SO4 H2O127,96 &[10377-48-7]&1S Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Sulfato de Magnesio, MgSO4 7H2O246,48 (USP30)Usar grado reactivo ACS.
& &
[ 7778-18-9 ]
(USP30)
[10034-99-8]
&1S
Cambio en la redaccio n: Sulfato de Magnesio Anhidro, MgSO4120,37 &[7487-88-9] &1S (USP30)El Sulfato de Magnesio Anhidro puede prepararse del siguiente modo. Colocar en un recipiente poco profundo una cantidad adecuada de sulfato de magnesio (ver anteriormente), preferentemente en polvo, y exponer a una temperatura de aproximadamente 808 durante varias horas, mezclando ocasionalmente. Calentar luego entre 2758 y 3008 hasta que el peso sea pra cticamente constante. Transferir el producto au n tibio a recipientes impermeables, dado que la sal anhidra es muy higrosco pica. Cambio en la redaccio n: Sulfato de p-Metilaminofenol, (p-CH3NHC6H4OH)2 H2SO4 344,38 &[55-55-0]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
4048
Cambio en la redaccio n: Sulfato de N quel, NiSO 4 6H 2 O 262,85 &1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Sulfato Fe rrico, Fe2(SO4)3 xH2O&[10028-22-5]&1S (USP30) Polvo blanco grisa ceo e higrosco pico, o perlas de color beige, lentamente solubles en agua. Valoracio nPesar con exactitud aproximadamente 700 mg y disolver en una mezcla de 50 mL de agua y 3 mL de a cido clorh drico en un matraz con tapo n de vidrio. Agregar 3 g de yoduro de potasio y dejar en reposo en la oscuridad durante 30 minutos. Luego diluir con 100 mL de agua y valorar con tiosulfato de sodio 0,1 N SV, agregando 3 mL de almido n SR cerca del punto nal. Cada mL de tiosulfato de sodio 0,1 N equivale a 5,585 mg de Fe: se encuentra no menos de 21,0% y no ma s de 23,0%. Materia insoluble (Prueba para reactivos)Una porcio n de 10 g, disuelta en una mezcla de 100 mL de agua y 5 mL de a cido sulfu rico, presenta no ma s de 2 mg de materia insoluble (0,02%). ClorurosDisolver 1 g entibiando en una mezcla de 10 mL de agua y 1 mL de a cido n trico, agregar 4 mL de a cido n trico adicional y diluir con agua a 50 mL. A 25 mL agregar 1 mL de a cido fosfo rico y 1 mL de nitrato de plata SR. Si se produce turbidez, esta no excede la obtenida con un control que contenga 0,01 mg de io n de cloruro (Cl), 1 mL de a cido n trico, 1 mL de a cido fosfo rico y 1 mL de nitrato de plata SR (0,002%). Hierro ferrosoDisolver 4 g entibiando con 50 mL de a cido sulfu rico diluido (1 en 10), enfriar y valorar con permanganato de potasio 0,1 N: no se requiere ma s de 0,16 mL para que aparezca un color rosado permanente (0,02% como Fe+2). [NOTADado que los reactivos empleados en las pruebas de Cobre y Cinc pueden contener cantidades excesivas de cobre y de cinc, primero se los debe puricar extrayendo con Solucio n de Extraccio n de Ditizona (ver Plomo h251i).] CobreDisolver 1,2 g en 100 mL de agua. A 10 mL agregar 50 mL de una solucio n que contenga 5 g de tartrato de amonio y 5 mL de hidro xido de amonio. Agregar 10 mL de Solucio n de Ditizona Esta ndar (ver Plomo h251i), agitar durante 2 minutos, retirar la capa de ditizona y comparar el color rosado con el de un control que contenga 6 mg de io n de cobre (Cu) y que este tratado exactamente como la porcio n de 10 mL de la solucio n de prueba. Si el color de la solucio n de prueba es menos intenso que el del control, entonces la muestra de prueba contiene menos del l mite de Cobre y de Cinc. Si el color de la solucio n de prueba es ma s intenso que el del control, agregar 15 mL de a cido clorh drico diluido (1 en 250) y agitar durante 2 minutos. Retirar la solucio n de ditizona y agitar con una segunda porcio n de 15 mL de a cido clorh drico diluido (1 en 250) durante 2 minutos. Retirar la ditizona, combinar los dos extractos a cidos y reservar para la prueba de Cinc. Si se produce color rosado en la solucio n de ditizona, aquel no es ma s oscuro que el de la solucio n control tratada exactamente como la solucio n de prueba (0,005%). CincA los extractos a cidos combinados reservados de la prueba de Cobre, agregar acetato de sodio 0,5 M para llevar el pH hasta un nivel comprendido entre 5,0 y 5,5, y luego agregar 1 mL de tiosulfato de sodio 0,1 N. Agregar 10 mL de Solucio n de Ditizona Esta ndar (ver Plomo h251i), agitar durante 2 minutos y permitir que las capas se separen. Retirar la ditizona y descartar la capa de agua. Si se produce color rosado, este no es ma s intenso que el de un control preparado agregando 0,006 mg de io n cinc (Zn) a los extractos a cidos combinados del control usado en la prueba de Cobre (0,005%). NitratoDisolver 10 g en 100 mL de a cido sulfu rico diluido (1 en 100), calentar hasta ebullicio n y verter, lentamente, en una mezcla de 140 mL de agua y 50 mL de amon aco concentrado SR. Filtrar a trave s de un ltro plegado mientras au n esta caliente, lavar con agua caliente hasta que el volumen del ltrado sea 300 mL, mezclar y enfriar. A 15 mL de esta solucio n, agregar 1 mL de solucio n de cloruro de sodio (1 en 200), 0,10 mL de ndigo carm n SR y 15 mL de a cido sulfu rico. El color azul no desaparece por completo al cabo de los 5 minutos (0,01%).
&
[ 7786-81-4 ]
Sustancias no precipitadas por amon acoEvaporar hasta sequedad 30 mL del ltrado obtenido en la prueba de Nitrato e incinerar suavemente: el peso del residuo no excede de 1 mg (0,10%). Cambio en la redaccio n: Sulfato Ferroso, FeSO4 7H2O278,02 Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Sulfato Mercu rico, HgSO4296,65 Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Sulfuro de Hidro geno, H2S34,08 &[7783-06-4]&1S (USP30) Gas incoloro y venenoso, ma s pesado que el aire. Soluble en agua. Se genera tratando sulfuro ferroso con a cido clorh drico diluido o a cido sulfu rico diluido. Se pueden usar otros sulfuros que produzcan sulfuro de hidro geno con a cidos diluidos. Tambie n esta disponible en forma comprimida en cilindros. Cambio en la redaccio n: Tetracloruro de Carbono, CCl4153,82 &[56-23-5]&1S (USP30) Usar un grado que cumpla con las especicaciones de la ACS en Reagent Chemicals, 8va Edicio n. Cambio en la redaccio n: Te t r a u o r o b o r a t o d e p - N i t r o b e n c e n o d i a z o n i o , NO2C6H4N2BF4236,92 &[456-27-9]&1S (USP30)Cristales color dorado amarillento. Soluble en acetonitrilo. [Precaucio nSensible a los golpes; mantener refrigerado.] Valoracio nTransferir aproximadamente 30 mg, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL con proteccio n act nica. Disolver en a cido clorh drico 0,01 N, diluir a volumen con a cido clorh drico 0,01 N y mezclar. Usando material de vidrio con proteccio n act nica, diluir 2,0 mL de la solucio n resultante a 50,0 mL con metanol de grado espectrofotome trico. Medir la absorbancia de esta solucio n en una celda de 1 cm aproximadamente a 255 nm, usando metanol como blanco. Calcular la absortividad de la solucio n, dividiendo la absorbancia medida por la concentracio n en g por mL. Calcular el valor de valoracio n, por la fo rmula: 100a / 59,4 en donde a es la absortividad de la solucio n: no se encuentra menos de 95,0%. Cambio en la redaccio n: Tierra de Diatomeas Fundido-Calcinada&[91053-39-3] &1S (USP30)Usar un grado adecuado. [NOTASe puede obtener un grado adecuado de Alltech, www.alltechweb.com, disponible como Chromosorb W, AWDMCS]. Cambio en la redaccio n: Tierra de Diatomeas Silanizada&[91053-39-3]&1S (USP30) Usar un grado adecuado. [NOTAExisten grados adecuados disponibles comercialmente como Anachrome Q, Gas-Chrom Q y Varaport 30].
& &
[7720-78-7]&1S
(USP30)
[7783-35-9]&1S
(USP30)
4049
Cambio en la redaccio n: Tiocianato de Amonio & (Rodanida de Amonio),& 1S (USP30) NH4SCN76,12 &[1762-95-4]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Tiocianato Mercu rico, Hg(SCN) 2 316,76 & [ 592-85-8 ] (USP30)Polvo cristalino blanco. Muy poco soluble en agua; soluble en soluciones de cloruro de sodio; poco soluble en alcohol y en e ter. Cambio en la redaccio n: Tornasol&[1393-92-6]&1S (USP30)Pigmento azul preparado a partir de varias especies de Rocella DeCandolle, Lecanora Acharius u otros l quenes (Fam. Parmeliaceae). Descripcio nCubos, masas, fragmentos o gra nulos de color azul ndigo o violeta intenso. Tiene el olor combinado de ndigo y violetas y tin e la saliva de un azul intenso. Las sustancias indicadoras que contiene son solubles en agua y menos solubles o insolubles en alcohol. CenizasProduce no ma s de 60,0% de ceniza. Cambio en la redaccio n:
&
&1S
Valoracio nPesar con exactitud aproximadamente 500 mg, transferir a un recipiente adecuado, agregar 30 mL de agua y 2 mL de a cido sulfu rico diluido (1 en 4), agitar por rotacio n moderada para disolver y pasar dio xido de azufre gaseoso a trave s de la solucio n hasta que la reduccio n nalice y la solucio n tenga un color azul brillante. Calentar a ebullicio n moderada pasando una corriente de dio xido de carbono a trave s de la solucio n para eliminar el exceso de dio xido de azufre, luego enfriar y valorar con permanganato de potasio 0,1 N SV. Cada mL de permanganato de potasio 0,1 N consumido equivale a 11,7 mg de NH4VO3. No se encuentra menos de 98,0%. Solubilidad en hidro xido de amonioDisolver 1 g en una mezcla de 3 mL de hidro xido de amonio y 50 mL de agua tibia: la solucio n es transparente e incolora. CarbonatoAgregar 1 mL de agua y 2 mL de a cido clorh drico diluido a 500 mg: no se produce efervescencia. CloruroDisolver 250 mg en 40 mL de agua caliente, agregar 2 mL de a cido n trico y dejar en reposo durante 1 hora. Filtrar y agregar al ltrado 0,5 mL de nitrato de plata SR: la turbidez producida no excede la turbidez de un blanco que contenga 0,5 mg de Cl (0,2%) agregado. SulfatoDisolver 500 mg en 50 mL de agua caliente y agregar 2 mL de a cido clorh drico diluido y 1,5 g de clorhidrato de hidroxilamina. Calentar a 608 durante 3 minutos, ltrar, enfriar y agregar al ltrado 2 mL de cloruro de bario SR: no se produce turbidez ni precipitado en el plazo de 30 minutos. Cambio en la redaccio n: Verde Brillante (Verde de Malaquita G), C27H34N2O4S482,64 [3051-11-4]&1S (USP30)Cristales brillantes de color amarillo dorado. Soluble en agua y en alcohol. Ma ximo de absorcio n: 623 nm.
&
Tricloruro de Antimonio (Cloruro Antimonioso), SbCl3228,12 [10025-91-9]&1S (USP30)Usar grado reactivo ACS.
Cambio en la redaccio n: Triuoruro de Boro, BF367,81 &[7637-07-2]&1S un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: Triuoruro de Boro al 14% en Metanol &[373-57-9]&1S Usar un grado adecuado. Cambio en la redaccio n: Trio xido de Arse nico, As2O3197,84 &[1327-53-3]&1S (USP30) Utilizar grado reactivo ACS. [NOTASe puede obtener Trio xido de Arse nico de calidad apropiada para usar como esta ndar primario del Instituto Nacional de Normas y Tecnolog a del gobierno de Estados Unidos (National Institute of Standards and Technology - NIST), Ofce of Standard Reference Materials, www.nist.gov, como muestra de esta ndar N8 83]. Cambio en la redaccio n: Trio xido de Cromo, CrO399,99 &[1333-82-0]&1S grado reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Vanadato de Amonio (Metavanadato de Amonio), NH4VO3 116,98 &[7803-55-6]&1S (USP30)Polvo blanco y cristalino. Poco soluble en agua fr a, soluble en agua caliente y en amon aco diluido SR.
(USP30)Usar (USP30) (USP30)Usar
Cambio en la redaccio n: Yodo (Iodo), I2253,81 reactivo ACS. Cambio en la redaccio n: Yoduro de 1-Etilquinaldinio, C12H14IN299,15 &[606-55-3] lido verde amarillento. Moderadamente soluble en (USP30)So agua. Valoracio nDisolver aproximadamente 290 mg, pesados con exactitud, en 100 mL de agua y agregar 10 mL de a cido ace tico glacial. Valorar con nitrato de plata 0,1 N SV y determinar el punto nal potenciome tricamente usando un electrodo selectivo para io n plata y un electrodo de referencia de calomel que contenga nitrato de potasio 1 M. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de nitrato de plata 0,1 N equivale a 29,92 mg de C12H14IN: no se encuentra menos de 97,0%.
&1S &
[7553-56-2]&1S
(USP30)Usar
grado
Cambio en la redaccio n: quido Yoduro de Metilo, CH3I141,94 &[74-88-4]&1S (USP30)L incoloro, pesado y transparente. Poco soluble en agua. Miscible con alcohol, e ter y e ter de petro leo. Se torna marro n por exposicio n a la luz como resultado de la liberacio n de yodo. Valoracio nAgregar 1 mL a un matraz volume trico de 100 mL tarado con 10 mL de alcohol. Volver a pesar, agregar alcohol a volumen y mezclar. Pipetear 20 mL y transferir a un matraz con tapo n de vidrio y agregar 50,0 mL de nitrato de plata 0,1 N SV y 2 mL de a cido n trico. Insertar el tapo n inmediatamente, agitar con frecuencia durante 2 horas y dejar en reposo en la oscuridad toda la noche. Volver a agitar durante 2 horas, luego agregar 50 mL de agua y 3 mL de sulfato fe rrico amo nico SR y valorar volume tricamente el
4050
exceso de nitrato de plata con tiocianato de amonio 0,1 N SV. Cada mL de nitrato de plata 0,1 N equivale a 14,19 mg de CH3I: no se encuentra menos de 98,5%. Intervalo de ebullicio n (Prueba para reactivos)Destilar 50 mL en un recipiente colector fr o parcialmente cerrado: no menos de 48 mL destilan entre 41,58 y 438. Densidad: entre 2,270 y 2,285. Residuos de evaporacio nEvaporar 4 mL (10 g) en un ban o de vapor y secar el residuo a 1058 durante 1 hora: el residuo no pesa ma s de 1 mg (0,01%). AcidezAgitar 3 mL con 5 mL de agua durante 30 segundos y retirar la capa inferior inmediatamente: la capa acuosa es neutra al tornasol y cuando se agrega 1 mL de nitrato de plata SR no presenta ma s que una leve opalescencia. Cambio en la redaccio n: Yoduro Mercu rico Rojo, HgI2454,40 &[7774-29-0]&1S Usar grado reactivo ACS.
(USP30)
Pesar con exactitud aproximadamente 5 g de biftalato de potasio, previamente triturado ligeramente y secado a 1208 durante 2 horas, y disolver en 75 mL de agua libre de dio xido de carbono. Agregar 2 gotas de fenolftale na SR y valorar con la solucio n de hidro xido de sodio hasta obtener un color rosa permanente. Cada &204,23 mg&1S (USP30) de biftalato de potasio equivalen a 1 mL de hidro xido de sodio 1 N.
TRICAS SOLUCIONES VOLUME
NOTAS(1) Las soluciones de hidro xidos alcalinos absorben dio xido de carbono cuando se exponen al aire. Deben conservarse en frascos con tapones adecuados bien ajustados con un tubo relleno de una mezcla de hidro xido de sodio y cal (tubos de cal sodada) que absorbe el dio xido de carbono, para que el aire que ingrese en el recipiente pase a trave s de este tubo. (2) Preparar las soluciones de menor concentracio n (por ejemplo, 0,1 N; 0,01 N) diluyendo cuantitativamente volu menes medidos con exactitud de la solucio n 1 N con suciente agua exenta de dio xido de carbono para obtener la concentracio n deseada. Volver a normalizar la solucio n con frecuencia.
Cambio en la redaccio n: Cambio en la redaccio n: Tiosulfato de Sodio, De cimo Normal (0,1 N) Na2S2O3 5H2O, 248,19 24,82 g en 1000 mL Disolver aproximadamente 26 g de tiosulfato de sodio y 200 mg de carbonato de sodio en 1000 mL de agua recientemente calentada a ebullicio n y enfriada. Normalizar esta solucio n del siguiente modo. Pesar con exactitud aproximadamente 210 mg de dicromato de potasio patro n primario, previamente pulverizado y secado &segu n las instrucciones de la etiqueta, si fuera necesario,&1S (USP30) y disolver en 100 mL de agua en un matraz de 500 mL con tapo n de vidrio. Mezclar por rotacio n moderada para disolver los so lidos, destapar y agregar ra pidamente 3 g de yoduro de potasio, 2 g de bicarbonato de sodio y 5 mL de a cido clorh drico. Tapar suavemente el matraz, mezclar por rotacio n moderada y dejar en reposo durante exactamente 10 minutos en un lugar oscuro. Enjuagar el tapo n y las paredes interiores del matraz con agua y valorar el yodo liberado con la solucio n de tiosulfato de sodio hasta que la solucio n se torne de un color verde amarillento. Agregar 3 mL de almido n SR y continuar con la volumetr a hasta que el color azul haya desaparecido. Realizar una determinacio n con un blanco. Volver a normalizar la solucio n con la frecuencia que indiquen los datos de estabilidad de laboratorio. En caso de no contar con dichos datos, normalizar semanalmente.
Hidro xido de Potasio, Normal (1N) KOH, 56,11 56,11 g en 1000 mL Disolver 68 g de hidro xido de potasio en 950 mL de agua. Agregar una solucio n saturada recie n preparada de hidro xido de bario hasta que no se formen ma s precipitados. Agitar bien la mezcla y dejarla en reposo durante la noche en un frasco con tapo n. Decantar el l quido transparente o ltrar la solucio n en un frasco de poliolena herme tico y normalizarlo siguiendo el procedimiento indicado en Hidro xido de Sodio, Normal (1 N).
Hidro xido de Sodio, Normal (1N) NaOH, 40,00 40,00 g en 1000 mL Disolver 162 g de hidro xido de sodio en 150 mL de agua libre de dio xido de carbono, enfriar la solucio n a temperatura ambiente y ltrar a trave s de papel de ltro endurecido. Transferir 54,5 mL del ltrado transparente a un recipiente de poliolena herme tico y diluir con agua libre de dio xido de carbono a 1000 mL.
Tablas de Referencia / Descripcio n y Solubilidad
4051
PSULAS Y ENVASES PARA DISPENSAR CA TABLETAS
La siguiente tabla sirve como fuente de informacio n para el farmace utico que participa en la situacio n t pica de dispensacio n y que ya esta familiarizado con los requisitos de Envasado y almacenamiento establecidos en las monograf as individuales. En la tabla adjunta se listan las ca psulas y las tabletas ociales de la Farmacopea de los Estados Unidos y se indican las especicaciones pertinentes a los envases impermeable (I), bien cerrado (B) y resistente a la luz (RL) en los que se deben dispensar los medicamentos que se reenvasan. Esta tabla no esta destinada a remplazar los requisitos denitivos declarados en las monograf as individuales ni debe interpretarse como un reemplazo de los mismos. Especicaciones del Envase para Tabletas y Ca psulas Especicaciones del Envase Agregar lo siguiente: & Metilsulfonilmetano, Tabletas I, RL
&1S (USP30)
Especicaciones del Envase para Tabletas y Ca psulas (Continuacio n) Especicaciones del Envase
T tulo de la Monograf a
&
Agregar lo siguiente: Irbesarta n, Tabletas
B&1S (USP30)
Agregar lo siguiente: & Irbesarta n e Hidroclorotiazida, Tabletas
B&1S (USP30)
T tulo de la Monograf a
Agregar lo siguiente: & Bitartrato de Hidrocodona y Metilbromuro de Homatropina, Tabletas Agregar lo siguiente: & Clorhidrato de Fexofenadina, Tabletas Agregar lo siguiente: & Clorhidrato de Fexofenadina y Clorhidrato de Pseudoefedrina, Tabletas de Liberacio n Prolongada Agregar lo siguiente: & Clorhidrato de Nefazodona, Tabletas Agregar lo siguiente: & Desogestrel y Etinil Estradiol, Tabletas Agregar lo siguiente: & Doxazosina, Tabletas Agregar lo siguiente: & Estradiol y Acetato de Noretindrona, Tabletas Agregar lo siguiente: & Fosinopril So dico, Tabletas Agregar lo siguiente: & Fosinopril So dico e Hidroclorotiazida, Tabletas
Agregar lo siguiente: & Mononitrato de Isosorbida, Tabletas I, RL

&1S (USP30)
I&1S (USP30)
Agregar lo siguiente: & Nevirapina, Tabletas B&1S (USP30) Agregar lo siguiente: & Norgestimato y Etinil Estradiol, Tabletas Agregar lo siguiente: & Pentazocina y Acetaminofeno, Tabletas
B&1S (USP30)
B&1S (USP30)
B&1S (USP30)
I, RL
&1S (USP30)
I&1S (USP30)
Agregar lo siguiente: & Quinapril, Tabletas
B&1S (USP30)
B&1S (USP30)
I&1S (USP30)
B&1S (USP30)
I&1S (USP30)
I&1S (USP30)
4052
Descripcio n y Solubilidad / Tablas de Referencia
N Y SOLUBILIDAD DESCRIPCIO Descripcio n y Solubilidad Relativa de Art culos de la USP y del NF

Las secciones descripcio n y solubilidad relativas a un art culo (anteriormente incluidas en la monograf a individual) son de ndole general. La informacio n se suministra para quienes usan, preparan y dispensan fa rmacos, so lo para indicar las propiedades descriptivas y de solubilidad de un art culo que cumple con las normas de la monograf a. Las propiedades no son normas o pruebas de pureza en s mismas aunque pueden contribuir indirectamente a la evaluacio n preliminar de la integridad de un art culo. Agregar lo siguiente:
& Aceite de Coco: L quido viscoso transparente, de color blanco a tostado amarillento claro. Fa cilmente soluble en cloruro de metileno y en e ter de petro leo (pe: 658 a 708); muy poco soluble en alcohol; pra cticamente insoluble en agua. Categor a del NF: Agente de recubrimiento; agente emulsionante y/o solubilizante.&1S (NF25)
Sabor y Olor
En muchos casos se indican caracter sticas organole pticas porque pueden resultar propiedades descriptivas y u tiles de las sustancias. Sin embargo, no esta n destinadas para su aplicacio n como pruebas de identicacio n de sustancias. La inclusio n del olor y el sabor, entre otras propiedades descriptivas, puede ayudar a identicar el agente causante despue s de una exposicio n accidental o el contacto con una sustancia. Esta informacio n se ofrece como advertencia o para informar acerca de las sensaciones que pueden experimentarse. Se recomienda rmemente no usar el olor o el sabor como pruebas de identicacio n o contenido. El olor caracter stico de una sustancia vola til aparece de inmediato al abrir el envase que lo contiene. El olor puede ser agradable (por ejemplo, el Aceite de Menta), desagradable (por ejemplo, el Dio xido de Azufre) o potencialmente peligroso ante la exposicio n prolongada (por ejemplo, Alquitra n de Hulla). Adema s, se puede encontrar un olor inesperado si no se conocen las caracter sticas de una sustancia o si un envase ha sido etiquetado incorrectamente. En consecuencia, los envases de tales sustancias se deben abrir con precaucio n, preferiblemente en una campana de extraccio n bien ventilada. Asimismo, se puede experimentar una sensacio n o un sabor caracter sticos en la boca si trazas de material residual presente en los dedos entran inadvertidamente en contacto con la lengua o con las mucosas adyacentes.
& Acetato de Desmopresina: Polvo blanco, ligero. Soluble en agua, en alcohol y en a cido ace tico.&1S (USP30)
& Acetato de Gonadorelina: Polvo blanco a levemente amarillento. Soluble en agua; moderadamente soluble en metanol.&1S (USP30)
& Besilato de Amlodipino: Polvo blanco o casi blanco. Fa cilmente soluble en metanol; moderadamente soluble en alcohol; poco soluble en 2-propanol y en agua.&1S (USP30)
& Budeso nida: Polvo cristalino blanco a blanquecino, inodoro. Fa cilmente soluble en cloroformo; moderadamente soluble en alcohol; pra cticamente insoluble en agua y en heptano.&1S (USP30)
Solubilidad
Se considera una prueba de pureza so lo cuando, en la monograf a individual, se la indica como prueba de solubilidad cuantitativa especial y esta designada bajo el encabezado de la prueba. Las solubilidades aproximadas de sustancias de la Farmacopea y del Formulario Nacional se indican mediante los te rminos descriptivos de la siguiente tabla. El te rmino miscible utilizado en esta Farmacopea se reere a una sustancia que produce una mezcla homoge nea al mezclarse en cualquier proporcio n con el disolvente designado. Te rmino Descriptivo Muy soluble Fa cilmente soluble Soluble Moderadamente soluble Poco soluble Muy poco soluble Pra cticamente insoluble o Insoluble Partes de Disolvente Requeridas para 1 Parte de Soluto Menos de 1 De 1 a 10 De 10 a 30 De 30 a 100 De 100 a 1000 De 1000 a 10 000 10 000 o ma s
& Copol mero de Metacrilato de Amino: Gra nulos incoloros a amarillentos. Soluble en acetona, en alcohol isoprop lico y en a cidos diluidos; pra cticamente insoluble en agua. Las soluciones son transparentes a ligeramente turbias. Categor a del NF: Agente de recubrimiento; pol mero de membrana; aglutinante de tabletas.&1S (NF25)
& Dantroleno So dico: Polvo no de color anaranjado a marro n anaranjado. Moderadamente soluble en acetona, en dimetilformamida y en glicerina.&1S (USP30)
& Didanosina: Polvo cristalino blanco a blanquecino. Muy soluble en dimetil sulfo xido; pra cticamente insoluble o insoluble en acetona y en metanol.&1S (USP30)
Los art culos solubles de la Farmacopea y del Formulario Nacional, cuando se solubilizan, pueden mostrar trazas de impurezas f sicas, tales como fragmentos diminutos de papel de ltro, bras y otras part culas, a menos que sean limitados o excluidos por pruebas denidas u otras especicaciones en las monograf as individuales.
& Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo: L quido blanco lechoso de baja viscosidad con un de bil olor caracter stico. Es miscible con agua en cualquier proporcio n; se mantiene la apariencia blanca lechosa. Al mezclar una parte con
Tablas de Referencia / Descripcio n y Solubilidad
4053
cinco partes de acetona, alcohol o alcohol isoprop lico, se obtiene una solucio n viscosa transparente o levemente opalescente; el pol mero primero precipita, pero luego se disuelve en el disolvente orga nico en exceso. Cuando se mezcla con hidro xido de sodio 1 N en una relacio n de 1 : 2, la dispersio n no se disuelve; se mantiene la apariencia blanca lechosa. Categor a del NF: Agente de recubrimiento; pol mero de membrana; aglutinante de tabletas.&1S (NF25) Agregar lo siguiente:
& Drospirenona: Polvo blanco a blanquecino. Fa cilmente soluble en cloruro de metileno; soluble en acetona y en metanol; moderadamente soluble en acetato de etilo y en alcohol; pra cticamente insoluble en hexano y en agua.&1S (USP30)
& Meloxicam: Polvo amarillo pa lido. Soluble en dimetilformamida; poco soluble en acetona; muy poco soluble en metanol y en alcohol; pra cticamente insoluble en agua.&1S (USP30)
& Metilsulfonilmetano: Polvo o cristales escamosos de color blanco. Funde aproximadamente a 1098. Fa cilmente soluble en agua, en metanol, en alcohol y en acetona. Moderadamente soluble en e ter.&1S (USP30)

& Eritritol: Polvo cristalino blanco o casi blanco, o gra nulos de libre uidez. Es estable al calor y no es higrosco pico. Fa cilmente soluble en agua; muy poco soluble en alcohol. Categor a del NF: Humectante; agente edulcorante.&1S (NF25)
Milrinona: So lido cristalino, de color blanco a tostado. Es higrosco pico. Fa cilmente soluble en dimetil sulfo xido; &muy poco soluble en metanol; pra cticamente insoluble en agua y en cloroformo.&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
& Estro genos Conjugados Sinte ticos: Un polvo cristalino o amorfo, blanco a beige claro que es inodoro o con un olor leve.&1S (USP30)
& Sevourano: L quido transparente, incoloro, no inamable y vola til. Poco soluble en agua. Miscible con alcohol, con cloroformo y con e ter.&1S (USP30)
& Topiramato: Polvo blanco a blanquecino. Fa cilmente soluble en cloruro de metileno.&1S (USP30)
4054
Licopeno / Suplementos Diete ticos
Suplementos Diete ticos

Monograf as Ociales
Extracto de Tomate con Licopeno
&
Recuento microbiano h2021iCumple con los requisitos de las pruebas para ausencia de Salmonella spp, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa. El recuento total de microorganismos aerobios no excede de 1000 ufc por g, y el recuento total combinado de hongos lamentosos y levaduras no excede de 200 ufc por g.&1S (USP30)
&
L mite de aatoxinas h561i: no ma s de 4 mg por kg del total de aatoxinas B1, B2, G1 y G2; no ma s de 2 mg por kg de aatoxina B1.&1S (USP30)
&Metilsulfonilmetano
C2H6O2S 94,13 Dimethyl sulfone. Sulfonilbismetano
[67-71-0].
El Metilsulfonilmetano contiene no menos de 98,0 por

ciento y no ma s de 102,0 por ciento de C2H6O2S, calculado con respecto a la sustancia anhidra. La pureza cromatogra ca no es menos de 99,8%.
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. Esta ndares de referencia USP h11iER Metilsulfonilmetano USP. ER Dimetil Sulfo xido USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki.
B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Intervalo de fusio n h741i: entre 108,58 y 110,58. Recuento microbiano h2021iCumple con los requisitos de las pruebas para determinar la ausencia de Escherichia coli en 10 g. El recuento total de microorganismos aerobios no excede de 1000 ufc por g o mL, y el recuento total combinado de hongos lamentosos y levaduras no excede de 100 ufc por g o mL. Agua, Me todo I h921i: no ma s de 0,1%. [NOTAPara este ana lisis, se pueden necesitar aproximadamente 500 mg de metilsulfonilmetano.] Metales pesados, Me todo I h231i: 3 mg por g. Pureza cromatogra ca y l mite del dimetil sulfo xido Solucio n madre del esta ndarDisolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Dimetil Sulfo xido USP y diluir cuantitativamente con metanol, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1,0 mg de ER Dimetil Sulfo xido USP por mL. Solucio n de control de sensibilidadDiluir la Solucio n madre del esta ndar con metanol para obtener una solucio n con una concentracio n de 2,0 mg por mL. Solucio n de aptitud del sistemaEn un matraz volume trico de 50 mL, disolver 20 mg de ER Metilsulfonilmetano USP en 5 mL de la Solucio n madre del esta ndar, diluir a volumen con metanol y mezclar para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg de ER Dimetil Sulfo xido USP por mL y 0,4 mg de ER Metilsulfonilmetano USP por mL. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 100 mg de metilsulfonilmetano, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL, disolver y diluir a volumen con metanol, y mezclar. Someter a ultrasonido a 508 durante 1 minuto, dejar que se enfr e a temperatura ambiente y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar el cromato grafo de gases con un detector de ionizacio n a la llama y una columna capilar de 0,53 mm 6 30 m, recubierta con una fase G2 de 5 mm de espesor. Mantener la temperatura de la columna a 1208. Usar helio como gas transportador, el cual uye a una velocidad de 5,0 mL por minuto. La relacio n de particio n es 2 : 1. Mantener la temperatura del inyector y del detector a 2508. Cromatograar la Solucio n de control de sensibilidad: el pico de dimetil sulfo xido debe ser mayor que 10 veces la altura del ruido, esta u ltima se determina mediante un procedimiento adecuado. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre dimetil sulfo xido y metilsulfonilmetano no es menor de 2,0. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo un volumen (aproximadamente 1 mL) de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma y medir las respuestas de los picos principales. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Metilsulfonilmetano tomada, por la fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es la respuesta de cada impureza individual en el cromatograma de la Solucio n de prueba; y rs es la suma de las respuestas de todos los picos, diferentes del pico de disolvente: no se encuentra ma s de 0,1% de dimetil sulfo xido; no se encuentra ma s de
Suplementos Diete ticos / Valeriana
4055
0,05% de cualquier otra impureza individual; y la suma de todas las impurezas, incluyendo el dimetil sulfo xido, no es ma s de 0,2%. Valoracio n DiluyenteTransferir aproximadamente 950 mL de metanol a un matraz volume trico de 1 L. Agregar 0,60 mL de di(etilenglicol) metil e ter y diluir a volumen con metanol. Preparacio n esta ndarDisolver en Diluyente una cantidad, pesada con exactitud, de ER Metilsulfonilmetano USP y diluir cuantitativamente con Diluyente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,4 mg por mL. Someter a ultrasonido a 508 durante 1 minuto, dejar que se enfr e a temperatura ambiente y mezclar. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 40 mg de Metilsulfonilmetano, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Someter a ultrasonido a 508 durante 1 minuto, dejar que se enfr e a temperatura ambiente y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar el cromato grafo de gases con un detector de ionizacio n a la llama y una columna capilar de 0,53 mm 6 30 m, recubierta con una fase G2 de 5 mm. Mantener la temperatura de la columna a 1208. Usar helio como gas transportador, el cual uye a una velocidad de 5,0 mL por minuto. La relacio n de particio n es 2 : 1. Mantener la temperatura del inyector y del detector a 2508. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 1 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de C2H6O2S en la porcio n de Metilsulfonilmetano tomada, por la fo rmula: 100C(RU / RS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Metilsulfonilmetano USP en la Preparacio n esta ndar; y RU y RS son los cocientes de respuesta entre los picos de metilsulfonilmetano y di(etilenglicol) metil e ter, obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Variacio n de peso h2091i: cumplen con los requisitos. Valoracio n Diluyente, Preparacio n esta ndar y Sistema cromatogra co Proceder segu n se indica en Valoracio n en Metilsulfonilmetano. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas. Disolver en Diluyente, una porcio n del material reducido a polvo no, pesada con exactitud, equivalente aproximadamente a 1 Tableta, mezclar y someter a ultrasonido durante 15 minutos a 508. Dejar que se enfr e a temperatura ambiente, diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Diluir cuantitativamente con Diluyente para obtener una concentracio n nal de 0,4 mg de metilsulfonilmetano por mL. Transferir aproximadamente 1 mL de la suspensio n a un tubo de microcentr fuga de 1,5 mL y centrifugar durante 20 segundos. Usar el sobrenadante. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 1 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en n de Tabletas mg, de metilsulfonilmetano (C2H6O2S) en la porcio tomada, por la fo rmula: DC(RU / RS) en donde D es el factor de dilucio n; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Metilsulfonilmetano USP en la Preparacio n esta ndar; y RU y RS son los cocientes de respuesta entre los picos de metilsulfonilmetano y de di(etilenglicol) metil e ter obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Valeriana
Cambio en la redaccio n: Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Proteger de la luz y la humedad. &Almacenar a temperatura ambiente.&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: Sustancias extra blesMezclar 2 g de Valeriana, secada cuidadosamente a 408 y reducida a polvo grueso, con &20 mL de alcohol al 70 por ciento,&1S (USP30) y dejar en reposo durante 2 horas, agitando frecuentemente. Filtrar, evaporar &5 mL&1S (USP30) del ltrado en un ban o de agua hasta sequedad y secar el residuo a 1058. El peso del residuo seco no es menos de 100 mg (20%).
&Metilsulfonilmetano,
Tabletas
Las Tabletas de Metilsulfonilmetano contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de metilsulfonilmetano (C2H6O2S).
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables y resistentes a la luz. Esta ndares de referencia USP h11iER Metilsulfonilmetano USP. Identicacio nEl tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Desintegracio n y disolucio n h2040i: cumplen con los requisitos de Desintegracio n u nicamente; 30 minutos.
Cambio en la redaccio n: Recuento microbiano h2021iEl recuento bacteriano total no excede de &105&1S (USP30) ufc por g, el recuento total combinado de hongos lamentosos y levaduras no excede de &103&1S (USP30) ufc por g y &las bacterias Gram-negativas tolerantes a la bilis no exceden de 103.&1S (USP30) Cumple con los requisitos de las pruebas para ausencia de Salmonella spp y Escherichia coli. &&1S (USP30)
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Valeriana / Suplementos Diete ticos
Valeriana en Polvo
Cambio en la redaccio n: Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. Proteger de la luz y de la humedad. &Almacenar a temperatura ambiente.&1S (USP30)
das&1S (USP30); fragmentos de peridermis y de capa pil fera con pelos radiculares; numerosos gra nulos de almido n, raramente simples, principalmente compuestos de 2 a 6 componentes, esferoidales, plano-convexos, de 3 a 20, principalmente de 8 a 12 mm de dia metro, con un hilio central, siendo los gra nulos de almido n de un dia metro entre 7 y 30 mm.
Valeriana, Tabletas
Cambio en la redaccio n: EtiquetadoLa etiqueta indica el nombre cient co en lat n y, despue s de la denominacio n ocial, las partes de la planta & culo. &1S (USP30) de donde se obtuvo el art Cambio en la redaccio n: Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables, resistentes a la luz. & Almacenar a temperatura ambiente.&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: Caracter sticas bota nicas Estructuras de diagno stico: Numerosos fragmentos de ce lulas parenquimatosas que contienen glo bulos de aceite vola til y gra nulos de almido n; fragmentos de vasos y traqueidas con engrosamientos escaliformes y reticulares, y bras estrechas fuertemente &lignicaCambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11 i & ER Fluoresce na cido Valere USP.&1S (USP30) ER A nico USP.
Excipientes
4057
Excipientes
Excipientes USP y NF, Agrupados por Categor a
En la siguiente tabla de referencia, los excipientes se han agrupado por categor a funcional para indicar su uso ma s comu n en la formulacio n de productos farmace uticos. La lista de sustancias incluidas en cada categor a no es exhaustiva. La inclusio n de una sustancia en una determinada categor a no implica que su uso o eleccio n se limite al indicado ni que no tenga ninguna otra utilidad. Cambio en la redaccio n: Agente Edulcorante Acesulfamato de Aspartamo Acesulfamo Pota sico Aspartamo Azu car Compresible Azu car de Conter a Dextratos Dextrosa & Eritritol&1S (NF25) Excipiente de Dextrosa Fructosa Galactosa Jarabe Maltitol Maltosa Manitol Sacarina Sacarina Ca lcica Sacarina So dica Sacarosa Solucio n de Sorbitol Sorbitol Sucralosa Tagatosa Cambio en la redaccio n: Agente Emulsionante y/o Solubilizante & Aceite de Coco&1S (NF25) Aceite de Ricino Hidrogenado Polioxilado 40 Aceite de Ricino Polioxilado 35 cido Estea A rico cido Oleico (Coadyuvante) A Alcohol Ole lico (Estabilizante) Alcoholes de Lanolina Cera Emulsionante Cetoestearil Sulfato de Sodio Colesterol Copol mero de Carbo mero Diestearato de Glicerilo Dietanolamina (Coadyuvante) Estearatos de Dietilenglicol Estearatos de Etilenglicol Estearato de Polioxietileno 50 Estearato de Polioxilo 40 Estearato de Sodio ter Polioxil 10 Ole E lico ter Polioxil 20 Cetoestear E lico ter Polioxil Estear E lico ter Polioxil Laur E lico Goma Ara biga Interpol mero de Carbo mero Lauril Sulfato de Sodio Lecitina Monoestearato de Glicerilo Monoestearato de Propilenglicol Monoestearato de Sorbita n Monoetanolamina (Coadyuvante) Monoglice ridos y Diglice ridos Monolaurato de Sorbita n Monolinoleato de Glicerilo Monooleato de Glicerilo Monooleato de Sorbita n Monopalmitato de Sorbita n Polisorbato 20 Polisorbato 40 Polisorbato 60 Polisorbato 80 Poloxa mero Sesquioleato de Sorbita n Trioleato de Sorbita n Trolamina Cambio en la redaccio n: Agente de Recubrimiento & Aceite de Coco&1S (NF25) Acetato de Celulosa Acetato Ftalato de Celulosa (ver Celacefato) Acetato Ftalato de Polivinilo Acetato Succinato de Hipromelosa Almido n Pregelatinizado Modicado Barniz Farmace utico Carboximetilcelulosa So dica Celaburato Celacefato (anteriormente Acetato Ftalato de Celulosa) Cera de Carnauba Cera Microcristalina cido Metacr Copol mero de A lico Copol mero de Metacrilato de Amonio & Copol mero de Metacrilato de Amino&1S (NF25) Copovidona Dio xido de Titanio Dispersio n Acuosa de Etilcelulosa cido Metacr Dispersio n de Copol mero de A lico & Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo&1S (NF25) Dispersio n de Copol mero de Metacrilato de Amonio Etilcelulosa Ftalato de Hidroxipropil Metilcelulosa (ver Ftalato de Hipromelosa)
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Excipientes
Ftalato de Hipromelosa (anteriormente Ftalato de Hidroxipropil Metilcelulosa) Gelatina Goma Laca Hidroxipropil Celulosa Hidroxipropil Metilcelulosa (ver Hipromelosa) Hipromelosa (anteriormente Hidroxipropil Metilcelulosa) Maltodextrina Metilcelulosa Polietilenglicol Sacarosa Ze na Cambio en la redaccio n:
Goma Ara biga Goma Guar Hidroxipropil Celulosa de Baja Sustitucio n Hidroxipropil Metilcelulosa (ver Hipromelosa) Hipromelosa (anteriormente Hidroxipropil Metilcelulosa) Homopol mero de Carbo mero Interpol mero de Carbo mero Jarabe Maltodextrina Maltosa Metilcelulosa xido de Polietileno O Povidona Cambio en la redaccio n:
Aglutinante de Tabletas Acetato Succinato de Hipromelosa cido Alg A nico Almido n de Ma z Almido n de Papa Almido n de Tapioca Almido n de Trigo Almido n Pregelatinizado Almido n Pregelatinizado Modicado Carboximetilcelulosa So dica Celulosa Microcristalina Copol mero de Carbo mero Copol mero de Metacrilato de Amonio & Copol mero de Metacrilato de Amino&1S (NF25) Copovidona Dextrina & Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo&1S (NF25) Dispersio n de Copol mero de Metacrilato de Amonio Etilcelulosa Gelatina Glucosa L quida
Humectante Eritritol&1S (NF25) Glicerina Hexilenglicol Maltitol Propilenglicol Solucio n de Sorbitol-Sorbita n Sorbitol Tagatosa
&
Cambio en la redaccio n: Pol mero de Membrana Acetato de Celulosa & Copol mero de Metacrilato de Amino&1S (NF25) Celaburato Copol mero de Metacrilato de Amonio & Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo&1S (NF25) Dispersio n de Copol mero de Metacrilato de Amonio
Monograf as Ociales, NF 25 / Alfadex
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Monograf as Ociales de NF 25
Alfadex
Solucio n esta ndarPreparar segu n se indica en la Solucio n de Prueba, al mismo tiempo, excepto que se debe usar 1 mL de una solucio n que contenga 20 mg de glucosa por L. ProcedimientoMedir concomitantemente la absorbancia de la Solucio n de prueba y de la Solucio n esta ndar a la longitud de onda de ma xima absorcio n, a 740 nm, con respecto a la del agua, con un espectrofoto metro adecuado. La absorbancia de la Solucio n de prueba no es mayor que la de la Solucio n esta ndar (0,2%). Cambio en la redaccio n: Impurezas que absorben luz Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 1,0 g de Alfadex, pesado con exactitud, &y calculado con respecto a la sustancia anhidra,&1S (NF25) a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con agua, previamente hervida y enfriada & a temperatura ambiente, mezclar, y pasar a trave s de un ltro de 0,2 mm.&1S (NF25) ProcedimientoDeterminar la absorbancia de la Solucio n de prueba en una celda de 1 cm, con un espectrofoto metro adecuado, despue s de corregir por el blanco: entre 230 nm y 350 nm, la absorbancia no es mayor de 0,10; y entre 350 nm y 750 nm, la absorbancia no es mayor de 0,05. Cambio en la redaccio n: Valoracio n Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de agua y metanol (90 : 10). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndar&Disolver en agua una cantidad, pesada con exactitud, de ER Alfa Ciclodextrina USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1,0 mg por mL, calculada con respecto a la sustancia anhidra.&1S (NF25) Preparacio n de aptitud del sistema&Disolver en agua cantidades, pesadas con exactitud, de ER Alfa Ciclodextrina USP, ER Beta Ciclodextrina USP y ER Gamma Ciclodextrina USP para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 1,0 mg por mL de ER Alfa Ciclodextrina USP, calculada con respecto a la sustancia anhidra, y aproximadamente 0,5 mg por mL de ER Beta Ciclodextrina USP y de ER Gamma Ciclodextrina USP, calculadas cada una con respecto a la sustancia anhidra.&1S (NF25) Preparacio n madre de valoracio nTransferir 250 mg de Alfadex, pesados con exactitud, &y calculados con respecto a la sustancia anhidra,&1S (NF25) a un matraz volume trico de 25 mL y disolver en agua con ayuda de calor. Enfriar y diluir a volumen con agua. Preparacio n de valoracio nTransferir 5,0 mL de la Preparacio n madre de valoracio n a un matraz volume trico de 50 mL y diluir a volumen con agua. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector de ndice de refraccio n y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de &5 mm.&1S (NF25) La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n de aptitud del sistema y registrar los cromatogramas durante aproximadamente 3,5 veces el tiempo de retencio n de alfa ciclodextrina. Registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: &&1S (NF25) la resolucio n, R, entre los picos de gamma ciclodextrina y alfa ciclodextrina no es menor de 1,5; y para el pico de alfa ciclodextrina, la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s
La Alfadex esta compuesta por seis unidades
Dglucopiranosilo unidas por enlaces alfa-(1-4). Contiene no menos de 98,0 por ciento y no ma s de 101,0 por ciento de (C6H10O5)6, calculado con respecto a la sustancia &anhidra.&1S (NF25)
&
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. No se especican requisitos de almacenamiento.&1S (NF25)
&
Pe rdida por secado h731iSecar 1,0 g a 1208 durante 2 horas: no pierde ma s de 10,0% de su peso.&1S (NF25)
&
Agua, Me todo I h921i: no ma s de 11,0%.&1S
(NF25)
Cambio en la redaccio n: Azu cares reductores Solucio n cu pricaDisolver en agua 15 g de sulfato cu prico para obtener 100 mL. Solucio n de tartratoDisolver en agua 2,5 g de carbonato de sodio anhidro, 2,5 g de tartrato de sodio y potasio, 2,0 g de bicarbonato de sodio y 20 g de sulfato de sodio anhidro para obtener 100 mL. Solucio n cu pricatarta ricaInmediatamente antes de usar, mezclar 1 parte de Solucio n cu prica con 25 partes de Solucio n de tartrato. Reactivo de molibdato de amonioMezclar 10 mL de solucio n de arseniato diso dico (6 en 100), 50 mL de una solucio n de molibdato de amonio (1 en 10) y 90 mL de a cido sulfu rico diluido, y diluir con agua hasta 200 mL. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 1,0 g de Alfadex, pesado con exactitud, &y calculado con respecto a la sustancia anhidra,&1S (NF25) a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con agua, previamente hervida y enfriada a temperatura ambiente, y mezclar. A 1 mL de esta solucio n agregar 1 mL de Solucio n cu pricatarta rica. Calentar en un ban o de agua durante 10 minutos y enfriar luego a temperatura ambiente. Agregar 10 mL de Reactivo de molibdato de amonio y dejar en reposo durante 15 minutos.
4060
Amino / Monograf as Ociales, NF 25
de 2,0%. &[NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son de aproximadamente 1,0 para alfa ciclodextrina, aproximadamente 2,2 para beta ciclodextrina y aproximadamente 0,7 para gamma ciclodextrina.]&1S (NF25) ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas correspondientes a los picos principales. Calcular el porcentaje de (C6H10O5)6 en la porcio n de Alfadex tomada, por la fo rmula:
&
Residuo de incineracio n h281i: L mite de mono meros
no ma s de 0,1%.
MITE DE METACRILATO DE BUTILO Y METACRILATO DE PRUEBA 1, LI METILO
2500(C/W)(rU / rS)&1S
(NF25)
en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de alfa ciclodextrina en la Preparacio n esta ndar, &&1S (NF25) W es el peso, en mg, de alfa ciclodextrina tomado para preparar la Preparacio n madre de valoracio n; y &rU y rS&1S (NF25) son las respuestas de los picos de alfa ciclodextrina obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
&Copol mero
de Amino Metacrilato
Solucio n amortiguadora de fosfato (0,0625 M) de pH 2,0 Preparar una solucio n acuosa que contenga 8,9 g de fosfato diba sico de sodio anhidro y 8,5 g de fosfato monoba sico de potasio por L. Ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 2,0. Fase mo vilPreparar una mezcla de metanol y Solucio n amortiguadora de fosfato (0,0625 M) de pH 2.0 (55 : 45). Solucio n esta ndarPreparar una solucio n en acetonitrilo con una concentracio n de aproximadamente 1000 mg por mL de metacrilato de butilo y de metacrilato de metilo. Diluir 1,0 mL de la solucio n con agua a 250,0 mL y mezclar. Solucio n de pruebaDisolver aproximadamente 1,0 g de Copol mero de Amino Metacrilato, pesado con exactitud, en Solucio n amortiguadora de fosfato (0,0625 M) de pH 2,0 y diluir con Solucio n amortiguadora de fosfato (0,0625 M) de pH 2,0 a 50,0 mL, y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 205 nm y una columna de 4,6 mm 6 12 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre metacrilato de butilo y metacrilato de metilo no es menor de 10; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 3,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de cada mono mero en la porcio n de Copol mero de Amino Metacrilato tomada, por la fo rmula: 50C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de cada mono mero en la Solucio n esta ndar; y rU and rS son las respuestas de los picos para cada mono mero obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente: no se encuentra ma s de 0,1% de cada mono mero. MITE DE METACRILATO DE 2-DIMETILAMINOETILO PRUEBA 2, LI Solucio n de fosfato monoba sico de potasio (0,025M)Preparar una solucio n acuosa que contenga 3,4 g de fosfato monoba sico de potasio por L. Fase mo vilPreparar una mezcla de Solucio n de fosfato monoba sico de potasio (0,025M) y tetrahidrofurano (75 : 25). Solucio n esta ndarPreparar una solucio n en tetrahidrofurano con una concentracio n de aproximadamente 200 mg por mL de metacrilato de 2-(dimetilamino)etilo. Diluir 2,0 mL de la solucio n con tetrahidrofurano a 50,0 mL y mezclar. Solucio n de pruebaDisolver en tetrahidrofurano aproximadamente 1,0 g de Copol mero de Amino Metacrilato, pesado con exactitud, diluir con tetrahidrofurano a 50,0 mL y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 215 nm y una columna de 4,6 mm 6 12 cm rellena con material L8. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir la respuesta del pico principal. Calcular la cantidad, en mg, de metacrilato de 2-(dimetilamino)etilo en la porcio n de Copol mero de Amino Metacrilato tomada, por la fo rmula: 50C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, del mono mero en la Solucio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos de metacrilato de 2-(dimetilamino)etilo obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente: no se encuentra ma s de 0,1%.
copol mero completamente polimerizado de metacrilato de 2-(dimetilamino)etilo, metacrilato de butilo y metacrilato de metilo. Contiene no menos de 20,8 por ciento y no ma s de 25,5 por ciento de grupos dimetilaminoetilo (C4H10N), calculado con respecto a la sustancia seca.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Almacenar a una temperatura que no exceda de 258. Esta ndares de referencia USP h11iER Copol mero de Amino Metacrilato USP. Color de la solucio nLa absorbancia de la Solucio n de prueba preparada en la prueba de Viscosidad, determinada en una celda de 1 cm a 420 nm con un espectrofoto metro adecuado, no es mayor de 0,300. Usar agua como blanco. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki. B: Verter 1 mL de la Solucio n de prueba preparada en la prueba de Viscosidad sobre una placa de vidrio y dejar que se evapore el disolvente: se produce una pel cula incolora transparente. Viscosidad h911i Solucio n de pruebaDisolver 12,5 g en una mezcla de 35,0 g de acetona y 52,5 g de alcohol isoprop lico. [NOTAReservar una porcio n de esta solucio n para la prueba de Color de la solucio n.] ProcedimientoEquipar un viscos metro rotatorio adecuado con un sistema adaptador compuesto de un cilindro de medicio n y un va stago. El cilindro de medicio n tiene un dia metro interno de 2,762 cm y una altura de 13,50 cm; el va stago tiene un dia metro de 2,515 cm, una altura de 9,074 cm y un eje de 0,40 cm de dia metro. Transferir 16 mL de la Solucio n de prueba al cilindro de medicio n y ajustar la temperatura de la solucio n y el adaptador a 20 + 0,18. Mientras el va stago gira a 30 rpm, observar y registrar inmediatamente la lectura de la escala. Convertir la lectura de la escala a centipoises multiplicando la lectura por la constante del viscos metro, el sistema adaptador y la velocidad empleada. La viscosidad esta entre 3 y 6 centipoises. Pe rdida por secado h731iSecar a 1108 durante 3 horas: no pierde ma s de 2,0% de su peso.
El Copol mero de Amino Metacrilato es un
Monograf as Ociales, NF 25 / Calcio
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Valoracio nDisolver 0,20 g en una mezcla de 4 mL de agua y 96 mL de a cido ace tico glacial, y mezclar. Valorar con a cido perclo rico 0,1 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente (ver Volumetr a h541i). Un mL de a cido perclo rico 0,1 N es equivalente a 7,21 mg de los grupos de dimetilaminoetilo (C4H10N).&1S (NF25)
Silicato de Calcio
durante 5 minutos y medir el potencial de la Solucio n esta ndar que contenga 0,10 mg de uoruro por mL. De manera similar, agregar otros 100 mL y 200 mL de la Solucio n madre del esta ndar y registrar el potencial de las Soluciones esta ndar que contengan 0,20 mg de uoruro por mL y 0,40 mg de uoruro por mL, respectivamente. Despue s de cada adicio n, seguir mezclando durante 5 minutos antes de registrar la lectura. ProcedimientoInsertar el electrodo calibrado en la Solucio n de prueba, mezclar durante 5 minutos y registrar la medicio n. A partir del potencial medido de la Solucio n de prueba y de la L nea de respuesta esta ndar, determinar la concentracio n, C, en mg por mL, de io n uoruro en la Solucio n de prueba. Calcular la cantidad, en mg por g de uoruro en Silicato de Calcio, por la fo rmula: 100C/W en donde W es el peso, en g, de Silicato de Calcio tomado. El l mite es 10 mg por g.&1S (NF25) Cambio en la redaccio n: Valoracio n de dio xido de silicioTransferir &la cantidad apropiada de Silicato de Calcio (ver la Tabla 2),&1S (NF25) pesada con exactitud, a un vaso de precipitados, agregar 5 mL de agua y 10 mL de a cido perclo rico, y calentar hasta que se produzcan humos blancos densos de a cido perclo rico. Tapar el vaso de precipitados con un vidrio de reloj y continuar el calentamiento durante &2 horas.&1S (NF25) Dejar que se enfr e, agregar 30 mL de agua, ltrar y lavar el precipitado con 200 mL de agua caliente. [NOTAConservar el ltrado y los lavados combinados para usar en la Valoracio n de o xido de calcio.] Transferir el papel de ltro y su contenido a un crisol de platino, calentar lentamente hasta sequedad, luego calentar lo suciente para carbonizar el papel de ltro &e incinerar aproximadamente entre 9008 y 10008&1S (NF25) hasta peso constante. Humedecer el residuo con 5 gotas de a cido &perclo rico,&1S (NF25) agregar 15 mL de a cido uorh drico, calentar con cuidado en una placa de calentamiento hasta que todo el a cido se haya eliminado e incinerar a una temperatura no inferior a 10008 hasta peso constante. Enfriar en un desecador y pesar: la pe rdida de peso representa el peso del SiO2. El porcentaje de dio xido de silicio en el Silicato de Calcio esta entre 90,0% y 110,0% del contenido declarado en el etiquetado o dentro del intervalo de porcentajes declarado en el etiquetado.
El Silicato de Calcio, cristalino o amorfo,&1S (NF25) es

&
un compuesto de o xido de calcio y dio xido de silicio. Contiene no menos de 4,0 por ciento de o xido de calcio y no menos de &35,0&1S (NF25) por ciento de dio xido de silicio.
Cambio en la redaccio n: pH h791i: entre 8,4 y &11,2;&1S (NF25) determinado en una suspensio n acuosa bien mezclada (1 en 20).
Cambio en la redaccio n: L mite de uoruro & NOTAAlmacenar todas las soluciones en envases pla sticos. Solucio n amortiguadoraTransferir 147 g de citrato de sodio a un matraz volume trico de 500 mL, disolver y diluir a volumen con agua. Solucio n amortiguadora de ajuste de la fuerza io nicaTransferir 42 mL de a cido clorh drico, 121 g de tris(hidroximetil)aminometano y 115 g de tartrato de sodio a un matraz volume trico de 500 mL que contenga 250 mL de agua. Mezclar para disolver y diluir a volumen con agua. Sistema de electrodosUsar un electrodo espec co indicador de io n uoruro y un electrodo de referencia adecuado conectados a un medidor de pH capaz de medir potenciales con una reproducibilidad de +0,2 mV (ver pH h791i). Solucio n madre del esta ndarDisolver en agua una cantidad, pesada con exactitud, de ER Fluoruro de Sodio USP para obtener una solucio n que contenga 221 mg por mL. Cada mL de esta solucio n madre contiene 100 mg de io n uoruro. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 2,0 g de Silicato de Calcio, pesados con exactitud, a un vaso de precipitados de teo n de 100 mL que contenga una barra magne tica. Agregar 20 mL de agua y 2,0 mL de a cido clorh drico. Cubrir con un vidrio de reloj y calentar hasta ebullicio n vigorosa durante 1 minuto, mezclando constantemente. Retirar del calor y enfriar. Transferir la suspensio n enfriada a un vaso de precipitados de teo n de 100 mL. Agregar 25 mL de Solucio n amortiguadora y ajustar con hidro xido de amonio o a cido clorh drico a un pH entre 5 y 6. Agregar 50 mL de Solucio n amortiguadora de ajuste de la fuerza io nica y agua para obtener 100 mL de solucio n. L nea de respuesta esta ndarObtener una l nea de respuesta esta ndar con cuatro soluciones esta ndar que contengan 0; 0,10; 0,20 y 0,40 mg de uoruro por mL del siguiente modo. Agregar 23 mL de agua, 2 mL de a cido clorh drico y 25 mL de Solucio n amortiguadora a un vaso de precipitados de pla stico de 100 mL. Ajustar con hidro xido de amonio a un pH entre 5 y 6, y agregar Solucio n amortiguadora de ajuste de la fuerza io nica para obtener 100 mL de solucio n. Insertar el electrodo en la solucio n, mezclar durante al menos 15 minutos y registrar el potencial de la Solucio n esta ndar que contenga 0 mg de uoruro por mL. Cuando se estabiliza el electrodo, agregar 100 mL de la Solucio n madre del esta ndar al vaso de precipitados y mezclar. Dejar que el electrodo se estabilize
&
Tabla 2 xido de Calcio Contenido de O ma s de 25% 11%25% 4%10%

&1S
Peso de la Muestra aproximadamente 400 mg aproximadamente 600 mg aproximadamente 1000 mg
(NF25)
Cambio en la redaccio n: Valoracio n de o xido de calcioNeutralizar al tornasol, empleando hidro xido de sodio 1 N, la combinacio n del ltrado con los lavados reservada en la Valoracio n de dio xido de silicio. Mientras se revuelve, agregar aproximadamente &10 mL&1S (NF25) de edetato diso dico 0,05 M SV desde una bureta de 50 mL. Agregar 15 mL de hidro xido de sodio 1 N y 300 mg de azul de hidroxinaftol, y continuar la valoracio n hasta un punto nal azul. Cada mL de edetato diso dico 0,05 M equivale a 2,804 mg de CaO. El porcentaje de CaO en el Silicato de Calcio esta entre 90,0% y 110,0% del contenido declarado en el etiquetado o dentro del intervalo de porcentajes declarado en el etiquetado.
4062
Coco / Monograf as Ociales, NF 25
&Aceite
de Coco
[8001-31-8].
&Eritritol
Coconut oil. Aceite de coco
El Aceite de Coco es el aceite jo renado obtenido de las semillas de Cocos nucifera Linne (Fam. Palmae).
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables, resistentes a la luz y completamente llenos. No se especican requisitos de almacenamiento. Identicacio nCumple con los requisitos de la prueba de Composicio n de a cidos grasos. Intervalo de fusio n h741i: entre 238 y 268. ndice de acidez h401i: no ma I s de 0,5; determinado en 20,0 g. ndice de pero I xido h401i: no ma s de 5,0. Materia insaponicable h401i: no ma s de 1,0%. Composicio n de a cidos grasosEl Aceite de Coco presenta el siguiente perl de composicio n de a cidos grasos, segu n se indica en cidos Grasos en Grasas y Aceites Fijos la seccio n Composicio n de A h401i: Longitud de la cadena de carbono 6 8 10 12 14 16 18 20 16 18 18 18 20 Nu mero de enlaces dobles 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 2 3 1 Porcentaje (%) 51,5 5,011,0 4,09,0 40,050,0 15,020,0 7,012,0 1,55,0 50,2 51,0 4,010,0 1,03,0 50,2 50,2
C4H10O4 122,12 1,2,3,4-Butanetetrol. Butano1,2,3,4-tetrol (meso-eritritol)
[149-32-6].
El Eritritol se obtiene de la fermentacio n del
hidrolizado enzima tico de almido n (a partir de almidones como el trigo y el ma z). Se obtiene del caldo de fermentacio n de levaduras osmof licas adecuadas como Moniliella pollinis o Trichosporonoides megachiliensis. Contiene no menos de 96,0 por ciento y no ma s de 102,0 por ciento de C4H10O4, calculado con respecto a la sustancia anhidra.
Agua, Me todo I h921i: no ma s de 0,1%, usando 50 mL de cloroformo como disolvente en lugar de 35 a 40 mL de metanol. Arse nico, Me todo II h211i: no ma s de 0,5 mg por g. Impurezas alcalinasMezclar 10 mL de acetona recie n destilada y 0,3 mL de agua y agregar 0,05 mL de azul de bromofenol SR. Neutralizar la solucio n a color verde, si fuera necesario, con a cido clorh drico 0,01 N o hidro xido de sodio 0,01 N. Agregar 10 mL de Aceite de Coco, agitar y dejar en reposo. Valorar con a cido clorh drico 0,01 N SV para cambiar el color de la capa superior a amarillo: no se requiere ma s de 0,1 mL de a cido clorh drico 0,01 N SV.&1S (NF25)
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. Almacenar a temperatura ambiente. Esta ndares de referencia USP h11iER Eritritol USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h191Ki. B: Intervalo de fusio n h741i: entre 1198 y 1238. Pe rdida por secado h731iSecar a 1058 durante 4 horas; no pierde ma s de 0,2% de su peso. Usar aproximadamente 8 g de muestra. Agua, Me todo I h921i: no ma s de 0,5%. ConductividadDisolver 20,0 g de Eritritol en un matraz volume trico de 100 mL y diluir a volumen con el mismo disolvente. Con un conduct metro adecuado, seleccionar una celda de conductividad que sea apta para las propiedades y la conductividad de la solucio n en ana lisis. Emplear un material de referencia certicado1 por ejemplo, una solucio n de cloruro de potasioque sea adecuada para efectuar la medicio n. El valor de la conductividad del material de referencia certicado debe ser aproximado al valor de conductividad esperado de la solucio n en ana lisis. Despue s de calibrar el aparato con una solucio n de material de referencia certicado, enjuagar la celda de conductividad varias veces con agua y, por lo menos dos veces, con la solucio n acuosa en ana lisis. Medir la conductividad de la solucio n a una temperatura de 208 mientras se mezcla suavemente con un mezclador magne tico: la conductividad no es ma s de 20 mS por cm. L mites microbianos h61iEl recuento total de microorganismos aerobios mediante el Me todo de Placa no es ma s de 1000 ufc por g. El recuento total de hongos lamentosos y levaduras no es ma s de 100 ufc por g. Cumple con los requisitos de las pruebas para determinar la ausencia de Salmonella spp. y Escherichia coli. Residuo de incineracio n h281i: no ma s de 0,1%. L mite de plomo Solucio n esta ndar de plomoPreparar segu n se indica en Reactivos Especiales en Metales Pesados h231i . Solucio n de pruebaDisolver 20,0 g de Eritritol en a cido ace tico diluido y diluir con a cido ace tico diluido a 100 mL. Agregar 2,0 mL de una solucio n de pirrolidinoditiocarbamato de amonio saturada (que contenga aproximadamente 10 g de pirrolidinoditiocarbamato
1
Se pueden utilizar soluciones de calibracio n de conductividad, disponibles comercialmente, para la normalizacio n del conduct metro, estandarizadas por me todos rastreables al Instituto Nacional de Normas y Tecnolog a (NIST, por sus siglas en ingle s). Las soluciones preparadas segu n las instrucciones dadas en la Norma ASTM D1125 de la American Society for Testing and Materials (Sociedad Estadounidense de Pruebas y Materiales [ASTM, por sus siglas en ingle s]) pueden usarse, siempre que la conductividad de la solucio n resultante sea la misma que la de la solucio n preparada a partir del material certicado por el NIST.
Monograf as Ociales, NF 25 / Acrilato de Etilo
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de amonio por L) y 10,0 mL de metil isobutil cetona, y agitar durante 30 segundos. Proteger de la luz brillante. Dejar que las dos capas se separen y utilizar la capa de metil isobutil cetona. Solucio n blancoPreparar segu n se indica en Solucio n de prueba, excepto que se debe omitir el uso de Eritritol. Soluciones esta ndarPreparar segu n se indica en Solucio n de prueba, excepto que se deben preparar tres soluciones agregando 0,5 mL, 1,0 mL y 1,5 mL de Solucio n esta ndar de plomo adema s de los 20,0 g de Eritritol. ProcedimientoAjustar el espectrofoto metro de absorcio n ato mica a cero usando metil isobutil cetona tratada previamente segu n se describe en Solucio n de prueba, pero sin el agregado de muestra. Usar una la mpara de plomo de ca todo hueco como fuente de radiacio n, una llama de aireacetileno y una longitud de onda de ana lisis de 283,3 nm. Introducir la Solucio n de prueba y cada una de las tres Soluciones esta ndar en el instrumento. Registrar la lectura estable de absorbancia. Gracar las lecturas de absorbancia en funcio n de las concentraciones conocidas de plomo agregado (en mg) y trazar una l nea recta. Extrapolar la l nea hasta la interseccio n con el eje de concentracio n, que equivale a la concentracio n, en mg por kg, de plomo en la muestra. No se encuentra ma s de 0,5 mg por kg. Compuestos relacionados Fase mo vil, Preparacio n de valoracio n, Preparacio n esta ndar, Solucio n de aptitud del sistema y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n. Solucio n esta ndarTransferir 2,0 mL de la Preparacio n esta ndar a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Esta solucio n contiene aproximadamente 1 mg de eritritol por mL. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n de prueba y de la Solucio n esta ndar, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza encontrada, por la fo rmula: VC/W (ri / rS) en donde V es el volumen, en mL, de la Solucio n de prueba; C es la concentracio n de Eritritol, en mg por mL, en la Solucio n esta ndar; W es la cantidad de Eritritol, en mg, tomada para preparar la Solucio n de prueba; ri es la respuesta del pico para la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico de eritritol en la Solucio n esta ndar: no se encuentra ma s de 2,0% de cualquier impureza individual, y no se encuentra ma s de 2,0% de impurezas totales. Valoracio n Fase mo vilUsar a cido sulfu rico al 0,01% ltrado y desgasicado. Preparacio n esta ndarDisolver una cantidad de ER Eritritol USP, pesada con exactitud, en agua para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 50 mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir 500 mg de Eritritol, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 10 mL, disolver y diluir a volumen con agua, y mezclar. Solucio n de aptitud del sistemaTransferir cantidades de ER Eritritol USP y glicerol, pesados con exactitud, a un matraz volume trico adecuado, disolver y diluir con agua para obtener una solucio n con concentraciones de aproximadamente 0,05 mg por mL cada uno. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar el cromato grafo de l quidos con un detector de ndice de refraccio n y una columna de 7,8 mm x 30 cm o equivalente rellena con material L17. La velocidad de ujo es de aproximadamente 0,8 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 708. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 1,0 para eritritol y 1,1 para glicerol; y la resolucio n, R, entre eritritol y glicerol no es menor de 2,0. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas
durante un per odo equivalente a tres veces el tiempo de retencio n de eritritol y medir las respuestas de los picos. Calcular la cantidad, en mg, de C4H10O4 en la porcio n de Eritritol tomada, por la fo rmula: VC(rU / rS) en donde V es el volumen, en mL, de la Preparacio n de valoracio n; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Eritritol USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos de eritritol obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (NF25)
&Dispersio n
de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo

[9010-88-2].
La Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y

Metacrilato de Metilo es una dispersio n acuosa de un copol mero de acrilato de etilo y metacrilato de metilo, con un peso molecular promedio de aproximadamente 800 000. Puede contener agentes emulsionantes adecuados.
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. Almacenar entre 58 y 258, con excursiones permitidas hasta 308. No congelar. EtiquetadoEtiquetar indicando el nombre y la cantidad de cualquier emulsionante agregado. Esta ndares de referencia USP h11iER Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo USP. Identicacio n, Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki Muestra de pruebaSecar segu n se especica en la prueba de Pe rdida por secado. Viscosidad h911iEquipar un viscos metro rotativo adecuado con un sistema adaptador que consiste de un cilindro de medicio n y un va stago. El cilindro de medicio n tiene un dia metro interno de 2,762 cm y una profundidad de 13,50 cm; el va stago tiene un dia metro de 2,515 cm y una altura de 9,074 cm, y tiene un eje de 0,40 cm de dia metro. Mezclar la Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo, pipetear y transferir 16 mL en el cilindro de medicio n, ajustar la temperatura de la Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo y adaptar a 20 + 0,18. Con el va stago girando a 30 rpm, observar y registrar inmediatamente la lectura de la escala. Convertir la lectura de la escala a centipoises multiplicando la lectura por la constante para el viscos metro, el sistema adaptador y la velocidad usada. La viscosidad no es ma s de 50 centipoises. L mites microbianos h61iEl recuento total de microorganismos aerobios no excede de 1000 ufc por g y el recuento total de hongos lamentosos y levaduras no excede de 100 ufc por g. pH h791i: entre 5,5 y 8,6. Pe rdida por secado h731iSecar a 1108 durante 3 horas: pierde entre 68,5% y 71,5% de su peso. Residuo de incineracio n h281iUtilizando condiciones de calentamiento moderadas (por ej., ban o de vapor, ban o de arena) para evitar pe rdida de material, evaporar la Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo hasta sequedad antes de la incineracio n: no se obtiene ma s de 0,4% de residuo, calculado con respecto a la sustancia sin secar.
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Polietileno / Monograf as Ociales, NF 25
L mite de mono meros Solucio n de perclorato so dicoDisolver 3,5 g de perclorato so dico en 100 mL de agua. cido fosfo A rico de pH 2,0Diluir a cido fosfo rico con agua para obtener una solucio n con un pH de 2,0. cido fosfo Fase mo vilPreparar una mezcla de A rico de pH 2,0 y metanol (80 : 20), ltrar y desgasicar. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n esta ndarPreparar una solucio n en tetrahidrofurano con concentraciones de aproximadamente 2 mg por mL de acrilato de etilo y de metacrilato de metilo. Agregar 5,0 mL de una Solucio n de perclorato so dico a 10,0 mL de esta solucio n y mezclar. Diluir 5,0 mL de la mezcla con agua hasta 10,0 mL y mezclar. Solucio n madre de pruebaDisolver 1,0 g de Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo con tetrahidrofurano, y diluir a 50 mL con el mismo disolvente. Solucio n de pruebaAgregar 10,0 mL de la Solucio n madre de prueba a 5,0 mL de Solucio n de perclorato so dico, gota a gota, mezclando cont nuamente. Centrifugar y ltrar el sobrenadante transparente. Diluir 5,0 mL del sobrenadante transparente con agua a 10,0 mL y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 200 nm y una columna de 4,6 mm 6 120 mm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el acrilato de etilo y el metacrilato de metilo no es menor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0% para cada analito. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de cada mono mero en la porcio n de Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo tomada, por la fo rmula: 10C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, del mono mero en la Solucio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos para el mono mero obtenido a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente: no se encuentra ma s de 0,01% de mono meros totales. Contenido de coa guloPesar con exactitud un tamiz de acero inoxidable con aberturas de 125 mm y ltrar 100 g de Dispersio n de Copol mero de Acrilato de Etilo y Metacrilato de Metilo a trave s del mismo. Lavar el tamiz con agua destilada hasta obtener un ltrado transparente y secar el tamiz a 1058 hasta peso constante: el peso del residuo no excede de 1000 mg (1%).&1S (NF25)
B: La viscosidad de la solucio n en alcohol isoprop lico acuoso, determinada a 258 &empleando un viscos metro adecuado con validacio n apropiada&1S (NF25) y en una concentracio n que se indica en el etiquetado, esta comprendida dentro del intervalo de viscosidad indicado en el etiquetado. Cambio en la redaccio n: L mite de o xido de etileno libre Solucio n madre del esta ndar[Precaucio nEl o xido de etileno es to xico e inamable. Preparar las soluciones en una campana de extraccio n bien ventilada.] Emplear las condiciones especiales de manipulacio n que se describen a continuacio n para llevar a cabo la preparacio n. A temperatura ambiente, el o xido de etileno es un gas. Generalmente se almacena en un cilindro de gas graduado o en una pequen a bomba meta lica de presio n. Enfriar el cilindro en un refrigerador antes de usar. Transferir aproximadamente 5 mL del o xido de etileno l quido a un vial para suero de 10 mL fr o. Sellar el vial y guardar en un refrigerador. Transferir aproximadamente 40 g de acetona, pesados con exactitud, a un vial para suero tarado de 50 mL, que pueda sellarse herme ticamente con un septo con recubrimiento interno de teo n y una tapa meta lica precintada. Sellar el vial y pesarlo con exactitud. Transferir aproximadamente 60 mL del o xido de etileno l quido al mismo vial con una jeringa herme tica para cromatograf a de gases previamente enfriada en un refrigerador. Pesar el vial y determinar la cantidad agregada por la diferencia de peso. Esta Solucio n madre del esta ndar contiene aproximadamente 1 mg de o xido de etileno por mL. [NOTAEsta solucio n puede guardarse durante 1 semana en el vial para suero sellado con precinto, en un congelador.] xido de Polietileno Preparaciones esta ndarTransferir 1,0 g del O en ana lisis a cuatro viales para suero, tarados, de 50 mL, que puedan sellarse herme ticamente con septos con recubrimiento interno de teo n y tapa meta lica precintada. Sellar los viales. A cada uno de los viales, transferir respectivamente 2,0 mL, 4,0 mL, 6,0 mL y 8,0 mL de la Solucio n madre del esta ndar y mezclar. Estos viales contienen aproximadamente 2 mg, 4 mg, 6 mg y 8 mg de o xido de etileno, respectivamente, a partir de la Solucio n madre del esta ndar. Calentar los viales a 1008 durante 30 minutos y enfriar a temperatura ambiente. Preparacio n de pruebaTransferir aproximadamente 1 g del xido de Polietileno en ana O lisis, pesado con exactitud, a un vial para suero tarado de 50 mL que pueda ser sellado herme ticamente con un septo con recubrimiento interno de teo n y una tapa meta lica xido de precintada. Pesar el vial y determinar la cantidad de O Polietileno agregada por la diferencia de peso. Sellar el vial, calentar a 1008 durante 30 minutos y enfriar a temperatura ambiente. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de gases con un detector de ionizacio n a la llama, una columna capilar de 0,53 mm 6 10 m con una capa de 20 mm de fase G45 y un sistema de inyeccio n dividida. El gas transportador es helio, que uye a una velocidad de aproximadamente 15 mL por minuto. El gas de compensacio n tambie n es helio, con una velocidad de ujo en el sistema de inyeccio n dividida de aproximadamente 15 mL por minuto. Mantener las temperaturas del inyector y del detector aproximadamente a 2008 y 2508, respectivamente. Mantener la temperatura de la columna aproximadamente a 708 durante 5 minutos despue s de la inyeccio n, programar luego para aumentar a una velocidad de 108 por minuto hasta aproximadamente 2008 y mantener esta temperatura durante 5 minutos. Inyectar en el cromato grafo de gases 300 mL de la fase gaseosa del vial de Preparacio n esta ndar que contiene aproximadamente 6 mg de o xido de etileno de la Solucio n madre del esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 5%. & [NOTASe preparan varios viales para inyecciones repetidas.]&1S (NF25) Procedimiento[NOTAPara efectuar las inyecciones, se puede emplear un aparato para muestreo de fase gaseosa que transera automa ticamente la cantidad medida de la fase gaseosa.] Con una jeringa impermeable a los gases, inyectar por separado en el cromato grafo de gases volu menes iguales (aproximadamente 300 mL) de la fase gaseosa de cada una de las Preparaciones esta ndar y de la Preparacio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir
xido de Polietileno O
Cambio en la redaccio n: Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables, resistentes a la luz. &No se especican requisitos de almacenamiento.&1S (NF25)
Cambio en la redaccio n: Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki Muestra de prueba: secada previamente al vac o, a temperatura ambiente, hasta peso constante.
Monograf as Ociales, NF 25 / Sodio
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las a reas de los picos. Determinar, por comparacio n de los tiempos de retencio n, si se detecta o xido de etileno en la Preparacio n de prueba. Gracar las respuestas de &la Preparacio n de prueba y&1S (NF25) las Preparaciones esta ndar en funcio n del contenido, en mg, de o xido de etileno en cada vial, proporcionadas por la Solucio n madre del esta ndar; trazar la l nea recta que mejor se ajuste a los & cinco&1S (NF25) puntos; y calcular el coeciente de correlacio n para la l nea. &[NOTAEl contenido de o xido de etileno, proporcionado por la Solucio n madre del esta ndar, es 0 mg en la Preparacio n de prueba.]&1S (NF25) Un sistema adecuado es aquel que produce una l nea con un coeciente de correlacio n no menor de 0,99. Extrapolar la l nea hasta que intercepte el eje de contenido en el lado negativo. A partir de la intercepcio n, determinar la cantidad total, TU, en mg, de o xido de etileno en la Preparacio n de prueba. Calcular el porcentaje xido de Polietileno tomada, de o xido de etileno en la porcio n de O por la fo rmula: 100(TU / W) xido de Polietileno tomado para en donde W es el peso, en mg, de O preparar la Preparacio n de prueba: el l mite es 0,001%.
Poliisobutileno
Cambio en la redaccio n: Pe rdida por secado h731iSecar una muestra de 5 g a 1058 durante 2 horas: no pierde ma s de &0,3%&1S (NF25) de su peso.
Fosfato Triba sico de Sodio
Cambio en la redaccio n: Pe rdida por incineracio n h733i&Pesar con exactitud aproximadamente 2 g, secar a 1108 durante 5 horas, luego incinerar aproximadamente a 8008 durante 30 minutos:&1S (NF25) la forma anhidra pierde no ma s de 2,0% de su peso, el monohidrato pierde entre 8,0% y 11,0% de su peso, y el dodecahidrato pierde entre 45,0% y 57,0% de su peso.
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Agua / Monograf as Ociales
Monograf as Ociales Generales de USP 30

Agua Este ril para Inhalacio n
& SulfatosA 100 mL, agregar 1 mL de cloruro de bario SR: no se produce turbidez.&1S (USP30)
&
pH h791i: entre 4,5 y 7,5 en una solucio n que contenga 0,3 mL de solucio n saturada de cloruro de potasio por cada 100 mL de muestra de prueba.&1S (USP30)
& Conductividad del agua h645iRealizar Etapa 2, Paso 4 usando una cantidad suciente de agua para realizar la prueba. La conductividad no es ma s de 25 mS/cm para envases con un volumen nominal de 10 mL o menos a 25+18; y no ma s de 5 mS/cm para envases con un volumen nominal de ma s de 10 mL a 25+18.&1S (USP30)
Eliminar lo siguiente: Amon acoPara envases con volumen de llenado de menos de 50 mL, diluir 50 mL del producto con 50 mL de Agua de Alta Pureza (ver Reactivos en Envases h661i) y usar esta dilucio n como solucio n de prueba; cuando el volumen de llenado sea de 50 mL o ma s, usar 100 mL del producto como solucio n de prueba. Agregar 2 mL de yodomercuriato de potasio alcalino SR a 100 mL de la solucio n de prueba: cualquier color amarillo que se produzca inmediatamente no es ma s oscuro que el color de un control que contenga 30 mg de amon aco agregado (proporcionado por el agregado de 1 mL de la solucio n nal que se obtiene por dilucio n de 3,0 mL de amon aco SR hasta 100 mL con Agua de Alta Pureza; y diluyendo luego 1,0 mL sto de esta solucio n a 100 mL) en 100 mL de Agua de Alta Pureza. E corresponde a un l mite de 0,6 mg por L para envases con un volumen de llenado de menos de 50 mL y de 0,3 mg por L cuando el volumen de llenado sea de 50 mL o ma s.&1S (USP30)
&
Agua Este ril para Irrigacio n
& pH h791i: entre 5,0 y 7,0 en una solucio n que contenga 0,3 mL de solucio n saturada de cloruro de potasio por cada 100 mL de muestra de prueba.&1S (USP30)
&
CalcioA 100 mL, agregar 2 mL de oxalato de amonio SR: no se produce turbidez.&1S (USP30)
Eliminar lo siguiente: Amon acoPara envases con volumen de llenado de menos de 50 mL, diluir 50 mL del producto con 50 mL de Agua de Alta Pureza (ver Reactivos en Envases h661i) y usar esta dilucio n como solucio n de prueba; cuando el volumen de llenado sea de 50 mL o ma s, usar 100 mL del producto como solucio n de prueba. Agregar 2 mL de yodomercuriato de potasio alcalino SR a 100 mL de la solucio n de prueba: cualquier color amarillo que se produzca inmediatamente no es ma s oscuro que el color de un control que contenga 30 mg de amon aco agregado (proporcionado por el agregado de 1,76 mL de sto hidro xido de amonio 1,0 N) en 100 mL de Agua de Alta Pureza. E corresponde a un l mite de 0,6 mg por L para envases con un volumen de llenado de menos de 50 mL y de 0,3 mg por L cuando el volumen de llenado sea de 50 mL o ma s.&1S (USP30)
&
&
Dio xido de carbonoA 25 mL, agregar 25 mL de hidro xido de calcio SR: la mezcla permanece transparente.&1S (USP30)
Eliminar lo siguiente: ClorurosA 20 mL colocados en un tubo de comparacio n de color, agregar 5 gotas de a cido n trico y 1 mL de nitrato de plata SR y mezclar suavemente: la turbidez formada dentro de los 10 minutos no es mayor que la producida por una solucio n control, constituida por 20 mL de Agua de Alta Pureza (ver Reactivos en Envases h661i) con 10 mg de cloruro (0,5 mg por L), cuando se la trata de manera similar y se la observa hacia abajo sobre una supercie oscura, iluminando lateralmente los tubos.&1S (USP30)
&
&
Monograf as Ociales / Alopurinol
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Eliminar lo siguiente: Dio xido de carbonoA 25 mL, agregar 25 mL de hidro xido de calcio SR: la mezcla permanece transparente.&1S (USP30)
&
&
Eliminar lo siguiente: ClorurosA 20 mL colocados en un tubo de comparacio n de color, agregar 5 gotas de a cido n trico, 1 mL de nitrato de plata SR y mezclar suavemente: la turbidez formada dentro de los 10 minutos no es mayor que la producida por una solucio n control, constituida por 20 mL de Agua de Alta Pureza (ver Reactivos en Envases h661i) con 10 mg de cloruro (0,5 mg por L), cuando se la trata de manera similar y se la observa hacia abajo sobre una supercie oscura, iluminando lateralmente los tubos.&1S (USP30)
&
& Dio xido de carbonoA 25 mL, agregar 25 mL de hidro xido de calcio SR: la mezcla permanece transparente.&1S (USP30)
&
&
SulfatosA 100 mL, agregar 1 mL de cloruro de bario SR: no se produce turbidez.&1S (USP30)
ClorurosA 20 mL colocados en un tubo de comparacio n de color, agregar 5 gotas de a cido n trico y 1 mL de nitrato de plata SR y mezclar suavemente: la turbidez que se forma dentro de los 10 minutos no es mayor que la producida por una solucio n control, constituida por 20 mL de una solucio n de cloruro de sodio en Agua de Alta Pureza (ver Reactivos en Envases h661i), con 825 mg de cloruro de sodio por L (10 mg de Cl en 20 mL), cuando se la trata de manera similar y se la observa hacia abajo sobre una supercie oscura, iluminando lateralmente los tubos.&1S (USP30)
Agregar lo siguiente: Conductividad del agua h645iRealizar Etapa 2, Paso 4 usando una cantidad suciente de agua para realizar la prueba. La conductividad no es ma s de 25 mS/cm para envases con un volumen nominal de 10 mL o menos a 25+18; y no ma s de 5 mS/cm para envases con un volumen nominal de ma s de 10 mL a 25+18.&1S (USP30)
&
&
SulfatosA 100 mL, agregar 1 mL de cloruro de bario SR: no se produce turbidez.&1S (USP30)
& Conductividad del Agua h645iRealizar Etapa 2, Paso 4 usando una cantidad suciente de agua para realizar la prueba. La conductividad no es ma s de 25 mS/cm para envases con un volumen nominal de 10 mL o menos a 25+18; y no ma s de 5 mS/cm para envases con un volumen nominal ma s de 10 mL a 25+18.&1S (USP30)
Agua Puricada Este ril Alopurinol

&
pH h791i: entre 5,0 y 7,0 en una solucio n que contenga 0,3 mL de solucio n saturada de cloruro de potasio por cada 100 mL de muestra de prueba.&1S (USP30)
Eliminar lo siguiente: Amon acoPara envases con volumen de llenado de menos de 50 mL, diluir 50 mL del producto con 50 mL de Agua de Alta Pureza (ver Reactivos en Envases h661i) y usar esta dilucio n como solucio n de prueba; cuando el volumen de llenado sea de 50 mL o ma s, usar 100 mL del producto como solucio n de prueba. Agregar 2 mL de yodomercuriato de potasio alcalino SR a 100 mL de la solucio n de prueba: cualquier color amarillo que se produzca inmediatamente no es ma s oscuro que el color de un control que contenga 30 mg de amon aco agregado (proporcionado por el agregado de 1 mL de la solucio n nal que se obtiene por dilucio n de 3,0 mL de amon aco SR hasta 100 mL con Agua de Alta Pureza; y diluyendo luego 1,0 mL de esta solucio n a 100 mL) en 100 mL de Agua de Alta Pureza. Esto corresponde a un l mite de 0,6 mg por L para envases con un volumen de llenado de menos de 50 mL y de 0,3 mg por L cuando el volumen de llenado sea de 50 mL o ma s.&1S (USP30)
&
El Alopurinol contiene no menos de 98,0 por ciento y no ma s de &102,0&1S (USP30) por ciento de C5H4N4O, calculado con respecto a la sustancia seca.
Cambio en la redaccio n: Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. &Almacenar a temperatura ambiente.&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11iER Alopurinol USP. ER Compuesto Relacionado A de Alopurinol USP. &ER Compuesto Relacionado B de Alopurinol USP. ER Compuesto Relacionado C de Alopurinol USP. ER Compuesto Relacionado D de Alopurinol USP. ER Compuesto Relacionado E de Alopurinol USP. ER Compuesto Relacionado F de Alopurinol USP.&1S (USP30)
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Alopurinol / Monograf as Ociales
&
Pureza cromatogra ca Adsorbente: una capa de celulosa para cromatograf a de 0,1 mm de espesor que contenga un indicador uorescente. Solucio n de pruebaDisolver 250 mg de Alopurinol en una mezcla de hidro xido de amonio 6 N e hidro xido de sodio 1 N (9 : 1) para obtener 10,0 mL y mezclar. Solucio n esta ndarDisolver una cantidad adecuada de ER Compuesto Relacionado A de Alopurinol USP en hidro xido de amonio 6 N para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de 50 mg por mL. Volumen de aplicacio n: 10 mL. Fase mo vilAgitar 200 mL de alcohol but lico y 200 mL de hidro xido de amonio 6 N, desechar la capa inferior y agregar 20 mL de alcohol but lico a la capa superior. ProcedimientoProceder segu n se indica en Cromatograf a en Capa Delgada en Cromatograf a h621i. Desarrollar el cromatograma hasta que el frente de la fase mo vil este a 1 cm de la parte superior de la placa, secar al aire y examinar bajo luz UV. Toda mancha en el cromatograma obtenido a partir de la Solucio n de prueba, con excepcio n de la mancha principal, no es ma s intensa que la mancha que aparece en el cromatograma obtenido a partir de la Solucio n esta ndar: no se encuentra ma s de 0,2% de ninguna impureza individual.&1S (USP30)
temperatura de la columna a 308. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Tiempo (minutos) 030 3035 3536 3646 Solucio n A (%) 90?70 70 70?90 90 Solucio n B (%) 10?30 30 30?10 10 Elucio n gradiente lineal isocra tica gradiente lineal reequilibrio
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar, identicar los picos (ver la Tabla 1) y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado B de alopurinol y el compuesto relacionado C de alopurinol no es menor de 0,8; y el factor de asimetr a para el pico de alopurinol no es mayor de 1,5. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 40 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas, e identicar el pico de alopurinol y los picos debidos a las impurezas que guran en la Tabla 1. Tabla 1 Tiempo de Retencio n Relativo 0,62 0,79 0,81 1,0 4,4 4,8 6,5 L mite (%) 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2
& Compuestos relacionados[NOTAAlmacenar e inyectar la Solucio n esta ndar y la Solucio n de prueba a 88, usando un muestreador automa tico enfriado.] Solucio n ADisolver 1,25 g de fosfato monoba sico de potasio en 1000 mL de agua, ltrar y desgasicar. Solucio n BUsar metanol. Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y Solucio n B segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). DiluyentePreparar una mezcla de Solucio n A y Solucio n B (90 : 10). Solucio n madre del esta ndarPesar con exactitud aproximadamente 5 mg de ER Alopurinol USP, de ER Compuesto Relacionado A de Alopurinol USP, de ER Compuesto Relacionado B de Alopurinol USP, de ER Compuesto Relacionado C de Alopurinol USP, de ER Compuesto Relacionado D de Alopurinol USP, de ER Compuesto Relacionado E de Alopurinol USP y de ER Compuesto Relacionado F de Alopurinol USP, y transferir a un matraz volume trico de 100 mL. Agregar 2,0 mL de hidro xido de sodio 0,1 N para disolver, someter a ultrasonido en seguida agitando por rotacio n suave durante no ma s de 1 minuto, agregar 80 mL de Diluyente y someter a ultrasonido durante 5 minutos adicionales. Diluir a volumen con Diluyente. [NOTAEsta solucio n es estable durante 48 horas cuando se almacena a 88.] Solucio n esta ndarDiluir cuantitativamente un volumen, medido con exactitud, de la Solucio n madre del esta ndar con Diluyente para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,5 mg de alopurinol y aproximadamente 0,5 mg de cada uno de los compuestos relacionados A, B, C, D, E y F de alopurinol por mL. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 25 mg de Alopurinol, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, agregar 5,0 mL de hidro xido de sodio 0,1 N para disolver, someter a ultrasonido en seguida agitando por rotacio n suave durante no ma s de 1 minuto, agregar 80 mL de Diluyente y someter a ultrasonido durante 5 minutos adicionales. Diluir a volumen con Diluyente. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. Mantener la
Nombre Compuesto relacionado de alopurinol1 Compuesto relacionado de alopurinol3 Compuesto relacionado de alopurinol2 Alopurinol Compuesto relacionado de alopurinol4 Compuesto relacionado de alopurinol5 Compuesto relacionado de alopurinol6
1 2 3
A C B D E F
3-Amino-1H-pirazol-4-carboxamida 5-(Formilamino)-1H-pirazol-4-carboxamida 5-(4H-1,2,4-Triazol-4-il)-1H-pirazol-4-carboxamida 4 Etil-5-amino-1H-pirazol-4-carboxilato 5 Etil-5-(formilamino)-1H-pirazol-4-carboxilato 6 Etil-(E/Z)-3-(2-carbetoxi-2-cianoetienil)amino-1H-pirazol-4-carboxilato
Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Alopurinol tomada, por la fo rmula: 10(C/W)(ri / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de cada impureza individual en la Solucio n esta ndar; W es el peso, en mg, de Alopurinol tomado para preparar la Solucio n de prueba; y ri y rS son las respuestas de los picos para cada impureza individual obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente. [NOTAPara impurezas no especicadas, rS es la respuesta del pico para el pico de alopurinol obtenido a partir de la Solucio n esta ndar.] Adema s de no exceder los l mites de cada impureza en la Tabla 1, no se encuentra ma s de 0,1% de cualquier impureza no especicada individual; y no se encuentra ma s de 1,0% de impurezas totales.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Valoracio n&[NOTAAlmacenar e inyectar la Solucio n de aptitud del sistema, la Preparacio n esta ndar y la Preparacio n de valoracio n a 88, usando un muestreador automa tico enfriado.] Fase mo vilDisolver 1,25 g de fosfato monoba sico de potasio en 1000 mL de agua, ltrar y degasicar. Solucio n de aptitud del sistemaTransferir cantidades, pesadas con exactitud, de ER Alopurinol USP, de ER Compuesto Relacionado B de Alopurinol USP y de ER Compuesto Relacionado
Monograf as Ociales / Alu mina
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C de Alopurinol USP, a sendos matraces volume tricos adecuados, disolver en un volumen pequen o de hidro xido de sodio 0,1 N y de inmediato diluir cuantitativamente con Fase mo vil para obtener soluciones con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,05 mg por mL. Transferir 1,0 mL de cada una de estas tres soluciones a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Preparacio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Alopurinol USP en un volumen pequen o de hidro xido de sodio 0,1 N y de inmediato diluir cuantitativamente con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,5 mg por mL. Diluir cuantitativamente un volumen, medido con exactitud, de esta solucio n con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,08 mg de alopurinol por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 50 mg de Alopurinol, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver en 5,0 mL de hidro xido de sodio 0,1 N, de inmediato diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Diluir cuantitativamente un volumen, medido con exactitud, de esta solucio n con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,08 mg de alopurinol por mL. Sistema croma tograco (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 230 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,8 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado B de alopurinol y el compuesto relacionado C de alopurinol no es menor de 1,1, y aquella entre el compuesto relacionado C de alopurinol y alopurinol no es menor de 6,0. [NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,7 para el compuesto relacionado B de alopurinol, 0,8 para el compuesto relacionado C de alopurinol y 1,0 para alopurinol.] Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular el porcentaje de C5H4N4O en la porcio n de Alopurinol tomada, por la fo rmula: 100(CS / CU)(rU / rS) en donde CU y CS son las concentraciones, en mg por mL, de alopurinol en la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Magnesia y Carbonato de Calcio, Tabletas Masticables

(La Monograf a con este nuevo t tulosera ocial a partir del 18 de febrero de 2010) (El t tulo actual de la monograf a es Alu mina, Magnesia y Carbonato de Calcio, Tabletas)
&Alu mina,
Carbonato de Calcio contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de las cantidades declaradas de hidro xido de aluminio [Al(OH)3], hidro xido de magnesio [Mg(OH)2] y carbonato de calcio (CaCO3).
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. EtiquetadoEtiquetar las Tabletas Masticables indicando que se deben masticar antes de tragar. Las Tabletas Masticables preparadas empleando gel de hidro xido de aluminio desecado pueden ser etiquetadas indicando el contenido de hidro xido de aluminio en te rminos de la cantidad equivalente de gel de hidro xido de aluminio desecado, sobre la base de que cada mg de gel desecado equivale a 0,765 mg de Al(OH)3. Identicacio nA una porcio n de 3 g de Tabletas Masticables reducidas a polvo no, agregar 25 mL de agua y 25 mL de a cido sulfu rico 2 N, mezclar y calentar en un ban o de vapor durante 10 minutos. Enfriar, agregar 50 mL de alcohol y mezclar: la mezcla as obtenida cumple con los requisitos de las pruebas de Identicacio n A, B y C en Alu mina, Magnesia y Carbonato de Calcio, Suspensio n Oral, comenzando en la prueba de Identicacio n A donde dice colocar en un ban o de hielo durante 30 minutos. Desintegracio n h701i: 45 minutos. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumple con los requisitos de Variacio n de Peso con respecto a alu mina, magnesia y carbonato de calcio. Capacidad neutralizante de a cido h301iLa dosis m nima individual recomendada en el etiquetado consume no menos de 5 mEq de a cido y no menos del nu mero de mEq calculado por la fo rmula: 0,55(0,0385A) + 0,8(0,0343 M) + 0,9(0,02C) en donde 0,0385; 0,0343 y 0,02 son las capacidades neutralizantes de a cido teo ricas, en mEq, de Al(OH)3, Mg(OH)2 y CaCO3, respectivamente; y A, M y C son las cantidades respectivas, en mg, de Al(OH)3, Mg(OH)2 y CaCO3 en la muestra analizada, basadas en las cantidades declaradas. Valoracio n de hidro xido de aluminio Solucio n volume trica de edetato diso dicoPreparar segu n se indica en la Valoracio n en Alumbre de Amonio. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas Masticables. Transferir a un vaso de precipitados una porcio n del polvo pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 600 mg de hidro xido de aluminio, agregar 20 mL de agua y agregar lentamente 40 mL de a cido clorh drico 3 N, mezclando. Calentar la mezcla hasta ebullicio n, enfriar, y ltrar, recogiendo en un matraz volume trico de 200 mL. Lavar el vaso de precipitados con agua, agregando los lavados al ltro. Agregar agua a volumen y mezclar. ProcedimientoProceder segu n se indica en el Procedimiento en la Valoracio n de hidro xido de aluminio en Alu mina, Magnesia y Carbonato de Calcio, Suspensio n Oral. Cada mL de Solucio n volume trica de edetato diso dico 0,05 M equivale a 3,900 mg de Al(OH)3.
Las Tabletas Masticables de Alu mina, Magnesia y
Alu mina, Magnesia y Carbonato de Calcio, Tabletas

(T tulo vigente no cambiara hasta el 18 de febrero de 2010) Cambio de t tulo de la monograf asera ocial a partir del 18 de febrero de 2010 Ver Alu mina, Magnesia y Carbonato de Calcio, Tabletas Masticables
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Alu mina / Monograf as Ociales
Valoracio n de hidro xido de magnesio Solucio n volume trica de edetato diso dico y Preparacio n de valoracio nPreparar segu n se indica en la Valoracio n de hidro xido de aluminio. ProcedimientoProceder segu n se indica en el Procedimiento en la Valoracio n de hidro xido de magnesio en Alu mina, Magnesia y Carbonato de Calcio, Suspensio n Oral. Cada mL de edetato diso dico 0,05 M equivale a 2,916 mg de Mg(OH)2. Valoracio n de carbonato de calcio Solucio n volume trica de edetato diso dico y Preparacio n de valoracio nPreparar segu n se indica en la Valoracio n de hidro xido de aluminio. ProcedimientoProceder segu n se indica en el Procedimiento en la Valoracio n de carbonato de calcio en Alu mina, Magnesia y Carbonato de Calcio, Suspensio n Oral. Cada mL de edetato diso dico 0,05 M equivale a 5,004 mg de CaCO3. (Ocial a partir del 18 de febrero de 2010)&1S (USP30)
Alu mina, Magnesia y Simeticona, Tabletas

(T tulo vigenteno cambiara hasta el 18 de febrero de 2010) El cambio de t tulo de la monograf asera ocial a partir del 18 de febrero de 2010 Ver Alu mina, Magnesia y Simeticona, Tabletas Masticables
Solucio n: preparada segu n se indica en la Valoracio n de polidimetilosiloxano. B: A una porcio n de Tabletas Masticables reducidas a polvo no, que equivalga aproximadamente a 600 mg de hidro xido de magnesio, agregar 25 mL de a cido clorh drico 3 N y 25 mL de agua, y mezclar. Calentar a ebullicio n moderada durante 2 minutos. Dejar que se enfr e y ltrar. Agregar 5 gotas de rojo de metilo SR, calentar a ebullicio n y agregar hidro xido de amonio 6 N hasta que el color de la solucio n apenas se torne amarillo intenso. Continuar en ebullicio n durante 2 minutos y ltrar: el ltrado as obtenido cumple con los requisitos a las pruebas para Magnesio h191i. C: Lavar el precipitado obtenido en la prueba de Identicacio n B con una solucio n caliente de cloruro de amonio (1 en 50) y disolver el precipitado en a cido clorh drico: la solucio n as obtenida cumple con los requisitos a la prueba de Identicacio n C en Suspensio n Oral de Alu mina, Magnesia y Simeticona. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos de Variacio n de Peso con respecto a hidro xido de aluminio y a hidro xido de magnesio. Capacidad neutralizante de a cido h301iLa dosis m nima individual recomendada en el etiquetado consume no menos de 5 mEq de a cido y no menos del nu mero de mEq calculado por la fo rmula: 0,55(0,0385A) + 0,8(0,0343M) en donde 0,0385 y 0,0343 son las capacidades neutralizantes de a cido teo ricas, en mEq, de Al(OH)3 y Mg(OH)2, respectivamente; y A y M son las cantidades, en mg, de Al(OH)3 y Mg(OH)2 en la muestra analizada, basadas en las cantidades declaradas. Actividad antiespumante Solucio n espumanteDisolver 500 mg de Azul FD&C No. 1 y 1 g de octoxinol 9 en 100 mL de a cido clorh drico 0,1 N. Procedimiento[NOTAPara cada prueba, emplear un recipiente de vidrio de 250 mL limpio y sin uso.] Transferir una cantidad de Tabletas Masticables reducidas a polvo no, pasada completamente por un tamiz de malla 80, equivalente a 20 mg de simeticona, a un frasco cil ndrico de vidrio de 250 mL, limpio y sin uso, provisto con un tapo n de 50 mm, y que contenga 100 mL de la Solucio n espumante entibiada previamente a 378. Proceder segu n se indica en Procedimiento de la prueba para Actividad antiespumante en Simeticona, comenzando donde dice Tapar el recipiente. El tiempo de actividad antiespumante no excede de 45 segundos. Contenido de sodio Solucio n de cloruro de potasio, Solucio n madre de cloruro de sodio y Preparaciones esta ndarPreparar segu n se indica en la prueba de Contenido de sodio en Alu mina, Magnesia y Simeticona, Suspensio n Oral. Preparacio n de pruebaPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas Masticables. Transferir una porcio n del polvo pesada con exactitud, equivalente al peso promedio de 1 Tableta Masticable, a un matraz volume trico de 100 mL. Agregar 50 mL de a cido clorh drico 1 N, calentar a ebullicio n durante 15 minutos, enfriar a temperatura ambiente, diluir a volumen con agua y mezclar. Filtrar, desechando los primeros mL del ltrado. Transferir 5,0 mL del ltrado a un matraz volume trico de 100 mL que contenga 10,0 mL de Solucio n de cloruro de potasio, diluir a volumen con agua y mezclar. ProcedimientoProceder segu n se indica en la prueba de Contenido de sodio en Alu mina, Magnesia y Simeticona, Suspensio n Oral. Calcular la cantidad, en mg, de sodio por Tableta Masticable tomada, por la fo rmula: 2C Valoracio n de hidro xido de aluminio Solucio n volume trica de edetato diso dicoPreparar y normalizar segu n se indica en Valoracio n en Alumbre de Amonio. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas Masticables. Transferir a un vaso de precipitados de 150 mL una porcio n del polvo pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 800 mg de hidro xido de aluminio, agregar 20 mL de agua, mezclar y agregar lentamente 30 mL de a cido clorh drico 3 N. Calentar moderadamente, si fuera necesario,
Magnesia y Simeticona, Tabletas Masticables

(La Monograf a con este nuevo t tulosera ocial a partir del 18 de febrero de 2010) (El t tulo actual de la monograf a es Alu mina, Magnesia y Simeticona, Tabletas)
&Alu mina,
Las Tabletas Masticables de Alu mina, Magnesia y
Simeticona contienen el equivalente a no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 115,0 por ciento de las cantidades declaradas de hidro xido de aluminio [Al(OH)3] e hidro xido de magnesio [Mg(OH)2], y una cantidad de polidimetilosiloxano [(CH3)2SiO]n de no menos de 85,0 por ciento y no ma s de 115,0 por ciento de la cantidad declarada de simeticona.
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. EtiquetadoEtiquetar las Tabletas Masticables indicando que se deben masticar antes de tragar. Etiquetar las Tabletas Masticables indicando el contenido de sodio si e ste es superior a 5 mg por Tableta. Las Tabletas Masticables pueden etiquetarse indicando el contenido de hidro xido de aluminio en funcio n de la cantidad equivalente de gel de hidro xido de aluminio desecado, considerando que cada mg de gel desecado equivale a 0,765 mg de Al(OH)3. Esta ndares de referencia USP h11iER Polidimetilsiloxano USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Si Celda: 0,5 mm.
Monograf as Ociales / Alu mina
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para facilitar la disolucio n, enfriar a temperatura ambiente y ltrar en un matraz volume trico de 200 mL. Lavar el ltro con agua, vertiendo el agua en el matraz; agregar agua a volumen y mezclar. ProcedimientoProceder segu n se indica en Procedimiento en Valoracio n de hidro xido de aluminio en Alu mina, Magnesia y Simeticona, Suspensio n Oral. Valoracio n de hidro xido de magnesio Preparacio n de valoracio nPreparar segu n se indica en la Valoracio n de hidro xido de aluminio. ProcedimientoProceder segu n se indica en Procedimiento en Valoracio n de hidro xido de magnesio en Alu mina, Magnesia y Simeticona, Suspensio n Oral. Valoracio n de polidimetilosiloxanoPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas Masticables. Transferir una porcio n del polvo pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 33 mg de simeticona, a un frasco redondo de 120 mL, de boca estrecha y con tapa de rosca, agregar 40 mL de hidro xido de sodio 0,1 N y agitar por rotacio n moderada para dispersar. Agregar 20,0 mL de tolueno, cerrar bien el frasco con una tapa que tenga un revestimiento interno inerte y agitar durante 30 minutos, exactamente cronometrados, en un agitador de oscilacio n vertical (por ejemplo, aproximadamente 200 oscilaciones por minuto y un recorrido de 38 + 2 mm). Transferir la mezcla a un separador de 125 mL y dejar que se separe. Retirar la capa orga nica superior y transferir a un tubo de centr fuga con tapa de rosca que contenga aproximadamente 2 g de sulfato de sodio anhidro. Cerrar el tubo con una tapa de rosca que tenga revestimiento interno inerte, agitar vigorosamente y centrifugar la mezcla hasta obtener un sobrenadante transparente (Preparacio n de valoracio n). Del mismo modo, preparar una Preparacio n esta ndar usando aproximadamente 33 mg de ER Polidimetilosiloxano USP, pesados con exactitud. Preparar un blanco mezclando 10 mL de tolueno con aproximadamente 1 g de sulfato de sodio anhidro y centrifugando para obtener un sobrenadante transparente. Determinar concomitantemente las absorbancias de las soluciones en celdas de 0,5 mm a la longitud de ma xima absorcio n, aproximadamente a 7,9 mm (1265,8 cm1), con un espectrofoto metro IR adecuado, utilizando el blanco para ajustar el instrumento. Calcular la cantidad, en mg, de [(CH3)2SiO]n en la porcio n de Tabletas Masticables tomada, por la fo rmula: (W)(AU / AS) en donde W es el peso, en mg, de ER Polidimetilosiloxano USP utilizado para obtener la Preparacio n esta ndar; y AU y AS son las absorbancias de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar, respectivamente. (Ocial a partir del 18 de febrero de 2010)&1S (USP30)
Magnesia, Carbonato de Calcio y Simeticona, Tabletas Masticables

(La Monograf a con este nuevo t tulo sera ocial a partir del 18 de febrero de 2010) (El t tulo actual de la monograf a es Alu mina, Magnesia, Carbonato de Calcio y Simeticona, Tabletas)
&Alu mina,
Las Tabletas Masticables de Alu mina, Magnesia, Carbonato de Calcio y Simeticona contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de las cantidades declaradas de hidro xido de aluminio [Al(OH)3], hidro xido de magnesio [Mg(OH)2] y carbonato de calcio (CaCO3), y una cantidad de polidimetilosiloxano ([(CH3)2SiO]n) que es de no menos de 85,0 por ciento y no ma s de 115,0 por ciento de la cantidad declarada de simeticona.
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. EtiquetadoEtiquetar las Tabletas Masticables indicando que se deben masticar antes de tragar. Etiquetar las Tabletas Masticables para declarar el contenido de sodio, si es ma s de 5 mg por Tableta Masticable. Esta ndares de referencia USP h11iER Polidimetilosiloxano USP. Identicacio n A: Cortar una Tableta Masticable en trozos, agregar 50 mL de a cido sulfu rico 1 N, mezclar hasta que los trozos se desintegren y calentar en un ban o de vapor durante 10 minutos. Enfriar, agregar 50 mL de alcohol y mezclar. La mezcla as obtenida responde a las pruebas de Identicacio n A, B y C en Alu mina, Magnesia y Carbonato de Calcio, Suspensio n Oral, comenzando en la prueba de Identicacio n A donde dice colocar en un ban o de hielo durante 30 minutos. B: Absorcio n en el Infrarrojo h197Si Celda: 0,5 mm. Solucio n: preparada segu n se indica en la Valoracio n de polidimetilosiloxano. L mites microbianos h61iEl recuento total de microorganismos aerobios no excede de 200 ufc por g, el recuento total combinado de hongos lamentosos y levaduras no excede de 200 ufc por g y las Tabletas Masticables cumplen con los requisitos de la prueba para determinar la ausencia de Salmonella spp y Escherichia coli. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos de Variacio n de Peso con respecto al hidro xido de aluminio, al hidro xido de magnesio y al carbonato de calcio. Capacidad neutralizante de a cido h301iDisolver un nu mero de Tabletas Masticables contado con exactitud, equivalente aproximadamente a 120 mEq de capacidad neutralizante de a cido, en aproximadamente 400 mL de agua. Transferir la mezcla a un matraz volume trico de 500 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Utilizar 75,0 mL de esta solucio n como Preparacio n de prueba. Proceder segu n se indica en el apartado Procedimiento para Polvos, So lidos Efervescentes, Suspensiones y Otros L quidos, Tabletas No Masticables, Tabletas Masticables y Ca psulas. La dosis m nima individual recomendada en el etiquetado consume no menos de 5 mEq de a cido y no menos del nu mero de mEq calculado por la fo rmula: 0,55(0,0385A) + 0,8(0,0343 M) + 0,9(0,02C) en donde 0,0385; 0,0343 y 0,02 son las capacidades neutralizantes del a cido teo ricas, en mEq, de Al(OH)3, Mg(OH)2 y CaCO3, respectivamente, y A, M y C son las cantidades, en mg, de Al(OH)3,
Alu mina, Magnesia, Carbonato de Calcio y Simeticona, Tabletas

(T tulo vigenteno cambiara hasta el 18 de febrero de 2010) Cambio de t tulo de la monograf asera ocial a partir del 18 de febrero de 2010 Ver Alu mina, Magnesia, Carbonato de Calcio y Simeticona, Tabletas Masticables
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Alu mina / Monograf as Ociales
Mg(OH)2 y CaCO3 en la muestra analizada, basadas en las cantidades declaradas. Actividad antiespumante Solucio n espumanteDisolver 1 g de octoxinol 9 en 100 mL de a cido clorh drico 0,3 N. Procedimiento[NOTAPara cada prueba, utilizar un recipiente cil ndrico de vidrio limpio de 250 mL.] Pesar no menos de 10 Tabletas Masticables, cortarlas en pequen os trozos y mezclar. Transferir una porcio n de los trozos de Tabletas Masticables mezclados, equivalente aproximadamente a 20 mg de simeticona, a un recipiente cil ndrico de vidrio limpio de 250 mL, con una tapa de 50 mm, que contenga 100 mL de Solucio n espumante previamente entibiada a 378. Despue s de que cese la efervescencia, proceder segu n se indica en Procedimiento en la prueba de Actividad antiespumante en Simeticona, comenzando donde dice Tapar el recipiente. El tiempo de actividad antiespumante no excede de 45 segundos. Contenido de sodio Solucio n de cloruro de potasioDisolver 3 g de cloruro de potasio en agua en un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. cido clorh A drico diluidoPreparar mezclando 226 mL de a cido clorh drico con suciente agua para obtener 1000 mL. Solucio n esta ndarTransferir 2,5420 g de cloruro de sodio, previamente secados a 1058 durante 2 horas, a un matraz volume trico de 1000 mL, disolver y diluir a volumen con agua, y mezclar. Transferir 10,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir 10,0 mL de esta solucio n a un segundo matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. A tres matraces volume tricos de 100 mL, cada uno con 10,0 mL de cido clorh Solucio n de cloruro de potasio y 3,0 mL de A drico diluido, agregar, respectivamente, 10,0; 20,0 y 30,0 mL de esta solucio n. Estas soluciones contienen 1,0; 2,0 y 3,0 mg de sodio (Na) por mL, respectivamente. Solucio n de pruebaPesar con exactitud 10 Tabletas Masticables y determinar el peso promedio, A, en mg. Cortar 4 Tabletas Masticables en trozos, combinar los trozos y pesarlos. Transferir los trozos combinados a un matraz volume trico de 500 mL, agregar 150 cido clorh mL de A drico diluido y agitar por rotacio n moderada para desintegrar los trozos. Diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir 10,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 100 mL, agregar 10,0 mL de Solucio n de cloruro de potasio, diluir a volumen con agua y mezclar. cido clorh Solucio n blancoTransferir 3,0 mL de A drico diluido y 10,0 mL de Solucio n de cloruro de potasio a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. ProcedimientoDeterminar concomitantemente las absorbancias de las Soluciones esta ndar y de la Solucio n de prueba en la l nea de emisio n de sodio a 589,0 nm con un espectrofoto metro de absorcio n ato mica adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i) equipado con una la mpara de sodio de ca todo hueco y una llama de aireacetileno, utilizando la Solucio n blanco como blanco. Gracar las absorbancias de las Soluciones esta ndar en funcio n de la concentracio n de sodio, en mg por mL, y trazar la l nea recta que mejor se ajuste a los tres puntos gracados. A partir de la gra ca as obtenida, determinar la concentracio n, C, en mg por mL, de sodio en la Solucio n de prueba. Calcular los mg de sodio (Na) en cada Tableta tomada, por la fo rmula: 5C(A/W) en donde A es el peso promedio, en mg, de cada Tableta Masticable; y W es el peso, en mg, de la porcio n de Tabletas Masticables tomada para preparar la Solucio n de prueba. Las Tabletas Masticables contienen no ma s de 5 mg de sodio por Tableta Masticable, excepto cuando la etiqueta indica que contienen ma s de 5 mg de sodio por Tableta Masticable, las tabletas contienen no ma s de 110% de la cantidad declarada. Valoracio n de hidro xido de aluminio Solucio n volume trica de Edetato diso dicoPreparar y normalizar segu n se indica en Valoracio n en Alumbre de Amonio. Preparacio n de valoracio nTransferir un nu mero de Tabletas Masticables contado con exactitud, equivalente aproximadamente a 665 mg de hidro xido de aluminio, a un vaso de precipitados adecuado. Agregar 15 mL de a cido clorh drico y agitar por rotacio n
moderada para disolver las Tabletas Masticables. Agregar 80 mL de agua, ltrar y transferir a un matraz volume trico de 200 mL. Lavar el ltro con agua vertiendo el agua en el matraz; agregar agua a volumen y mezclar. ProcedimientoPipetear 20 mL de Preparacio n de valoracio n y transferir a un vaso de precipitados de 250 mL; luego agregar, en el orden mencionado y mezclando continuamente, 25,0 mL de Solucio n volume trica de edetato diso dico y 20 mL de solucio n amortiguadora de a cido ace ticoacetato de amonio SR y calentar a una temperatura cercana al punto de ebullicio n durante 5 minutos. Enfriar, agregar 50 mL de alcohol y 2 mL de ditizona SR, y mezclar. Valorar con sulfato de cinc 0,05 M SV hasta que el color cambie de violeta verdoso a rosado. Realizar una determinacio n con un blanco, reemplazando con 20 mL de agua la Preparacio n de valoracio n y haciendo todas las correcciones necesarias. Cada mL consumido de Solucio n volume trica de edetato diso dico 0,05 M equivale a 3,900 mg de Al(OH)3. Valoracio n de hidro xido de magnesio Solucio n de cloruro de lantanoTransferir 17,6 g de cloruro de lantano a un matraz volume trico de 200 mL, agregar 100 mL de agua y agregar cuidadosamente 50 mL de a cido clorh drico. Mezclar y dejar enfriar. Diluir a volumen con agua y mezclar. cido clorh A drico diluidoPreparar mezclando 226 mL de a cido clorh drico con suciente agua para obtener 1000 mL. Solucio n de cloruro de potasioDisolver 3 g de cloruro de potasio en agua en un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Solucio n madre de magnesioTransferir 1,000 g de magnesio meta lico a un matraz volume trico de 1000 mL que contenga 10 mL de agua, agregar lentamente 10 mL de a cido clorh drico y agitar por rotacio n moderada para disolver el metal. Diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir 2,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Esta solucio n contiene 20 mg de magnesio (Mg) por mL. Preparaciones esta ndarA cada uno de tres matraces volume tricos de 100 mL, cada uno de los cuales contiene 5,0 mL de Solucio n de cloruro de lantano, agregar 1,0; 2,0 y 3,0 mL, respectivamente, de Solucio n madre de magnesio. Diluir cada solucio n a volumen con agua y mezclar. Estas soluciones contienen 0,1; 0,2 y 0,3 mg de magnesio (Mg) por mL, respectivamente. Preparacio n de valoracio nTransferir un nu mero de Tabletas Masticables contado con exactitud, equivalente aproximadamente a 250 mg de hidro xido de magnesio (100 mg de magnesio), a un cido matraz volume trico de 1000 mL. Agregar 500 mL de A clorh drico diluido y agitar por rotacio n moderada para desintegrar las Tabletas Masticables. Agregar 100,0 mL de Solucio n de cloruro de potasio, diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir 10,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir 2,0 mL de esta solucio n a un segundo matraz volume trico de 100 mL, agregar 5,0 mL de Solucio n de cloruro de lantano, diluir a volumen con agua y mezclar. cido clorh BlancoAgregar 50 mL de A drico diluido y 10,0 mL de Solucio n de cloruro de potasio a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir 10,0 mL de esta solucio n a un segundo matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir 2,0 mL de esta solucio n a un tercer matraz volume trico de 100 mL, agregar 5,0 mL de Solucio n de cloruro de lantano, diluir a volumen con agua y mezclar. ProcedimientoDeterminar concomitantemente las absorbancias de las Preparaciones esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n en la l nea de emisio n de magnesio a 285,2 nm, con un espectrofoto metro de absorcio n ato mica adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i) equipado con una la mpara de magnesio de ca todo hueco y una llama de aireacetileno, utilizando el Blanco para ajustar el instrumento. Gracar las absorbancias de las Preparaciones esta ndar en funcio n de la concentracio n, en mg por mL, de magnesio y trazar la l nea recta que mejor se ajuste a los tres puntos gracados. Del gra co obtenido, determinar la concentracio n, C, en mg por mL, de magnesio en la Preparacio n de valoracio n. Calcular la cantidad, en mg, de hidro xido de magnesio [Mg(OH)2] en cada Tableta Masticable tomada, por la fo rmula: (58,34/24,305)(500C/N) en donde 58,34 es el peso molecular de hidro xido de magnesio; 24,305 es el peso ato mico del magnesio; y N es el nu mero de
Monograf as Ociales / Aluminio
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Tabletas Masticables tomado para preparar la Preparacio n de valoracio n. Valoracio n de carbonato de calcio Preparacio n de valoracio nPreparar segu n se indica en Valoracio n de hidro xido de aluminio. ProcedimientoPipetear un volumen de la Preparacio n de valoracio n, equivalente aproximadamente a 50 mg de carbonato de calcio, transferir a un vaso de precipitados de 400 mL y agregar 200 mL de agua, un volumen de solucio n de hidro xido de sodio (1 en 2) equivalente al volumen de la Preparacio n de valoracio n tomada y 250 mg de azul de hidroxinaftol. Mezclar con un mezclador magne tico y valorar de inmediato con edetato diso dico 0,05 M SV hasta que la solucio n adquiera netamente un color azul. Realizar una determinacio n con un blanco, reemplazando la Preparacio n de valoracio n tomada por un volumen equivalente de agua tomada, y hacer las correcciones necesarias. Cada mL de edetato diso dico 0,05 M equivale a 5,004 mg de CaCO3. Valoracio n de polidimetilosiloxano cido clorh A drico diluidoPreparar mezclando 400 mL de a cido clorh drico con suciente agua para obtener 1000 mL. Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 60 mg de ER Polidimetilosiloxano USP, pesados con exactitud, a un separador, cido clorh agregar 30,0 mL de cloroformo y 60 mL de A drico diluido, agitar durante 30 segundos y dejar que las fases se separen. Retirar aproximadamente 10 mL de la capa orga nica inferior y transferir a un tubo de ensayo de 15 mL con tapa de rosca que contenga 0,5 g de sulfato de sodio anhidro. Tapar el tubo con una tapa de rosca con revestimiento interno inerte, agitar vigorosamente y centrifugar la mezcla hasta obtener un sobrenadante transparente. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas Masticables. Transferir una porcio n del polvo pesada con exactitud, equivalente aproximadamente a 60 mg de simeticona, a un frasco con tapa de rosca apropiado, agregar 30,0 cido clorh mL de cloroformo y 60 mL de A drico diluido y dejar en reposo, agitando con frecuencia, hasta que las Tabletas Masticables se disuelvan. Transferir el contenido del frasco a un separador, agitar y dejar que las fases se separen. Retirar aproximadamente 10 mL de la capa orga nica inferior y transferir a un tubo de ensayo de 15 mL con tapa de rosca que contenga 0,5 g de sulfato de sodio anhidro. Tapar el tubo con una tapa de rosca con revestimiento interno inerte, agitar vigorosamente y centrifugar la mezcla hasta obtener un sobrenadante transparente. cido BlancoColocar 30,0 mL de cloroformo y 60 mL de A clorh drico diluido en un separador, agitar durante 30 segundos y dejar que las fases se separen. Retirar aproximadamente 10 mL de la capa orga nica inferior y transferir a un tubo de ensayo de 15 mL con tapa de rosca que contenga 0,5 g de sulfato de sodio anhidro. Tapar el tubo con una tapa de rosca con revestimiento interno inerte, agitar vigorosamente y centrifugar la mezcla hasta obtener un sobrenadante transparente. ProcedimientoDeterminar concomitantemente las absorbancias de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n en celdas de 0,5 mm a la longitud de onda de ma xima absorcio n, aproximadamente a 7,9 mm, con un espectrofoto metro IR apropiado, utilizando el Blanco para ajustar el instrumento. Calcular la cantidad, en mg, de [(CH3)2SiO]n en cada Tableta Masticable tomada, por la fo rmula: (W/N)(AU / AS) en donde W es el peso, en mg, de ER Polidimetilosiloxano USP usado para preparar la Preparacio n esta ndar; N es el nu mero de Tabletas Masticables tomado para preparar la Preparacio n de valoracio n; y AU y AS son las absorbancias de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar, respectivamente. (Ocial a partir del 18 de febrero de 2010)&1S (USP30)
de Aluminio y Acetato de Calcio para Solucio n To pica

El Sulfato de Aluminio y Acetato de Calcio para
Solucio n To pica contiene no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de las cantidades declaradas de sulfato de aluminio tetradecahidrato [Al2(SO4)3 14H2O] y de acetato de calcio monohidrato (C4H6CaO4 H2O).
&Sulfato
Envasado y almacenamientoConservar en envases unitarios y proteger del calor excesivo. Identicacio n A: Colocar aproximadamente 0,25 g de Sulfato de Aluminio y Acetato de Calcio para Solucio n To pica en un tubo de ensayo. Agregar 10 mL de agua y 0,25 g de carbonato de calcio. Calentar en un ban o de vapor durante 10 minutos y ltrar. Agregar de 3 a 4 gotas de cloruro fe rrico SR al ltrado. Un color o precipitado marro n rojizo indica acetato. [NOTADespue s de agregar el cloruro fe rrico SR, la solucio n se puede calentar durante 1 minuto para acelerar la reaccio n.] B: Suspender 2 g de muestra en 50 mL de agua y ltrar. El ltrado cumple con los requisitos de las pruebas para Sulfato h191i y para Calcio h191i. pH h791i: entre 4,0 y 4,8 en una solucio n (1 en 200). Valoracio n de sulfato de aluminio Preparacio n de valoracio nTransferir 10 g de Sulfato de Aluminio y Acetato de Calcio para Solucio n To pica, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 1000 mL. Agregar 100 mL de a cido clorh drico 1,2 M y aproximadamente 250 mL de agua. Calentar en un ban o de vapor o placa de calentamiento hasta que se disuelva. Enfriar, diluir a volumen con agua y mezclar. [NOTA Reservar una porcio n de esta Preparacio n de valoracio n para la Valoracio n de acetato de calcio.] ProcedimientoTransferir una al cuota de 5,0 mL de la Preparacio n de valoracio n a un matraz Erlenmeyer de 250 mL. Agregar 40,0 mL de edetato diso dico 0,01 M SV y 20 mL de solucio n amortiguadora SR de a cido ace ticoacetato de amonio, y mezclar bien. Agregar 50 mL de alcohol y 2 mL de ditizona SR. [NOTA Seguir el orden indicado de adicio n.] Valorar con sulfato de cinc 0,02 M SV hasta que el color cambie de violeta verdoso a rosado transparente. Realizar una valoracio n volume trica con un blanco, reemplazando la Preparacio n de valoracio n por 5,0 mL de agua. Cada mL de edetato diso dico 0,01 M equivale a 2,972 mg de sulfato de aluminio tetradecahidrato [Al2(SO4)3 14H2O]. Calcular el porcentaje de sulfato de aluminio tetradecahidrato [Al2(SO4)3 14H2O] por la fo rmula: [(1000)(100)CF M(VB VU)] / 5,0 MTW en donde 1000/5,0 es el factor de dilucio n; 100 es el factor de conversio n a porcentaje; CF es el factor de conversio n (2,972 mg de muestra por mL de edetato diso dico 0,01 M); M es la molaridad real de la solucio n volume trica; VB es el volumen de valoracio n volume trica del blanco, en mL; VU es el volumen de valoracio n volume trica de la muestra, en mL; MT es la molaridad teo rica de la solucio n volume trica (0,02); y W es el peso de la muestra, en mg. Valoracio n de acetato de calcio ProcedimientoTransferir una al cuota de 5,0 mL de la Preparacio n de valoracio n reservada de la Valoracio n de sulfato de aluminio a un matraz Erlenmeyer de 250 mL. Agregar de 1 a 2 mL de trietanolamina al 50% para enmascarar el aluminio. Mezclar bien. Agregar 100 mL de agua, 15 mL de hidro xido de sodio 1 N y aproximadamente 300 mg de azul de hidroxinaftol. [NOTASeguir el orden indicado de adicio n.] Valorar con edetato diso dico 0,01 M SV. El indicador cambiara de color pu rpura a azul transparente en el punto nal. Cada mL de edetato diso dico 0,01 M equivale a 1,762
4074
Amifostina / Monograf as Ociales
mg de acetato de calcio monohidrato (C4H6CaO4 H2O). Calcular el porcentaje de acetato de calcio monohidrato (C4H6CaO4 H2O) por la fo rmula: [(1000)(100)VUCF M] / 5,0 MTW en donde 1000/5,0 es el factor de dilucio n; 100 es el factor de n volume trica conversio n a porcentaje; VU es el volumen de valoracio de la muestra, en mL; CF es el factor de conversio n (1,762 mg de muestra por mL de edetato diso dico 0,01 M); M es la molaridad real de la solucio n volume trica; MT es la molaridad teo rica de la solucio n volume trica (0,01); y W es el peso de la muestra, en mg.&1S (USP30)
Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar de tiol, respectivamente. Calcular el porcentaje de cada una de las impurezas restantes en la porcio n de Amifostina tomada, por la fo rmula: 100(ri / rA) en donde ri y rA son las respuestas correspondientes a los picos de cada impureza y de amifostina, respectivamente, obtenidos a partir de la Solucio n de prueba: no se encuentra ma s de 0,1% de cualquier impureza individual, excluyendo amifostina tiol; y no se encuentra ma s de 0,3% de impurezas totales, incluyendo amifostina tiol.
Amifostina
Amifostina para Inyeccio n
Cambio en la redaccio n: Compuestos relacionados Fase mo vilDisolver 1,0 mL de a cido nonauorobutansulfo nico en 1200 mL de agua de grado HPLC, agregar 400 mL de a cido triuoroace tico y ajustar con trietilamina a un pH de 2,5. Preparar una mezcla desgasicada de esta solucio n y acetonitrilo (68 : 32). Solucio n blancoUsar agua. Solucio n esta ndar de tiolTransferir aproximadamente 12,4 mg de ER Amifostina Tiol USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL. Disolver y diluir a volumen con agua, y mezclar. [NOTAInyectar inmediatamente despue s de la preparacio n o refrigerar hasta su uso. La solucio n es estable durante 48 horas si se mantiene aproximadamente a 58.] Solucio n de aptitud del sistemaDisolver aproximadamente 5,0 mg de ER Amifostina USP, pesados con exactitud, en 1 mL de Solucio n esta ndar de tiol y mezclar. [NOTAInyectar inmediatamente despue s de la preparacio n o refrigerar hasta su uso. La solucio n es estable durante 12 horas si se mantiene aproximadamente a 58.] Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 50 mg de Amifostina, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 1 mL. Disolver y diluir a volumen con agua, y mezclar. [NOTA Inyectar inmediatamente despue s de la preparacio n o refrigerar hasta su uso. La solucio n es estable durante 48 horas si se mantiene aproximadamente a 58.] Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1. Mantener la temperatura de la columna a 308 y mantener la temperatura de las soluciones a inyectar entre 28 y 88. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y la Solucio n esta ndar de tiol, y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre los picos de amifostina y amifostina tiol no es menor de 2,0; la eciencia de la columna calculada para el pico de amifostina tiol no es menos de 2300 platos teo ricos; el factor de asimetr a no es mayor de 4,0; el factor de capacidad, k, es mayor de 0,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 4,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n esta ndar de tiol, de la Solucio n de prueba y de la Solucio n blanco, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de todos los picos, excluyendo los picos correspondientes a los obtenidos a partir de la Solucio n blanco. Calcular el porcentaje de amifostina tiol en la porcio n de Amifostina tomada, por la fo rmula:
.(134,24/207,17)100(C/W)(r
U
La Amifostina para Inyeccio n es una sustancia ril adecuada para el uso parenteral. cristalina ..5 y este Contiene no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de amifostina (C5H15N2O3PS).
Cambio en la redaccio n: Compuestos relacionados Fase mo vil, Solucio n blanco y Solucio n de aptitud del sistema..5 Preparar segu n se indica en la prueba de Compuestos relacionados en Amifostina. Solucio n esta ndar de tiolTransferir aproximadamente 40,1 mg de ER Amifostina Tiol USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL. Disolver y diluir a volumen con agua, y mezclar. [NOTAInyectar inmediatamente despue s de la preparacio n o refrigerar hasta su uso. La solucio n es estable durante 48 horas si se mantiene aproximadamente a 58.] Solucio n esta ndar de disulfuroTransferir aproximadamente 18,6 mg de ER Disulfuro de Amifostina USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL. Disolver y diluir a volumen con agua y mezclar. [NOTAInyectar inmediatamente despue s de la preparacio n o refrigerar hasta su uso. La solucio n es estable durante 48 horas si se mantiene aproximadamente a 58.] .Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 50 mg de Amifostina para Inyeccio n, pesada con exactitud, a un matraz volume trico de 1 mL, disolver y diluir a volumen con agua, y mezclar. [NOTAInyectar inmediatamente despue s de la preparacio n o refrigerar hasta su uso. La solucio n es estable durante 48 horas si se mantiene aproximadamente a 58.].5 Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector capaz de registrar tanto a 220 nm como a 247 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1. Mantener la temperatura de la columna a 308 y mantener la temperatura de las soluciones a inyectar entre 28 y 88. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Cromatograar la Solucio n de aptitud del sistema, la Solucio n esta ndar de disulfuro y la Solucio n esta ndar de tiol, y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna calculada para el pico de amifostina tiol no es menos de 2300 platos teo ricos; el factor de asimetr a no es mayor de 4,0; el factor de capacidad, k, es mayor de 0,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 4,0%. La eciencia de la columna calculada para el pico de disulfuro de amifostina no es menos de 2000 platos teo ricos; el factor de asimetr a no es mayor de 4,5; el factor de capacidad, k, es mayor de 2,2; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 4,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n esta ndar de tiol, de la Solucio n esta ndar de disulfuro, de la Solucio n de prueba y
/ rS).5
en donde 134,24 y 207,17 son los pesos moleculares de amifostina tiol y de diclorhidrato de amifostina tiol, respectivamente; C es la concentracio n, en mg por mL, de diclorhidrato de amifostina tiol en la Solucio n esta ndar de tiol; W es el peso, en mg, de Amifostina tomada para preparar la Solucio n de prueba; y rU y rS son las respuestas de los picos de amifostina tiol obtenidos a partir de la
Monograf as Ociales / Amlodipino
4075
de la Solucio n blanco, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de todos los picos excepto los picos correspondientes a la Solucio n blanco. Calcular el porcentaje de amifostina tiol en la porcio n de Amifostina para Inyeccio n tomada, por la fo rmula:
.(134,24/207,17)100(C/W)(r
U
/ r S). 5
en donde 134,24 y 207,17 son los pesos moleculares de amifostina tiol y de diclorhidrato de amifostina tiol, respectivamente; C es la concentracio n, en mg por mL, de diclorhidrato de amifostina tiol en la Solucio n esta ndar de tiol; W es el peso, en mg, de amifostina tomado para preparar la Solucio n de prueba; y rU y rS son las respuestas de los picos de amifostina tiol registrados a 220 nm, obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar de tiol, respectivamente. Calcular el porcentaje de disulfuro de amifostina en la porcio n de Amifostina para Inyeccio n tomada, por la fo rmula:
.(266,47/412,31)(100C/W)(r
U
/ r S). 5
Esta ndares de referencia USP h11iER Besilato de Amlodipino USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Mi. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Rotacio n o ptica h781Ai: entre -0,108 y +0,108, determinada a 208. Solucio n de prueba: 10 mg por mL, en metanol. Agua, Me todo I h921i: no ma s de 0,5%. Residuo de incineracio n h281i: no ma s de 0,2%. Metales pesados, Me todo II h231i: 0,002%. Compuestos relacionados
PRUEBA 1
en donde 266,47 y 412,31 son los pesos moleculares del disulfuro de amifostina y del tetraclorhidrato de disulfuro de amifostina, respectivamente; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Disulfuro de Amifostina USP en la Solucio n esta ndar de disulfuro; y rU y rS son las respuestas de los picos registrados a 247 nm, obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar de disulfuro, respectivamente: no se encuentra ma s de 2,0% de impurezas totales, incluyendo la amifostina tiol y el disulfuro de amifostina. Calcular el porcentaje de cada una de las impurezas restantes en la porcio n de Amifostina para Inyeccio n tomada, por la fo rmula: 100(ri / rA) en donde ri y rA son las respuestas correspondientes a los picos de cada impureza y de amifostina, respectivamente, obtenidos a partir de la Solucio n de prueba: no se encuentra ma s de 0,1% de cualquier impureza individual, excepto amifostina tiol.
&Besilato
de Amlodipino
Adsorbente: una capa de mezcla de gel de s lice para cromatograf a de 0,25 mm de espesor. Solucio n de pruebaTransferir 140 mg de Besilato de Amlodipino a un matraz volume trico de 2 mL, disolver y diluir a volumen con metanol, y mezclar. Solucio n de aptitud del sistemaTransferir aproximadamente 14 mg de ER Besilato de Amlodipino USP a un recipiente adecuado, disolver en 0,2 mL de metanol, y mezclar. Solucio n madre del esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Besilato de Amlodipino USP en metanol para obtener una solucio n que contenga 7,0 mg por mL. Solucio n esta ndar 1Transferir 3,0 mL de la Solucio n madre del esta ndar a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con metanol y mezclar. Solucio n esta ndar 2Transferir 1,0 mL de la Solucio n madre del esta ndar a otro matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con metanol y mezclar. Volumen de aplicacio n: 10 mL. Fase mo vilUsar la capa superior de una mezcla de metil isobutil cetona, agua y a cido ace tico glacial (50 : 25 : 25). ProcedimientoProceder segu n se indica en Cromatograf a en Capa Delgada en Cromatograf a h621i. Secar la placa durante 15 minutos a 808. Examinar la placa bajo luz UV a 254 nm y 365 nm. El cromatrograma de la Solucio n de aptitud del sistema presenta dos manchas menores claramente separadas con valores RF de aproximadamente 0,18 y 0,22. Comparar las intensidades de todas las manchas secundarias observadas en el cromatograma de la Solucio n de prueba con las intensidades de las manchas principales de los cromatogramas de las Soluciones esta ndar. Cualquier mancha obtenida a partir de la Solucio n de prueba, excepto la mancha principal, no es mayor en taman o que la mancha obtenida a partir de la Solucio n esta ndar 1 (0,3%), y como ma ximo, dos manchas son ma s intensas que la mancha obtenida a partir de la Solucio n esta ndar 2 (0,1%).
PRUEBA 2
C20H25ClN2O5 C6H6O3S 567,05 3,5-Pyridinedicarboxylic acid, 2-[(2-aminoethoxy)methyl]-4-(2chlorophenyl)-1,4-dihydro-6-methyl-, 3-ethyl 5-methyl ester, (+)-, monobenzenesulfonate. Monobencensulfonato de 3-etil 5-metil (+)-2-[(2-aminoetoxi)metil]-4-(o-clorofenil)-1,4-dihidro-6-metil-3,5-piridindicarboxilato [111470-99-6].
El Besilato de Amlodipino contiene no menos de 97,0

por ciento y no ma s de 102,0 por ciento de C20H25ClN2O5 C6H6O3S, calculado con respecto a la sustancia anhidra.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Proteger de la luz. Almacenar a temperatura ambiente.
Solucio n amortiguadora de pH 3,0 y Fase mo vilPreparar segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n de aptitud del sistemaDisolver aproximadamente 5 mg de Besilato de Amlodipino en 5 mL de pero xido de hidro geno y calentar a 708 durante 45 minutos. Solucio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Besilato de Amlodipino USP en Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,003 mg por mL. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 50 mg de Besilato de Amlodipino, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Preparar segu n se indica en la Valoracio n. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre la impureza A de amlodipino y amlodipino no es menor de 4,5. [NOTAA efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,2 para bencensulfonato, 0,5 para la impureza A de amlodipino y 1,0 para amlodipino. La impureza A de amlodipino es 3-etil 5-metil 2-[(2-aminoetoxi)metil]-4-(2-clorofenil)-6-metilpiridin-3,5-dicarboxilato.] Inyectar en el cromato grafo la Solucio n
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Atracurio / Monograf as Ociales
esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar para inyecciones repetidas no es ma s de 10,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas por un per odo que sea de aproximadamente tres veces el tiempo de retencio n de amlodipino y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Besilato de Amlodipino tomada, por la fo rmula: 100(1/F)(CS /CT)(ri / rS) en donde F es el factor de respuesta relativa, que es igual a 0,5 para la impureza A de amlodipino y a 1,0 para otras impurezas; CS y CT son las concentraciones, en mg por mL, de besilato de amlodipino en la Solucio n esta ndar y la Solucio n de prueba, respectivamente; ri es la respuesta para cada pico de impureza obtenido a partir de la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico de besilato de amlodipino obtenido a partir de la Solucio n esta ndar: no se encuentra ma s de 0,3% de la impureza A de amlodipino, y no se encuentra ma s de 0,3% de otras impurezas totales. Descartar cualquier pico de menos de 0,03% y descartar cualquier pico debido al bencensulfonato. Valoracio n Solucio n amortiguadora de pH 3,0Disolver 7,0 mL de trietilamina en 800 mL de agua. Ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 3,0 + 0,1 y diluir con agua a 1 L. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora de pH 3,0, metanol y acetonitrilo (50 : 35 : 15). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Besilato de Amlodipino USP en Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,05 mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 50 mg de Besilato de Amlodipino, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Transferir 5,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 237 nm y una columna de 3,9 mm 6 15 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular el porcentaje de C20H25ClN2O5 C6H6O3S en la porcio n de Besilato de Amlodipino tomada, por la fo rmula: 100(CS /CU)(rU / rS) en donde CS y CU son las concentraciones, en mg por mL, de besilato de amlodipino en la Preparacio n esta ndar y la Preparacio n de valoracio n, respectivamente; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Solucio n esta ndarTransferir 1,0 mL de la Preparacio n esta ndar, preparada segu n se indica en la Valoracio n, a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con Solucio n A y mezclar. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Preparar segu n se indica en la Valoracio n. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: las respuestas de los iso meros cis-cis de no menos de dos inyecciones no dieren en ma s de 10%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos, excepto los tres picos isome ricos principales. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Besilato de Atracurio tomada, por la fo rmula:
&
10 000(1/F)(C/W)(ri / rS)&1S
(USP30)
en donde &F es el factor de respuesta relativo del pico de impureza, que es 1,9 para laudanosina y 1,0 para todas las dema s impurezas desconocidas;&1S (USP30) C es la concentracio n, en mg por mL, del iso mero cis-cis en la Solucio n esta ndar; W es el peso, en mg, de Besilato de Atracurio tomado para preparar la Solucio n de prueba; ri es la respuesta del pico de cada impureza obtenido a partir de la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta de pico del iso mero cis-cis obtenido a partir de la Solucio n esta ndar: &no se encuentra ma s de 0,5% de laudanosina, no se encuentra ma s de 1,0% de cualquier otra impureza individual&1S (USP30) y no se encuentra ma s de 3,5% de impurezas totales. &[NOTAA los efectos de la identicacio n, el tiempo de retencio n relativo para laudanosina es aproximadamente 0,3.]&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Valoracio n Solucio n amortiguadoraTransferir aproximadamente 10,2 g de fosfato monoba sico de potasio a un matraz volume trico de 1000 mL y disolver en aproximadamente 950 mL de agua. Mientras se mezcla, ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 3,1, diluir a volumen con agua y mezclar. Solucio n APreparar una mezcla de Solucio n amortiguadora, acetonitrilo y metanol (75 : 20 : 5). Solucio n BPreparar una mezcla de Solucio n amortiguadora, metanol y acetonitrilo (50 : 30 : 20). Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y de Solucio n B segu n se indica en Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver en Solucio n A una cantidad, pesada con exactitud, de ER Besilato de Atracurio USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida que contenga aproximadamente 1,0 mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 100 mg de Besilato de Atracurio, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Solucio n A y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 280 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 desactivado para bases. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo: Tiempo (minutos) 0 05 515 1525 2530 Solucio n A (%) 80 80 80?40 40 40?0 Solucio n B (%) 20 20 20?60 60 60?100 Elucio n equilibrio isocra tica gradiente lineal isocra tica gradiente lineal
Besilato de Atracurio
Cambio en la redaccio n: Pureza cromatogra ca Solucio n amortiguadora, Solucio n A, Solucio n B y Fase mo vil Proceder segu n se indica en la Valoracio n.
Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: &&1S (USP30) la resolucio n, R, entre el iso mero trans-trans y el iso mero cis-trans, y entre el iso mero cis-trans y el iso mero cis-cis, no es menor de 1,1; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. &[NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de
Monograf as Ociales / Azitromicina
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retencio n relativos son aproximadamente 0,8, 0,9 y 1,0 para el iso mero trans-trans, el iso mero cis-trans y el iso mero cis-cis, respectivamente.]&1S (USP30) ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar las respuestas correspondientes a los tres picos isome ricos. Calcular la cantidad, en mg, de C65H82N2O18S2 en la porcio n de Besilato de Atracurio tomada, por la fo rmula: 100C(rU / rs) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Besilato de Atracurio USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rs son las sumas de las respuestas correspondientes a los picos del iso mero transtrans, el iso mero trans-cis y el iso mero cis-cis obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
Azitromicina
Cambio en la redaccio n: EtiquetadoEtiquetar indicando si se trata del monohidrato o del dihidrato. En los casos en los que se indique la cantidad de azitromicina en el etiquetado de cualquier preparacio n que contenga Azitromicina, aquella se debera entender en te rminos de azitromicina & anhidra (C38H72N2O12). Si se usa una prueba diferente de la Prueba 1, el etiquetado declara la prueba de L mite de sustancias relacionadas con la cual cumple el art culo.&1S (USP30)
durante aproximadamente 20 segundos para disolver. Diluir a volumen con Solucio n de dilucio n y mezclar. [NOTAUsar esta solucio n dentro de las 6 horas.] Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector electroqu mico amperome trico con electrodos dobles de carbo n v treo operado en la modalidad de oxidacio n selectiva con el electrodo 1 ajustado a +0,70 + 0,05 V y el electrodo 2 ajustado a +0,85 + 0,05 V, y la corriente de fondo optimizada a 95 + 25 nanoamperios, una guarda columna de 4,6 mm 6 5 cm rellena con material L29 de 5 mm y una columna anal tica de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L29 de 5 mm o rellena con material L49 de 3 mm sin la guarda columna. [NOTAEn general, mantener el electrodo 1 a 0,12 V por debajo del potencial del electrodo 2 y mantener los electrodos a una temperatura constante de aproximadamente 268.] La velocidad de ujo es de aproximadamente 0,4 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo, la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna no es menos de 1500 platos teo ricos para el pico de azitromicina; el factor de asimetr a para cada uno de estos compuestos no es mayor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 5% para cada uno de estos compuestos. [NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,38 para desosaminilazitromicina, 0,54 para N-demetilazitromicina y 1,0 para azitromicina.] ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas, empleando un per odo de elucio n para la Solucio n de prueba que sea 3,3 veces el tiempo de elucio n del pico de azitromicina en el cromatograma de la Solucio n esta ndar, y medir las a reas de todos los picos. Calcular los porcentajes de desosaminilazitromicina y de N-demetilazitromicina en la Azitromicina tomada, por la fo rmula: 0,1(CP/W)(ri /rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, del Esta ndar de Referencia USP adecuado en la Solucio n esta ndar; P es la potencia especicada, en porcentaje, del Esta ndar de Referencia USP correspondiente; W es el peso, en mg, de Azitromicina tomado para preparar la Solucio n de prueba; y ri y rS son las a reas de los picos para el analito correspondiente en los cromatogramas obtenidas a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente. Calcular los porcentajes de otras sustancias relacionadas en la Azitromicina tomada, por la fo rmula: 0,01(CP/W)(ri /rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Azitromicina USP en la Solucio n esta ndar; P es la pureza especicada, en mg por mg, de ER Azitromicina USP; W es el peso, en mg, de la Azitromicina tomada para preparar la Solucio n de prueba; ri es el a rea del pico para un pico de una sustancia relacionada individual en el cromatograma obtenido a partir de la Solucio n de prueba; y rS es el a rea del pico de azitromicina en el cromatograma obtenido a partir de la Solucio n esta ndar. No se encuentra ma s de 0,3% de desosaminilazitromicina, 0,7% de N-demetilazitromicina y 1,0% de cualquier otra sustancia individual relacionada; la suma de todas las sustancias relacionadas no es ma s de 3,0%.
&
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11iER Azaeritromicina A USP. ER Azitromicina USP. &ER Identidad de Azitromicina USP. ER N xido de Azitromicina USP.&1S (USP30) ER N-Demetilazitromicina O USP. ER Desosaminilazitromicina USP. Cambio en la redaccio n: L mite de sustancias relacionadas&[NOTARealizar la Prueba 1 o la Prueba 2, dependiendo del proceso de fabricacio n usado.] PRUEBA 1&1S (USP30)[ NOTAUsar agua que tenga una resistividad de no menos de 18 Mohm cm.] Fase mo vilProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n amortiguadora de fosfato de potasio de pH 7,5 Transferir 2,7 g de fosfato monoba sico de potasio a un matraz volume trico de 1000 mL. Diluir a volumen con agua y mezclar. Ajustar con hidro xido de potasio 10 N a un pH de 7,5 + 0,1. Solucio n de dilucio nPreparar una mezcla de Solucio n amortiguadora de fosfato de potasio de pH 7,5 y acetonitrilo (750 : 250). Solucio n madre del esta ndarDisolver cuantitativamente cantidades, pesadas con exactitud, de ER Desosaminilazitromicina USP, ER N-Demetilazitromicina USP y ER Azitromicina USP con acetonitrilo para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 45; 105 y 160 mg por mL, respectivamente. Solucio n esta ndarTransferir 4,0 mL de la Solucio n madre del esta ndar a un matraz volume trico de 200 mL, diluir a volumen con la Solucio n de dilucio n y mezclar. Esta solucio n contiene concentraciones conocidas de ER Desosaminilazitromicina USP, ER N-Demetilazitromicina USP y ER Azitromicina USP de aproximadamente 0,9; 2,1 y 3,2 mg por mL, respectivamente. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 33 mg de Azitromicina, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, agregar 5 mL de acetonitrilo y someter a ultrasonido
PRUEBA 2
Solucio n amortiguadora de fosfatoDisolver aproximadamente 8,7 g de fosfato diba sico de potasio en 1 L de agua, ajustar con a cido fosfo rico al 20% a un pH de 8,2 y mezclar. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de acetonitrilo y Solucio n amortiguadora de fosfato (6 : 4). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n esta ndar 1Disolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Azitromicina USP en Fase mo vil, y diluir cuantativamente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 35 mg por mL. Solucio n esta ndar 2Preparar una solucio n en Fase mo vil que contenga aproximadamente 7 mg de ER Identidad de Azitromicina USP por mL. Solucio n esta ndar 3Preparar una solucio n en Fase mo vil que xido de Azitromicina contenga aproximadamente 14 mg de ER N-O USP por mL.
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Bismuto / Monograf as Ociales
Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 70,0 mg de Azitromicina, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 10 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Solucio n de aptitud del sistemaPreparar una solucio n en Fase mo vil que contenga aproximadamente 0,07 mg de ER Azaeritromicina A USP y 7 mg de ER Azitromicina USP por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato gafo de l quidos con un detector a 210 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 0,9 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 308. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre azaeritromicina A y azitromicina no es menor de 8,0; y el factor de asimetr a para el pico de azitromicina no es mayor de 2,5. [NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,47 para azaeritromicina A y 1,00 para azitromicina.] ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Solucio n esta ndar 1, de la Solucio n esta ndar 2, de la Solucio n esta ndar 3, de la Solucio n de prueba y de la Fase mo vil, registrar los cromatogramas, identicar los picos en el cromatograma de la Solucio n de prueba en comparacio n con los cromatogramas obtenidos a partir de la Soluco n esta ndar 2 y de la Soluco n esta ndar 3, y medir las a reas de los picos. Descartar cualquier pico debido al frente del disolvente y cualquier pico correspondiente a los obtenidos a partir de la Fase mo vil. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Azitromicina tomada, por la fo rmula:
&Subsalicilato
de Bismuto, Suspensio n
Oral
La Suspensio n Oral de Subsalicilato de Bismuto es
una suspensio n que contiene no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de C7H5BiO4. Puede contener uno o ma s amortiguadores, colorantes, saborizantes, conservantes, estabilizantes, edulcorantes y agentes de suspensio n adecuados.
Identicacio n A: Cumple con los requisitos de las pruebas para Bismuto h191i. B: Cumple con los requisitos de las pruebas para Salicilato h191i, despue s de acidicar con a cido n trico. pH h791i: entre 3,0 y 5,0. L mites microbianos h61iEl recuento total de microorganismos aerobios no excede de 100 ufc por g, el recuento combinado de hongos lamentosos y levaduras no excede de 50 ufc por g y cumple con los requisitos de las pruebas para determinar la ausencia de (CP/W)(1/F)(ri / rS) Escherichia coli. Valoracio n en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Azitromicina Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 500 mg de USP en la Solucio n esta ndar 1; P es la pureza especicada, en mg bismuto meta lico, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de por mg, de ER Azitromicina USP; W es el peso, en mg, de 200 mL, disolver en 12 mL de a cido n trico y diluir a volumen con Azitromicina tomada para preparar la Solucio n de prueba; F es el a cido n trico 0,01 N. Transferir 10,0 mL de esta solucio n a un matraz factor de respuesta relativa (ver la Tabla 1); ri es el a rea del pico de volume trico de 500 mL y diluir a volumen con a cido n trico 1 N para cualquier impureza obtenida a partir de la Solucio n de prueba; y rS es obtener una solucio n con una concentracio n de 50 mg de bismuto por el a rea del pico de azitromicina obtenida a partir de la Solucio n mL. esta ndar 1. Las impurezas cumplen con los l mites que se Preparacio n de valoracio nTransferir una cantidad, medida con especican en la Tabla 1. &1S (USP30) exactitud, de aproximadamente 10 g de Suspension Oral, previamente bien agitada en su envase original para garantizar la homogeneidad, a un matraz volume trico de 200 mL. Agregar aproximadamente 100 mL de a cido n trico 1 N, mezclar y diluir a volumen con a cido n trico 1 N. Mezclar bien sin agitar, transferir 10,0 mL de esta mezcla a un matraz volume trico de 100 mL y diluir a volumen con a cido n trico 1 N. Centrifugar aproximadamente 20 mL a 4500 rpm durante al menos 10 minutos. ProcedimientoTransferir un volumen, medido con exactitud, de la Preparacio n de valoracio n que contenga aproximadamente 0,9 mg de subsalicilato de bismuto y 10 mL de la Preparacio n esta ndar a sendos matraces volume tricos de 50 mL. Agregar 10,0 mL de solucio n de a cido asco rbico al 10% y 25,0 mL de solucio n de yoduro de potasio al 20% a cada matraz volume trico, diluir a volumen con agua y mezclar bien. Determinar concomitantemente las absorbancias de ambas soluciones en celdas de 1,0 cm a una longitud de onda Tabla 1 Tiempo de Retencio n Relativo 0,20 0,26 0,34 0,37 0,47 0,80 1,52 1,60 2,14 Factor de Respuesta Relativa 0,45 1,8 4,1 4,1 0,67 1,9 1,0 1,0 7,0 1,0 L mite (p/p, %) 0,40 0,30 0,15 0,15 0,50 0,25 0,50 0,50 0,50 0,20 2,0
Compuesto N-Oxido de azitromicina 3-(N,N-didemetil)-3-N-formilazitromicina 3-N-demetil-3-N-formiazitromicina (rotamero 1) 3-N-demetil-3-N-formilazitromicina (rotamero 2) 6-Demetilazitromicina (azaeritromicina A) 3-De(dimetilamino)-3-oxoazitromicina 2-Desetil-2-propilazitromicina 3-Deoxiazitromicina (azitromicina B) 3-N-demetil-3-N-[(4-metilfenil)sulfonil]azitromicina Impureza individual desconocida Impurezas totales
Monograf as Ociales / Bisoctrizol
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de 463 nm con un espectrofoto metro adecuado, usando el blanco de reactivos para ajustar el espectrofoto metro. Calcular la cantidad, en mg, de subsalicilato de bismuto (C7H5BiO4) en la porcio n de Suspensio n Oral tomada, por la fo rmula: (362,09/208,98)20(C/V)(AU / AS) en donde 362,09 y 208,98 son los pesos moleculares de subsalicilato de bismuto y de bismuto, respectivamente; C es la concentracio n, en mg por mL, de bismuto en la Preparacio n esta ndar; V es el volumen, en mL, de la Preparacio n de valoracio n tomada; y AU y AS son las absorbancias de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
&Bisoctrizol
C41H50N6O2 658,90 Phenol, 2,2-methylenebis[6-(2H-benzotriazol-2-yl)-4-(1,1,3,3-tetramethylbutyl)]-. 2,2-Metilenbis[6-(2H-benzotriazol-2-il)-4-(1,1,3,3-tetrametilbutil)fenol] [103597-45-1].
&Subsalicilato
de Bismuto, Tabletas
El Bisoctrizol contiene no menos de 96,0 por ciento y
no ma s de 102,0 por ciento de C41H50N6O2, calculado con respecto a la sustancia tal como se encuentra.
Las Tabletas de Subsalicilato de Bismuto contienen no

menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de subsalicilato de bismuto (C7H5BiO4).
EtiquetadoEtiquetar las Tabletas masticables para indicar que deben masticarse antes de tragarlas. Identicacio n A: Cumple con los requisitos de las pruebas para Bismuto h191i. B: Despue s de acidicar con a cido n trico, cumple con los requisitos de la prueba para Salicilato h191i con cloruro fe rrico SR. Desintegracio n h701i: 10 minutos. [NOTAEsta prueba no se aplica a Tabletas etiquetadas como masticables.] Valoracio n Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 500 mg de bismuto, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 200 mL, disolver en 12 mL de a cido n trico y diluir a volumen con a cido n trico 0,01 N. Transferir 10,0 mL de la solucio n as obtenida a un matraz volume trico de 500 mL y diluir a volumen con a cido n trico 1 N para obtener una concentracio n de 50 mg de bismuto por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir una porcio n pesada con exactitud de Tabletas reducidas a polvo no, equivalente aproximadamente a 90 mg de subsalicilato de bismuto, a un matraz volume trico de 200 mL, agregar aproximadamente 150 mL de a cido n trico 1 N, y someter a ultrasonido durante 2 minutos. Diluir a volumen con a cido n trico 1 N. Transferir 20,0 mL de la solucio n as obtenida a un matraz volume trico de 100 mL y diluir a volumen con a cido n trico 1 N. Centrifugar una porcio n a 4500 rpm durante al menos 10 minutos. ProcedimientoTransferir 10,0 mL, medidos con exactitud, de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar a sendos matraces volume tricos de 50,0 mL. Agregar 10,0 mL de solucio n de a cido asco rbico al 10% y 25,0 mL de solucio n de yoduro de potasio al 20% a cada matraz volume trico y diluir a volumen con a cido n trico 1 N. Determinar concomitantemente la absorbancia de las soluciones a la longitud de onda de ma xima absorbancia, aproximadamente a 463 nm, con un espectrofoto metro adecuado utilizando las soluciones de reactivos combinados como blanco. Calcular la cantidad, en mg, de C7H5BiO4 en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: (362,09/208,98)(C)(AU / AS) en donde 362,09 y 208,98 son los pesos moleculares de subsalicilato de bismuto y de bismuto, respectivamente; C es la concentracio n, en mg por mL, de bismuto en la Preparacio n esta ndar; y AU y AS son las absorbancias de las soluciones de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados y almacenar a temperatura ambiente controlada. Esta ndares de referencia USP h11iER Bisoctrizol USP. ER Compuesto Relacionado A de Bisoctrizol USP. ER Mezcla de Resolucio n de Bisoctrizol USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Metales pesados, Me todo II h231i: 0,002%. L mite de compuesto relacionado A de bisoctrizol y del iso mero de bisoctrizol Diluyente, Solucio n A, Solucio n B y Fase mo vilProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n madre del esta ndar ADisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Bisoctrizol USP en tetrahidrofurano para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,65 mg por mL. Solucio n madre del esta ndar BDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Compuesto Relacionado A de Bisoctrizol USP en tetrahidrofurano para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,40 mg por mL. Solucio n esta ndarTransferir cuantitativamente 5 mL de Solucio n madre del esta ndar A y 1,0 mL de Solucio n madre del esta ndar B a un matraz volume trico de 100 mL. Agregar 60 mL de tetrahidrofurano y diluir a volumen con Diluyente. Solucio n de pruebaProceder segu n se indica en la Preparacio n de valoracio n. Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre bisoctrizol y el iso mero de bisoctrizol no es menor de 1,5. [NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,42 para el compuesto relacionado A de bisoctrizol y aproximadamente 1,1 para el iso mero de bisoctrizol.] ProcedimientoInyectar en el cromato grafo un volumen (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de compuesto relacionado A de bisoctrizol tomado, por la fo rmula: 10 000(C /W)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Compuesto Relacionado A de Bisoctrizol USP; W es el peso, en mg, de
4080
Budeso nida / Monograf as Ociales
Bisoctrizol tomado; rU es la respuesta del pico para el compuesto relacionado A de bisoctrizol en la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico para el compuesto relacionado A de bisoctrizol en la Solucio n esta ndar: no se encuentra ma s de 0,5% del compuesto relacionado A de bisoctrizol. Calcular el porcentaje del iso mero de bisoctrizol tomado, por la fo rmula: 10 000(C/W)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Bisoctrizol USP; W es el peso, en mg, de Bisoctrizol tomado; rU es la respuesta del pico para el iso mero de bisoctrizol en la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico de bisoctrizol en la Solucio n esta ndar: no se encuentra ma s de 4,0% del iso mero de bisoctrizol. Compuestos relacionados Diluyente, Solucio n A, Solucio n B, Fase mo vil y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n de pruebaProceder segu n se indica en la Preparacio n de valoracio n. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo un volumen (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma y medir las respuestas de todos los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Bisoctrizol tomada, por la fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es la respuesta del pico para cada impureza individual, y rs es la suma de las respuestas de todos los picos: no se encuentra ma s de 0,1% de cualquier impureza individual, excluidos el compuesto relacionado A de bisoctrizol y el iso mero de bisoctrizol. No se encuentra ma s de 4,0% de impurezas totales, incluidos el compuesto relacionado A de bisoctrizol y el iso mero de bisoctrizol, determinados en la prueba para el L mite de compuesto relacionado A de bisoctrizol y del iso mero de bisoctrizol. Valoracio n DiluyentePreparar una mezcla (60 : 40) que contenga tetrahidrofurano y una solucio n acuosa de la sal de sodio del a cido 1pentansulfo nico al 0,2% (p/v). Solucio n APreparar una solucio n ltrada y desgasicada que contenga 0,4 g de la sal de sodio del a cido 1-pentansulfo nico, 800 mL de metanol, 200 mL de agua y 0,5 mL de a cido fosfo rico. Solucio n BPreparar una solucio n ltrada y desgasicada que contenga 0,4 g de la sal de sodio del a cido 1-pentansulfo nico, 1000 mL de metanol y 0,5 mL de a cido fosfo rico. Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y Solucio n B segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de aptitud del sistemaDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Mezcla de Resolucio n de Bisoctrizol USP en tetrahidrofurano, y diluir cuantitativamente con Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,8 mg por mL de bisoctrizol. Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 80 mg de ER Bisoctrizol USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL. Disolver en 60 mL de tetrahidrofurano, diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 80 mg de Bisoctrizol, pesados con exactitud a un matraz volume trico de 100 mL. Disolver en 60 mL de tetrahidrofurano, diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 346 nm y una columna de 3,0 mm 6 25 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 0,8 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 408. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Tiempo (minutos) 01 111 1127 2728 Solucio n A (%) 70 70?3 3 3?70 Solucio n B (%) 30 30?97 97 97?30 Elucio n isocra tica gradiente lineal isocra tica gradiente lineal
bisoctrizol y 1,1 para el iso mero de bisoctrizol; la resolucio n, R, entre bisoctrizol y el iso mero de bisoctrizol no es menor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de la Preparacio n esta ndar no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de C41H50N6O2 en la porcio n de Bisoctrizol tomada, por la fo rmula: 100C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Bisoctrizol USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
&Budeso nida
C25H34O6 430,53 Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 16,17-butylidenebis(oxy)-11,21-dihydroxy-, [11b,16a(R)], y 16a,17-[(S)-Butylidenebis(oxy)]11b,21-dihydroxypregna-1,4-diene-3,20-dione. (RS)-11b,16a,17,21-Tetrahidroxipregna-1,4-dieno-3,20-diona 16,17acetal c clico con butiraldeh do [51372-29-3; 51372-28-2; 51333-22-3].
La Budeso nida es una mezcla de dos formas epime ricas, ep mero A(C-22S) y ep mero B(C-22R). Contiene no menos de 44,0 por ciento y no ma s de 51,0 por ciento de ep mero A, y la suma de ambos ep meros no es menos de 98,0 por ciento y no es ma s de 102,0 por ciento de C25H34O6, calculado con respecto a la sustancia seca. NOTAProteger todas las soluciones que contengan budeso nida de la luz.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables y resistentes a la luz. Almacenar a temperatura ambiente controlada. Esta ndares de referencia USP h11iER Budeso nida USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki. B: Absorcio n en el Ultravioleta h197Ui Solucio n: 25 mg por mL. Medio: metanol. L mites microbianos h61i El recuento total de microorganismos aerobios no excede de 1000 ufc por g y el recuento total combinado de hongos lamentosos y levaduras no excede de 100 ufc por g. Pe rdida por secado h731iSecar a 1058 hasta peso constante. No pierde ma s de 0,3% de su peso.
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema, y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 1,0 para
Monograf as Ociales / Budeso nida
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L mite de 21-acetato de budeso nida Solucio n amortiguadoraProceder segu n se indica en la Valoracio n. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora y acetonitrilo (55 : 45). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n esta ndarPreparar segu n se indica en la Preparacio n esta ndar en la Valoracio n. Solucio n de pruebaPreparar segu n se indica en la Preparacio n de valoracio n. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 3,1 para el primer ep mero eluido de 21-acetato de budeso nida, aproximadamente 3,2 para el segundo ep mero eluido de 21-acetato de budeso nida, 1,0 para el primer ep mero eluido de budeso nida (ep mero B) y aproximadamente 1,1 para el segundo ep mero eluido de budeso nida (ep mero A); y la eciencia de la columna no es menos de 5500 platos teo ricos, determinada a partir del pico del ep mero B de budeso nida. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo un volumen (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de 21-acetato de budeso nida en la porcio n de Budeso nida tomada, por la fo rmula: 100(ri / rS) en donde ri es la suma de las a reas de los picos de los dos ep meros de 21-acetato de budeso nida; y rS es la suma de las a reas de los dos picos de budeso nida; no se encuentra ma s de 0,10% de 21-acetato de budeso nida. L mite de 11-cetobudeso nida Solucio n amortiguadoraProceder segu n se indica en la Valoracio n. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora, acetonitrilo e isopropanol (65 : 26 : 9). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n esta ndarPreparar segu n se indica en la Preparacio n esta ndar en la Valoracio n. Solucio n de pruebaProceder segu n se indica en la Preparacio n de valoracio n. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 3,5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 508. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,73 y 0,78, respectivamente, para los dos ep meros de 11cetobudeso nida, aproximadamente 0,68 para 21-deshidrobudeso nida, aproximadamente 0,84 para 14,15-deshidrobudeso nida y 1,0 para el primer ep mero eluido de budeso nida (ep mero B); la resolucio n, R, entre el primer ep mero de 11-cetobudeso nida y 21deshidrobudeso nida no es menor de 1,0 y entre el segundo ep mero de 11-cetobudeso nida y 14,15-deshidrobudeso nida no es menor de 1,2; y la eciencia de la columna no es menos de 5500 platos teo ricos, determinada a partir del pico del ep mero B de budeso nida. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo un volumen (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de 11-cetobudeso nida en la porcio n de Budeso nida tomada, por la fo rmula: 100(ri / rU) en donde ri es la suma de las a reas de los dos picos de cetobudeso nida; y rU es la suma de las a reas de los dos picos de budeso nida; no se encuentra ma s de 0,2% de 11-cetobudeso nida. Compuestos relacionados Solucio n amortiguadora y Fase mo vilProceder segu n se indica en la Valoracio n.
Solucio n esta ndarPreparar segu n se indica en la Preparacio n esta ndar en la Valoracio n Solucio n de pruebaProceder segu n se indica en la Preparacio n de valoracio n. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna no es menos de 5500 platos teo ricos, determinada a partir del pico de ep mero B de budeso nida. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo un volumen (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma y medir todas las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Budeso nida tomada, por la fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es el a rea del pico de cada impureza; y rs es la suma de las respuestas de todos los picos: las impurezas cumplen con los requisitos indicados en la Tabla siguiente. Tiempo de Retencio n Relativo 0,11 0,36 0,61; 0,66 0,86 L mite (%) 0,2 0,10 0,07 0,10 0,4 0,10 0,4
Nombre del Compuesto 16a-Hidroxilprednisolona1 D-Homobudeso nida2 21-Deshidrobudeso nida (ep meros)3 14,15-Deshidrobudeso nida4 Impurezas especicadas totales Cualquier otra impureza Total de impurezas sin especicar
1 2
11b,16a,17,21-tetrahidroxipregna-1,4-dieno-3,20-diona 16a,17-[(1RS)-etilidenbis(oxo)]-11b,21-dihidroxipregna-1,4-dieno-3,20diona 3 16a,17-[(1RS)-butilidenbis(oxo)]-11b-hidroxi-3,20-dioxopregna-1,4-dien21-al 4 16a,17-[(1RS)-butilidenbis(oxo)]-11b,21-dihidroxipregna-1,4,14-trieno3,20-diona
Valoracio n Solucio n amortiguadoraDisolver 3,17 g de fosfato monoba sico de sodio en agua, agregar 0,23 g de a cido fosfo rico, diluir con agua hasta 1000 mL y mezclar. El pH es 3,2 + 0,1. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora y acetonitrilo (68 : 32). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver en acetonitrilo una cantidad, pesada con exactitud, de ER Budeso nida USP y diluir cuantitativamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con Solucio n amortiguadora para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,5 mg por mL. La proporcio n de acetonitrilo en la Preparacio n esta ndar no excede de 30%. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 25 mg de Budeso nida, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL, disolver en 15 mL de acetonitrilo, diluir a volumen con Solucio n amortiguadora y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el tiempo de retencio n relativo para el ep mero A es 1,1 con respecto al ep mero B; la resolucio n, R, entre los dos picos de los ep meros de budeso nida es mayor de 1,5; y la eciencia de la columna no es menos de 5500 platos teo ricos, determinada a partir del pico del ep mero B de budeso nida. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y
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Bupropio n / Monograf as Ociales
medir las a reas de los picos principales. Calcular el porcentaje de ep mero A (C25H34O6) en la porcio n de Budeso nida tomada, por la fo rmula: 100[rUA / (rUA + rUB)] en donde rUA y rUB son las a reas de los picos del ep mero A y el ep mero B obtenidas a partir de la Preparacio n de valoracio n, respectivamente. Calcular la cantidad, en mg, de budeso nida (C25H34O6) en la porcio n de Budeso nida tomada, por la fo rmula: 50C[(rUA + rUB) / (rSA + rSB)] en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Budeso nida USP en la Preparacio n esta ndar; rSA y rSB son las a reas de los picos del ep mero A y el ep mero B obtenidas a partir de la Preparacio n esta ndar, respectivamente; y los otros te rminos son los denidos anteriormente.&1S (USP30)
Clorhidrato de Bupropio n, Tabletas de Liberacio n Prolongada
Solucio n esta ndarDisolver en Medio una cantidad, pesada con exactitud, de ER Clorhidrato de Bupropio n USP y diluir cuantitativamente con Medio, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida similar a la esperada en la Solucio n de prueba. Solucio n de pruebaUsar porciones de la solucio n en ana lisis y pasar a trave s de un ltro de nailon de 0,45 mm. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 298 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna no es menos de 2000 platos teo ricos; el factor de asimetr a no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de clorhidrato de bupropio n disuelto en cada tiempo de muestreo. ToleranciasLos porcentajes de la cantidad declarada de C13H18ClNO HCl disuelta en los tiempos especicados se ajustan a la Tabla de Aceptacio n 2. Tiempo (horas) 1 2 4 6 Cantidad disuelta entre 25% y 50% entre 40% y 65% entre 65% y 90% no menos de 80%
Cambio en la redaccio n: Disolucio n h711i

PARA PRODUCTOS QUE DECLARAN ESTAR DESTINADOS A ADMINISTRARSE CADA 12 HORAS&1S (USP30) PRUEBA 1
&
Medio: agua; 900 mL. Aparato 2: 50 rpm. Tiempos: 1; 4 y 8 horas. ProcedimientoDeterminar la cantidad de C13H18ClNO HCl disuelta empleando absorcio n UV a la longitud de onda de ma xima absorbancia, aproximadamente a 298 nm, utilizando una celda de 1,0 cm, en porciones ltradas de la solucio n en ana lisis, diluidas apropiadamente con Medio si fuera necesario, en comparacio n con una Solucio n esta ndar con una concentracio n conocida de ER Clorhidrato de Bupropio n USP en el mismo Medio. ToleranciasLos porcentajes de la cantidad declarada de C13H18ClNO HCl disuelta en los tiempos especicados se ajustan a la Tabla de Aceptacio n 2. Tiempo (horas) 1 4 8 Cantidad disuelta entre 25% y 45% entre 60% y 85% no menos de 80%
PRUEBA 3Si el producto cumple con esta prueba, el etiquetado indica que cumple con la Prueba de Disolucio n 3 de la USP. Medio, Aparato y ProcedimientoProceder segu n se indica en la Prueba 1, excepto que la longitud de onda debe ser aproximadamente a 250 nm. Tiempos: 1; 2; 4 y 6 horas. Tolerancias: los porcentajes de la cantidad declarada de C13H18ClNO HCl disuelta en los tiempos especicados se ajustan a la Tabla de Aceptacio n 2.
Tiempo (horas) 1 2 4 6
Cantidad disuelta entre 30% y 55% entre 50% y 75% entre 70% y 90% no menos de 80%
& PARA PRODUCTOS QUE DECLARAN ESTAR DESTINADOS A ADMINISTRARSE CADA 24 HORAS PRUEBA 4Si el producto cumple con esta prueba, el etiquetado
PRUEBA 2Si el producto cumple con esta prueba, el etiquetado indica que cumple con la Prueba de Disolucio n 2 de la USP. Medio: a cido clorh drico 0,1 N, pH 1,5; &(preparado transriendo aproximadamente 50 mL de a cido clorh drico concentrado a 6000 mL de agua, agregando aproximadamente 18 g de hidro xido de sodio, mezclando y ajustando con hidro xido de sodio diluido o con a cido clorh drico a un pH de 1,5 + 0,05);&1S (USP30) 900 mL, &desgasicado.&1S (USP30) Aparato 1: 50 rpm. Tiempos: 1; 2; 4 y 6 horas. Determinar los porcentajes de la cantidad declarada de C13H18ClNO HCl disuelta empleando el siguiente me todo. Solucio n amortiguadoraDisolver 3,45 g de fosfato monoba sico de sodio monohidrato en 996 mL de agua, agregar 4,0 mL de trietilamina y mezclar. Ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 2,80 + 0,05. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora y metanol (65 : 35). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i).
indica que cumple con la Prueba de Disolucio n 4 de la USP. Medio: a cido clorh drico 0,1 N; 900 mL, desgasicado. Aparato 1: 75 rpm. Tiempo: 2; 4; 8 y 16 hours. ProcedimientoDeterminar la cantidad de C13H18ClNO HCl disuelta empleando absorcio n UV a la longitud de onda de ma xima absorbancia, aproximadamente a 252 nm, utilizando una celda de 1,0 cm, en porciones ltradas de la solucio n en ana lisis, diluidas apropriadamente con Medio, si fuera necesario, en comparacio n con una Solucio n esta ndar con una concentracio n conocida de ER Clorhidrato de Bupropio n USP en el mismo Medio. ToleranciasLos porcentajes de la cantidad declarada de C13H18ClNO HCl disuelta en los tiempos especicados se ajustan a la Tabla de Aceptacio n 2. Tiempo (horas) 2 4 8 16 Cantidad disuelta no ma s de 20% entre 20% y 45% entre 65% y 85% no menos de 80%
&1S
(USP30)
Monograf as Ociales / Calcio
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Carbonato de Calcio, Magnesia y Simeticona, Tabletas

(T tulo vigenteno cambiara hasta el 18 de febrero de 2010) Cambio de t tulo de la monograf asera ocial a partir del 18 de febrero de 2010 Ver Carbonato de Calcio, Magnesia y Simeticona, Tabletas Masticables
de Calcio, Magnesia y Simeticona, Tabletas Masticables

(La Monograf a con este nuevo t tulosera ocial a partir del 18 de febrero de 2010) (El t tulo actual de la monograf a es Carbonato de Calcio, Magnesia y Simeticona, Tabletas)
&Carbonato
Las Tabletas Masticables de Carbonato de Calcio,
Magnesia y Simeticona contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de las cantidades declaradas de carbonato de calcio (CaCO3) e hidro xido de magnesio [Mg(OH)2], y una cantidad de polidimetilsiloxano [(CH3)2SiO]n que es no menos de 85,0 por ciento y no ma s de 115,0 por ciento de la cantidad declarada de simeticona.
Procedimiento[NOTAPara cada prueba, usar un recipiente cil ndrico de vidrio de 250 mL, limpio y sin usar.] Transferir una cantidad de Tabletas Masticables reducidas a polvo no, que haya pasado completamente a trave s de un tamiz de malla 80, equivalente a 20 mg de simeticona, a un recipiente cil ndrico de vidrio de 250 mL limpio, con una tapa de 50 mm, que contenga 100 mL de Solucio n espumante previamente calentada a 378. Proceder segu n se indica en Procedimiento en la prueba para Actividad antiespumante en Simeticona, comenzando donde dice Tapar el recipiente. El tiempo de actividad antiespumante no excede de 45 segundos. Contenido de sodio (si as lo indica la etiqueta) Solucio n de cloruro de lantanoPreparar segu n se indica en la Valoracio n de carbonato de calcio e hidro xido de magnesio. cido clorh A drico diluidoPreparar segu n se indica en la Valoracio n de polidimetilsiloxano. Solucio n esta ndarTransferir 2,542 g de cloruro de sodio, previamente secados a 1058 durante 2 horas, a un matraz volume trico de 1000 mL, disolver y diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir 5,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir 4,0 mL de esta solucio n a un segundo matraz volume trico de 100 mL que cido clorh contenga 6,0 mL de A drico diluido y 2,0 mL de Solucio n de cloruro de lantano, diluir a volumen con agua y mezclar. Esta solucio n contiene 2,0 mg de sodio (Na) por mL. Solucio n de pruebaTransferir 3,0 mL de la capa acuosa reservada durante la elaboracio n de la Preparacio n de valoracio n en la Valoracio n de polidimetilsiloxano a un matraz volume trico de 50 mL que contenga 1,0 mL de Solucio n de cloruro de lantano, diluir a volumen con agua y mezclar. cido clorh Solucio n blancoTransferir 15,0 mL de A drico diluido y 5,0 mL de Solucio n de cloruro de lantano a un matraz volume trico de 250 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. ProcedimientoDeterminar concomitantemente las absorbancias de la Solucio n esta ndar y la Solucio n de prueba en l nea de emisio n del sodio a 589,0 nm, con un espectrofoto metro de absorcio n ato mica adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i) equipado con una la mpara de sodio de ca todo hueco y una llama de aireacetileno, utilizando la Solucio n blanco como blanco. Calcular los mg de sodio (Na) en cada Tableta Masticable tomada, por la fo rmula: (5C/6)(A/W)(AU / AS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de sodio en la Solucio n esta ndar; A es el peso promedio, en mg, de cada Tableta Masticable; W es el peso, en mg, de la porcio n de Tabletas Masticables de la Preparacio n de valoracio n en la Valoracio n de polidimetilsiloxano usada para preparar la Solucio n de prueba; y AU y AS son las absorbancias de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente. Cada Tableta Masticable contiene un nu mero de mg de sodio no mayor del declarado en la etiqueta. Valoracio n de polidimetilsiloxano Solucio n de sacarinaPreparar una solucio n de sacarina en 4metil-2-pentanona que contenga 12,5 mg por mL. cido clorh A drico diluidoMezclar 200 mL de a cido clorh drico con suciente agua para obtener 1000 mL. Preparacio n esta ndarDisolver una cantidad adecuada de ER Polidimetilsiloxano USP en 4-metil-2-pentanona para obtener una solucio n madre con una concentracio n conocida de aproximadamente 1 mg por mL. En el d a de uso, transferir 20,0 mL de esta solucio n y 5,0 mL de Solucio n de sacarina a un matraz volume trico de 250 mL, diluir a volumen con 4-metil-2-pentanona y mezclar. Esta solucio n contiene aproximadamente 0,08 mg de ER Polidimetilsiloxano USP por mL. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas Masticables. Transferir una porcio n del polvo pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 20 mg de polidimetilsiloxano, a un separador de 125 mL. Agregar cuidadocido clorh samente 50,0 mL de A drico diluido y agitar por rotacio n suave hasta que la reaccio n disminuya. Tapar y mezclar. Liberar cuidadosamente la presio n, agregar 50,0 mL de 4-metil-2-pentanona y mezclar durante 10 minutos. Dejar que las capas se separen y verter la capa acuosa en un recipiente con tapo n adecuado. [NOTA Reservar esta capa acuosa para usarla en la Preparacio n de valoracio n en la Valoracio n de carbonato de calcio e hidro xido de magnesio y para preparar la Solucio n de prueba en la prueba de
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. EtiquetadoEtiquetar las Tabletas Masticables indicando que se deben masticar antes de tragar. Etiquetar las Tabletas Masticables declarando el contenido de sodio, en mg por Tableta Masticable, si es ma s de 5 mg por Tableta Masticable. Esta ndares de referencia USP h11iER Polidimetilsiloxano USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Si Solucio nUtilizando Tabletas Masticables, proceder para obtener los espectros de absorcio n IR segu n se indica en Valoracio n de polidimetilsiloxano en Alu mina, Magnesia y Simeticona, Tabletas Masticables. B: La adicio n de a cido clorh drico 1 N a una Tableta Masticable produce efervescencia y la solucio n resultante, despue s de haber sido ltrada, cumple con los requisitos a las pruebas para Calcio h191i. C: Calentar 2 Tabletas Masticables en 20 mL de a cido sulfu rico 1 N. Enfriar, agregar 20 mL de alcohol, mezclar y dejar en reposo durante 30 minutos. Filtrar esta solucio n y agregar 2 mL de a cido clorh drico 1 N al ltrado: esta solucio n cumple con los requisitos a las pruebas para Magnesio h191i. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos de Variacio n de Peso con respecto al carbonato de calcio y al hidro xido de magnesio. Capacidad neutralizante de a cido h301iLa dosis m nima individual recomendada en el etiquetado no consume menos de 5 mEq de a cido. Actividad antiespumante Solucio n espumanteDisolver 500 mg de Azul FD&C No. 1 y 1 g de octoxinol 9 en 100 mL de a cido clorh drico 0,1 N.
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Cefadroxilo / Monograf as Ociales
Contenido de sodio.] Pasar la capa orga nica a trave s de un ltro que contenga 50 g de sulfato de sodio anhidro. Transferir 10,0 mL del ltrado a un matraz volume trico de 50 mL, agregar 1,0 mL de Solucio n de sacarina, diluir a volumen con metil isobutil cetona y mezclar. Solucio n blancoTransferir 1,0 mL de la Solucio n de sacarina a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con 4-metil-2pentanona y mezclar. ProcedimientoDeterminar concomitantemente las absorbancias de la Preparacio n esta ndar y la Preparacio n de valoracio n en la l nea de emisio n del silicio a 251,6 nm, con un espectrofoto metro de absorcio n ato mica adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de la Luz h851i) equipado con una la mpara de silicio de ca todo hueco y una llama de o xido nitrosoacetileno, utilizando la Solucio n blanco como blanco. Calcular la cantidad, en mg, de polidimetilsiloxano en cada Tableta Masticable tomada, por la fo rmula: 250C(A/W)(AU / AS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Polidimetilsiloxano USP en la Preparacio n esta ndar; A es el peso promedio, en mg, de cada Tableta Masticable; W es el peso, en mg, de la porcio n de Tabletas Masticables tomada para preparar la Preparacio n de valoracio n; y AU y AS son las absorbancias de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. Valoracio n de carbonato de calcio e hidro xido de magnesio Solucio n de cloruro de lantanoTransferir 26,8 g de cloruro de lantano a un matraz volume trico de 200 mL, agregar 100 mL de agua y agregar cuidadosamente 50 mL de a cido clorh drico. Mezclar y dejar que se enfr e. Diluir a volumen con agua y mezclar. cido clorh A drico diluidoPreparar segu n se indica en la Valoracio n de polidimetilsiloxano. Solucio n madre del esta ndar de calcioTransferir 499,5 mg de esta ndar primario de carbonato de calcio a un matraz volume trico de 200 mL y agregar 10 mL de agua. Agregar cuidadosamente 5 mL de cido clorh A drico diluido y agitar por rotacio n suave para disolver el carbonato de calcio. Diluir a volumen con agua y mezclar. Esta solucio n contiene 1000 mg de calcio (Ca) por mL. Solucio n madre del esta ndar de magnesioTransferir 1,000 g de magnesio meta lico a un matraz volume trico de 1000 mL que contenga 10 mL de agua, agregar lentamente 10 mL de a cido clorh drico y agitar por rotacio n suave para disolver el metal. Diluir a volumen con agua y mezclar. Esta solucio n contiene 1000 mg de magnesio (Mg) por mL. Preparacio n esta ndar de calcio y magnesioA un matraz volume trico de 250 mL, agregar 10,0 mL de Solucio n madre del esta ndar de calcio y 5,0 mL de Solucio n madre del esta ndar de magnesio, diluir a volumen con agua y mezclar. Esta solucio n contiene 40 mg de calcio (Ca) y 20 mg de magnesio (Mg) por mL. En el d a de uso, transferir 4,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 100 mL que contenga 2,0 mL de Solucio n de cloruro de lantano, diluir a volumen con agua y mezclar. Esta solucio n contiene 1,6 mg de calcio (Ca) y 0,8 mg de magnesio (Mg) por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir un volumen medido con exactitud de la capa acuosa reservada durante la elaboracio n de la Preparacio n de valoracio n en la Valoracio n de polidimetilsiloxano, que equivalga aproximadamente a 28 mg de carbonato de calcio, a un matraz volume trico de 200 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir 3,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 100 mL que contenga 2,0 mL de Solucio n de cloruro de lantano, diluir a volumen con agua y mezclar. Solucio n blancoTransferir 5,0 mL de la Solucio n de cloruro de lantano a un matraz volume trico de 250 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Procedimiento para carbonato de calcioDeterminar concomitantemente las absorbancias de la Preparacio n esta ndar y la Preparacio n de valoracio n en la l nea de emisio n del calcio a 422,7 nm con un espectrofoto metro de absorcio n ato mica adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i) equipado con una la mpara de calcio de ca todo hueco y una llama de
o xido nitrosoacetileno, utilizando la Solucio n blanco como blanco. Calcular la cantidad, en mg, de carbonato de calcio (CaCO3) en cada Tableta Masticable tomada, por la fo rmula: (100,09/40,08)(1000C/3V)(A/W)(AU / AS) en donde 100,09 es el peso molecular del carbonato de calcio, 40,08 es el peso ato mico del calcio; C es la concentracio n, en mg por mL, de calcio en la Preparacio n esta ndar; V es el volumen, en mL, de la capa acuosa reservada durante la elaboracio n de la Preparacio n de valoracio n en la Valoracio n de polidimetilsiloxano usado para elaborar la Preparacio n de valoracio n; A es el peso promedio, en mg, de cada Tableta Masticable; W es el peso, en mg, de la porcio n de Tabletas Masticables tomada para elaborar la Preparacio n de valoracio n en la Valoracio n de polidimetilsiloxano; y AU y AS son las absorbancias de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. Procedimiento para hidro xido de magnesioDeterminar concomitantemente las absorbancias de la Preparacio n esta ndar y la Preparacio n de valoracio n en la l nea de emisio n del magnesio a 285,2 nm, con un espectrofoto metro de absorcio n ato mica adecuado (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i) equipado con una la mpara de magnesio de ca todo hueco y una llama de o xido nitrosoacetileno, utilizando la Solucio n blanco como blanco. Calcular la cantidad, en mg, de hidro xido de magnesio [Mg(OH)2] en cada Tableta Masticable tomada, por la fo rmula: (58,34/24,305)(1000C/3V)(A/W)(AU / AS) en donde 58,34 es el peso molecular de hidro xido de magnesio, 24,305 es el peso ato mico de magnesio; C es la concentracio n, en mg por mL, de magnesio en la Preparacio n esta ndar; V es el volumen, en mL, de la capa acuosa reservada durante la elaboracio n de la Preparacio n de valoracio n en la Valoracio n de polidimetilsiloxano usada para elaborar la Preparacio n de valoracio n; A es el peso promedio, en mg, de cada Tableta Masticable tomada; W es el peso, en mg, de la porcio n de Tabletas Masticables tomada para elaborar la Preparacio n de valoracio n en la Valoracio n de polidimetilsiloxano; y AU y AS son las absorbancias de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. (Ocial a partir del 18 de febrero de 2010)&1S (USP30)
Cefadroxilo para Suspensio n Oral
Agregar lo siguiente: Disolucio n h711i Medio: agua; 900 mL. Aparato 2: 25 rpm. Tiempo: 30 minutos. ProcedimientoPesar con exactitud 5,0 mL de la Suspensio n Oral reconstituida y transferir al vaso de disolucio n. Determinar la cantidad de cefadroxilo disuelta empleando absorcio n UV a la longitud de onda de ma xima absorbancia, aproximadamente a 263 nm, en porciones ltradas de la solucio n en ana lisis, diluidas apropiadamente con Medio, si fuera necesario, en comparacio n con una Solucio n esta ndar con una concentracio n conocida de ER Cefadroxilo USP en el mismo Medio. Calcular la cantidad de cefadroxilo disuelta por la fo rmula:
&
en donde AU y AS son las absorbancias obtenidas a partir de la solucio n en ana lisis y la Solucio n esta ndar, respectivamente; CS es la concentracio n, en mg por mL, de la Solucio n esta ndar; 900 es el volumen, en mL, de Medio; 100 es el factor de conversio n a porcentaje; W es el peso, en mg, de los 5 mL de la Suspensio n Oral
Monograf as Ociales / Cefepima
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reconstituida tomada; D es el factor de dilucio n de la solucio n en ana lisis; y LC es la cantidad declarada, en mg por 5 mL. ToleranciasNo menos de 75% (Q) de la cantidad declarada de cefadroxilo se disuelve en 30 minutos.&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: Compuestos relacionados Solucio n de fosfato de potasioDisolver 0,68 g de fosfato monoba sico de potasio en 1000 mL de agua. Solucio n APreparar una mezcla de Solucio n de fosfato de potasio y acetonitrilo (9 : 1). &Ajustar con hidro xido de potasio oa cido fosfo rico a un pH de 5,0, ltrar y desgasicar.&1S (USP30) Solucio n BPreparar una mezcla de Solucio n de fosfato de potasio y acetonitrilo (1 : 1). &Ajustar con hidro xido de potasio oa cido fosfo rico a un pH de 5,0, ltrar y desgasicar.&1S (USP30) Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y de Solucio n B segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de aptitud del sistemaPreparar una solucio n de ER Aptitud del Sistema de Clorhidrato de Cefepima USP en Solucio n A que contenga aproximadamente 1,4 mg por mL. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 70 mg de Clorhidrato de Cefepima, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL, disolver y diluir a volumen con Solucio n A, someter a ultrasonido y mezclar. [NOTAInyectar esta solucio n inmediatamente o almacenarla en un refrigerador e inyectarla dentro de las 12 horas.] Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Tiempo (minutos) 010 1030 3035 3536 Solucio n A (%) 100 100?50 50 50?100 Solucio n B (%) 0 0?50 50 50?0 Elucio n isocra tica gradiente lineal isocra tica gradiente lineal
Clorhidrato de Cefepima
Cambio en la redaccio n: L mite de N-metilpirrolidina Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de a cido n trico 0,01 N y acetonitrilo (100 : 1). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). & Solucio n de enjuague de la columnaTransferir 5,0 mL de a cido n trico a un matraz volume trico de 1 L. Diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir esta solucio n a un matraz apropiado, agregar 1 L de acetonitrilo y mezclar. &1S (USP30) Solucio n esta ndarTransferir aproximadamente 0,16 mL de Nmetilpirrolidina, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con agua, y mezclar. Transferir 4,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con a cido n trico 0,01 N y mezclar. Esta solucio n contiene aproximadamente 0,05 mg de N-metilpirrolidina por mL. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 100 mg de Clorhidrato de Cefepima, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 10 mL, disolver y diluir a volumen con a cido n trico 0,01 N, y mezclar. &[NOTASe puede guardar esta solucio n hasta 6 horas si se mantiene a 58; de lo contrario, usar esta solucio n dentro de los 30 minutos.]&1S (USP30) Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)&Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector de conductividad y una columna de 4,6 mm 6 5 cm rellena con material L52 de 5 mm. Se recomienda colocar una guarda columna de 4,4 mm 6 5 cm rellena con material L17 entre la bomba y el inyector. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. La conductancia de fondo t pica es de aproximadamente 3500 mS.&1S (USP30) Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el tiempo de retencio n de la Nmetilpirrolidina no es menos de 8 minutos y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 5,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 100 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos para N-metilpirrolidina. Calcular el porcentaje de N-metilpirrolidina en la porcio n de Clorhidrato de Cefepima tomada, por la fo rmula: 1000(C/W)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de N-metilpirrolidina en la Solucio n esta ndar; W es la cantidad, en mg, de Clorhidrato de Cefepima tomada para preparar la Solucio n de prueba; y rU y rS son las respuestas de los picos de N-metilpirrolidina obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente: no se encuentra ma s de 0,3%. &[NOTALa Cefepima de la Solucio n de prueba eluye como un pico ancho aproximadamente a los 55 minutos. Para minimizar el tiempo de equilibracio n al comienzo del d a siguiente, se recomienda encender el detector la noche anterior y bombear la Fase mo vil a trave s del sistema durante la noche a una velocidad de ujo de 0,2 mL por minuto. Se recomienda tambie n, despue s de cada inyeccio n de Solucio n de prueba, lavar el cromato grafo con Solucio n de enjuague de la columna durante 30 minutos, a una velocidad de ujo de 1 mL por minuto, para eliminar la cefepima de la columna; y luego cambiar el sistema a Fase mo vil a una velocidad de ujo de 1 mL por minuto para la reequilibracio n.]&1S (USP30)
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: & n, R, entre cefepima y el compuesto &1S (USP30) la resolucio relacionado A de cefepima no es menor de 5, y entre el compuesto relacionado A de cefepima y el compuesto relacionado B de cefepima no es menor de 10. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de prueba y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de capacidad, k, es mayor de 0,6; la eciencia de la columna no es menos de 4000 platos teo ricos; y el factor de asimetr a no es mayor de &1,5. [NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 1,0 para cefepima, 2,7 para el compuesto relacionado A de cefepima y aproximadamente 4,3 para el compuesto relacionado B de cefepima.]&1S (USP30) ProcedimientoInyectar en el cromato grafo un volumen (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Clorhidrato de Cefepima tomada, por la fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es la respuesta del pico de cada impureza; y rs es la suma de las respuestas de todos los picos: no se encuentra ma s de 0,3% de compuesto relacionado A de cefepima; no se encuentra ma s de 0,2% de compuesto relacionado B de cefepima; y no se encuentra ma s de 0,1% de cualquier otra impureza.
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Cimetidina / Monograf as Ociales
Cimetidina
ProcedimientoProceder segu n se indica en el Procedimiento en la Valoracio n. Calcular el porcentaje de cada pico de impureza en el cromatograma obtenido a partir de la Preparacio n de valoracio n tomada, por la fo rmula: 100 ri / rs en donde ri es la respuesta para cada pico de impureza; y rs es la suma de las respuestas de todos los picos: no se encuentra ma s de 0,2% de ana logo etilendiam nico de ciprooxacino o de cualquier otro pico de impureza individual y la suma de todos los picos de impurezas no es ma s de 0,5%. Cambio en la redaccio n: Valoracio n Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de a cido fosfo rico 0,025 M, previamente ajustada con trietilamina, a un pH de 3,0 + 0,1, y acetonitrilo (87 : 13). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 12,5 mg de ER Ciprooxacino USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 25 mL. Agregar 0,1 mL de a cido fosfo rico al 7%, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Solucio n de resolucio n&Preparar una solucio n de 0,025 mg por mL de ER Ana logo Etilendiam nico de Ciprooxacino USP en Fase mo vil. Transferir 1,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 10 mL, diluir a volumen con Preparacio n esta ndar y mezclar.&1S (USP30) Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 25 mg de Ciprooxacino, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL. Agregar 0,2 mL de a cido fosfo rico al 7%, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 278 nm y una columna de &4,6 mm 6 25 cm&1S (USP30) rellena con material L1 y mantener la columna a una temperatura de 308 + 18. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: &&1S (USP30) la resolucio n, R, entre el pico de ana logo etilendiam nico de ciprooxacino y el pico de ciprooxacino no es menor de 6. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna determinada a partir del pico de ciprooxacino no es menos de 2500 platos teo ricos; el factor de asimetr a para el pico de ciprooxacino no es mayor de & 2,5;&1S (USP30) y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 1,5%.&[NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,7 para el ana logo etilendiam nico de ciprooxacino y 1,0 para ciprooxacino.]&1S (USP30) ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las a reas correspondientes a los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de C17H18FN3O3 en la porcio n de Ciprooxacino tomada, por la fo rmula: 50C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Ciprooxacino USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos de ciprooxacino obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
Cambio en la redaccio n: Identicacio n n en el Infrarrojo h197Ki.&1S (USP30) A: &Absorcio B: El espectro de absorcio n UV de una solucio n (1 en 80 000) en a cido sulfu rico 0,1 N presenta un ma ximo y un m nimo a la misma longitud de onda que el de una solucio n similar de ER Cimetidina USP, medida concomitantemente. Cambio en la redaccio n: Pureza cromotogra ca Fase mo vilMezclar 240 mL de metanol, 0,3 mL de a cido fosfo rico (85%), 940 mg de 1-hexanosulfonato de sodio y suciente agua para obtener 1 L. Filtrar antes de usar. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n esta ndarPreparar una solucio n de ER Cimetidina USP en Fase mo vil con una concentracio n de 0,80 mg por mL. Solucio n de pruebaTransferir 100,0 mg de Cimetidina, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 250 mL, disolver en aproximadamente 50 mL de Fase mo vil y diluir a volumen con Fase mo vil. Mezclar, someter a ultrasonido durante 15 minutos y volver a mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de capacidad, k, no es menor de 3,0; el nu mero de platos teo ricos, n, no es menos de 2000; y la desviacio n esta ndar relativa de la respuesta para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. &Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Cimetidina tomada, por la fo rmula: 100(0,001CS)/CU)(rU / rS) n, en mg por mL, de cimetidina en la en donde CS es la concentracio Solucio n esta ndar, el multiplicador de 0,001 es para la conversio n de mg por mL a mg por mL; CU es la concentracio n, en mg por mL, de Cimetidina en la Solucio n de prueba; rU es la repuesta del pico para cada impureza obtenido a partir de la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico de cimetidina obtenido a partir de la Solucio n esta ndar: no se encuentra ma s de 0,2% de cualquier impureza individual y no se encuentra ma s de 1,0% de impurezas totales.&1S (USP30)
Ciprooxacino
Cambio en la redaccio n: Pureza cromatogra ca n de resolucio n, Preparacio n de Fase mo vil, &&1S (USP30) Solucio valoracio n y Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en la Valoracio n.
Monograf as Ociales / Ciprooxacino
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Ciprooxacino, Inyeccio n
Cambio en la redaccio n: L mite de ana logo etilendiam nico de ciprooxacino Fase mo vil, &Solucio n de resolucio n, Preparacio n de valoracio n&1S (USP30) y Sistema cromatogra co&Preparar&1S (USP30) segu n se indica en la Valoracio n.
&
mente; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Ciprooxacino USP en la Preparacio n esta ndar, calculada con respecto a la sustancia anhidra; V es el volumen, en mL, de Inyeccio n tomado para preparar la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las respuestas correspondientes a los picos de ciprooxacino obtenidos de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
ProcedimientoProceder segu n se indica en el Procedimiento en la Valoracio n. &&1S (USP30) Calcular el porcentaje de ana logo etilendiam nico de ciprooxacino a partir del cromatograma obtenido de la Preparacio n de valoracio n &&1S (USP30) por la fo rmula: 100[0,7rA / (0,7rA + rC)] en donde 0,7 es el factor de correccio n del ana logo etilendiam nico de ciprooxacino; y rA y rC son las respuestas de los picos de ana logo etilendiam nico de ciprooxacino y de ciprooxacino, respectivamente. No contiene ma s de 0,5% de ana logo etilendiam nico de ciprooxacino. Cambio en la redaccio n: Valoracio n & Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de a cido fosfo rico 0,025 M, previamente ajustada con trietilamina a un pH de 3,0 + 0,1, y acetonitrilo (87 : 13). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i).&1S (USP30) Preparacio n esta ndarDisolver cuantitativamente en Fase Mo vil una cantidad, pesada con exactitud, de ER Clorhidrato de Ciprooxacino USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente &0,5 mg&1S (USP30) por mL. Solucio n de resolucio n&Preparar una solucio n de 0,025 mg por mL de ER Ana logo Etilendiam nico de Ciprooxacino USP en Fase mo vil. Transferir 1,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 10 mL, diluir a volumen con Preparacio n esta ndar y mezclar.&1S (USP30) Preparacio n de valoracio nTransferir a un matraz volume trico de &50 mL&1S (USP30) un volumen de Inyeccio n, medido con exactitud, que equivalga aproximadamente a 25 mg de ciprooxacino, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. & Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 278 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 y mantenerla a una temperatura de 30 + 18. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el pico de ana logo etilendiam nico de ciprooxacino y el pico de ciprooxacino no es menor de 6. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna determinada a partir del pico de ciprooxacino no es menos de 2500 platos teo ricos; el factor de asimetr a para el pico de ciprooxacino no es mayor de 2,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 1,5%. [NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,7 para el ana logo etilendiam nico de ciprooxacino y 1,0 para ciprooxacino.]&1S (USP30) ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de ciprooxacino en cada mL de la Inyeccio n tomada, por la fo rmula:
&
&1S
(USP30)
Clorhidrato de Ciprooxacino
Cambio en la redaccio n: Pureza cromatogra ca n de resolucio n, Preparacio n de Fase mo vil, &&1S (USP30) Solucio valoracio n y Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en la Valoracio n. ProcedimientoProceder como se indica en el Procedimiento de la Valoracio n. Calcular el porcentaje de cada pico de impureza en el cromatograma obtenido a partir de la Preparacio n de valoracio n tomada, por la fo rmula: 100(ri / rt) en donde ri es la respuesta para cada pico de impureza; y rt es la suma de las respuestas de todos los picos: no se encuentra ma s de 0,2% de ana logo etilendiam nico de ciprooxacino o de cualquier otra impureza individual; y la suma de todos los picos de impurezas no es ma s de 0,5%. Cambio en la redaccio n: Valoracio n Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de a cido fosfo rico 0,025 M, previamente ajustada (con trietilamina) a un pH de 3,0 + 0,1, y acetonitrilo (87 : 13). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver cuantitativamente en Fase Mo vil una cantidad, pesada con exactitud, de ER Clorhidrato de Ciprooxacino USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,5 mg por mL. Solucio n de resolucio n&Preparar una solucio n de 0,025 mg por mL de ER Ana logo Etilendiam nico de Ciprooxacino USP en Fase mo vil. Transferir 1,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 10 mL, diluir a volumen con Preparacio n esta ndar y mezclar.&1S (USP30) Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 25 mg de Clorhidrato de Ciprooxacino, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 278 nm y una columna de &4,6 mm 6 25 cm&1S (USP30) rellena con material L1 y mantener la columna a una temperatura de 30 + 18. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: &&1S (USP30) la resolucio n, R, entre el pico del ana logo etilendiam nico de ciprooxacino y el pico del ciprooxacino no es menor de 6. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna determinada a partir del pico de ciprooxacino no es menos de 2500 platos teo ricos; el factor de asimetr a para el pico de Ciprooxacino no es mayor de & 2,5;&1S (USP30) y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 1,5%. &[NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,7 para el ana logo etilendiam nico de ciprooxacino y 1,0 para ciprooxacino.]&1S (USP30) ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y
(331,34/367,81)(50C/V)(rU / rS)&1S
(USP30)
en donde 331,34 y 367,81 son los pesos moleculares de ciprooxacino y clorhidrato de ciprooxacino anhidro, respectiva-
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Ciprooxacino / Monograf as Ociales
medir las a reas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de C17H18FN3O3 HCl en la porcio n de Clorhidrato de Ciprooxacino tomada, por la fo rmula: 50C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Ciprooxacino USP en la Preparacio n esta ndar, calculada con respecto a la sustancia anhidra; y rU y rS son las respuestas de los picos de ciprooxacino obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
y Dexametasona, tica Suspensio n O

tica de Ciprooxacino y Dexameta La Suspensio n O sona es una suspensio n acuosa este ril que contiene clorhidrato de ciprooxacino y dexametasona. Contiene no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de ciprooxacino (C17H18FN3O3), y no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de dexametasona (C22H29FO5).
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Proteger de la luz. Evitar su congelacio n. Esta ndares de referencia USP h11iER Ana logo de Ciprooxacino Etilendiamina USP. ER Ciprooxacino Formamida USP. ER Clorhidrato de Ciprooxacino USP. ER Dexametasona USP. ER Acetato de Dexametasona USP. Identicacio n A: El cromatograma de la Preparacio n de valoracio n, obtenido segu n se indica en la Valoracio n de ciprooxacino, presenta un pico principal de ciprooxacino cuyo tiempo de retencio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar obtenido segu n se indica en la Valoracio n de ciprooxacino. B: El cromatograma de la Preparacio n de valoracio n, obtenido segu n se indica en la Valoracio n de dexametasona, presenta un pico principal de dexametasona cuyo tiempo de retencio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar obtenido segu n se indica en la Valoracio n de dexametasona. Esterilidad h71iCumple con los requisitos cuando se analiza segu n se indica en Filtracio n por Membrana en Prueba de Esterilidad del Producto a Examinar. pH h791i: entre 3,8 y 4,8. Taman o de part cula L quido transportadorCalentar Agua Puricada a una temperatura de 408 a 508, agregar 100 mg de dexametasona por L mientras se mezcla, enfriar a temperatura ambiente mientras se mezcla, pasar a trave s de un ltro de 0,2 mm y conservar en un envase limpio y cubierto. Preparacio n de pruebaDiluir un volumen de aproximadamente tica con L 10 mL de Suspensio n O quido transportador a 25 mL. Procedimiento(ver Prueba de Recuento de Part culas por Oscurecimiento de la Luz en Part culas en Inyecciones h788i). Analizar la Preparacio n de prueba usando un sistema de recuento electro nico de part culas con soporte l quido que emplea un sensor de oscurecimiento de luz con un dispositivo adecuado para la introduccio n de muestras. No menos de 99,5% de las part culas son 525 mm, no menos de 99,95% son 550 mm y no menos de 99,995% son 5100 mm.
&Ciprooxacino
Osmolalidad h785i: entre 270 y 330 mOsmol por kg. L mite de ciprooxacino formamida Solucio n amortiguadoraAgregar 6,0 mL de a cido fosfo rico a 2,0 L de agua. Ajustar con hidro xido de sodio al 50% a un pH de 3,0. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora y acetonitrilo (73 : 27). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n esta ndarTransferir aproximadamente 25 mg de ER Ciprooxacino Formamida USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con metanol. Transferir 3,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 50 mL y diluir a volumen con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,015 mg por mL. Solucio n de aptitud del sistemaTransferir aproximadamente 2,5 mg de ER Dexametasona USP y aproximadamente 2,5 mg de ER Ciprooxacino Formamida USP a un matraz volume trico de 100 mL. Disolver en 15 mL de metanol, despue s diluir a volumen con Fase mo vil. Solucio n de pruebaTransferir un volumen, medido con tica recie exactitud, de Suspensio n O n mezclada, equivalente aproximadamente a 6 mg de ciprooxacino, a un matraz volume trico de 10 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 280 nm y una columna de 3,9 mm 6 15 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna para ciprooxacino formamida no es menos de 2000 platos teo ricos; la resolucio n, R, entre ciprooxacino formamida y dexametasona no es menor de 8; y el factor de asimetr a para ciprooxacino formamida no es mayor de 2,0. La desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de la Solucio n esta ndar no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos en el tiempo de retencio n de ciprooxacino formamida. Calcular el porcentaje de ciprooxacino formamida en la tica tomada, por la fo porcio n de la Suspensio n O rmula: 10(C/VL)(rU / rS)100 en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Ciprooxacino Formamida USP en la Solucio n esta ndar; V es el tica tomado; L es la cantidad volumen, en mL, de Suspensio n O declarada, en mg por mL, de ciprooxacino; y rU y rS son las respuestas de los picos de ciprooxacino formamida obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente. La ciprooxacino formamida no es ma s de 0,5% de la cantidad declarada de ciprooxacino. Compuestos relacionados de ciprooxacino ProcedimientoA partir del cromatograma de la Preparacio n de valoracio n, obtenido segu n se indica en la Valoracio n de ciprooxacino, medir las respuestas del ana logo ciprooxacino etilendiamina y los otros picos menores. Calcular el porcentaje de tica cada compuesto relacionado en la porcio n de Suspensio n O tomada, por la fo rmula: (331,34/367,81)25(C/V)(rU / rS)100/FL en donde 331,34 y 367,81 son los pesos moleculares de ciprooxacino y clorhidrato de ciprooxacino anhidro, respectivamente; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Ciprooxacino USP en la Preparacio n esta ndar diluida, calculada con respecto a la sustancia anhidra; V es el volumen, en mL, de tica tomado; rU y rS son las respuestas de los picos de Suspensio n O los compuestos relacionados obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la respuesta del pico de ciprooxacino obtenido a partir de la Preparacio n esta ndar diluida, respectivamente; F es el factor de respuesta relativa (1,3 para el ana logo de ciprooxacino etilendiamina y 1,0 supuesto para todos los otros productos de degradacio n); y L es la cantidad declarada, en mg por mL, de ciprooxacino. El ana logo de ciprooxacino etilendiamina no es ma s de 0,4% de la cantidad declarada de ciprooxacino. Ningu n otro
Monograf as Ociales / Ciprooxacino
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compuesto relacionado individual es ma s de 0,2%, y la suma de todos los compuestos relacionados encontrados no es ma s de 0,8%. Compuestos relacionados de dexametasona ProcedimientoA partir del cromatograma de la Preparacio n de valoracio n, obtenido segu n se indica en la Valoracio n de dexametasona, medir las respuestas del compuesto relacionado 21dehidro-17-desoxi, el compuesto relacionado 20-carboxi-17-desoxi y otros picos menores. Calcular el porcentaje de cada compuesto tica tomada, por la relacionado en la porcio n de la Suspensio n O fo rmula: 10(C/VL)(rU / rS)100 en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Dexametasona USP en la Preparacio n esta ndar diluida; V es el tica tomado; L es la cantidad volumen, en mL, de Suspensio n O declarada, en mg por mL, de dexametasona; y rU y rS son las respuestas de los picos de los compuestos relacionados obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la respuesta del pico de dexametasona obtenido a partir de la Preparacio n esta ndar diluida, respectivamente. El compuesto relacionado 21-dehidro-17-desoxi no es ma s de 1,0%, el compuesto relacionado 20-carboxi-17-desoxi no es ma s de 2,6%, ningu n otro compuesto relacionado es ma s de 0,3%, y la suma de todos los compuestos relacionados encontrados no es ma s de 3,5%. [ NOTALa identicacio n de los compuestos relacionados conocidos se lleva a cabo midiendo los tiempos de retencio n relativos en funcio n de la dexametasona. Los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente de 1,4 a 1,6 para el compuesto relacionado 21-dehidro-17-desoxi y aproximadamente de 2,8 a 3,2 para el compuesto relacionado 20-carboxi-17-desoxi.] Valoracio n de ciprooxacino Solucio n amortiguadoraAgregar 6,0 mL de a cido fosfo rico y 8 g de fosfato de dietilamina a 2,0 L de agua. Ajustar con hidro xido de sodio al 50% a un pH de 3,0. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora y acetonitrilo (89 : 11). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarPesar con exactitud aproximadamente 37 mg de ER Clorhidrato de Ciprooxacino USP en un matraz volume trico de 25 mL, disolver y diluir a volumen con a cido clorh drico 0,1 N. Transferir 5,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 50 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,13 mg de ciprooxacino por mL. Preparacio n esta ndar diluidaTransferir 2,0 mL de la Preparacio n esta ndar a un matraz volume trico de 100 mL y diluir a volumen con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,0025 mg de ciprooxacino por mL. Solucio n de aptitud del sistemaPesar aproximadamente 1 mg de ER Clorhidrato de Ciprooxacino USP y 1 mg de ER Ana logo de Ciprooxacino Etilendiamina USP en un matraz volume trico de 25 mL y diluir a volumen con Fase mo vil. Transferir 2,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 50 mL y diluir a volumen con Fase mo vil. Preparacio n de valoracio nTransferir un volumen medido con tica recie exactitud de Suspensio n O n mezclada, equivalente aproximadamente a 3 mg de ciprooxacino, a un matraz volume trico de 25 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 280 nm y una columna de 3,9 mm 6 15 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre ciprooxacino y el ana logo de ciprooxacino etilendiamina no es menor de 3,0; la eciencia de la columna para ciprooxacino no es menos de 2500 platos teo ricos; y el factor de asimetr a para ciprooxacino no es mayor de 2,0. La desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de la Preparacio n esta ndar no es ma s de 2,0%; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de la Preparacio n esta ndar diluida no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y
medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de ciprooxacino (C17H18FN3O3) en cada mL de la Suspensio n tica tomada, por la fo O rmula: (331,34/367,81)(25C/V)(rU / rS) en donde 331,34 y 367,81 son los pesos moleculares de ciprooxacino y clorhidrato de ciprooxacino anhidro, respectivamente; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Ciprooxacino USP en la Preparacio n esta ndar, calculada con respecto a la sustancia anhidra; V es el volumen, en mL, de tica tomado; y rU y rS son las respuestas de los picos de Suspensio n O ciprooxacino obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. Valoracio n de dexametasona Solucio n amortiguadora y Fase mo vilPreparar segu n se indica en el L mite de ciprooxacino formamida. Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 50 mg de ER Dexametasona USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 25 mL, diluir a volumen con acetonitrilo y mezclar. Transferir 5,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 50 mL, disolver y diluir con Fase mo vil, y mezclar. Esta solucio n contiene aproximadamente 0,2 mg de ER Dexametasona USP por mL. Preparacio n esta ndar diluidaTransferir 2,0 mL de la Preparacio n esta ndar a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Esta solucio n contiene aproximadamente 0,004 mg de ER Dexametasona USP por mL. Solucio n de aptitud del sistemaTransferir aproximadamente 2 mg de ER Dexametasona USP y aproximadamente 2 mg de ER Acetato de Dexametasona USP a un matraz volume trico de 10 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Preparacio n de valoracio nTransferir un volumen, medido con tica recie exactitud, de Suspensio n O n mezclada, equivalente aproximadamente a 2 mg de dexametasona, a un matraz volume trico de 10 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 3,9 mm 6 15 cm rellena de material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna para dexametasona no es menos de 2000 platos teo ricos; la resolucio n, R, entre dexametasona y acetato de dexametasona no es menor de 12; el factor de asimetr a para dexametasona no es mayor de 2,0; la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de la Preparacio n esta ndar no es ma s de 2,0%; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de la Preparacio n esta ndar diluida no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de dexametasona (C22H29FO5) en cada mL de la Suspensio n tica tomada, por la fo O rmula: 10(C/V)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Dexametasona USP en la Preparacio n esta ndar; V es el volumen, tica tomado; y rU y rS son las respuestas de en mL, de Suspensio n O los picos de dexametasona obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
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Cladribina / Monograf as Ociales
Cladribina
Cambio en la redaccio n: Agua, Me todo I h921i: no ma s de .4.0%..5
Claritromicina, Tabletas de Liberacio n Prolongada
Solucio n de pruebaCentrifugar la solucio n en ana lisis a 2500 rpm durante 10 minutos. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 210 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. .Mantener la temperatura de la columna a 508..5 Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a no es mayor de 2,0; la eciencia de la columna no es menos de 2000 platos teo ricos; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 5 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Determinar la cantidad, en porcentaje, de claritromicina disuelta, por la fo rmula:
Cambio en la redaccio n: Disolucio n h711i PRUEBA 1 Medio: solucio n amortiguadora de fosfato 0,3 M de pH 6,0 (preparada disolviendo 816,5 g de fosfato monoba sico de potasio y 48 g de hidro xido de sodio en aproximadamente 4 L de agua, mezclando y diluyendo con agua a 20 L. Ajustar con a cido fosfo rico concentrado o con hidro xido de sodio 1 N a un pH de 6,0 + 0,05); 900 mL. Aparato 2: 75 rpm. Tiempos: 30; 45; 60 y 120 minutos. Determinar los porcentajes de la cantidad declarada de claritromicina (C38H69NO13) disuelta utilizando el siguiente me todo. Soluciones esta ndarPreparar cinco soluciones de ER Claritromicina USP disuelta en acetonitrilo y diluida en Medio, con concentraciones conocidas en el intervalo de aproximadamente 60 mg por mL a 600 mg por mL. Solucio n de pruebaUsar porciones de la solucio n en ana lisis pasadas a trave s de un ltro de polietileno con un taman o de poro de 35 mm. Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de las cinco Soluciones esta ndar y la Solucio n de prueba y medir las respuestas de los picos principales. Realizar un ana lisis de regresio n lineal para generar una curva esta ndar utilizando el a rea del pico de cada Solucio n esta ndar en funcio n de su concentracio n. Determinar la cantidad de claritromicina (C38H69NO13) disuelta en cada intervalo de tiempo especicado usando el a rea del pico de cada Solucio n de prueba y los datos estad sticos de la regresio n lineal para las Soluciones esta ndar. ToleranciasLos porcentajes de las cantidades declaradas de claritromicina (C38H69NO13) disueltas en los tiempos especicados se ajustan a la siguiente Tabla de Aceptacio n. PRUEBA 2.Si el producto cumple con esta prueba, el etiquetado indica que cumple con la Prueba de Disolucio n 2 de la USP..5 Medio: solucio n amortiguadora de fosfato 0,05 M de pH 6,8 que contiene 0,5% de lauril sulfato de sodio; 900 mL, desgasicada por ultrasonido y vac o. Aparato 1: 100 rpm. Tiempos: 2, 12 y 24 horas. Determinar los porcentajes de la cantidad declarada de claritromicina (C38H69NO13) disuelta utilizando el siguiente me todo. Solucio n amortiguadora de fosfato 0,067 M de pH 2,5Disolver 9,2 g de fosfato monoba sico de sodio monohidrato en aproximadamente 800 mL de agua. Ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 2,5. Diluir con agua a 1000 mL. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de metanol y Solucio n amortiguadora de fosfato 0,067 M de pH 2,5 (65 : 35). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n esta ndarTransferir aproximadamente 56 mg de ER Claritromicina USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL. Agregar 10 mL de metanol y someter a ultrasonido para disolver. Diluir a volumen con Medio.
en donde CU es la concentracio n, en mg por mL, de claritromicina en la muestra en cada tiempo de muestreo; rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente; y CS es la concentracio n, en mg por mL, de claritromicina en la Solucio n esta ndar. Calcular la cantidad, en porcentaje, de claritromicina disuelta con correccio n del volumen:
en donde Cn es la concentracio n, en mg por mL, de claritromicina en la Solucio n de prueba en cada tiempo de muestreo; 900 es el volumen, en mL, de Medio; VU es el volumen, en mL, de la muestra tomada en cada tiempo de muestreo; n es el nu mero de tiempos de muestreo. [NOTALa sumatoria de la cantidad de claritromicina retirada a los tiempos de muestreo anteriores se aplica so lo si n41.]; 100 es el factor de conversio n a porcentaje; y LC es el valor declarado, en mg, por Tableta. ToleranciasLos porcentajes de las cantidades declaradas de claritromicina (C38H69NO13) disueltas en los tiempos especicados se ajustan a la Tabla de Aceptacio n 2. Tiempo (horas) 2 12 24 Cantidad disuelta no mas de 20% entre 45% y 70% no menos de 80%
.PRUEBA 3Si el producto cumple con esta prueba, el etiquetado indica que cumple con la Prueba de Disolucio n 3 de la USP. Medio: solucio n amortiguadora de acetato de pH 4,75 (preparada disolviendo 3,59 g de acetato de sodio trihidrato y 11,0 mL de a cido ace tico 2 N en 1000 mL de agua y ajustando con a cido ace tico 2 N a un pH de 4,75); 1000 mL. Aparato 1: de malla 10; 50 rpm. Tiempos: 1, 2, 4, 8 y 12 horas. Determinar los porcentajes de la cantidad declarada de claritromicina (C38H69NO13) disuelta empleando el siguente me todo. Solucio n amortiguadora de fosfato 0,067 MDisolver 9,12 g de fosfato monoba sico de potasio en 1000 mL de agua y mezclar. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de metanol y Solucio n amortiguadora de fosfato 0,067 M (65 : 35), mezclar y ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 4,0. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n madre del esta ndarDisolver cuantitativamente una cantidad, pesada con exactitud, de ER Claritromicina USP en metanol, agitando y sometiendo a ultrasonido si fuera necesario para asegurar la disolucio n, para obtener una solucio n madre con una
Monograf as Ociales / Claritromicina
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Tabla de Aceptacio n Nivel L1 Tiempo (minutos) 30 45 60 120 30 45 60 120 30 45 60 120 Cantidad disuelta (l mites individuales) no ma s de 65% entre 55% y 85% no menos de 75% no menos de 85% no ma s de 75% entre 45% y 95% no menos de 65% no menos de 75% no ma s de 2 tabletas liberan ma s de 75% y ninguna tableta individual libera ma s de 85% no ma s de 2 tabletas esta n fuera del intervalo de 45% a 95% y ninguna tableta individual esta fuera del intervalo de 35% a 105% no ma s de 2 tabletas liberan menos de 65% y ninguna tableta individual libera menos de 55% no ma s de 2 tabletas liberan menos de 75% y ninguna tableta individual libera menos de 65% Cantidad disuelta (l mites promedio) no ma s de 65% entre 55% y 85% no menos de 75% no menos de 85% no ma s de 65% entre 55% y 85% no menos de 75% no menos de 85%
L2
L3
concentracio n conocida de aproximadamente 625 mg de claritromicina por mL, teniendo en cuenta la potencia declarada, en mg por mg, de ER Claritromicina USP. Solucio n esta ndarTransferir 10,0 mL de la Solucio n madre del esta ndar a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Esta solucio n contiene aproximadamente 125 mg de claritromicina por mL. Solucio n de aptitud del sistemaDisolver cuantitativamente una cantidad, pesada con exactitud, de ER Compuesto Relacionado A de Claritromicina USP en metanol para obtener una solucio n que contenga aproximadamente 625 mg del compuesto relacionado A de claritromicina por mL. Transferir 10 mL de esta solucio n y 10 mL de la Solucio n madre del esta ndar a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Solucio n de pruebaRetirar 10 mL de la solucio n en ana lisis. Transferir 3 mL a un matraz volume trico de 25 mL y diluir a volumen con Fase mo vil. Pasar porciones de esta dilucio n a trave s de un ltro de 0,45 mm. Reemplazar 10 mL de Medio en cada recipiente. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 210 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 508. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,75 para claritromicina y 1,0 para el compuesto relacionado A de claritromicina; y la resolucio n, R, entre claritromicina y el compuesto relacionado A de claritromicina no es menor de 2,0. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna, determinada a partir del pico de claritromicina, no es menos de 750 platos teo ricos; el factor de asimetr a no es menor de 0,9 y no es mayor de 2; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Determinar la cantidad, en porcentaje, de claritromicina (C38H69NO13) disuelta, por la fo rmula:
conversio n a porcentaje; y LC es la cantidad declarada, en mg, por Tableta. Calcular la cantidad, en porcentaje, de claritromicina disuelta con correccio n del volumen a tiempos de muestreo n ! 2:
en donde Cn es la concentracio n, en mg por mL, de claritromicina en la Solucio n de prueba a cada tiempo de muestreo; 1000 es el volumen, en mL, de Medio; VU es el volumen, en mL, de la muestra retirada a cada tiempo de muestreo; n es el tiempo de muestreo (a 2 horas, n = 2), la sumatoria de la concentracio n de la Solucio n de prueba desde el primer tiempo de muestreo hasta el tiempo de muestreo (n 1) (so lo aplica desde n ! 2); 100 es el factor de conversio n a porcentaje; y LC es la cantidad declarada, en mg, por Tableta. ToleranciasLos porcentajes de la cantidad declarada de claritromicina (C38H69NO13) disuelta en los tiempos especicados se ajustan a la Tabla de Aceptacio n 2. Tiempo (horas) 1 2 4 8 12 Cantidad disuelta no ma s de 15% entre 10% y 30% entre 35% y 55% no menos de 80% no menos de 90%
en donde CU es la concentracio n, en mg por mL, de claritromicina en la muestra en cada tiempo de muestreo; rU y rS son las repuestas de los picos obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente; CS es la concentracio n, en mg por mL, de claritromicina en la Solucio n esta ndar; 100 es el factor de
PRUEBA 4Si el producto cumple con esta prueba, el etiquetado indica que cumple con la Prueba de Disolucio n 4 de la USP. Medio: solucio n amortiguadora de fosfato de pH 6,0 (preparada disolviendo 68,0 g de fosfato dia cido de potasio y 1,8 g de hidro xido de sodio en 10 L de agua, y ajustando con hidro xido de sodio diluido oa cido fosfo rico a un pH de 6,0 + 0,1); 900 mL. Aparato 2: 50 rpm. Tiempos: 2; 4; 8 y 12 horas. Determinar los porcentajes de la cantidad declarada de claritromicina (C38H69NO13) disuelta empleando el siguiente me todo.
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Clorhexidina / Monograf as Ociales
Solucio n amortiguadoraDisolver 6,8 g de fosfato dia cido de potasio en 1 L de agua. Ajustar con hidro xido de sodio diluido oa cido fosfo rico a un pH de 4,5 + 0,1. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de metanol y Solucio n amortiguadora (64 : 36). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n esta ndarTransferir aproximadamente 20 mg de ER Claritromicina USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL. Agregar aproximadamente 30 mL de Medio y someter a ultrasonido durante aproximadamente 10 minutos hasta que se disuelva. Agregar 2 mL de metanol y diluir a volumen con Medio. Solucio n de pruebaUsar esta solucio n en ana lisis pasada a trave s de un ltro adecuado de 0,45 mm. Sistema cromatogra co (see Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 203 nm y una columna de 4,0 mm 6 12,5 cm rellena con material L7 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 308. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Determinar la cantidad, en porcentaje, de claritromicina disuelta, por la fo rmula:
Gluconato de Clorhexidina, Enjuague Oral
Cambio en la redaccio n: Valoracio n Diluyente, Solucio n A, Solucio n B, Fase mo vil, Solucio n de aptitud del sistema, Preparacio n esta ndar y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en Valoracio n en Gluconato de Clorhexidina, Solucio n. Preparacio n de valoracio nTransferir 5,0 mL de Enjuague Oral a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con Diluyente y mezclar. ProcedimientoProceder segu n se indica en Valoracio n en Gluconato de Clorhexidina, Solucio n. Calcular el porcentaje (p/v) de gluconato de clorhexidina (C22H30Cl2N10 2C6H12O7) en la porcio n de Enjuague Oral tomada, por la fo rmula:
&
(897,76/625,55(C/500)(rU / rS)&1S
(USP30)
en donde los te rminos son los denidos en esa Valoracio n.
Gluconato de Clorhexidina, Solucio n

en donde CU es la concentracio n, en mg por mL, de claritromicina en la Solucio n de prueba a cada tiempo de muestreo; rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente; y CS es la concentracio n, en mg por mL, de claritromicina en la Solucio n esta ndar. Calcular la cantidad, en porcentaje, de claritromicina disuelta a cada tiempo de muestreo, por la fo rmula:
Cambio en la redaccio n: C22H30Cl2N10 2C6H12O7 &897,76&1S (USP30) 2,4,11,13-Tetraazatetradecanediimidamide, N, N-bis(4-chlorophenyl)-3,12-diimino-, di-D-gluconate. Di-D-gluconato de 1,1-hexametilenobis[5-(p -clorofenil)biguanida] [18472-51-0].
Cambio en la redaccio n: en donde Cn es la concentracio n, en mg por mL, de claritromicina en la Solucio n de prueba a cada tiempo de muestreo; 900 es el volumen, en mL, de Medio; VS es el volumen, en mL, de la muestra tomada a cada tiempo de muestreo; y LC es la cantidad declarada, en mg, por Tableta. ToleranciasLos porcentajes de la cantidad declarada de claritromicina (C38H69NO13) disuelta en los tiempos especicados se ajustan a la Tabla de Aceptacio n 2. Tiempo (horas) 2 4 8 12 Cantidad disuelta no ma s de 25% entre 20% y 40% entre 45% y 75% no menos de 80%
.5
Valoracio n DiluyentePreparar una solucio n de 27,6 g de fosfato monoba sico de sodio en aproximadamente 1,5 L de agua. Ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 3,0; diluir con agua a 2000 mL y mezclar. Solucio n APreparar una solucio n de 27,6 g de fosfato monoba sico de sodio y 10 mL de trietilamina en aproximadamente 1,5 L de agua. Ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 3,0; diluir con agua a 2000 mL y mezclar. Preparar una mezcla de esta solucio n y acetonitrilo (70 : 30). [NOTAPueden hacerse pequen os ajustes al contenido de acetonitrilo para satisfacer criterios de resolucio n aceptables (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i).] Desgasicar antes de usar y burbujear con helio durante el ana lisis. Solucio n BUsar acetonitrilo. Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y de Solucio n B segu n se indica en Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de aptitud del sistemaPreparar una solucio n en Diluyente que contenga aproximadamente 50 mg de ER Acetato de Clorhexidina USP por mL y 1 mg de p-cloroanilina por mL. Preparacio n esta ndarPreparar una solucio n de ER Acetato de Clorhexidina USP en agua con una concentracio n conocida de aproximadamente 1 mg por mL. Diluir cuantitativamente con Diluyente un volumen, medido con exactitud, de esta solucio n madre para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 50 mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir 5,0 mL de Solucio n a un matraz volume trico de 250 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir 5,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 250 mL, diluir a volumen con Diluyente y mezclar.
Monograf as Ociales / Colestiramina
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Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 239 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm desactivado para bases. Mantener la columna a una temperatura constante de aproximadamente 408. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Tiempo (minutos) 0 09 910 1015 1516 1621 Solucio n A (%) 100 100 100?45 45 45?100 100 Solucio n B (%) 0 0 0?55 55 55?0 0
Elucio n equilibrio isocra tica gradiente lineal isocra tica gradiente lineal re-equilibrio
ProcedimientoDeterminar concomitantemente las absorbancias de las Soluciones esta ndar y de la Solucio n de prueba en la l nea de emisio n del cobre a 324,8 nm, con un espectrofoto metro de absorcio n ato mica (ver Espectrofotometr a y Dispersio n de Luz h851i) equipado con una la mpara de cobre de ca todo hueco y una llama de aireacetileno, utilizando agua como blanco. Gracar las absorbancias de las Soluciones esta ndar con respecto a la concentracio n de cobre, en mg por mL, y trazar la recta que mejor se ajuste a los cuatro puntos gracados. A partir del gra co as obtenido, determinar la concentracio n de cobre, C, en mg por mL, en la Solucio n de prueba. Calcular el porcentaje de cobre en la porcio n de Complejo de ClorolinaCobre So dico tomada, por la fo rmula: 500C / W en donde W es el peso, en mg, con respecto a la sustancia seca, del Complejo de ClorolinaCobre So dico tomado para preparar la Solucio n de prueba: no se encuentra menos de 4,25%.
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre los picos de clorhexidina y p-cloroanilina no es menor de 3; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%, determinada a partir del pico de clorhexidina, y no es ma s de 5,0% determinada a partir del pico de pcloroanilina. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos de clorhexidina. Calcular el porcentaje (p/v) de gluconato de clorhexidina (C22H30Cl2N10 2C6H12O7) en la porcio n de Solucio n tomada, por la fo rmula:
&
Resina de Colestiramina
Cambio en la redaccio n: Aminas cuaternarias dializables Solucio n amortiguadora de pH 9,2Transferir 3,80 g de borato de sodio decahidrato a un matraz volume trico de 1000 mL, disolver y diluir a volumen con agua, y mezclar. Solucio n de azul de bromotimolTransferir 150 mg de azul de bromotimol y 405 mg de carbonato de sodio a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Solucio n esta ndarDiluir en agua, cuantitativamente y en diluciones sucesivas, 1 mL de solucio n de cloruro de benciltrimetilamonio al 60%, pipeteado con exactitud, para obtener una solucio n madre con una concentracio n de 0,2 + 0,01 mg por mL [NOTA Preparar esta solucio n al momento de usarla]. Cortar un trozo de 20 a 25 cm* de tubo de celulosa para dia lisis que tenga un peso molecular de corte &comprendido dentro del intervalo de 6000 a 14 000&1S (USP30) y un ancho de 5 a 9 cm cuando se lo mide seco y aplanado, y colocar en agua para hidratar hasta que se vuelva exible, sellando un extremo en forma apropiada. Pipetear 5 mL de la solucio n madre y transferirla al tubo, agregar 5 mL de agua, sellar bien el extremo abierto, colocar el tubo en un recipiente adecuado con 100 mL de agua, de manera que quede totalmente sumergido y agitar el l quido durante 16 horas para dializar. Solucio n de pruebaCortar un trozo de 20 a 25 cm de tubo de celulosa para dia lisis* que tenga un peso molecular de corte &comprendido dentro del intervalo de 6000 a 14 000&1S (USP30) y un ancho de 5 a 9 cm cuando se lo mide seco y aplanado, y colocarlo en agua para hidratar hasta que se vuelva exible, sellando un extremo en forma apropiada. Pesar 2 + 0,01 g de Resina de Colestiramina y transferir con cuidado la muestra al tubo, asegura ndose que no quede nada adherido a las paredes superiores del tubo. Agregar 10 mL de agua al contenido del tubo, sellar el extremo abierto en forma apropiada y colocar el tubo en un recipiente adecuado con 100 mL de agua, de manera que quede totalmente sumergido. Agitar el l quido durante 16 horas para dializar. ProcedimientoPipetear y transferir a tres separadores distintos: Separador 15 mL de Solucio n esta ndar, 5 mL de Solucio n amortiguadora de pH 9,2, 1 mL de Solucio n de azul de bromotimol y 10 mL de cloroformo; Separador 25 mL de Solucio n de prueba, 5 mL de Solucio n amortiguadora de pH 9,2, 1 mL de Solucio n de azul de bromotimol y 10 mL de cloroformo; Separador 35 mL de agua, 5 mL de Solucio n amortiguadora de pH 9,2, 1 mL de Solucio n de azul de bromotimol y 10 mL de cloroformo. Agitar cada separador vigorosamente durante 1 minuto, dejar que se separen las fases hasta que la fase de cloroformo quede transparente y recoger los extractos clorofo rmicos en sendos matraces volume tricos de 25
* & Un tubo adecuado es Spectra/Por 1, # de art culo 132 665, disponible de Spectrum Laboratories, Inc. (www.spectrapor.com), o equivalente.&1S (USP30)
(897,76/625,55(0,25C)(rU / rS)&1S
(USP30)
en donde &897,76 y 625,55&1S (USP30) son los pesos moleculares de gluconato de clorhexidina y de acetato de clorhexidina, respectivamente; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Acetato de Clorhexidina USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las a reas de los picos de clorhexidina obtenidas a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
Complejo de ClorolinaCobre So dico
Cambio en la redaccio n: Contenido de cobre total Solucio n madre de cobreTransferir 1,000 g de cobre a un matraz volume trico de 1000 mL, disolver en 20 mL de a cido n trico, diluir a volumen con a cido n trico 0,2 N y mezclar. La solucio n contiene 1000 mg de cobre por mL. Almacenar en un frasco de polietileno. Soluciones esta ndarPipetear 5,0 mL de la Solucio n madre de cobre y transferir a un matraz volume trico de 500 mL, diluir a volumen con agua, y mezclar. Transferir 5,0 mL, 10,0 mL, 15,0 mL y 20,0 mL, respectivamente, de esta solucio n a distintos matraces volume tricos de 100 mL, diluir el contenido de cada matraz a volumen con agua y mezclar. Estas Soluciones esta ndar contienen, 0,5 mg, 1,0 mg, &1,5 mg y 2,0&1S (USP30) mg de cobre por mL, respectivamente. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 100 mg de Complejo de ClorolinaCobre So dico, previamente secado y pesado con exactitud, a un matraz Kjeldahl. Agregar 2,0 mL de a cido sulfu rico, 1,0 mL de a cido n trico y 1,0 mL de pero xido de hidro geno, y calentar cuidadosamente bajo una campana de extraccio n hasta obtener un color verde claro. [NOTASi la solucio n presenta algu n indicio de tinte de color marro n, continuar agregando porciones de 0,5 mL de a cido n trico hasta obtener un color verde.] Enfriar, transferir cuantitativamente el contenido a un matraz volume trico de 1000 mL con varias porciones de agua, diluir el contenido del matraz a volumen con agua y mezclar. Transferir 10,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con agua y mezclar.
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Dantroleno / Monograf as Ociales
mL cada uno. Repetir el proceso de extraccio n con una segunda porcio n de 10 mL de cloroformo y combinar con los extractos anteriores. Diluir a volumen cada solucio n con cloroformo, si fuera necesario, y mezclar. Determinar concomitantemente las absorbancias de la Solucio n de prueba y de la Solucio n esta ndar a la longitud de onda de ma xima absorcio n, aproximadamente a 420 nm, con un espectrofoto metro adecuado, usando como blanco la solucio n del Separador 3: la absorbancia de la Solucio n de prueba no es mayor que la absorbancia de la Solucio n esta ndar (0,05% como cloruro de benciltrimetilamonio).
Solucio n de pruebaDiluir la Solucio n madre de prueba con acetonitrilo para obtener una solucio n con una concentracio n de aproximadamente 0,175 mg por mL de dantroleno so dico. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 365 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a para el compuesto relacionado A de dantroleno no es mayor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 5% para el compuesto relacionado A de dantroleno. [NOTAEl pico de dantroleno eluye en el volumen muerto aproximadamente a los 1,5 minutos.] ProcedimientoInyectar en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir la respuesta del pico para el compuesto relacionado A de dantroleno. Calcular el porcentaje del compuesto relacionado A de dantroleno en la porcio n de Dantroleno So dico tomada, por la fo rmula: 100(rU / rS)(CS / CT) en donde rU y rS son las respuestas de los picos del compuesto relacionado A de dantroleno obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente; CS es la concentracio n, en mg por mL, del compuesto relacionado A de dantroleno en la Solucio n esta ndar; y CT es la concentracio n, en mg por mL, de Dantroleno So dico en la Solucio n de prueba: no se encuentra ma s de 0,15% del compuesto relacionado A de dantroleno. Compuestos relacionados Fase mo vil, Solucio n madre de aptitud del sistema B, Diluyente y Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarDiluir cuantitativamente la Solucio n madre de aptitud del sistema B con Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de 0,25 mg por mL del compuesto relacionado B de dantroleno y del compuesto relacionado C de dantroleno. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada uno de los compuestos relacionados de dantroleno pertinentes en la porcio n de Dantroleno So dico tomada, por la fo rmula: 100(CS / CT)(rU / rS) en donde CS es la concentracio n, en mg por mL, del compuesto relacionado B de dantroleno o del compuesto relacionado C de dantroleno en la Solucio n esta ndar; CT es la concentracio n, en mg por mL, de Dantroleno So dico en la Solucio n de prueba; rU es la respuesta individual del pico para el compuesto relacionado B de dantroleno o el compuesto relacionado C de dantroleno obtenidos a partir de la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico correspondiente obtenido a partir de la Solucio n esta ndar. No se encuentra ma s de 0,50% de compuesto relacionado B de dantroleno; y no se encuentra ma s de 0,30% de compuesto relacionado C de dantroleno. Valoracio n Solucio n amortiguadoraDisolver 3,85 g de acetato de amonio en 1,0 L de agua y ajustar con a cido ace tico glacial a un pH de 4,5 + 0,1. DiluyentePreparar una mezcla de agua y acetonitrilo (50 : 50). Solucio n APreparar una mezcla ltrada y desgasicada de agua, Solucio n amortiguadora y acetonitrilo (70 : 20 : 10). Solucio n BPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de acetonitrilo y Solucio n amortiguadora (80 : 20). Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y Solucio n B segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n madre de aptitud del sistema ATransferir 62,5 mg de ER Dantroleno So dico USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL y disolver en 2,5 mL de dimetilformamida. Agregar 2,5 mL de a cido ace tico glacial y diluir a volumen con acetona para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1,25 mg por mL de dantroleno so dico.
&Dantroleno
So dico
C14H9N4NaO5 3H2O 399,29 2,4-Imidazolidinedione, 1-[[[5-(4-nitrophenyl)-2-furanyl]methylene]amino]-, sodium salt, hydrate (2 : 7). Sal so dica de 1-[[5-(p-nitrofenil)furfuriliden]amino]hidanto na hidrato [24868-20-0].
El Dantroleno So dico contiene no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 96,0 por ciento de C14H10N4O5, la forma a cido libre del Dantroleno So dico, calculada con respecto a la sustancia anhidra.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables y resistentes a la luz. Almacenar a temperatura ambiente. Esta ndares de referencia USP h11iER Dantroleno USP. ER Compuesto Relacionado A de Dantroleno USP. ER Compuesto Relacionado B de Dantroleno USP. ER Compuesto Relacionado C de Dantroleno USP. ER Dantroleno So dico USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. C: Incinerar aproximadamente 200 mg: el residuo cumple con los requisitos de la prueba de la llama para Sodio h191i. Agua, Me todo Ia h921i: entre 14,5% y 17,0%. Metales pesados, Me todo II h231i: 0,002%. L mite de compuesto relacionado A de dantroleno Solucio n madre de pruebaPreparar segu n se indica en la Preparacio n madre de valoracio n como se indica en la Valoracio n. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de acetonitrilo y agua (80 : 20). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Compuesto Relacionado A de Dantroleno USP y ER Dantroleno So dico USP en dimetilformamida para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de 17,5 mg por mL del compuesto relacionado A de dantroleno y 50 mg por mL de dantroleno so dico. Diluir con acetonitrilo para obtener una solucio n con concentraciones de aproximadamente 0,35 mg por mL del compuesto relacionado A de dantroleno y 1 mg por mL de dantroleno so dico.
Monograf as Ociales / Dantroleno
4095
Solucio n madre de aptitud del sistema BTransferir 6,3 mg de ER Compuesto Relacionado B de Dantroleno USP y de ER Compuesto Relacionado C de Dantroleno USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL y disolver en 2,5 mL de dimetilformamida. Agregar 2,5 mL de a cido ace tico glacial y diluir a volumen con acetona para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,125 mg por mL del compuesto relacionado B de dantroleno y del compuesto relacionado C de dantroleno. Solucio n de aptitud del sistemaDiluir cuantitativamente volu menes adecuados de Preparacio n madre de aptitud del sistema A y Preparacio n madre de aptitud del sistema B con Diluyente para obtener una solucio n con concentraciones de aproximadamente 0,125 mg por mL de dantroleno so dico y 2,5 mg por mL del compuesto relacionado B de dantroleno y del compuesto relacionado C de dantroleno. Preparacio n madre del esta ndarTransferir 50 mg de ER Dantroleno USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL y disolver en 2,5 mL de dimetilformamida. Agregar 2,5 mL de a cido ace tico glacial y diluir a volumen con acetona para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1,0 mg por mL de dantroleno. Preparacio n esta ndarDiluir la Preparacio n madre del esta ndar con Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg por mL de dantroleno. Preparacio n madre de valoracio nTransferir una cantidad, pesada con exactitud, de dantroleno so dico a un matraz volume trico de 100 mL y disolver en 5 mL de dimetilformamida. Agregar 5 mL de a cido ace tico glacial y diluir a volumen con acetona para obtener una solucio n con una concentracio n de aproximadamente 1,25 mg por mL de dantroleno so dico. Preparacio n de valoracio nDiluir la Preparacio n madre de valoracio n con Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n de aproximadamente 0,125 mg por mL de dantroleno so dico. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 365 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2,0 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo: Tiempo (minutos) 010 1020 2025 2525,1 25,135 Disolvente A (%) 90?60 60?10 10 10?90 90 Disolvente B (%) 10?40 40?90 90 90?10 10 Elucio n gradiente lineal gradiente lineal isocra tica gradiente lineal re-equilibrio
&Dantroleno
So dico para Inyeccio n
El Dantroleno So dico para Inyeccio n es una

formulacio n este ril, apiro gena, liolizada que contiene Dantroleno So dico y uno o ma s amortiguadores o agentes secuestrantes adecuados. Contiene no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de C14H9N4NaO5 3H2O.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Almacenar a temperatura ambiente controlada. Proteger de la luz. Esta ndares de referencia USP h11iER Dantroleno USP. ER Compuesto Relacionado B de Dantroleno USP. ER Endotoxina USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki Muestra de pruebaAgregar 10 mL de a cido clorh drico 0,1 N y 10 mL de acetato de etilo a 0,5 g de Dantroleno So dico para Inyeccio n, y mezclar. Dejar que las fases se separen y transferir la fase superior de acetato de etilo a un recipiente de vidrio adecuado. Evaporar el disolvente, secar el residuo a 1058 durante 10 minutos y usar el residuo. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Endotoxinas bacterianas h85iNo contiene ma s de 0,5 Unidades USP de Endotoxinas por mg de dantroleno so dico. Esterilidad h71i: cumple con los requisitos. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumple con los requisitos. pH h791iDisolver el contenido de 1 vial en 60 mL de Agua para Inyeccio n USP: el pH esta entre 8,8 y 11,0. Agua, Me todo Ia h921i: no ma s de 3,0%. Compuestos relacionados Fase mo vil y DiluyenteProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarTransferir 10 mg de ER Compuesto Relacionado B de Dantroleno USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL y disolver en 2,5 mL de dimetilformamida. Agregar 2,5 mL de a cido ace tico glacial y diluir a volumen con acetona para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,2 mg por mL. Diluir con Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,002 mg por mL del compuesto relacionado B de dantroleno. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n. Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas para el compuesto relacionado B de dantroleno no es ma s de 5,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de compuesto relacionado B de dantroleno en la porcio n de Dantroleno So dico para Inyeccio n tomada, por la fo rmula: 100(rU / rS)(CS / CT) en donde rU es la respuesta del pico para el compuesto relacionado B de dantroleno obtenido a partir de la Solucio n de prueba; rS es la respuesta del pico correspondiente en la Solucio n esta ndar; CS es la concentracio n, en mg por mL, del compuesto relacionado B de dantroleno en la Solucio n esta ndar; y CT es la concentracio n, en mg por mL, de dantroleno so dico hidrato en la Solucio n de prueba. No se encuentra ma s de 8% de compuesto relacionado B de dantroleno.
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre dantroleno y el compuesto relacionado C de dantroleno no es menor de 8. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a no es mayor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 1,0%. [NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos aproximados son 0,68 para el compuesto relacionado B de dantroleno, 1,24 para el compuesto relacionado C de dantroleno y 1,0 para dantroleno.] ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos de dantroleno. Calcular el porcentaje de dantroleno (C14H10N4O5) en la porcio n de Dantroleno So dico tomada, por la fo rmula: 100(CS / CU)(rU / rS) en donde CS es la concentracio n, en mg por mL, de dantroleno en la Preparacio n esta ndar; CU es la concentracio n, en mg por mL, de Dantroleno So dico en la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las respuestas de los picos para dantroleno obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
4096
Desmopresina / Monograf as Ociales
Otros requisitos: cumple con los requisitos en Inyectables h1i. Valoracio n Solucio n amortiguadoraDisolver 3,3 mg de acetato de amonio en 1 L de agua y ajustar con a cido ace tico a un pH de 4,5 + 0,1. Solucio n APreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora, acetonitrilo y a cido ace tico glacial (120 : 80 : 7). Solucio n BPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de acetonitrilo y agua (70 : 30). Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y Solucio n B, segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). DiluyentePreparar una mezcla de acetonitrilo y agua (60 : 40). Preparacio n esta ndarTransferir 40 mg de ER Dantroleno USP pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL y disolver en 2,5 mL de dimetilformamida. Agregar 2,5 mL de a cido ace tico glacial y diluir a volumen con acetona para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,8 mg por mL. Diluir esta solucio n con Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,08 mg por mL de dantroleno. Preparacio n de valoracio nUsando 70 mL de agua para cada vial, transferir a un matraz adecuado todo el contenido del nu mero requerido de viales necesarios para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg de dantroleno so dico hidrato por mL. Someter a ultrasonido durante de 2 a 5 minutos para disolver la muestra. Diluir a volumen con Diluyente. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 365 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Tiempo (minutos) 08 88,1 8,113 1313,1 13,120 Solucio n A (%) 100 100?0 0 0?100 100 Solucio n B (%) 0 0?100 100 100?0 0 Elucio n isocra tica gradiente lineal isocra tica gradiente lineal re-equilibrio
&Acetato
de Desmopresina
C48H68N14O14S2 C48H68N14O14S2 xH2O (anhidra) 1129,27 [62288-83-9]. Vasopressin, 1-(3-mercaptopropanoic acid)-8-D-arginine-, monoacetate (salt). Monoacetato (sal) del 1-(3-a cido mercaptopropio nico)-8-D-argininavasopresina. Trihidrato 1183,31 [62357-86-2].
El Acetato de Desmopresina es una hormona sinte tica
nonapept dica que tiene propiedades antidiure ticas. Es un ana logo sinte tico de la vasopresina. Contiene no menos de 95,0 por ciento y no ma s de 105,0 por ciento de desmopresina (C46H64N14O12S2), calculado con respecto a la sustancia anhidra, exenta de a cido ace tico.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables, preferentemente de vidrio Tipo I, protegidos de la luz. Almacenar a una temperatura que no exceda de 258, preferiblemente entre 28 y 88. EtiquetadoEtiquetar para indicar la potencia de desmopresina, en mg. Esta ndares de referencia USP h11iER Acetato de Desmopresina USP. Identicacio n A: Ana lisis espectral de masas Diluyente: una mezcla de agua y metanol (1 : 1). Solucio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Acetato de Desmopresina USP en Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 5 mg por mL. Solucio n de pruebaDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de Acetato de Desmopresina en Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 5 mg por mL. [NOTALa concentracio n nal de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba se puede ajustar de acuerdo con la sensibilidad del espectro metro de masas usado en la prueba.] Sistema espectrome trico de masas (ver Espectrometr a de Masas h736i)El Espectro metro LC/MS esta equipado con una interfase de electrospray, modo de io n positivo, sistema de infusio n y capacidad de MS/MS. ProcedimientoInfundir por separado la Solucio n esta ndar y la Solucio n de prueba aproximadamente a 5 mL por minuto en el espectro metro de masas. Obtener los espectros MS y MS/MS optimizados del pico con relacio n masa-carga de 1069. Para los espectros MS, se debe observar el pico principal con relacio n masacarga de 1069. Para los espectros MS/MS, los iones producto esta n presentes con relaciones masa-carga de aproximadamente 641, 742 y 995. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Rotacio n espec ca h781Si: entre 728 y 828, calculada con respecto a la sustancia anhidra exenta de a cido ace tico. Solucio n de prueba: 5 mg por mL, en a cido ace tico diluido. L mites microbianos h61iEl recuento total de microorganismos aerobios no excede de 100 ufc por g.
Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar, y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a no es mayor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas para dantroleno no es ma s de 1,5%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos para dantroleno. Calcular el porcentaje de C14H9N4NaO5 3H2O en la porcio n de Dantroleno So dico para Inyeccio n tomada, por la fo rmula: (399,29/314,25)(rU / rS)(CS / CU) en donde 399,29 y 314,25 son los pesos moleculares de dantroleno so dico hidrato y dantroleno, respectivamente; rU y rS son las respuestas de los picos para dantroleno obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente; CS es la concentracio n, en mg por mL, de dantroleno en la Preparacio n esta ndar; y CU es la concentracio n, en mg por mL, de dantroleno so dico hidrato en la Preparacio n de valoracio n.&1S (USP30)
Monograf as Ociales / Desmopresina
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Agua, Me todo Ic h921i: no ma s de 6,0%. Contenido de aminoa cidos (ver Art culos Obtenidos por Biotecnolog aAna lisis de Aminoa cidos h1052i) NOTAEl me todo que se describe a continuacio n se ofrece so lo con nes informativos; se puede usar cualquier me todo de ana lisis de aminoa cidos validado. Sin embargo, independientemente del me todo utilizado, se deben cumplir las proporciones relativas de aminoa cidos. Solucio n APreparar una solucio n con concentraciones nales de 20 mM de acetato de sodio, 0,2% (v/v) de trietilamina y 0,3% (v/v) de tetrahidrofurano. Solucio n BPreparar una solucio n que contenga 20% (v/v) de acetato de sodio 100 mM, 40% (v/v) de metanol y 40% (v/v) de acetonitrilo. Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y Solucio n B segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n amortiguadora de boratoTransferir 12,4 g de a cido bo rico a un matraz volume trico de 500 mL y suspenderlos en 300 mL de agua. Agregar 100 mL de hidro xido de potasio 1 N y mezclar. Ajustar con hidro xido de potasio 1 N a un pH de 10,4, diluir a volumen con agua y mezclar. Almacenar en un envase de pla stico cerrado. Solucio n de norvalinaPreparar una solucio n de norvalina 4 mM. Solucio n de DTDPA al 2%Transferir 2 g de a cido ditiodipropio nico a un matraz volume trico de 100 mL. Disolver y diluir a volumen con agua. Solucio n de sarcosinaPreparar una solucio n de sarcosina 4 mM. Fenol al 0,1%Preparar una solucio n que contenga fenol al 0,1% (p/v) en a cido clorh drico 6 N. Reactivo OPAPreparar una solucio n que contenga 10 mg por mL de o-ftalaldeh do y 10 mg por mL de a cido 3-mercaptopropio nico en Solucio n amortiguadora de borato. Reactivo FMOCPreparar una solucio n que contenga 2,5 mg por mL de 9-uorenilmetilcloroformiato en acetonitrilo. Solucio n de calibracio nPreparar una mezcla donde las concentraciones nales de los aminoa cidos son las siguientes: aproximadamente 2,50 mM de glicina; aproximadamente 2,50 mM para la forma L de los aminoa cidos lisina, histidina, arginina, a cido aspa rtico, treonina, serina, a cido gluta mico, prolina, alanina, valina, metionina, isoleucina, leucina, tirosina y fenilalanina, y aproximadamente 1,25 mM de L-cistina. Transferir una al cuota de 1 mL de esta solucio n a un vial adecuado y agregar 5 mL de Solucio n de norvalina y 5 mL de Solucio n de DTDPA al 2%. Evaporar la al cuota hasta sequedad y agregar 300 mL de Fenol al 0,1%. Mezclar y alternar entre el purgado de la ca mara gaseosa del vial con gas nitro geno y la reduccio n de la presio n a 2 mm de mercurio por un total de dos ciclos de purga y vac o. Purgar la muestra con gas nitro geno una vez ma s y reducir la presio n a 1,5 mm de mercurio. Sellar y calentar la muestra a 1108 durante 24 horas. Abrir el vial y evaporar hasta sequedad. Disolver el residuo en 115 mL de Solucio n amortiguadora de borato, y agregar 5 mL de Solucio n de sarcosina. Centrifugar durante 2 minutos y transferir el sobrenadante a un vial limpio. Retirar una al cuota de 6 mL y agregar 1 mL de Reactivo OPA. Mezclar y agregar 1 mL de Reactivo FMOC. Mezclar, agregar 28 mL de agua y mezclar de nuevo. Solucio n de pruebaDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de Acetato de Desmopresina en agua para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1,00 mg por mL. Agregar 5 mL de Solucio n de norvalina y 5 mL de Solucio n de DTDPA al 2% a una al cuota de 1 mL, y preparar segu n se indica en Solucio n de calibracio n, comenzando donde dice Evaporar la al cuota a sequedad y agregar 300 mL de Fenol al 0,1%. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un muestreador automa tico termorregulado, ajustado a 48, que sea capaz de agregar y mezclar agentes derivatizantes; un detector de longitud de onda variable ajustado a 262 nm y 338 nm; y una columna de 2,1 mm 6 20 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 0,45 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 408. Programar el cromato grafo del siguiente modo.
Tiempo (minutos) 0 017 1718,10 18,1024 2425 2535
Solucio n A (%) 100 100?40 40?0 0 0?100 100
Solucio n B (%) 0 0?60 60 ?100 100 100?0 0
Elucio n equilibrio gradiente lineal gradiente lineal isocra tica gradiente lineal reequilibrio
Procesar e inyectar la Solucio n de calibracio n y la Solucio n de prueba, y registrar la respuesta de los picos para los derivados de aminoa cidos individuales segu n se indica en el Procedimiento: el orden de elucio n de los derivados de aminoa cidos es a cido aspa rtico, a ` cido gluta mico, serina, histidina, glicina, treonina, ciste na (cistina reducida), alanina, arginina, tirosina, valina, metionina, norvalina, fenilalanina, isoleucina, leucina, lisina y prolina; la resolucio n, R, entre los pares de aminoa cidos histidina y glicina, alanina y arginina, y valina y metionina en la Solucio n de calibracio n no es menor de 1; y la desviacio n esta ndar relativa para tres inyecciones repetidas de la Solucio n de calibracio n no es ma s de 15% para ciste na, lisina y prolina, y no ma s de 10% para todos los otros aminoa cidos. El a rea del pico de norvalina en la Solucio n de prueba debe ser no menos de 80% y no ma s de 120% de la encontrada en la Solucio n de calibracio n. ProcedimientoCon el muestreador automa tico, retirar por separado volu menes iguales (aproximadamente 6 mL) de la Solucio n de calibracio n y de la Solucio n de prueba, y agregar a cada uno 1 mL de Reactivo OPA. Mezclar y agregar a cada uno 1 mL de Reactivo FMOC. Mezclar, agregar 28 mL de agua a cada uno, mezclar de nuevo e inyectar todo el volumen en el cromato grafo. Registrar las a reas de los picos principales e identicar los aminoa cidos. Con la Solucio n de calibracio n como esta ndar, expresar el contenido de cada aminoa cido en moles. Considerando el contenido de arginina igual a 1, calcular las proporciones relativas de los aminoa cidos: a cido aspa rtico, a cido gluta mico, prolina, glicina y fenilalanina esta n entre 0,95 y 1,05; tirosina esta entre 0,7 y 1,05; ciste na esta entre 0,30 y 1,05; lisina, isoleucina y leucina esta n ausentes; y no se encuentran ma s que trazas de otros aminoa cidos. L mite de a cido ace tico Solucio n de esta ndar internoTransferir aproximadamente 16 mL de a cido clorh drico a un matraz volume trico de 1000 mL que contenga aproximadamente 500 mL de agua y mezclar. Agregar aproximadamente 0,5 mL de a cido propio nico, medido con exactitud, diluir a volumen con acetonitrilo y mezclar. Solucio n esta ndarTransferir aproximadamente 1,049 g de a cido ace tico, medidos con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL. Diluir a volumen con Solucio n de esta ndar interno y mezclar. Transferir 2,5 mL de la solucio n resultante a un matraz volume trico de 50 mL. Diluir a volumen con Solucio n de esta ndar interno y mezclar. Solucio n de pruebaDisolver aproximadamente 5 mg de Acetato de Desmopresina, pesados con exactitud, en 0,5 mL de Solucio n de esta ndar interno y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de gases con un detector de ionizacio n a la llama y una columna capilar de s lice fundida de 0,32 mm 6 30 m recubierta con una pel cula de 0,25 mm de fase G35. El gas transportador es helio, que uye a una velocidad de aproximadamente 3 mL por minuto, y la relacio n de particio n de ujo es 20 : 3. Mantener la temperatura de la columna a 1208 y las temperaturas del inyector y del detector a 2508. Inyectar en el cromato grafo seis inyecciones repetidas de la Solucio n esta ndar y registrar las a reas de los picos segu n se indica en el Procedimiento: el orden de elucio n es a cido ace tico seguido por a cido propio nico; la resolucio n, R, entre a cido ace tico y a cido propio nico no es menor de 5,0; el factor de asimetr a para a cido ace tico no es mayor de 3,0; y la desviacio n esta ndar relativa del cociente entre las a reas de los picos de a cido ace tico y de a cido propio nico no es ma s de 15%.
4098
Desmopresina / Monograf as Ociales
ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 1,0 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de a cido ace tico en la porcio n de Acetato de Desmopresina tomada, por la fo rmula: 100(CS / CU)(RU / RS) en donde CS es la concentracio n, en mg por mL, de a cido ace tico en la Solucio n esta ndar; CU es la concentracio n, en mg por mL, de acetato de desmopresina en la Solucio n de prueba; y RU y RS son los cocientes entre las a reas de los picos de a cido ace tico y del esta ndar interno obtenidas a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente: se encuentra no menos de 3% y no ma s de 8,0%. Pureza cromatogra ca Fase mo vil y Solucio n de aptitud del sistemaProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Acetato de Desmopresina USP en Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1 mg por mL. Solucio n de pruebaDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de Acetato de Desmopresina en Fase Mo vil para preparar una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 200 mg por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto y la columna se mantiene a 308. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y la Solucio n de aptitud del sistema, y registrar las a reas de los picos segu n se indica en el Procedimiento: el pico de desmopresina eluye antes que el pico de oxitocina; la resolucio n, R, entre desmopresina y oxitocina no es menor de 1,5; el factor de asimetr a no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa del a rea del pico de desmopresina para inyecciones repetidas de la Solucio n esta ndar no es ma s de 5,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 200 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir la respuesta para cada pico, excepto para el pico principal de desmopresina en el cromatograma de la Solucio n de prueba. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Acetato de Desmopresina tomada, por la fo rmula: 100(CS / CU)(ri / rS) en donde CS es la concentracio n, en mg por mL, de ER Acetato de Desmopresina USP, calculada con respecto a la sustancia anhidra exenta de a cido ace tico, en la Solucio n esta ndar; CU es la concentracio n, en mg por mL, de Acetato de Desmopresina, calculada con respecto a la sustancia anhidra exenta de a cido ace tico, en la Solucio n de prueba; ri es la respuesta del pico de una impureza individual en el cromatograma obtenido a partir de la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico de desmopresina obtenido a partir de la Solucio n esta ndar: no se encuentra ma s de 0,5% de cualquier impureza individual y la suma de todas las impurezas es menos de 1,5%. Valoracio n Solucio n amortiguadoraDisolver 3,4 g de fosfato monoba sico de potasio y 2,0 g de 1-heptanosulfonato de sodio en 1000 mL de agua. Ajustar el pH a 4,50 + 0,05 con a cido fosfo rico o hidro xido de sodio, segu n sea necesario. Pasar a trave s de un ltro de 0,45 mm. Fase mo vilMezclar 780 mL de Solucio n amortiguadora con 220 mL de acetonitrilo y desgasicar. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). [NOTAEl tiempo de retencio n de desmopresina es muy sensible a la composicio n de la Fase mo vil.] Preparacio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Acetato de Desmopresina USP en Fase Mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 20 mg por mL. Preparacio n de valoracio nDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de Acetato de Desmopresina en Fase Mo vil para preparar una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 20 mg por mL.
Solucio n de aptitud del sistemaDisolver aproximadamente 1 mg de oxitocina, pesado con exactitud, en un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Transferir 5,0 mL de la solucio n resultante y 5,0 mL de Preparacio n de valoracio n a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. Mantener la temperatura de la columna a 308. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y la Solucio n de aptitud del sistema, y registrar las a reas de los picos segu n se indica en el Procedimiento: el pico de desmopresina eluye antes que el pico de oxitocina; la resolucio n, R, entre los picos de desmopresina y oxitocina no es menor de 1,5; el factor de asimetr a no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa del a rea del pico de desmopresina para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, ambas recie n preparadas, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos de desmopresina. Calcular el porcentaje de C46H64N14O12S2 en la porcio n de Acetato de Desmopresina tomada, por la fo rmula: 100(CS / CU)(rU / rS) n, en mg por mL, de ER Acetato de en donde CS es la concentracio Desmopresina USP, calculada con respecto a la sustancia anhidra exenta de a cido ace tico, en la Preparacio n Esta ndar; CU es la concentracio n, en mg por mL, de Acetato de Desmopresina, calculada con respecto a la sustancia anhidra exenta de a cido ace tico, en la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las respuestas de los picos de desmopresina obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
&Acetato
de Desmopresina, Inyeccio n
La Inyeccio n de Acetato de Desmopresina es una

solucio n este ril de Acetato de Desmopresina en un diluyente apropiado. Puede contener conservantes adecuados. Posee una actividad, por mL, que es no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad d eclarada de desmopresina (C46H64N14O12S2), calculados con respecto a la sustancia anhidra, exenta de a cido ace tico.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Proteger de la luz. Almacenar a una temperatura de entre 28 y 88. EtiquetadoEtiquetar indicando la potencia, en mg, de desmopresina. Esta ndares de referencia USP h11iER Acetato de Desmopresina USP. ER Endotoxina USP. Identicacio nEl tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el obtenido en el cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Endotoxinas bacterianas h85iNo contiene ma s de 10 Unidades USP de Endotoxinas por mg de desmopresina.
Monograf as Ociales / Desogestrel
4099
Esterilidad h71iCumple con los requisitos cuando se prueba segu n se indica en Filtracio n por Membrana en Prueba de Esterilidad del Producto a Examinar. pH h791i: entre 3,5 y 6,0. Part culas h788i: cumple con los requisitos para inyecciones de pequen o volumen. Otros requisitosCumple con los requisitos en Volumen en Envase en Inyectables h1i. Valoracio n Solucio n AmortiguadoraDisolver 4,9 g de a cido fosfo rico, pesados con exactitud, en agua. Diluir con agua hasta 1000 mL. Ajustar con trietilamina a un pH de 3,5. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora y acetonitrilo (83,5 : 16,5). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n ATransferir 9 g de cloruro de sodio, pesados con exactitud, a un matraz de 1000 mL, disolver y diluir a volumen con agua. Ajustar con a cido clorh drico a un pH entre 3,5 y 5,0. Solucio n BTransferir 9 g de cloruro de sodio, pesados con exactitud, a un matraz de 1000 mL, disolver en agua y agregar 5 g de clorobutanol. Diluir a volumen con agua y ajustar con a cido clorh drico a un pH entre 3,5 y 5,0. Preparacio n esta ndarDisolver en una cantidad, pesada con exactitud, de ER Acetato de Desmopresina USP en agua para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1 mg por mL. Diluir esta solucio n con Solucio n A o Solucio n B, segu n se indica en la Preparacio n de valoracio n, para obtener una solucio n con una concentracio n de desmopresina equivalente a la de la Preparacio n de valoracio n. Preparacio n de valoracio nPara inyecciones con concentraciones de desmopresina entre 4 mg por mL y 0,1 mg por mL, usar Inyeccio n de Acetato de Desmopresina, no diluida. Para inyecciones con concentraciones que excedan 0,1 mg por mL y sin conservantes, diluir 1000 mL de Inyeccio n de Acetato de Desmopresina, medidos con exactitud, con 10 mL de Solucio n A. Para inyecciones con concentraciones que excedan 0,1 mg por mL y con conservantes, diluir 1000 mL de Inyeccio n de Acetato de Desmopresina, medidos con exactitud, con 10 mL de Solucio n B. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 215 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo aproximadamente 50 mL de la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a no es mayor de 1,4; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 1,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, recientemente preparadas, y registrar los cromatogramas para un tiempo total que no sea menos de 2,5 veces el tiempo de retencio n del pico de desmopresina. Calcular la cantidad de desmopresina (C46H64N14O12S2), en mg, en el volumen de Inyeccio n tomado por la fo rmula: CD(rU / rS) en donde C es la concentracio n de desmopresina, en mg por mL, en la Preparacio n esta ndar; D es el factor de dilucio n usado para preparar la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las respuestas de los picos para desmopresina obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
&Desogestrel
y Etinil Estradiol, Tabletas
Las Tabletas de Desogestrel y Etinil Estradiol contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de las cantidades declaradas de desogestrel (C22H30O) y de etinil estradiol (C20H24O2).
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. EtiquetadoCuando se especica ma s de una prueba de Disolucio n, el etiquetado indica la prueba de Disolucio n usada so lo si no se utiliza la Prueba 1. Esta ndares de Referencia USP h11iER Desogestrel USP. ER Etinil Estradiol USP. Identicacio n A: Prueba de Identicacio n por Cromatograf a en Capa Delgada h201i Solucio n de pruebaTransferir un nu mero de Tabletas, equivalente a 1,5 mg de desogestrel y 0,3 mg de etinil estradiol a un recipiente adecuado, agregar 50 mL de agua y someter a ultrasonido hasta que las Tabletas se desintegren (si fuera necesario, quitar cualquier recubrimiento con agua antes de someter a ultrasonido). Colocar la muestra en un embudo de separacio n, agregar 25 mL de e ter y agitar bien para extraer los componentes activos. Empleando una pipeta de vidrio, transferir la capa de e ter a un vaso de precipitados limpio y evaporar aproximadamente a 10 mL. Solucio n esta ndarDisolver una cantidad de ER Desogestrel USP y ER Etinil Estradiol USP en e ter para obtener una solucio n que contenga aproximadamente 0,15 mg por mL y 0,03 mg por mL, respectivamente. Volumen de aplicacio n: 30 mL. Fase mo vil: una mezcla de cloroformo y alcohol (96 : 4). ProcedimientoProceder segu n se indica en el cap tulo y luego secar al aire. Rociar la placa con una mezcla de metanol y a cido sulfu rico (50 : 50), colocar en un horno a 1058 durante aproximadamente 5 minutos y examinar la placa: cumple con los requisitos. B: Los tiempos de retencio n de los picos principales en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponden con los del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Disolucio n h711i
PRUEBA 1
Medio: lauril sulfato de sodio al 0,05% con un contenido de valoracio n de no menos de 95%; 500 mL. Aparato 2: 50 rpm. Tiempo: 30 minutos. Determinar las cantidades de desogestrel (C22H30O) y de etinil estradiol (C20H24O2) disueltas empleando el siguiente me todo. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de acetonitrilo y solucio n amortiguadora de fosfato de potasio 20 mM de pH 6,0 (50 : 50). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n madre del esta ndar de desogestrelDisolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Desogestrel USP, y diluir cuantitativamente con metanol, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,25 mg por mL. Solucio n madre del esta ndar de etinil estradiolDisolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Etinil Estradiol USP, y diluir cuantitativamente con metanol, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,25 mg por mL. Solucio n esta ndar diluida de desogestrelTransferir 1,0 mL de Solucio n madre del esta ndar de desogestrel a un matraz volume trico de 50 mL. Diluir a volumen con Medio y mezclar. Esta solucio n contiene aproximadamente 0,005 mg de ER Desogestrel USP por mL.
4100
Diazepam / Monograf as Ociales
Solucio n esta ndar diluida de etinil estradiolTransferir 1,0 mL de Solucio n madre del esta ndar de etinil estradiol a un matraz volume trico de 50 mL. Diluir a volumen con Medio y mezclar. Esta solucio n contiene aproximadamente 0,005 mg de ER Etinil Estradiol USP por mL. Solucio n esta ndarDiluir porciones cuantitativas de Solucio n esta ndar diluida de desogestrel y de Solucio n esta ndar diluida de etinil estradiol con Medio para obtener una solucio n que contenga aproximadamente 0,3 mg por mL y 0,06 mg por mL de ER Desogestrel USP y ER Etinil Estradiol USP, respectivamente. Solucio n de pruebaCentrifugar una porcio n de la muestra de disolucio n y usar el sobrenadante transparente. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 210 nm (para el ana lisis de desogestrel); un detector espectrouorome trico (para el ana lisis de etinil estradiol) con una longitud de onda de excitacio n de 285 nm y una longitud de onda de emisio n de 310 nm; una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L11; y una guarda columna de 4,6 mm 6 12,5 mm tambie n rellena con material L11. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,2 para etinil estradiol y 1,0 para desogestrel, y la desviacio n esta ndar relativa no es ma s de 3,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 200 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular el porcentaje de C22H30O y de C20H24O2 disuelto, por la fo rmula: (0,5C)(100/K)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Desogestrel USP o ER Etinil Estradiol USP en la Solucio n esta ndar; K es la cantidad declarada, en mg por Tableta, de C22H30O o C20H24O2; y rU y rS son las respuestas de los picos de desogestrel o etinil estradiol obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente. ToleranciasNo menos de 80% (Q) de las cantidades declaradas de C22H30O y de C20H24O2 se disuelve en 30 minutos. PRUEBA 2Si el producto cumple con esta prueba, el etiquetado indica que cumple con la Prueba de Disolucio n 2 de la USP. Medio: lauril sulfato de sodio al 0,3%; 500 mL. Aparato 2: 100 rpm. Tiempo: 30 minutos. Determinar las cantidades de desogestrel (C22H30O) y de etinil estradiol (C20H24O2) disueltas, por el me todo cromatogra co usado en Prueba 1. ToleranciasNo menos de 80% (Q) de las cantidades declaradas de C22H30O y de C20H24O2 se disuelve en 30 minutos. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos de Uniformidad de Contenido con respecto al desogestrel y al etinil estradiol. Valoracio n Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de acetonitrilo y solucio n amortiguadora de fosfato de potasio 20 mM de pH 6,0 (50 : 50). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). DiluyentePreparar una mezcla de acetonitrilo y agua (50 : 50). Solucio n madre del esta ndar de desogestrelDisolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Desogestrel USP, y diluir cuantitativamente con metanol, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,3 mg por mL. Solucio n madre del esta ndar de etinil estradiolDisolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Etinil Estradiol USP, y diluir cuantitativamente con metanol, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,3 mg por mL. Preparacio n esta ndarDiluir al cuotas apropiadas de Solucio n madre del esta ndar de desogestrel y de Solucio n madre del esta ndar de etinil estradiol con Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,6 mg por mL y 0,12 mg por mL de ER Desogestrel USP y ER Etinil Estradiol USP, respectivamente.
Preparacio n de valoracio nTransferir 20 Tabletas a un matraz volume trico de 200 mL. Agregar aproximadamente 120 mL de Diluyente y agitar durante aproximadamente 30 minutos. Diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Centrifugar una porcio n de la muestra y transferir un volumen, medido con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL para obtener una concentracio n nal de aproximadamente 0,6 mg por mL de desogestrel. Diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 210 nm (para el ana lisis de desogestrel); un detector espectrouorome trico (para el ana lisis de etinil estradiol) con una longitud de onda de excitacio n de 285 nm y una longitud de onda de emisio n de 310 nm; una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L11; y una guarda columna de 4,6 mm 6 12,5 mm tambie n rellena con material L11. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,2 para etinil estradiol y 1,0 para desogestrel; el factor de asimetr a para ambos analitos no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 200 mL) de la Preparacio n esta ndar y la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular el porcentaje de desogestrel (C22H30O) y de etinil estradiol (C20H24O2) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100(CS/CU)(rU / rS) en donde CS es la concentracio n, en mg por mL, de ER Desogestrel USP o ER Etinil Estradiol USP en la Preparacio n esta ndar; CU es la concentracio n, en mg por mL, de desogestrel o etinil estradiol en la Preparacio n de valoracio n basada en la cantidad declarada; y rU y rS son las respuestas de los picos de desogestrel o etinil estradiol obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Diazepam, Ca psulas de Liberacio n Prolongada
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11iER Diazepam USP. Etilparabeno USP.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Valoracio n Fase mo vil y Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en Valoracio n en Diazepam. Solucio n de esta ndar interno&Disolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Etilparabeno USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1,5 mg por mL.&1S (USP30) Preparacio n esta ndarDisolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Diazepam USP y diluir cuantitativamente con metanol para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1 mg por mL y mezclar. Transferir 15,0 mL de esta solucio n y 5,0 mL de Solucio n de esta ndar interno a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con metanol y mezclar. Preparacio n de valoracio nPesar y mezclar el contenido de no menos de 20 Ca psulas. Transferir una porcio n de la mezcla, pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 15 mg de diazepam, a un matraz volume trico de 100 mL. Agregar 5,0 mL de Solucio n de esta ndar interno y aproximadamente 45 mL de
&
ER
Monograf as Ociales / Didanosina
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metanol. Agitar meca nicamente durante 30 minutos, diluir a volumen con metanol y mezclar. Centrifugar aproximadamente 30 mL de esta solucio n durante 5 minutos y ltrar. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas correspondientes a los picos principales. &El factor de asimetr a para diazepam no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa del pico de diazepam para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. [NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,5 para etilparabeno y 1,0 para diazepam.]&1S (USP30) Calcular la cantidad, en mg, de diazepam (C16H13ClN2O) en la porcio n de Ca psulas tomada, por la fo rmula: 100C(RU / RS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Diazepam USP en la Preparacio n esta ndar; y RU y RS son los cocientes de respuesta entre los picos obtenidos de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
Preparacio n de valoracio nTransferir una cantidad, pesada con exactitud, de 50 mg de Didanosina a un matraz volume trico de 500 mL. Disolver y diluir a volumen con agua. Mezclar la muestra durante 1 hora para disolver por completo antes de usar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna no es menos de 6000 platos teo ricos; el factor de asimetr a no es mayor de 2,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. [NOTAA los efectos informativos, el tiempo de retencio n de didanosina es entre 7 y 11 minutos.] ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales Calcular el porcentaje de C10H12N4O3 en la porcio n de Didanosina tomada, por la fo rmula: 500(C/W)(100)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Didanosina USP en la Preparacio n esta ndar; W es el peso, en mg, de Didanosina tomado para la Preparacio n de valoracio n; 100 es el factor de conversio n a porcentaje; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
&Didanosina
&Didanosina
C10H12N4O3 236,23 Inosine, 2,3-dideoxy-. 2,3-Dideoxiinosina [69655-05-6].
para Solucio n Oral
La Didanosina contiene no menos de 98,0 por ciento y

no ma s de 102,0 por ciento de C10H12N4O3, calculado con respecto a la sustancia anhidra.
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados y almacenar a temperatura ambiente controlada. Esta ndares de referencia USP h11iER Didanosina USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Agua, Me todo I h921i: no ma s de 2,0%. Residuo de incineracio n h281i: no ma s de 0,2%. Metales pesados, Me todo II h231i: no ma s de 20 ppm. Rotacio n espec ca h781Si: entre 288 y 248, anhidra. Solucio n de prueba: 10 mg por mL, en agua. Valoracio n Solucio n amortiguadora de acetato de amonio 0,01MDisolver 1,54 g de acetato de amonio en un matraz volume trico de 2000 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora de acetato de amonio 0,01M y acetonitrilo (21 : 1). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver en agua una cantidad, pesada con exactitud, de ER Didanosina USP para obtener una solucio n que contenga 0,1 mg por mL.
La Didanosina para Solucio n Oral, cuando se reconstituye segu n se indica en el etiquetado, produce una solucio n de 10 mg por mL que contiene no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de didanosina (C10H12N4O3).
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Almacenar a una temperatura entre 158 y 308. EtiquetadoLa etiqueta contiene instrucciones para la reconstitucio n del polvo e indica la cantidad equivalente de C10H12N4O3 en un volumen dado de la Solucio n Oral obtenida despue s de la reconstitucio n. Esta ndares de referencia USP h11iER Didanosina USP. ER Compuesto Relacionado A de Didanosina USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Agua, Me todo Ia h921i: no ma s de 3%. Volumen de entrega h698i: cumple con los requisitos. Compuestos relacionados Fase mo vil, Sistema cromatogra co y ProcedimientoProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarDisolver en agua una cantidad, pesada con exactitud, de ER Compuesto Relacionado A de Didanosina USP para obtener una solucio n que contenga 5 mg por mL. Hacer diluciones sucesivas si fuera necesario. [NOTAUsar esta solucio n dentro de las 48 horas de su preparacio n.]
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Difenoxilato / Monograf as Ociales
Solucio n de pruebaTransferir el contenido de 1 envase de Didanosina para Solucio n Oral a un matraz volume trico adecuado y disolver en agua para obtener una solucio n con una concentracio n de aproximadamente 4 mg por mL. [NOTAUsar esta solucio n dentro de las 24 horas de su preparacio n.] Solucio n de prueba diluidaDiluir cuantitativamente la Solucio n de prueba con agua, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n de aproximadamente 0,1 mg por mL. Calcular el porcentaje del compuesto relacionado A de didanosina (hipoxantina) en la Didanosina para Solucio n Oral en comparacio n con la cantidad declarada de didanosina, por la fo rmula: [100(C/1000)(rU / rS)VD]/L en donde 100 es el factor de conversio n a porcentaje; C es la concentracio n del compuesto relacionado A de didanosina en la Solucio n esta ndar, en mg por mL; 1000 es el factor de conversio n (de mg a mg); rU y rS son las respuestas de los picos del compuesto relacionado A de didanosina en la Solucio n de prueba diluida y la Solucio n esta ndar, respectivamente; V es el volumen, en mL, de Didanosina para Solucio n Oral usado para preparar la Solucio n de prueba; D es el factor de dilucio n de la Solucio n de prueba diluida; y L es la cantidad declarada de didanosina expresada en mg: no se encuentra ma s de 1%. Valoracio n Solucio n amortiguadora de acetato de amonio 0,01 MDisolver 1,54 g de acetato de amonio en un matraz volume trico de 2000 mL, diluir a volumen con agua, mezclar y pasar a trave s de un ltro de 0,45 mm. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora de acetato de amonio 0,01 M y acetonitrilo (24 : 1). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver en agua una cantidad, pesada con exactitud, de ER Didanosina USP para obtener una solucio n que contenga 0,1 mg por mL. [NOTAUsar esta solucio n dentro de las 24 horas de su preparacio n.] Preparacio n de valoracio nTransferir el contenido de 1 frasco de Didanosina para Solucio n Oral a un matraz volume trico adecuado y diluir en diluciones sucesivas, si fuera necesario, para obtener una solucio n en agua de aproximadamente 0,1 mg por mL. [NOTAUsar esta solucio n dentro de las 24 horas de su preparacio n.] Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm, una columna anal tica de 4 mm 6 25 cm rellena con material L1 y una guarda columna de 4,6 mm 6 20 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el tiempo de retencio n de didanosina esta entre 7 y 11 minutos; la eciencia de la columna no es menos de 6000 platos teo ricos; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 1,5%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de didanosina (C10H12N4O3) en la porcio n de Didanosina para Solucio n Oral tomada, por la fo rmula: CD(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Didanosina USP en la Preparacio n esta ndar; D es el volumen, en mL, de Didanosina para Solucio n Oral usado para preparar la Preparacio n de valoracio n multiplicado por el factor de dilucio n de la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Clorhidrato de Difenoxilato y Sulfato de Atropina, Solucio n Oral
Cambio en la redaccio n: n de los dos picos Identicacio n&Los tiempos de retencio principales en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponden con los picos de atropina y difenoxilato en el cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n.&1S (USP30)
Eliminar lo siguiente: Valoracio n de clorhidrato de difenoxilatoTransferir un volumen de Solucio n Oral medido con exactitud, que equivalga aproximadamente a 100 mg de clorhidrato de difenoxilato, a un separador, agregar 4 mL de a cido clorh drico 3 N y extraer con seis porciones de cloroformo de 30 mL. Lavar los extractos clorofo rmicos combinados con 25 mL de agua y desechar el lavado. Transferir el cloroformo a un vaso de precipitados y evaporar casi hasta sequedad. Agregar 100 mL de a cido ace tico glacial y 4 mL de acetato mercu rico SR al vaso de precipitados y valorar con a cido perclo rico 0,05 N en dioxano SV, determinando potenciome tricamente el punto nal. Cada mL de a cido perclo rico 0,05 N equivale a 24,45 mg de clorhidrato de difenoxilato (C30H32N2O2 HCl).&1S (USP30)
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Eliminar lo siguiente: Valoracio n de sulfato de atropina Solucio n amortiguadora de pH 2,8Disolver 1,9 g de a cido aminoace tico y 1,5 g de cloruro de sodio en 250 mL de agua. Ajustar hasta un pH de 2,8 mediante la adicio n gradual de aproximadamente 85 mL de a cido clorh drico 0,1 N. Solucio n de esta ndar internoTransferir aproximadamente 20 mg de bromhidrato de homatropina a un matraz volume trico de 200 mL, disolver y diluir a volumen con agua, y mezclar. Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 25 mg de ER Sulfato de Atropina USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 200 mL. Disolver y diluir a volumen con agua y mezclar. Pipetear 2 mL de la solucio n resultante y transferir a un separador de 125 mL que contenga aproximadamente 50 mL de agua. Agregar 2,0 mL de Solucio n de esta ndar interno, 10,0 mL de Solucio n amortiguadora de pH 2,8 y 25 mL de cloruro de metileno saturado con agua. Tapar, agitar durante 2 minutos y permitir que las capas se separen. Desechar la capa inferior orga nica. Repetir la extraccio n cuatro veces, utilizando porciones de 25 mL de cloruro de metileno saturado con agua cada vez, dejar que las capas se separen y desechar, cada vez, la capa orga nica. Agregar 3 mL de hidro xido de sodio 0,1 N a la capa acuosa restante y agitar brevemente. Utilizando un medidor de pH, ajustar la solucio n a un pH de 9,0 + 0,3. Inmediatamente, agregar 10 mL de cloruro de metileno saturado con agua, tapar y agitar. Transferir la capa orga nica inferior a un recipiente de 50 mL. Repetir la extraccio n dos veces ma s con porciones de 10 mL de cloruro de metileno saturado con agua, combinando los extractos orga nicos. Evaporar los extractos orga nicos hasta sequedad bajo una corriente de nitro geno. Disolver el residuo en 0,1 mL de cloruro de metileno. Preparacio n de valoracio nTransferir un volumen de Solucio n Oral medido con exactitud, que equivalga aproximadamente a 250 mg de sulfato de atropina, a un separador de 125 mL. Proceder segu n se indica para la Preparacio n esta ndar, comenzando donde dice Agregar 2,0 mL de Solucio n de esta ndar interno. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de gases con un detector de ionizacio n a la llama y una columna de vidrio de 4 mm 6 1,2 m rellena con fase G3 al 3% sobre soporte S1. Mantener la temperatura de la columna a 2308 y la temperatura del inyector y del detector a 2508. El gas transportador
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Monograf as Ociales / Difenoxilato
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es helio, que uye a una velocidad de 40 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre atropina y el esta ndar interno no es menor de 2,0 y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,5%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 2 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas correspondientes a los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de sulfato de atropina [(C17H23NO3)2 H2 SO4 H2O] por cada mL de la Solucio n Oral tomada, por la fo rmula: 2(694,85/676,83)(C/V)(RU / RS) en donde 694,85 y 676,83 son los pesos moleculares de sulfato de atropina monohidrato y de sulfato de atropina anhidro, respectivamente; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Sulfato de Atropina USP (corregida al monohidrato) en la Preparacio n esta ndar; V es el volumen, en mL, de la Solucio n Oral tomada; y RU y RS son los cocientes entre la respuesta del pico de atropina y la del esta ndar interno obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30) Agregar lo siguiente: Valoracio n Solucio n ATransferir 192 mg de 1-pentanosulfonato de sodio monohidrato a un recipiente adecuado, agregar 200 mL de agua y someter a ultrasonido para disolver. Agregar 800 mL de agua y 1,0 mL de a cido fosfo rico, y mezclar. Solucio n BTransferir 192 mg de 1-pentanosulfonato de sodio monohidrato a un recipiente adecuado, agregar 200 mL de agua y someter a ultrasonido para disolver. Agregar 800 mL de acetonitrilo, 1,0 mL de a cido fosfo rico y mezclar. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de la Solucio n B y la Solucio n A (66 : 34). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n madre de atropinaDisolver en alcohol deshidratado una cantidad, pesada con exactitud, de ER Sulfato de Atropina USP, y diluir cuantitativamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con alcohol deshidratado para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,04 mg por mL. Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 20 mg de ER Clorhidrato de Difenoxilato USP a un matraz volume trico de 200 mL, agregar aproximadamente 100 mL de alcohol deshidratado y someter a ultrasonido para disolver. Agregar con exactitud 5,0 mL de Preparacio n madre de atropina y 34 mL de agua, y mezclar. Dejar que la solucio n alcance la temperatura ambiente y diluir a volumen con alcohol deshidratado. Esta solucio n contiene aproximadamente 0,1 mg de clorhidrato de difenoxilato y aproximadamente 0,001 mg de sulfato de atropina por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir un volumen, medido con exactitud, de la Solucio n Oral, equivalente aproximadamente a 2,5 mg de clorhidrato de difenoxilato, basado en la cantidad declarada, a un matraz volume trico de 25 mL, lavar el interior de la pipeta con porciones pequen as de alcohol deshidratado, agregar los lavados al matraz, diluir a volumen con alcohol deshidratado y mezclar. Pasar una porcio n de la solucio n obtenida a trave s de un ltro PTFE con un taman o de poro de 0,45 mm, desechando los primeros mL y usar el ltrado transparente. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L10 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,7 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,35 para atropina y 1,0 para difenoxilato; la resolucio n, R, entre atropina y difenoxilato no es menor de 5.0; el factor de asimetr a no es mayor de 1,5 para atropina; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0% para difenoxilato y no ma s de 5,0% para atropina. [NOTASi se observa un factor de asimetr a signicativo para el pico de difenoxilato (mayor de 2,5), se recomienda mantener la temperatura de la columna a 258 para estabilizar el sistema.]
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ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de clorhidrato de difenoxilato (C30H32N2O2 HCl) en la porcio n de Solucio n Oral tomada, por la fo rmula: 25CD (rU / rS) en donde 25 es el volumen, en mL, de la Preparacio n de valoracio n; CD es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Difenoxilato USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos de difenoxilato obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. Calcular la cantidad, en mg, de sulfato de atropina [(C17H23NO3)2 H2SO4 H2O] en la porcio n de la Solucio n Oral tomada, por la fo rmula: (694,83/676,83)(25)CA (rU / rS) en donde 694,83 y 676,83 son los pesos moleculares de sulfato de atropina monohidrato y sulfato de atropina anhidro, respectivamente; 25 es el volumen, en mL, de la Preparacio n de valoracio n; CA es la concentracio n, en mg por mL, de ER Sulfato de Atropina USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos de atropina obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Clorhidrato de Difenoxilato y Sulfato de Atropina, Tabletas
Cambio en la redaccio n: n de los dos picos Identicacio n&Los tiempos de retencio principales en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponden con los picos de atropina y difenoxilato en el cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n.&1S (USP30)
Eliminar lo siguiente: Valoracio n de clorhidrato de difenoxilato Solucio n amortiguadora de fosfato de trietilamina de pH 2,7 Transferir aproximadamente 18 mL de trietilamina a un matraz volume trico de 2000 mL que contenga aproximadamente 1000 mL de agua y mezclar. Agregar aproximadamente 11,4 mL de a cido fosfo rico, mezclar y diluir a volumen con agua. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de acetonitrilo y Solucio n amortiguadora de fosfato de trietilamina de pH 2,7 (55 : 45). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver en Fase mo vil una cantidad pesada con exactitud de ER Clorhidrato de Difenoxilato USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,25 mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir a un matraz volume trico de 100 mL un nu mero de Tabletas contado con exactitud, que equivalga aproximadamente a 25 mg de clorhidrato de difenoxilato, agregar Fase mo vil y agitar meca nicamente durante aproximadamente 30 minutos hasta que las Tabletas se hayan desintegrado por completo. Diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L7. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para clorhidrato de difenoxilato no es ma s de 2,0%.
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Difenoxilato / Monograf as Ociales
ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 25 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas correspondientes a los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de clorhidrato de difenoxilato (C30H32N2O2 HCl) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: (L / D)C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Difenoxilato USP en la Preparacio n esta ndar; L es la cantidad declarada, en mg, de clorhidrato de difenoxilato, en cada Tableta; D es la concentracio n, en mg por mL, de clorhidrato de difenoxilato en la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las respuestas de los picos de difenoxilato obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30) Eliminar lo siguiente: Valoracio n de sulfato de atropina Solucio n amortiguadora de fosfato de trietilamina de pH 2,7 Preparar segu n se indica en la Valoracio n de clorhidrato de difenoxilato. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora de fosfato de trietilamina de pH 2,7, metanol y acetonitrilo (78 : 18 : 4). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver en Fase mo vil una cantidad pesada con exactitud de ER Sulfato de Atropina USP y diluir cuantitativamente y en diluciones sucesivas con Fase mo vil hasta obtener una solucio n que contenga una concentracio n conocida de aproximadamente 5 mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir a un matraz volume trico de 100 mL un nu mero de Tabletas contado con exactitud, que equivalga aproximadamente a 0,5 mg de sulfato de atropina, agregar Fase mo vil y agitar meca nicamente durante aproximadamente 30 minutos hasta que las Tabletas se hayan desintegrado por completo. Diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 206 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L7. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a para el pico de atropina no es mayor de 2,5 y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 25 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas correspondientes a los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de sulfato de atropina [(C17H23NO3)2 H2 SO4 H2O] en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula:
&
Solucio n BTransferir 192 mg de 1-pentanosulfonato de sodio monohidrato a un recipiente adecuado, agregar 200 mL de agua y someter a ultrasonido para disolver. Agregar 800 mL de acetonitrilo y 1,0 mL de a cido fosfo rico, y mezclar. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de la Solucio n B y la Solucio n A (66 : 34). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n madre de atropinaDisolver en Diluyente una cantidad, pesada con exactitud, de ER Sulfato de Atropina USP y diluir cuantitativamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,04 mg por mL. Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 20 mg de ER Clorhidrato de Difenoxilato USP a un matraz volume trico de 200 mL, agregar aproximadamente 100 mL de Dilyuente y someter a ultrasonido para disolver. Agregar con exactitud 5,0 mL de Preparacio n madre de atropina y mezclar. Dejar que la solucio n alcance la temperatura ambiente y luego diluir a volumen con Diluyente. Esta solucio n contiene aproximadamente 0,1 mg de clorhidrato de difenoxilato y aproximadamente 0,001 mg de sulfato de atropina por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir una cantidad de Tabletas, contadas con exactitud, equivalente aproximadamente a 25 mg de clorhidrato de difenoxilato, basada en la cantidad declarada, a un matraz volume trico de 250 mL, agregar aproximadamente 100 mL de Dilyuente y agitar meca nicamente durante al menos 15 minutos o hasta que las Tabletas se desintegren por completo. Someter a ultrasonido durante 15 minutos adicionales, dejar que la solucio n alcance la temperatura ambiente, diluir a volumen con Dilyuente y mezclar. Pasar una porcio n de la solucio n obtenida a trave s de un ltro PTFE con un taman o de poro de 0,45 mm, desechando los primeros mL, y usar el ltrado transparente. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L10 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,7 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,35 para atropina y 1,0 para difenoxilato; la resolucio n, R, entre atropina y difenoxilato no es menor de 5,0; el factor de asimetr a no es mayor de 1,5 para atropina; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0% para difenoxilato y no ma s de 5,0% para atropina. [NOTASi se observa un factor de asimetr a signicativo para el pico de difenoxilato (mayor de 2,5), se recomienda mantener la temperatura de la columna a 258 para estabilizar el sistema.] ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de clorhidrato de difenoxilato (C30H32N2O2 HCl) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 250CD (rU / rS) en donde 250 es el volumen, en mL, de la Preparacio n de valoracio n; CD es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Difenoxilato USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos de difenoxilato obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. Calcular la cantidad, en mg, de sulfato de atropina [(C17H23NO3)2 H2SO4 H2O] en la porcio n de las Tabletas tomada, por la fo rmula: (694,83/676,83)(250)CA (rU / rS) en donde 694,83 y 676,83 son los pesos moleculares de sulfato de atropina monohidrato y sulfato de atropina anhidro, respectivamente; 250 es el volumen, en mL, de la Preparacio n de valoracio n; CA es la concentracio n, en mg por mL, de ER Sulfato de Atropina USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos de atropina obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
(694,85 / 676,83)(L / D)C(rU / rS) en donde 694,85 y 676,83 son los pesos moleculares del sulfato de atropina monohidrato y del sulfato de atropina anhidro, respectivamente; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Sulfato de Atropina USP en la Preparacio n esta ndar; L es la cantidad declarada, en mg, de sulfato de atropina, en cada Tableta; D es la concentracio n, en mg por mL, de sulfato de atropina en la Preparacio n de valoracio n, basada en la cantidad declarada por Tableta y en el grado de disolucio n; y rU y rS son las respuestas de los picos de atropina obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30) Agregar lo siguiente:
&
Valoracio n DiluyenteUsar una mezcla de acetonitrilo y agua (1 : 1). Solucio n ATransferir 192 mg de 1-pentanosulfonato de sodio monohidrato a un recipiente adecuado, agregar 200 mL de agua y someter a ultrasonido para disolver. Agregar 800 mL de agua y 1,0 mL de a cido fosfo rico, y mezclar.
Monograf as Ociales / Doxepina
4105
Carbonato So dico de Dihidroxialuminio, Tabletas

(T tulo vigenteno cambiara hasta el 18 de febrero de 2010) Cambio de t tulo de la monograf asera ocial a partir del 18 de febrero de 2010 Ver Carbonato So dico de Dihidroxialuminio, Tabletas Masticables
&Doxazosina,
Tabletas
Las Tabletas de Doxazosina contienen una cantidad de
mesilato de doxazosina equivalente a no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de doxazosina (C23H25N5O5).
So dico de Dihidroxialuminio, Tabletas Masticables

(La Monograf a con este nuevo t tulosera ocial a partir del 18 de febrero de 2010) (El t tulo actual de la monograf a es Carbonato So dico de Dihidroxialuminio, Tabletas)
&Carbonato
Las Tabletas Masticables de Carbonato So dico de
Dihidroxialuminio contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de CH2AlNaO5.
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. EtiquetadoEtiquetar las Tabletas Masticables indicando que se deben masticar antes de tragar. Identicacio nUna suspensio n 1 en 10 de Tabletas Masticables pulverizadas en a cido clorh drico 3 N cumple con los requisitos de las pruebas para Aluminio h191i y para Sodio h191i. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos. Capacidad neutralizante de a cido h301iLa dosis m nima individual recomendada en el etiquetado consume no menos de 5 mEq de a cido y no menos del nu mero de mEq calculado, por la fo rmula: 0,8(0,0278D) en donde 0,0278 es la capacidad neutralizante de a cido teo rica, en mEq, del CH2AlNaO5 y D es la cantidad, en mg, de CH2AlNaO5 en la muestra analizada, basada en la cantidad declarada. Valoracio n Solucio n volume trica de edetato diso dicoDisolver 18,6 g de edetato diso dico en agua para obtener 500 mL y normalizar como se indica en Valoracio n en Alumbre de Amonio. ProcedimientoPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas Masticables. Transferir a un vaso de precipitados de 250 mL una porcio n del polvo pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 300 mg de carbonato so dico de dihidroxialuminio, y proceder segu n se indica en Valoracio n en Carbonato So dico de Dihidroxialuminio, comenzando donde dice agregar 10 mL de a cido sulfu rico 2 N. Cada mL de Solucio n volume trica de edetato diso dico 0,1 M equivale a 14,40 mg de CH2AlNaO5. (Ocial a partir del 18 de febrero de 2010)&1S (USP30)
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Esta ndares de referencia USP h11iER Mesilato de Doxazosina USP. Identicacio nEl tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos. Valoracio n Solucio n amortiguadora, Fase mo vil, Diluyente, Preparacio n esta ndar y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en Valoracio n en Mesilato de Doxazosina. Preparacio n de valoracio nTransferir 10 Tabletas, enteras o molidas, a un matraz volume trico de 250 mL, agregar 10 mL de agua y someter a ultrasonido hasta que las Tabletas se desintegren. Agregar 150 mL de Diluyente, someter a ultrasonido durante 30 minutos, diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Diluir cuantitativamente una porcio n del sobrenadante con Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n de aproximadamente 0,04 mg de doxazosina por mL. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos de doxazosina. Calcular la cantidad, en mg, de doxazosina (C23H25N5O5) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: (451,48/547,58)CD(rU / rS) en donde 451,48 y 547,58 son los pesos moleculares de doxazosina y mesilato de doxazosina; respectivamente; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Mesilato de Doxazosina USP en la Preparacio n esta ndar; D es el volumen de dilucio n, en mL, considerando el matraz inicial de 250 mL y cualquier dilucio n subsiguiente utilizada para preparar la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Clorhidrato de Doxepina
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11iER Clorhidrato de Doxepina USP. &ER Compuesto Relacionado A de Doxepina USP. ER Compuesto Relacionado B de Doxepina USP. ER Compuesto Relacionado C de Doxepina USP.&1S (USP30)
4106
Dronabinol / Monograf as Ociales
Cambio en la redaccio n: Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki. n del pico principal en el cromatograma B: &El tiempo de retencio de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. C: Una solucio n (1 en 100) en una mezcla de agua y alcohol (1 : 1) cumple con los requisitos de la prueba para Cloruro h191i en clorhidratos de amina.&1S (USP30) Eliminar lo siguiente:
&
retencio n relativos aproximados especicados en la Tabla 1 para identicar los picos. El compuesto relacionado C de doxepina sera el pico mayor en el cromatograma de la Solucio n esta ndar.] Tabla 1 Tiempo de Retencio n Relativo (TRR) 0,48 0,55 0,63 1,0
Intervalo de fusio n, Clase I h741i: entre 1858 y 1918.&1S
(USP30)
Nombre Compuesto relacionado A de doxepina Compuesto relacionado C de doxepina Compuesto relacionado B de doxepina Clorhidrato de doxepina Impureza desconocida
L mite (%) 0,10 0,20 0,10 0,10 cada uno
&
Contenido de cloruroDisolver aproximadamente 100 mg, pesados con exactitud, en una mezcla de 100 mL de agua y 100 mL de alcohol. Valorar con nitrato de plata 0,05 N SV, determinando el punto nal potenciome tricamente utilizando como sensor un electrodo plata/sulfuro de plata y un electrodo de referencia de doble junta que contenga solucio n de relleno de nitrato de potasio en la camisa externa y una solucio n de relleno esta ndar en la camisa interna. Cada mL de nitrato de plata 0,05 N equivale a 1,773 mg de cloruro: Se encuentra no menos de 10,9% y no ma s de 11,6% de cloruro.&1S (USP30)
ProcedimientoInyectar en el cromato grafo un volumen (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma hasta 2,2 veces el tiempo de retencio n de doxepina y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada compuesto relacionado individual de doxepina en la porcio n de Clorhidrato de Doxepina tomada, por la fo rmula: 100(rU / rS)(CS / CT) en donde rU es la respuesta del pico individual para cada compuesto relacionado de doxepina obtenido a partir de la Solucio n de prueba; rS es la respuesta del pico correspondiente obtenido a partir de la Solucio n esta ndar; CS es la concentracio n, en mg por mL, de cada compuesto relacionado de doxepina en la Solucio n esta ndar; y CT es la concentracio n, en mg por mL, de Clorhidrato de Doxepina en la Solucio n de prueba. Los l mites de las sustancias relacionadas se especican en la Tabla 1. [NOTADescartar cualquier pico con un tiempo de retencio n relativo menor de 0,25. Este me todo no esta destinado para resolver los iso meros E y Z de clorhidrato de doxepina. Variaciones menores en la composicio n de la fase mo vil pueden resultar en un hombro en el borde posterior de doxepina. En los casos en que puede haber separacio n, se deben usar ambos iso meros, E y Z, en los ca lculos apropiados.] Utilizar la respuesta del pico de doxepina obtenido a partir de la Solucio n esta ndar y la concentracio n de clorhidrato de doxepina en la Solucio n esta ndar para calcular el porcentaje de impurezas individuales desconocidas.&1S (USP30)
Agregar lo siguiente: Compuestos relacionados cido fosfo A rico diluidoPreparar una mezcla de agua y a cido fosfo rico (10 : 1), y mezclar bien. Solucio n amortiguadoraDisolver 1,42 g de fosfato diba sico de cido fosfo sodio en 1 L de agua, ajustar con A rico diluido a un pH de 7,7 y mezclar. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de metanol, Solucio n amortiguadora y acetonitrilo (50 : 30 : 20). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). DiluyentePreparar una mezcla de Fase mo vil e hidro xido de sodio 2 N (1000 : 2). Solucio n esta ndarDisolver en Diluyente cantidades, pesadas con exactitud, de ER Clorhidrato de Doxepina USP, ER Compuesto Relacionado A de Doxepina USP, ER Compuesto Relacionado B de Doxepina USP y ER Compuesto Relacionado C de Doxepina USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,001 mg por mL del compuesto relacionado A de doxepina y del compuesto relacionado B de doxepina, y 0,002 mg por mL del compuesto relacionado C de doxepina. [NOTASe puede someter a ultrasonido durante aproximadamente 1 minuto para facilitar la disolucio n inicial de los compuestos.] Solucio n de pruebaDisolver en Diluyente una cantidad, pesada con exactitud, de Clorhidrato de Doxepina para obtener una solucio n nal con una concentracio n conocida de aproximadamente 1 mg por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 215 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 308. Inyectar en el cromato grafo aproximadamente 20 mL de la Solucio n esta ndar y registrar las a reas de los picos segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado A de doxepina y el compuesto relacionado C de doxepina no es menor de 1,5; la resolucio n entre el compuesto relacionado C de doxepina y el compuesto relacionado B de doxepina no es menor de 1,5; y la relacio n sen al-ruido para todos los picos no es menor de 10. [NOTAUtilizar los tiempos de
&
Dronabinol
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11i&ER Exo-tetrahidrocannabinol USP.&1S (USP30) ER 9-Tetrahidrocannabinol USP. &&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Identicacio n A: El tiempo de retencio n del pico principal &&1S (USP30) en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. B: &&1S (USP30) Agente de visualizacio nTransferir aproximadamente 100 mg de Sal de Fast Blue B a un matraz adecuado que contenga aproximadamente 100 mL de metanol, mezclar durante aproximadamente 5 minutos y dejar que sedimente. Decantar el l quido transparente en el recipiente del rociador. [NOTAPreparar a diario.] Solucio n de identicacio nUsar la Preparacio n esta ndar preparada segu n se indica en la Valoracio n.
Monograf as Ociales / Dronabinol
4107
Solucio n de pruebaEmplear la Preparacio n de valoracio n. ProcedimientoAplicar por separado porciones de 10 mL de la Solucio n de identicacio n y de la Solucio n de prueba a una placa para cromatograf a en capa delgada adecuada (ver Cromatograf a h621i) recubierta con una capa de 0,25 mm de gel de s lice para cromatograf a. Dejar que las aplicaciones se sequen y desarrollar la placa en una ca mara cromatogra ca que se haya equilibrado (durante aproximadamente 2 minutos) con vapores de una fase mo vil de nhexano y cloruro de metileno (1 : 1) hasta que el frente de la fase mo vil haya recorrido aproximadamente 10 cm. Retirar la placa de la ca mara de desarrollo, marcar ra pidamente el frente de la fase mo vil y dejar que la placa se seque a temperatura ambiente durante aproximadamente 5 minutos. Rociar la placa con el Agente de visualizacio n hasta que este uniformemente hu meda (no saturada). Calentar la placa aproximadamente a 808 hasta que las manchas se desarrollen: el color y el valor RF de las manchas obtenidas de la Solucio n de prueba se corresponden con los obtenidos a paritr de la Solucio n de identicacio n. Eliminar lo siguiente: L mite de 8-tetrahidrocannabinol Fase mo vil, Solucio n de aptitud del sistema, Preparacio n esta ndar y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en Valoracio n. Solucio n de 8-tetrahidrocannabinolDiluir con alcohol deshidratado, cuantitativamente y en diluciones sucesivas si fuera necesario, un volumen de ER 8-Tetrahidrocannabinol USP medido con exactitud, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 4 mg por mL. Solucio n de prueba Usar la Preparacio n de valoracio n. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n de 8tetrahidrocannabinol y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de todos los picos. Calcular el porcentaje de 8-tetrahidrocannabinol en la porcio n de Dronabinol tomada, por la fo rmula:
&
9-tetrahidrocannabinol en la Solucio n esta ndar. Adema s de no exceder los l mites de la Tabla 1, no se encuentra ma s de 5,0% de impurezas totales.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Valoracio n & Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de metanol, agua, tetrahidrofurano y acetonitrilo (45 : 25 : 20 : 10), haciendo ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de aptitud del sistemaTransferir a un matraz volume trico adecuado volu menes, medidos con exactitud, de ER 9-Tetrahidrocannabinol USP y ER Exo-tetrahidrocannabinol USP, y diluir con alcohol deshidratado para preparar una solucio n que contenga aproximadamente 200 mg de 9-tetrahidrocannabinol y aproximadamente 10 mg de exo-tetrahidrocannabinol por mL. Preparacio n esta ndarDiluir cuantitativamente un volumen, medido con exactitud, de ER 9-Tetrahidrocannabinol USP con alcohol deshidratado para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,2 mg por mL. Preparacio n esta ndar de sensibilidadDiluir cuantitativamente un volumen, medido con exactitud, de la Preparacio n esta ndar con alcohol deshidratado para obtener una solucio n con una concentracio n de aproximadamente 0,2 mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 20 mg de Dronabinol, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con alcohol deshidratado, y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 228 nm y una columna anal tica de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 4 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 208. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre 9-tetrahidrocannabinol y exo-tetrahidrocannabinol no es menor de 1,5; y el factor de asimetr a de 9-tetrahidrocannabinol no es mayor de 2,0. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar de sensibilidad y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la relacio n sen al-ruido no es menor de 10. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de todos los picos. Calcular la cantidad, en mg, de C21H30O2 en la porcio n de Dronabinol tomada, por la fo rmula: CV(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de 9tetrahidrocannabinol en la Preparacio n esta ndar; V es el volumen, en mL, de la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las respuestas de los picos de 9-tetrahidrocannabinol obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
10 000(C / W)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER 8Tetrahidrocannabinol USP en la Solucio n de 8-tetrahidrocannabinol; W es el peso, en mg, de dronabinol en la porcio n de Dronabinol tomada para preparar la Solucio n de prueba; y rU y rS son las respuestas de los picos de 8-tetrahidrocannabinol obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y de la Solucio n de 8-tetrahidrocannabinol, respectivamente: no se encuentra ma s de 2,0%.&1S (USP30) Agregar lo siguiente: Compuestos relacionados Fase Mo vil, Solucio n de aptitud del sistema, Preparacio n esta ndar y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarDiluir un volumen, medido con exactitud, de la Preparacio n esta ndar, cuantitativamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con alcohol deshidratado para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,004 mg por mL. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de todos los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Dronabinol tomada, por la fo rmula:
&
100(1/F)(CV/W)(rU / rS) en donde F es el factor de respuesta relativa para cada impureza (ver Tabla 1); C es la concentracio n, en mg por mL, de 9tetrahidrocannabinol en la Solucio n esta ndar; V es el volumen, en mL, de la Solucio n de prueba; W es el peso, en mg, de Dronabinol tomado para preparar la Solucio n de prueba; rU es el a rea del pico de cada impureza en la Solucio n de prueba; y rS es el a rea del pico de
4108
Drospirenona / Monograf as Ociales
Tabla 1 Nombre Cannabinol 9-Tetrahidrocannabinol Exo-tetrahidrocannabinol1 8-Tetrahidrocannabinol Cualquier otra impureza individual
1
Tiempo de Retencio n Relativo 0,78 1,00 1,07 1,18
Factor de Respuesta Relativa 2,7 1,0 0,92 0,90 1,0
L mite (%) 1,5 0,5 2,0 1,0
(6aR, 10aR)-6,6-dimetil-9-metilen-3-pentil-6a,7,8,9,10,10a-hexahidro-6H-benzo[c]cromen-1-ol.
&Drospirenona
C24H30O3 366,49 (6R,7R,8R,9S,10R,13S,14S,15S,16S,17S)1,3,4,6,6a,7,8,9,10,11,12,13,14,15,15a,16-Hexadecahydro10,13-dimethylspiro-[17H-dicyclopropa[6,7 : 15,16]cyclopenta[a]phenanthrene-17,2(5H)-furan]-3,5(2H)-dione. cido 17-hidroxi-6b,7b: 15b,16b-dimetilen-3-oxo-17a-pregn-4A eno-21-carbox lico, g-lactona [67392-87-4].
mantener a 408 durante 10 minutos, luego incrementar a una velocidad de 58 por minuto hasta 708; luego aumentar a una velocidad de 308 por minuto hasta 2208. Mantener la temperatura del inyector a 1608 y la temperatura del detector a 2508. El gas transportador es helio, que uye a una velocidad de 32 + 8 cm por segundo. [NOTAPara sistemas de presio n controlada, sera necesaria una presio n de columna de aproximadamente 130 kPa.] Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,6 para e ter diisoprop lico y 1,0 para 1,2-dimetoxietano; y la desviacio n esta ndar relativa para la Solucio n esta ndar no es ma s de 4,0%. ProcedimientoTransferir 2,0 mL de la Solucio n de prueba y de la Solucio n esta ndar a sendos viales para muestreo de fase gaseosa y sellar. Mantener los viales a 808 durante 60 minutos antes de realizar la inyeccio n de fase gaseosa. Registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos de 1,2-dimetoxietano y e ter diisoprop lico. Calcular por separado el porcentaje de 1,2-dimetoxietano y e ter diisoprop lico en la porcio n de Drospirenona tomada, por la fo rmula: 100(CS /CU)(rU / rS) en donde CS es la concentracio n, en mg por mL, de 1,2dimetoxietano o e ter diisoprop lico en la Solucio n esta ndar; CU es la concentracio n, en mg por mL, de Drospirenona en la Solucio n de prueba; y rU y rS son las a reas de los picos de 1,2-dimetoxietano oe ter diisoprop lico en los cromatogramas obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente: no se encuentran ma s de 0,2% de 1,2-dimetoxietano y no se encuentra ma s de 0,1% de e ter diisoprop lico. Pureza cromatogra ca Solucio n A, Solucio n B, Fase mo vil, Diluyente y Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarPreparar segu n se indica en la Preparacio n esta ndar en la Valoracio n. Solucio n de pruebaPreparar segu n se indica en la Preparacio n de valoracio n en la Valoracio n. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n esta ndar, de la Solucio n de prueba y del Diluyente, y registrar los cromatogramas. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Drospirenona tomada, por la fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es el a rea del pico de cada impureza; y rs es la suma de las respuestas de todos los picos. Descartar los picos que sean menos de 0,05% del pico de drospirenona. No se encuentra ma s de 0,1% de cualquier impureza individual; y no se encuentra ma s de 0,4% de impurezas totales. Valoracio n Solucio n AUsar agua. Solucio n BUsar acetonitrilo. Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y Solucio n B, segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). DiluyentePreparar una mezcla desgasicada de agua y acetonitrilo (1 : 1). Preparacio n esta ndarDisolver cantidades, pesadas con exactitud, de ER Drospirenona USP en Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 2 mg por mL.
La Drospirenona contiene no menos de 98,0 por ciento y no ma s de 102,0 por ciento de C24H30O3, calculado con respecto a la sustancia anhidra y exenta de disolvente.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Almacenar a temperatura ambiente controlada. Esta ndares de referencia USP h11iER Drospirenona USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Mi. B: El tiempo de retencio n de los picos principales en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Intervalo de fusio n,Clase 1 h741i: entre 1988 y 2038. [NOTASecar sobre gel de s lice durante no menos de 24 horas antes de realizar las pruebas.] Rotacio n espec ca h781Si: entre 1868 y 1968 con respecto a la sustancia anhidra y exenta de disolvente (10 mg por mL en metanol). Agua, Me todo I h921i: no ma s de 0,2%. Residuo de incineracio n h281i: no ma s de 0,1%. Metales pesados, Me todo II h231i: no ma s de 0,002%. L mite de 1,2-dimetoxietano y e ter diisoprop lico (si estuvieran presentes) Solucio n esta ndarPreparar una solucio n de 1,2-dimetoxietano y e ter diisoprop lico en dimetilformamida para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,1 mg por mL y 0,05 mg por mL, respectivamente. Solucio n de pruebaDisolver una porcio n, pesada con exactitud, de Drospirenona en dimetilformamida para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 50 mg por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de gases con un inyector de fase gaseosa, un detector de ionizacio n a la llama y una columna capilar de 0,25 mm 6 30 m recubierta con una pel cula de 1,4 mm de fase l quida G43. Programar la temperatura de la columna segu n los siguientes pasos:
Monograf as Ociales / Estradiol
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Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 20 mg de Drospirenona, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 10 mL, disolver y diluir a volumen con Diluyente, y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 245 nm y una columna de 4,0 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm que se mantiene a una temperatura constante de aproximadamente 308. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo: Tiempo (minutos) 028,5 28,545 4545,5 45,552 5253 5380 Solucio n A (%) 64 64?10 10?0 0 0?64 64 Solucio n B (%) 36 36?90 90?100 100 100?36 36 Elucio n isocra tica gradiente lineal gradiente lineal isocra tica gradiente lineal re-equilibrio
Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar el cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Tiempo (minutos) 0 010 1018 1825 Solucio n A (%) 25 25?75 75 75?25 Solucio n B (%) 75 75?25 25 25?75 Elucio n equilibrio gradiente lineal iso cratica gradiente lineal
Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna no es menos de 7000 platos teo ricos; el factor de asimetr a no es mayor de 2,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 1,0%. No debe haber ningu n pico con una relacio n sen al-ruido mayor de 10 en el cromatograma del Diluyente entre 5 y 45 minutos. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir la respuesta del pico de drospirenona. Calcular la cantidad, en mg, de C24H30O3 en la porcio n de Drospirenona tomada, por la fo rmula: 10C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Drospirenona USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Inyectar la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre hidroclorotiazida y espironolactona no es menor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoProceder segu n se indica en la Valoracio n, inyectando 20 mL de cada solucio n.&1S (USP30) ToleranciasNo menos de 75% (Q) de las cantidades declaradas de C24H32O4S y C7H8ClN3O4S2 se disuelve en 60 minutos.
&Estradiol
y Acetato de Noretindrona,
Tabletas
Las Tabletas de Estradiol y Acetato de Noretindrona
contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de estradiol (C18H24O2), y no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de acetato de noretindrona (C22H28O3).
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. Almacenar a temperatura ambiente controlada. Esta ndares de referencia USP h11iER Estradiol USP. ER Estrona USP. ER Acetato de Noretindrona USP. Identicacio n A: Prueba de Identicacio n por Cromatograf a en Capa Delgada h201i Solucio n de pruebaColocar 2 Tabletas en un vial de 10 mL y agregar 0,2 mL de agua. Cuando las Tabletas se desintegren parcialmente, agregar unas pocas perlas de vidrio y agitar vigorosamente para desintegrar. Agregar 4,0 mL de alcohol deshidratado y agitar: Centrifugar hasta que el sobrenadante sea transparente antes de la aplicacio n a la placa. Solucio n esta ndarDisolver cantidades, pesadas con exactitud, de ER Estradiol USP y ER Acetato de Noretindrona USP en alcohol deshidratado para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de 0,5 mg por mL y 0,25 mg por mL, respectivamente. Volumen de aplicacio n: 2 mL. Fase mo vil: una mezcla de cloroformo y acetona (9 : 1). ProcedimientoProceder segu n se indica en el cap tulo, usando la Fase mo vil. Despue s de retirar la placa, marcar el frente de la fase mo vil y dejar que la fase mo vil se evapore. Colocar la placa sobre una placa de calentamiento a 1008 durante 15 minutos. Dejar que la placa se enfr e y despue s sumergir en una mezcla de alcohol deshidratado y a cido sulfu rico concentrado (95 : 5) Colocar la placa sobre un trozo de papel horizontal grueso hasta que este casi seca. Calentar la placa a 1008 hasta que se haya desarrollado por completo. Examinar bajo luz UV a 365 nm. El color y el valor RF de las
Espironolactona e Hidroclorotiazida, Tabletas
Cambio en la redaccio n: Disolucio n h711i Medio: a cido clorh drico 0,1 N que contenga lauril sulfato de sodio al 0,1% ; 900 mL. Aparato 2: 75 rpm. Tiempo: 60 minutos. Determinar las cantidades disueltas de espironolactona e hidroclorotiazida empleando el siguiente me todo. Solucio n esta ndarPreparar una solucio n de ER Espironolactona USP y ER Hidroclorotiazida USP en una mezcla de metanol y Medio (1 : 1) con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,0125 mg por mL de cada uno. Solucio n de pruebaTransferir 5,0 mL de la solucio n en ana lisis a un matraz volume trico de 10 mL, diluir a volumen con metanol y mezclar. & Solucio n AUsar acetonitrilo. Solucio n BTransferir aproximadamente 4,5 g de fosfato monoba sico de potasio a un matraz volume trico de 1 L que contenga aproximadamente 500 mL de agua. Disolver y diluir a volumen con agua, y mezclar. Fase mo vilUsar cantidades variables de Solucio n A y de Solucio n B segu n se indica en Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud de Sistema en Cromatograf a h621i).
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Estradiol / Monograf as Ociales
manchas principales obtenidas a partir de la Solucio n de prueba se corresponden con los de las manchas obtenidas a partir de la Solucio n esta ndar. B: El tiempo de retencio n y el espectro UV de los picos principales en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponden con los del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Pureza cromatogra ca Solucio n APreparar una mezcla de agua y tetrahidrofurano (200 : 1). Solucio n BPreparar una solucio n desgasicada de acetonitrilo, agua y tetrahidrofurano (160 : 40 : 1). Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y Solucio n B segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes, si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). DiluyentePreparar una mezcla de agua y alcohol deshidratado (1 : 1). Solucio n de aptitud del sistemaDisolver cantidades, pesadas con exactitud, de ER Estradiol USP, ER Acetato de Noretindrona USP y ER Estrona USP en Diluyente para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 240 mg por mL, 60 mg por mL y 1 mg por mL, respectivamente. Solucio n madre del esta ndar de estradiol Disolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Estradiol USP en alcohol para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de estradiol de aproximadamente 250 mg por mL. Solucio n madre del esta ndar de acetato de noretindrona Disolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Acetato de Noretindrona USP en alcohol para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de acetato de noretindrona de aproximadamente 150 mg por mL. Solucio n esta ndarCombinar 250 mL de Solucio n madre del esta ndar de estradiol y 100 mL de Solucio n madre del esta ndar de acetato de noretindrona, y diluir con 50,0 mL de Diluyente. Solucio n de pruebaPesar con exactitud y reducir a polvo no 20 Tabletas. Transferir el equivalente de 12 Tabletas a un matraz apropiado y disolver en un volumen conocido de Diluyente para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de estradiol y acetato de noretindrona de aproximadamente 240 mg por mL y 120 mg por mL, respectivamente. Filtrar la solucio n, si fuera necesario. Sistema cromatogra coEquipar un cromato grafo de l quidos con un detector de doble longitud de onda (235 nm y 254 nm) y una columna de 3,9 mm 6 30 cm rellena con material L1 de 4 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 0,8 mL por minuto. Programar el cromatograma del siguiente modo. Tiempo (minutos) 0 02 235 3549 4950 5060 Solucio n A (%) 80 80?65 65?20 20 20?80 80 Solucio n B (%) 20 20?35 35?80 80 80?20 20 Elucio n equilibrio gradiente lineal gradiente lineal isocra tica gradiente lineal isocra tica
a 235 nm obtenida a partir de la Solucio n esta ndar. Las Tabletas cumplen con los requisitos indicados en la Tabla 1. Tabla 1 Tiempo de Retencio n Relativo aproximadamente 0,47 aproximadamente 0,51 aproximadamente 0,62 aproximadamente 0,65 aproximadamente 0,75 aproximadamente 0,88 aproximadamente 0,95 1,0 aproximadamente 1,06 aproximadamente 1,17 aproximadamente 1,24 Factor de Respuesta Relativa 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 0,04 1,0 1,0 1,0 1,0 L mite (%) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Compuesto 6-a Hidroxil estradiol 6-b Hidroxil estradiol 6-Ceto estradiol 16-Ceto estradiol 6-Ceto estrona b-Equilenol 6-Dehidro estradiol Estradiol a-Estradiol Estrona 4-Metil estradiol
Calcular el porcentaje de cualquier impureza relacionada de acetato de noretindrona en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100F(CS / CT) (ri / rS) en donde F es el factor de respuesta relativa de cualquier impureza relacionada de acetato de noretindrona en relacio n con el acetato de noretindrona; CS y CT son las concentraciones de la Solucio n esta ndar y la Solucio n de prueba, respectivamente; ri es el a rea del pico de cada impureza a 254 nm obtenida a partir de la Solucio n de prueba; y rS es el a rea del pico a 254 nm obtenida a partir de la Solucio n esta ndar. Las Tabletas cumplen con los requisitos indicados en la Tabla 2. Tabla 2 Tiempo de Retencio n Relativo Factor de Respuesta Relativa 1,0 1,0 1,8 1,0 2,2 L mite (%) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 1,4 para estrona, aproximadamente 3,0 para acetato de noretindrona y 1,0 para estradiol; y la resolucio n, R, entre estrona y estradiol no es menor de 1,3, medida a 254 nm. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 100 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cualquier impureza de estradiol en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100F(CS / CT)(ri / rS) en donde F es el factor de respuesta relativa de cualquier impureza de estradiol en relacio n con el estradiol; CS y CT son las concentraciones de la Solucio n esta ndar y la Solucio n de prueba, respectivamente; ri es el a rea del pico de cada impureza a 235 nm obtenida a partir de la Solucio n de prueba; y rS es el a rea del pico
Compuesto Acetato de 6-b hidroxi-noretin- aproximadamente drona 0,58 Noretindrona aproximadamente 0,66 Acetato de 6-ceto- aproximadamente noretindrona 0,79 19-Nor-17-alfapregaproximadamente 4-eno-3,20-diona 0,90 Acetato de 6-dehidroaproximadamente noretindrona 0,97 Acetato de noretindrona 1,0
No se encuentra ma s de 0,5% de cualquier impureza individual desconocida y no se encuentra ma s de 1,0% de impurezas totales (de la Tabla 1 y Tabla 2). [NOTAPara calcular el porcentaje de cualquier impureza individual desconocida, rS es igual a la respuesta del pico ma s pequen o de los dos principales en la Solucio n esta ndar y CS es la concentracio n correspondiente en la Solucio n esta ndar.] Valoracio n Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de acetonitrilo y agua (55 : 45) (ver Cromatograf a h621i). DiluyentePreparar una mezcla de agua y alcohol deshidratado (1 : 1).
Monograf as Ociales / Etoto na
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Solucio n madre del esta ndar de estronaTransferir aproximadamente 6,00 mg de ER Estrona USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL y disolver en 10 mL de alcohol deshidratado. Diluir a volumen con alcohol deshidratado y mezclar. Solucio n madre del esta ndar de estradiolPreparar una solucio n de ER Estradiol USP en alcohol deshidratado con una concentracio n conocida de 0,25 mg por mL. Solucio n madre del esta ndar de acetato de noretindrona Preparar una solucio n de ER Acetato de Noretindrona USP en alcohol deshidratado con una concentracio n conocida de 0,15 mg por mL. Preparacio n de aptitud del sistemaTransferir 800 mL de Solucio n madre del esta ndar de estradiol, 600 mL de Solucio n madre del esta ndar de acetato de noretindrona y 200 mL de Solucio n madre del esta ndar de estrona a un matraz adecuado que contenga 10,0 mL de Diluyente. Preparacio n esta ndarPreparar una solucio n de Solucio n madre del esta ndar de estradiol y Solucio n madre del esta ndar de acetato de noretindrona en Diluyente con una concentracio n conocida con exactitud de aproximadamente 20 mg por mL y 10 mg por mL, respectivamente. Preparacio n de valoracio nAgregar 12 Tabletas en una cantidad medida de Diluyente, para obtener una solucio n con una concentracio n de estradiol de aproximadamente 20 mg por mL y una concentracio n de acetato de noretindrona de aproximadamente 10 mg por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector de arreglo de diodos y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Llevar a cabo una corrida de investigacio n para determinar los tiempos de retencio n de estradiol y acetato de noretindrona. De este modo, la absorcio n de estradiol a 280 nm y de acetato de noretindrona a 254 nm se pueden incluir en una u nica corrida modicando la longitud de onda. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n de aptitud del sistema y registrar las a reas de los picos segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre estradiol y acetato de estrona no es menor de 1,8. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 3%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos de estradiol y acetato de noretindrona. Calcular la cantidad, en mg, de estradiol (C18H24O2) en cada una de las Tabletas tomadas, por la fo rmula: (VC/12)(rU / rS) en donde V es el volumen, en mL, de Diluyente tomado para preparar la Preparacio n de valoracio n; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Estradiol USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las a reas de los picos obtenidas a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. Calcular la cantidad, en mg, de acetato de noretindrona (C22H28O3) en cada una de las Tabletas tomadas, por la fo rmula: (VC/12)(rU / rS) en donde V es el volumen, en mL, de Diluyente usado en la Preparacio n de valoracio n; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Acetato de Noretindrona USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las a reas de los picos obtenidas a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Etoto na, Tabletas
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11iER Etoto na USP. Etilparabeno USP.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Valoracio n & DiluyentePreparar una mezcla de agua, acetonitrilo y a cido fosfo rico (750 : 250 : 1).&1S (USP30) Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de agua y acetonitrilo (3 : 1). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de esta ndar internoPreparar una solucio n de &ER Etilparabeno USP&1S (USP30) en &Diluyente&1S (USP30) con una concentracio n de 0,02 mg por mL. Preparacio n esta ndarDisolver en Fase mo vil una cantidad, pesada con exactitud, de ER Etoto na USP y diluir cuantitativamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1,0 mg por mL.&Transferir inmediatamente 5 mL de esta solucio n y 5 mL de la Solucio n de esta ndar interno a un recipiente adecuado y mezclar bien.&1S (USP30) Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas. Transferir una porcio n del polvo, pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 100 mg de etoto na, a un matraz volume trico de 100 mL. Agregar 75 mL de Fase mo vil, agitar vigorosamente durante 60 minutos, diluir a volumen con Fase mo vil, mezclar y ltrar &de inmediato&1S (USP30). &Sin demora, transferir 5 mL del ltrado y 5 mL de la Solucio n de esta ndar interno a un recipiente adecuado y mezclar.&1S (USP30) Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 3,9 mm 6 30 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre los picos del analito y del esta ndar interno, no es menor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas correspondientes a los picos principales. & [NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,5 para etoto na y 1,0 para etilparabeno.]&1S (USP30) Calcular la cantidad, en mg, de etoto na (C11H12N2O2) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 200C(RU / RS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Etoto na USP en la Preparacio n esta ndar; y RU y RS son los cocientes de respuesta de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
&
ER
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Famotidina / Monograf as Ociales
&Famotidina,
Inyeccio n
ProcedimientoInyectar en el cromato grafo aproximadamente 30 mL de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular el porcentaje del total de impurezas B, C y D en la porcio n de la Inyeccio n tomada, por la fo rmula: 100(rU / rT) reas de los picos de las impurezas B, en donde rU es la suma de las a C y D obtenidas a partir de la Solucio n de prueba; y rT es la suma de las a reas de los picos de famotidina, impureza B, impureza C e impureza D obtenidas a partir de la Solucio n de prueba: no se encuentra ma s de 5,0% de impurezas totales. Contenido de alcohol benc lico (si estuviera presente) Solucio n amortiguadora, Fase mo vil y DiluyenteProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n preparada segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n madre de aptitud del sistemaTransferir aproximadamente 10 mg de ER Famotidina USP a un matraz volume trico de 50 mL y agregar 1 mL de a cido clorh drico 0,1 N. Calentar a 808 durante 30 minutos. Dejar que se enfr e, agregar 2 mL de hidro xido de sodio 0,1 N y calentar a 808 durante 30 minutos adicionales. Dejar que se enfr e y neutralizar agregando 1 mL de a cido clorh drico 0,1 N. Diluir a volumen con Diluyente y mezclar (Solucio n A). Transferir aproximadamente 5 mg de ER Famotidina USP a otro matraz volume trico de 50 mL, agregar 8 mL de metanol y someter a ultrasonido para disolver. Agregar 10 mL de Solucio n A, diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Solucio n de aptitud del sistemaTransferir 25 mL de Solucio n madre de aptitud del sistema a un matraz volume trico de 50 mL. Agregar 1 gota (aproximadamente 20 mg) de ER Alcohol Benc lico USP, diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Solucio n esta ndarDisolver cantidades, pesadas con exactitud, de ER Famotidina USP y ER Alcohol Benc lico USP en Diluyente para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,1 mg de famotidina por mL y aproximadamente 0,09 mg de alcohol benc lico por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Preparar segu n se indica en la Valoracio n. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema, identicar los componentes basa ndose en sus tiempos de retencio n relativos indicados en la Tabla 1 y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el pico del alcohol benc lico se resuelve del frente de la fase mo vil, y la resolucio n, R, entre los picos adyacentes de alcohol benc lico e impureza B de famotidina no es menor de 1,3. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas es menos de 2,0% para cada pico. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 30 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de alcohol benc lico en cada mL de Inyeccio n tomado, por la fo rmula: D(C /V)(rU / rS) en donde D es el volumen, en mL, de la Solucio n de prueba; C es la concentracio n, en mg por mL, de alcohol benc lico en la Solucio n esta ndar; V es el volumen, en mL, de la Inyeccio n tomado para preparar la Solucio n de prueba; y rU y rS son las a reas de los picos de alcohol benc lico obtenidas a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente: el contenido de alcohol benc lico cumple con los requisitos para Sustancias Agregadas en Inyectables h1i. Otros requisitosCumple con los requisitos para Volumen en Envase en Inyectables h1i. Valoracio n Solucio n amortiguadoraDisolver en agua 13,8 g de fosfato monoba sico de sodio y diluir con agua a 1 L. Fase mo vilPreparar una mezcla de agua, metanol y Solucio n amortiguadora (32 : 5 : 3) y ajustar con hidro xido de sodio 1 N a un pH de 5,3.
concentrada este ril de Famotidina. Contiene no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de famotidina (C8H15N7O2S3). Puede contener conservantes adecuados.
Envasado y almacenamientoConservar en envases monodosis o multidosis, preferentemente de vidrio Tipo I. Almacenar en un refrigerador. EtiquetadoCumple con los requisitos de Etiquetado en Inyectables h1i. Etiquetar indicando que la Inyeccio n debe diluirse con un veh culo parenteral adecuado antes de la administracio n. Etiquetar indicando el nombre y la cantidad de cualquier conservante agregado. Esta ndares de referencia USP h11iER Alcohol Benc lico USP. ER Endotoxina USP. ER Famotidina USP. Identicacio nEl tiempo de retencio n del pico de famotidina en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Endotoxinas bacterianas h85iNo contiene ma s de 16,67 Unidades USP de Endotoxinas por mg de famotidina. Esterilidad h71i: cumple con los requisitos. pH h791i: entre 5,0 y 5,6. Part culas h788i: cumple con los requisitos para inyecciones de pequen o volumen. Compuestos relacionados Solucio n amortiguadora, Fase mo vil y DiluyenteProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n preparada segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n madre de aptitud del sistemaProceder segu n se indica en la prueba de Contenido de alcohol benc lico. Solucio n de aptitud del sistema LICOProceder segu SI ESTUVIERA PRESENTE EL ALCOHOL BENCI n se indica en la prueba de Contenido de alcohol benc lico. LICOTransferir 25 SI NO ESTUVIERA PRESENTE EL ALCOHOL BENCI mL de la Solucio n madre de aptitud del sistema a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Preparar segu n se indica en la Valoracio n. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema, identicar el pico de famotidina y otros picos basa ndose en los tiempos de retencio n relativos indicados en la Tabla 1 y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre los picos adyacentes de impureza B, impureza C, famotidina e impureza D no es menor de 1,3 para cada par de picos. Tabla 1 Nombre Alcohol benc lico (si estuviera presente) Impureza B1 Impureza C2 Famotidina Impureza D3
1 2
La Inyeccio n de Famotidina es una solucio n
Tiempo de Retencio n Relativo Aproximado 0,4 0,7 0,8 1,0 1,3
cido 3-[2-(diaminometilenamino)-1,3-tiazol-4-ilmetiltio]propanoico A 3-[2-(Diaminometilenamino)-1,3-tiazol-4-ilmetiltio]-N-sulfamoilpropanamida 3 3-[2-(Diaminometilenamino)-1,3-tiazol-4-ilmetiltio]propanamida
Monograf as Ociales / Fenito na
4113
DiluyenteDisolver 1,36 g de fosfato monoba sico de potasio en 800 mL de agua, ajustar con hidro xido de sodio 1 N a un pH de 7,0 y diluir con agua a 1 L. Preparacio n esta ndar LICODisolver cantiSI ESTUVIERA PRESENTE EL ALCOHOL BENCI dades, pesadas con exactitud, de ER Famotidina USP y ER Alcohol Benc lico USP en Diluyente para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,1 mg de famotidina por mL y aproximadamente 0,09 mg de alcohol benc lico por mL. LICODisolver una SI NO ESTUVIERA PRESENTE EL ALCOHOL BENCI cantidad, pesada con exactitud, de ER Famotidina USP en Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg de famotidina por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir un volumen de Inyeccio n, medido con exactitud, equivalente aproximadamente a 20 mg de famotidina, basado en la cantidad declarada, a un matraz volume trico de 200 mL y diluir a volumen con Diluyente. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L3 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas para el pico de famotidina es menos de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 30 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de famotidina (C8H15N7O2S3) en cada mL de la Inyeccio n, por la fo rmula: D(C/V)(rU / rS) en donde D es el volumen, en mL, de la Preparacio n de valoracio n; C es la concentracio n, en mg por mL, de famotidina en la Preparacio n esta ndar; V es el volumen, en mL, de Inyeccio n tomado para preparar la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. EtiquetadoEtiquetar las Tabletas Masticables para indicar que se deben masticar. Esta ndares de referencia USP h11iER Fenito na USP. Identicacio nEl tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Disolucio n h711i Solucio n amortiguadora de Tris 0,05 MDisolver 60,5 g de tris(hidroximetil)aminometano en 6 L de agua. Diluir con agua hasta 10 L y ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 9,0 + 0,05. Disolver 100 g de dodecil sulfato de sodio en aproximadamente 6 L de la solucio n amortiguadora preparada, transferir esta solucio n a la solucio n amortiguadora restante y mezclar. Medio: Solucio n amortiguadora de Tris 0,05 M; 900 mL. Aparato 2: 100 rpm. Tiempo: 120 minutos. Determinar la cantidad de C15H12N2O2 disuelta utilizando el me todo que se indica a continuacio n. Solucio n de trietilamina, Fase mo vil y Sistema cromatogra co Proceder como se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarDisolver una cantidad pesada con exactitud de ER Fenito na USP en metanol para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de 3,0 mg por mL. Transferir una porcio n de esta solucio n a un recipiente adecuado y diluir cuantitativamente con Medio de Disolucio n, si fuera necesario hacerlo en diluciones sucesivas, para obtener una concentracio n de 0,06 mg por mL. Transferir 10,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Solucio n de pruebaRetirar una porcio n de la solucio n en ana lisis y ltrar, desechando los primeros 3 mL del ltrado. Pipetear 10,0 mL de esta solucio n, transferir a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. ProcedimientoInyectar por separado volu menes iguales (aproximadamente 25 mL) de Solucio n esta ndar y de Solucio n de prueba en el cromato grafo, registrar los cromatogramas y medir las a reas correspondientes a las respuestas de los picos. Determinar la cantidad disuelta de C15H12N2O2 comparando las respuestas de los picos obtenidas a partir de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba. ToleranciasNo menos de 70% (Q) de la cantidad declarada de C15H12N2O2 se disuelve en 120 minutos. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos. Valoracio n Solucio n de trietilaminaTransferir 1 mL de trietilamina a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de agua, metanol, acetonitrilo, Solucio n de trietilamina y a cido ace tico (500 : 270 : 230 : 5 : 1). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver una cantidad de ER Fenito na USP pesada con exactitud en Fase mo vil y diluir cuantitativamente con Fase mo vil, si fuera necesario hacerlo en diluciones sucesivas, hasta obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,5 mg por mL. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas Masticables. Transferir una porcio n del polvo, pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 250 mg de fenito na, a un matraz volume trico de 500 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna no es menos de 6500 platos teo ricos; el factor de asimetr a no es mayor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%.
Fenito na, Tabletas

(T tulo vigenteno cambiara hasta el 18 de febrero de 2010) Cambio de t tulo de la monograf asera ocial a partir del 18 de febrero de 2010 Ver Fenito na, Tabletas Masticables
Fenito na, Tabletas Masticables

(La Monograf a con este nuevo t tulosera ocial a partir del 18 de febrero de 2010) (El t tulo actual de la monograf a es Fenito na, Tabletas)
Las Tabletas Masticables de Fenito na contienen no menos de 95,0 por ciento y no ma s de 105,0 por ciento de la cantidad declarada de C15H12N2O2.
4114
Fexofenadina / Monograf as Ociales
ProcedimientoInyectar por separado volu menes iguales (aproximadamente 25 mL) de Preparacio n esta ndar y de Preparacio n de valoracio n en el cromato grafo, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de C15H12N2O2 en la porcio n de Tabletas Masticables tomada, por la fo rmula: 500C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Fenito na USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidas a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. (Ocial a partir del 18 de febrero de 2010)
&Clorhidrato
de Fexofenadina, Tabletas
Las Tabletas de Clorhidrato de Fexofenadina
contienen no menos de 95,0 por ciento y no ma s de 105,0 por ciento de la cantidad declarada de clorhidrato de fexofenadina (C32H39NO4 HCl).
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. Almacenar a temperatura ambiente controlada. Esta ndares de referencia USP h11iER Clorhidrato de Fexofenadina USP. ER Compuesto Relacionado A de Fexofenadina USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197KiPesar y reducir a polvo no un nu mero suciente de Tabletas. Transferir una porcio n del polvo, pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 60 mg de clorhidrato de fexofenadina, a un tubo con tapa. Agregar 10 mL de una mezcla de acetonitrilo y metanol (10 : 1), y agitar o mezclar en un mezclador por vo rtice durante 1 a 2 minutos para dispersar la muestra. Dejar la solucio n en reposo durante 10 minutos o centrifugar durante 2 a 3 minutos. Pasar el l quido a un vaso de precipitados de 50 mL utilizando un ltro de politetrauoretileno para jeringa de 0,45 mm. Evaporar el disolvente hasta que quede aproximadamente 0,5 mL usando una corriente de nitro geno con calentamiento moderado (que no exceda de 758). Agregar 5 mL de agua y 5 gotas de a cido clorh drico diluido y revolver para inducir la precipitacio n. Enfriar en un ban o de hielo durante aproximadamente 30 minutos. Filtrar la solucio n a trave s de un crisol de vidrio sinterizado de 10 a 15 mm. Secar el precipitado en un horno de aire a 1058 durante 1 hora. El espectro de absorcio n IR de una dispersio n en bromuro de potasio del residuo as obtenido presenta ma ximos so lo a las mismas longitudes de onda que el de una dispersio n en bromuro de potasio de una preparacio n similar usando ER Clorhidrato de Fexofenadina USP. Para preparar la dispersio n en bromuro de potasio del esta ndar de referencia, transferir aproximadamente 60 mg de ER Clorhidrato de Fexofenadina USP a un tubo de ensayo con tapa y proceder segu n se indica ma s arriba, comenzando donde dice Agregar 10 mL de una mezcla de acetonitrilo y metanol (10 : 1). B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Disolucio n h711i Medio: a cido clorh drico 0,001 N; 900 mL, desgasicado. Aparato 2: 50 rpm. Tiempos: 10 y 30 minutos.
ProcedimientoDeterminar los porcentajes de la cantidad declarada de clorhidrato de fexofenadina (C32H39NO4 HCl) disuelta utilizando el siguiente me todo. Solucio n amortiguadoraDisolver en 300 mL de agua, 1,0 g de fosfato monoba sico de sodio, 0,5 g de perclorato de sodio y 0,3 mL de a cido fosfo rico concentrado, y mezclar. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de acetonitrilo y Solucio n amortiguadora (7 : 3). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h 621i). Solucio n esta ndar[NOTAPara disolver el clorhidrato de fexofenadina se puede usar una pequen a cantidad de metanol que no exceda de 0,5% del volumen total.] Disolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Clorhidrato de Fexofenadina USP en Medio para obtener una solucio n con una concentracio n conocida similar a la esperada para la solucio n en ana lisis. Solucio n de resolucio n[NOTAPara disolver el compuesto relacionado A de fexofenadina, se puede usar una pequen a cantidad de a cido ace tico que no exceda de 5% del volumen total.] Disolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Compuesto Relacionado A de Fexofenadina USP en agua para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,44 mg por mL. Transferir 1,0 mL de esta solucio n a un vial, agregar 40 mL de la Solucio n esta ndar y mezclar. Preparacio n de pruebaUsar porciones de la solucio n en ana lisis pasadas a trave s de un ltro de bra de vidrio de 0,45 mm. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 10 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Cromatograar la Solucio n de resolucio n segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre fexofenadina y el compuesto relacionado A de fexofenadina no es menor de 2,0. Cromatograar la Solucio n esta ndar segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (carga de columna de aproximadamente 2 a 3 mg de clorhidrato de fexofenadina) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos de fexofenadina. Calcular la cantidad, en mg, de clorhidrato de fexofenadina (C32H39NO4 HCl) disuelta en el Medio, por la fo rmula: CD(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Fexofenadina USP en la Solucio n esta ndar; D es el factor de dilucio n utilizado para preparar la Preparacio n de prueba; y rU y rS son las a reas de los picos de fexofenadina obtenidas a partir de la Preparacio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente. ToleranciasNo menos de 60% (Q) de la cantidad declarada de C32H39NO4 HCl se disuelve en 10 minutos; y no menos de 80% (Q) de la cantidad declarada de C32H39NO4 HCl se disuelve en 30 minutos. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos. Compuestos relacionados Diluyente y Fase mo vilPreparar segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n de sensibilidadDiluir 4,0 mL de la Preparacio n madre del esta ndar, preparada segu n se indica en la Valoracio n, con Fase mo vil a 100 mL. Diluir 6,0 mL de esta solucio n con Fase mo vil a 100 mL. Solucio n de compuesto relacionadoDisolver en Diluyente una cantidad, pesada con exactitud, de ER Compuesto Relacionado A de Fexofenadina USP y diluir cuantitativamente con Diluyente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,05 mg por mL. Solucio n madre del esta ndarUsar la Preparacio n madre del esta ndar, preparada segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarDiluir volu menes iguales de la Solucio n de compuesto relacionado y de la Solucio n madre del esta ndar con Fase mo vil para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,015 y 0,0045 mg por mL de clorhidrato de fexofenadina y compuesto relacionado A de fexofenadina, respectivamente.
Monograf as Ociales / Fluconazol
4115
Solucio n madre de pruebaUsar la Preparacio n madre de valoracio n. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Proceder segu n se indica en el Sistema cromatogra co en la Valoracio n. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de sensibilidad y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 6%. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 1,6 para el compuesto relacionado A de fexofenadina y 1,0 para fexofenadina; la resolucio n, R, entre fexofenadina y el compuesto relacionado A de fexofenadina no es menor de 7; el factor de asimetr a no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0% y no es ma s de 3,0% para fexofenadina y el compuesto relacionado A de fexofenadina, respectivamente. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar, de la Solucio n madre de prueba y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de compuesto relacionado A de fexofenadina en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100CD(ri / rS)/NL en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de compuesto relacionado A de fexofenadina en la Solucio n esta ndar; D es el factor de dilucio n para la preparacio n de la Solucio n madre de prueba, en mL; ri y rS son las a reas de los picos de compuesto relacionado A de fexofenadina en la Solucio n madre de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente; N es el nu mero de Tabletas usado para preparar la Solucio n madre de prueba; y L es la cantidad declarada, en mg por Tableta, de clorhidrato de fexofenadina. Calcular el porcentaje del producto de degradacio n descarboxilado [(+)-4-[1-hidroxi-4-[4-(hidroxidifenilmetil)-1-piperidinil]-butil]-isopropilbenceno; el tiempo de retencio n relativo es 6,7] en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100CD(ri / rS)/NLF en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Fexofenadina USP en la Solucio n esta ndar; D es el factor de dilucio n para la preparacio n de la Solucio n madre de prueba en mL; ri es el a rea del pico del producto de degradacio n descarboxilado en la Solucio n madre de prueba; rS es el a rea del pico de fexofenadina en la Solucio n esta ndar; N es el nu mero de Tabletas usado para preparar la Solucio n madre de prueba; L es la cantidad declarada, en mg por Tableta, de clorhidrato de fexofenadina; y F es el factor de respuesta relativa (F es 1,1) para el producto de degradacio n descarboxilado (F es 1,0 para todas las otras impurezas conocidas y desconocidas). Calcular el porcentaje de cualquier otra impureza en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100ri / (DrS + rT) en donde ri es el a rea del pico individual para una impureza individual desconocida en la Solucio n madre de prueba; D es el factor de dilucio n, en mL, de la Solucio n de prueba; rS es el a rea del pico de fexofenadina en la Solucio n de prueba; y rT es la suma de las a reas de los picos de todas las impurezas desconocidas en la Solucio n madre de prueba: descartar cualquier pico inferior a 0,05%; no se encuentra ma s de 0,4% de compuesto relacionado A de fexofenadina; no se encuentra ma s de 0,15% de producto de degradacio n descarboxilado; no se encuentra ma s de 0,2% de cualquier otra impureza individual; y no se encuentra ma s de 0,5% de impurezas totales. Valoracio n Solucio n a cidaDiluir 17 mL de a cido ace tico glacial con agua a 1 L y mezclar. Diluir 100 mL de esta solucio n con agua a 1 L. Solucio n amortiguadoraDiluir 15 mL de una solucio n que contenga una mezcla de acetonitrilo y trietilamina (1 : 1) con Solucio n a cida a 1 L. Ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 5,25. DiluyentePreparar una mezcla de acetonitrilo y Solucio n a cida (75 : 25). Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora y acetonitrilo (64 : 36). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i).
Preparacio n madre del esta ndarDisolver en Diluyente una cantidad, pesada con exactitud, de ER Clorhidrato de Fexofenadina USP y diluir cuantitativamente con Diluyente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,25 mg por mL. Preparacio n esta ndarDiluir un volumen exacto de la Preparacio n madre del esta ndar con Fase Mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,015 mg por mL. Preparacio n madre de valoracio nTransferir una cantidad suciente de Tabletas enteras (no menos de 10) a un matraz volume trico adecuado, agregar Solucio n a cida (equivalente aproximadamente al 20% del volumen total del matraz) y agitar meca nicamente a alta velocidad durante aproximadamente 30 minutos o hasta que las Tabletas se desintegren por completo y se dispersen namente. Agregar acetonitrilo (equivalente aproximadamente al 80% del volumen total del matraz) y agitar meca nicamente durante 60 minutos. Diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Pasar una porcio n de esta solucio n a trave s de un ltro de politetrauoretileno con un taman o de poro de 0,45 mm o menor y usar el ltrado. Diluir cuantitativamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con Diluyente para obtener una solucio n que contenga aproximadamente 1,2 mg de clorhidrato de fexofenadina por mL. Preparacio n de valoracio nDiluir cuantitativamente una al cuota de la Preparacio n madre de valoracio n, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con Fase mo vil para obtener una solucio n que contenga aproximadamente 0,018 mg de clorhidrato de fexofenadina por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L11 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 358. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos de fexofenadina. Calcular la cantidad, en mg por Tableta, de clorhidrato de fexofenadina (C32H39NO4 HCl) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: CD(rU / rS)/N en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Fexofenadina USP en la Preparacio n esta ndar; D es el factor de dilucio n usado para la Preparacio n de valoracio n; rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente; y N es el nu mero de Tabletas usadas en la Preparacio n de valoracio n.&1S (USP30)
Fluconazol
Cambio en la redaccio n: Compuestos relacionados[NOTAEn funcio n de la informacio n referente al proceso de fabricacio n, llevar a cabo la Prueba 1 o la Prueba 2 y la Prueba 3.] PRUEBA 1 Fase mo vilPreparar una mezcla de agua y acetonitrilo (80 : 20). Solucio n de aptitud del sistemaUtilizar la Solucio n esta ndar. Solucio n esta ndarTransferir cantidades pesadas con exactitud de ER Fluconazol USP, ER Compuesto Relacionado A de Fluconazol USP, ER Compuesto Relacionado B de Fluconazol USP y ER Compuesto Relacionado C de Fluconazol USP a un matraz volume trico adecuado, disolver en acetonitrilo, diluir a volumen cuantitativamente con Fase mo vil, y si fuera necesario en
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Fluconazol / Monograf as Ociales
diluciones sucesivas, y mezclar hasta obtener una solucio n con concentraciones conocidas de 10 mg por mL de cada Esta ndar de Referencia. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 30 mg de Fluconazol, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 10 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 260 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 3,5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 0,5 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 408. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n t picos son aproximadamente 4,9 minutos para el compuesto relacionado A de uconazol, 8,0 minutos para el compuesto relacionado B de uconazol, 8,5 minutos para el compuesto relacionado C de uconazol y 9,9 minutos para el uconazol; la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado B de uconazol y el compuesto relacionado C de uconazol no es menor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa de cada pico para inyecciones repetidas no es ma s de 5,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas correspondientes a los picos principales. Calcular el porcentaje de compuesto relacionado A de uconazol, de compuesto relacionado B de uconazol, de compuesto relacionado C de uconazol y de cualquier otra impureza presente en la porcio n de Fluconazol tomada, por la fo rmula: 1000(C/W)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Compuesto Relacionado A de Fluconazol USP, ER Compuesto Relacionado B de Fluconazol USP, ER Compuesto Relacionado C de Fluconazol USP o ER Fluconazol USP, respectivamente, en la Solucio n esta ndar; W es el peso, en mg, de Fluconazol tomado para preparar la Solucio n de prueba; rU es la respuesta del pico obtenido a partir de la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta promedio correspondiente a los picos de compuesto relacionado A de uconazol, de compuesto relacionado B de uconazol, de compuesto relacionado C de uconazol o de uconazol obtenidos a partir de las inyecciones repetidas de la Solucio n esta ndar: no se encuentra ma s de 1,0% de cualquier impureza con un tiempo de retencio n relativo (TRR) de aproximadamente 0,6; no se encuentra ma s de 0,2% de compuesto relacionado A de uconazol o compuesto relacionado C de uconazol; no se encuentra ma s de 0,1% de compuesto relacionado B de uconazol; no se encuentra ma s de 0,1% de cualquier otra impureza individual; no se encuentra ma s de &0,3%&1S (USP30) de impurezas totales &desconocidas;&1S (USP30) y no se encuentra ma s de & 1,5%&1S (USP30) de impurezas totales. PRUEBA 2 Solucio n amortiguadora de acetatoPreparar una solucio n de acetato de sodio anhidro 0,04 M; ajustar con a cido ace tico 1 N a un pH de 5,0; y mezclar. Solucio n A: Solucio n amortiguadora de acetato ltrada y desgasicada. Solucio n B: acetonitrilo. Solucio n C: metanol. Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A, Solucio n B y Solucio n C, segu n se indica en Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del sistema en Cromatograf a h621i). DiluyentePreparar una mezcla de Solucio n amortiguadora de acetato y metanol (84 : 16). Solucio n esta ndarDisolver en Diluyente una cantidad de ER Fluconazol USP pesada con exactitud y diluir cuantitativamente con Diluyente, si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,01 mg por mL. Solucio n de aptitud del sistemaDisolver cantidades adecuadas de ER Fluconazol USP y ER Clorhidrato de Desacetil Diltiazem USP en Diluyente. Diluir cuantitativamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n de aproximadamente 0,02 mg por mL y 0,006 mg por mL, respectivamente.
Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 200 mg de Fluconazol, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Diluyente. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 261 nm y una columna de 4,0 mm 6 10 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de 1 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo: Tiempo (minutos) 010 1020 2023 2325 2530 Solucio n A (%) 80 80?30 30 30?80 80 Solucio n B (%) 5 5?55 55 55?5 5 Solucio n C (%) Elucio n 15 isocra tica 15 gradiente lineal (A y B ) 15 isocra tica 15 reajuste de composicio n 15 re-equilibrio
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son 1,0 para uconazol y aproximadamente 1,2 para clorhidrato de desacetil diltiazem; la resolucio n, R, entre uconazol y clorhidrato de desacetil diltiazem no es menor de 10,0; la eciencia de la columna para uconazol no es menos de 30 000 platos teo ricos; y el factor de simetr a, T, no es ma s de 1,4. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas es menos de 5,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Fluconazol tomada, por la fo rmula: 10 000(ri / rS)(C/W)(1/F) en donde ri es la respuesta del pico de cada impureza obtenido a partir de la Solucio n de prueba; rS es la respuesta del pico de uconazol obtenido a partir de la Solucio n esta ndar; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Fluconazol USP en la Solucio n esta ndar; W es el peso, en mg, de Fluconazol tomado para preparar la Solucio n de prueba; y F es el factor de respuesta relativa segu n se determina a partir de la siguiente tabla. Factor de Respuesta Relativa (F) 0,72 0,85 1,21 0,96 0,97 1,0 Tiempo de Retencio n Relativo (TRR) 0,170,37 & 0,480,60&1S (USP30) & 0,670,79&1S (USP30) 1,141,18 & 1,201,32&1S (USP30) todos los dema s picos
No se encuentra ma s de 0,1% de cualquier impureza individual; y no se encuentra ma s de 0,5% de impurezas totales. PRUEBA 3 Adsorbente: una capa de mezcla de gel de s lice para cromatograf a de 0,25 mm de espesor. Solucio n de pruebaDisolver una cantidad pesada con exactitud de Fluconazol en metanol para obtener una solucio n que contenga aproximadamente 50 mg por mL. Soluciones esta ndarDisolver una cantidad pesada con exactitud de ER Fluconazol USP en metanol para obtener la Solucio n esta ndar A con una concentracio n conocida de aproximadamente 1 mg por mL (2,0%). Diluir cuantitativamente porciones de esta solucio n con metanol para obtener la Solucio n esta ndar B y la Solucio n esta ndar C con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,1 mg por mL (0,2%) y 0,05 mg por mL (0,1%), respectivamente. Fase mo vilPreparar una mezcla de cloroformo, metanol e hidro xido de amonio (80 : 20 : 1). Volumen de aplicacio n: 10 mL. Reactivo para rociado ADisolver aproximadamente 170 mg de nitrato de plata en 100 mL de agua. Reactivo para rociado B (Solucio n de yodoplatinato de potasio) Disolver aproximadamente 375 mg de a cido cloroplat nico en 5 mL de a cido clorh drico 1 N. Disolver aproximadamente 5 g de yoduro
Monograf as Ociales / Flumazenil
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de potasio en 50 mL de agua, y almacenar en un envase resistente a la luz. Preparar una mezcla de agua, la solucio n de yoduro de potasio y la solucio n de a cido cloroplat nico (20 : 9 : 1). ProcedimientoProceder segu n se indica en Cromatograf a en Capa Delgada en Cromatograf a h621i. Rociar la placa seca con Reactivo para rociado A y exponer la placa a luz UV a 365 nm durante 10 a 20 minutos. Secar la placa durante 20 minutos entre 808 y 908 y despue s rociar la placa con Reactivo para rociado B. Dejar que la placa se seque. Examinar la placa y comparar las intensidades de las manchas secundarias observadas en el cromatograma de la Solucio n de prueba con las intensidades de las manchas principales en los cromatogramas de las Soluciones esta ndar: ninguna mancha del cromatograma de la Solucio n de prueba con un valor RF entre 0,10 a 0,25 y 0,27 a 0,41 es ma s grande o ma s intensa que la que se obtiene de la Solucio n esta ndar B (0,2%).
longitud de onda corta. Rociar la placa con la Solucio n de ninhidrina y calentar durante 15 minutos a 1058. Los valores RF de los picos de analito son los siguientes. Compuesto RF Deteccio n Flumazenil aproximadamente 0,8 UV & Compuesto relacionado a p r o x i m a d a m e n t e Ninhidrina C 0,04 de umazenil&1S (USP30) Cualquier mancha con un valor RF que corresponda al &compuesto relacionado C de umazenil&1S (USP30) en el cromatograma obtenido a partir de la Solucio n de prueba no es ma s intensa que la mancha correspondiente en el cromatograma obtenido a partir de la Solucio n esta ndar 2: no se encuentra ma s de 0,2%. cido fosfo A rico diluido, pH 2,0, Fase mo vil, Solucio n de aptitud del sistema y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndar&Diluir la Preparacio n esta ndar cuantitativamente,&1S (USP30) con Fase mo vil, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1 mg por mL. Solucio n de prueba & Usar la Preparacio n de valoracio n.&1S (USP30) ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 5 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas durante al menos tres veces el tiempo de retencio n del pico de umazenil y medir las a reas de los picos principales. Calcular el porcentaje de cualquier impureza en la porcio n de Flumazenil tomada, por la fo rmula:
&
PRUEBA 2
Flumazenil
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11iER Flumazenil USP. &ER Compuesto Relacionado B de Flumazenil USP. ER Compuesto Relacionado C de Flumazenil USP.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Compuestos relacionados
PRUEBA 1
100(CS / CU)(ri / rS)(1/F)
Solucio n de ninhidrinaDisolver 0,5 g de ninhidrina en 90 mL de alcohol y agregar 10 mL de a cido ace tico glacial. DiluyentePreparar una mezcla de alcohol y cloroformo (1 : 1). Adsorbente: Capa de mezcla de gel de s lice para cromatograf a de 0,25 mm de espesor (ver Cromatograf a h621i). Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 250 mg de Flumazenil, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 5 mL. Disolver y diluir a volumen con Diluyente, y mezclar. Solucio n esta ndar 1Preparar una solucio n de ER Flumazenil USP y &ER Compuesto Relacionado C de Flumazenil USP &1S (USP30) en Diluyente con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,5 mg por mL y aproximadamente 0,6 mL por mL, respectivamente. Solucio n esta ndar 2Diluir 2,0 mL de la Solucio n esta ndar 1 con Diluyente hasta 10,0 mL. Volumen de aplicacio n: 10 mL. Fase mo vil: una mezcla de cloroformo, a cido ace tico glacial, alcohol y agua (75 : 15 : 7,5 : 2,5). ProcedimientoProceder segu n se indica en Cromatograf a en Capa Delgada en Cromatograf a h621i. Secar la placa durante 10 minutos en una corriente de aire fr o y examinar bajo luz UV de
en donde CS y CU son las concentraciones, en mg por mL, de umazenil en la Solucio n esta ndar y la Solucio n de prueba, respectivamente; ri es el a rea del pico para cualquier impureza en la Solucio n de prueba; rS es el a rea del pico de umazenil en la Solucio n esta ndar; y F es el factor de respuesta relativa para cada una de las impurezas conocidas con respecto al umazenil. [NOTA Los valores de F para todas las impurezas y los l mites correspondientes, se proveen en la Tabla adjunta.]&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Valoracio n cido fosfo A rico diluido, pH 2,0Ajustar 800 mL de agua con a cido fosfo rico a un pH de 2,0 + 0,05. cido Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de A fosfo rico diluido, pH 2,0, metanol y tetrahidrofurano (80 : 13 : 7). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de aptitud del sistemaDisolver en Fase mo vil cantidades apropiadas de &&1S (USP30) ER Flumazenil USP & y ER Compuesto Relacionado B de Flumazenil USP&1S (USP30) y diluir con Fase mo vil, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 6,4 mg por mL de cada compuesto. Factor de Respuesta Relativa 1,1 1,5 1,3 1,1 1,1 1,0
Nombre del compuesto Compuesto relacionado A de Flumazenil 7-Fluoro-4-metil-3,4-dihidro-2,5H-1,4benzodiazepina-2,5-diona 5,6-Dihidro-5-metil-6-oxo-4H-imidazo-[1,5-a] [1,4]benzodiazepina-3-carboxilato de etilo Compuesto relacionado B de Flumazenil Flumazenil 8-Cloro-5,6-dihidro-5-metil-6-oxo-4H-imidazo-[1,5-a] [1,4]benzodiazepina-3-carboxilato de etilo Cualquier impureza desconocida individual Total
Tiempo de Retencio n Relativo aproximadamente 0,4 aproximadamente 0,5 aproximadamente 0,7 aproximadamente 0,8 1,0 aproximadamente 2,2
L mite (%) 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,1 0,5
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Fluorometolona / Monograf as Ociales
Preparacio n esta ndarDisolver en Fase mo vil una cantidad pesada con exactitud de ER Flumazenil USP y diluir cuantitativamente con Fase mo vil, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1,0 mg por mL&de umazenil.&1S (USP30) Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 25,0 mg de Flumazenil, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 25 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 230 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo &5 mL de&1S (USP30) la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma: &&1S (USP30) los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente &0,8 para el compuesto relacionado B de umazenil &1S (USP30) y 1,0 para umazenil; la resolucio n, R, entre &el compuesto relacionado B de umazenil&1S (USP30) y umazenil no es menor de &4,0;&1S (USP30) la eciencia de la columna no es menos de 1500 platos teo ricos para el pico de umazenil; y el factor de asimetr a no es mayor de 1,5 para el pico de umazenil. Inyectar en el cromato grafo &5 mL de&1S (USP30) la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma: &&1S (USP30) la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 5 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos de umazenil. &Calcular el porcentaje de C15H14FN3O3 en la porcio n de Flumazenil tomada, por la fo rmula: 100(CS /CU)(rU / rS)&1S
(USP30)
&Acetato
de Fluorometolona
C24H31FO5 418,50 Pregna-1,4-diene-3,20-dione, 17-(acetyloxy)-9-uoro-11-hydroxy-6methyl-, (6a,11b)-. 17 Acetato de 9-uoro-11b,17-dihidroxi-6a-metilpregna-1,4-dien3,20-diona, [3801-06-7].
El Acetato de Fluorometolona contiene no menos de 98,0 por ciento y no ma s de 101,0 por ciento de C24H31FO5, calculado con respecto a la sustancia seca.
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. Esta ndares de referencia USP h11iER Fluorometolona USP. ER Acetato de Fluorometolona USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki. B: Absorcio n en el Ultravioleta h197Ui. Solucio n: 10 mg por mL. Medio: metanol. Rotacio n espec ca h781Si: entre +25,08 y +31,08. Solucio n de prueba: 20 mg por mL, en cloroformo. Pe rdida por secado h731iSecar al vac o a 608 durante 3 horas: no pierde ma s de 1,0% de su peso. Compuestos relacionados Fase mo vil, Solucio n de aptitud del sistema y Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarDisolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Fluorometolona USP y diluir cuantitativamente con acetonitrilo, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,03 mg por mL. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n. BlancoUsar acetonitrilo. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) del Blanco, de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y Tiempo de Retencio n Relativo 0,6 0,89 1,0 1,39 1,58 1,82 1,77 Factor de Respuesta Relativa 1,0a 1,0 0,45a 1,0 1,0 1,8 1,0
en donde &CS y CU son las concentraciones, en mg por mL, de umazenil en la Preparacio n esta ndar y la Preparacio n de valoracio n, respectivamente;&1S (USP30) y rU y rS son las a reas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
Impureza Fluorometolona Compuesto 5OX1 Acetato de Fluorometolona Diacetato de Fluorometolona Acetato de Fluorometolona, ana logo epoxi2 Acetato de Fluorometolona, Delta 9(11)3 Acetato de Fluorometolona 7, 9(11) Dieno4 Individual desconocida Impurezas totales
1 2 3
L mite (%) 1,0 0,5 1,0 0,5 0,2 0,3 0,1 1,5
19b,11b-Epoxi-17a-hidroxi-6a-metilpregna-1,4-dien-3,20-diona. 17a-Acetoxi-9b,11b-epoxi-6a-metilpregna-1,4-dien-3,20-diona. 17a-Acetoxi-6a-metilpregna-1,4,9(11)-trien-3,20-diona. 4 17a-Acetoxi-6a-metilpregna-1,4,7,9(11)-tetraen-3,20-diona. a Con respecto a la uorometolona.
Monograf as Ociales / Fluvoxamina
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medir las respuestas de los picos. [NOTADejar eluir durante aproximadamente dos veces y media el tiempo de elucio n del pico de acetato de uorometolona antes de realizar la inyeccio n siguiente.] Calcular el porcentaje de uorometolona o diacetato de uorometolona en la porcio n de Acetato de Fluorometolona tomada, por la fo rmula: 100 6 50 6 (1/F)(C/W)(rU / rS) en donde F es el factor de respuesta relativa (ver los valores en la Tabla adjunta); C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Fluorometolona USP en la Solucio n esta ndar; W es el peso, en mg, tomado para preparar la Solucio n de prueba; rU es la altura del pico de uorometolona o diacetato de uorometolona obtenido a partir de la Solucio n de prueba; y rS es la altura del pico de uorometolona obtenido a partir de la Solucio n esta ndar. Calcular el porcentaje de todas las otras impurezas de acetato de uorometolona en la porcio n de Acetato de Fluorometolona tomada, por la fo rmula: 100(1/F)(ri / rT) en donde F es el factor de respuesta relativa (ver los valores en la Tabla adjunta); ri es el a rea del pico de cada impureza (excepto uorometolona y diacetato de uorometolona) obtenida a partir de la Solucio n de prueba; y rT es la suma de las a reas de los picos de todas las impurezas ma s el pico de acetato de uorometolona obtenidas a partir de la Solucio n de prueba. Valoracio n Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de agua y acetonitrilo (60 : 40). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver en acetonitrilo una cantidad, pesada con exactitud, de ER Acetato de Fluorometolona USP y diluir cuantitativamente con acetonitrilo, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1,0 mg por mL. Solucio n de aptitud del sistemaPreparar una solucio n de ER Fluorometolona USP disolviendo una cantidad en metanol y diluyendo con acetonitrilo a una concentracio n nal de aproximadamente 1 mg por mL. Mezclar volu menes iguales de esta solucio n y de la Preparacio n esta ndar, y diluir con acetonitrilo a una concentracio n nal de aproximadamente 0,03 mg por mL de uorometolona y de acetato de uorometolona. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 50 mg de Acetato de Fluorometolona, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL, disolver y diluir a volumen con acetonitrilo, y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre uorometolona y acetato de uorometolona no es menor de 10. La eciencia de la columna para acetato de uorometolona no es menos de 10 000 platos teo ricos y el factor de asimetr a de acetato de uorometolona no es mayor de 2,0. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de C24H31FO5 en la porcio n de Acetato de Fluorometolona tomada, por la fo rmula: 50C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Acetato de Fluorometolona USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Propionato de Fluticasona
El Propionato de Fluticasona contiene no menos de 98,0 por ciento y no ma s de &101,0&1S (USP30) por ciento de C25H31F3O5S, calculado con respecto a la sustancia anhidra exenta de disolventes.
Eliminar lo siguiente: Contenido de bromouorometano Solucio n madre del esta ndarTransferir aproximadamente 20 mL de bromouorometano a un recipiente con 10 mL de dimetilformamida y mezclar. Diluir 10 mL de esta solucio n con 1 mL de dimetilformamida (0,002% v/v). Solucio n esta ndarDiluir 10 mL de Solucio n madre del esta ndar con 1 mL de dimetilformamida y mezclar (0,00002% v/v). Solucio n de pruebaDisolver 200 mg de Propionato de Fluticasona en 1,0 mL de dimetilformamida. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de gases con un detector de captura de electrones, una columna capilar de 0,32 mm 6 25 m recubierta con una capa de 5 mm de fase G27 y un sistema de inyeccio n dividida. El gas transportador es nitro geno, que uye a una velocidad de aproximadamente 2,8 mL por minuto. El gas de compensacio n es nitro geno, que uye a una velocidad de 30 mL por minuto. Programar la temperatura de la columna del siguiente modo. Equilibrar la temperatura de la columna inicialmente a 408 durante 3,5 minutos; luego aumentar la temperatura a una velocidad de 308 por minuto hasta 2008 y mantener a 2008 durante 10 minutos. Mantener la temperatura del sistema de inyeccio n dividida (70 : 1) a 858 y la temperatura del detector a 2508. Cromatograar la Solucio n esta ndar y registrar las respuestas de los picos segu n se indica en el Procedimiento. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 5 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba y medir las respuestas de los picos de bromouorometano. La intensidad del pico de bromouorometano en el cromatograma de la Solucio n de prueba es menor que la intensidad del pico de bromouorometano en el cromatograma de la Solucio n esta ndar.&1S (USP30)
&
Maleato de Fluvoxamina
Eliminar lo siguiente: cido maleicoTransferir aproximadamente 800,0 mg de MaleaA to de Fluvoxamina, pesados con exactitud, a un matraz Erlenmeyer de 250 mL que contenga 50 mL de agua. Valorar con hidro xido de sodio 0,1 N SV, usando 0,5 mL de fenolftale na SR como indicador. Realizar una determinacio n con un blanco y hacer las correcciones necesarias (ver Volumetr a h541i). Cada mL de hidro xido de sodio 0,1 N SV equivale a 5,805 mg de a cido maleico (C4H4O4). Se encuentra entre 26,0% y 27,5% de a cido maleico.&1S (USP30)
&
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Fluvoxamina / Monograf as Ociales
Cambio en la redaccio n: Agregar lo siguiente: Valoracio n Solucio n amortiguadoraDisolver aproximadamente 5 g de sal so dica del a cido 1-pentanosulfo nico y 0,7 g de fosfato monoba sico de potasio en 620 mL de agua. Ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 3,00 + 0,05. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora y acetonitrilo (62 : 38). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de resolucio nTransferir aproximadamente 6 mg de Maleato de Fluvoxamina a un matraz volume trico de 50 mL. Calentar la muestra a 1208 durante 10 minutos. Enfriar a temperatura ambiente y agregar 3,0 mL de a cido clorh drico 0,1 N. Calentar la solucio n en un ban o de agua durante 10 minutos. Enfriar a temperatura ambiente, agregar 50 mg de Maleato de Fluvoxamina y disolver en 25 mL de Fase mo vil. Diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Preparacio n esta ndarDisolver en Fase mo vil una cantidad, pesada con exactitud, de ER Maleato de Fluvoxamina USP y diluir cuantitativamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,05 mg por mL. Preparacio n madre de valoracio nTransferir una cantidad, pesada con exactitud, de aproximadamente 50 mg de Maleato de Fluvoxamina a un matraz volume trico de 50 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Preparacio n de valoracio nTransferir 5,0 mL de la Preparacio n madre de valoracio n a un matraz volume trico de 100 mL. Diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 234 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L7. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,7 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 408. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento:&&1S (USP30) la resolucio n, R, entre el iso mero Z y el maleato de uvoxamina no es menor de 3,0; y no es menor de 5,0 entre 5-metoxi-1-[4-(triuorometil)fenil]-1-pentanona-(E)-O-[2-[(2succinil)amino]etil]oxima y el iso mero Z. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna no es menos de 5000 platos teo ricos; el factor de asimetr a no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. &[NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos aproximados se indican en la Tabla 1.]&1S (USP30) ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos de maleato de uvoxamina. Calcular la cantidad, en mg, de C15H21F3N2O2 C4H4O4 en la porcio n de Maleato de Fluvoxamina tomada, por la fo rmula: 1000C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Maleato de Fluvoxamina USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las a reas de los picos obtenidas a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
&
EtiquetadoSi se usa una prueba de Compuestos relacionados diferente de la Prueba 1, el etiquetado declara la prueba de Compuestos relacionados con la cual cumple el art culo. &1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: Disolucio n h711i Medio: agua desgasicada; 900 mL. Aparato 2: 50 rpm. Tiempo: 30 minutos. ProcedimientoDeterminar la cantidad de C15H21F3N2O2 C4H4O4 disuelta empleando absorcio n UV a la longitud de onda de ma xima absorbancia, aproximadamente a 246 nm, en porciones de la & solucio n pasada a trave s de un ltro adecuado con un taman o de poro de 0,45 mm,&1S (USP30) diluidas apropiadamente con Medio, si fuera necesario, en comparacio n con una Solucio n esta ndar con una concentracio n conocida de ER Maleato de Fluvoxamina USP en el & mismo Medio. Cuando existen interferencias conocidas debidas a excipientes, se pueden aplicar correcciones de interferencia de excipientes, si fuera necesario. &1S (USP30) ToleranciasNo menos de 80% (Q) de la cantidad declarada de C15H21F3N2O2 C4H4O4 se disuelve en 30 minutos. Agregar lo siguiente:
& Compuestos relacionados[NOTASi (E)-5-metoxi-4-diuorometilvalerofenona-O-2-aminoetiloxima es una impureza conocida, se recomienda la Prueba 2.]
PRUEBA 1
Solucio n amortiguadora, Fase mo vil, Solucio n de resolucio n y Sistema croma togracoProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n de identicacio nDisolver en Fase mo vil una cantidad de a cido maleico y diluir cuantitativamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n de aproximadamente 0,35 mg por mL. Solucio n esta ndarUsar la Preparacio n esta ndar preparada segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n madre de valoracio n preparada segu n se indica en la Valoracio n. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar, de la Solucio n de prueba y de la Solucio n de identicacio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular el porcentaje de impurezas en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100(C/D)F(ri / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Maleato de Fluvoxamina USP en la Solucio n esta ndar; D es la concentracio n esperada, en mg por mL, de maleato de uvoxamina teniendo en cuenta la cantidad declarada y la cantidad de la muestra tomada para preparar la Solucio n de prueba; F es el factor de respuesta de cada impureza segu n se indica en la Tabla 1; ri es el a rea del pico individual de cada impureza en la Solucio n de prueba; y rS es el a rea del pico de maleato de uvoxamina en la Solucio n esta ndar. Los l mites de impurezas se especican en la Tabla 1. [NOTADescartar cualquier pico debido al a cido maleico o al blanco del reactivo.]
PRUEBA 2
Maleato de Fluvoxamina, Tabletas
Cambio en la redaccio n: Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Almacenar a &temperatura ambiente.&1S (USP30)
DilyuentePreparar una mezcla de metanol y agua (60 : 40). Solucio n amortiguadora de acetatoDisolver aproximadamente 13,6 g de acetato de sodio trihidrato en 1000 mL de agua. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora de acetato, acetonitrilo y metanol (550 : 300 : 150). Agregar 2 mL de trietilamina. Ajustar con a cido ace tico glacial a un pH de 4,5. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i).
Monograf as Ociales / Fosinopril
4121
Tabla 1 Tiempo de Retencio n Relativo aproximadamente 0,19 aproximadamente 0,50 aproximadamente 0,67 aproximadamente 0,79 1,0 aproximadamente 1,18 aproximadamente 1,74 aproximadamente 2,00 aproximadamente 3,45 aproximadamente 4,3 aproximadamente 4,2 Factor de Respuesta 1,0 1,4 1,0 1,0 1,0 1,0 0,6 1,0 0,3 1,0 L mite % 0,8 0,2 0,5 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,1 1,8
Nombre del Compuesto cido maleico A 5-Metoxi-1-[4-(triuorometil)fenil]-1-pentanona(E)-O-[2-[(2-succinil)amino]etil]oxima Maleato de 5-metoxi-4-(triuorometil)valerofenona(E)-O(2-aminoetil)aminoetil oxima Z-iso mero Fluvoxamina Maleato de 4-(triuorometil)valerofenona(E)-O-2-(2-aminoetil)aminoetil oxima Maleato de (E)-O-2-(2-aminoetil)-4-(triuorometil)-a-fenilacetofenona oxima Maleato de 4-(triuorometil)valerofenona(E)-O-(2-aminoetil) oxima 5-Metoxi-4-(triuorometil)valerofenona oxima Monomaleamida de (E)-O-(2-aminoetil)oxima de 5-metoxi-1-[4(triuorometil)fenil]-1-pentanona 5-Metoxi-4-(triuorometil)valerofenona cetona Impurezas desconocidas Total Solucio n esta ndarDiluir cuantitativamente la Preparacio n esta ndar, preparada segu n se indica en la Valoracio n, con Dilyuente para obtener una solucio n nal con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,001 mg por mL de maleato de uvoxamina. Solucio n de pruebaTransferir 5 mL de la Preparacio n madre de valoracio n (el sobrenadante despue s de la centrifugacio n), preparada segu n se indica en la Valoracio n, a un matraz volume trico de 50 mL y diluir a volumen con Dilyuente. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L7. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2,0 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 408. Inyectar en el cromato grafo 20 mL de la Solucio n de resolucio n y registrar la respuesta de los picos segu n se indica en el Procedimiento. Identicar los picos empleando los tiempos de retencio n relativos que se indican en la Tabla 2; la resolucio n, R, entre el Z-iso mero y maleato de uvoxamina no es menor de 1,0. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 5,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 100 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas para todas las impurezas y maleato de uvoxamina. Calcular el porcentaje de las impurezas en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100(C/D)(1/F)(ri / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Maleato de Fluvoxamina USP en la Solucio n esta ndar; D es la concentracio n esperada, en mg por mL, de maleato de uvoxamina teniendo en cuenta la cantidad declarada y la cantidad de la muestra tomada para preparar la Solucio n de prueba; F es el factor de respuesta para cada impureza segu n se indica en la Tabla 2; ri es el a rea del pico individual de cada impureza en la Solucio n de prueba; y rS es el a rea del pico de maleato de uvoxamina en la Solucio n esta ndar. Los l mites de impurezas se especican en la Tabla 2.
&Fosinopril
So dico
C30H45NNaO7P 585,64 L-Proline, 4-cyclohexyl-1-[[[2-methyl-1-(1-oxopropoxy)propoxy](4phenylbutyl)phosphinyl]acetyl]-, sodium salt, [1[S*(R*)],2a,4b]-. Sal so dica del propionato (e ster) de (4S)-4-ciclohexil-1-[(R)-[(S)-1hidroxi-2-metilpropoxi](4-fenilbutil)fosnil]acetil-L-prolina [88889-14-9].
El Fosinopril So dico contiene no menos de 97,5 por

ciento y no ma s de 102,0 por ciento de C30H45NNaO7P, calculado con respecto a la sustancia anhidra.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables y almacenar a temperatura ambiente controlada. Esta ndares de referencia USP h11iER Fosinopril So dico USP. ER Compuesto Relacionado A de Fosinopril USP. ER Compuesto Relacionado B de Fosinopril USP. ER Compuesto Relacionado C de Fosinopril USP. ER Compuesto Relacionado D de Fosinopril USP. ER Compuesto Relacionado E de Fosinopril USP. ER Compuesto Relacionado F de Fosinopril USP. Identicacio n, Absorcio n en el Infrarrojo h197Mi. Agua, Me todo I h921i: no ma s de 0,2%. Metales pesados, Me todo II h231i: 0,002%. Compuestos relacionados
PRUEBA 1
Fase mo vil, Solucio n de aptitud del sistema y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n.
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Fosinopril / Monograf as Ociales
Tabla 2 Tiempo de Retencio n Relativo Aproximado 0,58 0,70 0,75 0,85 1,0 1,86 aproximadamente 1,99 aproximadamente 2,17 Factor de Respuesta 1,0 1,0 1,0 0,5 1,0 1,0 1,0 1,0 L mite % 0,2 0,5 0,2 0,5 0,2 0,2 0,2 0,2 1,5
Nombre del Compuesto (E)-5-Metoxi-4-diuorometilvalerofenona-O-2-aminoetiloxima cido (E)-N-[2[[[a-(4-metoxibutil)-4-(triuorometil)benziliden]aA mino]oxi] etil]aspa rtico (E)-5-Metoxi-4-triuorometilvalerofenona-O-[2-N-(aminoetil)aminoetil]oxima Z-iso mero Fluvoxamina (E)-4-Triuorometil-valerofenona-O-2-aminoetiloxima 5-Metoxi-4-triuorometilvalerofenona oxima 5-Metoxi-4-triuorometilvalerofenona Impurezas desconocidas Total ProcedimientoProceder segu n se indica en la Valoracio n y medir las a reas de cada componente en el cromatograma obtenido, llevando a cabo la cromatograf a hasta cuatro veces el tiempo de retencio n del pico de fosinopril so dico. Calcular el porcentaje de cada compuesto relacionado individual, por la fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es la respuesta de cualquier pico individual diferente del pico de fosinopril so dico; y rs es la suma de las respuestas de todos los picos. [NOTASi estuvieran presentes, es posible que dos diastereoiso meros ma s no puedan resolverse del compuesto relacionado B de fosinopril por este me todo. Estos picos, que aparecen a un tiempo de retencio n relativo de 0,7, se deben integrar juntos para determinar su conformidad con el l mite de la Tabla 1.]
Tabla 1 Tiempo de Retencio n Relativo 2,0 0,7 1,2 1,3 0,8 0,9 0,53 0,67
1 2
Compuesto Relacionado de Fosinopril A1 B2 C3 D4 E5 F6 Impureza 17 Impureza 28
L mite (%) Prueba 1 1 2 2 3 3 1 1 0,3 1,0 0,3 0,3 0,3 0,3 0,3 0,2
Solucio n de resolucio nTransferir aproximadamente 1 mg de ER Fosinopril So dico USP, de ER Compuesto Relacionado C de Fosinopril USP y de ER Compuesto Relacionado D de Fosinopril USP a un matraz volume trico de 100 mL. Disolver y diluir a volumen con Solucio n esta ndar y mezclar. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 214 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L12. Mantener la temperatura de la columna a 458. La velocidad de ujo es de aproximadamente 0,9 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el fosinopril so dico y el compuesto relacionado C de fosinopril no es menor de 1,5. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo aproximadamente 20 mL de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma y medir las a reas de los picos, llevando a cabo la cromatograf a hasta dos veces el tiempo de retencio n del pico de fosinopril so dico. Calcular so lo los porcentajes del compuesto relacionado C de fosinopril y del compuesto relacionado D de fosinopril por la fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es la respuesta del pico del compuesto relacionado C de fosinopril o compuesto relacionado D de fosinopril; y rs es la suma de las respuestas de todos los picos.
PRUEBA 3
(4S)-4-Ciclohexil-1-[(4-fenilbutil)fosnil]acetil-L-prolina Propionato (e ster) de (4S)-4-ciclohexil-1-[(R)-[(S)-1-hidroxi-2-metilpropoxi](4-fenilbutil)fosnil]acetil-D-prolina 3 Mezcla de sal so dica del propionato (e ster) de (4S)-4-ciclohexil-1-[(S)-[(S)1-hidroxi-2-metilpropoxi](4-fenilbutil)fosnil]acetil-L-prolina y sal so dica del propionato (e ster) de (4S)-4-ciclohexil-1-[[(R)-[(R)-1-hidroxi-2-metilpropoxi](4-fenilbutil)fosnil]acetil-L-prolina 4 Sal so dica del propionato (e ster) de (4R)-4-ciclohexil-1-[(R)-[(S)-1-hidroxi2-metilpropoxi](4-fenilbutil)fosnil]acetil-L-prolina 5 Sal so dica del propionato (e ster) de (4S)-4-fenil-1-[(R)-[(S)-1-hidroxi-2metilpropoxi](4-fenilbutil)fosnil]acetil-L-prolina 6 Sal so dica del propionato (e ster) de (4S)-4-ciclohexil-1-[(R)-[(S)-1-hidroxipropoxi](4-fenilbutil)fosnil]acetil-L-prolina 7 Acido (2S,4S)-4-ciclohexil-1-pivaloilpirrolidin-2-carbox lico 8 Acido 2-((RS)-((SR)-2-metil-1-(propioniloxi)propoxi)(4-fenilbutil)fosnil) ace tico
PRUEBA 2
Fase mo vilPreparar una mezcla desgasicada de acetonitrilo, agua y a cido fosfo rico (4000 : 15 : 2). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n esta ndarUsar la Preparacio n esta ndar, preparada segu n se indica en la Valoracio n.
Solucio n de a cido fosfo rico al 0,2%Preparar una solucio n de a cido fosfo rico 1 en 500. Fase mo vilPreparar una mezcla desgasicada de acetonitrilo y Solucio n de a cido fosfo rico al 0,2% (560 : 440). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de resolucio nTransferir aproximadamente 1 mg de ER Fosinopril So dico USP, de ER Compuesto Relacionado E de Fosinopril USP y de ER Compuesto Relacionado F de Fosinopril USP a un matraz volume trico de 100 mL. Disolver y diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 10 mg de Fosinopril So dico, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL. Disolver y diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 205 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L11. Mantener la temperatura de la columna a 458. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado F de fosinopril y fosinopril so dico no es menor de 1,5; y la resolucio n entre el compuesto relacionado E de fosinopril y el compuesto relacionado F de fosinopril no es menor de 1,5. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo aproximadamente 20 mL de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma y medir las a reas de los picos, llevando a cabo la cromatograf a hasta cuatro
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veces el tiempo de retencio n del pico de fosinopril so dico. Calcular so lo los porcentajes de compuesto relacionado E de fosinopril y de compuesto relacionado F de fosinopril, usando la siguiente fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es la respuesta del pico del compuesto relacionado E de fosinopril o del compuesto relacionado F de fosinopril; y rs es la suma de las respuestas de todos los picos. Adema s de no exceder los l mites para impurezas de la Tabla 1, no se encuentra ma s de 0,1% de cualquier otra impureza individual (calculado segu n se indica en el Procedimiento en la PRUEBA 1); y no se encuentra ma s de 1,5% de impurezas totales. Valoracio n Fase mo vilPreparar una mezcla desgasicada de acetonitrilo, agua y a cido fosfo rico (2000 : 10 : 1). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de aptitud del sistemaTransferir aproximadamente 10 mg de ER Fosinopril So dico USP y aproximadamente 1 mg de ER Compuesto Relacionado A de Fosinopril USP y de ER Compuesto Relacionado B de Fosinopril USP a un matraz volume trico de 100 mL. Disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Preparacio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Fosinopril So dico USP en Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,10 mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 25 mg de Fosinopril So dico, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 250 mL. Disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 214 nm y una columna de 3,9 mm 6 15 cm rellena con material L3. Mantener la temperatura de la columna a 338. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado B de fosinopril y fosinopril so dico no es menor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa de la respuesta del pico de fosinopril so dico para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de C30H45NNaO7P en la porcio n de Fosinopril So dico tomada, por la fo rmula: 250CS (rU / rS) n, en mg por mL, de ER Fosinopril en donde CS es la concentracio So dico USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
&Fosinopril
So dico, Tabletas
Las Tabletas de Fosinopril So dico contienen no menos

de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de fosinopril so dico (C30H45NNaO7P).
Esta ndares de referencia USP h11iER Fosinopril So dico USP. ER Compuesto Relacionado A de Fosinopril USP. ER Compuesto Relacionado G de Fosinopril USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Fi Muestra de pruebaTransferir una porcio n de Tabletas reducidas a polvo no, equivalente aproximadamente a 25 mg de fosinopril so dico, a un vaso de precipitados de 100 mL con 40 mL de agua. Calentar a 258 durante 5 minutos mezclando y pasar a trave s de un embudo con un disco sinterizado de porosidad media. Centrifugar el ltrado a 2500 rpm durante 30 minutos. Ajustar el ltrado con a cido fosfo rico a un pH de 3 para precipitar el fosinopril y pasar a trave s de un embudo con disco sinterizado. Disolver el precipitado pasando cloroformo a trave s del ltro y evaporar hasta sequedad la solucio n clorofo rmica en una corriente de aire. Proceder segu n se indica, usando el residuo aceitoso as obtenido y un residuo preparado de manera similar a partir de 25 mg de ER Fosinopril So dico USP. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Disolucio n h711i Medio: agua; 900 mL. Aparato 2: 50 rpm. Tiempo: 30 minutos. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de acetonitrilo y a cido fosfo rico al 0,2% (64 : 36). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de resolucio nPreparar una solucio n en Fase mo vil que contenga aproximadamente 0,02 mg por mL de ER Fosinopril So dico USP y de ER Compuesto Relacionado G de Fosinopril USP. Solucio n de pruebaUsar porciones de la solucio n en ana lisis pasadas a trave s de un ltro de acr lico de 1,2 mm. [NOTANo usar ltros de vidrio.] Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 215 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm, rellena con material L1 de 5 mm, mantenida a una temperatura de 408. La velocidad de ujo es de aproximadamente 3 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y la Solucio n esta ndar, y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el pico de fosinopril so dico y el pico del compuesto relacionado G de fosinopril no es menor de 1,7; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de la Solucio n esta ndar no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Solucio n de prueba y de una Solucio n esta ndar con una concentracio n conocida de ER Fosinopril So dico USP en el mismo Medio, y registrar los cromatogramas. Medir las respuestas de los picos principales y calcular la cantidad de C30H45NNaO7P disuelta. ToleranciasNo menos de 80% (Q) de la cantidad declarada de C30H45NNaO7P se disuelve en 30 minutos. Uniformidad de unidades de dosicacio n: cumplen con los requisitos. L mite de compuesto relacionado A Fase mo vil, Diluyente y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarDisolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Compuesto Relacionado A de Fosinopril USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg por mL. Diluir con Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n nal conocida de 0,0025 mg por mL. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular el porcentaje de compuesto relacionado A de fosinopril en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 1000C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, del compuesto relacionado A de fosinopril en la Solucio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente. No se encuentra ma s de 4%.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Almacenar a temperatura ambiente controlada.
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Fosinopril / Monograf as Ociales
Valoracio n Fase mo vilPreparar una mezcla desgasicada de metanol y a cido fosfo rico al 0,2% (78 : 22). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). DiluyentePreparar una mezcla de solucio n de urea 0,2 M y acetonitrilo (80 : 20). Solucio n de resolucio nPreparar una solucio n en Diluyente que contenga 30 mg de ER Compuesto Relacionado A de Fosinopril USP y 70 mg de ER Fosinopril So dico USP por mL. Preparacio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Fosinopril So dico USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir no menos de 10 Tabletas a un matraz volume trico de 500 mL, agregar 400 mL de Diluyente y mezclar durante 40 minutos. Diluir a volumen con Diluyente, mezclar y centrifugar. Diluir cuantitativamente un volumen (VS mL), medido con exactitud, del sobrenadante transparente con Diluyente para obtener una solucio n (VA mL) que contenga aproximadamente 0,1 mg de fosinopril so dico por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 215 nm y una columna de 4,0 mm 6 30 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y la Preparacio n esta ndar, y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el tiempo de retencio n relativo es 0,4 para el compuesto relacionado A de fosinopril y 1,0 para fosinopril so dico; la resolucio n, R, entre los picos de fosinopril so dico y el compuesto relacionado A de fosinopril no es menor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de la Preparacio n esta ndar no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Continuar la cromatograf a hasta 1,5 veces el tiempo de retencio n del pico de fosinopril so dico. Calcular la cantidad, en mg, de fosinopril so dico (C30H45NNaO7P) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 50C(VA / VS)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Fosinopril So dico USP en la Preparacio n esta ndar; VA es el volumen, en mL, de la Preparacio n de valoracio n; VS es el volumen, en mL, del sobrenadante tomado para la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
&Fosinopril
So dico e Hidroclorotiazida,
Tabletas
Las Tabletas de Fosinopril So dico e Hidroclorotiazida
contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de las cantidades declaradas de fosinopril so dico (C30H45NNaO7P) y de hidroclorotiazida (C7H8ClN3O4S2).
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Almacenar a temperatura ambiente controlada.
Esta ndares de referencia USPh11iER Compuesto Relacionado A de Benzotiadiazina USP. ER Fosinopril So dico USP. ER Compuesto Relacionado A de Fosinopril USP. ER Compuesto Relacionado H de Fosinopril USP. ER Hidroclorotiazida USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Fi DICOTransferir una porcio FOSINOPRIL SO n de Tabletas reducidas a polvo no, equivalente aproximadamente a 25 mg de fosinopril so dico, a un vaso de precipitados de 100 ml con 40 mL de agua, calentar a 308 durante 5 minutos mezclando y pasar a trave s de un embudo con un disco sinterizado de porosidad media. Centrifugar el ltrado a 2500 rpm durante 30 minutos. Ajustar el ltrado con a cido clorh drico a un pH de 1 para precipitar el fosinopril y pasar a trave s de un embudo con disco sinterizado. Disolver el precipitado pasando metil isobutil cetona a trave s del ltro y evaporar hasta sequedad el ltrado en una corriente de nitro geno. Proceder segu n se indica, usando el residuo aceitoso as obtenido y un residuo preparado de manera similar a partir de 25 mg de ER Fosinopril So dico USP. HIDROCLOROTIAZIDATransferir una porcio n de Tabletas reducidas a polvo no, equivalente aproximadamente a 37,5 mg de hidroclorotiazida, a un vaso de precipitados de 250 mL con 120 mL de agua, calentar a 308 durante 5 minutos mezclando y pasar a trave s de un embudo con un disco sinterizado de porosidad media. Lavar el precipitado con 60 mL de una mezcla de cloruro de metileno y a cido ace tico glacial (90 : 10) y desechar el ltrado. Disolver el precipitado pasando 10 mL de metil isobutil cetona a trave s del ltro y evaporar hasta sequedad el ltrado en una corriente de nitro geno. Proceder segu n se indica, usando el residuo ceroso as obtenido y un residuo preparado de manera similar a partir de 37 mg de ER Hidroclorotiazida USP. B: Los tiempos de retencio n de los picos de fosinopril so dico y de hidroclorotiazida en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponden con los de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n de fosinopril so dico y la Valoracio n de hidroclorotiazida, respectivamente. Disolucio n h711i Medio: agua; 900 mL. Aparato 2: 50 rpm. Tiempo: 30 minutos. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de fosfato monoba sico de potasio 0,01 M (pH 3,0), metanol y acetonitrilo (45 : 35 : 20). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Soluciones madre del esta ndarDisolver por separado aproximadamente 20 mg de ER Fosinopril So dico USP y de ER Hidroclorotiazida USP, pesados con exactitud, en 6 mL de metanol y diluir con agua para obtener soluciones (Solucio n madre del esta ndar A y B) con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,1 mg por mL de ER Fosinopril So dico USP y ER Hidroclorotiazida USP, respectivamente. Solucio n esta ndarMezclar 25 mL de Solucio n madre del esta ndar B y x25 mL de Solucio n madre del esta ndar A y diluir con agua a 200 mL, donde x es el cociente entre las respectivas cantidades declaradas, en mg, de fosinopril so dico e hidroclorotiazida por Tableta. Solucio n de resolucio nTransferir 5 mg de ER Compuesto Relacionado H de Fosinopril USP a un matraz volume trico de 100 mL y disolver en 5 mL de metanol. Agregar 2,0 mL de Solucio n madre del esta ndar B, diluir a volumen con agua y mezclar. Solucio n de pruebaUsar porciones de la solucio n en ana lisis pasadas a trave s de un ltro de acr lico de 1,2 mm. [NOTANo usar ltros de vidrio.] Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector de longitud de onda variable ajustado a 210 nm y 272 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm, rellena con material L10 de 5 mm, mantenida a 408. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,3 mL por minuto. Con el detector ajustado a 215 nm, inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y la Solucio n esta ndar, y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el pico del compuesto relacionado H de fosinopril y el pico de hidroclorotiazida no es menor de 1,5 y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de la Solucio n esta ndar no es ma s de 1,5%.
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ProcedimientoInyectar por separado volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Solucio n de prueba y de la Solucio n esta ndar y registrar los cromatogramas con el detector ajustado a 272 nm de 0 a 5 minutos y a 210 de 5 a 9 minutos, para hidroclorotiazida y fosinopril so dico, respectivamente. Medir las respuestas de los picos principales y calcular la cantidad de C30H45NNaO7P y de C7H8ClN3O4S2 disuelta. ToleranciasNo menos de 80% (Q) de la cantidad declarada de C30H45NNaO7P y no menos de 75% (Q) de la cantidad declarada de C7H8ClN3O4S2 se disuelven en 30 minutos. Uniformidad de unidades de dosicacio n: cumplen con los requisitos. Compuestos relacionados
PRUEBA 1
Fase mo vil, Diluyente y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n de fosinopril so dico. Solucio n esta ndarDisolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Compuesto Relacionado A de Fosinopril USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg por mL. Diluir una al cuota (5 en 200) en Diluyente para obtener una solucio n que contenga 0,0025 mg por mL. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n, preparada segu n se indica en la Valoracio n de fosinopril so dico. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 25 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Descartar el pico de hidroclorotiazida. Calcular el porcentaje de compuesto relacionado A de fosinopril en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 20C(D/L)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de compuesto relacionado A de fosinopril en la Solucio n esta ndar; D es el volumen, en mL, de la Solucio n de prueba; L es la cantidad declarada, en mg por Tableta, de fosinopril so dico; y rU y rS son las respuestas de los picos del compuesto relacionado A de fosinopril obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente. No se encuentra ma s de 4% de compuesto relacionado A de fosinopril so dico. Calcular el porcentaje de cualquier otra impureza en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es la respuesta del pico de cada impureza; y rs es la suma de las respuestas de todos los picos: no se encuentra ma s de 0,1% de cualquier otra impureza individual y no se encuentra ma s de 5,0% de impurezas totales.
PRUEBA 2
Valoracio n de fosinopril so dico Fase mo vilPreparar una mezcla desgasicada de metanol y a cido fosfo rico al 0,2% (75 : 25). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Diluyente: una mezcla de urea 0,2 M y acetonitrilo (80 : 20). Solucio n de resolucio nPreparar una solucio n en Fase mo vil con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg por mL de ER Compuesto Relacionado A de Fosinopril USP y de ER Fosinopril So dico USP. Preparacio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Fosinopril So dico USP en Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg por mL. Preparacio n de valoracio nColocar 5 Tabletas por matraz en dos matraces volume tricos de 500 mL, agregar 400 mL de Diluyente a cada matraz, agitar durante 45 minutos, diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Centrifugar una porcio n de la solucio n a 2000 rpm durante 20 minutos. Mezclar volu menes iguales del sobrenadante, medidos con exactitud, y diluir, si fuera necesario, para producir una concentracio n esperada de fosinopril so dico de aproximadamente 0,1 mg por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector de longitud de onda variable ajustado a 215 nm y una columna de 3,9 mm 6 30 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son 0,4 para el compuesto relacionado A de fosinopril y 1,0 para fosinopril so dico; la resolucio n, R, entre los picos de fosinopril so dico y el compuesto relacionado A de fosinopril no es menor de 4,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de la Preparacio n esta ndar no es ma s de 1,5%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 25 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Continuar la cromatograf a hasta 1,5 veces el tiempo de retencio n del pico de fosinopril so dico. Calcular la cantidad, en mg, de fosinopril so dico (C30H45NNaO7P) en la porcio n de cada Tableta tomada, por la fo rmula: 100(CD)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Fosinopril So dico USP en la Preparacio n esta ndar; D es el factor de dilucio n de la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. Valoracio n de hidroclorotiazida Fase mo vilPreparar una mezcla desgasicada de a cido fosfo rico al 0,2% y metanol (85 : 15). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de resolucio nPreparar una solucio n en Fase mo vil con una concentracio n conocida de aproximadamente 12,5 mg por mL de ER Hidroclorotiazida USP y 10 mg por mL de ER Compuesto Relacionado A de Benzotiadiazina USP. Preparacio n esta ndarDisolver una cantidad pesada con exactitud de ER Hidroclorotiazida USP en Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 12,5 mg por mL. Preparacio n de valoracio nColocar 5 Tabletas por matraz en dos matraces volume tricos de 500 mL, agregar 50 mL de agua a cada matraz y agitar durante 15 minutos para desintegrar las Tabletas. Agregar aproximadamente 350 mL de metanol, agitar durante 45 minutos, diluir a volumen con metanol y mezclar. Mezclar 5,0 mL de cada sobrenadante, diluir con Fase mo vil a 100 mL y mezclar para producir una concentracio n esperada de hidroclorotiazida de aproximadamente 12,5 mg por mL. Centrifugar una porcio n de la solucio n a 2000 rpm durante 20 minutos. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector de longitud de onda variable ajustado a 271 nm y una columna de 3,9 mm 6 30 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y la Preparacio n esta ndar, y registrar el cromatograma
Fase mo vil y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n de hidroclorotiazida. Solucio n esta ndarDisolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Compuesto Relacionado A de Benzotiadiazina USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,2 mg por mL. Diluir una al cuota (2 en 100) en Fase mo vil para obtener una solucio n que contenga 0,004 mg por mL. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n, preparada segu n se indica en la Valoracio n de hidroclorotiazida.. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 25 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Descartar el pico de fosinopril. Calcular el porcentaje de compuesto relacionado A de benzotiadiazina en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 20C(D/L)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de compuesto relacionado A de benzotiadiazina en la Solucio n esta ndar; D es el volumen, en mL, de la Solucio n de prueba; L es la cantidad declarada, en mg por Tableta, de hidroclorotiazida; y rU y rS son las respuestas de los picos de compuesto relacionado A de benzotiadiazina obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente. No se encuentra ma s de 0,5% de compuesto relacionado A de benzotiadiazina.
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Gonadorelina / Monograf as Ociales
segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son 0,7 para el compuesto relacionado A de benzotiadiazina y 1,0 para hidroclorotiazida; la resolucio n, R, entre los picos de hidroclorotiazida y el compuesto relacionado A de benzotiadiazina no es menor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de la Preparacio n esta ndar no es ma s de 1,5%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 25 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Continuar la cromatograf a hasta 1,5 veces el tiempo de retencio n del pico de hidroclorotiazida. Calcular la cantidad, en mg, de hidroclorotiazida (C7H8ClN3O4S2) en la porcio n de cada Tableta tomada, por la fo rmula: 100(CD)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Hidroclorotiazida USP en la Preparacio n esta ndar; D es el factor de dilucio n de la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
&Acetato
de Gonadorelina
C55H75N17O13 xC2H4O2 yH2O 1182,3 Luteinizing hormone-releasing factor acetate (salt) hydrate. Acetato (sal) de 5-oxo-L-prolil-L-histidil-L-triptol-L-seril-L-tirosilglicil-L-leucil-L-arginil-L-prolilglicinamida hidrato [52699-48-6; 33515-09-2].
El Acetato de Gonadorelina es una hormona polipept dica sinte tica que tiene la propiedad de estimular la liberacio n de la hormona luteinizante desde el hipota lamo. Contiene no menos de 80 por ciento en peso de C55H75N17O13, y el resto es a cido ace tico y agua. NOTAEl Acetato de Gonadorelina es sumamente higrosco pico. Evitar la exposicio n a la humedad y almacenar en un desecador.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables, bien sellados y protegidos de la humedad. Almacenar a una temperatura de no ma s de 88. EtiquetadoEtiquetar indicando que esta destinado so lo al uso veterinario. Esta ndares de referencia USP h11iER Acetato de Gonadorelina USP. ER Compuesto Relacionado A de Acetato de Gonadorelina USP. Identicacio n A: La masa monoisoto pica por Espectrometr a de Masa h736i es 1181,6 + 1 unidades de masa. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Solucio n de prueba se corresponde con el del cromatograma de la Solucio n esta ndar, segu n se obtienen en la prueba de Compuestos relacionados.
Rotacio n espec ca h781Si: entre 548 y 668, a 208, calculada con respecto al contenido de pe ptido determinado en la Valoracio n. Solucio n de prueba: 10 mg por mL, en a cido ace tico al 1% (v/ v). Agua, Me todo Ic h921i: no ma s de 7,0%, determinada introduciendo directamente no menos de 2 mg de la sustancia so lida en el titulador. L mite de uoruro[NOTAUsar recipientes de polipropileno para la preparacio n de soluciones y esta ndares.] Soluciones esta ndarPreparar una serie de esta ndares de calibracio n que contengan 10, 1, 0,1 y 0,05 ppm de uoruro disuelto en una solucio n amortiguadora para ajuste de la fuerza io nica adecuada para el electrodo en uso (pH aproximadamente 5). Solucio n de pruebaDisolver entre 3 y 5 mg de Acetato de Gonadorelina en 1,375 mL de la misma solucio n amortiguadora usada para la preparacio n de las Soluciones esta ndar. ProcedimientoUsando un electrodo selectivo para el io n uoruro conectado a un medidor de pH/iones, medir el potencial de cada Solucio n esta ndar, y gracar la respuesta en funcio n del logaritmo de la concentracio n. Determinar la l nea de regresio n por el me todo de m nimos cuadrados. La prueba se considera va lida si la pendiente de la curva esta en el intervalo de 54 a 60 mV por de cada y la curva de regresio n tiene un cuadrado del coeciente de correlacio n, r 2, no menor de 0,995. A partir de la curva de calibracio n y de la concentracio n de la Solucio n de prueba, determinar la cantidad de uoruro en la muestra: no se encuentra ma s de 0,1% (p/p). Acido ace tico y a cido triuoroace tico Solucio n AAgregar 7,0 mL de a cido fosfo rico y 5,0 mL de amon aco concentrado a 900 mL de agua. Mezclar y diluir con agua a 1000 mL, pasar a trave s de un ltro de 0,45 mm y desgasicar. Agregar 20 mL de metanol, mezclar y desgasicar durante 2 minutos adicionales. Solucio n BPreparar una mezcla desgasicada de acetonitrilo y agua (1 : 1). Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y Solucio n B, segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). DiluyenteDiluir 5,0 mL de a cido fosfo rico con agua hasta 1000 mL y mezclar bien. Solucio n madre de a cido triuoroace ticoAgregar aproximadamente 50 mL de agua a un matraz volume trico de 100 mL con tapo n. Tarar el matraz tapado en una balanza anal tica hasta que no haya una variacio n importante en la lectura. Agregar cuidadosamente 670 mL de a cido triuoroace tico al matraz, tapar inmediatamente y pesar. Diluir a volumen con agua. Soluciones esta ndarPesar con exactitud 150, 75 y 10 mg de acetato de sodio trihidrato en sendos matraces volume tricos de 100 mL. Agregar a los matraces 10 mL, 2 mL y 100 mL, respectivamente, de la Solucio n madre de a cido triuoroace tico y diluir cada uno con Diluyente hasta la marca de 100 mL. Calcular la concentracio n, en mg por mL, de a cido ace tico en cada Solucio n esta ndar usando la siguiente ecuacio n: 0,00434WA en donde WA es el peso, en mg, de acetato de sodio trihidrato tomado. Calcular la concentracio n, en mg por mL, de a cido triuoroace tico en cada Solucio n esta ndar usando la siguiente ecuacio n: 0,0001(WTV) en donde WT es el peso, en mg, de a cido triuoroace tico usado para la preparacio n de la Solucio n madre de a cido triuoroace tico; y V es el volumen, en mL, de Solucio n madre de a cido triuoroace tico usado para preparar la Solucio n esta ndar. Solucio n de pruebaPreparar muestras por duplicado pesando con exactitud dos al cuotas de aproximadamente 4,0 mg de Acetato de Gonadorelina y disolviendo cada una en 1 mL de Diluyente.
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Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 210 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es aproximadamente 1,5 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo: Tiempo (minutos) 05 56 614 1415 1525 Solucio n A % 100 100?0 0 0?100 100 Solucio n B % 0 0?100 100 100?0 0 Elucio n isocra tica lineal isocra tica volver al valor inicial reequilibrio
SISTEMA 2
Inyectar en el cromato grafo las Soluciones esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna no es menos de 2000 platos teo ricos para el pico del a cido triuoroace tico y no es menos de 10 000 para el pico del a cido ace tico; y la desviacio n esta ndar relativa para seis inyecciones repetidas de la Solucio n esta ndar ma s concentrada no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por duplicado volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de cada una de las Soluciones esta ndar seguido de las Soluciones de prueba duplicadas. Gracar las a reas de los picos de cada uno de los componentes de las Soluciones esta ndar en funcio n de la concentracio n, en mg por mL y determinar la l nea de regresio n por el me todo de m nimos cuadrados. La prueba se considera va lida si las curvas de regresio n para el a cido ace tico y el a cido triuoroace tico tienen un cuadrado del coeciente de correlacio n, r 2, no menor de 0,995. A partir de la gra ca resultante, determinar los porcentajes de a cido ace tico y a cido triuoroace tico en la Solucio n de prueba: se encuentra entre 8% y 12,5% de a cido ace tico y no se encuentra ma s de 0,25% de a cido triuoroace tico. Compuestos relacionados Solucio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Acetato de Gonadorelina USP en agua para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,5 mg por mL. Solucio n de aptitud del sistemaDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Compuesto Relacionado A de Acetato de Gonadorelina USP en agua para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,5 mg por mL. Mezclar volu menes iguales de esta solucio n y de la Solucio n esta ndar. Solucio n de pruebaDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de Acetato de Gonadorelina en agua para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,5 mg por mL.
SISTEMA 1
Disolvente 1Mezclar 1 mL de a cido triuoroace tico con 1 L de agua. Pasar a trave s de un ltro de 0,45 mm y desgasicar. Disolvente 2Mezclar 1 mL de a cido triuoroace tico con 1 L de acetonitrilo. Solucio n APreparar una mezcla de Disolvente 1 y Disolvente 2 (95 : 5). Solucio n BPreparar una mezcla de Disolvente 2 y Disolvente 1 (60 : 40). Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un HPLC con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es aproximadamente 1,5 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo: Tiempo (minutos) 0 025 25 2530 Solucio n A (%) 91 91?45 45?91 91 Solucio n B (%) 9 9?55 55?9 9 Elucio n inicial lineal volver al valor inicial reequilibrio
Fase mo vilAgregar 47 mL de a cido fosfo rico y 55 mL de trietilamina a 4 L de agua, y ajustar con a cido fosfo rico o trietilamina a un pH de 2,5, segu n corresponda. Pasar a trave s de un ltro de 0,45 mm y desgasicar. Agregar acetonitrilo para obtener una concentracio n de acetonitrilo de 13% (v/v). Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un HPLC con un detector a 215 nm y una columna de 4,6 mm 6 10 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es aproximadamente 1,5 mL por minuto usando elucio n isocra tica y con un tiempo de corrida de 50 minutos. Usando el Sistema 1 y el Sistema 2 inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar las respuestas de los picos segu n se indica en el Procedimiento. La Solucio n esta ndar se usa so lo para identicar el pico de acetato de gonadorelina. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre acetato de gonadorelina y el compuesto relacionado A de acetato de gonadorelina no es menor de 2,0; la eciencia de la columna no es menos de 75 000 platos teo ricos para el Sistema 1 y no es menos de 3000 platos teo ricos para el Sistema 2; el factor de asimetr a no es mayor de 2,0 para el Sistema 1 ni para el Sistema 2; y la desviacio n esta ndar relativa para cinco inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar, de la Solucio n de aptitud del sistema y de la Solucio n de prueba, seguido de una co-inyeccio n de la Solucio n de prueba con la Solucio n esta ndar, en el Sistema 1 y en el Sistema 2. Incluir inyecciones de un blanco entre las diferentes soluciones. Integrar todos los picos para obtener una l nea base similar a la de los cromatogramas del blanco, descartando cualquier pico debido al disolvente, el contra-io n y los artefactos en la l nea base. Usando las a reas de los picos e incluyendo todos los picos de ma s de 0,05%, calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Acetato de Gonadorelina tomada: no se encuentra ma s de 1% de cualquier impureza individual y no se encuentra ma s de 2% de impurezas totales. Ana lisis de aminoa cidosProceder segu n se indica en la Valoracio n. Expresar el contenido de cada aminoa cido en mmoles y calcular el nu mero total de mmoles de Acetato de Gonadorelina en la muestra de prueba segu n se indica en la Valoracio n. Dividiendo el nu mero de mmoles de cada aminoa cido por el nu mero total de mmoles de Acetato de Gonadorelina en la muestra de prueba, se encuentran las proporciones relativas de aminoa cidos: serina, de 0,7 a 1,05; a cido gluta mico, de 0,95 a 1,05; prolina, de 0,95 a 1,05; glicina, de 1,9 a 2,1; leucina, de 0,9 a 1,1; tirosina, de 0,7 a 1,05; histidina, de 0,95 a 1,05; y arginina, de 0,95 a 1,05. La isoleucina y la lisina esta n ausentes; no se detectan ma s que trazas de otros aminoa cidos excepto tripto fano. Valoracio n(ver Art culos Obtenidos por Biotecnolog aAna lisis de Aminoa cidos h1052i). [NOTAEl siguiente me todo se proporciona con nes informativos; se puede usar cualquier me todo de ana lisis de aminoa cidos validado.] Estandarizar el instrumento con una mezcla que contenga las mismas cantidades molares por volumen (excepto de L-cistina que estara en la mitad de la cantidad molar) de glicina y de la forma L de los siguientes aminoa cidos: lisina, treonina, alanina, leucina, histidina, serina, valina, tirosina, arginina, a cido gluta mico, metionina, fenilalanina, a cido aspa rtico, prolina, isoleucina, tripto fano y cistina. Preparacio n de valoracio n (ver Hidro lisis de Prote nas, Me todo 1 h1052i)Pesar con exactitud entre 0,4 y 1,0 mg de Acetato de Gonadorelina en ampollas de vidrio. Agregar un m nimo de 1,0 mL de Solucio n de Hidro lisis que contenga 4% de fenol, congelar la ampolla de muestra y sellar a la llama al vac o. Hidrolizar a 1108 durante aproximadamente 22 horas. Despue s de la hidro lisis, secar la muestra de prueba al vac o para eliminar cualquier a cido residual. Agregar a la ampolla 2 mL de una solucio n amortiguadora adecuada para el analizador de aminoa cidos y pasar a trave s de un ltro con un taman o de poro de 0,45 mm. ProcedimientoPreparar una co-inyeccio n de la Solucio n esta ndar y la muestra de prueba. Inyectar un volumen adecuado en el analizador de aminoa cidos y registrar y medir las respuestas de los picos de cada aminoa cido. Expresar el contenido de cada aminoa cido en mmoles. El nu mero total de mmoles de acetato de gonadorelina en la muestra de prueba se calcula sumando el nu mero de mmoles de
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a cido gluta mico, prolina, glicina, leucina, tirosina, histidina y arginina y dividiendo por ocho. Calcular el porcentaje de C55H75N17O13 en la porcio n de Acetato de Gonadorelina tomada, por la fo rmula: 118,23(N/W) en donde N es el nu mero total de mmoles de acetato de gonadorelina; y W es el peso de la muestra en mg.&1S (USP30)
Bitartrato de Hidrocodona
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11iER Bitartrato de Dihidrocode na USP. ER Bitartrato de Hidrocodona USP. &ER Compuesto Relacionado A de Bitartrato de Hidrocodona USP.&1S (USP30) Eliminar lo siguiente:
&
Impurezas comunes h466i Solucio n de prueba: una mezcla de metanol y agua (1 : 1). Solucio n esta ndar: una mezcla de metanol y agua (1 : 1). Fase mo vil: una mezcla de hexanos, acetona, metanol e hidro xido de amonio (60 : 40 : 20 : 1,5). Visualizacio n: 3, seguida de un rociado con pero xido de hidro geno SR. [NOTACubrir la placa para cromatograf a en capa delgada con una placa de vidrio para reducir la velocidad de desaparicio n de las manchas. Excluir la mancha del origen, si estuviera presente, de la determinacio n de las impurezas totales.]&1S (USP30)
de Hidrocodona y Metilbromuro de Homatropina, Tabletas

Las Tabletas de Bitartrato de Hidrocodona y Metilbromuro de Homatropina contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de las cantidades declaradas de bitartrato de hidrocodona disesquihidrato (C18H21NO3 C4H6O6 2 H2O) y de metilbromuro de homatropina (C17H24BrNO3). NOTASe requiere el uso de viales silanizados para muestreadores automa ticos, como los viales tratados con dimetildiclorosilano,* para la prueba de Disolucio n, las pruebas de L mite y la Valoracio n para evitar la degradacio n de los fa rmacos.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables y resistentes a la luz.
*
&Bitartrato
Se puede obtener un grado adecuado de Analytical Research and Testing, Somerville, NJ; Fax: 908-725-8848.
Esta ndares de referencia USP h11iER Bitartrato de Dihidrocode na USP. ER Metilbromuro de Homatropina USP. ER Bitartrato de Hidrocodona USP. Identicacio n A: Prueba de Identicacio n por Cromatograf a en Capa Delgada h201i Solucio n ADisolver 850 mg de subnitrato de bismuto en una mezcla de 10 mL de a cido ace tico glacial y 40 mL de agua. Solucio n BDisolver 8 g de yoduro de potasio en 20 mL de agua. Solucio n madre: una mezcla de Solucio n A y Solucio n B (1 : 1). Disolvente: una mezcla de metanol y agua (9 : 1). Reactivo para rociado 1[NOTAPreparar immediatamente antes de usar.] Preparar una mezcla de agua, a cido ace tico glacial y Solucio n madre (50 : 10 : 5). Reactivo para rociado 2: pero xido de hidro geno SR. Solucio n esta ndar 1Transferir una cantidad, pesada con exactitud, de aproximadamente 30 mg de ER Metilbromuro de Homatropina USP a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Disolvente, y mezclar. Solucio n esta ndar 2Transferir una cantidad, pesada con exactitud, de aproximadamente 25 mg de ER Bitartrato de Hidrocodona USP a un matraz volume trico de 25 mL, disolver y diluir a volumen con Disolvente, y mezclar. Solucio n de pruebaTransferir una porcio n de 20 Tabletas reducidas a polvo no, equivalente al peso promedio de las Tabletas, a un tubo de centr fuga, agregar 5,0 mL de Disolvente, centrifugar y usar el sobrenadante. Fase mo vil: una mezcla de acetato de etilo, agua y a cido fo rmico (134 : 33 : 33). ProcedimientoAplicar 50 mL de Solucio n esta ndar 1, Solucio n esta ndar 2 y Solucio n de prueba, y proceder segu n se indica en el cap tulo. Retirar la placa y secar a 1058. Rociar la placa con Reactivo para rociado 1 y despue s con Reactivo para rociado 2: los valores RF de las manchas principales en el cromatograma de la Solucio n de prueba se corresponden con los de las Soluciones esta ndar. B: Los tiempos de retencio n de los picos principales en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponden con los del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos. L mite de bitartrato de dihidrocode na, hidrocodona diol y sustancias relacionadas Solucio n de par io nicoPreparar 1-octanosulfonato de sodio 0,005 M y ajustar con a cido ace tico glacial a un pH de 2,5 + 0,1. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n de par io nico y metanol (6 : 4). Agregar 0,5 mL de trietilamina por L. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de aptitud del sistemaDisolver aproximadamente 2 mg de hidrocodona diol y de ER Bitartrato de Dihidrocode na USP en 35 mL de Fase mo vil en un matraz volume trico de 100 mL y diluir a volumen con Fase mo vil. Diluir cuantitativamente esta solucio n, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg por mL de cada uno. Solucio n esta ndarUsar la Preparacio n esta ndar, preparada segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 280 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L7 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,67 para hidrocodona diol, 0,75 para bitartrato de dihidrocode na y 1,0 para bitartrato de hidrocodona; la resolucio n, R, entre hidrocodona diol y bitartrato de dihidrocode na no es menor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de cada uno de estos compuestos no es ma s de 5,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 200 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las
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a reas de los picos. Calcular los porcentajes de hidrocodona diol y de bitartrato de dihidrocode na en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100(rD / rS) en donde rD es la respuesta del pico individual de hidrocodona diol o de dihidrocode na en el cromatograma obtenido a partir de la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico de bitartrato de hidrocodona en el cromatograma obtenido a partir de la Solucio n esta ndar: no se encuentra ma s de 0,5% de hidrocodona diol y no se encuentra ma s de 1,0% de bitartrato de dihidrocode na. Calcular el porcentaje de las sustancias relacionadas de cada uno en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es la respuesta del pico para cualquier sustancia relacionada individual con un tiempo de retencio n mayor de 5 minutos; y rs es la suma de las respuestas de todos los picos: no se encuentra ma s de 0,5% de cualquier sustancia relacionada individual. La suma de todas las impurezas no es ma s de 1,5%. L mite de bromhidrato de homatropina y sustancias relacionadas Solucio n amortiguadoraPreparar una solucio n de fosfato diba sico de potasio 0,005 M y ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 6,4 + 0,1. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora y acetonitrilo (17 : 3). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n esta ndarDisolver en Fase mo vil una cantidad, pesada con exactitud, de bromhidrato de homatropina y diluir cuantitativamente con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,6 mg por mL. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 210 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L7 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 5,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de bromhidrato de homatropina en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100(rH / rS) en donde rH es la respuesta del pico individual de bromhidrato de homatropina en el cromatograma obtenido a partir de la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico para metilbromuro de homatropina en el cromatograma obtenido a partir de la Solucio n esta ndar: no se encuentra ma s de 0,5% de bromhidrato de homatropina. Calcular el porcentaje de las sustancias relacionadas de cada uno en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es la respuesta del pico para cualquier sustancia relacionada individual con un tiempo de retencio n relativo menor de 0,44 en relacio n con el tiempo de retencio n del bitartrato de hidrocodona; y rs es la suma de las respuestas de todos los picos: no se encuentra ma s de 0,5% de cualquier sustancia relacionada individual. La suma de todas las impurezas no es ma s de 1,5%. L mite de tropina Adsorbente: capa de gel de s lice para cromatograf a de 0,25 mm de espesor. Diluyente: e ter diet lico. Solucio n de pruebaReducir a polvo no 25 Tabletas y agregar a un tubo de centr fuga. Pipetear 5,0 mL de e ter diet lico y transferir al tubo de centr fuga, mezclar en un mezclador por vo rtice durante 5 minutos, centrifugar y usar el sobrenadante. Solucio n madre del esta ndarDisolver en Diluyente una cantidad, pesada con exactitud, de tropina y diluir cuantitativamente con Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 150 mg por mL.
Soluciones esta ndarTransferir 5,0 mL de la Solucio n madre del esta ndar a un matraz volume trico de 10 mL y diluir a volumen cuantitativamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con Diluyente para obtener Soluciones esta ndar A, B, C y D con concentraciones conocidas de aproximadamente 75 mg por mL, 37,5 mg por mL, 18,75 mg por mL y 9,38 mg por mL, respectivamente. Reactivo para rociadoDisolver 300 mg de a cido plat nico en 3 mL de acido clorh drico diluido, agregar 97 mL de agua y 100 mL de yoduro de potasio al 6% en agua, y mezclar. Fase mo vil: una mezcla de alcohol e hidro xido de amonio (400 : 100). ProcedimientoAplicar volu menes iguales (aproximadamente 500 mL) de la Solucio n madre del esta ndar, de Soluciones esta ndar A, B, C y D, y de la Solucio n de prueba a una placa para cromatograf a en capa delgada (ver Cromatograf a h621i), y proceder segu n se indica en el cap tulo. Despue s de que la placa se haya secado, colocarla en una ca mara saturada con vapor de yodo durante aproximadamente 30 minutos, despue s colocarla en una campana para permitir que el yodo sublime de la placa y rociar la placa con Reactivo para rociado hasta que aparezcan las manchas. Cualquier mancha de la Solucio n de prueba que aparezca a un valor RF correspondiente a tropina no es mayor en taman o ni en intensidad que la mancha correspondiente obtenida a partir de la Solucio n esta ndar B (0,5%): no se encuentra ma s de 0,5% de tropina. Valoracio n Solucio n amortiguadoraPreparar una solucio n de fosfato diba sico de potasio 0,005 M y ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 6,4 + 0,01. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora y acetonitrilo (17 : 3). Preparacio n esta ndarDisolver en Fase mo vil una cantidad, pesada con exactitud, de ER Bitartrato de Hidrocodona USP y ER Metilbromuro de Homatropina USP y diluir cuantitativamente con Fase mo vil para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,2 mg por mL y 0,06 mg por mL, respectivamente. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas. Transferir una porcio n del polvo, pesada con exactitud, a un matraz volume trico de 25 mL equivalente aproximadamente a 5 mg de bitartrato de hidrocodona y 1,5 mg de metilbromuro de homatropina. Pipetear 15 mL de la Fase mo vil y transferir al matraz volume trico, someter a ultrasonido durante 15 minutos y despue s agitar con agitador de movimiento tipo mun eca (wrist-action) durante 15 minutos adicionales. Pipetear otros 10 mL de Fase mo vil y transferir al matraz volume trico y mezclar. Pasar esta solucio n a trave s de un ltro con un taman o de poro de 0,45 mm antes de inyectarla en el cromato grafo. Sistema cromatogra coEquipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 230 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L7 de 5 m m. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,44 para metilbromuro de homatropina y 1,0 para bitartrato de hidrocodona; la resolucio n, R, entre bitartrato de hidrocodona y metilbromuro de homatropina no es menor de 2,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 3,0% para cada analito. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de metilbromuro de homatropina (C17H24BrNO3) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: (LCS / CU)(rU / rS) en donde L es la cantidad declarada, en mg, de metilbromuro de homatropina en cada Tableta; CS es la concentracio n, en mg por mL, de ER Metilbromuro de Homatropina USP en la Preparacio n esta ndar; CU es la concentracio n, en mg por mL, de metilbromuro de homatropina en la Preparacio n de valoracio n, basada en la cantidad declarada por Tableta y el grado de dilucio n; y rU y rS son las respuestas de los picos de metilbromuro de homatropina obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. Calcular la cantidad, en mg, de bitartrato de
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Ibuprofeno / Monograf as Ociales
hidrocodona disesquihidrato (C18H21NO3 C4H6O6 2 H2O) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: (494,50/449,46)(LCS / CU)(rU / rS) en donde 494,50 y 449,46 son los pesos moleculares de bitartrato de hidrocodona disesquihidrato y bitartrato de hidrocodona anhidro, respectivamente; L es la cantidad declarada, en mg, de bitartrato de hidrocodona disesquihidrato en cada Tableta; CS es la concentracio n, en mg por mL, de ER Bitartrato de Hidrocodona USP en la Preparacio n esta ndar; CU es la concentracio n, en mg por mL, de bitartrato de hidrocodona disesquihidrato en la Preparacio n de valoracio n, basada en la cantidad declarada por Tableta y el grado de dilucio n; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Ibuprofeno
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11iER Ibuprofeno USP. Compuesto Relacionado C de Ibuprofeno USP.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: L mite de &compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) Usando los cromatogramas de la Preparacio n de valoracio n y la & Solucio n esta ndar de compuesto relacionado C de ibuprofeno,&1S (USP30) obtenidos segu n se indica en la Valoracio n, calcular el porcentaje de &compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) (C12H16O) en la porcio n de Ibuprofeno tomada, por la fo rmula: 10 000 (C / W)(RU / RS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de &ER Compuesto Relacionado C de Ibuprofeno USP&1S (USP30) en la &Solucio n esta ndar de compuesto relacionado C de ibuprofeno;&1S (USP30) W es el peso, en mg, del Ibuprofeno tomado para preparar la Preparacio n de valoracio n; y RU y RS son los cocientes de las respuestas entre los picos del &compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) y de la valerofenona, obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la &Solucio n esta ndar de compuesto relacionado C de ibuprofeno,&1S (USP30) respectivamente: no se encuentra ma s de 0,1%. Cambio en la redaccio n:
&
ER
de esta ndar interno y mezclar para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,012 mg de &compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 1200 mg de Ibuprofeno, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con la Solucio n de esta ndar interno y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i) Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son de aproximadamente 1,4 para el esta ndar interno y 1,0 para el ibuprofeno; la resolucio n, R, entre ibuprofeno y el esta ndar interno no es menor de 2,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. Inyectar en el cromato grafo la &Solucio n esta ndar de compuesto relacionado C de ibuprofeno,&1S (USP30) y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 1,0 para la valerofenona y 1,2 para el &compuesto relacionado C de ibuprofeno;&1S (USP30) la resolucio n, R, entre el pico de la valerofenona y el del &compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) no es menor de 2,5; los factores de asimetr a para los picos individuales no son mayores de 2,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 5 mL) de la Preparacio n esta ndar, de la Preparacio n de valoracio n y de la &Solucio n esta ndar de compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30), registrar los cromatogramas y medir las respuestas correspondientes a los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de C13H18O2 en la porcio n de Ibuprofeno tomada, por la fo rmula: 100C(RU / RS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Ibuprofeno USP en la Preparacio n esta ndar; y RU y RS son los cocientes de respuesta obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
Ibuprofeno, Suspensio n Oral
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11iER Ibuprofeno USP. Compuesto Relacionado C de Ibuprofeno USP.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n:
&
ER
Valoracio n Fase mo vilDisolver 4,0 g de a cido cloroace tico en 400 mL de agua y ajustar con hidro xido de amonio a un pH de 3,0. Agregar 600 mL de acetonitrilo, ltrar y desgasicar. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de esta ndar internoPreparar una solucio n de valerofenona en Fase mo vil con una concentracio n de aproximadamente 0,35 mg por mL. Preparacio n esta ndarDisolver en la Solucio n de esta ndar interno una cantidad, pesada con exactitud, de ER Ibuprofeno USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 12 mg por mL. & Solucio n esta ndar de compuesto relacionado C de ibuprofeno &1S (USP30) Disolver cuantitativamente en acetonitrilo una cantidad, pesada con exactitud, de&ER Compuesto Relacionado C de Ibuprofeno USP&1S (USP30) para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,6 mg por mL. Agregar 2,0 mL de esta solucio n madre a 100,0 mL de Solucio n
L mite de &compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) Fase mo vil y DiluyenteProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarDisolver cuantitativamente una cantidad, pesada con exactitud, de &ER Compuesto Relacionado C de Ibuprofeno USP&1S (USP30) en acetonitrilo para obtener una solucio n madre con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,5 mg por mL. Transferir 3,0 mL de esta solucio n madre a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Transferir 2,0 mL de esta solucio n a un segundo matraz volume trico de 50 mL, agregar 18 mL de Diluyente, diluir a volumen con acetonitrilo, mezclar y pasar a trave s de un ltro con un taman o de poro de 0,22 mm. Esta Solucio n esta ndar contiene aproximadamente & 0,0012 mg del compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) por mL.
Monograf as Ociales / Ibuprofeno
4131
Solucio n de pruebaTransferir 20,0 mL de la porcio n de solucio n madre reservada de la Preparacio n de valoracio n en la Valoracio n a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con acetonitrilo, mezclar y pasar a trave s de un ltro con un taman o de poro de 0,22 mm. Solucio n de aptitud del sistemaTransferir 1,5 mL de la solucio n madre de & ER Compuesto Relacionado C de Ibuprofeno USP&1S (USP30) preparada segu n se indica en la Solucio n esta ndar y 9 mL de la solucio n madre de ER Ibuprofeno USP preparada segu n se indica en la Preparacio n esta ndar en la Valoracio n a un matraz volume trico de 25 mL, diluir a volumen con acetonitrilo, mezclar y pasar a trave s de un ltro con un taman o de poro de 0,22 mm. Esta solucio n contiene aproximadamente 0,03 mg del &compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) y aproximadamente 0,4 mg de ibuprofeno por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L7 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 1,3 para &compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) y 1,0 para ibuprofeno; la resolucio n, R, entre ibuprofeno y el &compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) no es menor de 1,5; el factor de asimetr a no es mayor de 2,0. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 35 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos principales. Calcular el porcentaje del &compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) en la Suspensio n Oral tomada, basado en el contenido de ibuprofeno declarado, por la fo rmula: (12 500C/DL)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de &ER Compuesto Relacionado C de Ibuprofeno USP&1S (USP30) en la Solucio n esta ndar; D es la cantidad, en mL, de Suspensio n Oral tomada para preparar la solucio n madre para la Preparacio n de valoracio n; L es la cantidad declarada, en mg, de ibuprofeno en cada mL de Suspensio n Oral; y rU y rS son las a reas de los picos del &compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) obtenidas a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente. No se encuentra ma s de 0,25%. Cambio en la redaccio n: Valoracio n Fase mo vilDiluir 0,7 mL de a cido fosfo rico con agua para obtener 1000 mL de a cido fosfo rico 0,01 M. Preparar una mezcla de esta solucio n y acetonitrilo (63 : 37). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). DiluyentePreparar una mezcla de acetonitrilo y agua (1 : 1). Solucio n de esta ndar internoPreparar una solucio n de benzofenona en acetonitrilo que contenga aproximadamente 3,2 mg por mL. Preparacio n esta ndarDisolver cuantitativamente una cantidad, pesada con exactitud, de ER Ibuprofeno USP en Diluyente para obtener una solucio n madre con una concentracio n conocida de aproximadamente 1,2 mg por mL. Transferir 20,0 mL de esta solucio n madre y 5,0 mL de Solucio n de esta ndar interno a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con acetonitrilo, mezclar y ltrar. Esta solucio n contiene aproximadamente 0,48 mg de ibuprofeno por mL. DensidadEn un matraz volume trico tarado de 50 mL, pesar 50 mL de Suspensio n Oral que haya sido bien agitada previamente para garantizar la homogeneidad, dejar en reposo hasta que el aire atrapado suba y, nalmente, invertir con cuidado antes de la transferencia al matraz volume trico. A partir del peso observado de 50 mL de Suspensio n Oral, calcular la densidad, en g por mL, de la Suspensio n Oral.
Preparacio n de valoracio nTransferir una porcio n de Suspensio n Oral, pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 60 mg de ibuprofeno, a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con Diluyente y mezclar (solucio n madre). Transferir 20,0 mL de esta solucio n madre y 5,0 mL de la Solucio n de esta ndar interno a un segundo matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con acetonitrilo, mezclar y ltrar. [NOTAReservar una porcio n de la solucio n madre para usar en la prueba del &L mite de compuesto relacionado C de ibuprofeno.&1S (USP30).] Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L7 de 5 mm. La velocidad de ujo es aproximadamente de 2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,9 para benzofenona y 1,0 para ibuprofeno; la resolucio n, R, entre benzofenona y ibuprofeno no es menor de 1,5; el factor de asimetr a no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 5 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las a reas correspondientes a los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de C32H18O2 en cada mL de la Suspensio n Oral tomada, por la fo rmula: 125C(D/WU)(RU / RS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Ibuprofeno USP en la Preparacio n esta ndar; D es la densidad, en g por mL, de n de Suspensio n Suspensio n Oral; WU es el peso, en g, de la porcio Oral tomada para preparar la Preparacio n de valoracio n; y RU y RS son los cocientes de las a reas entre los picos de ibuprofeno y de la benzofenona obtenidas de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
Ibuprofeno, Tabletas
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11iER Ibuprofeno USP. Compuesto Relacionado C de Ibuprofeno USP.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: L mite de &compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) Usando los cromatogramas de la Preparacio n de valoracio n y la & Solucio n esta ndar de compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) obtenidos segu n se indica en la Valoracio n, calcular el porcentaje de &compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) (C12H16O) en las Tabletas tomadas, por la fo rmula: 10 000C(A / WI)(RU / RS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de &ER Compuesto Relacionado C de Ibuprofeno USP&1S (USP30) en la &Solucio n esta ndar de compuesto relacionado C de ibuprofeno; &1S (USP30) A es el peso promedio, en mg, de una Tableta; W es el peso del polvo de las Tabletas tomado para preparar la Preparacio n de valoracio n; I es la cantidad, en mg, de ibuprofeno por Tableta segu n lo obtenido en la Valoracio n; y RU y RS son los cocientes de respuesta entre los picos del &compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) y de la valerofenona obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente: no se encuentra ma s de 0,1% por Tableta.
&
ER
4132
Indinavir / Monograf as Ociales
Cambio en la redaccio n: Valoracio n Fase mo vil, Solucio n de esta ndar interno y Preparacio n n se indica en Valoracio esta ndarPreparar segu n en Ibuprofeno. & Solucio n esta ndar de compuesto relacionado C de ibuprofeno &1S (USP30) Disolver cuantitativamente una cantidad, pesada con exactitud, de &ER Compuesto Relacionado C de Ibuprofeno USP & 1S ( USP30 ) en acetonitrilo para obtener una solucio n & madre&1S (USP30) con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,6 mg por mL. Agregar 2,0 mL de esta solucio n madre a &100 mL de Solucio n de esta ndar interno y mezclar.&1S (USP30) Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas. Transferir una porcio n del polvo, pesada con exactitud, equivalente a 1200 mg de ibuprofeno, a un recipiente adecuado, agregar 100,0 mL de Solucio n de esta ndar interno y agitar durante 10 minutos. [NOTAEn el caso de Tabletas recubiertas, colocar un nu mero de Tabletas, contado con exactitud, equivalente a no menos de 1200 mg de ibuprofeno, en un recipiente; agregar un volumen, medido con exactitud, de Solucio n de esta ndar interno suciente para obtener una Preparacio n de valoracio n que contenga aproximadamente 12 mg de ibuprofeno por mL y aproximadamente 15 perlas de vidrio, y agitar hasta la desintegracio n total de las Tabletas.] Centrifugar una porcio n de la suspensio n as obtenida y usar el sobrenadante transparente como Preparacio n de valoracio n. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,75 para ibuprofeno y 1,0 para valerofenona; la resolucio n, R, entre ibuprofeno y valerofenona no es menor de 2,5; los factores de asimetr a para los picos individuales no son mayores de 2,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. Inyectar en el cromato grafo la &Solucio n esta ndar de compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 1,0 para valerofenona y 1,2 para el &compuesto relacionado C de ibuprofeno;&1S (USP30) la resolucio n, R, entre valerofenona y el & compuesto relacionado C de ibuprofeno&1S (USP30) no es menor de 2,5; los factores de asimetr a para los picos individuales no son mayores de 2,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 5 mL) de la Preparacio n esta ndar, de la Preparacio n de valoracio n y de la &Solucio n esta ndar de compuesto relacionado C de ibuprofeno,&1S (USP30) registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de ibuprofeno (C13H18O2) en cada Tableta tomada, por la fo rmula: 100C(A / W)(RU / RS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Ibuprofeno USP en la Preparacio n esta ndar; A es el peso promedio, en mg, de una Tableta; W es el peso, en mg, del polvo de las Tabletas tomado para preparar la Preparacio n de valoracio n; y RU y RS son los cocientes de respuesta entre los picos de ibuprofeno y valerofenona, obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente; o en el caso de tomar Tabletas intactas, calcular la cantidad, en mg, de C13H18O2 en cada Tableta tomada, por la fo rmula: (CV/N)(RU / RS) en donde V es el volumen, en mL, de Solucio n de esta ndar interno usado para preparar la Preparacio n de valoracio n; N es el nu mero de Tabletas tomadas; y los otros te rminos son los denidos anteriormente.
Sulfato de Indinavir
&
Metales pesados, Me todo I h231i: 0,001%.&1S
(USP30)
Agregar lo siguiente: Metales pesados h231i Solucio n esta ndarPipetear y transferir 2 mL de Solucio n Esta ndar de Plomo (10 mg por mL) a un tubo para comparacio n de color de 50 mL y diluir con agua hasta 25 mL. Utilizando un medidor de pH o un papel indicador de pH de intervalo corto como indicador externo, ajustar con a cido ace tico 1 N o hidro xido de amonio 6 N a un pH entre 3,0 y 4,0, diluir con agua hasta 40 mL y mezclar. Solucio n de pruebaDisolver 2,0 g de Sulfato de Indinavir en 25 mL de agua en un tubo para comparacio n de color de 50 mL. Utilizando un medidor de pH o un papel indicador de pH de intervalo corto como indicador externo, ajustar con a cido ace tico 1 N o hidro xido de amonio 6 N a un pH entre 3,0 y 4,0, diluir con agua hasta 40 mL y mezclar. Solucio n blancoAgregar 25 mL de agua a un tubo para comparacio n de color de 50 mL. Utilizando un medidor de pH o un papel indicador de pH de intervalo corto como indicador externo, ajustar con a cido ace tico 1 N o hidro xido de amonio 6 N a un pH entre 3,0 y 4,0, diluir con agua hasta 40 mL y mezclar. ProcedimientoAgregar 10 mL de sulfuro de hidro geno SR a cada tubo, mezclar, dejar en reposo durante 5 minutos, y observar hacia abajo sobre una supercie blanca: el color de la Solucio n de prueba no es ma s oscuro que el de la Solucio n esta ndar. La intensidad del color de la Solucio n blanco es menor o igual a la intensidad del color de la Solucio n de prueba.&1S (USP30)
&
Cambio en la redaccio n: Pureza cromatogra ca Solucio n ADisolver 0,54 g de fosfato monoba sico de potasio y 2,79 g de fosfato diba sico de potasio en 2 L de agua. Solucio n B Usar acetonitrilo. DiluyentePreparar una mezcla de Solucio n A y Solucio n B (1 : 1). Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y Solucio n B, segu n se indica en Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de aptitud del sistemaTransferir aproximadamente 40 mg de ER Aptitud del Sistema de Indinavir USP a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 50 mg de Sulfato de Indinavir, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Tiempo (minutos) 040 4045 4547 4752 Solucio n A (%) 80?30 30 30?80 80 Solucio n B (%) 20?70 70 70?20 20 Elucio n gradiente lineal isocra tica gradiente lineal isocra tica
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: & n, R, entre indinavir y el compuesto &1S (USP30) la resolucio
Monograf as Ociales / Insulina
4133
relacionado C es mayor de 1,8; y el factor de asimetr a, determinado a partir del pico de indinavir, es mayor de 0,95 y menor de 2,0.
&
Verde de Indocianina
ProcedimientoInyectar en el cromato grafo aproximadamente 20 mL de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Sulfato de Indinavir tomada, por la fo rmula: 100(ri / rs) rea de pico para cada impureza; y rs es la suma de en donde ri es el a las respuestas de todos los picos: no se encuentra ma s de 0,1% de cualquier impureza individual especicada en la Tabla 1 , ni ma s de 0,5% de impurezas totales.
&1S
(USP30)
por ciento y no ma s de .100,0.5 por ciento de C43H47N2NaO6S2, calculado con respecto a la sustancia seca. Contiene no ma s de 5,0 por ciento de yoduro de sodio, calculado con respecto a la sustancia seca.
El Verde de Indocianina contiene no menos de .89,0.5
&
Tabla 1 Tiempo de Retencio n Relativo Aproximado 0,18 0,80 0,98 1,14 1,30
&1S
Compuesto Relacionado de Indinavir A B C D E
(USP30)
de Insulina Humana Iso fana e Inyeccio n de Insulina Humana

La Suspensio n de Insulina Humana Iso fana e Inyeccio n de Insulina Humana es una suspensio n amortiguada este ril de Insulina Humana, complejada con Sulfato de Protamina, en una solucio n de Insulina Humana. Su potencia, basada en la suma de los componentes insulina y desamido insulina, segu n se determina en la Valoracio n, no es menos de 95,0 por ciento y no es ma s de 105,0 por ciento de la potencia declarada en la etiqueta, expresada en Unidades USP de Insulina Humana por cada mL.
Envasado y almacenamientoConservar en el envase multidosis, sin abrir, provisto por el fabricante. Almacenar en un refrigerador, proteger de la luz solar y evitar su congelacio n. EtiquetadoLa etiqueta del envase de la Inyeccio n indica que la Inyeccio n se debe resuspender adecuadamente antes de su uso. Etiquetar indicando que se ha preparado con Insulina Humana de origen semisinte tico (es decir, obtenida por modicacio n enzima tica de insulina de pa ncreas porcino) o con Insulina Humana de origen ADN recombinante (es decir, obtenida por s ntesis microbiana), segu n corresponda. Etiquetar especicando que debe almacenarse en un refrigerador y que debe evitarse la congelacio n. La etiqueta indica la potencia en Unidades USP de Insulina Humana por mL y la relacio n porcentual entre la suspensio n de insulina humana iso fana y la inyeccio n de insulina humana soluble. Esta ndares de referencia USP h11iER Endotoxina USP. ER Insulina Humana USP. Identicacio nEl tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Endotoxinas bacterianas h85iNo contiene ma s de 80 Unidades USP de Endotoxinas por cada 100 Unidades USP de Insulina Humana. Esterilidad h71iCumple con los requisitos de la prueba de Esterilidad en Insulina Iso fana, Suspensio n. pH h791i: entre 7,0 y 7,8, determinado potenciome tricamente. Determinacio n de cinc h591i: entre 0,02 mg y 0,04 mg por cada 100 Unidades USP de Insulina Humana.
&Suspensio n
Cambio en la redaccio n: Valoracio n Solucio n amortiguadora de fosfato de dibutilamonioTransferir 20 mL de fosfato de dibutilamonio a 1000 mL de agua. Mientras se mezcla, ajustar con hidro xido de sodio SR a un pH de 6,5 + & 0,5.&1S (USP30) Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora de fosfato de dibutilamonio y acetonitrilo (11 : 9). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver en Fase mo vil una cantidad adecuada de ER Indinavir USP, pesada con exactitud, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,5 mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 60 mg de Sulfato de Indinavir, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 260 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L7 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 408. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna no es menos de 4000 platos teo ricos, el factor de asimetr a es menor de 2,0 y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 1,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de C36H47N5O4 H2SO4 en la porcio n de Sulfato de Indinavir tomada, por la fo rmula: (1,1598)DC(rU / rS) en donde D es el factor de dilucio n, en mL, para la Preparacio n de valoracio n; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Indinavir USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar, respectivamente. [NOTA1,1598 = PM del Sulfato de Indinavir (711,87 g/mol)/PM del Indinavir (613,80 g/ mol).]
4134
Irbesarta n / Monograf as Ociales
L mite de prote nas de alto peso molecularProceder segu n se indica en la prueba para L mite de prote nas de alto peso molecular en Insulina, Inyeccio n: no se encuentra ma s de 3,0%. Contenido de insulina humana soluble[NOTAUsar uno de los dos me todos indicados a continuacio n.]
TODO 1 ME
desamido insulina A-21. Calcular la cantidad de insulina humana soluble como un porcentaje del contenido de insulina humana total de la Inyeccio n, por la fo rmula: (500/D)(rS / rT) en donde D es el factor de dilucio n de la Solucio n de prueba de insulina total; y rS y rT son las respuestas de los picos de insulina humana obtenidos a partir de la Solucio n de prueba de insulina soluble y la Solucio n de prueba de insulina total, respectivamente. El porcentaje de insulina humana soluble esta en el intervalo L + 5, donde L es el porcentaje de insulina humana soluble declarado en la etiqueta del producto. Valoracio nProceder segu n se indica en Valoracio n en Insulina Humana, Inyeccio n.&1S (USP30)
Fase mo vil, Solucio n de aptitud del sistema y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en Valoracio n en Insulina. Solucio n de prueba de insulina solubleMantener la temperatura a 25 + 18 durante todo el procedimiento. Transferir 5,0 mL de la Inyeccio n a un tubo de centr fuga. Agregar 20 mL de hidro xido de sodio 1 N y ajustar con a cido clorh drico 0,05 N o hidro xido de sodio 0,05 N a un pH de 8,20 + 0,02 si la concentracio n total de cinc es de aproximadamente 20 mg por mL o ajustar a un pH de 8,35 + 0,02 si la concentracio n total de cinc es de aproximadamente 30 mg por mL. Registrar el volumen, en mL, de a cido o base necesario para ajustar el pH. Mezclar y dejar en reposo durante 1 hora. Centrifugar, transferir el sobrenadante a otro tubo de centr fuga y repetir la centrifugacio n. Transferir 2 mL del sobrenadante a otro tubo, agregar 5 mL de a cido clorh drico 9,6 N y mezclar. Solucio n de prueba de insulina totalTransferir 2 mL de Inyeccio n a un recipiente adecuado, agregar 5 mL de a cido clorh drico 9,6 N y dejar que la suspensio n clarique. Diluir la solucio n resultante con a cido clorh drico 0,01 N a la misma concentracio n teo rica de insulina de la Solucio n de prueba de insulina soluble (por ejemplo, si se declara que la Inyeccio n contiene 20% de insulina soluble, el factor de dilucio n es 100/20 = 5). ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n de prueba de insulina soluble y de la Solucio n de prueba de insulina total, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos de insulina y desamido insulina A-21. Calcular la cantidad de insulina humana soluble como un porcentaje del contenido total de insulina de la Inyeccio n, por la fo rmula: (100/D)[(5020 + VA)/5000](rS / rT) en donde D es el factor de dilucio n de la Solucio n de prueba de insulina total; VA es el nu mero de mL agregado para ajustar el pH de la Solucio n de prueba de insulina soluble; y rS y rT son las respuestas de la Solucio n de prueba de insulina soluble y de la Solucio n de prueba de insulina total, respectivamente. El porcentaje de insulina humana soluble esta en el intervalo L + 5, donde L es el porcentaje de insulina humana soluble declarado en la etiqueta del producto.
TODO 2 ME
Irbesarta n
Cambio en la redaccio n: L mite de azida Fase mo vilPreparar una solucio n de hidro xido de sodio 0,1 N ltrada y desgasicada (ver Aptitud del sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n esta ndarTransferir aproximadamente 25 mg de azida so dica, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Pipetear 250 mL de esta solucio n y transferir a un matraz volume trico de 200 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Esta solucio n contiene aproximadamente 0,312 mg de azida so dica por mL. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 100 mg de Irbesarta n, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 5 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector conductime trico y una columna de 4,0 mm 6 25 cm rellena con material &L31.&1S (USP30) La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la relacio n sen al-ruido para el pico de azida no es menor de 10. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 200 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos de azida. Calcular la cantidad de azida, en ppm, en la porcio n de Irbesarta n tomada, por la fo rmula: 1000(CS / CT)(42,02/65,01)(rU / rS) en donde CS es la concentracio n, en mg por mL, de azida so dica en la Solucio n esta ndar; CT es la concentracio n, en mg por mL, de Irbesarta n en la Solucio n de prueba; rU es el a rea del pico de azida obtenida a partir de la Solucio n de prueba; y rS es el a rea del pico de azida obtenida a partir de la Solucio n esta ndar: no se encuentra ma s de 10 ppm de azida. Cambio en la redaccio n: Compuestos relacionados Solucio n amortiguadora de fosfato de pH 3,2 y Fase mo vil & n se indica en la Valoracio n. &1S (USP30)Proceder segu Solucio n esta ndarPreparar segu n se indica en la Solucio n de aptitud del sistema en la Valoracio n. & Solucio n de pruebaDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de Irbesarta n en metanol para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1 mg por mL.&1S (USP30)
Fase mo vil, Solucio n de aptitud del sistema y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en Valoracio n en Insulina. Solucio n amortiguadora de Tris 0,1 MDisolver 3,54 + 0,01 g de clorhidrato de Tris(hidroximetil)aminometano y 3,34 + 0,01 g de Tris(hidroximetil)aminometano en 500 mL de agua. El pH de la Solucio n amortiguadora de Tris 0,1 M debe estar entre 8,0 y 8,4. Si el pH esta fuera de este intervalo, desechar la solucio n y preparar una nueva; no ajustar el pH. [NOTAEsta solucio n es estable durante dos semanas y debe almacenarse alejada de la luz solar directa.] Solucio n de prueba de insulina solubleMezclar bien 2,0 mL de Inyeccio n con 2,0 mL de Solucio n amortiguadora de Tris 0,1 M. Sumergir el recipiente en un ban o de agua a 25 + 28 durante 30 + 2 minutos. Pasar inmediatamente esta solucio n a trave s de un ltro de 0,2 mm usando una jeringa desechable. Transferir 2 mL del ltrado a un recipiente adecuado y agregar 1 mL de a cido clorh drico 0,2 N y 2 mL de a cido clorh drico 0,01 N. Solucio n de prueba de insulina totalAgregar 3,0 mL de a cido clorh drico 9,6 N por cada mL de Inyeccio n, mezclar y dejar que la suspensio n clarique. Diluir la solucio n resultante con a cido clorh drico 0,01 N a la misma concentracio n teo rica de insulina de la Solucio n de prueba de insulina soluble (por ejemplo, si se declara que la inyeccio n contiene 20% de insulina soluble, el factor de dilucio n es 2/1 6 5/2 6 100/20 = 25). ProcedimientoInyectar por separado volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n de prueba de insulina soluble y de la Solucio n de prueba de insulina total, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos de insulina y
Monograf as Ociales / Irbesarta n
4135
Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Proceder segu n se indica en la Valoracio n. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir el a rea del pico del compuesto relacionado A de irbesarta n. Calcular el porcentaje del compuesto relacionado A de irbesarta n en la porcio n de Irbesarta n tomada, por la fo rmula: 100(CS / CT)(rU / rS) en donde CS es la concentracio n, en mg por mL, de ER Compuesto relacionado A de Irbesarta n USP en la Solucio n esta ndar; CT es la concentracio n, en mg por mL, de Irbesarta n en la Solucio n de prueba; rU es la respuesta del pico del compuesto relacionado A de irbesarta n obtenido a partir de la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico del compuesto relacionado A de irbesarta n obtenido a partir de la Solucio n esta ndar. & Calcular el porcentaje de otras impurezas en la porcio n de Irbesarta n tomada, por la fo rmula: 100(CS / CT)(rU / rS) en donde CS es la concentracio n, en mg por mL, de ER Irbesarta n USP en la Solucio n esta ndar; CT es la concentracio n, en mg por mL, de Irbesarta n en la Solucio n de prueba; y rU y rS son las respuestas de los picos para cada una de las otras impurezas y ER Irbesarta n USP obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente:&1S (USP30) no se encuentra ma s de 0,2% del compuesto relacionado A de irbesarta n; no se encuentra ma s 0,1% de cualquier otra impureza; y no se encuentra ma s de 0,5% de impurezas totales. Cambio en la redaccio n: Valoracio n Solucio n amortiguadora de fosfato de pH 3,2Mezclar 5,5 mL de a cido fosfo rico con aproximadamente 950 mL de agua y ajustar con trietilamina a un pH de 3,2. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de solucio n amortiguadora de fosfato de pH 3,2 y acetonitrilo (67 : 33). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de aptitud del sistemaDisolver cantidades, pesadas con exactitud, de ER Irbesarta n USP y ER Compuesto Relacionado A de Irbesarta n USP en metanol para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,05 mg por mL de cada Esta ndar de Referencia USP.
&
ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de todos los picos. Calcular la cantidad, en mg, de C25H28N6O en la porcio n de Irbesarta n tomada, por la fo rmula: 100C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Irbesarta n USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
&Irbesarta n,
Tabletas
Las Tabletas de Irbesarta n contienen no menos de 90,0

por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de irbesarta n (C25H28N6O).
Preparacio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Irbesarta n USP en metanol para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,5 mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 50 mg de Irbesarta n, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con metanol, y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,0 mm 6 25 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,8 para el compuesto relacionado A de irbesarta n y 1,0 para irbesarta n; la resolucio n, R, entre irbesarta n y el compuesto relacionado A de irbesarta n no es menor de 2,0. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 1,0%.
&1S
(USP30)
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. Esta ndares de referencia USP h11iER Irbesarta n USP. ER Compuesto Relacionado A de Irbesarta n USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki Muestra de prueba: Transferir 1 Tableta a un vial adecuado. Agregar 10 mL de metanol y someter a ultrasonido durante 10 minutos. Pasar la solucio n a trave s de un ltro de membrana de microbra de vidrio con un taman o de poro de 0,45 mm o menor y evaporar hasta sequedad usando una corriente de nitro geno. Mezclar aproximadamente 1 mg del residuo con aproximadamente 250 mg de bromuro de potasio y mezclar bien para obtener una mezcla homoge nea. El espectro de absorcio n IR de una dispersio n de bromuro de potasio del residuo as obtenido presenta ma ximos so lo a las mismas longitudes de onda que el de una dispersio n de bromuro de potasio de una preparacio n similar usando ER Irbesarta n USP. B: El tiempo de retencio n relativo del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Disolucio n h711i Medio: a cido clorh drico 0,1 N; 1000 mL. Aparato 2: 50 rpm. Tiempo: 20 minutos. ProcedimientoDeterminar la cantidad disuelta de C25H28N6O empleando absorcio n UV a la longitud de onda de ma xima absorbancia, aproximadamente a 244 nm, en porciones de la solucio n en ana lisis pasadas a trave s de un ltro de 0,45 mm de copol mero de acr lico sobre un soporte de nailon* y adecuadamente diluidas con Medio, si fuera necesario, en comparacio n con una
Un ltro adecuado es Acrodisc, fabricado por Gelman Sciences y distribuido por Pall Corp. (www.pall.com).
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Irbesarta n / Monograf as Ociales
Solucio n esta ndar con una concentracio n conocida de ER Irbesarta n USP en el mismo Medio. Calcular la cantidad disuelta de C25H28N6O, en porcentaje, por la fo rmula:
ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 15 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de irbesarta n (C25H28N6O) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Irbesarta n USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
en donde AU y AS son las absorbancias obtenidas a partir de la solucio n en ana lisis y la Solucio n esta ndar, respectivamente; CS es la concentracio n, en mg por mL, de la Solucio n esta ndar; 1000 es el volumen, en mL, de Medio; 100 es el factor de conversio n a porcentaje; y L es la cantidad declarada, en mg, de irbesarta n. ToleranciasNo menos de 80% (Q) de la cantidad declarada de C25H28N6O se disuelve en 20 minutos. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos. Compuestos relacionados Solucio n amortiguadora, Fase mo vil, Solucio n de aptitud del sistema y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarUsar la Preparacio n esta ndar, preparada segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo un volumen de aproximadamente 15 mL de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es la respuesta del pico de cada impureza; y rs es la suma de las respuestas de todos los picos: no se encuentra ma s de 0,2% del compuesto relacionado A de irbesarta n; no se encuentra ma s de 0,2% de cualquier impureza individual; y no se encuentra ma s de 0,5% de impurezas totales. Valoracio n Solucio n amortiguadoraDiluir aproximadamente 5,5 mL de a cido fosfo rico en aproximadamente 950 mL de agua y agregar trietilamina, lentamente y gota a gota, para ajustar a un pH de 3,0. Diluir adicionalmente esta solucio n con agua a un volumen nal de 1 L. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora y acetonitrilo (60 : 40). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n de aptitud del sistemaDisolver en metanol cantidades, pesadas con exactitud, de ER Irbesarta n USP y de ER Compuesto Relacionado A de Irbesarta n USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg por mL de cada uno de los Esta ndares de Referencia USP. Preparacio n esta ndarDisolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Irbesarta n USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,15 mg por mL. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 5 Tabletas. Transferir a un matraz volume trico de 100 mL una porcio n del polvo, pesada con exactitud, equivalente aproximadamente a 15 mg de irbesarta n. Agregar metanol hasta tres cuartas partes del volumen del matraz. Someter a ultrasonido durante 15 minutos, revolviendo a intervalos de 5 minutos. Diluir a volumen con metanol y pasar una porcio n de esta solucio n a trave s de un ltro de membrana de microbra de vidrio con un taman o de poro de 0,45 mm o menor. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre irbesarta n y el compuesto relacionado A de irbesarta n no es menor de 2,0. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para cinco inyecciones repetidas no es ma s de 1,5%.
&Irbesarta n
e Hidroclorotiazida,
Tabletas
Las Tabletas de Irbesarta n e Hidroclorotiazida con-
tienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de las cantidades declaradas de irbesarta n (C25H28N6O) e hidroclorotiazida (C7H8ClN3O4S2).
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. Esta ndares de referencia USP h11iER Irbesarta n USP. ER Hidroclorotiazida USP. Identicacio nLos tiempos de retencio n relativos de los picos principales en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponden con los del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Disolucio n h711i Medio: a cido clorh drico 0,01 N; 900 mL. Aparato 2: 50 rpm. Tiempo: 45 minutos. Determinar las cantidades disueltas de irbesarta n (C25H28N6O) e hidroclorotiazida (C7H8ClN3O4S2) empleando el siguiente me todo. Fase mo vil y Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en la Valoracio n. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Solucio n esta ndar y de porciones ltradas de las soluciones en ana lisis, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos principales. Calcular las cantidades disueltas de irbesarta n (C25H28N6O) e hidroclorotiazida (C7H8ClN3O4S2) en comparacio n con una Solucio n esta ndar con concentraciones conocidas de ER Irbesarta n USP y ER Hidroclorotiazida USP en el mismo Medio y cromatograada de manera similar. ToleranciasNo menos de 75% (Q) de las cantidades declaradas de C25H28N6O y C7H8ClN3O4S2 se disuelve en 45 minutos. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos. Valoracio n Solucio n de trietilaminaAgregar 1,0 mL de trietilamina a 1000 mL de agua, mezclar y ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 3,5. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n de trietilamina y acetonitrilo (1 : 1). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 25 mg de ER Hidroclorotiazida USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL. Agregar 25J mg de ER Irbesarta n USP, pesados con exactitud, en donde J es el cociente entre la cantidad
Monograf as Ociales / Isosorbida
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declarada, en mg, de irbesarta n y la cantidad declarada, en mg, de hidroclorotiazida por Tableta. Disolver y diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas. Transferir a un matraz volume trico de 100 mL una porcio n del polvo, pesada con exactitud, equivalente aproximadamente a 25 mg de hidroclorotiazida. Agregar aproximadamente 80 mL de Fase mo vil y mezclar sobre una placa de agitacio n magne tica durante 15 minutos. Diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Centrifugar una porcio n de esta solucio n durante 10 minutos y usar el sobrenadante transparente. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar las a reas de los picos segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre hidroclorotiazida e irbesarta n no es menor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, y registrar las a reas de los picos principales. Calcular las cantidades, en mg, de irbesarta n (C25H28N6O) e hidroclorotiazida (C7H8ClN3O4S2) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, del Esta ndar de Referencia USP apropriado en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos del analito correspondiente obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Solucio n esta ndar: una solucio n de ER Mononitrato de Isosorbida Diluido USP en alcohol absoluto que contenga 0,5 mg de mononitrato de isosorbida por mL. Volumen de aplicacio n: 20 mL. Fase mo vil: una mezcla de cloroformo y metanol (95 : 5). Reactivo para rociadoDisolver 1 g de almido n soluble en 100 mL de agua en ebullicio n. Enfriar, agregar 0,5 g de yoduro de potasio y mezclar para disolver. ProcedimientoExaminar la placa bajo luz UV de longitud de onda corta, marcando cualquier mancha observada. Visualizar los nitratos en la placa rociando con el Reactivo para rociado e iluminando con luz UV de longitud de onda corta durante aproximadamente 10 minutos. El mononitrato de isosorbida y otros nitratos aparecen como una mancha violeta sobre un fondo de color blanco a violeta claro. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos de Uniformidad de Contenido. Compuestos relacionados
PRUEBA 1
Adsorbente, Solucio n esta ndar 1, Solucio n esta ndar 2, Solucio n estn. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos de Uniformidad de Contenido. Compuestos relacionados
PRUEBA 1
&Mononitrato
de Isosorbida, Tabletas
Las Tabletas de Mononitrato de Isosorbida contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de mononitrato de isosorbida (C6H9NO6).
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Almacenar a una temperatura entre 208 y 308. Esta ndares de referencia USP h11iER Isosorbida USP. [NOTA Los siguientes Esta ndares de Referencia son mezclas secas de un componente activo con excipientes adecuados que permitan una manipulacio n segura. Para aplicaciones cuantitativas, calcular la concentracio n del componente activo basada en el contenido declarado en la etiqueta.] ER Dinitrato de Isosorbida Diluido USP. ER Mononitrato de Isosorbida Diluido USP. ER Compuesto Relacionado A de Mononitrato de Isosorbida Diluido USP. Identicacio n A: Prueba de Identicacio n por Cromatograf a en Capa Delgada h201i Solucio n de pruebaPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas. Transferir una porcio n del polvo, pesada con exactitud, equivalente aproximadamente a 120 mg de mononitrato de isosorbida, a un recipiente adecuado, agregar 50,0 mL de alcohol absoluto, someter a ultrasonido durante 10 minutos y centrifugar. Diluir cuantitativamente el sobrenadante (10 en 50) con alcohol absoluto.
Adsorbente, Solucio n esta ndar 1, Solucio n esta ndar 2, Solucio n esta ndar 3, Volumen de aplicacio n y Fase mo vilPreparar segu n se indica en Compuestos relacionados, Prueba 1 en Mononitrato de Isosorbida Diluido. Solucio n de pruebaPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas. Transferir a un recipiente adecuado una porcio n del polvo, pesada con exactitud, equivalente aproximadamente a 100 mg de mononitrato de isosorbida, agregar 20,0 mL de alcohol absoluto, someter a ultrasonido durante 10 minutos y centrifugar. Emplear el sobrenadante. ProcedimientoProceder segu n se indica en Cromatograf a en Capa Delgada en Cromatograf a h621i. Despue s del desarrollo, secar la placa con aire caliente durante aproximadamente 10 minutos, sumergir la placa en una solucio n preparada disolviendo 1,25 g de permanganato de potasio y 10,0 g de hidro xido de sodio en 500 mL de agua (recie n preparada para cada placa), y calentar a 1058 durante 5 minutos. Cualquier mancha en el cromatograma obtenida a partir de la Solucio n de prueba cuyo valor RF se corresponda con el de las manchas obtenidas a partir de las Soluciones esta ndar no es ma s intensa que la mancha en el cromatograma obtenida a partir de la Solucio n esta ndar 3: no se encuentra ma s de 1,0% de cualquier impureza individual. Si la mancha en el cromatograma obtenida a partir de la Solucio n de prueba es casi tan intensa como la mancha obtenida a partir de la Solucio n esta ndar 3, volver a diluir la Solucio n de prueba (1 : 1) con alcohol absoluto, repetir la prueba y comparar la intensidad de la mancha de isosorbida en la Solucio n de prueba diluida con la intensidad de las manchas obtenidas a partir de las Soluciones esta ndar, corrigiendo el nivel de porcentaje para la dilucio n adicional de la Solucio n de prueba.
PRUEBA 2
Fase mo vil y Solucio n de resolucio nProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n madre del esta ndar del compuesto relacionado A de mononitrato de isosorbidaDisolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Compuesto Relacionado A de Mononitrato de Isosorbida Diluido USP y diluir cuantitativamente con metanol, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg de compuesto relacionado A de mononitrato de isosorbida por mL. Solucio n madre del esta ndar de dinitrato de isosorbidaDisolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Dinitrato de Isosorbida Diluido USP y diluir cuantitativamente con metanol, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg de dinitrato de isosorbida por mL.
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Lamivudina / Monograf as Ociales
Solucio n esta ndarTransferir una cantidad, pesada con exactitud, de ER Mononitrato de Isosorbida Diluido USP a un matraz volume trico adecuado. Disolver en agua, agregar cuantitativamente un volumen de Solucio n madre del esta ndar del compuesto relacionado A de mononitrato de isosorbida y un volumen de Solucio n madre del esta ndar de dinitrato de isosorbida, y diluir a volumen con agua para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg de mononitrato de isosorbida por mL, 0,0005 mg del compuesto relacionado A de mononitrato de isosorbida por mL y 0,0005 mg de dinitrato de isosorbida por mL. Filtrar una porcio n de la solucio n, desechando los primeros mL del ltrado. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n, preparada segu n se indica en la Valoracio n. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado A de mononitrato de isosorbida y mononitrato de isosorbida no es menor de 1,5. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 10% para los picos del compuesto relacionado A de mononitrato de isosorbida y de dinitrato de isosorbida. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos principales. Comparar las a reas de los picos de la impureza correspondiente obtenidas a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente. El a rea promedio del pico de la impureza en la Solucio n de prueba es menor o igual que el a rea promedio del pico correspondiente en la Solucio n esta ndar: no se encuentra ma s de 0,5% del compuesto relacionado A de mononitrato de isosorbida; y no se encuentra ma s de 0,5% de dinitrato de isosorbida. Valoracio n Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de agua y metanol (7 : 3). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de resolucio nPreparar una solucio n de ER Mononitrato de Isosorbida Diluido USP y ER Compuesto Relacionado A de Mononitrato de Isosorbida Diluido USP con una concentracio n de 0,0005 mg de mononitrato de isosorbida y del compuesto relacionado A de mononitrato de isosorbida por mL. Preparacio n esta ndarDisolver en agua una cantidad, pesada con exactitud, de ER Mononitrato de Isosorbida Diluido USP y diluir cuantitativamente con agua, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg de mononitrato de isosorbida por mL. Pasar una porcio n de esta solucio n a trave s de un ltro con un taman o de poro de 0,45 mm o menor y usar el ltrado. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas. Transferir a un matraz volume trico de 200 mL una porcio n del polvo, pesada con exactitud, equivalente aproximadamente a 20 mg de mononitrato de isosorbida, agregar 100 mL de agua y someter a ultrasonido durante aproximadamente 10 minutos. Diluir a volumen con agua y mezclar. Pasar una porcio n de esta solucio n a trave s de un ltro con un taman o de poro de 0,45 mm o menor y usar el ltrado. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado A de mononitrato de isosorbida y mononitrato de isosorbida no es menor de 1,5. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 1,5%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y
medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de mononitrato de isosorbida (C6H9NO6) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 200C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de mononitrato de isosorbida en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Lamivudina
Cambio en la redaccio n: Valoracio n Solucio n de acetato de amonio 0,025 MTransferir aproximadamente 1,9 g de acetato de amonio a un matraz volume trico de 1000 mL, disolver en aproximadamente 900 mL de agua, ajustar con a cido ace tico a un pH de 3,8 + 0,2; diluir a volumen con agua y mezclar. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n de acetato de amonio 0,025 M y metanol (95 : 5). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). & Solucio n de aptitud del sistema Disolver en Fase mo vil una cantidad, pesada con exactitud, de ER Mezcla de Resolucio n B de Lamivudina USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,25 mg por mL.&1S (USP30) Preparacio n esta ndarDisolver en Fase mo vil una cantidad, pesada con exactitud, de ER Lamivudina USP y diluir cuantitativamente con Fase mo vil, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,25 mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 25 mg de Lamivudina, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 277 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 358. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre lamivudina y el diastereo mero de lamivudina no es menor de 1,5. [NOTALos tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 1,0 para lamivudina y 0,9 para el diastereo mero de lamivudina.] Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos de lamivudina. Calcular la cantidad, en mg, de C8H11N3O3S en la porcio n de Lamivudina tomada, por la fo rmula: 100C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Lamivudina USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
Monograf as Ociales / Leuprolida
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minutos y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Acetato de Leuprolida tomada, por la fo rmula: 0,01(WS / WU)(ri / rS)P en donde WS es el peso de ER Acetato de Leuprolida USP en la Preparacio n madre del esta ndar; WU es el peso, en mg, de Acetato de Leuprolida en la Solucio n de prueba; ri es la respuesta del pico para cada impureza obtenido a partir de la Solucio n de prueba; rS es la respuesta del pico de leuprolida obtenido a partir de la Solucio n esta ndar; y P es la pureza designada, en porcentaje, de ER Acetato de Leuprolida USP: no se encuentra ma s de 1,0% de acetileuprolida; no se encuentra ma s de 0,5% de D-His-leuprolida, de L-Leu6leuprolida y de D-Ser-leuprolida; no se encuentra ma s de 0,5 % de cualquier otra impureza individual; y no se encuentra ma s de 2,5% de impurezas totales. Contenido de a cido ace tico DiluyenteUsar metanol y ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 2,5. Solucio n esta ndarPipetear 2,0 mL de a cido ace tico glacial y transferir a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con Diluyente, y mezclar. Transferir 4,0 mL de la solucio n as obtenida a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Transferir 10,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con Diluyente y mezclar para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,08 mg por mL. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 100 mg de Acetato de Leuprolida, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Diluyente, y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de gases con un detector de ionizacio n a la llama y una columna capilar de s lice fundida de 0,53 mm 6 30 m con una pel cula de 1,2 mm de fase G35. El gas transportador es helio, que uye a una velocidad de aproximadamente 10 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna aproximadamente a 1008, la del inyector aproximadamente a 2008 y la del detector aproximadamente a 2508. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar las a reas de los picos segu n se indica en el Procedimiento: el tiempo de retencio n del a cido ace tico es de aproximadamente 5 a 7 minutos; la eciencia de la columna no es menos de 15 000 platos teo ricos; el factor de asimetr a no es menor de 0,8 y no es mayor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. Inyectar en el cromato grafo el Diluyente y registrar las a reas de los picos segu n se indica en el Procedimiento: asegurarse de que no haya picos que intereran. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo (modalidad sin divisio n) volu menes iguales (aproximadamente 1,0 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos de a cido ace tico. Calcular el porcentaje de a cido ace tico (C2H4O2) en la porcio n de Acetato de Leuprolida tomada, por la fo rmula: (839,2/WU)(rU / rS) en donde WU es el peso, en mg, de Acetato de Leuprolida tomado para preparar la Solucio n de prueba; y rU y rS son las a reas de los picos de a cido ace tico obtenidas a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente: no se encuentra menos de 4,7% y no ma s de 9,0%. Contenido de aminoa cidosUsar un procedimiento validado, adecuado (ver Art culos Obtenidos por Biotecnolog aAna lisis de Aminoa cidos h1052i). Soluciones esta ndarPreparar una solucio n con cantidades equimolares conocidas de L-alanina, L-arginina, L-a cido aspa rtico, L-a cido gluta mico, glicina, L-histidina, L-isoleucina, L-leucina, Llisina, L-metionina, L-fenilalanina, L-prolina, L-serina, L-treonina, Ltirosina y L-valina con la mitad de la cantidad equimolar de L-cistina. Para la validacio n del me todo, se utiliza un esta ndar interno apropiado, como norleucina. Preparar por separado una solucio n equimolar de L-tripto fano. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 64 mg de Acetato de Leuprolida, pesados con exactitud, a un recipiente adecuado y disolver en 1,0 mL de agua. Transferir 0,10 mL de esta solucio n a un tubo de hidro lisis al vac o, agregar 2,0 mL de a cido
&Acetato
de Leuprolida
C59H84N16O12 (C2H4O2)n, n = 1 o 2 1209,41 (como base libre) Luteinizing hormone-releasing factor, 6-D-leucine-9-(N-ethyl-L-prolinamide)-10-deglycinamide acetate (salt). Acetato (sal) de 5-oxo-L-prolil-L-histidil-L-triptol-L-seril-L-tyrosilD-leucil-L-leucil-L-arginil-N-etil-L-prolinamida [74381-53-6].
El Acetato de Leuprolida es un ana logo agonista

nonape ptido sinte tico del factor liberador de hormona luteinizante. Contiene no menos de 97,0 por ciento y no ma s de 103,0 por ciento de leuprolida (C59H84N16O12), calculada con respecto a la base anhidra, exenta de a cido ace tico. NOTADebido a la naturaleza higrosco pica de este material, los ana lisis se realizan inmediatamente despue s de abierto el envase en una ca mara cerrada con guantes bajo una purga de nitro geno seco. Precaucio nEl Acetato de Leuprolida es un potente manipulador hormonal. Evitar el contacto con la piel y la inhalacio n de polvos y nieblas.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Almacenar a temperatura que no exceda de 308. Esta ndares de referencia USP h11iER Endotoxina USP. ER Acetato de Leuprolida USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Rotacio n espec ca h781Si: entre 38,08 y 42,08; expresada con respecto a la sustancia anhidra exenta de a cido ace tico. Solucio n de prueba: 10,0 mg por mL, en a cido ace tico al 1%. Endotoxinas bacterianas h85iNo contiene ma s de 166,7 Unidades USP de Endotoxinas por mg de acetato de leuprolida. Agua, Me todo Ic h921i: no ma s de 8,0%. Residuo de incineracio n h281i: no ma s de 0,3%. Pureza cromatogra ca Solucio n amortiguadora, Solucio n de modicador orga nico, Fase mo vil, Preparacio n madre del esta ndar y Preparacio n esta ndar de degradacio nPreparar segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarTransferir 1,0 mL de la Preparacio n madre del esta ndar a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 100 mg de Acetato de Leuprolida, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de prueba y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,80 para D-Ser-leuprolida; 0,90 para D-His-leuprolida; 1,00 para leuprolida; 1,2 para L-Leu6leuprolida; y 1,5 para acetileuprolida. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas durante 90
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Lidoca na / Monograf as Ociales
clorh drico 6 N, aplicar vac o y calentar a 1208 durante 16 horas. Transferir 0,10 mL del hidrolisado as obtenido a un recipiente adecuado, agregar 1 mL de agua y liolizar. Disolver y diluir a un volumen adecuado en una solucio n amortiguadora adecuada para ana lisis de aminoa cidos. ProcedimientoInyectar en el analizador de aminoa cidos volu menes iguales de las Soluciones esta ndar y de la Solucio n de prueba, y registrar y medir las respuestas de cada pico de aminoa cido. Expresar el contenido de cada aminoa cido en moles. Calcular las proporciones relativas de los aminoa cidos en la Solucio n de prueba, tomar la se ptima parte de la suma del nu mero de moles de histidina, a cido gluta mico, leucina, prolina, tirosina y arginina como igual a uno: se encuentran entre 0,85 y 1,1 moles de cada uno de los aminoa cidos a cido gluta mico, prolina, tirosina, histidina y arginina por mol de Acetato de Leuprolida; se encuentran entre 1,8 y 2,2 moles de leucina por mol de Acetato de Leuprolida. Tambie n se hallan presentes serina y tripto fano. Valoracio n Solucio n amortiguadoraDisolver aproximadamente 15,2 g de trietilamina en 800 mL de agua, ajustar con a cido fosfo rico a un pH de 3,0 y diluir con agua hasta 1000 mL. Solucio n de modicador orga nicoPreparar una mezcla de acetonitrilo y alcohol n-prop lico (3 : 2). Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora y Solucio n de modicador orga nico (85 : 15). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n madre del esta ndarTransferir aproximadamente 100 mg de ER Acetato de Leuprolida USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Preparacio n esta ndarTransferir 5.0 mL de la Solucio n madre del esta ndar a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Preparacio n esta ndar de degradacio nTransferir 5 mL de la Preparacio n madre del esta ndar a un matraz volume trico de 50 mL y diluir a volumen con agua. Transferir 5 mL de la solucio n as obtenida a un vial de centelleo. Agregar 100 mL de solucio n de hidro xido de sodio 1 N, tapar herme ticamente y agitar vigorosamente. Colocar en un horno a 1008 durante 60 minutos, retirar, dejar que se enfr e, agregar 50 mL de a cido fosfo rico 1 M, volver a tapar y agitar vigorosamente para mezclar. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 100 mg de Acetato de Leuprolida, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Transferir 5,0 mL de la solucio n as obtenida a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4,6 mm 6 10 cm rellena con material L1 de 3 mm. La velocidad de ujo esta entre 1,0 y 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar de degradacio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el tiempo de retencio n de leuprolida esta entre 41 y 49 minutos; los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,90 para el producto de degradacio n y 1,0 para la leuprolida; y la resolucio n, R, entre leuprolida y el producto de degradacio n no es menor de 1,5. Inyectar en el cromato grafo la Fase mo vil y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: vericar que no haya picos extran os. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar las a reas de los picos segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a no es menor de 0,8 y no es mayor de 1,5; la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 1,5%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas durante 60 minutos y medir las a reas de los picos de leuprolida. Calcular el porcentaje de leuprolida (C59H84N16O12) en la porcio n de Acetato de Leuprolida tomada, por la fo rmula: [(WS / WU)(rU / rS)(P)(0,9527)(100)] /(100 contenido de a cido ace tico contenido de agua) en donde WS es el peso, en mg, de ER Acetato de Leuprolida USP en la Preparacio n esta ndar; WU es el peso, en mg, de Acetato de Leuprolida en la Preparacio n de valoracio n; rU y rS son las a reas de
los picos obtenidas a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente; y P es la pureza designada, en porcentaje, de ER Acetato de Leuprolida USP.&1S (USP30)
&
Lidoca na y Priloca na, Crema
La Crema de Lidoca na y Priloca na contiene no
menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de las cantidades declaradas de lidoca na (C14H22N2O) y priloca na (C13H20N2O).
Envasado y almacenamientoConservar en tubos depresibles o en envases impermeables. No almacenar a una temperatura superior a 308. No congelar. Esta ndares de referencia USP h11iER Lidoca na USP. ER Clorhidrato de Priloca na USP. ER Compuesto Relacionado B de Priloca na USP. Identicacio nLos tiempos de retencio n de los picos principales en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponden con los del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. L mites microbianos h61iCumple con los requisitos de las pruebas para ausencia de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. El recuento total de microorganismos aerobios no excede de 100 ufc por g, y el recuento total combinado de hongos lamentosos y levaduras no excede de 50 ufc por g. Llenado m nimo h755i: cumple con los requisitos. pH h791i: entre 8,7 y 9,7, determinado en una solucio n (1 en 10) o en la Crema sin diluir. Valoracio n Solucio n ADisolver aproximadamente 2,73 g de fosfato monoba sico de potasio en 630 mL de agua y ajustar con hidro xido de sodio 5 N a un pH de 7,20 + 0,02. Diluir con acetonitrilo a 1 L. Solucio n BDisolver aproximadamente 2,73 g de fosfato monoba sico de potasio in 900 mL de agua y ajustar con hidro xido de sodio 5 N a un pH de 7,20 + 0,02. Diluir con acetonitrilo a 1 L. Fase mo vilUsar mezclas variables, ltradas y desgasicadas de Solucio n A y Solucio n B segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver en Solucio n A cantidades, pesadas con exactitud, de ER Lidoca na USP y ER Clorhidrato de Priloca na USP y diluir cuantitativamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con Solucio n A para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,2 mg por mL de cada compuesto. Almacenar esta solucio n inmediatamente a 108 o menos. Solucio n de aptitud del sistemaDisolver en la Preparacio n esta ndar una cantidad, pesada con exactitud, de ER Compuesto Relacionado B de Priloca na USP y diluir cuantitativamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con la Preparacio n esta ndar para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,08 mg por mL de compuesto relacionado B de priloca na. Preparacio n de valoracio nTransferir una porcio n de la Crema, que equivalga aproximadamente a 20 mg de lidoca na y de priloca na, pesada con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL. Agregar 5 mL de hidro xido de sodio 5 N para dispersar la Crema y mezclar. Agregar 5 mL de a cido clorh drico 5 N, diluir a volumen con Solucio n A y mezclar. Pasar una porcio n a trave s de
Monograf as Ociales / Magaldrato
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un ltro de nailon con taman o de poro de 0,2 mm o menor, desechando el primer 1 mL y usar el ltrado. Almacenar esta solucio n inmediatamente a 108 o menos. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 232 nm y una columna de 4,6 mm 6 10 cm rellena con material L1 de 3 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 408. Mantener las muestras a 108 o menos. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Tiempo (minutos) 0 011,0 11,022,0 22,032,0 Solucio n A (%) 67 67 67?100 100 Solucio n B (%) 33 33 33?0 0 Elucio n equilibrio isocra tica gradiente lineal isocra tica
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son de 1,00 para priloca na, 1,09 para el compuesto relacionado B de priloca na y 2,14 para lidoca na; y la resolucio n, R, entre priloca na y el compuesto relacionado B de priloca na no es menor de 1,4. Inyectar en el cromato grafo como m nimo cinco veces la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna no es menos de 5000 platos teo ricos, basado en el pico de priloca na; el factor de asimetr a no es mayor de 1,5, basado en el pico de priloca na; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volumenes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos de lidoca na y priloca na. Calcular el porcentaje declarado de lidoca na (C14H22N2O) y de priloca na (C13H20N2O) en la porcio n de Crema tomada, por la fo rmula: 100C(rU / rS)(V/W)(100/L)(220,31/256,77) en donde C es la concentracio n individual, en mg por mL, de ER Lidoca na USP o ER Clorhidrato de Priloca na USP en la Preparacio n esta ndar; rU y rS son las respuestas individuales de los picos de lidoca na o priloca na obtenidos de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente; V es el volumen, en mL, de la Preparacio n de valoracio n; W es el peso, en mg, de la Crema tomado para preparar la Preparacio n de valoracio n; L es el valor individual declarado, como porcentaje, de lidoca na o priloca na; y 220,31 y 256,77 son los pesos moleculares de priloca na y de clorhidrato de priloca na respectivamente (so lo se utilizan para calcular el porcentaje de priloca na en la Crema).&1S (USP30)
solucio n con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 10 mg de clorhidrato de loperamida por mL.&1S (USP30) Preparacio n de valoracio nTransferir un volumen, medido con exactitud, de Solucio n Oral que equivalga aproximadamente a 1,0 mg de clorhidrato de loperamida a un matraz volume trico de 100 mL. Diluir a volumen con Fase mo vil, mezclar y ltrar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 214 nm y una columna de 4,0 mm 6 8,0 cm rellena con material L7 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar la a reas de los picos segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de clorhidrato de loperamida (C29H33ClN2O2 HCl) en cada mL de la Solucio n Oral tomada, por la fo rmula: 100(C/V)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Loperamida USP en la Preparacio n esta ndar; V es el volumen de Solucio n Oral tomado para preparar la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las a reas de los picos obtenidas a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
Magaldrato y Simeticona, Tabletas

(T tulo vigente no cambiara hasta el 18 de febrero de 2010) Cambio de t tulo de la monograf asera ocial a partir del 18 de febrero de 2010 Ver Magaldrato y Simeticona, Tabletas Masticables
Clorhidrato de Loperamida, Solucio n Oral
&Magaldrato
y Simeticona, Tabletas
Masticables
(La Monograf a con este nuevo t tulosera ocial a partir del 18 de febrero de 2010) (El t tulo actual de la monograf a es Magaldrato y Simeticona, Tabletas)
Cambio en la redaccio n: Valoracio n Solucio n amortiguadoraTransferir 3,0 g de fosfato monoba sico de potasio a un matraz volume trico de 1 L, disolver y diluir a volumen con agua, y mezclar. Fase mo vilPreparar una mezcla de Solucio n amortiguadora y acetonitrilo (63 : 37) y ajustar con a cido fosfo rico 0,9 M hasta un pH de 3,0. Mezclar, ltrar y desgasicar. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndar&Disolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de ER Clorhidrato de Loperamida USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 2 mg por mL. Diluir cuantitativamente esta solucio n con agua para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg por mL. Diluir adicionalmente esta
Las Tabletas Masticables de Magaldrato y Simeticona
contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de magaldrato [Al5Mg10(OH)31(SO4)2] y una cantidad de polidimetilsiloxano [(CH3)2SiO]n que no es menos de 85,0 por ciento y no es ma s de 115,0 por ciento de la cantidad declarada de simeticona.
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. EtiquetadoEtiquetar las Tabletas Masticables indicando que deben masticarse antes de tragarlas.
4142
Magnesia / Monograf as Ociales
Esta ndares de referencia USP h11iER Magaldrato USP. ER Polidimetilsiloxano USP. Identicacio n A: Transferir a un tubo de centr fuga de 100 mL una cantidad de Tabletas Masticables pulverizadas que equivalga aproximadamente a 2 g de magaldrato. Agregar aproximadamente 60 mL de agua, tapar y agitar durante 3 minutos. Centrifugar la suspensio n y desechar el sobrenadante. Repetir el lavado con tres porciones adicionales de 60 mL de agua. Transferir el residuo a un vaso de precipitados de 250 mL y calentar en un ban o de vapor hasta sequedad: el residuo as obtenido cumple con los requisitos de las pruebas de Identicacio n en Magaldrato. B: El espectro de absorcio n IR en la regio n comprendida entre 7 y 11 mm, determinado en una celda de 0,5 mm, de la Preparacio n de valoracio n, preparada segu n se indica en la Valoracio n de polidimetilsiloxano, presenta ma ximos so lo a las mismas longitudes de onda que el de la Preparacio n esta ndar, la cual contiene aproximadamente 2 mg de ER Polidimetilsiloxano USP por mL y se prepara segu n se indica en la Valoracio n de polidimetilsiloxano. L mites microbianos h61iLas Tabletas Masticables cumplen con los requisitos de la prueba para determinar la ausencia de Escherichia coli. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos de Variacio n de Peso con respecto al magaldrato. Capacidad neutralizante de a cidoProceder segu n se indica en cido h301i. La dosis m Capacidad Neutralizante de A nima individual recomendada en el etiquetado consume no menos de 5 mEq de a cido y no menos del nu mero de mEq calculado por la fo rmula: 0,8(0,0282M) en donde 0,0282 es la capacidad neutralizante de a cido teo rica, en mEq por mg, de magaldrato, y M es la cantidad declarada, en mg, de magaldrato. Actividad antiespumante Solucio n espumante y Pruebas de aptitud del sistemaProceder segu n se indica en la prueba de Actividad antiespumante en Magaldrato y Simeticona, Suspensio n Oral. Procedimiento[NOTAEn cada prueba, emplear un recipiente cil ndrico de 250 mL limpio (dia metro interno de 50 mm 6 altura interna de 110 mm) que tenga una abertura de 50 mm, y una tapa bien ajustada y con revestimiento inerte.] Transferir una cantidad de Tabletas Masticables reducidas a polvo no que equivalga a 20 mg de simeticona a un recipiente cil ndrico de 250 mL que contenga 50 mL de a cido clorh drico 0,6 N y se haya entibiado a 378, y proceder segu n se indica para la prueba de Actividad antiespumante en Magaldrato y Simeticona, Suspensio n Oral, comenzando donde dice Tapar el recipiente. Registrar el tiempo, en segundos, que la espuma tarda en colapsar hasta el punto en que su espesor sea de 1,0 cm, medido desde la supercie del l quido. El tiempo de actividad antiespumante no es superior a 45 segundos. Contenido de hidro xido de magnesio Preparacio n de pruebaPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas Masticables. Transferir a un matraz volume trico de 100 mL una porcio n del polvo pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 1 g de magaldrato, agregar 30 mL de a cido clorh drico diluido (1 en 10), agitar durante 15 minutos, diluir a volumen con agua y mezclar. ProcedimientoTransferir 10,0 mL de la Preparacio n de prueba a un vaso de precipitados de 400 mL y proceder segu n se indica en la prueba de Contenido de hidro xido de magnesio en Magaldrato, comenzando donde dice y diluir con agua aproximadamente a 200 mL. No se encuentra menos de 492 mg ni ma s de 666 mg de hidro xido de magnesio [Mg(OH)2] por g de la cantidad declarada de magaldrato. Contenido de hidro xido de aluminio Solucio n volume trica de edetato diso dicoPreparar y estandarizar segu n se indica en Valoracio n en Alumbre de Amonio. Preparacio n de pruebaPreparar segu n se indica en la prueba de Contenido de hidro xido de magnesio. ProcedimientoTransferir 10,0 mL de la Preparacio n de prueba y 20 mL de agua a un vaso de precipitados de 250 mL y proceder segu n se indica en Procedimiento en la prueba de Contenido de hidro xido de aluminio en Magaldrato, comenzando donde dice
Agregar, mezclando, 25,0 mL de Edetato diso dico. No se encuentra menos de 321 mg ni ma s de 459 mg de hidro xido de aluminio [Al(OH)3] por g de la cantidad declarada de magaldrato. Valoracio n de magaldratoPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas Masticables. Transferir a un matraz volume trico de 200 mL una porcio n del polvo pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 6 g de magaldrato. Agregar 100,0 mL de a cido clorh drico 2 N SV y agitar meca nicamente por rotacio n moderada durante 30 minutos. Diluir a volumen con agua, mezclar y ltrar. Transferir 100,0 mL del ltrado a un vaso de precipitados. Valorar el exceso de a cido con hidro xido de sodio 1 N SV hasta un pH de 3,0 determinado potenciome tricamente. Realizar una determinacio n con un blanco (ver Valoraciones Volume tricas Residuales en Volumetr a h541i). Cada mL de a cido clorh drico 2 N equivale a 70,80 mg de Al5Mg10(OH)31(SO4)2. Valoracio n de polidimetilsiloxanoPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas Masticables. Transferir a un separador de 60 mL una porcio n del polvo, pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 20 mg de simeticona. Agregar 10,0 mL de hexanos y 25 mL de a cido clorh drico 6 N, tapar el separador y agitar meca nicamente durante no menos de 2 horas. Dejar en reposo durante 10 minutos aproximadamente y escurrir tanto como sea posible la capa inferior acuosa sin eliminar ninguna porcio n de la interfase que no se haya separado. Agregar al separador 25 mL de hidro xido de sodio 4 N, taparlo y agitar meca nicamente durante 1 hora. Transferir la mezcla del separador a un tubo de centr fuga de 50 mL, taparlo y centrifugar para obtener capas transparentes. Transferir no menos de 5 mL de la capa superior transparente de hexanos a un tubo de ensayo que contenga aproximadamente 0,5 g de sulfato de sodio anhidro. Tapar el tubo, agitar vigorosamente y dejar en reposo hasta obtener un sobrenadante transparente (Preparacio n de valoracio n). Preparar tres Preparaciones esta ndar en hexanos que tengan una concentracio n conocida de aproximadamente 1,6; 2,0 y 2,4 mg de ER Polidimetilsiloxano USP por mL, respectivamente. Determinar concomitantemente con un espectrofoto metro IR las absorbancias de la Preparacio n de valoracio n y de las Preparaciones esta ndar en una celda de 0,5 mm, a la longitud de onda de ma xima absorcio n, aproximadamente a 1260 cm1, empleando hexanos como blanco. [NOTAEntre una y otra medicio n, enjuagar la celda con heptano, vaciarla y secarla.] Gracar las absorbancias de las Preparaciones esta ndar en funcio n de la concentracio n, en mg por mL, de ER Polidimetilsiloxano USP y trazar la recta que mejor se ajuste a los tres puntos gracados. A partir de la gra ca obtenida, determinar la concentracio n, C, en mg por mL, de polidimetilsiloxano en la Preparacio n de valoracio n. Calcular la cantidad, en mg, de [(CH3)2SiO]n en la porcio n de Tabletas Masticables tomada multiplicando C por 10. (Ocial a partir del 18 de febrero de 2010)&1S (USP30)
Leche de Magnesia
&
L mite de calcio cido clorh A drico diluido, Solucio n de lantano, Preparaciones esta ndar y Solucio n blancoProceder segu n se indica para la prueba de L mite de calcio en Carbonato de magnesio. Preparacio n de pruebaTransferir la cantidad equivalente a 1,4 g de Leche de Magnesia de concentracio n normal a un vaso de cido clorh precipitados, agregar 60 mL de A drico diluido y mezclar hasta que se disuelva, calenta ndolo si es necesario. Transferir la solucio n as obtenida a un matraz volume trico de 200 mL con 4 mL de Solucio n de lantano, diluir a volumen con agua y mezclar. ProcedimientoProceder segu n se indica en la prueba para L mite de calcio en Carbonato de Magnesio. Calcular el porcentaje de calcio en la Leche de Magnesia tomada multiplicando la concentracio n, en mg por mL, de calcio encontrado en la Preparacio n de prueba por 0,014: el l mite es 0,07%.&1S (USP30)
Monograf as Ociales / Meloxicam
4143
&Meloxicam
C14H13N3O4S2 351,40 4-Hydroxy-2-methyl-N-(5-methyl-2-thiazolyl)-2H-1,2-benzothiazine-3-carboxamide 1,1-dioxide 4-Hidroxi-2-metil-N-(5-metil-2-tiazolil)-2H-1,2-benzotiazina-3-carboxamida 1,1-dio xido [71125-38-7].
El Meloxicam contiene no menos de 99,0 por ciento y

Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. Almacenar a temperatura ambiente. EtiquetadoEl etiquetado indica la prueba de Compuestos relacionados con la que cumple el art culo si se usa una prueba diferente de la Prueba 1. Esta ndares de referencia USP h11iER Meloxicam USP. ER Compuesto Relacionado A de Meloxicam USP. ER Compuesto Relacionado B de Meloxicam USP. ER Compuesto Relacionado C de Meloxicam USP. ER Compuesto Relacionado D de Meloxicam USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki. B: Absorcio n en el Ultravioleta h197Ui. Intervalo espectral: 240 a 450 nm. Solucio n: 10 mg por mL. Medio: metanol. Pe rdida por secado h731iSecar a 1058 durante 4 horas: no pierde ma s de 0,5% de su peso. Residuo de incineracio n h281i: no ma s de 0,1%. Metales pesados, Me todo II h231i: no ma s de 0,001%. Compuestos relacionados[NOTARealizar la Prueba 1 o la Prueba 2, de acuerdo con el proceso de fabricacio n que se utilice.]
PRUEBA 1
no ma s de 100,5 por ciento de C14H13N3O4S2, calculado con respecto a la sustancia seca.
Solucio n B: metanol. Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y de Solucio n B segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de aptitud del sistemaTransferir aproximadamente 4 mg de ER Meloxicam USP, 4 mg de ER Compuesto Relacionado A de Meloxicam USP y 4 mg de ER Compuesto Relacionado B de Meloxicam USP a un matraz volume trico de 50 mL, disolver en 5 mL de metanol y 0,3 mL de hidro xido de sodio 1 N, diluir a volumen con metanol y mezclar. Solucio n esta ndarTransferir aproximadamente 12 mg de ER Meloxicam USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 20 mL, disolver en 5 mL de metanol y 0,3 mL de hidro xido de sodio 1 N, diluir a volumen con metanol y mezclar. Transferir 2 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con metanol y mezclar. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 80 mg de Meloxicam, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 20 mL, disolver en 5 mL de metanol y 0,3 mL de hidro xido de sodio 1 N, diluir a volumen con metanol y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector de longitud de onda UV variable o mu ltiple y una columna de 4,6 mm 615 cm rellena con material L1 de 5 mm. Mantener la temperatura de la columna a 458. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto y las longitudes de onda de deteccio n son 260 nm y 350 nm. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Tiempo (minutos) 02 210 1015 1515,1 15,118 Solucio n A (%) 60 60?30 30 30?60 60 Solucio n B (%) 40 40?70 70 70?40 40 Elucio n isocra tica gradiente lineal isocra tica gradiente lineal equilibrio
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos, basa ndose en el pico de meloxicam, aproximadamente a 7 minutos, se enumeran en la Tabla 1. A 350 nm, la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado A de meloxicam y meloxicam no es menor de 3,0; a 260 nm, la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado B de meloxicam y meloxicam no es menor de 3,0. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 10%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 5 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas a las longitudes
Solucio n A: una solucio n de fosfato monoba sico de potasio al 0,1% (p/v) ajustada con hidro xido de sodio 1 N a un pH de 6,0. Tabla 1 Tiempo de Retencio n Relativo Aproximado 1,4 Factor de Respuesta Relativa (F) 0,5
Compuesto Etile ster del a cido 4-hidroxi-2-metil-2H-1,2benzotiazina-3-carbox lico 1,1-dio ` xido (compuesto relacionado A de meloxicam) 2-Amino-5-metil-tiazol (compuesto relacionado B de meloxicam) 4-Hidroxi-2-metil-N-(N-metil-5-metil-2-tiazolil)-2H-1,2-benzotiazina-3-carboxamida-1, 1-dio xido 4-Hidroxi-2-metil-N-(N-etil-5-metil-2-tiazolil)-2H-1,2-benzotiazina-3-carboxamida-1, 1-dio xido Impureza individual desconocida Impurezas totales
Longitud de onda (nm) 350
L mite (p/p, %) 0,1
0,4 1,9 1,7
260 350 350 260/350
1,0 1,0 1,0 1,0
0,1 0,05 0,05 0,1 0,3
4144
Meloxicam / Monograf as Ociales
de onda de deteccio n de 260 nm y 350 nm, y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Meloxicam tomada, por la fo rmula: 100(CS / CT)(1 / F)(rU / rS) en donde CS es la concentracio n, en mg por mL, de ER Meloxicam USP en la Solucio n esta ndar; CT es la concentracio n, en mg por mL, de Meloxicam en la Solucio n de prueba; F es el factor de respuesta relativa (ver la Tabla 1); rU es la respuesta del pico para cada impureza obtenido a partir de la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico de meloxicam a 350 nm obtenido a partir de la Solucio n esta ndar. [NOTAPara las impurezas especicadas, calcular el contenido porcentual de cada impureza usando las respuestas de los picos de la Solucio n de prueba registrados a la longitud de onda de deteccio n indicada en la Tabla 1. Para una impureza desconocida, calcular el contenido porcentual usando las respuestas de los picos registrados a la longitud de onda que produce la mayor respuesta.] PRUEBA 2Si un art culo cumple con esta prueba, el etiquetado indica que cumple con los requisitos de la Prueba 2 en Compuestos relacionados. Solucio n A y Solucio n BPreparar segu n se indica en la Prueba 1. Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y de Solucio n B segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Diluyente A: una mezcla de Diluyente B e hidro xido de sodio 0,4 N (50 : 3). Diluyente B: una mezcla de agua y metanol (60 : 40). Solucio n madre del esta ndar 1Preparar una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 50 mg por mL de ER Meloxicam USP en Diluyente A. Transferir 2 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 10 mL, diluir a volumen con Diluyente B y mezclar. Solucio n madre del esta ndar 2Transferir aproximadamente 5 mg de ER Compuesto Relacionado B de Meloxicam USP, 5 mg de ER Compuesto Relacionado C de Meloxicam USP y 5 mg de ER Compuesto Relacionado D de Meloxicam USP a un matraz volume trico de 100 mL, agregar 6 mL de hidro xido de sodio 0,4 N y someter a ultrasonido durante aproximadamente 2 minutos. Agregar 40 mL de metanol a la solucio n resultante, someter a ultrasonido durante aproximadamente 2 minutos, diluir a volumen con agua y mezclar. Solucio n esta ndarTransferir 1 mL de Solucio n madre del esta ndar 1 y 1 mL de Solucio n madre del esta ndar 2 a un matraz volume trico de 10 mL, diluir a volumen con Diluyente B y mezclar. Solucio n madre de aptitud del sistemaPreparar una solucio n que contenga aproximadamente 2 mg por mL de ER Meloxicam USP en Diluyente A. Solucio n de aptitud del sistemaTransferir 5 mL de la Solucio n madre de aptitud del sistema y 1 mL de la Solucio n madre del esta ndar 2 a un matraz volume trico de 10 mL, diluir a volumen con Diluyente B y mezclar. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 20 mg de Meloxicam, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 20 mL, disolver en 10 mL de Diluyente A, diluir a volumen con Diluyente B y mezclar.
Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector de longitud de onda UV variable o mu ltiple y una columna de 4,6 mm 625 cm rellena con material L1 de 5 mm. Mantener la temperatura de la columna a 458. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto y las longitudes de onda de deteccio n son 260 nm y 350 nm. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Tiempo (minutos) 025 2530 3040 4045 4550 Solucio n A (%) 45 45?30 30 30?45 45 Solucio n B (%) 55 55?70 70 70?55 55 Elucio n isocra tica gradiente lineal isocra tica gradiente lineal equilibrio
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos, basa ndose en el pico de meloxicam, aproximadamente a 5 minutos, se enumeran en la Tabla 2; y la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado D de meloxicam y meloxicam a 350 nm no es menor de 5,0. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 5,0% para el compuesto relacionado C de meloxicam y el compuesto relacionado D de meloxicam a 350 nm; y no es ma s de 5,0% para el compuesto relacionado B de meloxicam a 260 nm. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas a las longitudes de onda de deteccio n de 260 nm y 350 nm, y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Meloxicam tomada, por la fo rmula: 100(CS / CT)(rU / rS) en donde CS es la concentracio n, en mg por mL, de ER Compuesto Relacionado USP en la Solucio n esta ndar [NOTAUsar la concentracio n de ER Meloxicam USP para impurezas desconocidas.]; CT es la concentracio n, en mg por mL, de Meloxicam en la Solucio n de prueba; rU es la respuesta del pico de cada impureza obtenido a partir de la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico del compuesto relacionado correspondiente obtenido a partir de la Solucio n esta ndar. [NOTAUsar la respuesta del pico de ER Meloxicam USP para las impurezas desconocidas; para las impurezas especicadas, calcular el contenido porcentual de cada impureza con las respuestas de los picos de la Solucio n de prueba registrados a la longitud de onda de deteccio n indicada en la Tabla 2. Para una impureza desconocida, calcular el contenido porcentual con las respuestas de los picos registrados a la longitud de onda que produce la mayor respuesta.] Valoracio n Solucio n amortiguadora: una mezcla de una solucio n de acetato de amonio al 0,1% (p/v) ajustada con solucio n de amon aco al 10% a un pH de 9,1.
Tabla 2 Tiempo de Retencio n Relativo Aproximado 0,8 3,2 2,4
Compuesto 2-Amino-5-metil-tiazol (compuesto relacionado B de meloxicam) Isopropil-4-hidroxi-2-metil-2H-1,2-benzotiazina-3carboxilato-1,1-dio xido (compuesto relacionado C de meloxicam) 4-Metoxi-2-metil-N-(5-metil-1,3-tiazol-2il)-2H-1,2benzotiazina-3-carboxamida-1,1-dio xido (compuesto relacionado D de meloxicam) Impureza individual desconocida Impurezas totales
Longitud de onda (nm) 260 350 350 260/350
Limite (p/p, %) 0,1 0,1 0,1 0,1 0,3
Monograf as Ociales / Metilprednisolona
4145
Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora y metanol (58 : 42). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de aptitud del sistemaTransferir aproximadamente 4 mg de ER Meloxicam USP y aproximadamente 4 mg de ER Compuesto Relacionado A de Meloxicam USP a un matraz volume trico de 50 mL, disolver en 25 mL de metanol y 0,1 mL de hidro xido de sodio 1N, diluir a volumen con agua y mezclar. Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 20 mg de ER Meloxicam USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver en 50 mL de metanol y 0,2 mL de hidro xido de sodio 1 N, diluir a volumen con agua y mezclar. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 20 mg de Meloxicam, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver en 50 mL de metanol y 0,2 mL de hidro xido de sodio 1 N, diluir a volumen con agua y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 360 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L1. Mantener la temperatura de la columna a 458. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,7 para el compuesto relacionado A y 1,0 para meloxicam; la resolucio n, R, entre los dos picos no es menor de 3,0; el factor de asimetr a para el pico de meloxicam no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas, calculada para el pico de meloxicam, no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas del pico de meloxicam. Calcular la cantidad, en mg, de C14H13N3O4S2 en la porcio n de Meloxicam tomada, por la fo rmula: 100C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Meloxicam USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
aproximadamente 1,0 y 0,8, respectivamente. Cromatograar tres inyecciones repetidas de la Solucio n esta ndar: el factor de resolucio n, R, entre metildopa y el producto de reaccio n de metildopa-glucosa no es menor de 2,0. Las desviaciones esta ndar relativas para tres inyecciones repetidas de la Solucio n esta ndar no son ma s de 2,0% y 3,0% para metildopa y para el producto de reaccio n de metildopa-glucosa, respectivamente. ProcedimientoProceder segu n se indica en el Procedimiento en la Valoracio n. Calcular la cantidad, en mg, de metildopa equivalente al producto de reaccio n de metildopa-glucosa en cada mL de la Suspensio n Oral tomada, por la fo rmula: (211,22/373,35)(250)(CD/W)(rU / rS) en donde 211,22 y 373,35 son los pesos moleculares de metildopa anhidra y del producto de reaccio n de metildopa-glucosa, respectivamente; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Producto de Reaccio n de Metildopa-glucosa USP en la Solucio n esta ndar; rU y rS son las respuestas de los picos del producto de reaccio n de metildopa-glucosa obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y de la Solucio n esta ndar, respectivamente; y los otros te rminos son los que se denen en la Valoracio n. El l mite es de 10,0%, basado en el contenido de metildopa de la Suspensio n Oral segu n se determina en la Valoracio n.&1S (USP30)
Metilprednisolona
Cambio en la redaccio n: Pureza cromatogra ca Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de agua, tetrahidrofurano, dimetil sulfo xido y butanol (149 : 40 : 10 : 1). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de dilucio nPreparar una mezcla ltrada de agua, tetrahidrofurano y a cido ace tico glacial (72 : 25 : 3). Solucio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Metilprednisolona USP en Solucio n de dilucio n. Diluir cuantitativamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con Solucio n de dilucio n para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,01 mg por mL. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 25 mg de Metilprednisolona, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 25 mL, disolver y diluir a volumen con Solucio n de dilucio n, y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 20 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna no es menos de 800 platos teo ricos; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 5,0%. & Procedimiento Inyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Metilprednisolona tomada, por la fo rmula: 25 6 100(C/W)(ri / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Metilprednisolona USP en la Solucio n esta ndar; W es el peso, en mg, de la muestra tomada para preparar la Solucio n de prueba; ri es la respuesta del pico para cada impureza obtenido a partir de la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico para metilprednisolona en la Solucio n esta ndar:&1S (USP30) no se encuentra ma s de 1,0% de cualquier impureza individual y no se encuentra ma s de 2,0% de impurezas totales.
Metildopa, Suspensio n Oral
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11 i ER Metildopa USP.

& &1S
(USP30)
&
L mite del producto de reaccio n de metildopa-glucosa
[A
DETERMINAR SI HUBIERA SACAROSA PRESENTE]
Fase mo vilPreparar segu n se indica en Valoracio n. Solucio n ADisolver una cantidad adecuada, pesada con exactitud, de ER Producto de Reaccio n de Metildopa-glucosa USP en a cido sulfu rico 0,1 N para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,45 mg por mL. Solucio n esta ndarTransferir a un matraz volume trico de 25 mL aproximadamente 25 mg de ER Metildopa USP, pesados con exactitud, agregar 1,0 mL de Solucio n A, diluir a volumen con a cido sulfu rico 0,1 N y mezclar. La Solucio n esta ndar tiene una concentracio n conocida de aproximadamente 18 mg de ER Producto de Reaccio n de Metildopa-glucosa USP por mL. Solucio n de pruebaPreparar segu n se indica para la Preparacio n de valoracio n en Valoracio n Sistema cromatogra coUtilizar el sistema descrito en Sistema cromatogra co en la Valoracio n. Los tiempos de retencio n relativos de metildopa y del producto de reaccio n de metildopa-glucosa son
4146
Mitoxantrona / Monograf as Ociales
Mitoxantrona, Inyeccio n
Cambio en la redaccio n: Envasado y almacenamientoConservar en envases monodosis & o multidosis,&1S (USP30) preferentemente de vidrio Tipo I.
Tartrato de Morantel
Cambio en la redaccio n: pH h791i: entre 2,8 y &3,9.&1S (USP30) Solucio nDisolver y diluir 0,25 g a 25,0 mL en agua exenta de dio xido de carbono.
&Mupirocina,
Crema
La Crema de Mupirocina contiene una cantidad de Mupirocina Ca lcica equivalente a no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 120,0 por ciento de la cantidad declarada de mupirocina (C26H44O9). Puede contener uno o ma s amortiguadores, dispersantes y conservantes adecuados.
Envasado y almacenamientoConservar en tubos depresibles o en envases bien cerrados. Almacenar a 258, con excursiones permitidas entre 158 y 308. EtiquetadoEtiquetar indicando que contiene Mupirocina Ca lcica y su contenido equivalente de mupirocina. Esta ndares de referencia USP h11iER Mupirocina de Litio USP. Identicacio nEl tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Llenado m nimo h755i: cumple con los requisitos. pH h791i: entre 6,0 y 8,0. Compuestos relacionados Acetato de amonio 0,1 M, Solucio n A, Solucio n B, Fase mo vil, Solucio n amortiguadora de fostato de pH 6,3 y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n de acetato de sodioAgregar 5,8 mL de a cido ace tico glacial a 900 mL de agua, ajustar con hidro xido de sodio SR a un pH de 4,0, diluir con agua hasta 1000 mL y mezclar. Solucio n de tetrahidrofuranoMezclar 750 mL de tetrahidrofurano y 250 mL de agua. Solucio n de acetato de sodio y tetrahidrofuranoPreparar una mezcla de Solucio n de acetato de sodio y Solucio n de tetrahidrofurano (50 : 50).
Solucio n esta ndarDisolver una porcio n, pesada con exactitud, de ER Muporicina de Litio USP en una Solucio n amortiguadora de fosfato de pH 6,3. Diluir cuantitativamente un volumen, medido con exactitud, de esta solucio n para obtener una solucio n que contenga 0,1 mg de mupirocina por mL. Solucio n madre de pruebaTransferir a un tubo de centr fuga con tapa de rosca una cantidad de Crema, pesada con exactitud, equivalente aproximadamente a 50 mg de mupirocina. Agregar 5,0 mL de Solucio n de tetrahidrofurano, tapar y dispersar la Crema mezclando y agitando en un mezclador por vo rtice. Agregar 5,0 mL de Solucio n de acetato de sodio, tapar y mezclar. Centrifugar durante aproximadamente 15 minutos. Retirar la capa inferior del tubo, pasarla a trave s de un ltro con un taman o de poro de 0,5 mm o menor y usar el ltrado. Solucio n de pruebaTransferir 1,0 mL de la Solucio n madre de prueba a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con Solucio n de acetato de sodio y tetrahidrofurano, mezclar y pasar a trave s de un ltro con un taman o de poro de 0,5 mm o menor. Solucio n amortiguadora de acetato de pH 4Transferir aproximadamente 13,6 g de acetato de sodio a un matraz volume trico de 1000 mL y disolver en aproximadamente 900 mL de agua. Ajustar con a cido ace tico glacial a un pH de 4,0 y diluir a volumen con agua. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma, segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n t picos son de aproximadamente 16 minutos para el a cido pseudomo nico D y 21 minutos para la mupirocina; los tiempos de retencio n relativos son 0,36 para el a cido pseudomo nico F, 0,6 para el producto de degradacio n A de mupirocina, 0,63 para el producto de degradacio n B de mupirocina, 0,74 para el a cido pseudomo nico D, 0,9 para el a cido pseudomo nico B, 1,0 para la mupirocina, 1,15 para el compuesto relacionado A de mupirocina, 1,23 para el compuesto relacionado B de mupirocina, 2,03 para el a cido pseudomo nico C, y entre 2,15 y 2,33 para el a cido pseudomo nico E; la resolucio n, R, entre el a cido pseudomo nico D y la mupirocina no es menor de 3; la eciencia de la columna para el pico de mupirocina no es menos de 7000 platos teo ricos; el factor de asimetr a para el pico de mupirocina no es mayor de 1,75; y la desviacio n esta ndar relativa del pico de mupirocina para inyecciones repetidas no es ma s de 2%. Procedimiento[NOTAAsegurarse de que las soluciones amortiguadoras, los dispersantes o los conservantes de la formulacio n no intereran con la cuanticacio n de las impurezas ni de los productos de degradacio n.] Inyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n madre de prueba y de la Solucio n de prueba, y medir la respuesta de todos los picos que no correspondan a soluciones amortiguadoras, dispersantes o conservantes. Calcular el porcentaje de cada compuesto relacionado y producto de degradacio n en relacio n con la mupirocina en la porcio n de Crema tomada, por la fo rmula: 2(ri / rM) en donde ri es la respuesta del pico para cada compuesto relacionado o producto de degradacio n obtenido a partir de la Solucio n madre de prueba; y rM es la respuesta del pico de mupirocina obtenido a partir de la Solucio n de prueba: no se encuentra ma s de 3,0% de a cido pseudomo nico D; no se encuentra ma s de 8,5% de producto de degradacio n A de mupirocina; no se encuentra ma s de 16% de producto de degradacio n B de mupirocina; no se encuentra ma s de 1,2% de cualquier otra impureza individual o producto de degradacio n; y no se encuentra ma s de 30% de impurezas y productos de degradacio n totales. Valoracio n Acetato de amonio 0,1 MPreparar segu n se indica en Valoracio n en Mupirocina Ca lcica. Solucio n APreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Acetato de amonio 0,1 M y tetrahidrofurano (75 : 25). Solucio n BPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Acetato de amonio 0,1 M y tetrahidrofurano (70 : 30). Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A y Solucio n B, segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n amortiguadora de fosfato de pH 6,3Disolver 69 g de fosfato monoba sico de sodio en 800 mL de agua, ajustar con hidro xido de sodio SR a un pH de 6,3, diluir con agua a 1000 mL y mezclar.
Monograf as Ociales / Mupirocina Ca lcica
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Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 21 mg de ER of Mupirocina de Litio USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 200 mL, disolver y diluir a volumen con Solucio n amortiguadora de fosfato de pH 6,3. Preparacio n de valoracio nTransferir una cantidad de Crema pesada con exactitud, equivalente aproximadamente a 10 mg de mupirocina, a un matraz volume trico de 100 mL. Agregar 50 mL de Solucio n amortiguadora de fosfato de pH 6,3 y 25 mL de tetrahidrofurano. Tapar el matraz, mezclar en un mezclador por vo rtice y agitar durante un per odo de 1 a 3 minutos. Diluir a volumen con Solucio n amortiguadora de fosfato de pH 6,3. Dejar en reposo hasta que se separe la capa de aceite, luego diluir a volumen la capa acuosa con Solucio n amortiguadora de fosfato de pH 6,3. Repetir 2 o 3 veces hasta que se haya separado la mayor cantidad posible de la capa de aceite. Despue s de la dilucio n nal, pasar la solucio n nal (capa inferior) a trave s de un ltro con un taman o de poro de 0,5 mm o menor. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 240 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L7 de 7 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Mantener la columna a una temperatura constante hasta 358. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Tiempo (minutos) 0 06 635 3555 5555,01 55,0165 Solucio n A (%) 100 100 100?0 0 0?100 100 Solucio n B (%) 0 0 0?100 100 100?0 0 Elucio n equilibrio isocra tica gradiente lineal isocra tica inmediata isocra tica
&Mupirocina
Ca lcica
C52H86CaO18 2H2O 1075,34 Nonanoic acid, 9-[[3-Methyl-1-oxo-4-[tetrahydro-3,4-dihydroxy-5[[3-(2-hydroxy-1-methylpropyl)oxiranyl]methyl]-2H-pyran-2yl]-2-butenyl]oxy-, calcium salt (2 : 1), dihydrate, [2 S [2a(E),3b,4b,5a[2R*,3R*(1R*,2R*)]]]-. cido (aE,2S,3R,4R,5S)-5-[(2S,3S,4S,5S)-2,3-epoxi-5-hidroxi-4A metilhexil]tetrahidro-3,4-dihidroxi-b-metil-2H-piran-2-crotonico, e ster con a cido 9-hidroxinonanoico, sal ca lcica (2 : 1), dihidrato [115074-43-6].
La Mupirocina Ca lcica contiene el equivalente a no menos de 865 mg y no ma s de 936 mg de mupirocina (C26H44O9) por mg.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Almacenar a 258, con excursiones permitidas entre 158 y 308. Esta ndares de referencia USP h11iER Mupirocina Ca lcica USP. ER Mupirocina de Litio USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Mi[NOTANo secar ni triturar extensivamente.] B: Absorcio n en el Ultravioleta h197Ui Solucio n: 20 mg por mL. Medio: metanol. C: Al humedecer con a cido clorh drico, cumple con los requisitos de la prueba a la llama para Calcio h191i. Rotacio n espec ca h781Si: entre 168 y 208. Solucio n de prueba: 50 mg por mL, en metanol. Agua, Me todo I h921i: no menos de 3,0% y no ma s de 4,5%. Cloruros h221iDisolver 50 mg en una mezcla de 1 mL de a cido n trico 2 N y 15 mL de metanol. Agregar 1 mL de nitrato de plata SR: la turbidez no excede la producida por 0,70 mL de a cido clorh drico 0,020 N (0,5%). Compuestos relacionados Acetato de amonio 0,1 MPreparar segu n se indica en la Valoracio n. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Acetato de amonio 0,1 M y tetrahidrofurano (70 : 30). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n amortiguadora de acetato de pH 4Transferir aproximadamente 13,6 g de acetato de sodio a un matraz volume trico de 1000 mL y disolver en aproximadamente 900 mL de agua. Ajustar con a cido ace tico glacial a un pH de 4,0 y diluir a volumen con agua. DiluyentePreparar una mezcla de Solucio n amortiguadora de acetato de pH 4 y metanol (1 : 1). Solucio n esta ndarTransferir aproximadamente 25 mg de ER Mupirocina de Litio USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 200 mL, disolver y diluir a volumen con Diluyente, y mezclar. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 50 mg de Mupirocina Ca lcica, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 10 mL, disolver y diluir a volumen con Diluyente, y mezclar. Solucio n de resolucio nAjustar 10 mL de la Solucio n esta ndar con a cido clorh drico 6 N a un pH de 2,0, dejar en reposo durante 20 horas y ajustar con hidro xido de sodio 5 N a un pH de 4,0. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 240 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L7 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el
Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma, segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n t picos son aproximadamente 16 minutos para el a cido pseudomo nico D y 21 minutos para la mupirocina; la resolucio n, R, entre el a cido pseudomo nico D y la mupirocina no es menor de 3; la eciencia de la columna para el pico de mupirocina no es menos de 7000 platos teo ricos; el factor de asimetr a para el pico de mupirocina no es mayor de 1,75; y la desviacio n esta ndar relativa del pico de mupirocina para inyecciones repetidas no es ma s de 2%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos principales. Calcular el porcentaje de peso de mupirocina en la porcio n de Crema tomada, por la fo rmula: 0,05E ( MS / MU)(rU / rS) en donde MS es el peso, en mg, de ER Mupirocina de Litio USP tomado para preparar la Preparacio n esta ndar; E es el equivalente designado de mupirocina, en mg, de mupirocina en cada mg de ER Mupirocina de Litio USP; MU es el peso, en mg, de Crema tomado para preparar la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las a reas de los picos de mupirocina obtenidas a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
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Nefazodona / Monograf as Ociales
segundo de los dos picos correspondiente a los productos de hidro lisis y el pico correspondiente a la mupirocina no es menor de 7,0. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,75 (6 minutos) para el a cido pseudomo nico D y 1,0 (14 minutos) para mupirocina; la eciencia de la columna para el pico de mupirocina no es menos de 3000 platos teo ricos; el factor de asimetr a para el pico de mupirocina no es mayor de 2; y la desviacio n esta ndar relativa del pico de mupirocina para inyecciones repetidas no es ma s de 5%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba y medir las a reas de todos los picos. Calcular el porcentaje de cada compuesto relacionado en la porcio n de Mupirocina Ca lcica tomada, por la fo rmula: (E/200)(WS / WU)(ri / rS) en donde E es el equivalente de mupirocina, en mg por mg, de ER Mupirocina de Litio USP; WS es el peso, en mg, de ER Mupirocina de Litio USP, tomado para preparar la Solucio n esta ndar; WU es el peso, en mg, de Mupirocina Ca lcica tomado para preparar la Solucio n de prueba; ri es el a rea del pico para cualquier impureza obtenida a partir de la Solucio n de prueba; y rS es el a rea del pico para mupirocina obtenida a partir de la Solucio n esta ndar: el a rea de cualquier pico correspondiente al a cido pseudomo nico D no es ma s de 2,5%; el a rea de cualquier pico, excluyendo el pico de mupirocina y cualquier pico correspondiente al a cido pseudomo nico D, no es ma s de 1%; y la suma de las a reas de todos los picos, excluyendo el pico principal, no es ma s de 4,5%. Descartar cualquier pico con un a rea menor de 0,05 veces el a rea del pico de mupirocina en el cromatograma obtenido a partir de la Solucio n esta ndar. Valoracio n Acetato de amonio 0,1 MTransferir aproximadamente 7,7 g de acetato de amonio a un matraz volume trico de 1000 mL, disolver en aproximadamente 900 mL de agua, ajustar con a cido ace tico glacial a pH de 5,7 y diluir a volumen con agua. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Acetato de amonio 0,1 M y tetrahidrofurano (68 : 32). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 25 mg de ER Mupirocina de Litio USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 200 mL, disolver en 5 mL de metanol, diluir a volumen con Acetato de amonio 0,1 M y mezclar. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 25 mg de Mupirocina Ca lcica, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 200 mL, disolver en 5 mL de metanol, diluir a volumen con Acetato de amonio 0,1 M y mezclar. Solucio n de resolucio nAjustar 10 mL de la Preparacio n esta ndar con a cido clorh drico 6 N a un pH de 2,0 y dejar en reposo durante 20 horas. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar el cromato grafo de l quidos con un detector a 230 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L7 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, del segundo de los dos picos correspondiente a los productos de hidro lisis y el pico correspondiente a mupirocina no es menor de 7,0. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 1,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y la Preparacio n de valoracio n y medir las a reas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de mupirocina (C26H44O9) en cada mg de Mupirocina Ca lcica tomada, por la fo rmula: E( MS / MU)(rU / rS) en donde E es el equivalente designado de mupirocina, en mg, de mupirocina en cada mg de ER Mupirocina de Litio USP; MS es el peso, en mg, de ER Mupirocina de Litio USP tomado para preparar la Preparacio n esta ndar; MU es el peso, en mg, de Mupirocina Ca lcica tomado para preparar la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las a reas de los picos de mupirocina obtenidas a partir de la
Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Clorhidrato de Nefazodona
Agregar lo siguiente: Compuestos relacionados DiluyentePreparar una solucio n de agua y acetonitrilo (50 : 50). Solucio n ADisolver 0,77 g de acetato de amonio en aproximadamente 950 mL de agua. Ajustar con trietilamina a un pH de 7,10 + 0,05. Diluir con agua hasta 1 L. Filtrar y degasicar. Solucio n BUsar acetonitrilo ltrado y degasicado. Fase mo vilUsar mezclas variables de la Solucio n A y la Solucio n B segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n madre del esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Clorhidrato de Nefazodona USP en Diluyente para obtener una solucio n que contenga 0,1 mg de clorhidrato de nefazodona por mL. Solucio n madre del compuesto relacionado A de nefazodona y Solucio n madre del compuesto relacionado B de nefazodona Transferir aproximadamente 20 mg de ER Compuesto Relacionado A de Nefazodona USP y 20 mg de ER Compuesto Relacionado B de Nefazodona USP, pesados con exactitud, a sendos matraces volume tricos de 200 mL. Disolver y diluir a volumen con Diluyente. Solucio n de resolucio nPipetear 5,0 mL de la Solucio n madre del compuesto relacionado A de nefazodona y 5,0 mL de la Solucio n madre del compuesto relacionado B de nefazodona y transferir a un matraz volume trico de 100 mL. Diluir a volumen con Solucio n madre del esta ndar y mezclar. Esta solucio n contiene aproximadamente 90 mg de clorhidrato de nefazodona por mL y aproximadamente 5 mg por mL del compuesto relacionado A de nefazodona y del compuesto relacionado B de nefazodona. Solucio n esta ndarPipetear 2,0 mL de la Solucio n madre del esta ndar, 2,0 mL de la Solucio n madre del compuesto relacionado A de nefazodona y 2,0 mL de la Solucio n madre del compuesto relacionado B de nefazodona y transferir a un matraz volume trico de 200 mL. Diluir a volumen con Diluyente y mezclar bien para obtener una concentracio n nal de 1 mg por mL de clorhidrato de nefazodona, del compuesto relacionado A de nefazodona y del compuesto relacionado B de nefazodona. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 100 mg de Clorhidrato de Nefazodona, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 250 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,7 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo.
&
Tiempo (minutos) 0 010 1016 1625 2526 2635
Solucio n A (%) 50 50?45 45?35 35 35?50 50
Solucio n B (%) 50 50?55 55?65 65 65?50 50
Elucio n equilibrio gradiente lineal gradiente lineal isocra tica gradiente lineal reequilibrio
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado A de nefazodona y clorhidrato de nefazodona no es menor de 4,0 y no es menor de 1,5 entre clorhidrato de nefazodona y el compuesto relacionado B de nefazodona. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y medir las respuestas de los picos segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 5,0% para el compuesto relacionado A de
Monograf as Ociales / Nefazodona
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nefazodona y el compuesto relacionado B de nefazodona. [NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 1,2 para el compuesto relacionado A de nefazodona, 1,0 para clorhidrato de nefazodona y 0,94 para el compuesto relacionado B de nefazodona.] ProcedimientoInyectar en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada compuesto relacionado de nefazodona en la porcio n de Clorhidrato de Nefazodona tomada, por la fo rmula: 100(CS /CT)(rU / rS) en donde CS es la concentracio n, en mg por mL, del Esta ndar de Referencia USP pertinente en la Solucio n esta ndar; CT es la concentracio n de Clorhidrato de Nefazodona, en mg por mL, en la Solucio n de prueba; y rU y rS son las a reas de los picos del compuesto relacionado correspondiente obtenidas a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente: no se encuentra ma s de 0,2% del compuesto relacionado A de nefazodona; no se encuentra ma s de 0,2% del compuesto relacionado B de nefazodona; no se encuentra ma s de 0,1% de cualquier impureza desconocida; y no se encuentra ma s de 0,5% de impurezas totales. [NOTAUsar el a rea del pico para clorhidrato de nefazodona en la Solucio n esta ndar como rS para calcular cualquier impureza desconocida.]&1S (USP30)
absorbancia aproximadamente a 246 nm, en la Solucio n de prueba, en comparacio n con la Solucio n esta ndar, usando Medio como blanco. Calcular el porcentaje disuelto de clorhidrato de nefazodona (C25H32ClN5O2 HCl), por la fo rmula:
&Clorhidrato
de Nefazodona, Tabletas
Las Tabletas de Clorhidrato de Nefazodona contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de clorhidrato de nefazodona (C25H32ClN5O2 HCl).
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. Almacenar a temperatura ambiente controlada. Esta ndares de referencia USP h11iER Clorhidrato de Nefazodona USP. ER Compuesto Relacionado A de Nefazodona USP. ER Compuesto Relacionado B de Nefazodona USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Disolucio n h711i Medio: a cido clorh drico 0,1 N; 900 mL, desgasicado. Aparato 2: 50 rpm. Tiempo: 30 minutos. Solucio n madre del esta ndarTransferir aproximadamente 70 mg de ER Clorhidrato de Nefazodona USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL. Agregar 2,5 mL de metanol, diluir a volumen con Medio y mezclar. Solucio n esta ndarDiluir la Solucio n madre del esta ndar con Medio de tal modo que la concentracio n nal sea similar a la esperada en la Solucio n de prueba. Solucio n de pruebaUsar porciones de la solucio n en ana lisis pasadas a trave s de un ltro de PVDF con un taman o de poro de 0,45 mm, descartando los primeros 5 mL. ProcedimientoDeterminar el porcentaje de la cantidad declarada de clorhidrato de nefazodona disuelta empleando absorcio n UV, con un espectrofoto metro adecuado, a la longitud de onda de ma xima
en donde AU y AS son las absorbancias obtenidas a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente; CS es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Nefazodona USP en la Solucio n esta ndar; 900 es el volumen, en mL, de Medio; 100 es el factor de conversio n a porcentaje; y LC es la cantidad declarada, en mg, por tableta. ToleranciasNo menos de 75% (Q) de la cantidad declarada de C25H32ClN5O2 HCl se disuelve en 30 minutos. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos. Compuestos relacionados cido ace A tico diluido, Solucio n amortiguadora y Fase mo vil Proceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n madre del compuesto relacionado A de nefazodona Preparar una solucio n de ER Compuesto Relacionado A de Nefazodona USP en Fase mo vil con una concentracio n conocida de aproximadamente 80 mg por mL. Solucio n madre del compuesto relacionado B de nefazodona Preparar una solucio n de ER Compuesto Relacionado B de Nefazodona USP en Fase mo vil con una concentracio n conocida de aproximadamente 80 mg por mL. Solucio n de aptitud del sistemaTransferir aproximadamente 10 mg de ER Clorhidrato de Nefazodona USP a un matraz volume trico de 10 mL. Agregar 2,0 mL de Solucio n madre del compuesto relacionado A de nefazodona y 2,0 mL de Solucio n madre del compuesto relacionado B de nefazodona y mezclar para disolver el clorhidrato de nefazodona. Diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Solucio n esta ndarUsar la Preparacio n esta ndar, preparada segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n madre de valoracio n, preparada segu n se indica en la Valoracio n. Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en la Valoracio n. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar las respuestas de los picos segu n se indica en el Procedimiento. Identicar los picos mediante los tiempos de retencio n relativos proporcionados en la Tabla 1: la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado A de nefazodona y clorhidrato de nefazodona no es menor de 2,0; y la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado B de nefazodona y clorhidrato de nefazodona no es menor de 1,5. [NOTALos tiempos de retencio n relativos aproximados se proporcionan en la Tabla 1 u nicamente con nes informativos.] ProcedimientoInyectar en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de compuestos relacionados individuales de la nefazodona en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100(rU / rS)(CS / CT)(1/F) en donde rU es la respuesta del pico individual para cada compuesto relacionado de la nefazodona obtenido a partir de la Solucio n de prueba; rS es la respuesta del pico correspondiente en la Solucio n esta ndar; CS y CT son las concentraciones, en mg por mL, de clorhidrato de nefazodona en la Solucio n esta ndar y la Solucio n de prueba, respectivamente; y F es el factor de respuesta relativa
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Nevirapina / Monograf as Ociales
obtenido a partir de la Tabla 1. Los requisitos del compuesto relacionado se indican en la Tabla 1. Agregar lo siguiente: Tabla 1 Tiempo de Retencio n Relativo Compuesto Relacionado Compuesto relacionado A de nefazodona Compuesto relacionado B de nefazodona Cualquier impureza individual desconocida Total conocidas y desconocidas 1,4 0,9 Factor de Respuesta Relativa (F) 1,2 1,0 1,0
&Nevirapina,
L mite (%) 0,2 0,2 0,2 cada una 0,5
Tabletas
Las Tabletas de Nevirapina contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de nevirapina (C15H14N4O).
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. Almacenar a 258, con excursiones permitidas entre 158 y 308. Esta ndares de referencia USP h11iER Nevirapina Anhidra USP. ER Compuesto Relacionado A de Nevirapina USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki Muestra de pruebaTransferir una porcio n de Tabletas pulverizadas, equivalente a 25 mg de nevirapina, a un matraz volume trico de 50 mL. Disolver en 10 mL de cloruro de metileno. Agitar la solucio n por rotacio n suave durante aproximadamente de 30 a 60 segundos y pasarla a trave s de un embudo para ltracio n al vac o de vidrio sinterizado de porosidad media. Con una jeringa de vidrio, pasar el ltrado a trave s de un ltro de teo n con un taman o de poro de 0,45 mm. Secar el extracto a una temperatura de 1058 durante un m nimo de 1 hora. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Disolucio n h711i Medio: solucio n amortiguadora de fosfato 0,1 M de pH de 2,0, preparada transferiendo 3,9 mL de a cido fosfo rico concentrado y 5,73 g de fosfato monoba sico de sodio monohidrato a un matraz volume trico de 1 L, disolviendo y diluyendo a volumen con agua, y si fuera necesario, ajustando con a cido fosfo rico a un pH de 2,0+0,02; 900 mL. Aparato 2: 50 rpm. Usar u nicamente paletas de acero inoxidable. No usar paletas recubiertas con politetrauoroetileno. Tiempo: 60 minutos. Determinar la cantidad disuelta de C15H14N4O empleando el siguiente me todo. Fase mo vil, Diluyente y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n madre del esta ndar 1Transferir 27 mg de ER Nevirapina Anhidra USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 500 mL. Agregar 50 mL de alcohol, seguido de 250 mL de Medio. Someter a ultrasonido para disolver durante aproximadamente 20 minutos, dejar que se enfr e a temperatura ambiente y diluir a volumen con Medio. Solucio n madre del esta ndar 2Transferir 7 mg de ER Compuesto Relacionado A de Nevirapina USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 250 mL. Agregar aproximadamente 2 mL de Diluyente, someter a ultrasonido hasta que se disuelva por completo y diluir a volumen con Medio. Solucio n esta ndarTransferir 25,0 mL de Solucio n madre del esta ndar 1 a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con Medio y mezclar bien. Solucio n de resolucio nTransferir 25,0 mL de Solucio n madre del esta ndar 1 a un matraz volume trico de 50 mL y diluir a volumen con Medio. Transferir 25,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con Solucio n madre del esta ndar 2 y mezclar bien. Solucio n de pruebaPasar 20 mL de la solucio n en ana lisis a trave s de un ltro de nailon o bra de vidrio de 0,45 mm, y diluir con Medio para obtener una solucio n con una concentracio n nal de aproximadamente 0,0135 mg de nevirapina por mL.
Valoracio n cido ace A tico diluidoPreparar una mezcla de a cido ace tico y agua (1 : 1). Solucio n amortiguadoraDisolver 0,77 g de acetato de amonio en 1 L de agua. Agregar 1,0 mL de trietilamina y mezclar bien. cido ace Ajustar con A tico diluido a un pH de 7,10 + 0,05 y mezclar. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de acetonitrilo y Solucio n amortiguadora (58 : 42). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarPreparar una solucio n de ER Clorhidrato de Nefazodona USP en Fase mo vil con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg por mL. Preparacio n madre de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas. Transferir una porcio n del polvo, pesada con exactitud, equivalente a aproximadamente 250 mg de clorhidrato de nefazodona, basada en la cantidad declarada, a un matraz volume trico de 250 mL, agregar aproximadamente 125 mL de Fase mo vil y someter a ultrasonido durante aproximadamente 10 minutos agitando ocasionalmente. Diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar para obtener una solucio n con una concentracio n de aproximadamente 1 mg de clorhidrato de nefazodona por mL. Pasar una porcio n de esta solucio n a trave s de un ltro con un taman o de poro de 0,45 mm o menor y usar el ltrado, que tiene una concentracio n de aproximadamente 1 mg de clorhidrato de nefazodona por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir 5,0 mL de la Preparacio n madre de valoracio n a un matraz volume trico de 50 mL. Diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar para obtener una solucio n con una concentracio n de aproximadamente 0,1 mg de clorhidrato de nefazodona por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 250 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 308. Inyectar la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas es no ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en porcentaje declarado, de clorhidrato de nefazodona (C25H32ClN5O2 HCl) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100(CS / CU)(rU / rS) en donde CS y CU son las concentraciones, en mg por mL, de clorhidrato de nefazodona en la Preparacio n esta ndar y la Preparacio n de valoracio n, respectivamente; y rU y rS son las a reas de los picos obtenidas a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Monograf as Ociales / Nimodipino
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ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Determinar la cantidad disuelta de C15H14N4O, por la fo rmula:
en donde rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente; WS es la cantidad, en mg, de ER Nevirapina Anhidra USP tomada; DS es el factor de dilucio n para la Solucio n esta ndar; 900 es el volumen, en mL, del Medio; 100 es el factor de conversio n a porcentaje; DU es el factor de dilucio n para la Solucio n de prueba; y LC es la cantidad declarada en mg por Tableta. ToleranciasNo menos de 75% (Q) de la cantidad declarada de C15H14N4O se disuelve en 60 minutos. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos. Pureza cromatogra ca Fase mo vil, Diluyente, Solucio n de resolucio n, Solucio n madre del esta ndar 1 y Solucio n madre del esta ndar 2Proceder segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarDiluir cuantitativamente la Solucio n madre del esta ndar 1 con Diluyente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,125 mg de nevirapina por mL. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n segu n se obtiene en la Valoracio n. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Proceder segu n se indica en la Valoracio n, excepto que la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de la Solucio n esta ndar no es ma s de 5,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas durante al menos 13 minutos y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza/producto de degradacio n en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 8000(C/W)(A/L)(ri / rS)(100) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Nevirapina Anhidra USP en la Solucio n esta ndar; W es el peso, en mg, de las Tabletas pulverizadas tomado para preparar la Solucio n de prueba; A es el peso promedio, en mg, de cada Tableta; L es la cantidad declarada de nevirapina, en mg, en cada Tableta; ri es la respuesta del pico obtenido para cada impureza/producto de degradacio n en la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico para nevirapina en la Solucio n esta ndar. Descartar todos los picos debidos al disolvente o a los excipientes y todos los picos de impurezas que sean menos de 0,1%. No se encuentra ma s de 0,1% de cualquier impureza/producto de degradacio n individual desconocido; y no se encuentra ma s de 0,2% de impurezas/productos de degradacio n desconocidos totales. Valoracio n Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de agua y acetonitrilo (77 : 23). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del sistema en Cromatograf a h621i). DiluyentePreparar una mezcla de alcohol deshidratado y agua (1 : 1). Solucio n madre del esta ndar 1Transferir aproximadamente 25 mg de ER Nevirapina Anhidra USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 250 mL, disolver y diluir a volumen con Diluyente. Solucio n madre del esta ndar 2Transferir aproximadamente 5 mg de ER Compuesto Relacionado A de Nevirapina USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL, disolver y diluir a volumen con Diluyente. Preparacio n esta ndarTransferir 25,0 mL de Solucio n madre del esta ndar 1 a un matraz volume trico de 100 mL y diluir a volumen con Diluyente. La concentracio n nal es aproximadamente 0,025 mg de nevirapina por mL.
Solucio n de resolucio nTransferir 25,0 mL de Solucio n madre del esta ndar 1 y 25,0 mL de Solucio n madre del esta ndar 2 a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con Diluyente y mezclar bien. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas. Transferir una porcio n del polvo, pesada con exactitud, equivalente a 200 mg of nevirapina, a un matraz volume trico de 200 mL y agregar aproximadamente 150 mL de Diluyente. Someter a ultrasonido la solucio n durante aproximadamente 20 minutos y luego agitar durante aproximadamente 20 minutos. Enfriar a temperatura ambiente, diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Centrifugar una porcio n de la solucio n resultante aproximadamente a 1500 rpm durante aproximadamente 5 minutos. Transferir 5,0 mL del sobrenadante a un matraz volume trico de 200 mL y diluir a volumen con Diluyente. Filtrar y desechar los primeros 2 mL del ltrado. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 214 nm y una columna de 3,9 mm 6 15 cm rellena con material L1. Mantener la columna a temperatura ambiente. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n (aproximadamente 20 mL) y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre nevirapina y el compuesto relacionado A de nevirapina no es menor de 3,0. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de la Preparacio n esta ndar no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas para el pico de nevirapina. Calcular la cantidad, en mg, de nevirapina (C15H14N4O) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 8000C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Nevirapina Anhidra USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Nimodipino
Cambio en la redaccio n: Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Solucio n de prueba se corresponde con el del cromatograma de la Solucio n esta ndar 1, segu n se obtienen en la prueba para & Compuestos relacionados.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Compuestos relacionados Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de agua, metanol y tetrahidrofurano (3 : 1 : 1). Solucio n esta ndar 1&Transferir una cantidad, pesada con exactitud, de ER Nimodipino USP a un matraz volume trico adecuado, disolver en un volumen de tetrahidrofurano equivalente aproximadamente a 10% del volumen del matraz volume trico, y diluir a volumen con Fase mo vil para obtener una solucio n que contenga aproximadamente 1,6 mg por mL. Diluir una al cuota de esta solucio n con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 3,2 m g por mL.&1S (USP30)
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Nitrofuranto na / Monograf as Ociales
Solucio n esta ndar 2&Transferir cantidades, pesadas con exactitud, de ER Nimodipino USP y ER Compuesto Relacionado A de Nimodipino USP a un matraz volume trico adecuado, disolver en un volumen de tetrahidrofurano equivalente aproximadamente a 10% del volumen del matraz volume trico, y diluir a volumen con Fase mo vil para obtener una solucio n que contenga 0,8 mg por mL de ER Nimodipino USP y de ER Compuesto Relacionado A de Nimodipino USP. Diluir una al cuota de esta solucio n con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1,6 mg por mL de cada uno de los esta ndares de referencia, ER Nimodipino USP y ER Compuesto Relacionado A de Nimodipino USP.&1S (USP30)
&
Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 40 mg de Nimodipino, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 25 mL, disolver en 2,5 mL de tetrahidrofurano, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 235 nm y una columna de 4,6 mm 6 12,5 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 408. Inyectar en el cromato grafo la &Solucio n esta ndar 2&1S (USP30) y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: &&1S (USP30) la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado A de nimodipino y nimodipino no es menor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. &[NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,9 para el compuesto relacionado A de nimodipino y 1,0 para nimodipino.]&1S (USP30) ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar 1, de la &Solucio n esta ndar 2&1S (USP30) y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. [NOTARegistrar el cromatograma de la Solucio n de prueba durante un per odo de tiempo equivalente a cuatro veces el tiempo de retencio n de nimodipino.]&Calcular el porcentaje de compuesto relacionado A de nimodipino en la porcio n de Nimodipino tomada, por la fo rmula: (100/1000)(CS / CT)(rU / rS) n, en mg por mL, de ER Compuesto en donde CS es la concentracio Relacionado A de Nimodipino USP en la Solucio n esta ndar 2; CT es la concentracio n, en mg por mL, de Nimodipino en la Solucio n de prueba; y rU y rS son las respuestas de los picos del compuesto relacionado A de nimodipino obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y Solucio n esta ndar 2, respectivamente: no se encuentra ma s de 0,1% de compuesto relacionado A de nimodipino. Calcular el porcentaje de cualquier otra impureza en la porcio n de Nimodipino tomada, por la fo rmula: (100/1000)(CS / CT)(ri / rS) en donde CS es la concentracio n, en mg por mL, de ER Nimodipino USP en Solucio n esta ndar 1; CT es la concentracio n, en mg por mL, de Nimodipino en la Solucio n de prueba; ri es la respuesta de los picos de cada impureza obtenidos a partir de la Solucio n de prueba; y rS es la respuesta del pico de nimodipino obtenido a partir de Solucio n esta ndar 1: no se encuentra ma s de 0,2% de cualquier otra impureza; y no se encuentra ma s de 0,5% de impurezas totales.&1S (USP30)
&1S
(USP30)
Aparato 1: 100 rpm. Tiempos: 1; 3 y 8 horas. ProcedimientoDeterminar la cantidad disuelta de C8H6N4O5 empleando absorcio n UV a la longitud de onda de ma xima absorbancia, aproximadamente a 375 nm, en porciones ltradas de la solucio n en ana lisis diluidas apropiadamente con Medio, si fuera necesario, en comparacio n con una Solucio n esta ndar con una concentracio n conocida de ER Nitrofuranto na USP en el mismo Medio. ToleranciasEl porcentaje de la cantidad declarada de C8H6N4O5 disuelta en 1 hora se ajusta a la Tabla de Aceptacio n 2, y los porcentajes disueltos a las 3 y 8 horas se ajustan a los criterios para el momento nal de la prueba en la Tabla de Aceptacio n 2. Tiempo (horas) 1 3 8 Cantidad disuelta entre 20% y 60% no menos de 45% no menos de 60%
PRUEBA 2 (cuando se declara que contienen ambas formas de nitrofuranto na, macrocristalina y monohidrato)Si el producto cumple con esta prueba, el etiquetado indica que cumple con la Prueba de Disolucio n 2 de la USP. Medio a cido: a cido clorh drico 0,01 N durante 1 hora; 900 mL. Medio de solucio n amortiguadora de pH 7,5Preparar un concentrado de solucio n amortiguadora de pH 7,5 disolviendo en agua 62,2 g de hidro xido de potasio y 129,3 g de fosfato monoba sico de potasio, diluir a 1 L con agua y mezclar. Despue s de 1 hora cambiar el Medio a cido a Medio de solucio n amortiguadora de pH 7,5 agregando 50 mL de concentrado de solucio n amortiguadora de pH 7,5, durante 6 horas adicionales. Aparato 2: 100 rpm, usando dispositivos de sumersio n de alambre de acero recubierto con teo n, preparados formando una bobina de aproximadamente 22 mm de largo a partir de un alambre calibre 20 de 13 cm de longitud (ver Figura 1).
Fig. 1. Dispositivo de sumersio n. Tiempos: 1; 3 y 7 horas. Solucio n esta ndar de la etapa a cidaPreparar una solucio n de ER Nitrofuranto na USP en Medio a cido para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,025 mg por mL. Solucio n esta ndar de la etapa amortiguadaPreparar una solucio n de ER Nitrofuranto na USP en Medio de solucio n amortiguadora de pH 7,5 para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,075 mg por mL. ProcedimientoDeterminar la cantidad disuelta de C8H6N4O5 a partir de las absorbancias UV a la longitud de onda isosbe stica, aproximadamente a 375 nm, en porciones ltradas de cada solucio n en ana lisis, diluidas adecuadamente si fuera necesario, con Medio a cido o Medio de solucio n amortiguadora de pH 7,5, segu n corresponda, en comparacio n con la Solucio n esta ndar apropiada.
Nitrofuranto na, Ca psulas
Cambio en la redaccio n: Disolucio n h711i PRUEBA 1 (cuando se declara que contienen macrocristales de nitrofuranto na) Medio: solucio n amortiguadora de fosfato de pH 7,2 (+0,05); 900 mL.
Monograf as Ociales / Norgestimato
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ToleranciasLos porcentajes de la cantidad declarada de C8H6N4O5 disuelta en los tiempos especicados se ajustan a la siguiente Tabla de Aceptacio n. Tiempo (horas) 1 3 7 Cantidad disuelta (individual) entre 2% y 16% entre 27% y 69% no menos de 68% Cantidad disuelta (promedio) entre 5% y 13% entre 39% y 56% no menos de 81% Agregar lo siguiente:
&Norgestimato
y Etinil Estradiol,
Tabletas
Las Tabletas de Norgestimato y Etinil Estradiol contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de las cantidades declaradas de norgestimato (C23H31NO3) y etinil estradiol (C20H24O2).
Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. Esta ndares de referencia USP h11iER Etinil Estradiol USP. ER Norgestimato USP. Identicacio nLos tiempos de retencio n de los picos principales en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponden con los del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Desintegracio n h701i: 15 minutos. Disolucio n h711i[NOTATener cuidado al ltrar y manipular soluciones que contengan etinil estradiol para evitar la pe rdida del fa rmaco por adsorcio n. Se puede centrifugar en lugar de ltrar con ltros de membrana no adsorbentes. Retirar las al cuotas de disolucio n con pipetas de vidrio o teo n, o con jeringas probadas contra pe rdida por adsorcio n. Utilizar vasos de disolucio n de vidrio y paletas de teo n o recubiertas con teo n.] Medio: polisorbato 20 al 0,05%; 600 mL. Aparato 2: 75 rpm. Tiempo: 20 minutos para Tabletas que declaran contener 180 mg de C23H31NO3 y 35 mg de C20H24O2; 20 minutos para Tabletas que declaran contener 215 mg de C23H31NO3 y 35 mg de C20H24O2; y 30 minutos para Tabletas que declaran contener 250 mg de C23H31NO3 y 35 mg de C20H24O2. Determinar la cantidad de norgestimato (C23H31NO3) y etinil estradiol (C20H24O2) disuelta, empleando el siguiente me todo. Fase mo vilPreparar una mezcla desgasicada de agua y alcohol isoprop lico (13 : 7). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n esta ndarDisolver en Medio una cantidad, pesada con exactitud, de ER Norgestimato USP y ER Etinil Estradiol USP y diluir cuantitativamente con Medio, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con concentraciones conocidas similares a las esperadas en la Solucio n de prueba. [NOTASe puede utilizar un volumen de metanol que no exceda 4% del volumen total de la Solucio n esta ndar para disolver los esta ndares antes de diluirlos con Medio.] Solucio n de pruebaUsar una porcio n ltrada o centrifugada de la solucio n en ana lisis. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm (para el ana lisis de norgestimato), un detector espectrouorome trico (para el ana lisis de etinil estradiol) con una longitud de onda de excitacio n a 234 nm y una longitud de onda de emisio n de 304 nm, y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L10. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,2 mL por minuto. Mantener la temperatura de la columna a 408. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n son aproximadamente 7,5 minutos para etinil estradiol y 9,5 minutos para norgestimato; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 3,0% para los picos de etinil estradiol y norgestimato.
Tabla de Aceptacio n Nu mero de Unidades Analizadas 12
Nivel L1
L2
12
Criterios El porcentaje promedio de la cantidad declarada disuelta se encuentra dentro del intervalo de los promedios para cada intervalo y no es menor que la cantidad declarada al momento nal de la prueba. Todos los valores individuales se encuentran dentro de los intervalos de los valores individuales para cada intervalo y no son menores que la cantidad declarada al momento nal de la prueba. El porcentaje promedio de la cantidad declarada disuelta se encuentra dentro del intervalo de los promedios para cada intervalo y no es menor que la cantidad declarada al momento nal de la prueba. No ma s de 2 de los 24 valores individuales se encuentran fuera de los intervalos especicados para los valores individuales en cada intervalo, y no ma s de 2 de los 24 son menores que la cantidad declarada al momento nal de la prueba.
.PRUEBA 3 (cuando se declara que contienen ambas formas de nitrofuranto na, macrocristalina y monohidrato)Si el producto cumple con esta prueba, el etiquetado indica que cumple con la Prueba de Disolucio n 3 de la USP. Medio a cido, Medio de solucio n amortiguadora de pH 7,5, Aparato 2, Tiempos, Solucio n esta ndar de la etapa a cida, Solucio n esta ndar de la etapa amortiguada, y ProcedimientoProceder segu n se indica en la Prueba 2. ToleranciasLos porcentajes de la cantidad declarada de C8H6N4O5 disuelta en los tiempos especicados se ajustan a la Tabla de Aceptacio n 2.
Tiempo (horas) 1 3 7
.5
Cantidad disuelta (individual) entre 2% y 16% entre 50% y 80% no menos de 85%
Cantidad disuelta (promedio) entre 5% y 13% entre 55% y 75% no menos de 90%
4154
Ondansetro n / Monograf as Ociales
ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 200 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de cada fa rmaco disuelta, por la fo rmula: 600C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, del analito apropiado en la Solucio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente. ToleranciasNo menos de 80% (Q) de las cantidades declaradas de C23H31NO3 y C20H24O2 se disuelven en 20 minutos para Tabletas que declaran contener 180 mg de C23H31NO3 y 35 mg de C20H24O2, y para Tabletas que declaran contener 215 mg de C23H31NO3 y 35 mg de C20H24O2. No menos de 80% (Q) de las cantidades declaradas de C23H31NO3 y C20H24O2 se disuelven en 30 minutos para Tabletas que declaran contener 250 mg de C23H31NO3 y 35 mg de C20H24O2. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos. Pureza cromatogra ca Fase mo vilPreparar segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarUsar la Preparacio n esta ndar, preparada segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n, preparada segu n se indica en la Valoracio n. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector capaz de detectar a 230 nm y 254 nm simulta neamente, y una columna de 4,6 mm 6 10 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar las a reas de los picos segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,5 para etinil estradiol, 1,0 para (Z)-norgestimato y 1,2 para (E)-norgestimato; la resolucio n, R, entre (Z)-norgestimato y (E)norgestimato no es menor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas de los picos de etinil estradiol y norgestimato no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo un volumen (aproximadamente 50 mL) de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos principales. Calcular el porcentaje de la impureza con un tiempo de retencio n relativo de aproximadamente 0,6, en relacio n con el pico de (Z)-norgestimato y detectado a 230 nm en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100(1,31)(ri / rs) en donde 1,31 es el factor de respuesta relativa de esta impureza; ri es la respuesta del pico de la impureza; y rs es la suma de las respuestas de los picos de (E)-norgestimato y (Z)-norgestimato: no se encuentra ma s de 7,5%. Calcular el porcentaje de cualquier impureza que tenga un tiempo de retencio n relativo de aproximadamente 0,2 o 0,4, en relacio n con el pico de (Z)-norgestimato y detectado a 254 nm en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100(1,54)(CZ / CE)(ri / rZ) en donde 1,54 es el factor de respuesta relativa de los picos de impureza; CZ y CE son las cantidades, en mg, de (Z)-norgestimato y etinil estradiol, respectivamente, segu n se determina en la Valoracio n; ri es la respuesta del pico para cada impureza; y rZ es la respuesta del pico para (Z)-norgestimato: la suma de las impurezas con tiempos de retencio n relativos de aproximadamente 0,2 y 0,4, no es ma s de 4,0%. Valoracio n Fase mo vilPreparar una mezcla desgasicada de agua, tetrahidrofurano y metanol (13 : 5 : 2). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de esta ndar internoDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ftalato de dibutilo en metanol para obtener una solucio n con una concentracio n de aproximadamente 0,05 mg por mL.
Preparacio n esta ndarDisolver en Solucio n de esta ndar interno una cantidad, pesada con exactitud, de ER Norgestimato USP y ER Etinil Estradiol USP y diluir cuantitativamente con Solucio n de esta ndar interno, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 7 mg por mL de etinil estradiol y una concentracio n conocida similar a la que se espera en la Preparacio n de valoracio n. Mezclar y pasar a trave s de un ltro de 0,45 mm. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas. Transferir una porcio n del polvo, pesada con exactitud, a un tubo de centr fuga de vidrio de 50 mL que equivalga aproximadamente a 0,175 mg de etinil estradiol, y agregar dos perlas de vidrio. Agregar 25,0 mL de la Solucio n de esta ndar interno, insertar el tapo n y mezclar en un mezclador por vo rtice durante al menos 15 minutos. Someter a ultrasonido durante al menos 5 minutos para asegurar una disolucio n completa de los fa rmacos, mezclar y pasar a trave s de un ltro de 0,45 mm. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 230 nm y una columna de 4,6 mm 6 5 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2,1 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,5 para etinil estradiol, 1,0 para (Z)norgestimato, 1,2 para (E)-norgestimato y 1,5 para ftalato de dibutilo; la resolucio n, R, entre (Z)-norgestimato y (E)-norgestimato no es menor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa del cociente de respuesta del pico de etinil estradiol, (Z)-norgestimato y (E)norgestimato con respecto al ftalato de dibutilo a partir de inyecciones repetidas, no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 25 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de etinil estradiol (C20H24O2) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 25C(RU / RS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Etinil Estradiol USP en la Preparacio n esta ndar; y RU y RS son los cocientes de respuesta entre los picos de etinil estradiol y de ftalato de dibutilo obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. Calcular la cantidad, en mg, de norgestimato (C23H31NO3) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 25C[PA(RUA / RSA) + PS(RUS / RSS)] en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Norgestimato USP en la Preparacio n esta ndar; PA y PS son las fracciones correspondientes a (E) y (Z) de ER Norgestimato USP; RUA y RSA son los cocientes de respuesta entre los picos de (E)-norgestimato y de ftalato de dibutilo obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente; y RUS y RSS son los cocientes de respuesta entre los picos de (Z)-norgestimato y de ftalato de dibutilo obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Ondansetro n
& Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables resistentes a la luz, a temperatura ambiente.&1S (USP30)
Monograf as Ociales / Paroxetina
4155
Cloruro de Oxibutinina
Tabla 1 (Continuacio n) Tiempo de Retencio n Relativo 0,79 1,8 1,9 Factor de Respuesta Relativa (F) 1,0 0,4 1,0
Cambio en la redaccio n: Compuestos relacionados Solucio n amortiguadora de fosfato y Fase mo vilPreparar segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n madre de aptitud del sistemaDisolver en Fase mo vil cantidades pesadas con exactitud de ER Compuesto Relacionado B de Oxibutinina USP y ER Compuesto Relacionado C de Oxibutinina USP para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 100 mg de cada Esta ndar de Referencia USP por mL. Solucio n madre del esta ndarDisolver en Fase mo vil una cantidad de ER Cloruro de Oxibutinina USP pesada con exactitud para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1,0 mg por mL. Solucio n de aptitud del sistemaTransferir 10,0 mL de la Solucio n madre de aptitud del sistema a un matraz volume trico de 100 mL, agregar 10,0 mL de la Solucio n madre del esta ndar y diluir a volumen con Fase mo vil. Solucio n esta ndarTransferir 15,0 mL de la Solucio n madre del esta ndar a un matraz volume trico de 100 mL y diluir a volumen con Fase mo vil. Transferir 5,0 mL de la solucio n obtenida a otro matraz volume trico de 100 mL y diluir a volumen con Fase mo vil. Esta solucio n contiene aproximadamente 7,5 mg de ER Cloruro de Oxibutinina USP por mL. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 50 mg de Cloruro de Oxibutinina, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 10 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil, y mezclar. Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en Valoracio n. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado B de oxibutinina y el compuesto relacionado C de oxibutinina no es menor de 1,1; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas, determinada a partir del pico de oxibutinina, no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas por un tiempo total no menor al doble del tiempo de retencio n del pico de oxibutinina y medir las respuestas de los picos (ver impurezas conocidas en Tabla 1). Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Cloruro de Oxibutinina tomada, por la fo rmula: (C/W)(1/F)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Cloruro de Oxibutinina USP en la Solucio n esta ndar; W es el peso, en mg, de Cloruro de Oxibutinina tomado para preparar la Solucio n de prueba; F es el factor de respuesta relativa para cada impureza (ver valores en Tabla 1); y rU y rS son las respuestas de los picos de cada impureza obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y del pico de oxibutinina en la Solucio n esta ndar, respectivamente. [NOTAPara impurezas desconocidas, usar el factor de respuesta relativa de & 1,0&1S (USP30).] Tabla 1 Tiempo de Retencio n Relativo 0,08 0,37 0,65 Factor de Respuesta Relativa (F) 1,4 2,7 1,3
Nombre del compuesto Compuesto relacionado C de oxibutinina4 Ana logo ciclohexen lico de cloruro de oxibutinina5 Ana logo etilprop lico de cloruro de oxibutinina6
1 2 3
L mite (%) 1,0 1,0 0,1
a cido fenilciclohexilglico lico (a cido ciclohexilmande lico o CHMA) 4-(dietilamino)but-2-inil 2-hidroxi-2,2-difenilacetato e ster met lico de a cido fenilciclohexilglico lico (e ster met lico de a cido ciclohexilmande lico o CHMME) 4 ana logo metilet lico de cloruro de oxibutinina (4-(etilmetilamino) but-2-inil (+)-2-ciclohexil-2-hidroxi-2-fenilacetato) 5 4-(dietilamino)but-2-inil (+)-2-(ciclohex-3-enil)-2-ciclohexil-2-hidroxiacetato 6 4-(etilpropilamino)but-2-inil (+)-2-ciclohexil-2-hidroxi-2-fenilacetato
Adema s de no exceder los l mites de cada impureza indicados en Tabla 1, no se encuentra ma s de 0,1% de cualquier otra impureza individual y no se encuentra ma s de 1,0% de impurezas totales.
Clorhidrato de Paroxetina
Cambio en la redaccio n: Valoracio n Solucio n amortiguadora de acetatoPreparar una solucio n de acetato de amonio 0,05 M en agua, ajustar con a cido ace tico glacial a un pH de 4,5, mezclar y ltrar. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora de acetato, acetonitrilo y trietilamina & (70 : 30 : 1). [NOTASe puede variar la relacio n de Solucio n amortiguadora de acetatoacetonitrilotrietilamina entre 70 : 40 : 1 y 75 : 25 : 1 para cumplir con los requisitos de aptitud del sistema.]&1S (USP30) Ajustar con a cido ace tico glacial a un pH de 5,5. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de aptitud del sistemaDisolver en agua cantidades adecuadas de ER Compuesto Relacionado B de Paroxetina USP y ER Clorhidrato de Paroxetina USP para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,5 mg de cada Esta ndar de Referencia USP por mL. Preparacio n esta ndarDisolver en agua una cantidad, pesada con exactitud, de ER Clorhidrato de Paroxetina USP y diluir cuantitativamente con agua, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,5 mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 50 mg de Clorhidrato de Paroxetina, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con agua y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 295 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L13. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: &&1S (USP30) la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado B de paroxetina y paroxetina no es menor de 2,0; &el factor de asimetr a para el pico de paroxetina no es mayor de 2,0;&1S (USP30) y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%.&[NOTAPara
Nombre del compuesto Compuesto relacionado A de oxibutinina1 Ana logo difen lico de cloruro de oxibutinina2 Compuesto relacionado B de oxibutinina3
L mite (%) 0,5 0,1 1,0
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Pentazocina / Monograf as Ociales
nes informativos, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,9 para el compuesto relacionado B de paroxetina y 1,0 para paroxetina.]&1S (USP30) ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de C19H20FNO3 HCl en la porcio n de Clorhidrato de Paroxetina tomada, por la fo rmula: 100C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Paroxetina USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
&Pentazocina
y Acetaminofeno, Tabletas
(La Monograf a con este t tulosera ocial a partir del 18 de febrero de 2009)
Las Tabletas de Pentazocina y Acetaminofeno
contienen una cantidad de Clorhidrato de Pentazocina equivalente a no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de pentazocina (C19H27NO), y no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de acetaminofeno (C9H8NO2).
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables y resistentes a la luz. Esta ndares de referencia USP h11iER Acetaminofeno USP. ER Pentazocina USP. Prueba de identicacio n por cromatograf a en capa delgada h201i Solucio n de pruebaTransferir una cantidad de Tabletas reducidas a polvo no, equivalente aproximadamente a 5 mg de pentazocina y 130 mg de acetaminofeno a un matraz adecuado, y agregar 5 mL de una mezcla de cloroformo y metanol (1 : 1), agitar y dejar que sedimenten los so lidos. Usar el sobrenadante. Soluciones esta ndarPreparar una solucio n de ER Pentazocina USP en una mezcla de cloroformo y metanol (1 : 1) que contenga 1 mg por mL (Solucio n esta ndar A). Empleando el mismo disolvente, preparar una solucio n de ER Acetaminofeno USP que contenga 26 mg por mL (Solucio n esta ndar B). Fase mo vil: una mezcla de acetato de etilo, metanol y a cido fo rmico (90 : 5 : 5). ProcedimientoEvaporar los disolventes en aire fr o circulante. Despue s de desarrollar y examinar las manchas, rociar la placa con un reactivo yodoplatinato preparado disolviendo 300 mg de cloruro plat nico en 100 mL de agua y agregando 100 mL de una solucio n de yoduro de potasio (6 en 100): el cromatograma obtenido con la Solucio n de prueba muestra dos manchas principales que se corresponden con los valores RF, taman o e intensidad del color con las manchas obtenidas a partir de las Soluciones esta ndar A y B. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos.
PROCEDIMIENTO PARA UNIFORMIDAD DE CONTENIDO DE PENTAZOCINA Y ACETAMINOFENO
Fase mo vilPreparar una mezcla de fosfato monoba sico de sodio 0,005 M, tetrahidrofurano y a cido fosfo rico (950 : 50 : 1). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n madre del esta ndar de pentazocinaDisolver en Disolvente una cantidad, pesada con exactitud, de ER Pentazocina USP y diluir cuantitativamente con Disolvente para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,25 mg por mL. Solucio n esta ndarTransferir una cantidad de ER Acetaminofeno USP, pesada con exactitud, a un matraz volume trico adecuado, agregar un volumen suciente de Solucio n madre del esta ndar de pentazocina, y mezclar para disolver el acetaminofeno. Diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar para obtener concentraciones conocidas de aproximadamente 0,0125 mg y 0,325 mg de pentazocina y acetaminofeno por mL, respectivamente. Solucio n de pruebaTransferir 1 Tableta a un matraz volume trico de 100 mL, agregar 50 mL de Disolvente, y someter a ultrasonido durante aproximadamente 30 minutos. Diluir a volumen con Disolvente y mezclar. Pasar una porcio n de esta solucio n a trave s de un ltro de papel, cubriendo el embudo con un vidrio de reloj y desechar los primeros mL de ltrado. Diluir 5,0 mL del ltrado con Fase mo vil hasta 100 mL y pasar esta solucio n a trave s de un ltro de membrana con un taman o de poro de 0,5 mm o menor. Solucio n de aptitud del sistemaTransferir aproximadamente 32,5 mg de ER Acetaminofeno USP a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con Disolvente, y mezclar. Transferir 1,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 100 mL, agregar 5,0 mL de Solucio n madre del esta ndar de pentazocina, diluir a volumen con Fase mo vil y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 9,4 mm 6 10 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,2 para acetaminofeno y 1,0 para pentazocina; la resolucio n, R, entre pentazocina y acetaminofeno no es menor de 7; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0% para los picos de pentazocina y acetaminofeno. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo de l quidos volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, y medir las respuestas de los picos de pentazocina y acetaminofeno. Calcular la cantidad, en mg, de pentazocina (C19H27NO) y de acetaminofeno (C8H9NO2) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 2000C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, del Esta ndar de Referencia USP adecuado en la Solucio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos del analito correspondiente obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente. Valoracio n de pentazocina Fase mo vilPreparar una mezcla de cloroformo, metanol e isopropilamina (96 : 4 : 0,2). DiluyentePreparar una mezcla de metanol y a cido sulfu rico 0,035 N (1 : 1). Preparacio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Pentazocina USP en Diluyente y diluir cuantitativamente con el mismo disolvente para obtener una solucio n madre con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,5 mg por mL. Transferir 10,0 mL de esta solucio n madre a un separador de 125 mL. Agregar 30 mL de agua y 5 mL de solucio n de carbonato de sodio (1 : 10), y mezclar. Extraer con 60 mL de cloroformo, pasar la capa clorofo rmica a trave s de un ltro de papel, recolectando el ltrado en un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con cloroformo y mezclar. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas. Transferir una porcio n del polvo, pesada con exactitud, equivalente aproximadamente a 25 mg de pentazocina a una probeta de 50 mL con tapo n de vidrio, agregar 50,0 mL de Diluyente y agitar de manera intermitente durante aproximadamente 15 minutos. Someter a ultrasonido durante aproximadamente 2 minutos, dejar que los so lidos sedimenten y transferir 10,0 mL
DisolventePreparar una mezcla de acetonitrilo y a cido sulfu rico 0,035 N (6 : 4).
Monograf as Ociales / Piridoxina
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del sobrenadante a un separador de 125 mL. [NOTAReservar el remanente de sobrenadante para utilizarlo en la Valoracio n de acetaminofeno.] Agregar 30 mL de agua y 5 mL de solucio n de carbonato de sodio (1 : 10) al separador y mezclar. Extraer con 60 mL de cloroformo, pasar la capa clorofo rmica a trave s de un ltro de papel, recolectando el ltrado en un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con cloroformo y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 280 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L3 de 10 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna no es menos de 1000 platos teo ricos; el factor de asimetr a no es mayor de 3,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo de l quidos volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos de pentazocina. Calcular la cantidad, en mg, de pentazocina (C19H27NO) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 50C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Pentazocina USP en la solucio n madre utilizada para preparar la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. Valoracio n de acetaminofeno Fase mo vil y DiluyenteProceder segu n se indica en la Valoracio n de pentazocina. Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 130 mg de ER Acetaminofeno USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 10 mL, disolver y diluir a volumen con Diluyente, y mezclar. Transferir 2,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 200 mL, diluir a volumen con acetato de etilo y mezclar. Preparacio n de valoracio nTransferir 2,0 mL del sobrenadante reservado de la Valoracio n de pentazocina a un matraz volume trico de 200 mL, diluir a volumen con acetato de etilo y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L3 de 10 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,4 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna no es menos de 1000 platos teo ricos; el factor de asimetr a no es mayor de 3,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos de acetaminofeno. Calcular la cantidad, en mg, de acetaminofeno (C8H9NO2) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 100C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Acetaminofeno USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. &1S (USP30)
Pentobarbital So dico, Inyeccio n
Cambio en la redaccio n: Identicacio n&El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n.&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: Valoracio n & Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de fosfato monoba sico de potasio 0,01 M y acetonitrilo (65 : 35) de pH 3,5. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver en Fase mo vil una cantidad, pesada con exactitud, de ER Pentobarbital USP y diluir cuantitativamente, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg por mL. Preparacio n de valoracio nDiluir cuantitativamente un volumen adecuado de Inyeccio n con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 214 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de capacidad, k, no es menor de 2,5; la eciencia de la columna no es menos de 15 000 platos teo ricos; el factor de asimetr a no es mayor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular el porcentaje de C11H17N2NaO3 en la porcio n de Inyeccio n tomada, por la fo rmula: 100(248,25/226,27)(CS / CU)(rU / rS) en donde 248,25 y 226,27 son los pesos moleculares de pentobarbital so dico y pentobarbital, respectivamente; CS es la concentracio n, en mg por mL, de ER Pentobarbital USP en la Preparacio n esta ndar; CU es la concentracio n nal, en mg por mL, de la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las a reas de los picos obtenidas a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Clorhidrato de Piridoxina, Inyeccio n
Cambio en la redaccio n: Valoracio n Solucio n amortiguadora de cloruro de amoniohidro xido de amonioDisolver 16 g de cloruro de amonio en 70 mL de agua, agregar 16 mL de hidro xido de amonio, diluir con agua a 100 mL, mezclar y ltrar. Solucio n de clorimidaDisolver 40 mg de 2,6-dicloroquinonaclorimida en 100 mL de alcohol isoprop lico. Conservar la solucio n en un refrigerador y usarla dentro del mes de preparada. No usar la solucio n si se ha tornado rosada.
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Potasio / Monograf as Ociales
Solucio n madre del esta ndarDisolver una cantidad adecuada de ER Clorhidrato de Piridoxina USP, pesada con exactitud, en a cido clorh drico 0,1 N, diluir cuantitativamente con el mismo disolvente hasta obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg por mL y mezclar. Conservar la solucio n en un frasco color a mbar, en un lugar fresco. Preparacio n esta ndarEn un matraz volume trico de 100 mL diluir a volumen con agua 10,0 mL de Solucio n madre del esta ndar y mezclar. Preparar esta solucio n en el d a de uso segu n sea necesario. Preparacio n de valoracio nDiluir cuantitativamente y en diluciones sucesivas con agua un volumen de Inyeccio n, medido con exactitud, que equivalga aproximadamente a 100 mg de clorhidrato de piridoxina hasta obtener una concentracio n de aproximadamente 10 mg de clorhidrato de piridoxina por mL. Procedimiento (a) Pipetear 5 mL de la Preparacio n de valoracio n transparente, transferir a un matraz, agregar 25,0 mL de alcohol isoprop lico y mezclar. Pipetear 5 mL de la dilucio n en alcohol isoprop lico, transferir a una probeta graduada de 25 mL con tapo n de vidrio o a un tubo de ensayo con las mismas caracter sticas, y agregar sucesivamente, mezclando despue s de cada agregado, 1,0 mL de Solucio n amortiguadora de cloruro de amoniohidro xido de amonio, 1,0 mL de solucio n de acetato de sodio (1 en 5) y 1,0 mL de agua. Enfriar hasta aproximadamente 258, luego agregar 1,0 mL de Solucio n de clorimida y agitar vigorosamente durante 10 segundos cronometrados con exactitud. &Noventa&1S (USP30) segundos, cronometrados con exactitud, despue s de agregar la Solucio n de clorimida, determinar la absorbancia a la longitud de onda de ma xima absorbancia, aproximadamente a 650 nm, con un espectrofoto metro adecuado, utilizando agua como blanco. [NOTA Realizar la lectura ra pidamente para evitar errores causados por la desaparicio n del color.] Designar la absorbancia como AU. (b) Repetir el procedimiento (a), pero utilizar 1,0 mL de solucio n de a cido bo rico (1 en 20) en lugar de 1,0 mL de agua. Designar la absorbancia como AU. (c) Repetir el procedimiento (a), pero utilizar 5,0 mL de la Preparacio n esta ndar en lugar de 5,0 mL de la Preparacio n de valoracio n. Designar la absorbancia como AS. (d) Repetir el procedimiento (c), pero utilizar 1,0 mL de solucio n de a cido bo rico (1 en 20) en lugar de 1,0 mL de agua. Designar la absorbancia como AS. Calcular la cantidad, en mg, de clorhidrato de piridoxina (C8H11NO3 HCl) en cada mL de Inyeccio n tomada, por la fo rmula: 10(C/V)(AU AU) / (AS AS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Piridoxina USP en la Preparacio n esta ndar; V es el volumen, en mL, de Inyeccio n tomado; y los otros te rminos son los denidos anteriormente.
Preparacio n esta ndarTransferir aproximadamente 50 mg de perclorato de potasio,&1S (USP30) pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Transferir 10,0 mL de esta solucio n a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con agua y mezclar para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 0,1 mg por mL. Preparacio n de valoracio nEmpleando aproximadamente 50 mg de Perclorato de Potasio, pesados con exactitud, proceder segu n se indica en la Preparacio n esta ndar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector de conductividad y una columna de 4,6 mm 6 7,5 cm rellena con material L23 de 6 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a no es mayor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de KClO4 en la porcio n de Perclorato de Potasio tomada, por la fo rmula:
&
500C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de &perclorato de potasio&1S (USP30) en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
&Prednicarbato,
Crema
La Crema de Prednicarbato contiene no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de prednicarbato (C27H36O8). Puede contener un conservante adecuado.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables y resistentes a la luz. Almacenar a temperatura ambiente controlada. Esta ndares de referencia USP h11iER Prednicarbato USP. ER Compuesto Relacionado A de Prednicarbato USP. ER Compuesto Relacionado B de Prednicarbato USP. ER Compuesto Relacionado C de Prednicarbato USP. Identicacio nEl tiempo de retencio n del pico de prednicarbato en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. ConsistenciaA temperatura ambiente, un cordo n de Crema de 2 cm de longitud conserva su forma en una placa de vidrio durante al menos 10 minutos. Se puede esparcir fa cilmente y no contiene grumos visibles. L mites microbianos h61iCumple con los requisitos de las pruebas para determinar la ausencia de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. El recuento total de bacterias aerobias no excede de 100 ufc por g.
Perclorato de Potasio
& Esta ndares de referencia USP h11iER Perclorato de Potasio USP.&1S (USP30)
Cambio en la redaccio n: Valoracio n Fase mo vilTransferir 16,6 g de a cido fta lico a un matraz volume trico de 100 mL, disolver y diluir a volumen con metanol, y mezclar. Transferir 10,0 mL de esta solucio n a un matraz de 1000 mL, diluir a volumen con agua y mezclar. Ajustar con aproximadamente 450 mg de hidro xido de litio a un pH de 4,5, ltrar y desgasicar.
Monograf as Ociales / Prednicarbato
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Llenado m nimo h755i:
cumple con los requisitos.
pH h791i: entre 3,5 y 5,0, en una solucio n preparada de la siguiente manera. Agregar 15 mL de agua en ebullicio n a 3,5 g de Crema en un tubo de centr fuga de 50 mL y agitar vigorosamente hasta que se forme una emulsio n. Aojar la tapa y colocar en un ban o de vapor durante 5 minutos. Centrifugar la solucio n caliente. Despue s de enfriar a temperatura ambiente, recolectar la solucio n acuosa inferior en un tubo de vidrio y determinar el pH. Compuestos relacionados Solucio n A, Solucio n B, Fase mo vil, Solucio n 1, Solucio n 2 y Solucio n de resolucio nPreparar segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n madre del esta ndarPreparar segu n se indica en la Preparacio n madre del esta ndar en la Valoracio n. Solucio n esta ndarPreparar segu n se indica en Preparacio n esta ndar en la Valoracio n. Solucio n de sensibilidad del sistemaDiluir 1,0 mL de la Solucio n esta ndar con alcohol deshidratado a 50,0 mL. Diluir 1,0 mL de la solucio n as obtenida con Solucio n A a 20,0 mL. Solucio n de pruebaPreparar segu n se indica en la Preparacio n de valoracio n. Sistema cromatogra coProceder segu n se indica en la Valoracio n. Cromatograar la Solucio n de sensibilidad del sistema: la relacio n sen al-ruido no es menor de 3. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente de 0,57 para el compuesto relacionado B de prednicarbato, 0,64 para el compuesto relacionado C de prednicarbato, 1,0 para prednicarbato y 1,04 para el compuesto relacionado A de prednicarbato. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo un volumen (aproximadamente 60 mL) de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada compuesto relacionado e impureza desconocida en la porcio n de Crema tomada, por la fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es la respuesta de cada pico de impureza individual obtenido a partir de la Solucio n de prueba, y rs es la suma de las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Solucio n de prueba: no se encuentra ma s de 2,0% del compuesto relacionado B de prednicarbato y no se encuentra ma s de 2,0% del compuesto relacionado C de prednicarbato; no se encuentra ma s de 0,5% de cualquier compuesto relacionado individual; y no se encuentra ma s de 5,0% de los compuestos relacionados totales. Valoracio n Solucio n APreparar una solucio n 0,01 M de fosfato monoba sico de potasio en agua. Solucio n BPreparar una mezcla de acetonitrilo y alcohol deshidratado (2 : 1). Fase mo vilUsar mezclas variables de la Solucio n A y de la Solucio n B, segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n madre del esta ndarDisolver en alcohol deshidratado una cantidad de ER Prednicarbato USP, pesada con exactitud, diluir cuantitativamente con alcohol deshidratado, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de 0,3 mg por mL. Preparacio n esta ndarTransferir 10,0 mL de la Preparacio n madre del esta ndar a un matraz volume trico de 100 mL, agregar 15 mL de tetrahidrofurano y 30 mL de Solucio n B, y diluir a volumen con Solucio n A. Preparacio n de valoracio nTransferir una cantidad de Crema, pesada con exactitud, equivalente aproximadamente a 3,0 mg de prednicarbato, a un matraz volume trico de 100 mL. Agregar 15 mL de tetrahidrofurano, agitar vigorosamente y dejar en reposo en un ban o de ultrasonido hasta que la muestra se haya disuelto. Agregar 20 mL de alcohol deshidratado y agitar vigorosamente. Agregar 20 mL de acetonitrilo y agitar vigorosamente. Diluir inmediatamente a volumen con Solucio n A y agitar vigorosamente. Dejar en reposo en un ban o de hielo durante aproximadamente 15 minutos. Agitar vigorosamente las muestras y pasarlas a trave s de un ltro de papel plegado. Pasar el ltrado a trave s de un ltro de membrana de 0,45 mm.
Solucio n 1Preparar una solucio n con 0,3 mg por mL de ER Compuesto Relacionado B de Prednicarbato USP y 0,3 mg por mL de ER Compuesto Relacionado C de Prednicarbato USP en alcohol deshidratado. Solucio n 2 Transferir aproximadamente 15 mg de ER Compuesto Relacionado A de Prednicarbato USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL; agregar 1,0 mL de Solucio n 1 y diluir a volumen con alcohol deshidratado. Solucio n de resolucio nTransferir 10,0 mL de la Preparacio n esta ndar a un matraz volume trico; agregar 1,0 mL de Solucio n 2, 1 mL de tetrahidrofurano y 2 mL de acetonitrilo; y diluir con Solucio n A a 20,0 mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar el cromato grafo de l quidos con un detector a 243 nm y una columna de 4,0 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. Mantener la temperatura de la columna a 408. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Tiempo (minutos) 05 545 4550 5055 5570 7075 7585 Solucio n A (%) 67 67?40 40 40?20 20 20?67 67 Solucio n B (%) 33 33?60 60 60?80 80 80?33 33 Elucio n equilibrio gradiente lineal isocra tica gradiente lineal isocra tica gradiente lineal isocra tica
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre prednicarbato y el compuesto relacionado A de prednicarbato no es menor de 1,5. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a para el pico de prednicarbato es entre 0,7 y 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 60 mL) de la Preparacio n esta ndar y la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. Calcular la cantidad, en mg, de prednicarbato (C27H36O8) en cada g de Crema tomada, por la fo rmula: 100(C/W)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Prednicarbato USP en la Preparacio n esta ndar; W es el peso, en g, de Crema tomada; y rU y rS son las respuestas de los picos de prednicarbato obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
&Prednicarbato,
Ungu ento
El Ungu ento de Prednicarbato contiene no menos de

90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de prednicarbato (C27H36O8), en una base para ungu ento adecuada.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables y resistentes a la luz. Almacenar a temperatura ambiente controlada.
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Prednisolona / Monograf as Ociales
Esta ndares de referencia USP h11iER Prednicarbato USP. ER Compuesto Relacionado A de Prednicarbato USP. ER Compuesto Relacionado B de Prednicarbato USP. ER Compuesto Relacionado C de Prednicarbato USP. Identicacio nCumple con los requisitos de la prueba de Identicacio n en Prednicarbato, Crema. ConsistenciaA temperatura ambiente, un cordo n de Ungu ento de 2 cm de longitud conserva su forma en una placa de vidrio durante al menos 10 minutos. Se puede esparcir fa cilmente y no contiene grumos visibles. L mites microbianos h61iCumple con los requisitos de las pruebas para determinar la ausencia de Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa. El recuento bacteriano aerobio total no excede de 100 ufc por g. Llenado m nimo h755i: cumple con los requisitos. Compuestos relacionados Solucio n A, Solucio n B, Fase mo vil, Solucio n 1, Solucio n 2 y Solucio n de resolucio nPreparar segu n se indica en Valoracio n en Prednicarbato, Crema. Solucio n madre del esta ndarPreparar segu n se indica en Preparacio n madre del esta ndar en Valoracio n en Prednicarbato, Crema. Solucio n de sensibilidad del sistemaPreparar segu n se indica en la prueba de Compuestos relacionados en Prednicarbato, Crema. Solucio n de pruebaPreparar segu n se indica en Preparacio n de valoracio n en Prednicarbato, Crema. Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en Valoracio n en Prednicarbato, Crema. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de sensibilidad del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la relacio n sen al-ruido no es menor de 3. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,57 para el compuesto relacionado B de prednicarbato, 0,64 para el compuesto relacionado C de prednicarbato, 1,0 para prednicarbato y 1,04 para el compuesto relacionado A de prednicarbato. ProcedimientoInyectar en el cromato grafo un volumen (aproximadamente 60 mL) de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de cada compuesto relacionado e impureza desconocida en la porcio n de Ungu ento tomada, por la fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es la respuesta del pico para cada impureza obtenido a partir de la Solucio n de prueba, y rs es la suma de todas las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Solucio n de prueba: no se encuentra ma s de 2,0% de compuesto relacionado B de prednicarbato ni ma s de 2,0% de compuesto relacionado C de prednicarbato; no se encuentra ma s de 0,5% de cualquier compuesto relacionado individual; y no se encuentra ma s de 5,0% de los compuestos relacionados totales. Valoracio n Solucio n A, Solucio n B, Fase mo vil, Preparacio n madre del esta ndar, Preparacio n esta ndar, Preparacio n de valoracio n, Solucio n 1, Solucio n 2 y Solucio n de resolucio nPreparar segu n se indica en Valoracio n en Prednicarbato, Crema. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 243 nm y una columna de 4,0 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. Mantener la temperatura de la columna a 408. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Tiempo (minutos) 05 545 4550 5055 5570 7075 7585 Solucio n A (%) 67 67?40 40 40?20 20 20?67 67 Solucio n B (%) 33 33?60 60 60?80 80 80?33 33 Elucio n equilibrio gradiente lineal isocra tica gradiente lineal isocra tica gradiente lineal isocra tica
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de resolucio n y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre prednicarbato y el compuesto relacionado A de prednicarbato no es menor de 1,5. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: el factor de asimetr a para el pico de prednicarbato esta entre 0,7 y 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 60 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. Calcular la cantidad, en mg, de prednicarbato (C27H36O8) en cada g de Ungu ento tomado, por la fo rmula: 100(C/W)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Prednicarbato USP en la Preparacio n esta ndar; W es el peso, en g, de Ungu ento tomado; y rU y rS son las respuestas de los picos de prednicarbato obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Fosfato So dico de Prednisolona
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11iER Prednisolona USP. &ER Fosfato So dico de Prednisolona USP.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Identicacio n n en el Infrarrojo h197Ki.&1S (USP30) A: &Absorcio B: El residuo de incineracio n de aproximadamente 20 mg cumple con los requisitos de las pruebas para Sodio h191i y para Fosfato h191i.
Quazepam, Tabletas
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11 i & ER Etilparabeno USP.&1S (USP30) ER Quazepam USP. ER Compuesto Relacionado A de Quazepam USP. Cambio en la redaccio n: Valoracio n Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de metanol y agua (7 : 3). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de esta ndar internoDisolver en metanol una cantidad, pesada con exactitud, de &ER Etilparabeno USP&1S (USP30) y diluir cuantitativamente con metanol, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n que contenga aproximadamente 0,19 mg por mL. Preparacio n esta ndarDisolver en Solucio n de esta ndar interno una cantidad, pesada con exactitud, de ER Quazepam USP y diluir cuantitativamente con la Solucio n de esta ndar interno, y si fuera
Monograf as Ociales / Ritonavir
4161
necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1,5 mg de quazepam por mL. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 10 Tabletas. Transferir una porcio n del polvo, pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 15 mg de quazepam, a un tubo de centr fuga de 50 mL con tapa de rosca. Agregar 10,0 mL de la Solucio n de esta ndar interno y centrifugar durante 30 minutos. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 254 nm y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L7. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: &&1S (USP30) la resolucio n, R, entre etilparabeno y quazepam no es menor de 5,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. & [NOTAA los efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,4 para etilparabeno y 1,0 para quazepam.]&1S (USP30) ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 5 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de quazepam (C17H11ClF4N2S) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 10C(RU / RS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Quazepam USP en la Preparacio n esta ndar; y RU y RS son los cocientes de respuesta entre los picos de quazepam y etilparabeno obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
Cambio en la redaccio n: Compuestos relacionados[NOTAEl Ritonavir es sensible al a lcali.&1S (USP30) Todo el material de vidrio debe enjuagarse previamente con agua destilada antes de usar para eliminar la contaminacio n residual con detergente.] Solucio n de fosfato monoba sico de potasio (0,03M), Diluyente, Solucio n A, Solucio n B y Fase mo vilPreparar segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n madre del esta ndar y Solucio n madre intermedia Preparar segu n se indica en Preparacio n madre del esta ndar y Preparacio n esta ndar intermedia en la Valoracio n. Solucio n esta ndar de identidad de RitonavirTransferir aproximadamente 50 mg de ER Mezcla de Compuestos Relacionados de Ritonavir USP, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL. Disolver y diluir a volumen con Diluyente, y mezclar. Solucio n esta ndarTransferir 5,0 mL de la Solucio n esta ndar intermedia a un matraz volume trico de 100 mL, diluir a volumen con Diluyente y mezclar. [NOTASe puede usar esta solucio n durante 48 horas siempre que se almacene a temperatura ambiente.] Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 50 mg de Ritonavir, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 50 mL. Disolver y diluir a volumen con Diluyente, y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 240 nm y una columna de 4,6 mm 6 15 cm rellena con material L26 de 3 mm, y mantener a una temperatura constante de aproximadamente 608. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo.
&
Tiempo (minutos) 0 060 60120 120,1 120,1155
Solucio n A (%) 100 100 100?0 0?100 100
Solucio n B (%) 0 0 0?100 100?0 0
Quinapril, Tabletas
Elucio n equilibrio isocra tica gradiente gradiente escalonado isocra tica
& Envasado y almacenamientoConservar en envases bien cerrados. Almacenar a temperatura ambiente controlada.&1S (USP30)
Ritonavir
Cambio en la redaccio n: Identicacio n A: &Absorcio n en el Infrarrojo h197i&1S (USP30) Muestra de pruebaDisolver 50 mg de Ritonavir en 1,0 mL de cloroformo. Depositar una gota de esta solucio n sobre la supercie de un disco de bromuro de potasio o cloruro de sodio y evaporar hasta sequedad. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n esta dentro del 2% del tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtiene en la Valoracio n. C: Difraccio n de rayos X h941iEl patro n de difraccio n de rayos X se ajusta al del ER Ritonavir USP.
El tiempo de corrida de la Solucio n esta ndar es de 40 minutos y el tiempo de corrida de la Solucio n de prueba es de 155 minutos. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar de identidad de Ritonavir y la Solucio n esta ndar, y registrar las respuestas segu n se indica en el Procedimiento: el tiempo de retencio n de ritonavir esta entre 30 minutos y 35 minutos; la resolucio n, R, entre la impureza E y la impureza F (ver la Tabla 1) en la Solucio n esta ndar de identidad de Ritonavir no es menor de 1,0; el cociente entre el pico (Hp) y el valle (Hv) de &Ritonavir e&1S (USP30) impureza N (regioiso mero) no es menor de 1; el factor de capacidad, k , utilizando el pico del componente principal de la primera inyeccio n de Solucio n esta ndar no es menor de 13; la eciencia de la columna, utilizando el pico del componente principal de la primera inyeccio n de Solucio n esta ndar, no es menos de 5000 platos teo ricos; el factor de asimetr a, utilizando el pico del componente principal de la primera inyeccio n de Solucio n esta ndar, esta entre 0,8 y 1,2; y la desviacio n esta ndar relativa del a rea del pico del componente principal, para inyecciones repetidas de la Solucio n esta ndar, no es ma s de 3,0%.
4162
Ropivaca na / Monograf as Ociales
ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 50 mL) de Diluyente, de la Solucio n esta ndar de identidad de Ritonavir, de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos. Calcular el porcentaje de cada impureza en la porcio n de Ritonavir tomada, por la fo rmula: 0,0025(WS / WT) (RT / RS)(1/F)P donde WS es el peso, en mg, de ER Ritonavir USP tomado para preparar la Solucio n esta ndar; WT es el peso, en mg, de Ritonavir tomado para preparar la Solucio n de prueba; RT es el a rea correspondiente al pico de impureza obtenido a partir de la Solucio n de prueba; RS es el a rea promedio de los picos de ritonavir obtenidos de las seis inyecciones de la Solucio n esta ndar; F es el factor de respuesta para la impureza (ver valores en Tabla 1); y P es la pureza, en porcentaje, de ER Ritonavir USP tomada para preparar la Solucio n esta ndar. No se encuentra ma s de 0,3% de impureza E y O; no se encuentra ma s de 0,2% de impureza T; no se encuentra ma s de 0,1% de cualquier otra impureza; y no se encuentra ma s de 1,0% de impurezas totales.
&Clorhidrato
de Ropivaca na, Inyeccio n
La Inyeccio n de Clorhidrato de Ropivaca na es una
solucio n este ril de Clorhidrato de Ropivaca na en Agua para Inyeccio n. Contiene no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de clorhidrato de ropivaca na (C17H26N2O HCl).
Envasado y almacenamientoConservar en envases monodosis o multidosis, preferentemente de vidrio Tipo 1 o de pla stico adecuado.
Esta ndares de referencia USP h11iER Endotoxina USP. ER Clorhidrato de Ropivaca na USP. ER Compuesto Relacionado A de Ropivaca na USP. ER Compuesto Relacionado B de Ropivaca na USP. Identicacio n A: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Solucio n de prueba se corresponde con el del cromatograma de la Solucio n de aptitud del sistema, segu n se obtienen en la prueba de Pureza enantiome rica. Endotoxinas bacterianas h85iNo contiene ma s de 60 Unidades USP de Endotoxinas por g de clorhidrato de ropivaca na. Part culas h788i: cumple con los requisitos para inyecciones. Esterilidad h71iCumple con los requisitos cuando se analiza segu n se indica en Filtracio n por Membrana en Prueba de Esterilidad del Producto a Examinar. pH h791i: entre 4,0 y 6,0. L mite de 2,6-dimetilanilina (compuesto relacionado A de ropivaca na, base) Solucio n amortiguadora de pH 8,0 y Fase mo vilPreparar segu n se indica en la Valoracio n. Solucio n esta ndarPreparar segu n se indica en la Preparacio n esta ndar en la Valoracio n. Solucio n de pruebaDiluir exactamente la Inyeccio n con Fase mo vil para obtener una concentracio n de 2,0 mg por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 240 nm y una columna de 3,9 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,5 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado A de ropivaca na y ropivaca na no es menor de 5; y la relacio n sen al-ruido para el compuesto relacionado A de ropivaca na no es menor de 10. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos. La respuesta del pico del compuesto relacionado A de ropivaca na obtenido a partir de la Solucio n de prueba no es mayor que la respuesta correspondiente obtenida a partir de la Solucio n esta ndar (no se encuentra ma s de 0,01% del compuesto relacionado A de ropivaca na base).
Tabla 1. Tiempo de Retencio n Relativo Aproximado (RRT) de Impurezas Conocidas Relacionadas Identidad de impureza A+B C D E F G H I J+K L M N O P Q R S T U Nombre comu n Mezcla de a cido 2,4-Wing y monoacil valina Monoacilacetamida 5-Wing diacilo Impureza de oxidacio n Producto de hidro lisis a cida Hidropero xido de Ritonavir Subproducto a cido/base Ana logo de etilo Mezcla de Boc-monoacil y monoacil isobutil carbamato Producto base por ciclado ster 2,4-Wing isobut E lico Regioiso mero Iso mero #2 Dimonoacil urea Iso mero #4 Iso mero #1 Dimonoacil valina urea 2,4-Wing diacilo Impureza de triacilo Factor de respuesta 1,37 0,73 0,76 0,74 0,53 0,73 RRT 0,07 0,15 0,24 0,36 0,39 0,45 0,47 0,64 0,81 0,87 0,94 1,05 1,11 1,14 1,23 1,32 1,62 2,87 3,20
Monograf as Ociales / Sodio
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Pureza enantiome rica Solucio n amortiguadora de pH 7,2Transferir 7,5 mL de solucio n de fosfato monoba sico de sodio 1 M y 28,5 mL de solucio n de fosfato diba sico de sodio dihidrato 0,5 M a un matraz volume trico de 1 L y diluir a volumen con agua. Ajustar la solucio n resultante a un pH de 7,2 si fuera necesario. Fase mo vilTransferir 35 mL de alcohol isoprop lico a un matraz volume trico de 500 mL, diluir a volumen con Solucio n amortiguadora de pH 7,2, mezclar y desgasicar. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Solucio n de aptitud del sistemaDisolver en agua cantidades adecuadas de ER Clorhidrato de Ropivaca na USP y ER Compuesto Relacionado B de Ropivaca na USP, y diluir cuantitativamente, y en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n que contenga aproximadamente 75 mg por mL y 0,75 mg por mL, respectivamente. Solucio n de pruebaDiluir la Inyeccio n con Fase mo vil a una concentracio n de aproximadamente 75 mg por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 220 nm y una columna de 4 mm 6 10 cm rellena con material L41. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado B de ropivaca na (enantio mero R) y ropivaca na (enantio mero S) no es menor de 1,5. [NOTAA efectos de la identicacio n, los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,75 para el compuesto relacionado B de ropivaca na y 1,0 para ropivaca na.] ProcedimientoInyectar en el cromato grafo aproximadamente 20 mL de la Solucio n de prueba, registrar el cromatograma y medir las respuestas de los picos. Calcular el porcentaje de compuesto relacionado B de ropivaca na (enantio mero R) en la porcio n de Inyeccio n tomada, por la fo rmula: 100(ri / rs) en donde ri es la respuesta del pico del compuesto relacionado B de ropivaca na (enantio mero R); y rs es la suma de las respuestas de los picos de ropivaca na (enantio mero S) y del compuesto relacionado B de ropivaca na (enantio mero R) obtenidos a partir de la Solucio n de prueba: no se encuentra ma s de 2,0% de compuesto relacionado B de ropivaca na (enantio mero R). Otros requisitosCumple con los requisitos en Inyectables h1i. Valoracio n Solucio n amortiguadora de pH 8,0Transferir 1,3 mL de solucio n de fosfato monoba sico de sodio 1 M y 32,5 mL de solucio n de fosfato diba sico de sodio dihidrato 0,5 M a un matraz volume trico de 1 L. Diluir a volumen con agua y mezclar. Ajustar la solucio n resultante a un pH de 8,0 si fuera necesario. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de acetonitrilo y Solucio n amortiguadora de pH 8,0 (60 : 40). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver cantidades, pesadas con exactitud, de ER Clorhidrato de Ropivaca na USP y ER Compuesto Relacionado A de Ropivaca na USP en Fase mo vil y diluir cuantitativamente, y en diluciones sucesivas, con Fase mo vil para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 0,25 mg por mL de ER Clorhidrato de Ropivaca na USP y aproximadamente 0,26 mg por mL de ER Compuesto Relacionado A de Ropivaca na USP. Preparacio n de valoracio nDiluir exactamente la Inyeccio n con Fase mo vil para obtener una concentracio n de aproximadamente 0,25 mg por mL. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 240 nm y una columna de 3,9 mm 6 15 cm rellena con material L1 de 5 o 10 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,2 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas, calculada para el pico de ropivaca na, no es ma s de 1,0%; y la resolucio n, R, entre el compuesto relacionado A de ropivaca na y ropivaca na no es menor de 5.
ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de clorhidrato de ropivaca na (C17H26N2O HCl) en cada mL de Inyeccio n tomado, por la fo rmula: CD(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Ropivaca na USP en la Preparacio n esta ndar; D es el factor de dilucio n, en mL, de la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
Saquinavir, Ca psulas
Cambio en la redaccio n: Disolucio n h711i Solucio n amortiguadora de citrato&Transferir 5,82 g de fosfato diba sico de sodio anhidro y 16,7 g de a cido c trico monohidrato a un matraz volume trico de 1 L. Disolver y diluir a volumen con agua.&1S (USP30) Medio: Solucio n amortiguadora de citrato; 900 mL. Aparato 2: 50 rpm. Tiempo: 45 minutos. ProcedimientoDeterminar la cantidad disuelta de C38H50N6O5 empleando absorcio n UV a la longitud de onda de ma xima absorbancia, aproximadamente a 240 nm, en porciones ltradas de la solucio n en ana lisis, diluidas apropiadamente con Medio, en comparacio n con una Solucio n esta ndar con una concentracio n conocida de ER Mesilato de Saquinavir USP en el mismo Medio. ToleranciasNo menos de 75% (Q) de la cantidad declarada de C38H50N6O5 se disuelve en 45 minutos.
cido Fosfo de Sodio y A rico, Solucio n To pica

&Fluoruro
Fosfo rico contiene no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de io n uoruro.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables de pla stico. EtiquetadoEtiquetar la Solucio n To pica en te rminos del contenido de uoruro de sodio (NaF) y en te rminos del contenido de io n uoruro. Esta ndares de referencia USP h11iER Fluoruro de Sodio USP. pH h791iUtilizando 40 mL de Solucio n To pica, proceder segu n se cido Fosfo indica en la prueba de pH en Fluoruro de Sodio y A rico, Gel: el pH esta entre 3,0 y 4,5. Otros requisitosResponde a las pruebas de Identicacio n en cido Fosfo Fluoruro de Sodio y A rico, Gel.
cido La Solucio n To pica de Fluoruro de Sodio y A
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Sodio / Monograf as Ociales
Valoracio n[NOTAAlmacenar todas las soluciones, salvo la Solucio n amortiguadora, en envases de pla stico.] Solucio n amortiguadora y Preparaciones esta ndarPreparar segu n se indica en la Valoracio n en Fluoruro de Sodio, Solucio n Oral. Preparacio n de valoracio nTransferir a un matraz volume trico de 1000 mL un volumen de Solucio n To pica medido con exactitud, que equivalga aproximadamente a 20 mg de io n uoruro, agregar agua para disolver, diluir a volumen con agua y mezclar. ProcedimientoProceder segu n se indica en el Procedimiento de la Valoracio n en Fluoruro de Sodio, Solucio n Oral. Calcular la cantidad, en mg, de io n uoruro en cada mL de la Solucio n To pica tomada, por la fo rmula: C/V en donde C es la concentracio n determinada de io n uoruro, en mg por mL, en la Preparacio n de valoracio n y V es el volumen tomado, en mL, de la Solucio n To pica.&1S (USP30)
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables. EtiquetadoEtiquetar las Tabletas Masticables indicando que se deben masticar antes de tragar. Esta ndares de referencia USP h11iER Tiabendazol USP. Identicacio n A: Triturar una cantidad de Tabletas Masticables pulverizadas, que equivalga aproximadamente a 0,5 g de tiabendazol, con aproximadamente 20 mL de agua y ltrar. Lavar el residuo con 20 mL de agua, desechar el lavado, disolver el residuo en 30 mL de a cido clorh drico 0,1 N y ltrar. Recoger el ltrado en un separador, alcalinizarlo con hidro xido de sodio 1 N y extraer con 10 mL de disulfuro de carbono. Pasar la capa de disulfuro de carbono a trave s de un ltro seco, recogiendo el ltrado en una ca psula de evaporacio n. Evaporar el disolvente con calor moderado y una corriente de nitro geno. [Precaucio nNo sobrecalentar el residuo.] El residuo as obtenido cumple con los requisitos a la prueba de Identicacio n A en Tiabendazol. B: El tiempo de retencio n del pico principal del cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar segu n se obtienen en la Valoracio n. Uniformidad de unidades de dosicacio n h905i: cumplen con los requisitos. PROCEDIMIENTO PARA UNIFORMIDAD DE CONTENIDO Preparacio n esta ndarDisolver en a cido clorh drico 0,1 N una cantidad pesada con exactitud de ER Tiabendazol USP, y diluir cuantitativamente en diluciones sucesivas con a cido clorh drico 0,1 N, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 5 mg por mL. Preparacio n de pruebaTransferir 1 Tableta Masticable a un matraz volume trico de 1000 mL, agregar aproximadamente 75 mL de a cido clorh drico 0,1 N y calentar en un ban o de vapor durante aproximadamente 1 hora. Enfriar a temperatura ambiente, diluir a volumen con a cido clorh drico 0,1 N, mezclar y ltrar una porcio n de la solucio n, desechando los primeros 20 mL del ltrado. Pipetear 5 mL del ltrado y transferir a un matraz volume trico de 500 mL, diluir a volumen con a cido clorh drico 0,1 N y mezclar. ProcedimientoDeterminar concomitantemente las absorbancias de la Preparacio n esta ndar y la Preparacio n de prueba a la longitud de onda de ma xima absorcio n, aproximadamente a 302 nm, con un espectrofoto metro adecuado, usando a cido clorh drico 0,1 N como blanco. Calcular la cantidad, en mg, de C10H7N3S en la Tableta Masticable tomada, por la fo rmula: (TC / D)(AU / AS) en donde T es la cantidad declarada, en mg, de Tiabendazol en la Tableta Masticable; C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Tiabendazol USP en la Preparacio n esta ndar; D es la concentracio n, en mg por mL, de tiabendazol en la Preparacio n de prueba, basada en la cantidad declarada por Tableta Masticable y el grado de dilucio n; y AU y AS son las absorbancias de la Preparacio n de prueba y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. Valoracio n Preparacio n esta ndar y Sistema cromatogra coPreparar segu n se indica en Valoracio n en Tiabendazol, Suspensio n Oral. Solucio n amortiguadora de fosfato de pH 3,5Disolver 13,8 g de fosfato monoba sico de sodio en agua para obtener 2000 mL de solucio n. Ajustar esta solucio n con a cido fosfo rico a un pH de 3,5 + 0,05. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Solucio n amortiguadora de fosfato pH 3,5 y metanol (54 : 46). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas Masticables. Transferir a un matraz volume trico de 1000 mL una porcio n del polvo, pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 200 mg de tiabendazol, agregar 100 mL de a cido clorh drico 0,1 N, mezclar y entibiar la solucio n durante al menos 30 minutos. Dejar que se enfr e a temperatura ambiente, diluir a volumen con agua, mezclar y ltrar, desechando los primeros 20 mL del ltrado.
Salicilato de Sodio, Tabletas
Cambio en la redaccio n: Disolucio n h711i Medio: agua; 900 mL. Aparato 1: 100 rpm. Tiempo: 45 minutos. ProcedimientoDeterminar la cantidad de C7H5NaO3 disuelta a partir de las absorbancias UV a la longitud de onda de ma xima absorbancia, aproximadamente a &230 nm,&1S (USP30) usando porciones ltradas de la solucio n en ana lisis, diluidas con agua, si fuera necesario, en comparacio n con una Solucio n esta ndar con una concentracio n conocida de ER Salicilato de Sodio USP en el mismo Medio. ToleranciasNo menos de 75% (Q) de la cantidad declarada de C7H5NaO3 se disuelve en 45 minutos.
Tiabendazol, Tabletas
(T tulo vigenteno cambiara hasta el 18 de febrero de 2010) Cambio de t tulo de la monograf asera ocial a partir del 18 de febrero de 2010 Ver Tiabendazol, Tabletas Masticables
&Tiabendazol,
Tabletas Masticables
(La Monograf a con este nuevo t tulo:sera ocial a partir del 18 de febrero de 2010) (El t tulo actual de la monograf a es Tiabendazol, Tabletas)
Las Tabletas Masticables de Tiabendazol contienen no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de tiabendazol (C10H7N3S).
Monograf as Ociales / Topiramato
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ProcedimientoProceder segu n se indica en Procedimiento en Valoracio n en Tiabendazol, Suspensio n Oral. Calcular la cantidad, en mg, de tiabendazol (C10H7N3S) en la porcio n de Tabletas Masticables tomada, por la fo rmula: 1000C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Tiabendazol USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente. (Ocial a partir del 18 de febrero de 2010)&1S (USP30)
Solucio n madre de a cido sulfa micoTransferir aproximadamente 60 mg, pesados con exactitud, de a cido sulfa mico a un matraz volume trico de 100 mL. Disolver y diluir a volumen con Diluyente. Solucio n madre de sulfatoTransferir aproximadamente 90,7 mg, pesados con exactitud, de sulfato de potasio a un matraz volume trico de 100 mL. Disolver y diluir a volumen con Diluyente. Solucio n esta ndarTransferir 3,0 mL de Solucio n madre de a cido sulfa mico y de Solucio n madre de sulfato a un matraz volume trico de 50 mL, diluir a volumen con Diluyente y mezclar. Solucio n de pruebaTransferir aproximadamente 100 mg de Topiramato, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 10 mL. Disolver y diluir a volumen con Agua de Alta Pureza. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector de conductividad, una guarda columna de 4,0 mm 6 5 cm rellena con material L46 y una columna de 4,0 mm 6 25 cm rellena con material L46. La velocidad de ujo es de aproximadamente 2,0 mL por minuto. Programar el cromato grafo del siguiente modo. Tiempo (minutos) 0 07,0 7,015,0 15,020,0 20,020,1 20,125,0 Solucio n A (%) 0 0 0?20 20 20?0 0 Solucio n B Solucio n C (%) (%) Elucio n 95 5 equilibrio 95 5 isocra tica 95?0 5?80 gradiente lineal 0 80 isocra tica 0?95 80?5 gradiente lineal 95 5 reequilibrio
&Topiramato
C12H21NO8S 339,36 b-D-Fructopyranose, 2,3 : 4,5-bis-O-(1-methylethylidene)-, sulfamate. Sulfamato de 2,3 : 4,5-di-O-isopropiliden-b-D-fructopiranosa [97240-79-4].
El Topiramato contiene no menos de 98,0 por ciento y no ma s de 102,0 por ciento de C12H21NO8S, calculado con respecto a la sustancia anhidra.
Envasado y almacenamientoConservar en envases impermeables, resistentes a la luz y almacenar a temperatura ambiente controlada. Esta ndares de referencia USP h11iER Topiramato USP. ER Compuesto Relacionado A de Topiramato USP. Identicacio n A: Absorcio n en el Infrarrojo h197Ki. B: El tiempo de retencio n del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. Rotacio n espec ca h781Si: entre 298 y 358, medida a 208. Solucio n de prueba: 4 mg por mL, en metanol. Agua, Me todo I h921i: no ma s de 0,5%. Residuo de incineracio n h281i: no ma s de 0,2%. L mite de sulfamato y sulfato DiluyentePreparar una mezcla de agua de alta pureza y acetonitrilo (80 : 20). Solucio n ATransferir aproximadamente 4 g de hidro xido de sodio a un matraz volume trico de 1000 mL. Disolver y diluir a volumen con Agua de Alta Pureza (ver Reactivos en Resistencia Qu micaEnvases de Vidrio en Envases h661i), ltrar y desgasicar. Solucio n BUsar Agua de Alta Pureza ltrada y desgasicada. Solucio n CDiluir 50 mL de Solucio n A hasta 100 mL con Agua de Alta Pureza, ltrar y desgasicar. Fase mo vilUsar mezclas variables de Solucio n A, Solucio n B y Solucio n C segu n se indica en el Sistema cromatogra co. Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i).
Inyectar en el cromato grafo la Solucio n esta ndar y registrar las a reas de los picos segu n se indica en el Procedimiento: el tiempo de retencio n relativo es 1,0 para el pico de sulfato y aproximadamente 0,27 para el pico de sulfamato; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0% para los picos de sulfato y sulfamato. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos de sulfato y sulfamato. Calcular el porcentaje de sulfato y sulfamato en la porcio n de Topiramato tomada, por la fo rmula: 1000F(C/W)(ri / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de sulfato de potasio o a cido sulfa mico en la Solucio n esta ndar; F es el factor de correccio n y es igual a 0,551 para sulfato y 0,989 para sulfamato; W reas de los es el peso, en mg, de Topiramato tomado; y ri y rS son las a picos de los iones sulfato o sulfamato obtenidas a partir de la Solucio n de prueba y la Solucio n esta ndar, respectivamente: no se encuentra ma s de 0,10% de io n sulfato; y no se encuentra ma s de 0,10% de io n sulfamato. Valoracio n Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de acetonitrilo y agua (1 : 1). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i). Preparacio n esta ndarDisolver en Fase mo vil una cantidad de ER Topiramato USP, pesada con exactitud, y diluir cuantitativamente con Fase mo vil, y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 2,0 mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 50 mg de Topiramato, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de 25 mL, disolver y diluir a volumen con Fase mo vil. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector de ndice de refraccio n y una columna de 4,6 mm 6 25 cm rellena con material L1 de 5 mm. La velocidad de ujo es de aproximadamente 0,6 mL por minuto. Mantener la temperatura del detector y de la columna a 508. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la eciencia de la columna no es menos de 1500 platos teo ricos; el factor de asimetr a no es mayor de 2,0; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y
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Triclosa n / Monograf as Ociales
medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de C12H21NO8S en la porcio n de Topiramato tomada, por la fo rmula: 25C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Topiramato reas de los picos USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las a obtenidas a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.&1S (USP30)
calculadas con respecto a la sustancia seca, y no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la potencia declarada. NOTADeterminar la aptitud de los sustratos y vericar el ajuste del espectrofoto metro llevando a cabo la Valoracio n con el Esta ndar de Referencia de Tripsina Cristalizada USP.
Triclosa n
Cambio en la redaccio n: Valoracio n Preparacio n esta ndarDisolver en &acetato de etilo&1S (USP30) una cantidad, pesada con exactitud, de ER Triclosa n USP y diluir cuantitativamente con &acetato de etilo&1S (USP30), y si fuera necesario en diluciones sucesivas, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente &0,4&1S (USP30) mg por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir aproximadamente 40 mg de Triclosa n, pesados con exactitud, a un matraz volume trico de & 100 mL&1S (USP30), disolver y diluir a volumen con &acetato de etilo&1S (USP30), y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de gases con un detector de ionizacio n a la llama y una columna capilar de 0,53 mm 6 15 m con fase G3. El gas transportador es helio mantenido aproximadamente a 6 psi. La temperatura del inyector se mantiene a 348 y se aumenta ra pidamente a 2008 inmediatamente despue s de la inyeccio n, la temperatura de la columna se mantiene a 348 y la temperatura del detector se mantiene a 2608. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente &2,0&1S (USP30) mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, incrementar la temperatura de la columna a razo n de 208 por minuto hasta alcanzar 1408, luego incrementar la temperatura de la columna a razo n de 48 por minuto hasta alcanzar 2408, mantener esta temperatura durante no menos de 5 minutos, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de C12H7Cl3O2 en la porcio n de Triclosa n tomada, por la fo rmula:
&
&A cido
Valproico, Inyeccio n
(T tulo para esta nueva monograf asera ocial a partir del 18 de octubre de 2008)
cido Valproico es una solucio La Inyeccio n de A n acuosa e steril de valproato so dico, formada por la cido Valproico e Hidro interaccio n de A xido de Sodio, en Agua para Inyeccio n, y uno o ma s amortiguadores o agentes secuestrantes adecuados. Contiene no menos de 90,0 por ciento y no ma s de 110,0 por ciento de la cantidad declarada de a cido valproico (C8H16O2). No contiene agentes antimicrobianos.
Envasado y almacenamientoConservar en Envases para Inyecciones monodosis segu n se describe en Inyectables h1i, preferentemente de vidrio de Tipo I. Almacenar a temperatura ambiente controlada, excursiones permitidas entre 158 y 308. EtiquetadoEtiquetar indicando el nombre y la cantidad de cualquier amortiguardor o agente secuestrante usado. Esta ndares de referencia USP h11iER Endotoxina USP. ER cido Valproico USP. A Identicacio n A: El tiempo de retencio n relativo del pico principal en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. B: Cumple con los requisitos de las pruebas para Sodio h191i. Endotoxinas bacterianas h85iNo contiene ma s de 23 Unidades USP de Endotoxinas por mL de Inyeccio n. Esterilidad h71iCumple con los requisitos cuando se realiza la prueba segu n se indica en Filtracio n por Membrana en Prueba de Esterilidad del Producto a Examinar. pH h791i: entre 7,0 y 9,0. Part culas h788iCumple con los requisitos para inyecciones de pequen o volumen. Otro requisitosCumple con los requisitos en Inyectables h1i. Valoracio n Solucio n de esta ndar internoDisolver una cantidad de bifenilo en cloruro de metileno para obtener una solucio n que contenga 5 mg por mL. Preparacio n madre del esta ndarPreparar una solucio n de ER cido Valproico USP en Solucio A n de esta ndar interno con una concentracio n de aproximadamente 8 mg por mL. Preparacio n esta ndarTransferir 5,0 mL de la Preparacio n madre del esta ndar a un matraz volume trico de 50 mL y diluir a volumen con cloruro de metileno. Preparacio n de valoracio nTransferir un volumen, medido con exactitud, de Inyeccio n equivalente a 400 mg de a cido valproico a un recipiente adecuado; agregar aproximadamente 20 mL de a cido
100C(rU / rS)&1S
(USP30)
en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Triclosa n USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
Tripsina Cristalizada
La Tripsina Cristalizada es una enzima proteol tica
cristalizada proveniente de un extracto del &pa ncreas de animales sanos, bovinos, porcinos o ambos.&1S (USP30) Cuando se valora segu n se indica aqu , contiene no menos de 2500 Unidades USP de Tripsina por mg,
Monograf as Ociales / Verapamilo
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clorh drico al 5% (v/v); agitar meca nicamente durante 2 minutos; agregar 50,0 mL de la Solucio n de esta ndar interno; y agitar meca nicamente durante 1 hora. Dejar que las capas se separen (aproximadamente 1 hora). La capa orga nica inferior permanece turbia y de vez en cuando se puede persistir una leve emulsio n. Si forma una emulsio n, deshacerla revolviendo con una varilla de vidrio. Pipetear 5 mL del extracto de la capa orga nica inferior y transferir a un matraz volume trico 50 mL, y diluir con cloruro de metileno. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar el cromato grafo de gases con un detector de ionizacio n a la llama y una columna de vidrio de 2 mm 6 1,8 m rellena con fase G34 al 10% sobre soporte S1A de malla de 80 a 100. Mantener la temperatura de la columna aproximadamente a 1558, la temperatura del inyector aproximadamente a 2758 y la temperatura del detector aproximadamente a 3008. Utilizar helio seco como gas transportador a una velocidad de ujo de aproximadamente 20 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Preparacio n esta ndar segu n se indica en el Procedimiento: la resolucio n, R, entre los picos de a cido valproico y bifenilo no es menor de 3,0; y la desviacio n esta ndar relativa de los cocientes de a rea de los picos para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 2 mL) de la Preparacio n esta ndar y de la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las a reas de los picos de a cido valproico y de bifenilo. Calcular la cantidad, en mg, de a cido valproico en el volumen de Inyeccio n tomado, por la fo rmula: C(RU / RS) D cido en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER A Valproico USP en la Preparacio n esta ndar; RU y RS son los cocientes de a rea de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente; y D es el factor de dilucio n apropriado usado para preparar la Preparacio n de valoracio n.&1S (USP30)
ProcedimientoInyectar por separado en el sistema de infusio n volu menes iguales de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba (aproximadamente 10 mL). La velocidad de ujo del sistema de infusio n es de aproximadamente 0,3 mL por minuto. Obtener un espectro de masas optimizado despue s de la inyeccio n. Los espectros de masas de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba deben contener los picos con cocientes masa-carga de 1084 y 543.&1S (USP30)
Clorhidrato de Verapamilo, Inyeccio n
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11iER Endotoxina USP. ER Clorhidrato de Verapamilo USP. ER Compuesto Relacionado A de Verapamilo USP. &ER Compuesto Relacionado B de Verapamilo USP. ER Compuesto Relacionado E de Verapamilo USP. ER Compuesto Relacionado F de Verapamilo USP.&1S (USP30) Cambio en la redaccio n: Compuestos relacionados Mezcla de disolventes acuosa, Fase mo vil, Solucio n de aptitud del sistema y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica &en la Valoracio n.&1S (USP30) Solucio n esta ndarDisolver cantidades, pesadas con exactitud, de ER Clorhidrato de Verapamilo USP, ER Compuesto Relacionado A de Verapamilo USP, &ER Compuesto Relacionado E de Verapamilo USP y ER Compuesto Relacionado F de Verapamilo USP&1S (USP30) en Fase mo vil para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 2,5 mg por mL de ER Clorhidrato de Verapamilo USP y 0,0075 mg por mL de ER Compuesto Relacionado A de Verapamilo USP, de &ER Compuesto Relacionado E de Verapamilo USP y de ER Compuesto Relacionado F de Verapamilo USP&1S (USP30). Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba, y dejar que la Solucio n de prueba eluya durante no menos de cuatro veces el tiempo de retencio n de clorhidrato de verapamilo. Registrar los cromatogramas y medir las respuestas de todos los picos. Los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,4 para &compuesto relacionado F de verapamilo,&1S (USP30) 0,5 para compuesto relacionado A de verapamilo, 0,7 para &compuesto relacionado E de verapamilo,&1S (USP30) y 1,0 para verapamilo. Calcular la cantidad, en mg, de cada impureza individual en cada mL de la Inyeccio n tomado, por la fo rmula: C(L / D)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de &compuesto relacionado A de verapamilo, compuesto relacionado E de verapamilo o compuesto relacionado F de verapamilo&1S (USP30) en la Solucio n esta ndar &[NOTAPara calcular cualquier otra impureza no especicada, C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Verapamilo USP en la Solucio n Esta ndar.];&1S (USP30) L es la cantidad declarada, en mg por mL, de clorhidrato de verapamilo en la Inyeccio n; D es la concentracio n, en mg por mL, de clorhidrato de verapamilo en la Solucio n de prueba, basada en la cantidad declarada por cada mL y en el grado de dilucio n; y rU y rS son las respuestas de los picos de la impureza apropiada obtenidos a partir de la Solucio n de prueba y de la Solucio n esta ndar, respectivamente: no se encuentra ma s de 0,3% de cualquier impureza especicada y la suma de todas las impurezas no es ma s de 1,0%.
Vasopresina
Cambio en la redaccio n: Identicacio n A: El tiempo de retencio n del pico de vasopresina en el cromatograma de la Preparacio n de valoracio n se corresponde con el del cromatograma de la Preparacio n esta ndar, segu n se obtienen en la Valoracio n. & B: Ana lisis espectral de masas Solucio n de infusio nPreparar una mezcla de acetonitrilo, agua y a cido de triuoroace tico (80 : 20 : 0,08). Solucio n esta ndarDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Vasopresina USP en agua para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1 mg por mL. Solucio n de pruebaDisolver una cantidad, pesada con exactitud, de ER Vasopresina USP en agua para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1 mg por mL. [NOTA Las concentraciones nales de la Solucio n esta ndar y la Solucio n de prueba se pueden ajustar dependiendo de la sensibilidad del espectro metro de masas utilizado en las pruebas.] Sistema de espectro metro de masas (ver Espectrometr a de Masas h736i)Equipar un espectro metro LC/MS con un sistema de infusio n conectado a una interfase de electrospray. El espectro metro de masas se hace funcionar en el modo de iones postivos. [NOTASe puede ajustar la velocidad de ujo del sistema de infusio n si fuera necesario. Para ayudar en la nebulizacio n el sistema de infusio n puede contener un ujo de gas envolvente.]
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Verapamilo / Monograf as Ociales
Cambio en la redaccio n: Valoracio n & Mezcla de disolventes acuosaPreparar una solucio n de acetato de sodio 0,015 N que contenga aproximadamente 33 mL de a cido ace tico glacial por L. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Fase mo vil acuosa, acetonitrilo y 2-aminoheptano (70 : 30 : 0,5). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i).&1S (USP30) Preparacio n esta ndarDisolver &una cantidad pesada&1S (USP30) con exactitud de ER Clorhidrato de Verapamilo USP en Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 2,5 mg por mL. Preparacio n de valoracio nDiluir la Inyeccio n, si fuera necesario cuantitativamente, con Fase mo vil para obtener una solucio n con una concentracio n de no ma s de 2,5 mg de clorhidrato de verapamilo por mL. & Solucio n de aptitiud del sistemaDisolver cantidades adecuadas de ER Clorhidrato de Verapamilo USP y ER Compuesto Relacionado B de Verapamilo USP en Fase mo vil para otener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 1,9 mg por mL y 1,5 mg por mL, respectivamente. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 278 nm y una columna de 4,6 mm 6 12,5 a 15 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 0,9 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,88 para compuesto relacionado B de verapamilo y 1,0 para verapamilo; la resolucio n, R, entre los picos correspondientes a compuesto relacionado B de verapamilo y verapamilo no es menor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%.&1S (USP30) ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y la Preparacio n de valoracio n, y dejar que la Preparacio n de valoracio n eluya durante no menos de cuatro veces el tiempo de retencio n del verapamilo. Registrar los cromatogramas y medir las respuestas para todos los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de clorhidrato de verapamilo (C27H38N2O4 HCl), en cada mL de la Inyeccio n tomado, por la fo rmula: C(L / D)(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Verapamilo USP en la Preparacio n esta ndar; L es la cantidad declarada, en mg por mL, de clorhidrato de verapamilo en la Inyeccio n; D es la concentracio n, en mg por mL, de clorhidrato de verapamilo en la Preparacio n de valoracio n, basada en la cantidad declarada en cada mL y en el grado de dilucio n; y rU y rS son las respuestas correspondientes a los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
Cambio en la redaccio n: Compuestos relacionados Mezcla de disolventes acuosa, Fase mo vil, Solucio n de aptitud del sistema y Sistema cromatogra coProceder segu n se indica &en la Valoracio n.&1S (USP30) Solucio n esta ndarDisolver en Fase mo vil cantidades, pesadas con exactitud, de ER Clorhidrato de Verapamilo USP, ER Compuesto Relacionado A de Verapamilo USP, &ER Compuesto Relacionado E de Verapamilo USP y ER Compuesto Relacionado F de Verapamilo USP&1S (USP30) para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 1,6 mg de ER Clorhidrato de Verapamilo USP por mL y 0,0048 mg de ER Compuesto Relacionado A de Verapamilo USP, de &ER Compuesto Relacionado E de Verapamilo USP y de ER Compuesto Relacionado F de Verapamilo USP&1S (USP30) por mL. Solucio n de pruebaUsar la Preparacio n de valoracio n. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Solucio n esta ndar y de la Solucio n de prueba y dejar que la Solucio n de prueba eluya durante no menos de cuatro veces el tiempo de retencio n de verapamilo. Registrar los cromatogramas y medir las respuestas de todos los picos. [NOTALos tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,4 para el &compuesto relacionado F de verapamilo;&1S (USP30) 0,5 para el compuesto relacionado A de verapamilo; 0,7 para el &compuesto relacionado E de verapamilo&1S (USP30) y 1,0 para verapamilo.] Calcular la cantidad, en mg, de cada impureza individual en cada mL de la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 25C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, del &compuesto relacionado A de verapamilo, del compuesto relacionado E de verapamilo o del compuesto relacionado F de verapamilo&1S (USP30) en la Solucio n esta ndar &[NOTAPara calcular cualquier otra impureza no especicada, C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Verapamilo USP en la Solucio n Esta ndar.];&1S (USP30) y rU y rS son las respuestas de los picos de la impureza apropiada obtenidos a partir de la Solucio n de prueba, y la Solucio n esta ndar, respectivamente: no se encuentra ma s de 0,3% de cualquier impureza especicada y la suma de todas las impurezas no es ma s de 1,0%. Cambio en la redaccio n: Valoracio n & Mezcla de disolventes acuosaPreparar una solucio n de acetato de sodio 0,015 N que contenga aproximadamente 33 mL de a cido ace tico glacial por L. Fase mo vilPreparar una mezcla ltrada y desgasicada de Fase mo vil acuosa, acetonitrilo y 2-aminoheptano (70 : 30 : 0,5). Hacer ajustes si fuera necesario (ver Aptitud del Sistema en Cromatograf a h621i).&1S (USP30) Preparacio n esta ndarDisolver en Fase mo vil una cantidad, pesada con exactitud, de ER Clorhidrato de Verapamilo USP para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente 1,6 mg por mL. Preparacio n de valoracio nPesar y reducir a polvo no no menos de 20 Tabletas. Transferir a un tubo de centr fuga con tapo n una porcio n del polvo, pesada con exactitud, que equivalga aproximadamente a 40 mg de clorhidrato de verapamilo y agregar 25 mL de Fase mo vil. Agitar meca nicamente durante 15 minutos, centrifugar y, si fuera necesario, ltrar el sobrenadante. & Solucio n de aptitud del sistemaDisolver cantidades adecuadas de ER Clorhidrato de Verapamilo USP y ER Compuesto Relacionado B de Verapamilo USP en Fase mo vil para obtener una solucio n con concentraciones conocidas de aproximadamente 1,9 mg por mL y 1,5 mg por mL, respectivamente. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector a 278 nm y una columna de 4,6 mm 6 12,5 a 15 cm rellena con material L1. La velocidad de ujo es de aproximadamente 0,9 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de
Clorhidrato de Verapamilo, Tabletas
Cambio en la redaccio n: Esta ndares de referencia USP h11iER Clorhidrato de Verapamilo USP. ER Compuesto Relacionado A de Verapamilo USP. &ER Compuesto Relacionado B de Verapamilo USP. ER Compuesto Relacionado E de Verapamilo USP. ER Compuesto Relacionado F de Verapamilo USP.&1S (USP30)
Monograf as Ociales / Vinorelbina
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retencio n relativos son aproximadamente 0,88 para el compuesto relacionado B de verapamilo y 1,0 para verapamilo; la resolucio n, R, entre los picos del compuesto relacionado B de verapamilo y verapamilo no es menor de 1,5; y la desviacio n esta ndar relativa para inyecciones repetidas no es ma s de 2,0%.&1S (USP30) ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 10 mL) de la Preparacio n esta ndar y la Preparacio n de valoracio n y dejar que la Preparacio n de valoracio n eluya durante no menos de cuatro veces el tiempo de retencio n de verapamilo. Registrar los cromatogramas y medir las respuestas de todos los picos principales. Calcular la cantidad, en mg, de clorhidrato de verapamilo (C27H38N2O4 HCl) en la porcio n de Tabletas tomada, por la fo rmula: 25C(rU / rS) en donde C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Clorhidrato de Verapamilo USP en la Preparacio n esta ndar; y rU y rS son las respuestas de los picos obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y de la Preparacio n esta ndar, respectivamente.
Cambio en la redaccio n: Valoracio n Solucio n amortiguadora de fosfato, Fase mo vil y Solucio n de aptitud del sistemaProceder segu n se indica en la prueba de Compuestos relacionados en Tartrato de Vinorelbina. Preparacio n esta ndarDisolver en agua una cantidad de ER Tartrato de Vinorelbina USP, pesada con exactitud, para obtener una solucio n con una concentracio n conocida de aproximadamente .0,14 mg.5 de vinorelbina por mL. Preparacio n de valoracio nTransferir a un matraz volume trico de 100 mL un volumen de Inyeccio n, medido con exactitud, que equivalga aproximadamente a 10 mg de vinorelbina, diluir a volumen con agua y mezclar. Sistema cromatogra co (ver Cromatograf a h621i)Equipar un cromato grafo de l quidos con un detector de arreglo de diodos y una columna de 3,9 mm 6 15 cm rellena con material L1. Mantener la temperatura de la columna a 408. La velocidad de ujo es de aproximadamente 1,0 mL por minuto. Inyectar en el cromato grafo la Solucio n de aptitud del sistema y registrar el cromatograma segu n se indica en el Procedimiento: los tiempos de retencio n relativos son aproximadamente 0,8 para el producto de la fotodegradacio n, 1,0 para la vinorelbina y aproximadamente 1,2 para el compuesto relacionado A de vinorelbina; y la retencio n relativa, a, entre el tartrato de vinorelbina y el compuesto relacionado A de vinorelbina no es menor de 1,1. ProcedimientoInyectar por separado en el cromato grafo volu menes iguales (aproximadamente 20 mL) de la Preparacio n esta ndar y la Preparacio n de valoracio n, registrar los cromatogramas y medir las respuestas de los picos de vinorelbina con un detector de arreglo de diodos. Calcular la cantidad, en mg, de vinorelbina (C45H54N4O8) en cada mL de la Inyeccio n tomada, por la fo rmula:
.(778,93/1079,11)C(L/D)(r
U
Vinorelbina, Inyeccio n
La Inyeccio n de Vinorelbina es una solucio n este ril de Tartrato de Vinorelbina en Agua para Inyeccio n. Contiene no menos de .90,0.5 por ciento y no ma s de . 110,0 . 5 por ciento de la cantidad declarada de vinorelbina (C45H54N4O8). Precaucio nManipular la Inyeccio n de Vinorelbina con sumo cuidado ya que es un potente agente citoto xico.
/ rS)
en donde 778,93 y 1079,11 son los pesos moleculares de vinorelbina y tartrato de vinorelbina, respectivamente;.5 C es la concentracio n, en mg por mL, de ER Tartrato de Vinorelbina USP en la Preparacio n esta ndar; L es la cantidad declarada, en mg, de vinorelbina en cada mL de la Inyeccio n tomada; D es la concentracio n, en mg por mL, de vinorelbina en la Preparacio n de valoracio n; y rU y rS son las respuestas de los picos a 267 nm obtenidos a partir de la Preparacio n de valoracio n y la Preparacio n esta ndar, respectivamente.

USP30 NF25 Spanish Suplemento 1

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USP30 NF25 Spanish Suplemento 1

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Primer Suplemento, USPNF

.... .... .... ... .... ....

3817 3817 3817 3818 3818 3821

Cap tulos Generales

3838 3838 3908 3908 3908 3927

Reactivos, Indicadores y Soluciones . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

.......... .......... .......... y del NF . . .

4051 4051 4052 4052

Suplementos Diete ticos

Primer Suplemento, USPNF

Excipientes USP y NF, Agrupados por Categor a

Monograf as, USP 30

Monograf as Ociales de USP 30

Primer Suplemento, USPNF

Consejo de Expertos (20052010)

Junta Directiva (20052010)

Primer Suplemento, USPNF

Lynn C. Yeoman, Ph.D. Houston, TX, EE.UU.

Comite Ejecutivo del Consejo de Expertos (20052010)

Comite s de Expertos (20052010)

Primer Suplemento, USPNF

Primer Suplemento, USPNF

Comite s de Expertos en Informacio n (20052010)

Primer Suplemento, USPNF

Paneles Asesores Ad Hoc (20052010)

Primer Suplemento, USPNF

Primer Suplemento, USPNF

TICOS SUPLEMENTOS DIETE Metilsulfonilmetano Metilsulfonilmetano, Tabletas

Primer Suplemento, USPNF

Topiramato cido Valproico, Inyeccio A n

Cambios en T tulos Ociales que Aparecen en Este Suplemento

Primer Suplemento, USPNF

Cap tulos Generales Pruebas y Valoraciones Generales

MICAS PRUEBAS Y VALORACIONES QUI OTRAS PRUEBAS Y VALORACIONES

Reactivos, Indicadores y Soluciones

Primer Suplemento, USPNF

Primer Suplemento, USPNF

Primer Suplemento, USPNF

TRICAS SOLUCIONES VOLUME

Primer Suplemento, USPNF

N Y SOLUBILIDAD RELATIVA DE ARTI CULOS DESCRIPCIO DE LA USP Y DEL NF

Monograf as (USP 30)

Monograf as (Suplementos Diete ticos)

Monograf as (NF 25)

Primer Suplemento, USPNF

Primer Suplemento, USPNF

Primer Suplemento, USPNF

Primer Suplemento de USP 30 y de NF 25

Fecha Ocial 18 de octubre de 2007 18 de diciembre de 2007

Primer Suplemento, USPNF

Primer Suplemento, USPNF

Primer Suplemento, USPNF

1053 1766 2234 2986

USP 30 USP 30 USP 30 USP 30

Seccio n Prueba de identicacio n por cromatograf a en capa delgada h201i

Primer Suplemento, USPNF

T tulo Ranitidina, Inyeccio n

Seccio n Pureza cromatogra ca

Primer Suplemento, USPNF

T tulo Ranitidina, Solucio n Oral

Seccio n Pureza cromatogra ca

Ranitidina y Cloruro de Pureza cromatogra ca Sodio, Inyeccio n

h1i Inyectables / Requisitos Generales

Primer Suplemento, USPNF