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4.- Esterilizacion y Preparacion de Medios de Cultivo

4.- Esterilizacion y Preparacion de Medios de Cultivo

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Lavar, preparar y envolver correctamente el material que se someterá a esterilización.
Seleccionar los métodos de esterilización adecuados para las diversas necesidades del laboratorio de microbiología.
Comprobar la efectividad del proceso de esterilización.
Elaborar adecuadamente los medios de cultivo deshidratados y por componentes.
Envasar los medios de cultivo de manera adecuada en los diferentes recipientes de acuerdo al uso que se les dará.
Relacionar la composición de los diversos medios de cultivo con sus características y aplicaciones.
Lavar, preparar y envolver correctamente el material que se someterá a esterilización.
Seleccionar los métodos de esterilización adecuados para las diversas necesidades del laboratorio de microbiología.
Comprobar la efectividad del proceso de esterilización.
Elaborar adecuadamente los medios de cultivo deshidratados y por componentes.
Envasar los medios de cultivo de manera adecuada en los diferentes recipientes de acuerdo al uso que se les dará.
Relacionar la composición de los diversos medios de cultivo con sus características y aplicaciones.

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PRÁCTICA # 4
“ 
ESTERILIZACIÓN DE MATERIAL Y PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
” 
INTRODUCCIÓNPor su minúsculo tamaño, los microorganismos no pueden estudiarse como individuos, sino que esnecesario manejarlos como poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos, es decir, favorecer sumultiplicación in Vitro, en ambientes especiales que proporcionen las condiciones semejantes a las de sushábitats naturales. En estos ambientes se debe eliminar a todos aquello microorganismos que interfierenen el estudio del microorganismo de interés, al que además de proporcionar los nutrientes necesariospara su crecimiento multiplicación.
OBJETIVOS:
Lavar, preparar y envolver correctamente el material que se someterá a esterilización.
Seleccionar los métodos de esterilización adecuados para las diversas necesidades del laboratorio demicrobiología.
Comprobar la efectividad del proceso de esterilización.
Elaborar adecuadamente los medios de cultivo deshidratados y por componentes.
Envasar los medios de cultivo de manera adecuada en los diferentes recipientes de acuerdo al uso quese les dará.
Relacionar la composición de los diversos medios de cultivo con sus características y aplicaciones.
REPORTE
(MARCO TEÓRICO)En muchos aspectos, el pequeño tamaño de los microorganismos los hace sujetos ideales para laexperimentación. Se pueden cultivar millones de organismos en un solo mililitro de medio para su estudio.La rápida multiplicación de estas diminutas criaturas constituye también una ventaja experimental, ya quese puede trabajar con muchas generaciones en un solo día, Es más, los conocimientos adquiridos en elestudio de los microorganismos pueden ser, a menudo, generalizados a los sistemas celulares, plantas yanimales, incluida la especie humana. Para llevar a cabo experimentos con microorganismos esusualmente necesario cultivarlos en el laboratorio.
La esterilización
La esterilización es un proceso a través del que se puede lograr la destruccn total de losmicroorganismos viables presentes en un determinado material. Este procedimiento es de gran utilidaddentro del campo farmacéutico, ya que existen muchos procesos que requieren la utilización demateriales estériles. Entre éstos podemos destacar:
°
La esterilización de equipos quirúrgicos y otros materiales de uso médico con el propósito de reducir el riesgo de infecciones en pacientes.
°
El acondicionamiento del material (pipetas, tubos, placas de Petri, pinzas, etc.) que va a ser utilizadoen los laboratorios de microbiología.
°
La preparación de medios de cultivo que serán empleados con diferentes propósitos (cultivo demicroorganismos, control de ambiente, equipos o personal, análisis microbiológico de medicamentos,cosméticos, alimentos, etc.)Existen diversos métodos de esterilización. La selección del método a aplicar en cada caso estádeterminada por el tipo de producto a esterilizar.
Clasificación de los métodos de esterilización:
En la siguiente página se presenta un esquema de los principales métodos de esterilización, clasificadosde acuerdo al tipo de agente que actúa.
1) Agentes físicos
El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor húmedo el cual destruye a losmicroorganismos por desnaturalizacn de las proteínas y el calor seco que destruye a losmicroorganismos por oxidación de sus componentes celulares. El calor es considerado como el métodode esterilización por excelencia siempre y cuando el material a esterilizar soporte altas temperaturas sinsufrir ningún tipo de daño.
1
 
La radiación, o emisión y propagación de la energía a travésde un medio, puede ser utilizada como agente para laeliminación de microorganismos. Así tenemos que lasradiaciones ionizantes se pueden utilizar para la esterilizaciónde materiales termolábiles, como por ejemplo materialesplásticos, y las radiaciones no ionizantes, como la luzultravioleta, puede ser empleada en el control de áreascerradas.
a) Esterilización por calor 
:El calor es el método de elección para esterilizar el material delaboratorio resistente a las altas temperaturas. La temperaturay el tiempo requeridos para esterilizar un material dependende que se esté utilizando calor seco o calor húmedo.Esterilización con calor seco: La acción bactericida del calor seco se debe a la oxidación física de un procedimiento lento ocoagulación de la proteína bacteriana por quemadura. Enausencia de humedad se necesita una temperatura más alta,ya que en esta forma los microbios son destruidos al absorber el calor. Pueden ser dos tipos:
Directa: flameado o incineración más utilizada enlaboratorios y en algunos hospitales pequeños.
Indirecto: aire caliente u horno de Pasteur contemperatura de 160ºC a 180ºC por 1 a 2 horas siendoel más eficaz y seguro el eléctrico.Ventajas:
°
El aire caliente penetra ciertos materiales que no sepueden esterilizar en el autoclave
°
Puede utilizarse en laboratorios para la esterilización deartículos de vidrio
°
El calor seco da protección en esterilización deinstrumentos delicados con punta o filo al que dañaríael vapor 
°
El acero no se corroe o decoloraDesventajas:
°
Se requiere más tiempo de acción, porque el airepenetra con lentitud y uniformidad
°
El tiempo y la temperatura varían según el tipo dematerial
°
La sobre exposición puede dañar algún producto
°
Destruye telas o material de cauchoEsterilización con calor húmedo:
 
El calor húmedo es la forma de vapor saturado a presión es eficaz parala destrucción de todas las formas microbianas, incluso espora. La muerte de las bacterias es causadapor la desnaturalización y coagulación de su proteína o su sistema
 
intercelular enzima-proteína. Estasreacciones son catolizadas por medio del agua. Estas pueden de dos tipos:
Calor húmedo discontinuo: algunos medios de cultivo que contiene carbohidratos como lagelatina, leche, etc. no soportan temperaturas elevadas y se realiza mediante los siguienteprocedimientos:
o
Tindalización: hace uso del calor húmedo, para una buena esterilización se deberealizar a 100ºC por ½ hora (por tres veces discontinuas) durante 1 día.
o
Ebullición: es el paso de un líquido al estado de vapor. El agua en ebullición representaen forma eficaz y práctica de proporcionar una desinfección de alto nivel deinstrumentos y guantes que entren en contacto de las membranas mucosas, si bien alhervirlos por 20 minutos se aniquilan todas las formas vegetativas de las bacterias, losvirus, las levaduras y los hongos, pero no destruye a las esporas.
o
Pasteurización:
 
elimina a todos los microorganismos no esporulados se puede variar lastemperaturas por ejemplo: 62ºC por 30 min.; 70ºC por 15 min. Se utiliza para preservar alimentos como ser leche, cerveza.
2
 
Vapor a presión: conocido como autoclave, que posee todos los requisitos indispensables comogrados de temperatura y tiempo de exposición, que junto con el tamaño del autoclave y el flujo delvapor, la densidad y el tamaño de la carga en la cámara aumentan la tasa se muerte de losmicroorganismos, en una temperatura de 121ºC – 132ºC durante 15 minutos o más.Ventajas:
°
Es más fácil segura y eficaz
°
El uso del vapor es el procedimiento más rápido, el ciclo total de tiempo es más corto
°
Es más barato y de obtención más fácil
°
La mayoría de las autoclaves poseen controles automáticos y dispositivos de controlDesventajas:
°
Se requiere mucho cuidado en la preparación y confección de bultos, en la carga y manejo delautoclave, así como el secado de los artículos
°
Los artículos a esterilizar deben estar limpios, sin grasa ni aceite
°
El vapor tiene que estar en contactó directo con todas las partes de los artículos
°
Los ciclos de tiempo se ajustan según el tipo de material y tamaño de la carga
°
El vapor puede no ser puroLa cámara presurizada utilizada normalmente en el laboratorio es el
autoclave.
 
En
 
muchos aspectos unaautoclave se parece a una olla de presión casera. De hecho, en algunos pequeños laboratorios demicrobiología se utilizan estas ollas en lugar de autoclaves. Ambos son recipientes de metal con paredessuficientemente fuertes para resistir la presión de vapor.Las autoclaves son grandes cámaras de acero inoxidable que funcionan automáticamente. Los objetosdeben ser colocados de manera que el vapor de agua entre en contacto con todas las partes de cada unode ellos, y el aire no quede atrapado en su interior. El aire que no es reemplazado por vapor crea unabolsa seca, donde la esterilización no será efectiva.
b) Esterilización por radiación:
 
La ionización por radiación genera iones al liberar electrones de losátomos, estos se desprenden violentamente con átomos adyacentes y se une a ellos, o bien sedesprenden del segundo átomo. La energía liberada se transforma en energía térmica o química la cualcausa la muerte de los microorganismos al romper la molécula del ADN e impide la división molecular y lapropagación de la vida. Las principales fuentes de radiación ionizante son las partículas Beta y rayosgamma.Ventajas:
°
Penetra la morí parte de todos los materiales para esterilizarlos con confiabilidad
°
Es el método de esterilización más eficaz
°
No genera radiación residual
°
Penetran en objetos grandes y voluminosos
2) Agentes mecánicos
La filtración permite la remoción de todos los microorganismos presentes en un líquido o un gasreteniéndolos sobre la superficie de un material.
Filtración:
Las células microbianas pueden retirarse de los líquidos o gases por filtración. La filtración eslenta y cara (debe usarse un filtro nuevo cada vez); por esta razón, se utiliza sólo para los líquidostermolábiles, que no se pueden esterilizar en el autoclave. Los sólidos termolábiles también se puedenesterilizar por filtración, si previamente se disuelven en un líquido. Técnicamente, la filtración no esterilizaporque los virus pueden pasar a través de los filtros, pero el proceso es suficiente para la mayoría de losestudios de rutina que se llevan a cabo en el laboratorio.Los filtros utilizados se denominan
filtros de membrana.
Estas membranas están compuestas denitrocelulosa, con un poro de diámetro constante. La nitrocelulosa es un derivado químico de la celulosa,que también se utiliza como explosivo. El diámetro de poro es aproximadamente 0,45 µm; este tamaño eslo suficientemente pequeño como para eliminar todos los microorganismos, con excepción de los virus yalgunas bacterias muy pequeñas. Un líquido se filtra haciéndolo pasar a través de un filtro de membranaacoplado a un matraz especial. Para hacer pasar el líquido por el filtro se utiliza una bomba de vacío; losmicroorganismos quedan en la superficie de la membrana. La filtración es el método de elección paraesterilizar soluciones de vitaminas, antibióticos v otros compuestos termolábiles, que son añadidos a losmedios.
3) Agentes químicos
3

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