Crystal tabung 1,5 mL dibuka dengan antikoagulan tabung dan disentrifugasi pada 800 x g untuk 10 min.

Serum Plasma dikumpulkan dan diadakan di 4 C; glukosa, laktat dan kolesterol total, diukur menggunakan ATAC 8000 Equipment Inc. Di samping itu, 50 L sub-sample dipisahkan dari awal untuk beredar penentuan count (THC) hemocyte. 2,4. Parameter stres evaluasi untuk mengevaluasi stres udang kemampuan respons yang diakuisisi di seluruh makan, 60 mg/L ammonia adalah yang ditambahkan untuk masing-masing dari 120 L tank pada akhir persidangan. Air laut yang telah dipertahankan pada 35 ppt ( bagian per seribu ) dan 28 C dan dievaluasi kelangsungan hidup ialah selama 24 jam . Uji oksigen dijalankan dengan metode statis menggunakan air laut yang berada di 35 ppt dan 28 C, stabil di 6.70 / mg l o2. Dua belas udang ( 12 0,16 g ) dari satu sama pengobatan yang ditempatkan dalam 38 l aquaria oleh triplicate dan oksigen adalah tidak dilengkapi selama 24 jam. Oksigen LD50 kelangsungan hidup persentase rate ini dievaluasi dan final yang dilaporkan untuk kelangsungan hidup ialah setiap treatment. 2.5. Statistik analisis unit eksperimental (tanki dan akuarium) didistribusikan dengan metode acak. Data kuantitatif diperiksa untuk normalitas dan homoscedasticity. Data yang dianalisis dengan menggunakan satu arah analisis varians (ANOVA), untuk mencari untuk signifikan (p < 0.05) berarti perbedaan antara pengobatan [24]. Duncans and Tukeys beberapa perbandingan berarti dilakukan dengan program Statistica V6. 3. Hasil 3.1. Analisis pakan fungsional Komposisi proksimal MBS-Cho basal (B) dan FM komersial feed (C) digunakan dalam pekerjaan ini ditunjukkan dalam tabel 1. Persentase protein hampir mencapai 10% perbedaan antara kedua feed, mengandung lebih tinggi tingkat fishmeal diet (36.39%) daripada feed basal (27.41%). Selain itu, sangat penting untuk menunjukkan bahwa sumber basal feed protein adalah MBS. Namun, konsentrasi karbohidrat adalah lebih tinggi di basal feed (49,50%) daripada di tepung ikan formulasi (38.40%), melebihi tingkat yang disarankan untuk udang feed [25]. Tabel 1. Komposisi proksimal Diet basal dan komersial.

Bakteri ditambah pada konsentrasi sama untuk pengobatan 1 (B. subtilis) dan pengobatan 2 (B. megaterium) (P > 0.05), yang mengandung kedua formulasi sekitar 1.2 104 CFU/g. Setelah setahun, feed tidak menunjukkan setiap variasi dalam konsentrasi bakteri dan kelangsungan hidup. B. subtilis ketegangan pulih dari B + Bs feed dan DAPI noda sel metodologi diselesaikan untuk deteksi probiotik dan kuantifikasi (gambar 1) [22,23]. Selain itu, B + Bs terisolasi strain B. subtilis adalah tumbuh sampai fase tengah eksponensial dalam Shaeffers sporulation media untuk melakukan neon in situ hibridisasi (ikan) (gambar 2), menggunakan rendah C G tertentu probe untuk sel kelangsungan hidup kuantifikasi [23,26]. Selain itu, bakteri identifikasi oleh PCR menggunakan Bacillus oligonucleotides khusus dilakukan [14]. Sampel DNA dari Bs + B feed terisolasi bakteri diperkuat bp diharapkan fragmen ukuran 640, dari 16 rDNA gen B. subtilis (data tidak ditampilkan). Gambar 1. Pertumbuhan kinetik dan DAPI ternoda sel-sel dari Bacillus subtilis pulih dari pengobatan B + Bs.

3.2. pertumbuhan Udang Seluruh makan uji suhu air dipertahankan pada salinitas 28.5 2.22 C, 35.2 1.19 ppt dan 6.7 0.20 mg/L konsentrasi oksigen. Total amonium 0.1 0.07 mg/L; nitrit 0.03 0.01 mg/L dan pH 7.6 0,46; yang ditetapkan dalam rentang yang dapat diterima [27]. Perbedaan signifikan secara statistik dalam parameter tidak diamati. Udang berat awal itu tidak berbeda antara perawatan. Namun, pada akhir sidang organisme yang makan dengan pengobatan 1 (B + Bs) mencapai kinerja pertumbuhan terbesar. Selain itu, mereka melakukan dipamerkan perbedaan yang signifikan terhadap perawatan lainnya (tabel 2). Penting untuk diingat bahwa perawatan 1, 2 dan 3 diformulasikan dengan sumber protein nabati (eksperimental seksi). Dalam pengertian ini, B. subtilis ketegangan dimanfaatkan menghasilkan enzim untuk menghidrolisis pakan bahan dari sayuran asal [10]. Rasio konversi makanan (FCR) adalah statistik berbeda antara perawatan, menunjukkan hasil terbaik dalam udang makan dengan pengobatan 1, di mana ketegangan B. subtilis telah disertakan (tabel 2). MBS-Cho basal feed (B) dipamerkan FCR nilai yang lebih tinggi (2,49 0,15) sebagaimana yang kita diharapkan, karena tingkat tinggi bahan sayuran dan bebas probiotik bakteri Inklusi (tabel 2). MBS-Cho basal feed Bacillus megaterium (B + Bm) menunjukkan kurang kemampuan untuk mencerna bahan sayuran daripada B. subtilis lakukan. Namun, pengobatan 2 udang masih memperoleh FCR lebih baik daripada pengobatan feed basal (B) dan tidak ada perbedaan FCR ditunjukkan dengan FM komersial feed pengobatan (C) (tabel 2). Tingkat kelangsungan hidup udang berkisar dari 96 untuk 100%, menunjukkan tidak ada perbedaan yang signifikan antara perawatan (p > 0.05). Namun, udang makan dengan pengobatan 1 menunjukkan tingkat kelangsungan hidup lebih tinggi (tabel 2). Gambar 2. Neon in situ hibridisasi (ikan) partikel-partikel feed pengobatan B+Bs.

Tabel 2. Efek pengobatan pada kelangsungan hidup dan pertumbuhan kinerja udang.

3.3. kuantifikasi Kadar glucose metabolit Serum Plasma hemolymph, laktat dan kolesterol total positif terpengaruh, terutama mereka yang disajikan oleh udang dari pengobatan 1 (tabel 3). Feed perumusan dan pertumbuhan kondisi lingkungan adalah faktor dominan mempengaruhi hemolymph metabolit konsentrasi dan udang