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Prácticas de bioquímica 2

Prácticas de bioquímica 2

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Prácticas de bioquímica del ciclo de laboratorio de análisis clínicos
Prácticas de bioquímica del ciclo de laboratorio de análisis clínicos

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Published by: Juan Carlos Vázquez on Apr 12, 2009
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17/12/08Título de la práctica:Determinación cuantitativa de fosfatasa ácida (FAC)Fundamento de la práctica:Método Hillmann: La fosfatasa ácida a pH 5.0 hidroliza el α-naftilfosfato o fosfatoinorgánico a α-naftol.α-naftilfosfato + H
2
O FAC α-naftol + fosfatoα-naftol + Fast Red TR Azo DyeEl α-naftol se hace reaccionar con un cromógeno diazotado formando un compuestocoloreado con pico de absorción a 405 nm.Materiales:
REACTIVOSR 1
Tampón
Citrato sódico pH5,250 mmol/L
R 2
Sustrato
α-Naftil fosfatoFast Red TR10 mmol/L6 mmol/L
R 3
Tartrato
Tartrato sódico 2 mmol/L
R 4
Ácido acético 0,5 mol/L
Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm.
Baño termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37ºC (± 0,1ºC)
Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
Equipamiento habitual de laboratorio.
 
Tubos de plástico
Suero o plasma. Estabilidad de la muestra: 7 días a 2-8ºC.Procedimiento:1.Preparación del reactivo de trabajo:Disolver (→) un comprimido de R2 Sustrato en un vial de R1.Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.Estabilidad: 2 días a 2-8ºC o 6 horas a temperatura ambiente.R 3 y R 4: Listo para su uso. (R4 Incluido en Ref:1001121).2.Revisar el programa del fotocolorímetro3. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.4.Pipetear en una cubeta:5. Mezclar, incubar 5 minutos.6. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha elcronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.7. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ΔA/min).
FAC Total (T) FAC NoProstática (No P)RT (mL) 1,0 1,0R 3 (μL) -- 10Muestra (μL) 100 100
 
Resultados :Las absorvancias obtenidas son lassiguientes:Abs1= 0,809Abs2= 0,887Abs3= 0,958Abs4=1,03055,2 U/l de FACDelta1= 0,078Delta2=0,071Delta3= 0,071Interpretación clínica de los resultados:Las fosfatasas ácidas son enzima quese encuentran presentes en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmentealtas en próstata, estómago, hígado, músculo, bazo, eritrocitos y plaquetas. Niveles elevados de fosfatasas ácidas se encuentra en alteraciones prostáticas comohipertrofia, prostatitis o carcinoma, en enfermedades hematológicas, óseas (enfermedadde Paget) o hepáticas. Niveles bajos de fosfatasa ácida no tiene significado clínico.El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y delaboratorio.
 
17/12/08Título de la práctica:Determinación cuantitativa de fosfatasa álcalina (ALP)Fundamento de la práctica:La fosfatasa alcalina (FAL) cataliza la hidrólisis del p-nitrofenilfosfato (
 p
 NPP) a pH10,4 liberando p-nitrofenol y fosfato, según la siguiente reacción: p-Nitrofenilfosfato + H
2
O ALP p-Nitrofenol + FosfatoLa velocidad de formación del p-Nitrofenol, determinado fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de fosfatasa alcalina en la muestra ensayada
1,2
.Materiales:
REACTIVOS
Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm.
Baño termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37ºC (± 0,1ºC)
Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
Equipamiento habitual de laboratorio.
Tubos de plástico
Suero o plasma. Estabilidad de la muestra: 7 días a 2-8ºC.Procedimiento:
R 1
Tampón
Dietanolamina (DEA)pH 10,4Cloruro de magnesio1 mmol/L0,5 mmol/L
R 2
Substrato
p-Nitrofenilfosfato(
 p
NPP)10 mmol/L
 
1.Preparación del reactivo de trabajo:Disolver (→) una tableta de R2 Sustrato en un vial de R1 tampón.Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.Estabilidad: 21 días a 2-8ºC o 5 días a temperatura ambiente.2.Revisar el programa del fotocolorímetro3. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.4.Pipetear en una cubeta:
RT (mL) 1,2Muestra (μL) 20
5. Mezclar, incubar 5 minutos.6. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha elcronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.7. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ΔA/min).Resultados:Las absorvancias obtenidas son las siguientes:Abs1= 0,622Abs2= 0,706Abs3= 0,799Abs4=0,881284 U/l de FACDelta1= 0,083Delta2=0,093Delta3= 0,082Interpretación clínica de los resultados:Las fosfatasas alcalinas son enzimas que se encuentran presentes en casi todos lostejidos del organismo, siendo particularmente alta en huesos, hígado, placenta,intestinos y riñón.Tanto el aumento como la disminución de los niveles en plasma, tienen significadoclínico.Causas más probables de aumento del nivel de FAL:Enfermedad ósea de Paget, obstrucciones hepáticas, hepatitis, hepatotoxicidad por medicamentos y osteomalacia.Causas más probables de disminución del nivel de FAL:Cretinismo y déficit de vitamina CEl diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y delaboratorio.9/1/08

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