LABORATORIO No.

5 DETERMINACIN CUALITATIVA DE ALGUNOS COMPONENTES DEL PROTOPLASMA CLULAR INTRODUCCIN Las biomolculas son compuestos de carbono con una variedad de grupos funcionales y se encuentran jerrquicamente organizados en las clulas. La versatilidad de los tomos de carbono para formar enlaces covalentes sencillos y dobles principalmente, es de gran significancia biolgica porque a partir de ellos se establecen unidades monomricas como los monosacridos, aminocidos y nucletidos. La polimerizacin de estas unidades monomricas primarias permite la aparicin de un segundo nivel de complejidad al que pertenecen macromolculas como los polisacridos (almidn y glucogno), protenas (albmina e histonas) y cidos nucleicos (DNA y RNA). Las interacciones de macromolculas a travs de diferentes tipos de fuerzas intermoleculares y mecanismos complejos de empaquetamiento, permiten la conformacin de las diferentes organelas (membranas plasmticas) y estructuras supramoleculares, como los cromosomas. Finalmente la interaccin conjunta de las biomolculas en sus diferentes niveles de organizacin permite la conservacin de la estructura y funcionamiento de las clulas (Ver Figura No. 5.1). En esta prctica se estudiarn los dos primeros niveles de complejidad estructural de algunas biomolculas, para lo cul el estudiante deber consultar acerca de sus caractersticas y propiedades fsico- qumicas, de forma tal que pueda comprender los resultados de los ensayos que aqu se realicen. 5.1 OBJETIVOS 5.1.1 OBJETIVO GENERAL: Identificar en forma cualitativa la presencia de algunos componentes que se encuentran en el protoplasma cellular. 5.1.2 OBJETIVOS ESPECFICOS: Determinar mediante mtodos cualitativos la presencia de carbohidratos, lpidos, protenas, enzimas y cidos nucleicos en muestras de materia viva. Reconocer la composicin qumica de los reactivos que se utilizan en la identificacin de los compuestos protoplasmticos. Investigar las reacciones que se producen en la identificacin de los compuestos protoplasmticos.

Figura No. 5.1. Biomolculas

Traer los materiales sealados con

5.2 MATERIALES: Tubos de ensayos Pipetas Goteros Gradillas para tubos de ensayos Mechero de alcohol Pinzas Reactivo de Benedict Solucin de glucosa al 3% Fruta madura Levadura activa Almidn Macerado de pan Lugol Solucin de clara de huevo Solucin de gelatina sin sabor Suero fisiolgico Hidrxido de sodio al 10% Sulfato de cobre al 0.5% Aceite vegetal Grasa animal Sudan III o IV Bao de mara Agua destilada Solucin sangunea Suspensin de levadura activa Reactivo de difenilamina Papel filtro Anhdrido actico Cloroformo cido Sulfrico concentrado Solucin reactivo de almidn al 1% 5.3 PROCEDIMIENTO: 5.3.1. Determinacin de carbohidratos: 5.3.1.1 Monosacridos: a. En un tubo de ensayo se vierten 5ml del reactivo de Benedict, y se calienta hasta ebullicin. No debe cambiar de color. b. Se aade al mismo tubo de ensayo 1ml de una solucin de glucosa y se calienta hasta ebullicin. Qu color aparece? Una turbidez verde indica de 0.1 a 0.3% de azcar reductor, y un precipitado rojo naranja o rojo ladrillo, indica que la concentracin de azcar supera el 1.5%. Ver figura No. 5.2 c. Macere un pedacito de fruta madura y adicinela a un tubo de ensayo que

contiene 5 ml de reactivo de Benedict. Caliente hasta ebullicin. Nota algn cambio? Analice sus resultados y saque conclusiones.

Figura No. 5.2 Prueba de Benedict. 5.3.1.2 Polisacrido: a. Haga una suspensin acuosa de almidn y vierta en un tubo de ensayo 2ml de ella. b. Agrguele a la anterior solucin dos gotas de solucin de lugol. Qu cambio se experimenta? Anote los resultados. Caliente hasta ebullicin esta solucin por dos minutos, Se experimenta algn cambio? Deje el tubo de ensayo en reposo hasta que se enfre. Qu sucede? Ver figura No. 5.3 c. Deposite dos gotas de lugol en una solucin acuosa de un macerado de pan, Qu sucede? Saque conclusiones

Figura No. 5.3. Determinacin de almidn

5.3.2 Protenas: a. Diluya la clara de huevo en 50ml de suero fisiolgico o en agua. b. A 1ml de la solucin anterior se aaden dos gotas de sulfato de cobre al 0.5% y 1ml de hidrxido de sodio al 10%, Se produce algn cambio? c. En un tubo de ensayo, coloque 2ml de solucin de gelatina sin sabor, y proceda como en el caso anterior. Agregue dos gotas de sulfato de cobre y 1ml de hidrxido de sodio agite y anote los resultados.

5.3.3.1. Reaccin de Lieberman Burchard para colesterol: a. Diluya una parte de la yema de huevo en 10 ml de cloroformo. b. Tome 1 ml de la solucin clorofrmica y colquelo en un tubo de ensayo limpio y seco. c. Adicione 1 ml de anhdrido actico. d. Adicione 3 a 4 gotas de cido sulfrico concentrado. e. Agite suavemente y observe los cambios de coloracin. Si el resultado es azul-verdoso la prueba es positiva para colesterol puro y los dems resultados con menor intensidad de color rojo/caf, son pruebas positivas para ergosterol, aunque con menor proporcin de colesterol en su contenido. El ensayo con la yema de huevo ser positivo cuando aparezca la coloracin caf plida. 5.3.4 Enzimas: a. En un tubo de ensayo limpio y seco coloque un embudo pequeo con papel filtro. Enjuguese la boca con suero fisiolgico y descarte. b. S es necesario mastique un trocito de parafina (vela) y la saliva secretada virtala sobre el embudo, recogiendo la saliva filtrada en el tubo. c. Coloque, en una serie de 5 a 10 tubos de ensayo, dos gotas de lugol en cada uno. d. En otro tubo coloque 10mL de suspensin acuosa de almidn y aadale 1ml de saliva y agite. e. Cada 20 segundos pase 1mL de la mezcla almidn ms saliva a cada uno de los tubos de la serie, hasta que no se produzca coloracin. Observe la variacin de los colores a lo largo de la serie. f. Caliente a ebullicin otra muestra de saliva y repita todo el experimento.

Figura No. 5. 4 Determinacin de Protenas 5.3.3 Lpidos: a. Coloque en un tubo de ensayo 3ml de agua. Agregue una pizca del reactivo Sudan III agite y observe, anote los resultados. b. En el mismo tubo de ensayo adicione 1ml de aceite vegetal, agite nuevamente y deje en reposo por unos minutos. Luego observe y anote los resultados. c. En otro tubo de ensayo coloque 2ml de grasa animal y agregue una pizca de Sudan III. Si la grasa est solidificada caliente un poco para derretirla. Agite y anote los resultados, comparndolos con los del tubo anterior. Saque conclusiones.

Figura No. 5.5. Determinacin de Lpidos

Figura No. 5.6 Determinacin de colesterol

Figura No. 5.7 Actividad enzimtica 5.3.5 cidos Nucleicos: a. Numere tres tubos de ensayo bien limpios y en cada uno de ellos ponga las siguientes sustancias: Tubo No. 1 = 3 ml de agua destilada Tubo No. 2 = 3 ml de suspensin de levadura activa Tubo No. 3 = 3 ml. de solucin sangunea b. Agregue a cada tubo 5 ml del reactivo difenilamina y coloque luego todos los tubos en bao de mara durante 15 minutos. Observe y anote los resultados despus de haberse enfriado todos los tubos.

Figura 5.8. Determinacin de c. Nucleicos

5.3 CUESTIONARIO: Que es un azcar reductor? Cite ejemplos de azucares reductores y no reductores Cuales son los componentes del reactivo de Benedict? Que reaccin se produce cuando se calienta el tubo de ensayo que contiene el reactivo de Benedict y glucosa? Cul es la naturaleza del precipitado de color rojo ladrillo que se forma en la anterior reaccin? Cual es la composicin qumica del lugol? A que se debe la desaparicin del color azul violceo de la solucin de almidn cuando se calienta hasta ebullicin? Por qu aparece nuevamente el color cuando la anterior solucin se enfra? En que consiste la reaccin del biuret? En que consiste la reaccin xantoproteica? Que es el Sudan III? Por qu es necesario incluir en el experimento de cidos nucleicos un tubo con agua? Considera que las levaduras contienen ms RNA que DNA? Que indica la reaccin en el caso de la suspensin de clulas sanguneas?

5.5 ENLACES: http://w w w.ibiblio.org/virtualcell/index.ht m: Pgina sobre una visita virtual a la clula, con muy buenos dibujos y animaciones. Incluye adems un libro virtual sobre qumica orgnica y biologa celular. Puede descargarse completa en un archivo comprimido e instalarla en el propio ordenador. http://w w w.acdlabs.com/ Pgina para descargar programas que permiten elaborar estructuras tridimensionales de las molculas y con mltiples enlaces a tutrales de biomolculas. http://w w w.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/q uery.fcgi?DB=pubmed Busca en esta pgina las bases de datos de protenas y modela alguna de ellas. Retornar a tabla de contenido.