PRÁCTICA # 2
“
MANEJO Y CUIDADO DEL MICROSCOPIO
”
INTRODUCCIÓN:
El microscopio es, sin lugar a dudas, el instrumento más importante en el laboratorio microbiológico. Se usapara aumentar el tamaño de la imagen aparente de los objetos, lo cuál hace posible ver los detallesestructurales de los microorganismos.Sus antecedentes más notables se remontan al s. XVII cuando Anthony Van Leewenhoek (Delft, Holanda, 1632 – 1723), reporta lo siguiente en una de las cartas que dirigió a la “British Royal Society” : “ En el año de 1675,descubrí criaturas vivientes en agua de lluvia que había permoneado sólo unos días en un recipiente… esto meinvitó a observar más atentamente el agua, especialmente los pequeños animalejos que me parecían diez milveces más pequeños que aquellos que pueden percibirse en el agua a simple vista”.Leewenhoek observó, entre otras cosas, bacterias y protozoarios en el agua de la lluvia, en infusiones diversasy en su sarro dental. Sus descripciones son, hasta la fecha excelentes y fácilmente reconocibles.El estudio microscópico de los organismos proporciona datos fundamentales para su identificación, como forma,tamaño, reacción a diferentes colorantes y estructuras celulares; orienta al microbiólogo cuando trata de aislar microorganismos y permite establecer características como pureza, presencia de contaminantes, variedad oedad de una población entre otras cosas. Por ello es tan importante saber utilizar este instrumento y desdeluego, cuidarlo adecuadamente. Para ello, en esta practica se incluye la descripción de los componentes de unmicroscopio compuesto y las funciones de cada uno de ellos; asimismo. Se describen las características de laslentes amplificadoras y las condiciones en las que se puede utilizar cada objetivo, así como los pasos que sedeben seguir para establecer una iluminación adecuada, el enfoque correcto y la forma precisa de manejar elmicroscopio.
OBJETIVOS:
Mediante esta practica, el alumno lograra:
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identificar cada una de las partes de el microscopio
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iluminar correctamente el microscopio óptico de campo claro
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enfocar adecuadamente el microscopio en todos sus aumentos
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reportar correctamente las observaciones microscópicas
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cuidar esmeradamente el microscopio en todo momento, sobre todo, cuando lo utilice.
GENERALIDADES:
En la actualidad existen dos tipos de microscopia, según la forma en que se amplifica la imagen:
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La microscopia óptica: en esta la imagen se amplifica sucesivamente por una seria de lentes. Este sistemapermite obtener aumentos de 100 a 1000 diámetros y en algunos casos, hasta 2000 según el tipo de luz quese utilice y la forma de iluminar el objeto en estudio o preparación.Los microscopios ópticos pueden ser de campo claro, de campo oscuro, de contraste de fases, defluorescencia y de ultravioleta. El de campo claro es el mas utilizado para el estudio microbiológico engeneral.
℘
La microscopia electrónica: es aquella en la cual la amplificación de la imagen se obtiene mediante un haz deelectrones (que sustituye la luz) y un campo magnético (que hace las veces de lentes) produce imágenescon aumentos de 200000 a 400000 diámetros.
MICROSCOPIO ÓPTICO DE CAMPO CLARO:
En la microscopia de campo claro, el campo microscópico o área observada esta brillantemente iluminada y losobjetos en estudio aparecen más oscuros al fondo.Un microscopio óptico de fondo claro esta integrado por un sistema óptico que permite iluminar el objeto enestudio y amplificar su imagen, y un sistema mecánico que da soporte y movimiento a los componentesópticos, explicado de manera muy concisa, el fundamento de su funcionamiento es el siguiente: la luzprocedente de la lámpara y del condensador atraviesa la preparación (en la cual se encuentra el objeto enestudio) y permite que la primera lente (objetivo) forme una imagen aumentada de lo que hay en ella; antes deser vista, esta imagen es amplificada nuevamente por otra lente (ocular).A continuación se describen brevemente las funciones de los componentes fundamentales del microscopio:
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°
Base, soporte y cuerpo del tubo
, sirven para mantener en posición a todos los componentes delmicroscopio y son gruesos y fuertes, para disminuir la vibración.
°
Tubo intercambiable del microscopio:
Se encuentra insertado en la parte superior del cuerpo del tubo,soporta el ocular y permite alinearlo con el objetivo seleccionado para una observación.
°
Platina:
En ella se coloca la preparación o portaobjetos de estudio, la platina esta equipada con pinzas parasujetar la preparación y dos tornillos 3.1, para desplazarla en sentido vertical y horizontal, lo que facilita lalocalización del objeto y la revisión de la preparación.
°
Revólver:
Es el disco que soporta a los objetivos y se gira para colocar el objetivo requerido bajo el tubo.
°
Tornillo micrométrico o de enfoque preciso:
Con este se puede desplazar el tubo en forma más lenta, lo quepermite hacer los movimientos finos que se requieren para obtener el enfoque exacto y preciso.
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Tornillo macrométrico o de enfoque aproximado:
Este permite desplazar el tubo del microscopio (o alaplatina en algunos modelos) acercando el objetivo a la preparación, lo que permite localizar la imagen ylograr un enfoque aproximado.
Sistema óptico:
Esta integrado por una fuente luminosa, una lente condensadora de luz que la dirige hacia elespécimen y dos juegos de lentes que ayudan a la amplificación de imagen.
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Interruptor
°
Fuente de luz :
Es una lámpara que se encuentra colocada debajo de el objeto y emite la luz que pasa por elcondensador, para después iluminar la preparación, para regular la intensidad de la luz algunos microscopiostienen integrado a la lámpara, un diafragma, el que se abre o se cierra, en otros únicamente regula el voltaje.
°
Diafragma de campo
°
Condensador
: Esta interpuesto entre la fuente de luz y la muestra, el condensador recibe la luz de la lámpara,rectifica los rayos de luz y los concentra o enfoca en un cono de luz sobre el campo donde se sitúa la muestra,de tal manera que los rayos después de atravesar la preparación, penetra a la lente de el objetivo con el mejor ángulo posible, para ello el condensador se baja o se sube hasta alcanzar una posición que origine un focopreciso.
°
Diafragma Iris
: Controla el diámetro del circulo de luz que sale de el sistema condensador, al mover la palancadel diafragma iris, es posible controlar la cantidad de luz que entra al condensador y regular el paso de la luzpara dar nitidez a la imagen, el propósito de el diafragma no es controlar la intensidad de la luz que llega alobjeto, sino asegurar que la que sale del condensador llene exactamente la lente de el objetivo, si eldiafragma es demasiado grande, parte de la luz pasara alrededor del objeto y originara brillo reduciendo laclaridad de la imagen.
°
Objetivos:
Son las lentes que amplifican la imagen del campo del microscopio y por lo tanto, del objeto enestudio, la mayoría de los microscopios tiene tres objetivos que proporcionan diferentes aumentos, siendo losmas comunes el 10x, 40x, 90x y 100x , la lente de bajo poder de aumento abarca un campo microscópico conuna superficie mayor, se utiliza para localizar los objetos de interés y para seleccionar al espécimen aobservar, la lente de 40x permite la visualización detallada de microorganismos grandes, como algas,protozoarios y hongos, la lente de 90x 0 100x ( que se emplea con aceite de inmersión ) se utiliza paraobservar bacterias o microorganismos eucariontes pequeños. Cuando el microscopio es par focal, las distintaslentes están ajustadas de tal manera que, al enfocar el espécimen con una lente, así permanece al cambiar aotros objetivos, de esta manera se puede enfocar con el objetivo de poco aumento y cambiar a los objetivosde mayos aumento sin volver a enfocar o realizando ajustes menores.
°
Ocular:
Esta lente amplifica aun más la imagen procedente del objetivo y permite que el ojo la perciba, elocular se encuentra insertado en el tubo intercambiable.La función de los sistemas de lentes amplificadoras interpuestas entre la muestra y el ojo (objetivo y ocular)consiste, en gran parte, en aumentar el ángulo aparente que forman con el ojo los objetos que estas dentro delcampo microscópico.Para hacer una buena observación es muy importante que la imagen aumentada no se encuentredistorsionada, de manera que retenga los detalles esenciales del espécimen, en la microcopia óptica,especialmente en la de pequeño aumento existen varios tipos de distorsiones que resultan de las propiedadesde las lentes por lo que, en los microscopios modernos, cada sistema de lentes (condensador objetivo y ocular)consiste en un juego de varias lentes de diversas formas y dimensiones, cuyo diseño permite corregir lasdistintas distorsiones, de este modo la amplificación y la calidad de la imagen quedan determinadas por :
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las características y calidad de las lentes
∼
la longitud de onda de luz empleada
∼
el medio que atraviesa la luz antes de llegar al objetivo (aire, agua, aceité de inmersión).
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Estas a su vez determinan la capacidad amplificadora y el poder de resolución del microscopio.En el ocular se indica su coeficiente de aumento individual, por ejemplo 10x, que significa que su poder deaumento es 10 veces o 10 diámetros.En el objetivo hay cuatro datos:40 X = Coeficiente de aumento0.65 = Apertura numérico160 = (Mm.) la longitud mecánica del tubo (medida desde la superficie de la rosca del objetivo hasta la basedel ocular)0.17 = Requiere cubre ojos de 0.17mm. de espesor (cubreobjetos num. 1)En lugar de 0.l7 puede estar marcado:/- = Acepta cubreobjetos desde 0.17 (num. 1) a 0.22 (num. 2) de espesor /0 = No requiere cubreobjetos/0.11 = 0.27 (Korr) es ajustable a los diferentes espesores de los cubreobjetos (desde 0.11 hasta 0.27 mm. ).
Características del ocular y los objetivos:
Los coeficientes de aumento de los oculares y de los objetivos, permiten calcular el aumento total o capacidadamplificadora de un microscopio, que es igual a: producto de los coeficientes de aumento del ocular y delobjetivo que se utilizan; por ejemplo: en un microscopio con un ocular de 6x y objetivos de 10x y 40x y 100x, laimagen se amplifica 60, 240 y 600 veces respectivamente.Mediante la utilización de oculares con mayores coeficientes de aumento, es posible obtener mayoresamplificaciones de la imagen, aunque esta tiene un límite al que se conoce como aumento útil de unmicroscopio.El aumento útil del microscopio esta dado por las propiedades físicas de la luz (que establecen el limite fijo dela amplificación efectiva) y una característica del sistema de lentes, conocida como
apertura numérica
, las queen conjunto dan lugar a una propiedad conocida como poder de resolución. Apoca resolución, las estructurasse ven juntas, entre mayor es la resolución, mayor es el detalle con que se observan.
Resolución de dos puntos:
El poder o límite de resolución de una lente, corresponde a su capacidad para presentar distintos y separadosdos puntos adyacentes, determinando la máxima amplificación útil que se puede obtener con un microscopioóptico. El poder de resolución (δ) se expresa mediante la siguiente ecuación:δ = longitud de onda / Apertura numérica De acuerdo con la teoría óptica, la resolución mas alta posible en un microscopio de luz compuesto permitiráver con claridad objetos cuyo diámetro sea de casi 0.2 mm. Lo anterior significa el poder de resolución es igualal diámetro de la estructura visible mas pequeña, de este modo en un microscopio óptico compuesto losobjetos de dimensiones menores alas señaladas, al ser amplificados, darán lugar a imágenes difusas. Laamplificación que aumenta el tamaño, pero no su detalle, se denomina
amplificación
o
aumento vacío
.
Efecto de la longitud de onda sobre el poder de resolución,
cuanto mas corta sea la longitud de ondaempleada, mas pequeña será la estructura visible (mayor poder de resolución), en este sentido, la luz aportaramayor poder de resolución que la luz roja, sin embargo puesto que el espectro de luz visible es relativamenteestrecho el aumento de la resolución disminuyendo la longitud de onda de la luz empleada, tiene un valor limitado. El mayor aumento de la resolución de un microscopio se consigue aumentado la apertura numéricaLa apertura numérica de la lente es función del diámetro real del objetivo en relación con su distancia focal, loque determina el Angulo (u) de los rayos de luz más oblicuos que pueden entrar al objetivo y el poder dedesviar el rayo luminoso, índice de refracción (N) del medio que hay entre la muestra y el objetivo.Existe correspondencia entre la amplificación del objetivo y su apertura numérica, las lentes con mayor coeficiente de aumento, por lo general, tienen mayor apertura numérica, pero como se indica en la formula elmedio por el que pasa la luz también influye en la apertura numérica; de este modo, cuando el objetivo estaseparado del objeto por aire, su apertura nunca puede ser mayor de 1.0 debido a que el índice de refraccióndel aire es menor que el de el vidrio, los rayos luminosos se refractan o desvían cuando pasan por elportaobjetos al aire, por lo que se pierde la mayor parte de los rayos luminosos, para alcanzar valores mayoresel objetivo debe estar inmerso en un medio con un índice de refracción mayor que el del aire y similar al del
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2.- Manejo y Cuidado Del Microscopio
identificar cada una de las partes de el microscopio, iluminar correctamente el microscopio óptico de campo claro, enfocar adecuadamente el microscopio en todos sus aumentos
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