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SPARATION DES COLORANTS PAR CHROMATOGRAPHIE

Objectif : -

raliser une chromatographie sur couche mince. extraire et sparer des colorants d'une substance naturelle ou artificielle. 1 cuve chromatographie, 1 matriel de filtration, 1 mortier + pilon, des capillaires, du sable, de l'actone, diffrents luants.

Matriel : 1 prouvette gradue munie d'un bouchon, des feuilles d'pinards ou d'orties, des encres de diffrentes couleurs, 1 plaque chromatographie, 1 prouvette gradue de 25 mL, I- LA CHROMATOGRAPHIE : PRINCIPE

Initialement applique aux substances colores, la chromatographie regroupe toutes les mthodes de sparation des constituants d'un mlange en phase liquide ou gazeuse lors du cheminement sur un support fixe. Les constituants du mlange sont entrans par une phase mobile appele luant. La chromatographie est base sur la diffrence de solubilit d'une substance dans deux solvants non miscibles : la phase stationnaire, lie au support, et la phase mobile, l'luant. Plus une substance est soluble dans la phase mobile, plus elle sera entrane par cette phase. Inversement, une substance peu soluble dans la phase mobile migrera peu. Dans la chromatographie sur couche mince (CCM), la phase stationnaire est constitue d'un gel de silice sur une plaque d'aluminium. La plaque sert de support la phase mobile qui se dplace en entranant les constituants du mlange analyser. Le solvant utilis ne doit pas ragir avec les constituants du mlange tudier. II- SPARATION DES COLORANTS 1- Sparation de colorants naturels
bouchon de lige crochet mtallique prouvette pied goutte de broyt d'pinards luant

Broyez trs finement des feuilles fraches d'pinards ou d'orties dans un mortier. Ajoutez 10 mL d'actone, du sable. Mlangez le tout et filtrez. Dans une prouvette gradue, introduisez 10 mL de solvant prpar (ther de ptrole). Dcoupez une bande troite de papier chromatographie (papier Whatmann) entrant dans l'prouvette pied sans toucher les bords. Tracez au crayon un trait 2 cm du bas du papier. Dposez sur ce trait une goutte de filtrat vert l'aide d'un capillaire. Laissez scher. Dposez de nouveau une goutte et laissez scher.

A l'aide d'un fil de fer, suspendez le papier dans l'prouvette de faon ce que le papier trempe dans le solvant sans que la tache soit immerge et couvrez avec le cache en papier. Laissez voluer jusqu' ce que le solvant arrive 1 cm du sommet. Retirez le papier et laissez scher. Notez vos observations et concluez. 2- Sparation des constituants d'encres Sur une plaque chromatographie, tracez au crayon un trait lger 1 cm du bas et reprez-y 5 points rgulirement repartis. En chacun des points, faites des taches de 2 mm de diamtre environ d'encres de diffrents stylos l'aide d'un capillaire (rouge, bleu effaable, vert, noir et un mlange). Dans une prouvette gradue de 25 mL, introduisez 10 mL de butan-1-ol, 2 mL d'thanol et 4 mL d'ammoniac 1 mol.L-1 (mlange prt au bureau ). Versez cette solution dans la cuve (la hauteur du liquide doit tre au maximum de 1 cm). Placez la plaque dans la cuve en veillant ce qu'il ne touche pas les parois. Refermez et laissez voluer jusqu' ce que le solvant arrive 0,5 cm du sommet. Pour chacune des encres utilises, dterminez les colorants qui la constituent.

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